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Abstract

本发明公开了一种从沙棘鲜果中提取SOD的方法，a、取沙棘鲜果榨汁，以获取沙棘果浆汁；将获得的沙棘果浆汁低温离心除去上层油脂，得除油沙棘糊；向所述的除油沙棘糊中加入果胶酶，然后球磨，得质地均匀的沙棘果浆；将沙棘果浆与PBS缓冲液混合，室温下搅拌得到沙棘PBS混合液；将所述的沙棘PBS混合液离心取上清液，并与冰丙酮混合搅拌，再次离心得SOD酶沉淀；将SOD酶放入冷冻干燥机，得浅绿色粉末状干粉。本发明采用机械化学技术提取超氧化物歧化酶具有诸多优点，该工艺提取率高、酶活高，生产周期短，技术工艺简单，有机溶剂使用量小。残渣可继续提取其他有效物质，对环境不造成污染等优点，为沙棘资源的综合利用和新产品开发提供技术依据。

Description

一种从沙棘鲜果中提取SOD的方法
技术领域
本发明涉及一种从植物中提取分离其有效成分的方法，具体地说，提供了一种由沙棘鲜果中提取分离其所含超氧化物歧化酶(SOD)的工艺方法。
背景技术
沙棘(拉丁学名：Hippophae rhamnoides Linn.)，是一种胡颓子科、沙棘属落叶性灌木，其特性是耐旱、抗风沙，可以在盐碱化土地上生存，因此被广泛用于水土保持。中国西北部大量种植沙棘，用于沙漠绿化。沙棘是植物和其果实的统称。植物沙棘为胡颓子科沙棘属，是一种落叶性灌木。
沙棘含有人体所必需的多种营养活性物质,包括多种不饱和脂肪酸、胡萝卜素、类胡萝卜素及其衍生物、天然维E等多种脂溶性维生素以及36种黄酮类和多酚类物质,还有甾醇、花青素、槲皮素等近160多种生命活性物质，是一个完整的生命活性因子宝库，是极佳的营养保健品。(生物学通报.2005.2.13-15)现代医学研究，沙棘可降低胆固醇，缓解心绞痛发作，还有防治冠状动脉粥样硬化性心脏病的作用。
SOD是超氧化物歧化酶的简称，能够清除人体内过剩的氧自由基，具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗衰老等作用。近年来医学方面的大量研究表明人体的多种疾病如癌症、心脏病、中风及一些炎症的发生、发展与恶化都与氧自由基脱不了干系。SOD能维护人体正常的生理机能，增强免疫力，预防心脑血管等疾病。
目前提取SOD的两种来源是从动物血液中提取、从植物中提取。而动物血液中提取的SOD不易保存，且可能携带病毒源，植物中提取的SOD则更稳定更安全且易保存。沙棘中SOD的含量是人参的5倍数，冬虫夏草的15倍之多。
传统的SOD提取工艺复杂、价格昂贵，严重影响SOD的应用及系列产品开发。采用机械化学提取技术能够提高提取率和酶活，简化工业，且提取过程无需使用有机溶剂，环境友好，具有广阔的应用前景。
利用机械化学提取沙棘中SOD的方法目前还未见报道，是一种提取超氧化物歧化酶的新方法，有望取代传统的提取方法，对推动传统药用植物提取技术的现代化进程具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于解决现有沙棘SOD提取工艺中存在的问题，提供一种原材料易得、工艺简单、环境友好的机械化学提取新方法。
为解决以上问题，本发明所采用的技术方案如下：
一种从沙棘鲜果中提取SOD的方法，按照如下步骤进行：
a、取沙棘鲜果榨汁，以获取沙棘果浆汁；
b、将获得的沙棘果浆汁在0～4℃下离心除去上层油脂，得除油沙棘糊；
c、向所述的除油沙棘糊中加入果胶酶，然后球磨，得质地均匀的沙棘果浆；
d、将沙棘果浆与PBS缓冲液混合，室温下搅拌得到沙棘PBS混合液；
e、将所述的沙棘PBS混合液离心取上清液，并与冰丙酮混合搅拌，再次离心得SOD酶沉淀；
f、对所述的SOD酶进行酶活检验；
g、将SOD酶在-55℃下进行冷冻干燥8h，得浅绿色粉末状干粉。进一步，步骤a中，所述榨汁过程采用陶瓷螺杆榨汁机进行榨汁。
进一步，步骤b中，离心过程要保证低温状态，油脂在此温度下为固态易除去。
进一步，步骤c中，所述的球磨过程是在粒径8mm的氧化锆球磨珠作用下进行，转速为10～30rpm，球磨时间为5～20min。
再进一步，步骤c中，氧化锆球磨珠个数为6～20个，优选为10～16个。
进一步，步骤d中，所述PBS缓冲液为沙棘果浆体积的1～10倍，优选为8～10倍。
进一步，步骤d中，搅拌时间为10～120分钟，优选为10～30分钟。
进一步，步骤e中，所述丙酮体积为所述沙棘果浆体积的0.5～5倍，优选为0.5～1倍。
与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
(1)与现有提取SOD的加工方法相比，本发明方法制作工艺简单，生产成本低，提取率高、酶活高，生产周期短，技术工艺简单；
(2)沙棘富含大量的超氧化物歧化酶且种植环保，加工过程有机溶剂使用量小，减轻环境污染；
(3)本发明工艺所产生的残渣无污染后续可制成动物饲料，具有良好的市场应用前景。
具体实施方式
以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此：
植物匀浆中SOD活力计算方法：
测定原理：通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基，后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见光分光光度计测其吸光度。因SOD对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，测定管吸光度值则会低于对照管的吸光度值。
定义：每毫克组织蛋白在1mL反应液中SOD抑制率达50％时所对应的SOD量为一个SOD活力单位(U)。
计算公式：
Figure BDA0002220481050000041
实施例1
挑选新鲜沙棘鲜果500g，去除杂物及杂质叶片，然后用陶瓷螺杆榨汁机榨汁，获得沙棘果浆汁。将获得的沙棘果浆汁在温度为0～5℃的条件下离心除上层油脂，得除油沙棘糊。取50mL沙棘糊球磨10分钟，速度为30rpm，得质地均匀的沙棘果浆。取10mL果浆与10mL浓度为0.05mol/L的PBS缓冲液混合，室温下搅拌10min。将处理过的沙棘PBS混合液离心取上清液，再与提前冷藏好的冰丙酮等体积混合搅拌，再次离心得SOD酶沉淀。用试剂盒测得酶活为555.014Umgprot/mL，蛋白含量为83.1％，将SOD酶在-55℃下进行冷冻干燥8h，得浅绿色粉末状干粉。
实施例2
挑选新鲜沙棘鲜果500g，去除杂物及杂质叶片，然后用陶瓷螺杆榨汁机榨汁，获得沙棘果浆汁。将获得的沙棘果浆汁在温度为0～5度的条件下离心除上层油脂，得除油沙棘糊。取50ml沙棘糊球磨20分钟，速度为30rpm，得质地均匀的沙棘果浆。取10ml果浆与10ml浓度为0.05mol/L的PBS缓冲液混合，室温下搅拌10min。将处理过的沙棘PBS混合液离心取上清液，再与提前冷藏好的冰丙酮等体积混合搅拌，再次离心得SOD酶沉淀。用试剂盒测得酶活为551.944Umgprot/ml，蛋白含量为85.6％，将SOD酶在-55℃下进行冷冻干燥8h，得浅绿色粉末状干粉。
实施例3
挑选新鲜沙棘鲜果500g，去除杂物及杂质叶片，然后用陶瓷螺杆榨汁机榨汁，获得沙棘果浆汁。将获得的沙棘果浆汁在温度为0～5度的条件下离心除上层油脂，得除油沙棘糊。取50ml沙棘糊球磨30分钟，速度为30rpm，得质地均匀的沙棘果浆。取10ml果浆与10ml浓度为0.05mol/L的PBS缓冲液混合，室温下搅拌10min。将处理过的沙棘PBS混合液离心取上清液，再与提前冷藏好的冰丙酮等体积混合搅拌，再次离心得SOD酶沉淀。用试剂盒测得酶活为512.395Umgprot/ml，蛋白含量为81.5％，将SOD酶在-55℃下进行冷冻干燥8h，得浅绿色粉末状干粉。
实施例4
