CN110741254A - 色谱质谱分析方法及色谱质谱分析装置 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种色谱质谱分析方法，其具有下述工序：将具有与分析对象成分类似的保留时间并且质荷比不同的内标物质添加至试样的工序，利用色谱质谱分析装置测定试样，获得分析对象成分的色谱图(101)和内标物质的色谱图(102)的工序，由内标物质的色谱图检测峰(113)，求出该峰的峰开始时间和峰结束时间的工序，以及将求得的峰开始时间和峰结束时间应用于分析对象成分的色谱图的峰开始时间和峰结束时间的工序。

Description

色谱质谱分析方法及色谱质谱分析装置

技术领域

本发明涉及色谱质谱分析方法以及色谱质谱分析装置。

背景技术

近年来，使用了液相色谱质谱分析装置的定量分析法被大量用于生物体试样中的药剂成分、代谢物、环境试样中的残留物等的分析。液相色谱中使用了利用柱的分离时间最大数十分钟的高速型，或以最大数分钟进行分离的超高速型等。进一步，检测分离后的成分的质谱分析装置有例如四极型质谱分析装置、离子阱型质谱分析装置、飞行时间型质谱分析装置。它们根据分析的目的来分别使用，但以定量为目标的情况下，大多使用四极型质谱分析装置。

四极型质谱分析装置能够通过扫描、选择离子监测(SIM：Selected IonMonitoring)来测定试样。扫描被用于未知试样的定性分析等，在规定的质荷比(m/z)的范围内，检测相对于质荷比的离子量来作为信号。SIM为选择性地检测相对于预先指定的质荷比的离子量。三重四极型质谱分析装置等中，还利用了选择性地检测由分析对象的成分产生的特定的子离子的量的选择反应监测(SRM：Selected Reaction Monitoring)。在来源于分析对象的成分的离子、该子离子的质荷比已知的情况下，能够通过这些方法以高灵敏度进行定量分析。

在生物体试样中的药剂成分、代谢物、环境试样中的残留物等的确认时，通过液相色谱质谱分析装置的SIM、SRM来取得表示离子量的经时变化的色谱图，检测与分析对象成分、内标物质对应的峰，并获得测定值。峰检测时，通常进行在判定峰的开始点和结束点的基础上，算出峰的面积、高度来作为测定值。另外，通过峰的保留时间来判定分析对象成分、内标物质，但保留时间取决于液相色谱的柱的种类、状态、分离条件。峰检测法有对数据的变化量进行梯度检测的方法等，作为使其改良后的方法，有专利文献1所示那样的肩峰检测方法，进一步有专利文献2所示那样的通过拟合到任意函数来进行检测的方法等。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开昭61-145457号公报

专利文献2：日本特开昭63-151851号公报

发明内容

发明所要解决的课题

在由色谱图鉴定峰并计算峰的面积、高度的情况下，使用例如专利文献1、2所示的方法来检测峰。然而，在生物体试样中的药剂成分、代谢物、环境试样中的残留物等的分析中，有时分析对象成分极其微量。在该情况下，色谱图上没有出现明确的峰，需要将噪声除去、高度的信号处理进行组合来检测分析对象成分，峰的检测变得困难。

在利用色谱进行的分析中，存在保留时间变动的问题。由于流路的堵塞、柱的劣化、环境温度、柱温度的微妙的差异，分析对象成分的保留时间受到影响。因此，通常即使已知规定的分析条件下的分析对象成分的保留时间，也要设置时间范围来进行峰位置的搜索。除了上述峰检测困难的状况以外，在考虑到保留时间变动的情况下，分析对象成分的测定值的算出变得更加困难。

从以上来看，即使在分析对象成分微量的情况下，也需要能够准确地进行峰位置的鉴定并算出测定值的方法。

用于解决课题的方法

本发明的色谱质谱分析方法作为一方式，具有下述工序：将具有与分析对象成分类似的保留时间并且质荷比不同的内标物质添加至试样的工序，利用色谱质谱分析装置测定试样，获得分析对象成分的色谱图和内标物质的色谱图的工序，由内标物质的色谱图检测峰，求出该峰的峰开始时间和峰结束时间的工序，以及将求得的峰开始时间和峰结束时间应用于分析对象成分的色谱图的峰开始时间和峰结束时间的工序。

