CN107475208A - 利用树莓提取sod酶和树莓苷的制备方法 - Google Patents

利用树莓提取sod酶和树莓苷的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107475208A
CN107475208A CN201710582886.9A CN201710582886A CN107475208A CN 107475208 A CN107475208 A CN 107475208A CN 201710582886 A CN201710582886 A CN 201710582886A CN 107475208 A CN107475208 A CN 107475208A
Authority
CN
China
Prior art keywords
raspberry
concentrate
filter
eluent
volume
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710582886.9A
Other languages
English (en)
Inventor
向华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
CHANGSHA XIANGZI BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
CHANGSHA XIANGZI BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by CHANGSHA XIANGZI BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical CHANGSHA XIANGZI BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201710582886.9A priority Critical patent/CN107475208A/zh
Publication of CN107475208A publication Critical patent/CN107475208A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0089—Oxidoreductases (1.) acting on superoxide as acceptor (1.15)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06—Separation; Purification
    • C07H1/08—Separation; Purification from natural products
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
    • C07H17/06—Benzopyran radicals
    • C07H17/065—Benzo[b]pyrans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y115/00—Oxidoreductases acting on superoxide as acceptor (1.15)
    • C12Y115/01—Oxidoreductases acting on superoxide as acceptor (1.15) with NAD or NADP as acceptor (1.15.1)
    • C12Y115/01001—Superoxide dismutase (1.15.1.1)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供一种利用树莓提取SOD酶和树莓苷的制备方法，具体步骤包括如下：新鲜树莓果实经酶解、水提、膜过滤、柱吸附、分步洗脱、浓缩结晶制得SOD酶、树莓苷和花色苷纯品。本发明方法操作简单，大大提高了SOD酶的产率，极大地降低了SOD酶的生产成本，简化了其生产过程。使用树莓果实作为提取原料，既大大提高了树莓的利用效率，又提高了树莓的附加值。