挑选新鲜沙棘鲜果500g，去除杂物及杂质叶片，然后用陶瓷螺杆榨汁机榨汁，获得沙棘果浆汁。将获得的沙棘果浆汁在温度为0～5度的条件下离心除上层油脂，得除油沙棘糊。取50ml沙棘糊球磨10分钟，速度为30rpm，得质地均匀的沙棘果浆。取10ml果浆与50ml浓度为0.05mol/L的PBS缓冲液混合，室温下搅拌20min。将处理过的沙棘PBS混合液离心取上清液，再与提前冷藏好的冰丙酮等体积混合搅拌，再次离心得SOD酶沉淀。用试剂盒测得酶活为686.796Umgprot/ml，蛋白含量为88.7％，将SOD酶在-55℃下进行冷冻干燥8h，得浅绿色粉末状干粉。
实施例5
挑选新鲜沙棘鲜果500g，去除杂物及杂质叶片，然后用陶瓷螺杆榨汁机榨汁，获得沙棘果浆汁。将获得的沙棘果浆汁在温度为0～5度的条件下离心除上层油脂，得除油沙棘糊。取50ml沙棘糊球磨20分钟，速度为30rpm，得质地均匀的沙棘果浆。取10ml果浆与50ml浓度为0.05mol/L的PBS缓冲液混合，室温下搅拌20min。将处理过的沙棘PBS混合液离心取上清液，再与提前冷藏好的冰丙酮等体积混合搅拌，再次离心得SOD酶沉淀。用试剂盒测得酶活为657.942Umgprot/ml，蛋白含量为87.4％，将SOD酶在-55℃下进行冷冻干燥8h，得浅绿色粉末状干粉。
实施例6
挑选新鲜沙棘鲜果500g，去除杂物及杂质叶片，然后用陶瓷螺杆榨汁机榨汁，获得沙棘果浆汁。将获得的沙棘果浆汁在温度为0～5度的条件下离心除上层油脂，得除油沙棘糊。取50ml沙棘糊球磨30分钟，速度为30rpm，得质地均匀的沙棘果浆。取10ml果浆与50ml浓度为0.05mol/L的PBS缓冲液混合，室温下搅拌20min。将处理过的沙棘PBS混合液离心取上清液，再与提前冷藏好的冰丙酮等体积混合搅拌，再次离心得SOD酶沉淀。用试剂盒测得酶活为648.851Umgprot/ml，蛋白含量为87.1％，将SOD酶在-55℃下进行冷冻干燥8h，得浅绿色粉末状干粉。
实施例7
挑选新鲜沙棘鲜果500g，去除杂物及杂质叶片，然后用陶瓷螺杆榨汁机榨汁，获得沙棘果浆汁。将获得的沙棘果浆汁在温度为0～5度的条件下离心除上层油脂，得除油沙棘糊。取50ml沙棘糊球磨10分钟，速度为30rpm，得质地均匀的沙棘果浆。取10ml果浆与100ml浓度为0.05mol/L的PBS缓冲液混合，室温下搅拌10min。将处理过的沙棘PBS混合液离心取上清液，再与提前冷藏好的冰丙酮等体积混合搅拌，再次离心得SOD酶沉淀。用试剂盒测得酶活为1019.644Umgprot/ml，蛋白含量为92.6％，将SOD酶在-55℃下进行冷冻干燥8h，得浅绿色粉末状干粉。
实施例8
挑选新鲜沙棘鲜果500g，去除杂物及杂质叶片，然后用陶瓷螺杆榨汁机榨汁，获得沙棘果浆汁。将获得的沙棘果浆汁在温度为0～5度的条件下离心除上层油脂，得除油沙棘糊。取50ml沙棘糊球磨20分钟，速度为30rpm，得质地均匀的沙棘果浆。取10ml果浆与100ml浓度为0.05mol/L的PBS缓冲液混合，室温下搅拌10min。将处理过的沙棘PBS混合液离心取上清液，再与提前冷藏好的冰丙酮等体积混合搅拌，再次离心得SOD酶沉淀。用试剂盒测得酶活为922.419Umgprot/ml，蛋白含量为90.1％，将SOD酶在-55℃下进行冷冻干燥8h，得浅绿色粉末状干粉。
实施例9
挑选新鲜沙棘鲜果500g，去除杂物及杂质叶片，然后用陶瓷螺杆榨汁机榨汁，获得沙棘果浆汁。将获得的沙棘果浆汁在温度为0～5度的条件下离心除上层油脂，得除油沙棘糊。取50ml沙棘糊球磨30分钟，速度为30rpm，得质地均匀的沙棘果浆。取10ml果浆与100ml浓度为0.05mol/L的PBS缓冲液混合，室温下搅拌10min。将处理过的沙棘PBS混合液离心取上清液，再与提前冷藏好的冰丙酮等体积混合搅拌，再次离心得SOD酶沉淀。用试剂盒测得酶活为914.099Umgprot/ml，蛋白含量为91.8％，将SOD酶在-55℃下进行冷冻干燥8h，得浅绿色粉末状干粉。
实施例10
挑选新鲜沙棘鲜果500g，去除杂物及杂质叶片，然后用陶瓷螺杆榨汁机榨汁，获得沙棘果浆汁。将获得的沙棘果浆汁在温度为0～5度的条件下离心除上层油脂，得除油沙棘糊。取50ml沙棘糊球磨60分钟，速度为30rpm，得质地均匀的沙棘果浆。取10ml果浆与100ml浓度为0.05mol/L的PBS缓冲液混合，室温下搅拌10min。将处理过的沙棘PBS混合液离心取上清液，再与提前冷藏好的冰丙酮等体积混合搅拌，再次离心得SOD酶沉淀。用试剂盒测得酶活为865.623Umgprot/ml，蛋白含量为90.3％，将SOD酶在-55℃下进行冷冻干燥8h，得浅绿色粉末状干粉。
实施例11
挑选新鲜沙棘鲜果500g，去除杂物及杂质叶片，然后用陶瓷螺杆榨汁机榨汁，获得沙棘果浆汁。将获得的沙棘果浆汁在温度为0～5度的条件下离心除上层油脂，得除油沙棘糊。取50ml沙棘糊球磨120分钟，速度为30rpm，得质地均匀的沙棘果浆。取10ml果浆与100ml浓度为0.05mol/L的PBS缓冲液混合，室温下搅拌10min。将处理过的沙棘PBS混合液离心取上清液，再与提前冷藏好的冰丙酮等体积混合搅拌，再次离心得SOD酶沉淀。用试剂盒测得酶活为843.113Umgprot/ml，蛋白含量为88.2％，将SOD酶在-55℃下进行冷冻干燥8h，得浅绿色粉末状干粉。
表1球磨条件对酶活的影响
Figure BDA0002220481050000081
Figure BDA0002220481050000091

Claims (10)

1.一种从沙棘鲜果中提取SOD的方法，其特征在于：所述的方法按照如下步骤进行：
a、取沙棘鲜果榨汁，以获取沙棘果浆汁；
b、将获得的沙棘果浆汁在0～4℃离心除去上层油脂，得除油沙棘糊；
c、向所述的除油沙棘糊中加入果胶酶，然后球磨，得质地均匀的沙棘果浆；
d、将沙棘果浆与PBS缓冲液混合，室温下搅拌得到沙棘PBS混合液；
e、将所述的沙棘PBS混合液离心取上清液，并与冰丙酮混合搅拌，再次离心得SOD酶沉淀；
f、对所述的SOD酶进行酶活检验；
g、将SOD酶冷冻干燥，得浅绿色粉末状干粉。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中，所述的球磨过程是在粒径8mm的氧化锆球磨珠作用下进行，转速为10～30rpm，球磨时间为5～20min。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤c中，所述的氧化锆球磨珠个数为6～20个。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤c中，所述的氧化锆球磨珠个数为10～16个。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤d中，所述PBS缓冲液为沙棘果浆体积的1～10倍。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤d中，所述PBS缓冲液为沙棘果浆体积的8～10倍。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤d中，所述的搅拌时间为10～120分钟。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤d中，所述的搅拌时间为10～30分钟。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤e中，所述丙酮体积为所述沙棘果浆体积的0.5～5倍。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤e中，所述冷冻干燥温度为-55℃，时间为8h。
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