此外，本发明的色谱质谱分析装置作为一方式，是同时测定分析对象成分和内标物质并获得分析对象成分的色谱图和内标物质的色谱图的色谱质谱分析装置，其具有：峰检测部，其由内标物质的色谱图求出峰开始点和峰结束点，峰范围检测部，其由峰检测部检测得到的峰开始点和峰结束点来抽取峰开始时间和峰结束时间，以及峰范围应用部，其将由峰范围检测部抽取得到的峰开始时间和峰结束时间应用于分析对象成分的色谱图的峰开始点和峰结束点。

发明效果

根据本发明，能够使分析对象成分的色谱图的品质不受影响地算出测定值。

上述以外的课题、构成和效果通过以下实施方式的说明来清楚地进行。

附图说明

图1为表示将内标物质色谱图的成分峰开始点和结束点的保留时间应用于分析对象成分色谱图的峰开始点和结束点的例子的概念图。

图2为表示液相色谱质谱分析装置的构成例的示意图。

图3为表示由内标法制作的试样的例子和将该试样用质谱分析装置测定时的信号强度的例子的概念图。

图4为表示由内标法制作的标准曲线的例子的图。

图5为表示睾酮和睾酮13C的未知试样中的SRM的测定结果数据的例子的图。

图6为表示图形用户界面的一例的图。

图7为表示将睾酮d3的峰开始点和结束点的保留时间应用于睾酮、睾酮13C的峰开始点和结束点的例子的图。

图8为表示峰检测涉及的构成的一例的功能框。

图9为表示峰检测涉及的处理的流程的流程图。

具体实施方式

以下，参照附图来说明本发明的实施方式。另外，本发明的实施方式并不限定于后述实施例，在其技术思想的范围内，能够进行各种变形。

此外，这里举出液相色谱质谱分析装置作为色谱质谱分析装置的例子，但只要同时测定分析对象成分和内标物质即可，本发明也能够应用于气相色谱质谱分析装置。

[实施例1]

使用通常的液相色谱质谱分析装置中最简单的装置构成，对于检测作为男性激素之一的睾酮的例子进行说明。图2为表示液相色谱质谱分析装置的构成例的示意图。

溶剂输送部201输送水、乙腈这样的溶剂。一般而言，能够进行设置两种以上的溶剂并固定了比率的等度输送、通过时间程序来使溶剂的组成发生变化的梯度输送。溶剂输送部201即使在分析中以外也常常输送溶剂，实现试样分离部204的平衡化、稳定化。

试样导入部202设置分析者要进行分析的试样，并利用被称为自动进样器的试样导入机构依次进行试样的吸取。此外，每次试样吸取都需要洗涤针、试样导入流路这样的部位。因此，省略了图示，但通常另行搭载有洗涤机构。

试样注入部203为向来自溶剂输送部的流路中注入被试样导入部吸取的试样的部位。它们通常使用在六角阀中，组合有被称为进样环路的配管的设备。进样环路通常连接于试样导入部侧。试样吸取时，被试样导入部吸取的试样被导入至进样环路中，导入结束后，将填充有试样的进样环路切换为向试样分离部的流路，从而构建从溶剂输送部201向试样分离部204的流路中注入试样的结构。

试样分离部204中设置有用于将试样每个成分进行分离的柱。所谓柱，为在金属筒中填充有硅胶、聚合物这样的填充剂的柱。如果在其中从单侧注入试样，进一步持续输送溶剂，则以与成分和填充剂的亲和性相应的速度，成分在柱内移动。利用该原理来分离成分。柱根据填充剂的种类、粒径而特性大不相同，因此需要根据要分离的成分的种类、目的来适当地选择。