Description

利用树莓提取SOD酶和树莓苷的制备方法
技术领域
本发明涉及一种从树莓叶提取SOD酶和树莓苷的制备方法，属于天然产物分离技术领域。
背景技术
树莓又名山莓、山抛子、牛奶泡、撒秧泡，三月泡、四月泡、龙船泡，蔷薇科悬钩子属的植物。分布于日本、越南、朝鲜、缅甸以及中国大陆的甘肃、西藏、东北、青海、新疆等地，生长于海拔200米至2,200米的地区，多生在向阳山坡、山谷、荒地、溪边和疏密灌丛中潮湿处，目前尚未由人工引种栽培。落叶灌木，高1—2米，小枝红褐色，有许多皮刺分布于枝干，幼枝带绿色，有柔毛及皮刺。叶卵形或卵状披针形，长3.5—9厘米，宽2—4.5厘米，顶端渐尖，基部圆形或略带心形，不分裂或有时作3浅裂，边缘有不整齐的重锯齿，两面脉上有柔毛，背面脉上有细钩刺；叶柄长约1.5厘米，有柔毛及细刺；托叶线形，基部贴生在叶柄上。花白色，直径约2厘米，通常单生在短枝上；萼片卵状披针形，有柔毛，宿存。聚合果球形，直径1—1.2厘米，成熟时红色。花期4—5月，果期5—6月。
树莓果实氨基酸(20.84mg/g·FW)至少含有17种氨基酸，包括8种人体必需氨基酸；SOD含量达237.98μg/g·FW；矿质元素含量丰富，尤其是锶(Se)；种子油中脂肪酸尬发以下饱和脂肪成分以不饱和脂肪酸为主，亚油酸(46.56％)、亚麻酸(11.67％)有较高含量，此外，含丰富糖类、蛋白质、有机酸、维生素、氨基酸等营养成分，被称为富含SOD酶的“第三代黄金水果”。
公开号为CN1341713的中国专利公开了一种硫酸铵沉淀法提取山楂SOD酶，其特征在于提取步骤为：新鲜山楂果，通过组织捣碎机捣碎成浆，置于4000-6000rpm离心机离心10-30分钟，弃沉淀残渣，获得上清液作为粗提液；将粗提液加入硫酸铵，使粗提液中硫酸铵达到30％饱和度，在室温(23-25℃)下搅拌55分钟，采用膜系统过滤获得滤液；在30％硫酸铵沉淀后的滤液中，加入硫酸铵使其饱和度达到90％，在室温下搅拌60分钟，置于10000-15000rpm离心机离心20-40分钟，将沉淀溶于最小量的5mM pH7.8磷酸缓冲液中(含2mMEDTA)，然后用上述缓冲液和SephadexG-25脱盐；Sephadex G-100柱，预先用pH7.8、5mM的磷酸钾缓冲液平衡；将脱盐后的粗酶提取液加入到柱中，并用上述缓冲液洗脱，采用全自动分布收集系统收集洗脱液，合并SOD活力高的收集液。
公开号为CN1683397的中国专利公开了一种从沙棘鲜嫩枝叶提取蛋白质、总黄酮和超氧化物歧化酶的工艺，以沙棘嫩枝叶为主要原料，其特征在于：(1)将沙棘嫩枝叶经过挑选、锤切、揉搓、压榨，用30目滤网过滤去枝叶渣，以获取沙棘嫩枝叶浆汁；(2)将以上沙棘嫩枝叶浆汁用热交换器加热到蛋白的热凝点60～93℃温度下，并在容器中保持30分钟后，用60目滤网过滤收集叶蛋白凝絮，叶蛋白凝絮经120目滤布、0.1Mpa压力过滤后得到滤饼，将滤饼在120～130℃温度下烘干干燥，干燥后粉碎、以获得叶蛋白粉粗品；(3)将以上经除去叶蛋白凝絮后的热叶清汁和经压滤出的热叶清汁合并，再进行提取总黄酮的工艺过程，因沙棘嫩枝叶中的总黄酮易溶热水中，SOD酶可耐受95℃温度，仍存活于去叶蛋白后的叶清汁中，去叶蛋白后的叶清汁经过-600mmHg负压和60℃温度，减压浓缩到原体积的1/3后冷却到4℃，并保持2～3小时，用分离因数大于3500G的卧式螺旋离心分离机，离心分离总黄酮沉淀，分离出的总黄酮粗品在85℃温度下烘干干燥后粉碎，以得到沙棘嫩枝叶总黄酮粉粗品；(4)将以上经除去总黄酮后的浓缩叶清汁，再进行提取SOD酶的工艺过程，将去除总黄酮后的浓缩叶清汁在4℃下加入硫酸铵盐(NH4)2SO4到85％的饱和浓度，并保持4小时后，用分离因数大于6000G的管式超高速离心分离机回收硫酸铵盐所析出的SOD酶沉淀，回收的Cu，Zn-SOD酶沉淀在-17℃温度下、-600mmHg负压下冻干干燥，以获得沙棘嫩枝叶Cu，Zn-SOD酶粗品冻干粉。
公开号为CN101633918的中国专利公开了一种从红树莓果实中提取超氧化物歧化酶的方法，按下述步骤：1)抽提：将磷酸盐缓冲液分两次加入到速冻红树莓中而后抽提，保留上清液待用；其中红树莓与磷酸盐缓冲液按1.0∶1.0-1.5(G∶V)混合；2)盐析：将上述上清液内先加入50％饱和度的硫酸铵再加入的90％饱和度的硫酸按，每次加入后均冷冻离心，取两次所得沉淀用磷酸盐缓冲液溶解；溶解后经聚乙二醇浓缩，浓缩液冷冻离心收集上清液；3)柱层析：将上述上清液用磷酸盐缓冲液洗进行柱层析，将各洗脱液经紫外检测收集230-500nm的活性峰，而后经聚乙二醇浓缩，浓缩液冷冻离心收集上清液，待用；4)金属螯合亲和层析将上述上清液上金属螯合亲和层析柱，用pH5.0柠檬酸缓冲液洗脱，将各洗脱液经紫外检测收集230-500nm的活性峰，经透析除去无机盐，即得超氧化物歧化酶。
公开号为CN104004048A的中国专利公开了一种邹皮木瓜高利用率提取及加工方法，包括如下步骤：邹皮木瓜与水混合后粉碎至糊状，常规过滤，对滤出液进行离心分离；上清液经0.22μm孔径过滤膜过滤；滤过液经截留分子量为50,000超滤膜包过滤；滤过液经截留分子量为5,000超滤膜包过滤；截留液通过丙酮法进行SOD酶沉淀，沉淀物经低温冷冻干燥，得SOD酶；将所述5,000超滤膜包过滤的滤过液和50,000超滤膜包过滤的截留液合并，得木瓜汁液原料；将所述常规过滤的滤渣在超声波辅助下进行无水乙醇浸提、过滤；滤清液去除乙醇后得齐墩果酸粗品，残渣烘干、粉碎、过筛得动物饲料。
公开号为CN102337252A的中国专利公开了一种从猪血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，依照如下步骤进行：(1)向猪血中加入抗凝剂，离心3000rpm离心10～30min去血浆，收集红细胞；然后加入红细胞体积3～5倍的0.9％NaCl溶液进行清洗，离心4000rpm离心10～30min，弃去上清液后，收集红细胞并加入红细胞体积1～3倍体积的去离子水，0～4℃水浴下静置10-15h后得到溶血液；(2)向溶血液中缓慢加入4℃以下冷预过的95％乙醇后，再缓慢加入预冷过的的氯仿，然后搅拌、静置、离心后收集上清液获得粗酶液；(3)向粗酶液中加入丙酮，然后搅拌、离心，取沉淀物；(4)将沉淀物用加入1-3倍体积的去离子水进行溶解，并进行热处理后，迅速冰浴至4℃以下，然后，加入K2HPO4缓冲液，搅拌、离心后获得上清液；(5)采用螺旋梯度洗脱技术对上清液进行纯化处理，获得纯化酶液；(6)将纯化酶液通过透析工艺除去盐离子，并最终将精致酶液进行冷冻干燥，可以获得最终的猪血SOD成品。
公开号为CN101962634A的中国专利公开了一种从宣木瓜果实中提取木瓜蛋白酶的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将新鲜宣木瓜果实洗净，去皮、去籽；(2)向步骤(1)处理过的果实里加蒸馏水进行研磨匀浆；(3)将步骤(2)的研磨匀浆采用超声提取，通过冰浴的方法控制超声温度为4-12℃；(4)将经过超声提取过的浆料用离心机冷冻离心分离，温度为3-5℃，离心机的转速为6000-10000r/min；(5)将离心所得的上层清液采用200-600目的筛网及孔径为5μm的袋式过滤器进行粗过滤，去除宣木瓜果浆中的杂质及不溶性成分，得到粗酶液；(6)将粗酶液采用截留分子量为9000-10000道尔顿的超滤膜超滤，分离小分子杂质，得到超滤产物；(7)将超滤后的产物进行冷冻真空干燥，得木瓜蛋白酶。
从树莓研究文献来看，黄酮类化合物具有降血糖、降血脂、抗心率失常、抗氧化高效性与低毒性、抗衰老等生理活性。东莨菪内酯具有一定的镇痛、抗炎、祛痰和平喘的作用。茶多酚具有降压、降血脂、抗突变、防治心血管疾病、抗菌消炎的功效，还具有消除自由基、防癌抗癌、抗脂质过氧化及抗衰老等作用。SOD在防辐射、抗衰老、防止肿瘤等方面有独特功能，添加到药品、化妆品中能起抗炎、抗衰老作用，添加到食品中则有保健作用。随着树莓叶药用有效成分研究的进一步深入，树莓叶的药用价值必将会得到更加充分的发现和利用。若对提取过程中其有效成分进行综合开发利用，因而对树莓进行综合深加工意义非凡，探索从树莓叶中快速提取高活性的SOD酶，其意义相当远大。