质谱分析部205为将被试样分离部204分离后的成分进行离子化并分别检测质荷比的部位。作为离子化法，有电喷雾电离法(ESI)、大气压化学离子化法(APCI)等。此外质谱分析部通常使用四极型、离子阱型、飞行时间型等。四极型中，除了配置1级四极的情况以外，有配置3级的三重四极型。其中，有能够使第1级被选择的离子在第2级开裂，在第3级从生成的子离子中选择特定的质荷比的物质并测定的情况。将这样的测定法称为SRM。

分别选择质荷比并被导入至检测器的离子作为与其量对应的信号而被检测到。进一步，被质谱分析部205检测到的离子量的信号被传送至解析部206，作为SIM、SRM的色谱图进行平滑化处理、峰检测处理、面积、高度计算处理这样的各种数据处理。这里所算出的峰面积、峰高度就成为测定值。

在要分析未知试样中的特定成分的含量、浓度的情况下，首先将在目标的浓度范围区域内制作的多个浓度系列的标准试样用分析装置进行分析，由算出的测定值和已知浓度的关联，导出表示测定值与浓度的关系的图。将该图称为标准曲线。接下来测定未知试样，算出分析对象成分的测定值之后，算出标准曲线所适合的浓度值。这样，只要制作出标准曲线，就能够测定未知浓度的试样，对于该测定值，由标准曲线推定浓度。

在利用液相色谱质谱分析装置进行定量分析的情况下，一般而言使用内标法。在内标法的情况下，例如在由生物体采集的试样中添加具有与分析对象成分类似的保留时间并且质荷比不同的内标物质。图3为表示由内标法制作的试样的例子以及与将该试样用质谱分析装置测定时的信号强度的例子的概念图。测定在与测定浓度的系列对应的若干浓度的分析对象成分301中添加有一定量的内标物质302的标准试样311～313和未知试样314。数据处理时，首先对于标准试样311～313，对于分析对象成分的峰321和内标物质的峰322各个进行峰检测，将测定值的比，即(分析对象成分的测定值)/(内标物质的测定值)的值与已知浓度相关联，制作标准曲线。

图4为表示由内标法制作的标准曲线的例子的图。如果将标准试样311～313的分析对象成分的测定值设为a₁～a₃，内标物质的测定值设为i₁～i₃，则能够相对于各标准试样所包含的分析对象成分的已知浓度c₁～c₃，画出标准曲线401。然后，测定未知试样314，能够由分析对象成分的测定值a_u和内标物质的测定值i_u算出未知试样所包含的分析对象成分的浓度c_u。即，能够将比的值(a_u/i_u)应用于标准曲线401来求出浓度c_u。

这样，使用分析对象成分和内标物质的测定值的比来进行计算的内标法的优点在于将例如试样的进样量的误差、由溶剂的挥发导致的误差这样的误差因素通过比率计算来抵消，而不对结果带来影响。因此，需要以使分析对象成分与内标物质的化学行为尽可能相同那样进行内标物质的选定。

液相色谱质谱分析装置中，通常进行将对于分析对象成分被稳定同位素标记的元素作为内标物质，由其质荷比的差异利用质谱分析部进行分离来检测。具体而言，将构成分析对象成分的原子的一部分用氮稳定同位素15N、碳稳定同位素13C、氧稳定同位素18O、氢稳定同位素2H等置换后的稳定同位素标记化合物作为内标物质。对于睾酮而言，能够例示例如进行了13C标记的睾酮(以下，表述为睾酮13C)。此外其浓度能够根据质谱分析装置的灵敏度、精度而设为任意的量，能够例示例如500fmol。