发明内容
针对山莓果实含有大量水溶性色素和抗氧化成分，在提取过程中由于氧化造成其损失很大，此类功能性成分并未得到充分利用。
本发明采用的技术方案包括：新鲜树莓果实经酶解、水提、膜过滤、柱吸附、分步洗脱、浓缩结晶制得SOD酶、树莓苷和花色苷纯品。
因此，本发明提供一种利用树莓提取SOD酶和树莓苷的制备方法，具体步骤包括如下：
(1)将树莓果实匀浆，分别加入果胶酶和纤维素复合酶至终浓度都在10U/mL以上，酶解一定时间，过滤得滤液Ⅰ和滤渣；
(2)滤渣再加入水，搅拌提取15～30min，过滤得滤液Ⅱ，合并得提取液，其中山莓果实重量kg与水的体积L比为1:2～4。
(3)提取液经超滤浓缩至原有体积的1/5～1/10，得浓缩液Ⅰ和滤过液，浓缩液Ⅰ加入两倍至四倍体积的预冷丙酮，-2℃～3℃下静置15～30min，5000rpm～8000rpm离心10～20min，得沉淀和上清液；
(4)沉淀加入水溶解后，5000rpm～8000rpm再次离心10～20min，得清液上金属螯合亲和层析柱，用三倍至六倍柱体积的pH5.0柠檬酸缓冲液洗脱，收集洗脱液，经超滤除去无机盐，即得超氧化物歧化酶，其中沉淀的重量g与水的体积mL比为1:10～25。
(5)将滤过液和上清液合并，在45～55℃减压进行浓缩至原有体积的1/10～1/25，得到浓缩液Ⅱ，上S-9大孔树脂吸附，用三倍柱体积的水进行冲洗，并用两倍至四倍柱体积的20～35％乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液Ⅰ；
(6)再用三倍至五倍柱体积的60～85％乙醇溶液对S-9大孔树脂进行洗脱，得到洗脱液Ⅱ，并将洗脱液Ⅱ进行45～55℃减压浓缩至原来体积的1/8～1/15，得浓缩液Ⅱ；
(7)将洗脱液Ⅰ进行45～55℃减压浓缩至干得干燥物即为花色苷；
(8)将浓缩液Ⅱ放置在4～8℃静置过夜结晶，过滤得结晶物，即为树莓苷粗品，再在4～8℃重结晶得树莓苷纯品。
在一个实施方案中，步骤(1)中所述果胶酶和纤维素复合酶可以直接购买，要求果胶酶的活性达到1000U/g以上，纤维素复合酶的活性达到1500U/g以上。
在一个实施方案中，步骤(1)中所述酶解时间为30～120min。
在一个实施方案中，步骤(4)中所述pH5.0柠檬酸缓冲液，是指0.01～0.5mol/L的柠檬酸根离子的水溶液。
在一个实施方案中，步骤(4)中所述金属螯合亲和层析柱为Metals ChelatingAffinity Chromatogram，用0.1mol/LCuSO4作为离子载体。
在一个实施方案中，步骤(1)、(2)和(8)中所述过滤，是指采用0.2μm孔径大小的陶瓷膜过滤一次。
所述20～35％乙醇溶液是指含有20～35％乙醇的水溶液，35％乙醇溶液的配制方法为35mL乙醇加入65mL的水混合制成。
技术效果
1、本发明方法操作简单，大大提高了SOD酶的产率，极大地降低了SOD酶的生产成本，简化了其生产过程。
2、使用树莓果实作为提取原料，既大大提高了树莓的利用效率，又提高了树莓的附加值。
具休实施方式
下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任何一个或类似实例。
实施例1
将100kg树莓果实匀浆，加入果胶酶至终浓度都在20U/mL，加入纤维素复合酶至终浓度都在30U/mL以上，酶解120min，过滤得滤液Ⅰ和滤渣；滤渣再加入300L水，搅拌提取30min，过滤得滤液Ⅱ，合并得320L提取液。提取液经超滤浓缩至40L，得浓缩液Ⅰ和280L滤过液，浓缩液Ⅰ加入预冷丙酮100L，-2℃～3℃下静置20min，7000rpm离心20min，得115g沉淀和上清液；沉淀加入1.5L水溶解后，8000rpm再次离心10min，得清液上金属螯合亲和层析柱，用六倍柱体积的0.1mol/L、pH5.0柠檬酸缓冲液洗脱，收集洗脱液，经超滤除去无机盐，即得21.5g超氧化物歧化酶。将滤过液和上清液合并，在45℃减压进行浓缩至30L，得到浓缩液Ⅱ，上S-9大孔树脂吸附，用三倍柱体积的水进行冲洗，并用四倍柱体积的30％乙醇溶液进行洗脱，得到80L洗脱液Ⅰ；再用三倍柱体积的含有70％乙醇溶液对S-9大孔树脂进行洗脱，得到60L洗脱液Ⅱ，并将洗脱液Ⅱ进行45℃减压浓缩至5L，得浓缩液Ⅱ；将洗脱液Ⅰ进行45℃减压浓缩至干得干燥物即为3.36kg花色苷；将浓缩液Ⅱ放置在5℃静置过夜结晶，过滤得结晶物，即为树莓苷粗品，再在4℃重结晶得1.25kg树莓苷纯品。经检测，树莓苷的含量为98.68％；花色苷的色价为367，超氧化物歧化酶活性达到3420U/mg。
实施例2
将200kg树莓果实匀浆，加入果胶酶至终浓度都在25U/mL，加入纤维素复合酶至终浓度都在30U/mL以上，酶解120min，过滤得滤液Ⅰ和滤渣；滤渣再加入600L水，搅拌提取30min，过滤得滤液Ⅱ，合并得600L提取液。提取液经超滤浓缩至70L，得浓缩液Ⅰ和530L滤过液，浓缩液Ⅰ加入预冷丙酮150L，-2℃～3℃下静置30min，6000rpm离心20min，得214g沉淀和上清液；沉淀加入0.8L水溶解后(其中沉淀的重量g与水的体积mL比为1:10～25)，8000rpm再次离心10min，得清液上金属螯合亲和层析柱，用五倍柱体积的0.1mol/L、pH5.0柠檬酸缓冲液洗脱，收集洗脱液，经超滤除去无机盐，即得40.8g超氧化物歧化酶。将滤过液和上清液合并，在45℃减压进行浓缩至40L，得到浓缩液Ⅱ，上S-9大孔树脂吸附，用三倍柱体积的水进行冲洗，并用四倍柱体积的含有30％乙醇溶液进行洗脱，得到160L洗脱液Ⅰ；再用三倍柱体积的含有60％乙醇溶液对S-9大孔树脂进行洗脱，得到120L洗脱液Ⅱ，并将洗脱液Ⅱ进行45℃减压浓缩至10L，得浓缩液Ⅱ；将洗脱液Ⅰ进行45℃减压浓缩至干得干燥物即为7.13kg花色苷；将浓缩液Ⅱ放置在4～8℃静置过夜结晶，过滤得结晶物，即为树莓苷粗品，再在4～8℃重结晶得2.62kg树莓苷纯品。经检测，树莓苷的含量为98.65％；花色苷的色价为361，超氧化物歧化酶活性达到3580U/mg。
对照实施例1
1)抽提：取100g冷冻树莓，按1.0∶1.0(G∶V)比例加入pH7.8，50mmol/L的磷酸盐缓冲液100mL，先加人50mL磷酸盐缓冲液和1g石英砂，在冰盐浴的条件下充分研磨；在12000r/min离心条件下-10℃高速冷冻离心40min，使悬浮物完全沉淀，取沉淀再加入50mL的磷酸盐缓冲液冰盐浴充分研磨，并以上述离心条件高速冷冻离心；弃去沉淀合并两次上清液，在抽提1小时，保留上清液待用。
2)盐析：向上清液中加100ml的50％饱和度的硫酸铵，4℃冷藏静置1h，而后以12000r/min下冷冻离心10min；取上清液再加100ml的90％饱和度的硫酸按，冷藏静置1h，12000r/min下-10℃冷冻离心10min；沉淀用pH7.8，30mmol/L的磷酸盐缓冲液溶解，溶解后在4℃下透析30小时；而后经聚乙二醇浓缩，浓缩液以12000r/min下-10℃冷冻离心10min收集上清液；
3)SephadexG-100柱层析：将上述上清液上SephadexG-100层析柱(柱体为1.6×60cm)，用pH7.8，2.5mmol/L磷酸盐缓冲液洗脱，流速为0.3mL/min，每管收集3mL；将各洗脱液经紫外检测收集230nm的活性峰同时检测其酶活性，合并230nm的活性峰，而后经聚乙二醇浓缩，浓缩液以12000r/min下-10℃冷冻离心10min，收集上清液待用；
4)金属螯合亲和层析：将得到的SOD浓缩液上Metals ChelatingAffinityChromatogram(金属螯合亲和层析柱，柱体为1.0cm×40cm)，用0.1mol/LCuSO4作为离子载体，同时采用pH5.0，0.1mol/L柠檬酸缓冲液洗脱，流速为0.3mL/min，每管收集3mL；将各洗脱液经紫外检测收集230nm的活性峰同时检测其酶活性，合并230nm的活性峰，经透析除去无机盐，即得超氧化物歧化酶。而后将其浓缩、冷冻、干燥后得到18.45mg超氧化物歧化酶成品，其酶活性达到3246U/mg。

Claims (3)

1.一种利用树莓提取SOD酶和树莓苷的制备方法，具体步骤包括如下：
(1)将树莓果实匀浆，分别加入果胶酶和纤维素复合酶至终浓度都在10U/mL以上，酶解一定时间，过滤得滤液Ⅰ和滤渣；