图1为表示将内标物质色谱图的成分峰开始点和结束点的保留时间应用于分析对象成分色谱图的峰开始点和结束点的实施例的概念图。

在通过SRM来同时测定分析对象成分和内标物质的情况下，如图1所示那样，获得两张色谱图，即分析对象成分的色谱图101和内标物质的色谱图102。

在这样的情况下，以往求出与内标物质的色谱图的峰113对应的测定值和峰顶等的保留时间，由分析对象成分的色谱图101检测规定区域中的峰(群)，求出其(它们)的测定值和峰顶等的保留时间(的组)。相当于由求得的峰(群)，选择与内标物质的峰的保留时间最接近的峰123来作为分析对象成分。在设置信号强度的阈值来检测峰的情况下，不能由阈值来检测峰123。因此，如果降低阈值，则虽然没有充分的信号强度，但是将信号强度的变化量进行梯度检测的方法、作为对于高斯函数的拟合等峰检测的复杂的处理反复进行，难以获得能够信赖的结果。

然而，如上述那样，由于以与分析对象成分的化学行为尽可能相同的方式来选定内标物质，因而这两张色谱图中保留时间基本上相等。即，认为分析对象成分的色谱图101中的峰开始点和峰结束点的保留时间与内标物质的峰开始点和峰结束点的保留时间类似。本实施例着眼于这一点。因此，本实施例的方法是将内标物质的峰开始点111和峰结束点112的保留时间作为分析对象成分的峰开始点121和峰结束点122的保留时间，计算峰的面积、高度。

需说明的是，虽然期望内标物质的保留时间与分析对象成分相同，但只要是能够忽视对于分析对象成分的峰面积、峰高度的计算带来影响的程度，那么分析对象成分和内标物质的保留时间即使有差别也没有问题。

图8为表示设置于本实施例的液相色谱质谱分析装置的解析部206的峰检测涉及的构成的一例的功能框图。一边参照图8一边对于本实施例的峰判定进行说明。

由SIM、SRM获得的内标物质的色谱图通过峰检测部801来进行峰判定，输出峰开始点806和峰结束点809以及内标峰部分数据808。峰范围检测部802中，由峰开始点和峰结束点，抽取峰开始时间813和峰结束时间814。在峰范围应用部803中，利用峰开始时间和峰结束时间，由分析对象成分色谱图输出成分峰部分数据810。在峰计算部804中，由内标峰部分数据808和成分峰部分数据810，分别求出内标测定值(面积、高度)和成分测定值(面积、高度)。需说明的是，实施例1中，峰范围检测部802仅从峰开始点806抽取峰开始时间813，仅从峰结束点809抽取峰结束时间814。对于峰范围检测部802的进一步的功能，在实施例2中进行说明。

图9为表示峰检测涉及的处理的流程的流程图。数据收集(S11)之后，在峰检测部801中进行内标物质的色谱图的峰检测(S12)。进一步利用峰范围检测部802来实施峰范围检测(S13)。基于由峰范围检测部802求得的峰开始时间813和峰结束时间814，利用峰范围应用部803进行相对于分析对象成分的色谱图的峰范围应用(S14)，在峰计算部804中实施峰计算(S15)。这里所获得的分析对象成分的峰面积、峰高度的值能够通过求出与内标物质的峰面积、峰高度的比而用于标准曲线的制作、浓度的算出。

通过遵循以上步骤，从而能够不受来源于分析对象成分的信号的有无、信号强度的影响，算出确切的测定值。总试样中包含一定量的内标物质，其SIM或SRM的色谱图中一定出现峰。此外，内标物质选择与例如分析对象成分保留时间类似的那样的被稳定同位素标记的化合物。进一步，能够使用内标物质的峰开始点和峰结束点的保留时间，由分析对象成分的色谱图算出面积、高度，从而即使是难以进行分析对象成分的峰检测的状况下也能够算出测定值。

此外假设即使在发生了示出于课题的部分中那样的保留时间变动的问题的情况下，也认为分析对象成分和内标物质这两者发生示出相同行为的变动。因此，即使在上述那样的分析对象成分的峰未检出那样的状况并且发生保留时间的变动的情况下，也能够根据本实施例的方法正确地算出测定值。

以往，有分析对象成分微量而难以峰检测的情况、由于较大量的夹杂成分的影响而判定为噪声，不能峰检测的情况等。然而，通过由内标物质的峰开始点和结束点的保留时间来判定分析对象成分的峰，从而即使在这样的状况下，也能够获得目标成分的测定值，鲁棒性(robustness)优异。

本实施例中，对于作为分析对象成分的睾酮，使用睾酮13C作为内标物质。即，在试样中添加作为内标物质的一定量的睾酮13C，利用液相色谱质谱分析装置来测定该试样，获得了分析对象成分的色谱图和内标物质的色谱图。

示出睾酮和睾酮13C的分析条件例。液相色谱中，溶剂设为0.2mL/min的流量的水/乙腈溶液，柱使用C18柱(粒径5μm，管径2.0mm×50mm)。该条件下的保留时间能够例示例如64秒。分离的试样通过例如ESI离子源来离子化，利用三重四极型质谱分析装置通过SRM进行测定。

图5为表示睾酮和睾酮13C的未知试样中的SRM的测定结果数据的例子的图。该图表示将睾酮13C的峰开始点和结束点的保留时间应用于睾酮的峰开始点和结束点的例子。睾酮的色谱图501为以上述分析条件进行了成分分离和SRM的测定的结果，此时的Q1和Q3各自应当设定的质荷比为289和97。此外睾酮13C的色谱图502为同样地利用SRM测定睾酮13C得到的结果，此时的Q1和Q3各自应当设定的质荷比为292和100。

本分析结果例中，作为分析对象成分的睾酮的浓度低，色谱图501中的睾酮的峰505不清楚，因此难以正确的峰检测。另一方面，作为内标物质以充分的量添加的睾酮13C的峰506的信噪比(S/N)良好，容易获得能够鉴定的峰。

本实施例中，首先对于睾酮13C的峰506进行峰检测。由此，检测出峰开始点511和峰结束点512。将这2点连结，画出睾酮13C的基线504，进行睾酮13C的峰506的面积、高度计算。接下来，将对于睾酮13C的峰506检测到的峰开始点511和峰结束点512的保留时间应用于睾酮的色谱图501，作为睾酮的峰505的峰开始点和峰结束点。各个点的信号强度设为在睾酮的色谱图501的信号强度的排列中，与峰开始点511和峰结束点512的保留时间对应的值。将这2点连结，画出睾酮的基线503，计算睾酮的峰505的面积、高度。最后，算出睾酮与睾酮13C的面积比、高度比，由标准曲线算出浓度。

需说明的的是，SRM一般而言，以时间分割方式进行与多个质荷比对应的离子量的检测，因此有时睾酮的色谱图501与睾酮13C的色谱图502的各数据点的保留时间会不一致。在这样的情况下，只要将相对于睾酮13C的峰506检测到的峰开始点511和峰结束点512的各保留时间最接近地存在的睾酮的色谱图501的各数据点设为睾酮的峰505的峰开始点和峰结束点即可。

通过使用以上方法，不进行难以鉴定的状况下的睾酮的峰505的峰检测，但使画出基线，算出面积、高度成为可能。即，即使在噪声多而难以峰识别的情况下，和除此以外发生了保留时间变动的问题的情况下，也能够更确切地算出分析对象成分的面积、高度。

此外作为其它效果，由于不需要分析对象成分的峰检测，因此减轻数据解析处理的负担。特别是通常内标物质利用检测器以充分的S/N在能够检测的浓度区域内进行测定，因此利用比较简单的算法准确算出峰开始、结束点成为可能。也就是说只要将该峰开始点和峰结束点的保留时间应用于分析对象成分的色谱图即可，因此能够确切地检测浓度区域未知并且保留时间变动的分析对象成分的峰，减轻大范围数据解析处理的负担。

图6为表示用于指示本实施例中的峰检测法的、解析部206中的图形用户界面的一例的图。需说明的是，将作为峰检测的对象的分析对象成分和内标物质设为检测目标成分。

图6中，“ID”为将检测目标成分的编号从1开始依次指定的标记，ID的编号与质谱分析装置的SRM的测定通道相对应。它们可以根据检测目标成分的设定状况采用自动输入。“名称”为检测目标成分的名称。对于该项目，使用者能够自由地输入名称，但不能设定两个以上相同的名称。“预期RT”指定检测目标成分的峰顶的保留时间。“RT范围”指定判定为检测目标成分的峰的范围。在该列所指定的保留时间的范围内，将峰顶最接近于预期RT的峰判定为检测目标成分的峰。本例中，在从(预期RT-RT范围)直至(预期RT+RT范围)，即64±10秒的保留时间的范围内判定ID＝2的睾酮13C的峰。

“IS ID”中，指定内标物质的ID。在内标物质本身的情况下，本列设定0作为特别值。此外在作为分析对象成分的情况下，指定为应当与该成分取面积、高度的比的内标物质的ID。图6的例子中，ID＝1的睾酮需要将ID＝2的睾酮13C设定为内标，因此IS ID设定为2。此外，睾酮13C为内标物质，因此设定为特别值0。

“峰检测类型”中，选择峰检测方法。本列为从多个峰检测方法中择一地选择目标方法的输入地方，作为选择项的例子，从例如梯度检测法(选择项名Delta)、利用拟合进行的峰检测法(选择项名Fitting)、使用内标物质的峰开始/结束时间(With IS)等中选择。需说明的是，在进行使用内标物质的峰开始/结束时间(With IS)的选择的情况下，由于不需要预期RT和RT范围的输入，因此该成分的这些项目为空白栏也没有关系。进一步，在虽然ISID设定为0，峰检测类型成为With IS的情况下，期望进行显示错误等的整合性检查。

以上，由液相色谱质谱分析装置的SRM获得的色谱图进行峰检测处理时的、分析对象成分与内标物质中的峰检测法的设定成为可能。

[实施例2]

利用质谱分析装置进行的SRM中，通常能够设定多个通道。因此，在实施例1的睾酮的测定中，同时测定作为内标物质的睾酮13C。本实施例中，除了实施例1所示的睾酮13C以外，进一步示出将睾酮所包含的氢原子的一部分取代为氘的睾酮d3作为内标物质添加至试样中，同时测定这些的情况下的例子。即，试样中添加多个不同的内标物质，作为内标物质的色谱图获得多个色谱图的例子。

图7为表示同时测定睾酮、睾酮d3、睾酮13C的例子的图。这里示出将睾酮d3的峰开始点和结束点的保留时间应用于睾酮、睾酮13C的峰开始点和结束点的例子。分别利用质谱分析装置进行的SRM同时并且单独地测定睾酮的色谱图701、睾酮d3的色谱图702、睾酮13C的色谱图703。

对于睾酮的色谱图701和睾酮13C的色谱图703，SRM的条件中应当设定的质荷比与实施例1同样。睾酮d3的色谱图702中应当设定的质荷比对于Q1和Q3而言为292和97。在该分析条件下，同时测定睾酮、睾酮d3、睾酮13C，检测睾酮的峰711、睾酮d3的峰712、睾酮13C的峰713。

对于作为内标物质的睾酮d3、睾酮13C，比较明确地检测到峰，但睾酮d3的峰712与睾酮13C的峰713相比，信噪比(S/N)良好。在这样的状况下，能够使用例如S/N最良好的作为内标物质的睾酮d3的峰712来检测峰开始点721和峰结束点722，以它们的保留时间算出睾酮和睾酮13C的定量值。

内标物质在本实施例中使用了2种，但可以使用3种或3种以上。在使用2种以上内标物质的情况下，获得作为内标物质的色谱图的多个色谱图。由这些多个色谱图分别检测峰，如果求出各峰的峰开始时间和峰结束时间，则获得多个峰开始时间和多个峰结束时间。从这些多个峰开始时间和多个峰结束时间挑选或算出1组峰开始时间和峰结束时间的组，将该峰开始时间和峰结束时间的组应用于分析对象成分的色谱图的峰开始时间和峰结束时间。对于求出应当应用于分析对象成分的色谱图的峰开始时间和峰结束时间的组的方法等，可举出例如以下那样的方法。

(1)例如，选择一个S/N最好的物质的方法。

在内标物质的色谱图中，将内标物质的峰的附近的区间设为噪声判定区域，将该区间的信号强度的最大值与最小值之差的半值设为N，将内标物质的峰的高度设为S。由多个内标物质的色谱图分别求出S/N，将该值中最大的物质中的、内标物质的峰的峰开始时间和峰结束时间的组作为分析对象成分的色谱图中的峰开始时间和峰结束时间来应用。由此，更稳定的峰检测成为可能，能够在定量值的算出时抑制误差、偏差。

(2)例如，挑选S/N具有阈值以上的值的物质，对于峰开始时间、峰结束时间，使用挑选的各峰的峰开始时间、峰结束时间的平均值的方法。

挑选具有阈值以上的S/N的内标物质的色谱图，算出这些色谱图中的峰开始时间的平均值和峰结束时间的平均值。将它们作为应用于分析目标成分的色谱图的峰开始时间和峰结束时间的组。由此，能够将夹杂成分、噪声的影响平均化，有助于稳定的峰检测。

(3)例如，进行全部内标物质的峰检测，选择其中最早保留时间的峰开始点和最迟的保留时间的峰结束点的方法。

挑选由多个内标物质的色谱图求出的多个峰开始时间和多个峰结束时间中的最早的峰开始时间和最迟的峰结束时间，作为应用于分析目标成分的色谱图的峰开始时间和峰结束时间的组。通过选择最早的峰开始时间和最迟的峰结束时间，从而将更宽的范围视为峰，对于分析对象成分的峰开始点、结束点的变动进行稳定的峰判定成为可能。

(4)例如，在将分析对象成分的色谱图和某一内标物质的色谱图的强度标准化后的数据中，求出与相同保留时间相当的各信号强度的差，将该分散设为噪声值，这时，选择内标物质的峰高度与噪声值的比最高的内标物质，选择该峰开始时间、峰结束时间的方法。

将分析对象成分的色谱图中的各信号强度的最大值和最小值以1和0进行标准化，进一步内标物质的色谱图中的各信号强度也同样地以1和0进行标准化。求出与相同保留时间相当的各信号强度的差，将该分散设为噪声值。挑选内标物质的峰高度与噪声值的比最大的内标物质的峰开始时间和峰结束时间，作为应用于分析目标成分的色谱图的峰开始时间和峰结束时间的组。通过该方法，从而即使在没有稳定地获得噪声的波形的情况下也能够求出S/N。

(5)例如，求出多个色谱图的各点中的信号强度的平方的值，进行将该算出的值作为数据点的色谱图的峰检测，求出峰开始时间和峰结束时间的方法。

通过对于将内标物质的色谱图的各保留时间下的信号强度平方而得的色谱图进行峰判定，从而抑制噪声的峰判定成为可能。与峰开始时间和峰结束时间的选择相关的该方法能够与上述方法并用。

在使用2种以上内标物质的情况下，多次应用图8的框图的峰检测部801。进一步，在峰范围检测部802中，参照多个峰开始点806、多个峰结束点809和各个内标物质色谱图、分析对象成分色谱图，求出峰开始时间813和峰结束时间814。

通过以上那样的方法，从而能够从内标物质的峰开始点、峰结束点正确地检测分析对象成分的峰开始点、峰结束点。

另外，本发明并不限定于上述实施例，各种变形例也包含在内。例如，上述实施例是为了容易理解本发明来说明而详细地说明的例子，不一定限定于具备所说明的全部构成的情况。此外，能够将某一实施例的构成的一部分置换为其它实施例的构成，此外，也能够在某一实施例的构成中增加其它实施例的构成。此外，对于各实施例的构成的一部分，能够进行其它构成的追加、删除、替换。

符号说明

101：分析对象成分的色谱图，102：内标物质的色谱图，111：峰开始点，112：峰结束点，121：峰开始点，122：峰结束点，201：溶剂输送部，202：试样导入部，203：试样注入部，204：试样分离部，205：质谱分析部，206：解析部，511：峰开始点，512：峰结束点，721：峰开始点，722：峰结束点。

Claims (12)

1.一种色谱质谱分析方法，具有下述工序：

将具有与分析对象成分类似的保留时间并且质荷比不同的内标物质添加至试样的工序，

利用色谱质谱分析装置测定所述试样，获得所述分析对象成分的色谱图和所述内标物质的色谱图的工序，

由所述内标物质的色谱图检测峰，求出该峰的峰开始时间和峰结束时间的工序，以及

将求得的峰开始时间和峰结束时间应用于所述分析对象成分的色谱图的峰开始时间和峰结束时间的工序。

2.根据权利要求1所述的色谱质谱分析方法，其中，

将作为所述内标物质的多个不同的内标物质添加至试样，

获得作为所述内标物质的色谱图的多个色谱图，

由所述多个色谱图分别检测峰，求出各峰的峰开始时间和峰结束时间，

由求得的多个峰开始时间和多个峰结束时间挑选或算出1组峰开始时间和峰结束时间的组，

将所述峰开始时间和峰结束时间的组应用于所述分析对象成分的色谱图的峰开始时间和峰结束时间。

3.根据权利要求2所述的色谱质谱分析方法，其中，挑选所述多个色谱图中具有最大信噪比的色谱图的峰开始时间和峰结束时间，作为所述峰开始时间和峰结束时间的组。

4.根据权利要求2所述的色谱质谱分析方法，其中，算出所述多个色谱图中的信噪比为阈值以上的色谱图的峰开始时间的平均值和峰结束时间的平均值，将各自的平均值作为所述峰开始时间和峰结束时间的组。

5.根据权利要求2所述的色谱质谱分析方法，其中，挑选由所述多个色谱图求得的多个峰开始时间和多个峰结束时间中最早的峰开始时间和最迟的峰结束时间，作为所述峰开始时间和峰结束时间的组。

6.根据权利要求2所述的色谱质谱分析方法，其中，

在将所述分析对象成分的色谱图和1个内标物质的色谱图的信号强度标准化后的数据中，求出与相同保留时间相当的各信号强度的差，将该分散作为噪声值，这时，挑选峰高度与噪声值的比最大的内标物质的峰开始时间和峰结束时间，作为所述峰开始时间和峰结束时间的组。

7.根据权利要求1所述的色谱质谱分析方法，其中，求出所述内标物质的色谱图的各点中的信号强度的平方的值，由将该值作为数据点的色谱图求出所述峰开始时间和所述峰结束时间。

8.根据权利要求1所述的色谱质谱分析方法，其中，所述内标物质为与所述分析对象成分保留时间类似的稳定同位素标记化合物。

9.一种色谱质谱分析装置，其是同时测定分析对象成分和内标物质，获得分析对象成分的色谱图和内标物质的色谱图的色谱质谱分析装置，具有：

峰检测部，其由内标物质的色谱图求出峰开始点和峰结束点，

峰范围检测部，其由所述峰检测部检测得到的峰开始点和峰结束点来抽取峰开始时间和峰结束时间，以及

峰范围应用部，其将由所述峰范围检测部抽取得到的峰开始时间和峰结束时间应用于所述分析对象成分的色谱图的峰开始点和峰结束点。

10.根据权利要求9所述的色谱质谱分析装置，其中，

所述峰检测部由相对于不同的内标物质的多个色谱图求出各个峰的峰开始点和峰结束点，

所述峰范围检测部从由所述峰检测部求得的多个峰开始点和多个峰结束点挑选或算出1组峰开始时间和峰结束时间的组，

所述峰范围应用部将所述峰开始时间和峰结束时间的组应用于分析对象成分的色谱图的峰开始点和峰结束点。

11.根据权利要求9所述的色谱质谱分析装置，其中，所述内标物质为与所述分析对象成分保留时间类似的稳定同位素标记化合物。

12.根据权利要求9所述的色谱质谱分析装置，其中，所述色谱为液相色谱。

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