(2)滤渣再加入水，搅拌提取15～30min，过滤得滤液Ⅱ，合并得提取液，其中山莓果实重量kg与水的体积L比为1:2～4。
(3)提取液经超滤浓缩至原有体积的1/5～1/10，得浓缩液Ⅰ和滤过液，浓缩液Ⅰ加入两倍至四倍体积的预冷丙酮，-2℃～3℃下静置15～30min，5000rpm～8000rpm离心10～20min，得沉淀和上清液；
(4)沉淀加入水溶解后，5000rpm～8000rpm再次离心10～20min，得清液上金属螯合亲和层析柱，用三倍至六倍柱体积的pH5.0柠檬酸缓冲液洗脱，收集洗脱液，经超滤除去无机盐，即得超氧化物歧化酶，其中沉淀的重量g与水的体积mL比为1:10～25。
(5)将滤过液和上清液合并，在45～55℃减压进行浓缩至原有体积的1/10～1/25，得到浓缩液Ⅱ，上S-9大孔树脂吸附，用三倍柱体积的水进行冲洗，并用两倍至四倍柱体积的20～35％乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液Ⅰ；
(6)再用三倍至五倍柱体积的60～85％乙醇溶液对S-9大孔树脂进行洗脱，得到洗脱液Ⅱ，并将洗脱液Ⅱ进行45～55℃减压浓缩至原来体积的1/8～1/15，得浓缩液Ⅱ；
(7)将洗脱液Ⅰ进行45～55℃减压浓缩至干得干燥物即为花色苷；
(8)将浓缩液Ⅱ放置在4～8℃静置过夜结晶，过滤得结晶物，即为树莓苷粗品，再在4～8℃重结晶得树莓苷纯品。
2.根据权利要求1的方法，其中步骤(1)中所述酶解时间为30～120min。
3.根据权利要求1的方法，其中步骤(1)、(2)和(8)中所述过滤，是指采用0.2μm孔径大小的陶瓷膜过滤一次。
CN201710582886.9A 2017-07-17 2017-07-17 利用树莓提取sod酶和树莓苷的制备方法 Pending CN107475208A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710582886.9A CN107475208A (zh) 2017-07-17 2017-07-17 利用树莓提取sod酶和树莓苷的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710582886.9A CN107475208A (zh) 2017-07-17 2017-07-17 利用树莓提取sod酶和树莓苷的制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107475208A true CN107475208A (zh) 2017-12-15

Family

ID=60595016

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710582886.9A Pending CN107475208A (zh) 2017-07-17 2017-07-17 利用树莓提取sod酶和树莓苷的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107475208A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110643582A (zh) * 2019-09-29 2020-01-03 浙江工业大学 一种从沙棘鲜果中提取sod的方法
CN112500442A (zh) * 2020-12-15 2021-03-16 南京亘闪生物科技有限公司 一种利用功能性高分子树脂提取树莓苷的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101253987A (zh) * 2008-04-03 2008-09-03 辛秀兰 一种树莓天然红色素的制备方法
CN101633918A (zh) * 2008-07-23 2010-01-27 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种从红树莓果实中提取超氧化物歧化酶的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101253987A (zh) * 2008-04-03 2008-09-03 辛秀兰 一种树莓天然红色素的制备方法
CN101633918A (zh) * 2008-07-23 2010-01-27 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种从红树莓果实中提取超氧化物歧化酶的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANNI PABST 等: "Phenylbutan-2-one β-D-Glucosides from Raspberry fruit", 《PHYTOCHEMISTRY》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110643582A (zh) * 2019-09-29 2020-01-03 浙江工业大学 一种从沙棘鲜果中提取sod的方法
CN110643582B (zh) * 2019-09-29 2021-07-27 浙江工业大学 一种从沙棘鲜果中提取sod的方法
CN112500442A (zh) * 2020-12-15 2021-03-16 南京亘闪生物科技有限公司 一种利用功能性高分子树脂提取树莓苷的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105566402B (zh) 一种综合提取茶香精、茶多糖和茶多酚的方法
CN105030878A (zh) 一种提取蓝莓果实多种活性成分的方法
CN107898868A (zh) 从枸杞中同步分离制备枸杞红素、枸杞多糖和枸杞黄酮的方法
CN102718817A (zh) 一种从黑豆皮中制备花色苷提取物的方法
CN102718879B (zh) 海参粘多糖提取工艺及其功能性保健饮料
CN107475208A (zh) 利用树莓提取sod酶和树莓苷的制备方法
KR20150037109A (ko) 산양삼 및 생약재 추출액을 함유하는 건강식품 조성물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 산양삼 및 생약재 추출액을 함유하는 건강식품 조성물
CN104663956A (zh) 红花沙棘冻干速溶茶粉
CN107213185A (zh) 一种具有抗氧化活性的蓝莓叶多酚制备方法
CN104817633B (zh) 一种红菇凝集素的制备方法及应用
CN107417696A (zh) 一种从树莓中提取树莓苷和鞣花酸的方法
CN107568548A (zh) 槐米固体饮料及制备方法
CN103478896A (zh) 茶树花低聚糖或多糖、其制备方法及其在卷烟中的应用
CN107353273B (zh) 从山莓中提取木犀草素和山莓素的方法
KR101929664B1 (ko) 진세노사이드 Rd, Rg3 및 Rg5 함량이 강화된 효소처리 백삼 추출물 및 이의 제조방법
CN109880864A (zh) 一种龙眼果皮中功能多糖和原花青素的酶法集成提取方法
CN102477105A (zh) 以南瓜藤蔓为原料联合制取多糖和黄酮的方法
CN102690359B (zh) 一种从罗汉果块根中提取淀粉和葫芦素的方法
CN107903328A (zh) 一种皱皮木瓜籽多糖及其制备方法
KR102602832B1 (ko) 새싹땅콩 추출물의 소야사포닌을 이용한 계면활성제 제조 방법
CN109053849A (zh) 山茱萸综合利用的方法
CN106539085A (zh) 一种具有降血压、降血脂的保健食品
KR0172568B1 (ko) 프로폴리스 추출정제물의 분말 및 그 수용성액
CN108567088A (zh) 一种青钱柳降糖固体饮料及其制备方法
CN105820262A (zh) 一种苦瓜多糖的提取方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20171215

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication