CN110621163A - 包含高含量低聚半乳糖(gos)的乳产品及其生产 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含高含量的原位产生的低聚半乳糖(GOS)的乳产品及其生产方法。用具有转半乳糖基活性的酶处理乳糖含量为至少20wt％乳糖的乳底物。可以通过以下方式提高所述酶的转半乳糖基活性：通过在升高的温度下将所述酶与高浓度的葡萄糖一起孵育来糖化赖氨酸和/或精氨酸残基。

Description

包含高含量低聚半乳糖(GOS)的乳产品及其生产
序列表
本发明包含序列表，将其通过引用并入本文。
发明领域
本发明涉及包含高含量的原位产生的低聚半乳糖(GOS)的乳产品及其生产方法。
发明背景
低聚半乳糖(GOS)可以通过β-半乳糖苷酶的酶促转半乳糖基反应由乳糖产生。已经显示GOS可以促进人的大肠中双歧杆菌、健康微生物的生长。因此，产生包含高含量GOS的乳产品是有益和期望的。
据报道，来自乳糖的GOS产量随乳糖浓度增加而增加。
GOS可以从乳糖溶液异位产生，并作为成分添加至乳制品中。这将增加乳制品中的卡路里，并且另外最终产品上应标明GOS的添加。这违背了普遍的“清洁标记”趋势，即许多消费者偏爱仅包含被认为是天然的成分而无添加剂或添加剂很少的“天然”产品。
因此，优选原位产生GOS，即乳产品中的GOS由已经存在于乳中的乳糖来制备。但是，很难原位产生高水平的GOS。
在EP 0458358 A1中，将脱脂乳浓缩至总固体含量为按重量计20％-50％。通过将浓缩乳与β-半乳糖苷酶在20℃-50℃的温度下孵育，然后进行喷雾干燥，推测可以获得含有按重量计总量为约5％-15％的GOS(推测为DP2+)的脱脂乳粉。假设浓缩脱脂乳中游离碳水化合物(乳糖和衍生物)的总含量为干物质的约50％，这相当于总游离碳水化合物的10％-30％DP2+GOS w/w的相对量。举例说明了包含总量为10.5％DP2+GOS w/w的脱脂乳粉的产生。
Chen等人(2002),“Optimization of the enzymic process for manufacturinglow-lactose milk containing oligosaccharides”[用于制造含有寡糖的低乳糖乳的酶法的优化],Process Biochemistry[过程生物化学]38,801-808已经比较了直接使用β-半乳糖苷酶将乳中的乳糖转化成GOS与应用超滤技术分离乳糖和乳蛋白然后将渗透物中的乳糖转化成GOS。当使用含有16.7％乳糖的浓缩乳时，可以通过在47℃下孵育1.4h来获得乳产品，其中22.8％w/w的乳糖被转化为DP3+GOS。而通过超滤去除乳蛋白从而通过蒸发将渗透物中的乳糖浓度提高至25.3％，可以通过在50℃下孵育3.5h来获得渗透物，其中多达31.1％w/w的乳糖被转化为DP3+GOS。
WO 2015/086746披露了通过用由887个氨基酸组成的来自两歧双歧杆菌的截短的β-半乳糖苷酶处理包含例如脱脂乳、乳脂和乳糖的乳基介质，将低浓度乳糖(至多15％w/v)高效地转化为GOS。还披露了乳基底物，其在酶处理后包含总量为0.1％至10％(w/v)的GOS。这些实例显示了GOS从已添加乳糖的乳基介质产生。在45℃或更低的温度下孵育，并且产生了总量高达3.7％(w/v)的DP3+GOS。
本发明的目的是由乳中已经存在的乳糖在乳产品中原位产生高水平的GOS，并提供具有高浓度原位产生的GOS的乳产品。
发明内容
本发明提供了乳产品，其包含总量为至少11wt％的原位产生的DP3+低聚半乳糖(GOS)，并且其中该原位产生的DP3+GOS构成总游离碳水化合物的至少35wt％。
本发明还提供了用于产生乳产品的方法，其包括：
(a)提供包含至少20wt％乳糖的乳底物，
(b)使该乳底物与具有转半乳糖基活性的酶接触至少45分钟，
(c)使该酶完全或部分失活，和
(d)由此获得乳产品，其中总游离碳水化合物的至少35wt％是原位产生的DP3+低聚半乳糖(GOS)。
在优选的实施例中，总游离碳水化合物的至少50wt％是原位产生的DP2+GOS。
具体实施方式
乳产品
非常需要包含低聚半乳糖(GOS)的乳产品。GOS可以是二糖(DP2)(除了根据定义不是GOS的乳糖以外)、三糖(DP3)、四糖(DP4)、五糖(DP5)或更长的寡糖。DP是聚合度的缩写。
在本发明的上下文中，术语“DPx+GOS”意指具有DPx或更高DP的GOS分子的总称。例如，术语“DP3+”意指具有DP3、DP4、DP5、DP6等的GOS分子的总称。
因此，DP3+GOS是聚合度为至少3的GOS。即，DP3+GOS是三糖、四糖、五糖和更长的寡糖。DP3+GOS是根据纤维定义，并且可以这样声明。乳业有兴趣声明其乳制品中GOS的含量以及纤维的含量。
高含量的原位产生的GOS或原位产生的纤维(DP3+GOS)特别令人感兴趣。
本发明提供了乳产品，其包含总量为至少11wt％的原位产生的DP3+低聚半乳糖(GOS)，并且其中该原位产生的DP3+GOS构成总游离碳水化合物的至少35wt％。
游离碳水化合物是未与蛋白质共价结合的碳水化合物。
在其中碳水化合物尚未例如通过酶处理操作的乳产品中，绝大多数的游离碳水化合物是乳糖。
在本发明的乳产品中原位产生的GOS已经在乳底物中由此处存在的乳糖产生。如果通过添加预产生的GOS来丰富乳产品，则此类GOS不是原位产生的。
优选地，乳产品获得自除了调节脂肪含量和/或水以外没有通过添加和/或去除乳成分在很大程度上改变组成的乳。显然，在本上下文中，为了将乳产品中的乳糖转化为GOS而添加的具有转半乳糖基活性的酶并不被认为是乳成分。
在一个实施例中，从这样的乳获得乳产品，该乳仅通过调节脂肪含量和/或水并通过添加转半乳糖基酶而改变组成。
脂肪含量和/或水的调节可能已经通过本领域已知的任何方法例如通过离心、蒸发、冷凝、超滤、纳米过滤、冷冻干燥、喷雾干燥、通过添加水进行重构等进行。
在一些实施例中，例如蛋白质含量或乳糖含量也可能已经通过例如乳制品公司略微调节，例如以获得具有明确定义的“标准”组成的乳产品。
优选地，乳产品是由乳产生的，而不改变乳清蛋白与酪蛋白的比率。优选地，乳清蛋白与酪蛋白的比率与乳中的相同。
在优选的实施例中，乳产品不包含添加的乳糖。在另一个优选的实施例中，例如通过添加/去除最初存在的乳糖的至多20％、优选至多10％，仅略微调节了在从中产生乳产品的乳底物中的乳糖含量。
在优选的实施例中，乳产品中没有添加或去除乳蛋白。在另一个优选的实施例中，例如通过添加/去除最初存在的乳蛋白的至多20％、优选至多10％，仅略微调节了乳产品中的乳蛋白含量。这意味着，除了因去除或添加脂肪或水而引起的相对变化外，总体乳蛋白含量与生乳中的总体乳蛋白含量在很大程度上相同。
在优选的实施例中，与最初存在的乳蛋白相比，乳产品中已经添加或去除至多20％、优选至多10％的乳蛋白。
在另一个优选的实施例中，乳产品包含总量为至少10wt％的乳蛋白，如至少15wt％或至少20wt％的乳蛋白。
作为实例，脱脂乳粉通常是由生乳产生的，而对乳糖和乳蛋白含量没有任何调节或仅有略微调节。通常，脱脂乳粉包含约50wt％乳糖和约35wt％乳蛋白。因此，60％脱脂乳溶液通常包含约30wt％乳糖和约21wt％乳蛋白。如果GOS是在脱脂乳粉的这种溶液中由此处存在的乳糖产生的，则此类GOS是在本发明的上下文中的原位产生的GOS。如果将包含原位产生的GOS的脱脂乳粉的溶液喷雾干燥，则获得的乳粉将是包含根据本发明的原位产生的GOS的乳产品。
而如果GOS是预产生的并且作为成分添加至脱脂乳粉或脱脂乳粉的溶液中，则此类GOS在本发明的上下文中不是原位产生的。
根据本发明的乳产品还可以是例如包含原位产生的GOS的浓缩乳，如炼乳。或者包含原位产生的GOS的经喷雾干燥的浓缩乳。
可以将根据本发明的乳产品稀释(如果乳产品是液体产品，如重构乳粉或浓缩乳)或溶解(如果乳产品是乳粉)以产生具有高相对水平的原位产生的GOS的乳饮品。或者根据本发明的乳产品可以用作例如具有高相对水平的原位产生的GOS的蛋白棒、婴儿配方食品或酸奶的生产中的成分。
在优选的实施例中，乳产品是重构乳粉如重构脱脂乳粉，浓缩乳如炼乳，或乳粉如脱脂乳粉。在更优选的实施例中，乳产品是脱脂乳粉或重构脱脂乳粉。
在优选的实施例中，乳产品包含至少40wt％，优选至少45wt％、至少50wt％、至少55wt％、至少57wt％或至少60wt％的干物质。在另一个优选的实施例中，乳产品是包含至少40wt％、优选至少45wt％、至少50wt％、至少55wt％、至少57wt％或至少60wt％干物质的重构乳粉(如重构脱脂乳粉)或浓缩乳(如炼乳)。在另一个优选的实施例中，乳产品是包含至少40wt％、优选至少45wt％、至少50wt％、至少55wt％、至少57wt％或至少60wt％干物质的重构脱脂乳粉。
在另一个优选的实施例中，乳产品是乳粉，优选脱脂乳粉。
在优选的实施例中，乳产品包含40wt％-100wt％，优选45wt％-100wt％、50wt％-100wt％、55wt％-100wt％、57wt％-100wt％或60wt％-100wt％的干物质。在另一个优选的实施例中，乳产品包含50wt％-70wt％的干物质，优选55wt％-65wt％的干物质，如约60wt％的干物质。
在本发明的乳产品中，原位产生的DP3+GOS构成总游离碳水化合物的至少35wt％。在优选的实施例中，总游离碳水化合物的至少40wt％是原位产生的DP3+GOS。
在另一个优选的实施例中，总游离碳水化合物的35wt％-70wt％，优选40wt％-70wt％、更优选40wt％-60wt％或40wt％-50wt％是原位产生的DP3+GOS。
总游离碳水化合物中DP3+GOS的wt％可以通过本申请的实例的方法确定。
在优选的实施例中，总游离碳水化合物的至少50wt％，优选至少55wt％或至少60wt％是原位产生的DP2+GOS。
在另一个优选的实施例中，总游离碳水化合物的50wt％-80wt％，优选55wt％-80wt％或60wt％-80wt％、更优选50wt％-70wt％或60wt％-70wt％是原位产生的DP2+GOS。
总游离碳水化合物中DP2+GOS的wt％可以通过本申请的实例的方法确定。
本发明的乳产品包含总量为至少11wt％的原位产生的DP3+GOS。在优选的实施例中，乳产品包含总量为至少12wt％，优选至少13wt％的原位产生的DP3+GOS。
在另一个优选的实施例中，乳产品包含11wt％-25wt％，优选12wt％-25wt％或13wt％-25wt％的原位产生的DP3+GOS。在另一个优选的实施例中，乳产品包含11wt％-15wt％、12wt％-15wt％或13wt％-15wt％的原位产生的DP3+GOS。
在优选的实施例中，乳产品包含总量为至少12wt％、优选至少15wt％或至少18wt％的原位产生的DP2+GOS。
在另一个优选的实施例中，乳产品包含12wt％-35wt％，优选15wt％-35wt％或18wt％-35wt％的原位产生的DP2+GOS。在另一个优选的实施例中，乳产品包含12wt％-20wt％、15wt％-20wt％或18wt％-20wt％的原位产生的DP2+GOS。
在优选的实施例中，乳产品中总游离碳水化合物的至多30wt％，优选至多20wt％是乳糖。在另一个优选的实施例中，乳产品中总游离碳水化合物的0-30wt％，优选0-20wt％是乳糖。
在另一个实施例中，乳产品中总游离碳水化合物的至多15wt％或至多12wt％是乳糖。在另一个实施例中，乳产品中总游离碳水化合物的0-15wt％或0-12wt％是乳糖。
在优选的实施例中，乳产品是包含总量为至少11wt％、优选至少12wt％或至少13wt％的原位产生的DP3+GOS的重构乳粉(如重构脱脂乳粉)或浓缩乳(如炼乳)。在另一个优选的实施例中，乳产品是包含总量为11wt％-20wt％、优选12wt％-20wt％或13wt％-20wt％、更优选11wt％-15wt％、12wt％-15wt％或13wt％-15wt％的原位产生的DP3+GOS的重构乳粉(如重构脱脂乳粉)或浓缩乳(如炼乳)。这种乳产品优选包含总量为至多10wt％，优选至多5wt％的乳糖。
在优选的实施例中，乳产品是包含总量为至少11wt％、优选至少12wt％或至少13wt％的原位产生的DP3+GOS的乳粉，如脱脂乳粉。在另一个优选的实施例中，乳产品是包含总量为11wt％-40wt％、优选12wt％-40wt％或13wt％-40wt％、更优选11wt％-30wt％、12wt％-30wt％或13wt％-30wt％的原位产生的DP3+GOS的乳粉，如脱脂乳粉。在另一个优选的实施例中，乳产品是包含总量为至少15wt％、优选至少18wt％或至少20wt％的原位产生的DP3+GOS的乳粉，如脱脂乳粉。在另一个优选的实施例中，乳产品是包含总量为15wt％-40wt％、优选18wt％-40wt％或20wt％-40wt％、更优选15wt％-30wt％、18wt％-30wt％或20wt％-30wt％的原位产生的DP3+GOS的乳粉，如脱脂乳粉。这种乳产品优先包含总量为至多15wt％，优选至多10wt％的乳糖。
乳产品可能已经进行了本领域已知的处理，例如巴氏灭菌、ESL处理或UHT处理。
用于产生乳产品的方法
本发明还提供了用于产生乳产品的方法，其包括：
(a)提供包含至少20wt％乳糖的乳底物，
(b)使该乳底物与具有转半乳糖基活性的酶接触至少45分钟，
(c)使该酶完全或部分失活，和
(d)由此获得乳产品，其中总游离碳水化合物的至少35wt％是原位产生的DP3+低聚半乳糖(GOS)。
在本发明的方法中，通过使包含乳糖的乳底物与将乳底物中的乳糖转化为GOS的转半乳糖基酶接触，由乳底物产生乳产品。
该方法中使用的乳底物是基于乳的。术语“乳”，在本发明的背景中，应理解为对任何哺乳动物如牛、绵羊、山羊、水牛或骆驼挤奶而获得的乳状分泌物。
优选地，乳底物获得自除了调节脂肪含量和/或水以外没有通过添加和/或去除乳成分在很大程度上改变组成的乳。
在一个实施例中，从这样的乳获得乳底物，该乳仅通过调节脂肪含量和/或水而改变组成。
脂肪含量和/或水的调节可能已经通过本领域已知的任何方法例如通过离心、蒸发、冷凝、超滤、纳米过滤、冷冻干燥、喷雾干燥、通过添加水进行重构等进行。
在一些实施例中，例如蛋白质含量或乳糖含量也可能已经通过例如乳制品公司略微调节，例如以获得具有明确定义的“标准”组成的乳底物。
乳底物可能已经进行了本领域已知的处理，例如巴氏灭菌、ESL处理或UHT处理。
优选地，乳底物是由乳产生的，而不改变乳清蛋白与酪蛋白的比率。优选地，乳清蛋白与酪蛋白的比率与乳中的相同。
在优选的实施例中，乳底物不包含添加的乳糖。在另一个优选的实施例中，例如通过添加/去除最初存在的乳糖的至多20％，优选至多10％，仅略微调节了乳糖含量。
在优选的实施例中，与最初存在的乳糖相比，乳底物中已经添加或去除至多20％，优选至多10％的乳糖。
在优选的实施例中，乳底物中没有添加或去除乳蛋白。在另一个优选的实施例中，例如通过添加/去除最初存在的乳蛋白的至多20％、优选至多10％，仅略微调节了乳底物中的乳蛋白含量。这意味着，除了因去除或添加脂肪或水而引起的相对变化外，总体乳蛋白含量与生乳中的总体乳蛋白含量在很大程度上相同。
在优选的实施例中，与最初存在的乳蛋白相比，乳底物中已经添加或去除至多20％、优选至多10％的乳蛋白。
优选地，乳底物比乳更浓。
在优选的实施例中，乳底物包含总量为至少10wt％的乳蛋白，如至少15wt％或至少20wt％的乳蛋白。
在优选的实施例中，乳底物是重构乳粉(如重构脱脂乳粉)或浓缩乳(如炼乳)。在更优选的实施例中，乳底物是重构乳粉，如重构脱脂乳粉。
在优选的实施例中，乳底物包含至少40wt％，优选至少45wt％、至少50wt％、至少55wt％、至少57wt％或至少60wt％的干物质。在另一个优选的实施例中，乳底物是包含至少40wt％、优选至少45wt％、至少50wt％、至少55wt％、至少57wt％或至少60wt％干物质的重构乳粉(如重构脱脂乳粉)或浓缩乳(如炼乳)。在另一个优选的实施例中，乳底物是包含至少40wt％、优选至少45wt％、至少50wt％、至少55wt％、至少57wt％或至少60wt％干物质的重构脱脂乳粉。
乳底物包含至少20wt％的乳糖。在优选的实施例中，乳底物包含至少25wt％，优选至少27wt％或至少30wt％的乳糖。
使乳底物与具有转半乳糖基活性的酶接触至少45分钟。在优选的实施例中，使乳底物与具有转半乳糖基活性的酶接触至少1小时，优选至少1.5小时、至少3小时、至少6小时、至少9小时、至少12小时、至少15小时、至少20小时或至少24小时。
在实施例中，使乳底物与具有转半乳糖基活性的酶在2℃-8℃、优选3℃-7℃的温度下接触12小时至5天，优选24小时至3天。
在另一个实施例中，使乳底物与具有转半乳糖基活性的酶在至少40℃、优选至少50℃、至少55℃或至少60℃的温度下，例如在40℃-65℃、50℃-65℃、55℃-65℃或60℃-65℃的温度下接触45分钟至48小时，优选2至36小时、更优选20至30小时。
在又另一个实施例中，使乳底物与具有转半乳糖基活性的酶在60℃-67℃的温度下接触45分钟至10小时，优选2小时-5小时。
优选地，以1-1,000LAU(C)/g乳糖，优选5-500LAU(C)/g乳糖、更优选8-150LAU(C)/g乳糖的浓度添加具有转半乳糖基活性的酶。
可以通过直接测量从乳糖释放的葡萄糖来测定特定β-半乳糖苷酶的以LAU(C)为单位的活性。技术人员了解如何确定这种活性。可替代地，可以通过使用在本申请的方法和实例中描述的活性测定来测定活性。在此，该活性可以通过将用已知活性的β-半乳糖苷酶运行的标准曲线与由此计算的未知样品的活性进行比较来获得。
当乳底物与转半乳糖基酶接触足够长的时间以确保足够的GOS形成时，该酶将全部或部分失活。
可以通过将导致酶活性降低的本领域已知的任何方法(例如通过热处理、pH或蛋白酶)使酶失活。应当理解，失活可以是暂时的。失活可能由于乳产品的生产过程中的固有步骤(例如巴氏灭菌、ESL处理、UHT处理或喷雾干燥)而发生。
在一个优选的实施例中，通过热处理使酶完全或部分失活。
在乳底物与转半乳糖基酶接触后，可以通过本领域已知的方法(例如离心、均质化、巴氏灭菌、ESL处理、UHT处理或干燥(如喷雾干燥或冷冻干燥))进一步处理获得的乳产品。
在通过本发明的方法获得的乳产品中，总游离碳水化合物的至少35wt％必须是由于使乳底物与转半乳糖基酶接触而获得的原位产生的DP3+GOS。
在优选的实施例中，总游离碳水化合物的至少40wt％是原位产生的DP3+GOS。
在另一个优选的实施例中，总游离碳水化合物的35wt％-70wt％，优选40wt％-70wt％、更优选40wt％-60wt％或40wt％-50wt％是原位产生的DP3+GOS。
在优选的实施例中，总游离碳水化合物的至少50wt％，优选至少55wt％或至少60wt％是原位产生的DP2+GOS。
在另一个优选的实施例中，总游离碳水化合物的50wt％-80wt％，优选55wt％-80wt％或60wt％-80wt％、更优选50wt％-70wt％或60wt％-70wt％是原位产生的DP2+GOS。
在优选的实施例中，通过本发明的方法产生的乳产品包含总量为至少11wt％、优选至少12wt％或至少13wt％的原位产生的DP3+GOS。
在另一个优选的实施例中，通过本发明的方法获得的乳产品包含11wt％-20wt％、优选12wt％-20wt％或13wt％-20wt％、更优选11wt％-15wt％、12wt％-15wt％或13wt％-15wt％的原位产生的DP3+GOS。
在优选的实施例中，通过本发明的方法获得的乳产品包含总量为至少12wt％、优选至少15wt％或至少18wt％的原位产生的DP2+GOS。
在另一个优选的实施例中，通过本发明的方法获得的乳产品包含12wt％-25wt％、优选15wt％-25wt％或18wt％-25wt％、更优选12wt％-20wt％、15wt％-20wt％或18wt％-20wt％的原位产生的DP2+GOS。
在优选的实施例中，通过本发明的方法获得的乳产品中的总游离碳水化合物的至多30wt％，优选至多20wt％，如至多15wt％或至多12wt％是乳糖。在另一个优选的实施例中，乳产品中总游离碳水化合物的0wt％-30wt％，优选0-20wt％，如0-15wt％或0-12wt％是乳糖。
在优选的实施例中，通过本发明的方法获得的乳产品是包含总量为至少11wt％、优选至少12wt％或至少13wt％的原位产生的DP3+GOS的重构乳粉(如重构脱脂乳粉)或浓缩乳(如炼乳)。在另一个优选的实施例中，通过本发明的方法获得的乳产品是包含总量为11wt％-20wt％、优选12wt％-20wt％或13wt％-20wt％、更优选11wt％-15wt％、12wt％-15wt％或13wt％-15wt％的原位产生的DP3+GOS的重构乳粉(如重构脱脂乳粉)或浓缩乳(如炼乳)。这种乳产品优选包含总量为至多10wt％，优选至多5wt％的乳糖。
在一个实施例中，本发明的方法还包括步骤(e)：
(e)干燥，优选喷雾干燥步骤(d)的乳产品以获得乳粉，如脱脂乳粉。
步骤(d)的乳产品或步骤(e)的乳粉可以用于产生例如蛋白质棒、乳饮品、婴儿配方食品或酸奶。
在一个实施例中，本发明的方法是用于产生发酵乳产品的方法，其包括：
(a)提供包含至少20％(w/v)乳糖的乳底物，
(b)使该乳底物与具有转半乳糖基活性的酶接触至少45分钟，
(c)在步骤(b)之前、期间和/或之后，优选通过与细菌培养物孵育来发酵乳底物，
(d)在步骤(c)之前或之后使酶失活，和
(e)由此获得发酵乳产品，其中总游离碳水化合物的至少35wt％是原位产生的DP3+低聚半乳糖(GOS)。
在一个优选的实施例中，发酵的乳产品是酸奶。在另一个优选的实施例中，步骤(b)和步骤(c)是在37℃-45℃，优选约40℃-45℃、更优选约42℃-43℃的温度下进行。
具有转半乳糖基活性的酶
在本发明方法的方法中，使乳底物与具有转半乳糖基活性的酶接触。
来自糖苷水解酶家族2(GH2)的β-半乳糖苷酶是具有外切作用的酶，其水解β-D-半乳糖苷中的末端非还原性β-D-半乳糖残基，例如将乳糖水解为半乳糖和葡萄糖。它们属于酶类别EC 3.2.1.23，官方名称为β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶。此酶的常用名称是乳糖酶，因为乳糖是常见的工业底物。除水解外，此酶类别还能够将半乳糖转移至其他糖类，从而制备低聚半乳糖(GOS)。不同的GH2酶对水解或β-半乳糖苷酶活性和转半乳糖基酶活性具有不同的偏好，并且该偏好可以由其GOS产生能力来表示，例如由转半乳糖基活性与水解活性的比率来表示。
在本上下文中，术语“β-半乳糖苷酶”意指具有将二糖乳糖水解成其成分半乳糖和葡萄糖单体的能力的任何糖苷水解酶。指定为亚类EC 3.2.1.108的酶也称为乳糖酶，其在本发明的上下文中也被认为是β-半乳糖苷酶。在本发明的上下文中，该β-半乳糖苷酶的乳糖水解活性可以被称为其乳糖酶活性或其β-半乳糖苷酶活性。
在本发明的上下文中，具有转半乳糖基活性的酶优选属于酶类别3.2.1.23或EC3.2.1.108，优选3.2.1.23。具有转半乳糖基活性的酶优选属于糖苷水解酶家族2(GH2)，更优选属于糖苷水解酶家族GH2_5。
在某些应用中，可以考虑主要具有转半乳糖基活性和主要具有水解活性的多肽的组合。当需要在用具有β-半乳糖苷酶活性的多肽处理(例如在低乳糖水平下)后减少残留的乳糖时，这可能尤其有用。
当考虑在例如乳中的酶的反应时，碳水化合物最初以乳糖的形式存在，该乳糖是在乳中发现的由半乳糖和葡萄糖构成的二糖。在GOS的形成中，连续的半乳糖分子被添加至乳糖中，然后在延长的孵育后，存在各种碳水化合物(葡萄糖、半乳糖和约30种不同的二糖和多糖)的混合物。
如本文所用的术语“二糖”意指通过称为糖苷键的共价键结合在一起的两个单糖单元，该糖苷键经由脱水反应形成，从而导致一个单糖失去氢原子而另一个单糖失去羟基基团。
如本文所用，术语“具有转半乳糖基活性的酶”、“转半乳糖基酶”和“转半乳糖基酶”可互换使用以意指能够将半乳糖转移至D-半乳糖(Gal)或D-葡萄糖(Glc)的羟基基团从而产生低聚半乳糖的酶。在一个实施例中，通过该酶对乳糖的反应来鉴定转半乳糖基酶活性，其中在给定时间产生的半乳糖的量少于产生的葡萄糖的量。
更特别地，可以将转半乳糖基酶活性(或对于用以水解乳糖或产生GOS的酶的偏好)评价为在反应期间的任何给定时间产生的葡萄糖减去半乳糖的量，或者通过直接定量反应期间产生的GOS来评价。可以通过包括本文实例中所示的方法在内的几种方式中的一种来进行此测量。
当评价酶的转半乳糖基活性与水解活性时，可以将水解活性测量为在反应期间的任何时间点产生的半乳糖浓度([Gal])。
可以将转半乳糖基活性(即将半乳糖部分转移至除了水以外的分子)测量为在任何给定时间产生的([Glc]-[Gal])。
因此，在本发明的上下文中，将转半乳糖基活性与水解活性的比率确定为([Glc]-[Gal])/[Gal]。
优选地，在本发明的方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶是β-半乳糖苷酶，该β-半乳糖苷酶当使用13LAU(C)/g乳糖的酶浓度在50℃下在60％的脱脂乳粉溶液中24小时后测量时，其转半乳糖基活性与水解活性的比率为至少1，优选至少2、至少3或至少4。
具有足够高的转半乳糖基活性的任何酶均可用于本发明的方法。酶的来源对于成功的结果并不重要。
本发明的方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶可以是动物、植物或微生物来源的。优选的酶获得自微生物来源，特别是来自丝状真菌或酵母，或来自细菌。
该酶可以例如源自以下：蘑菇属(Agaricus)的菌株，例如双孢蘑菇(A.bisporus)；Ascovaginospora；曲霉属(Aspergillus)，例如黑曲霉(A.niger)，泡盛曲霉(A.awamori)，臭曲霉(A.foetidus)，日本曲霉(A.japonicus)，米曲霉(A.oryzae)；念珠菌属(Candida)；毛壳菌属(Chaetomium)；Chaetotomastia；网柄菌属(Dictyostelium)，例如盘基网柄菌(D.discoideum)；克鲁维酵母属(Kluveromyces)，例如脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)、乳酸克鲁维酵母(K.lactis)；毛霉属(Mucor)，例如爪哇毛霉(M.javanicus)、高大毛霉(M.mucedo)、细孢毛霉(M.subtilissimus)；脉孢菌属(Neurospora)，例如粗糙脉孢菌(N.crassa)；根毛霉属(Rhizomucor)，例如微小根毛霉(R.pusillus)；根霉属(Rhizopus)，例如少根根霉(R.arrhizus)、日本根霉(R.japonicus)、匍枝根霉(R.stolonifer)；核盘霉属(Sclerotinia)，例如白腐核盘霉(S.libertiana)；圆酵母属(Torula)；球拟酵母属(Torulopsis)；毛癣菌属(Trichophyton)，例如红色毛癣菌(T.rubrum)；维氏核盘菌属(Whetzelinia)，例如W.sclerotiorum；芽孢杆菌属(Bacillus)，例如芽孢杆菌属的种凝结芽孢杆菌(B.coagulans)、环状芽孢杆菌(B.circulans)、巨大芽孢杆菌(B.megaterium)、B.novalis、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、短小芽孢杆菌(B.pumilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)；双歧杆菌，例如动物双歧杆菌(B.animalis)、两歧双歧杆菌(B.bifidum)、短双歧杆菌(B.breve)、婴儿双歧杆菌(B.infantis)、乳双歧杆菌(B.lactis)、长双歧杆菌(B.longum)；金黄杆菌属(Chryseobacterium)；柠檬酸杆菌属(Citrobacter)，例如弗氏柠檬酸杆菌(C.freundii)；梭菌属(Clostridium)，例如产气荚膜梭菌(C.perfringens)；色二孢属(Diplodia)，例如棉色二孢(D.gossypina)；肠杆菌属(Enterobacter)，例如产气肠杆菌(E.aerogenes)、阴沟肠杆菌(E.cloacae)；爱德华氏菌属(Edwardsiella)、迟钝爱德华菌(E.tarda)；欧文氏菌属(Erwinia)，例如草生欧文氏菌(E.herbicola)；埃希氏菌属(Escherichia)，例如大肠杆菌；克雷伯氏菌属(Klebsiella)，例如肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)；Miriococcum；Myrothesium；毛霉属；脉孢菌属(Neurospora)，例如粗糙脉孢菌(N.crassa)；变形菌属(Proteus)，例如普通变形菌(P.vulgaris)；普罗维登斯菌属(Providencia)，例如斯氏普罗维登斯菌(P.stuartii)；密孔菌属(Pycnoporus)，例如朱红密孔菌(Pycnoporuscinnabarinus)、血红密孔菌(Pycnoporus sanguineus)；瘤胃球菌属(Ruminococcus)，例如扭链瘤胃球菌(R.torques)；沙门氏菌属(Salmonella)，例如鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)；沙雷氏菌属(Serratia)，例如液化沙雷氏菌(S.liquefasciens)、粘质沙雷氏菌(S.Marcescens)；志贺氏杆菌属(Shigella)，例如弗氏志贺菌(S.flexneri)；链霉菌属(Streptomyces)，例如抗生链霉菌(S.antibioticus)、栗色球孢链霉菌(S.castaneoglobisporus)、紫红链霉菌(S.violeceoruber)；栓菌属(Trametes)；木霉属(Trichoderma)，例如里氏木霉(T.reesei)、维里德木霉(T.viride)；耶尔森氏菌属(Yersinia)，例如小肠结肠炎耶尔森氏菌(Y.enterocolitica)。
在优选的实施例中，该酶是来自细菌，例如来自双歧杆菌科，如来自双歧杆菌属，如来自动物双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、乳双歧杆菌或长双歧杆菌菌株的β-半乳糖苷酶。在更优选的实施例中，该酶是来自两歧双歧杆菌的β-半乳糖苷酶。
在优选的实施例中，该酶是来自细菌，例如来自芽孢杆菌科，如来自芽孢杆菌属，如来自芽孢杆菌属的种凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、B.novalis、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌；双歧杆菌，例如动物双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌菌株的β-半乳糖苷酶。在更优选的实施例中，该酶是来自环状芽孢杆菌或婴儿芽孢杆菌的β-半乳糖苷酶。
优选的酶是具有如下序列的β-半乳糖苷酶，该序列与SEQ ID NO:1的氨基酸1-1304或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同。SEQ ID NO:1的这种片段可以是SEQ ID NO:1的具有转半乳糖基活性的任何片段。
在优选的实施例中，在本发明的方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶具有如下氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸1-1304至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同并且具有900-1350个氨基酸，优选1300-1305个氨基酸、更优选1302或1304个氨基酸的长度。
在优选的实施例中，在本发明的方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶包含与SEQ ID NO:2的氨基酸28-1931或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％相同的氨基酸序列。在更优选的实施例中，该酶包含与SEQ ID NO:2的氨基酸28-1931至少60％，如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同的氨基酸序列。
在另一个实施例中，本发明的方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶具有与SEQID NO:3的氨基酸28-1331或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％相同的氨基酸序列。优选地，该多肽具有与SEQ ID NO:3的氨基酸28-1331至少60％，如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同的氨基酸序列。
在另一个实施例中，本发明方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶具有与SEQ IDNO:4或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％相同的氨基酸序列。优选地，该多肽具有与SEQ ID NO:4至少60％，如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同的氨基酸序列。
在另一个实施例中，本发明方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶具有与SEQ IDNO:5或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％相同的氨基酸序列。优选地，该多肽具有与SEQ ID NO:5至少60％，如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同的氨基酸序列。
在另一个实施例中，本发明方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶具有与SEQ IDNO:6或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％相同的氨基酸序列。优选地，该多肽具有与SEQ ID NO:6至少60％，如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同的氨基酸序列。
在另一个实施例中，本发明方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶具有与SEQ IDNO:7或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％相同的氨基酸序列。优选地，该多肽具有与SEQ ID NO:7至少60％，如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同的氨基酸序列。
在另一个实施例中，本发明方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶具有与SEQ IDNO:8或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％相同的氨基酸序列。优选地，该多肽具有与SEQ ID NO:8至少60％，如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同的氨基酸序列。
在另一个实施例中，本发明方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶具有与SEQ IDNO:9或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％相同的氨基酸序列。优选地，该多肽具有与SEQ ID NO:9至少60％，如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同的氨基酸序列。
在另一个实施例中，本发明方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶具有与SEQ IDNO:10或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％相同的氨基酸序列。优选地，该多肽具有与SEQ ID NO:10至少60％，如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同的氨基酸序列。
在另一个实施例中，本发明方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶具有与SEQ IDNO:11或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％相同的氨基酸序列。优选地，该多肽具有与SEQ ID NO:11至少60％，如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同的氨基酸序列。
在另一个实施例中，本发明方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶具有与SEQ IDNO:12或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％相同的氨基酸序列。优选地，该多肽具有与SEQ ID NO:12至少60％，如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同的氨基酸序列。
在另一个实施例中，本发明方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶具有与SEQ IDNO:13或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％相同的氨基酸序列。优选地，该多肽具有与SEQ ID NO:13至少60％，如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同的氨基酸序列。
在另一个实施例中，本发明方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶具有与SEQ IDNO:14或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％相同的氨基酸序列。优选地，该多肽具有与SEQ ID NO:14至少60％，如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同的氨基酸序列。
在另一个实施例中，本发明方法中使用的具有转半乳糖基活性的酶具有与SEQ IDNO:15或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％相同的氨基酸序列。优选地，该多肽具有与SEQ ID NO:15至少60％，如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同的氨基酸序列。
出于本发明的目的，使用尼德曼-翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm)(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性作为“最长同一性”的输出，该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件(The European Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人，2000，Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选6.6.0版本或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。为了使尼德尔程序报告最长同一性，必须在命令行中指定非简化(nobrief)选项。尼德尔标记的“最长同一性”的输出计算如下：
(相同的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
具有转半乳糖基活性的酶可以是胞外的。它可以在其N-末端具有信号序列，该信号序列在分泌过程中被切去。
具有转半乳糖基活性的酶可以源自本文提及的任何来源。术语“源自”在本发明的上下文中意指该酶可以从其天然存在的生物中分离，即该酶的氨基酸序列的身份(identity)与天然的多肽相同。术语“源自”还表示酶可以在宿主生物中重组产生，其中重组产生的酶具有与天然酶相同的身份，或具有修饰的氨基酸序列(例如具有缺失、插入和/或被取代的一个或多个氨基酸)，即重组产生的酶是天然氨基酸序列的突变体和/或片段。天然的酶的含义中包括天然的变体。此外，术语“源自”包括通过例如肽合成而合成产生的酶。术语“源自”还包括已经通过例如糖基化、磷酸化等在体内或体外修饰的酶。对于重组产生的酶，术语“源自”指酶的身份而不是重组产生酶的宿主生物的身份。
可以通过使用任何合适的技术从微生物获得具有转半乳糖基活性的酶。例如，酶制剂可通过发酵合适的微生物和之后通过本领域公知的方法从所得的发酵液或微生物分离乳糖酶制剂而获得。具有转半乳糖基活性的酶还可以通过使用重组DNA技术而获得。这种方法通常包括培养用重组DNA载体转化的宿主细胞，该载体包含编码所讨论的乳糖酶的DNA序列，并且DNA序列与合适的表达信号可操作地连接，使其能在允许酶表达的条件下在培养基中表达酶，并从培养物回收酶。还可以将DNA序列掺入宿主细胞的基因组中。DNA序列可以是基因组、cDNA或合成来源的、或它们的任何组合，并且可以按照本领域已知的方法进行分离或合成。
具有转半乳糖基活性的酶可以是经纯化的。如本文使用的术语“纯化的”包括基本上不含来自生产生物的不溶组分的β-半乳糖苷酶蛋白。术语“纯化的”还包括基本上不含来自获得酶的天然生物的不溶组分的β-半乳糖苷酶蛋白。优选地，还可以从酶的来源生物和培养基的一些可溶组分分离。更优选地，可以通过一种或多种单元操作来进行分离：过滤、沉淀或色谱。
因此，可纯化具有转半乳糖基活性的酶，即仅存在少量的其他蛋白质。表述“其他蛋白质”具体涉及其他酶。如本文使用的术语“纯化的”还指代去除其他组分，特别是存在于β-半乳糖苷酶的来源细胞中的其他蛋白质以及最特别是存在于β-半乳糖苷酶的来源细胞中的其他酶。具有转半乳糖基活性的酶可以是“基本上纯的”，即不含来自产生酶的生物(即，例如用于重组产生β-半乳糖苷酶的宿主生物)的其他成分。优选地，具有转半乳糖基活性的酶是至少40％(w/w)纯，更优选至少50％、60％、70％、80％或者甚至至少90％纯的酶蛋白制剂。
术语具有转半乳糖基活性的酶包括酶的催化活性必需的任何辅助化合物，如，例如合适的受体或辅因子，其可以或者可以不天然存在于反应系统中。
酶可以是适合于所述用途的任何形式，如，例如，为干粉或颗粒、无尘颗粒、液体、稳定化液体或受保护酶的形式。
糖化
尽管某些β-半乳糖苷酶或乳糖酶具有主要的水解特性，但是这些酶可以例如通过对酶进行预孵育而转化为具有更高的转移特性。因此，预孵育导致了更稳健的产生GOS的酶，这是由于该酶更高的转移能力(转半乳糖基化酶活性)所致。
不希望受理论的束缚，认为这些孵育条件导致β-半乳糖苷酶的糖化，这导致增加的转移特性。随着糖部分的共价附接，β-半乳糖苷酶从水解酶转化为具有转半乳糖基酶活性的转移酶。
在实施例中，具有转半乳糖基活性的酶已通过糖化而被修饰。
如本文所用的“糖化”是指碳水化合物共价附接至蛋白质。碳水化合物附接可以是经由例如该酶的精氨酸、赖氨酸或N-末端的侧链。优选地，该碳水化合物附接是经由精氨酸或赖氨酸的侧链。
糖化有时被称为(非酶促)糖基化。在本发明的上下文中，糖基化和糖化可互换使用，并且糖基化可以是非酶促的。
在实施例中，具有转半乳糖基活性的酶已通过该酶的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60个残基的糖化而被修饰。
在实施例中，具有转半乳糖基活性的酶已通过该酶的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60个赖氨酸和/或精氨酸残基的糖化而被修饰。
在实施例中，具有转半乳糖基活性的酶已通过该酶的至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％的赖氨酸和/或精氨酸残基的糖化而被修饰。在一个实施例中，具有转半乳糖基活性的酶已通过该酶的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60个赖氨酸和/或精氨酸残基的糖化而被修饰。
在实施例中，在如下文详述的合适条件下孵育导致赖氨酸和/或精氨酸的一些、基本上所有或甚至所有表面残基的糖化。同样，不希望受理论的束缚，认为一些、基本上所有或甚至所有糖化残基位于具有转半乳糖基活性的酶的C-末端。
在实施例中，具有转半乳糖基活性的酶已经与5wt％-90wt％糖的溶液在pH 5-10下，在20℃-80℃的温度下接触3-20小时的时间。优选的糖是还原糖，并且特别优选葡萄糖。
在优选的实施例中，将具有转半乳糖基活性的酶与40wt％-70wt％，优选50wt％-70wt％或55wt％-65wt％的葡萄糖在40℃-60℃、优选50℃-60℃下孵育40-100小时、优选50-90或60-80小时。
示例性的还原糖包括单糖果糖、半乳糖、葡萄糖、甘油醛、核糖、木糖。优选果糖、半乳糖和/或葡萄糖，并且最特别地是果糖和/或葡萄糖。
其他示例性还原糖包括二糖，如纤维二糖、乳糖和麦芽糖，优选乳糖和/或麦芽糖。示例还有葡萄糖聚合物例如麦芽糖糊精和糖原。
还原糖的存在可以通过许多熟知的测试，包括使用Benedict试剂和/或Tollen试剂来检测。
优选实施例
1.一种用于产生乳产品的方法，其包括：
(a)提供包含至少20wt％乳糖的乳底物，
(b)使该乳底物与具有转半乳糖基活性的酶接触至少45分钟，
(c)使该酶完全或部分失活，和
(d)由此获得乳产品，其中总游离碳水化合物的至少35wt％是原位产生的DP3+低聚半乳糖(GOS)。
2.如实施例1所述的方法，其中该游离碳水化合物是未与蛋白质共价结合的碳水化合物。
3.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该DP3+GOS是聚合度为至少3的GOS。
4.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该乳底物是重构乳粉如重构脱脂乳粉，或浓缩乳如炼乳。
5.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该乳底物是重构乳粉，如重构脱脂乳粉。
6.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该乳底物获得自除了调节脂肪含量和/或水以外没有通过添加和/或去除乳成分在很大程度上改变组成的乳。
7.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该乳底物中乳清蛋白与酪蛋白的比率与乳中的相同。
8.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该乳底物是由乳产生的，而不改变乳清蛋白与酪蛋白的比率。
9.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该乳底物不包含添加的乳糖。
10.如前述实施例中任一项所述的方法，其中与最初存在的乳蛋白相比，该乳底物中已经添加或去除至多20％、优选至多10％的乳蛋白。
11.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该乳底物包含至少40wt％，优选至少45wt％、至少50wt％或至少55wt％，更优选至少57wt％或至少60wt％的干物质。
12.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该乳底物包含至少25wt％，优选至少27wt％或至少30wt％的乳糖。
13.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该乳产品中总游离碳水化合物的至少40wt％是原位产生的DP3+GOS。
14.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该乳产品中总游离碳水化合物的至少50wt％，优选至少55wt％、至少57wt％或至少60wt％是原位产生的DP2+GOS。
15.如前述实施例中任一项所述的方法，其中在步骤(b)中至少35wt％，优选至少40wt％的乳糖转化为DP3+GOS。
16.如前述实施例中任一项所述的方法，其中在步骤(b)中至少50wt％，优选至少55wt％、至少57wt％或至少60wt％的乳糖转化为DP2+GOS。
17.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该乳产品中总游离碳水化合物的至多30wt％，优选至多20wt％，如至多15wt％或至多12wt％是乳糖。
18.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该乳产品是包含总量为至多10wt％、优选至多5wt％的乳糖的重构乳粉如重构脱脂乳粉，或浓缩乳如炼乳。
19.如前述实施例中任一项所述的方法，其中使该乳底物与具有转半乳糖基活性的酶接触至少1小时，优选至少1.5小时、至少3小时、至少6小时、至少9小时、至少12小时、至少15小时、至少20小时或至少24小时。
20.如前述实施例中任一项所述的方法，其中使该乳底物与具有转半乳糖基活性的酶在2℃-8℃、优选3℃-7℃的温度下接触12小时至5天，优选24小时至3天。
21.如实施例1-18中任一项所述的方法，其中使该乳底物与具有转半乳糖基活性的酶在至少40℃、优选至少50℃、至少55℃或至少60℃的温度下接触45分钟至48小时，优选2-36小时、更优选20-30小时。
22.如实施例1-18中任一项所述的方法，其中使该乳底物与具有转半乳糖基活性的酶在60℃-67℃的温度下接触45分钟至10小时，优选2小时-5小时。
23.如前述实施例中任一项所述的方法，其中以1-1,000LAU(C)/g乳糖，优选5-500LAU(C)/g乳糖的浓度添加该具有转半乳糖基活性的酶。
24.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该具有转半乳糖基活性的酶具有如下氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸1-1304或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同；与SEQ ID NO:2的氨基酸28-1931或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同；与SEQ ID NO:3的氨基酸28-1331或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同；与SEQ ID NO:4或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同；与SEQ ID NO:5或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同；与SEQ ID NO:6或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同；与SEQ ID NO:7或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同；与SEQ ID NO:8或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同；与SEQ ID NO:9或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同；与SEQ ID NO:10或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同；与SEQ ID NO:11或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同；与SEQID NO:12或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同；与SEQ ID NO:13或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同；与SEQ IDNO:14或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同；或与SEQ ID NO:15或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％相同。
25.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该具有转半乳糖基活性的酶具有如下氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸1-1304或其具有转半乳糖基活性的片段至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同。
26.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该具有转半乳糖基活性的酶具有如下氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸1-1304至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同并且具有900-1350个氨基酸，优选1300-1305个氨基酸、更优选1302或1304个氨基酸的长度。
27.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该具有转半乳糖基活性的酶已经通过至少一个赖氨酸和/或精氨酸残基的糖化而被修饰。
28.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该具有转半乳糖基活性的酶已经与还原糖，优选果糖、葡萄糖、半乳糖或乳糖接触，接触的时间和温度足以产生通过糖化修饰的多肽。
29.如前述实施例中任一项所述的方法，其中与未通过糖化修饰的酶相比，该已通过糖化修饰的具有转半乳糖基活性的酶具有改进的转半乳糖基活性。
30.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该具有转半乳糖基活性的酶已经通过与30wt％-90wt％的还原糖，优选果糖、葡萄糖或半乳糖在pH 5-8下在20℃-80℃的温度下接触3-20小时的时间进行糖化而被修饰。
31.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该具有转半乳糖基活性的酶已经与40wt％-70wt％，优选50wt％-70wt％或55wt％-65wt％的葡萄糖在40℃-60℃、优选50℃-60℃下孵育40-100小时、优选50-90或60-80小时。
32.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该具有转半乳糖基活性的酶已经通过与至少40wt％，优选至少60wt％或至少80wt％的还原糖，优选葡萄糖接触进行糖化而被修饰。
33.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该具有转半乳糖基活性的酶是β-半乳糖苷酶，该β-半乳糖苷酶当使用13LAU(C)/g乳糖的酶浓度在50℃下在60％的脱脂乳粉溶液中24小时后测量时，其转半乳糖基活性与水解活性的比率为至少1，优选至少2、至少3或至少4。
34.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该具有转半乳糖基活性的酶是属于酶类别EC 3.2.1.23或3.2.1.108，优选3.2.1.23的β-半乳糖苷酶。
35.如前述实施例中任一项所述的方法，其中该具有转半乳糖基活性的酶是GH2β-半乳糖苷酶，优选GH2_5β-半乳糖苷酶。
36.如前述实施例中任一项所述的方法，其中在步骤(c)中通过热处理使该酶完全或部分失活。
37.如前述实施例中任一项所述的方法，其中在步骤(c)中通过巴氏灭菌、ESL处理、UHT处理或喷雾干燥使该酶完全或部分失活。
38.如前述实施例中任一项所述的方法，其还包括：
(e)干燥，优选喷雾干燥步骤(d)的乳产品以获得乳粉，如脱脂乳粉。
39.如前述实施例中任一项所述的方法，其还包括：
(e)任选地干燥、优选喷雾干燥步骤(d)的乳产品以获得粉，如脱脂乳粉，和
(f)在蛋白棒的产生中使用步骤(d)的乳产品或步骤(e)的乳粉。
40.如前述实施例中任一项所述的方法，其还包括：
(e)任选地干燥、优选喷雾干燥步骤(d)的乳产品以获得粉，如脱脂乳粉，和
(f)在乳饮品的产生中使用步骤(d)的乳产品或步骤(e)的乳粉。
41.如前述实施例中任一项所述的方法，其还包括：
(e)任选地干燥、优选喷雾干燥步骤(d)的乳产品以获得粉，如脱脂乳粉，和
(f)在婴儿配方食品的产生中使用步骤(d)的乳产品或步骤(e)的乳粉。
42.如前述实施例中任一项所述的方法，其还包括：
(e)任选地干燥、优选喷雾干燥步骤(d)的乳产品以获得粉，如脱脂乳粉，和
(f)在酸奶的产生中使用步骤(d)的乳产品或步骤(e)的乳粉。
43.如实施例1-37中任一项所述的方法，其是用于产生发酵乳产品的方法，该方法包括：
(a)提供包含至少20％(w/v)乳糖的乳底物，
(b)使该乳底物与具有转半乳糖基活性的酶接触至少45分钟，
(c)在步骤(b)之前、期间和/或之后，优选通过与细菌培养物孵育来发酵该乳底物，
(d)在步骤(c)之前或之后使该酶失活，和
(e)由此获得发酵乳产品，其中总游离碳水化合物的至少35wt％是原位产生的DP3+低聚半乳糖(GOS)。
44.如实施例43所述的方法，其中该发酵乳产品是酸奶。
45.如实施例43-44中任一项所述的方法，其中步骤(b)和步骤(c)在40℃-45℃的温度下进行。
46.一种可通过前述实施例中任一项的方法获得的乳产品。
47.一种乳产品，其包含总量为至少11wt％的原位产生的DP3+低聚半乳糖(GOS)，并且其中该原位产生的DP3+GOS构成总游离碳水化合物的至少35wt％。
48.如实施例47所述的乳产品，其中该游离碳水化合物是未与蛋白质共价结合的碳水化合物。
49.如实施例47-48中任一项所述的乳产品，其中该DP3+GOS是聚合度为至少3的GOS。
50.如实施例47-49中任一项所述的乳产品，其是重构乳粉如重构脱脂乳粉，浓缩乳如炼乳，或乳粉如脱脂乳粉。
51.如实施例47-50中任一项所述的乳产品，其包含至少40wt％，优选至少45wt％、至少50wt％、至少55wt％、至少57wt％或至少60wt％的干物质。
52.如实施例47-51中任一项所述的乳产品，其获得自除了调节脂肪含量和/或水以外没有通过添加和/或去除乳成分在很大程度上改变组成的乳。
53.如实施例47-52中任一项所述的乳产品，其中乳清蛋白与酪蛋白的比率与乳中的相同。
54.如实施例47-53中任一项所述的乳产品，其是由乳产生的，而没有改变乳清蛋白与酪蛋白的比率。
55.如实施例47-54中任一项所述的乳产品，其不包含添加的乳糖。
56.如实施例47-55中任一项所述的乳产品，其包含总量为至少10wt％的乳蛋白，如至少15wt％或至少20wt％的乳蛋白。
57.如实施例47-56中任一项所述的乳产品，其是脱脂乳粉或重构脱脂乳粉。
58.如实施例47-57中任一项所述的乳产品，其中该总游离碳水化合物的至少40wt％是原位产生的DP3+GOS。
59.如实施例47-58中任一项所述的乳产品，其中该总游离碳水化合物的至少50wt％，优选至少55wt％或至少60wt％是原位产生的DP2+GOS。
60.如实施例47-59中任一项所述的乳产品，其包含总量为至少12wt％、优选至少13wt％的原位产生的DP3+GOS。
61.如实施例47-60中任一项所述的乳产品，其包含总量为至少12wt％、优选至少15wt％或至少18wt％的原位产生的DP2+GOS。
62.如实施例47-61中任一项所述的乳产品，其中该乳产品中总游离碳水化合物的至多30wt％，优选至多20wt％，如至多15wt％或至多12wt％是乳糖。
63.如实施例47-62中任一项所述的乳产品，其是包含总量为至少11wt％、优选至少12wt％或至少13wt％的原位产生的DP3+GOS的重构乳粉如重构脱脂乳粉，或浓缩乳如炼乳。
64.如实施例63所述的乳产品，其包含总量为至多10wt％，优选至多5wt％的乳糖。
65.如实施例47-62中任一项所述的乳产品，其是包含总量为至少11wt％、优选至少12wt％或至少13wt％的原位产生的DP3+GOS的乳粉，如脱脂乳粉。
66.如实施例65所述的乳粉，其包含总量为至少15wt％、优选至少18wt％或至少20wt％的原位产生的DP3+GOS。
67.如实施例65-66中任一项所述的乳粉，其包含总量为至多15wt％，优选至多10wt％的乳糖。
实例
材料和方法
活性测定(LAU(C))
原理：
乳糖酶水解乳糖以形成α-D-葡萄糖。在己糖激酶催化的反应中，α-D-葡萄糖被ATP磷酸化。形成的葡萄糖-6-磷酸被葡萄糖-6-磷酸脱氢酶氧化成6-磷酸葡萄糖酸。伴随着该反应，等摩尔量的NAD+被还原成NADH，导致在340nm处的吸光度增加。
试剂：
15％(w/v)Brij L23：称量508.0±0.4g的L23(Sigma B4184)放入烧杯中。添加约300mL超纯水并搅拌。将L23定量转移至1L容量瓶中。用超纯水填充至刻度。搅拌至均匀。可储存性：在冰箱中2个月。
显色试剂：(葡萄糖试剂盒(GHK)(0.1M Tris、2.1mM ATP、2.1mM NAD、4mM Mg2+、<0.1％NaN3、4mM Mg2+、>7.5kU/L己糖激酶、>7.5kU/L G-6-P-DH，pH 7.8))：打开葡萄糖(HK)试剂A的小瓶(Thermo Fisher Scientific(产品编号：981304或981779))和葡萄糖(HK)试剂B的小瓶(Thermo Fisher Scientific(产品编号：981304或981779))。将1瓶试剂B倒入1瓶试剂A中。盖上盖子。通过缓慢地且温和地上下旋转小瓶10-15次充分混合。使用在试剂A小瓶中的全部混合物，或将所需量倒入适当的容器中。可储存性：在冰箱中1个月。
溶解缓冲液/稀释缓冲液(0.01M柠檬酸一水合物、0.0225％(w/v)L23、1mMMgSO4,7H2O，pH 4.5)：称量21.0±0.1g柠檬酸一水合物(Cas号5949-29-1)并将其定量转移至10L容量瓶中。称量2.46±0.01g的MgSO4,7H2O(Cas号10034-99-8)并定量转移至容量瓶中。添加约9L的脱矿质水并搅拌直至完全溶解。将15mL的15％(w/v)Brij L23添加至容量瓶中并搅拌。添加约35mL的4M NaOH(Cas号1310-73-2)并搅拌。根据情况使用例如4M NaOH或例如HCl将pH调节至4.50±0.05。用脱矿质水填充至刻度并搅拌。可储存性：在室温下13天。
底物(31.6％w/w乳糖一水合物、0.01M柠檬酸一水合物、0.0225(w/v)Brij L23、1mM MgSO4,7H2O)：称量7.9±0.2g乳糖一水合物(Cas号10039-26-6)，直接放入烧杯中。溶解至总体积为25.0±0.1g的溶解缓冲液。加热并搅拌直至完全溶解，而底物不沸腾。可储存性：在室温下6小时。
标准品：使用具有鉴定的LAU(C)/g的酶标准品(可从丹麦的诺维信公司(Novozymes A/S)获得)作为标准品，在溶解缓冲液中稀释至0.197-0.7880LAU(C)/mL的范围内。
程序：
1.将50uL的底物在50℃下孵育540秒。减去空白(50uL的溶解缓冲液)。
2.添加25uL在溶解缓冲液中的样品。
3.将反应孵育1800秒，然后添加160uL显色试剂。
4.300秒后，测量在340nm处的吸光度。
酶活性的计算：
从标准曲线读取稀释样品的酶活性。以LAU(C)/g为单位的样品活性的计算如下式所述：
S＝从标准曲线的读取，以LAU(C)/mL为单位
V＝使用的容量瓶的体积，以mL为单位
F＝第二次稀释的稀释度
W＝样品的重量，以g为单位实例1
样品：
具有如SEQ ID NO:1所示序列的两歧双歧杆菌β-半乳糖苷酶已在地衣芽孢杆菌中表达，并使用UF(截断值为10kDa)浓缩，最终用60％(w/w)葡萄糖配制，并在55℃下孵育69.5h，然后在-20℃下储存。此样品的浓度为5300LAU(C)/g。
常规乳中的GOS生产。
在5℃下24h(结果显示在表1中)。
将两毫升半脱脂乳(阿拉公司，在丹麦当地一家超市中购买，每100g含有4.7g乳糖和3,5g蛋白质)转移到5ml Eppendorf管中(对每个剂量(包括对照)进行两次测定)。然后添加20μl酶稀释物(最终LAU(C)/l可参见表1)并混合，然后在5℃下孵育24h。孵育后，将10μl浓乙酸添加至每个样品中，并将溶液加热至90℃保持5min。失活后，将样品在室温下以14,000rpm离心5min。将1ml上清液转移至另一个管中，并保持冷冻直至通过HPLC分析。
在60℃下3h(结果显示在表3中)
将两毫升半脱脂乳(阿拉公司，在丹麦当地一家超市中购买，每100g含有4.7g乳糖和3.5g蛋白质)转移到2ml Eppendorf管中(对每个剂量(包括对照)进行两次测定)。然后添加20μl酶稀释物(最终LAU(C)/l可参见表3)并混合，然后在60℃下孵育3h。孵育后，将10μl浓乙酸添加至每个样品中，并将溶液加热至90℃保持5min。失活后，将样品在室温下以14,000rpm离心5min。将1ml上清液转移至另一个管中，并保持冷冻直至通过HPLC分析。
在60％脱脂乳粉溶液(SMP)中的GOS生产
在5℃下22.5h(结果显示在表2中)
将12g脱脂乳粉(含有50％乳糖和35％蛋白质)和8ml样品溶液(最终LAU(C)/kg60％SMP可参见表2)添加至50ml试管中，混合并在5℃下孵育22.5h。随后添加20ml 3％HAc并用抹刀混合直至溶液均匀，然后在室温下置于旋转器上10min。然后以7850rpm离心10min，将200μl上清液转移至含有1ml水的2ml Eppendorf管中，加热至90℃保持5min，在室温下以14,000rpm离心5min，并将上清液保持冷冻状态直到用于两次分析型HPLC测试。
在50℃、55℃和60℃下24h并且在65℃下3h(结果显示在表4中)
将12g脱脂乳粉(含有50％乳糖和35％蛋白质)和8ml样品溶液(最终LAU(C)/kg60％SMP可参见表4)添加至50ml试管中，混合并在50℃、55℃或60℃下孵育24h或在65℃下孵育3h。随后添加20ml 3％HAc并用抹刀混合直至溶液均匀，然后在室温下置于旋转器上10min。然后以7850rpm离心10min，将200μl上清液转移至含有1ml水的2ml Eppendorf管中，加热至90℃保持5min，在室温下以14,000rpm离心5min，并将上清液保持冷冻状态直到用于两次分析型HPLC测试。
测定乳糖(Lac)和GOS二糖(DP2-GOS)的比率
如下进行使用PA1柱的带有脉冲安培检测的高效阴离子交换色谱(HPAEC-PAD)，以定量测定半乳糖(Gal)、葡萄糖(Glc)、乳糖(Lac)和DP2-GOS。
将50μl样品与500μl Milli Q水+10μl Carrez I溶液在5ml Eppendorf管中混合，然后与10μl Carrez II溶液混合。然后添加4.43ml milli Q水，并在室温下以14,000rpm离心5min。将1ml上清液与4ml Milli-Q水混合，并转移到spin-x过滤管中，并以6,000rpm离心5min，并施加在PA1柱上。定量测定Lac、b-1-6-Gal-Gal、b-1-6-Gal-Glc、b-1-3-Gal-Gal、b-1-4-Gal-Gal和b-1-3-Gal-Glc(+b-1-2-Gal-Glc)，从而可以测定GOS二糖(DP2G)和乳糖的比率。
随后使用此DP2G/(Lac+DP2G)比率来计算通过Dionex HPLC系统ICS-5000RI方法测定的DP2峰中DP2G的量(参见下文)，然后可以通过DP3+和DP2G的总和计算总GOS。
同样，Lac/(Lac+DP2G)比率(＝1减去DP2G/(Lac+DP2G))可用于计算以下测定的DP2峰中的乳糖量。
定量测定Glc、Gal、DP2、DP3、DP4和DP5+
Dionex HPLC系统ICS-5000RI(Aminex-HPX-87H离子排斥柱)用于定量测定Gal、Glc、DP2、DP3、DP4和DP5+。将未稀释的样品转移至spin-x过滤管中，并以6,000rpm离心5min，然后施加至Aminex-HPX-87H柱。在与酶处理的样品相同的条件下孵育未添加酶的对照样品，并使用该对照样品计算来自酶处理的Gal、Glc和DP3、DP4和DP5+的贡献。
表中显示的数字是基于Gal、Glc、DP3、DP4和DP5+的定量测定减去在对照(无酶)样品中估算的Gal、Glc、DP3、DP4和DP5+的定量的量。
将定量DP3+测定为DP3+DP4+DP5+。
定量测定GOS二糖(DP2-GOS)和乳糖(Lac)
定量乳糖(Lac)＝DP2乘以上文测定的Lac/(Lac+DP2G)比率。
定量DP2G＝DP2乘以上文测定的DP2G/(Lac+DP2G)比率。
最后，定量GOS＝DP2G加DP3+。
结果
表1. 5℃下在常规乳中持续24h的GOS生产
表2. 5℃下在60％SMP中持续22.5h的GOS生产
为了声明在乳制品中的纤维，要求有高DP3+(DP3+是DP3和更高的DP，根据纤维定义)。如表1所见，如果起始底物是常规乳，则最多可获得28.0％DP3+；而60％SMP则最多可获得38.7％，参见表2。通过60％SMP应用能够获得更高的DP3+产量，除了纤维声明之外，最终乳产品的卡路里也更低，因为DP3+具有2kcal/g，而Glc、Gal和DP2G具有4kcal/g，如欧盟监管(EU regulatory)所述：附件十四，关于向消费者提供食品信息的条例1169/2011。
表3. 60℃下在常规乳中持续3h的GOS生产
表4. 50℃、55℃和60℃下在60％SMP中持续24h和65℃下持续3h的GOS生产
表3显示了60℃下在常规乳中持续3h随渐增的酶剂量(LAU(C)/kg，第1列)而制得的GOS。在最高酶剂量下，获得了31.3％的DP3+，这比在5℃下获得的最大DP3+高3.3％(参见表1)。与5℃下60％SMP(表2)相比，观察到在高温(50℃-65℃，表4)下60％SMP中DP3+的相对增加相同。因此，在常规乳和60％SMP中，较高温度下均可获得DP3+的相对增加。
表4显示，有可能获得这样的重构脱脂乳粉(60％)，其中超过44wt％的总游离碳水化合物是原位产生的DP3+GOS。所使用的脱脂乳粉含有50％乳糖。因此，在重构脱脂乳粉中原位产生的DP3+GOS的总量大于13wt％(44％x60％x50％)。如果将获得的重构脱脂乳粉干燥，例如通过喷雾干燥，则获得的脱脂乳粉将包含超过22wt％的原位产生的DP3+GOS(44％x50％)。
本文描述和要求保护的本发明不限于本文公开的特定方面的范围，因为这些方面旨在作为本发明若干方面的说明。任何等同方面旨在处于本发明的范围之内。实际上，除了本文所示和描述的那些之外，本发明的各种修改对于本领域的技术人员会从前述说明变得清楚。此类修改也旨在落入所附权利要求的范围内。在冲突的情况下，以包括定义的本公开为准。
序列表
<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）
Tams, Jeppe Wegener
<120> 乳制品
<130> 14709-WO-PCT
<160> 15
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 1304
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 1
Val Glu Asp Ala Thr Arg Ser Asp Ser Thr Thr Gln Met Ser Ser Thr
1 5 10 15
Pro Glu Val Val Tyr Ser Ser Ala Val Asp Ser Lys Gln Asn Arg Thr
20 25 30
Ser Asp Phe Asp Ala Asn Trp Lys Phe Met Leu Ser Asp Ser Val Gln
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65 70 75 80
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Gly Val Asn Ser Ile Arg Thr Thr His Asn Pro Ala Ala Lys Ala Leu
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Ile Val Pro Asp Ala Ala Asn Arg Val Thr Phe Asp Val Lys Gly Ala
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<210> 2
<211> 1931
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 2
Met Lys Lys Pro Leu Gly Lys Ile Val Ala Ser Thr Ala Leu Leu Ile
1 5 10 15
Ser Val Ala Phe Ser Ser Ser Ile Ala Ser Ala Ala Val Glu Asp Ala
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Thr Arg Ser Asp Ser Thr Thr Gln Met Ser Ser Thr Pro Glu Val Ala
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115 120 125
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Gly Tyr Ser Pro Phe Ser Phe Asp Leu Thr Gly Asn Ala Lys Phe Gly
165 170 175
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Arg Trp Tyr Ser Gly Ser Gly Ile Tyr Arg Asp Val Thr Leu Thr Val
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Ser Leu Ala Thr Gln Asn Gly Gly Asp Val Thr Met Asn Leu Thr Thr
225 230 235 240
Lys Val Ala Asn Asp Thr Glu Ala Ala Ala Asn Ile Thr Leu Lys Gln
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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Asp Thr Tyr Asp Thr Glu Tyr Gly Phe Arg Trp Thr Gly Phe Asp Ala
325 330 335
Thr Ser Gly Phe Ser Leu Asn Gly Glu Lys Val Lys Leu Lys Gly Val
340 345 350
Ser Met His His Asp Gln Gly Ser Leu Gly Ala Val Ala Asn Arg Arg
355 360 365
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385 390 395 400
Asn Glu Lys Gly Val Leu Val Val Glu Glu Val Phe Asp Met Trp Asn
405 410 415
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485 490 495
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Tyr Asp Lys Ile Arg Thr Thr His Pro Ser Trp Ala Ile Tyr Gly Ser
545 550 555 560
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565 570 575
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Ser Trp Pro Ser Pro Lys Asn Ser Tyr Phe Gly Ile Val Asp Thr Ala
645 650 655
Gly Phe Pro Lys Asp Thr Tyr Tyr Phe Tyr Gln Ser Gln Trp Asn Asp
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Pro Gly Ser Arg Pro Ala Val Leu Pro Asp Gly Thr Val Thr Ser
1010 1015 1020
Ala Asn Phe Ala Val His Trp Thr Lys Pro Ala Asp Thr Val Tyr
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Gln Val Thr Ile Gly Ser Ser Val Ser Gly Asn Ala Leu Arg Leu
1070 1075 1080
Thr Gln Asn Ile Pro Ala Asp Lys Gln Ser Asp Thr Leu Asp Ala
1085 1090 1095
Ile Lys Asp Gly Ser Thr Thr Val Asp Ala Asn Thr Gly Gly Gly
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1130 1135 1140
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1145 1150 1155
Arg Phe Pro Asp Ala Gly Lys Thr Lys Ile Gln Ile Ser Ala Asp
1160 1165 1170
Gly Lys Asn Trp Thr Asp Leu Ala Ala Thr Glu Thr Ile Ala Ala
1175 1180 1185
Gln Glu Ser Ser Asp Arg Val Lys Pro Tyr Thr Tyr Asp Phe Ala
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Thr Thr Thr Pro Ser Gly Val Val Cys Ala Gly Leu Thr Glu Ile
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Glu Leu Lys Thr Ala Thr Ser Lys Phe Val Thr Asn Thr Ser Ala
1235 1240 1245
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Lys Gly Glu Val Lys Pro Asp Pro Lys Pro Glu Pro Gly Thr Val
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<210> 3
<211> 1341
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 3
Met Lys Lys Pro Leu Gly Lys Ile Val Ala Ser Thr Ala Leu Leu Ile
1 5 10 15
Ser Val Ala Phe Ser Ser Ser Ile Ala Ser Ala Ile Glu Asp Ala Thr
20 25 30
Arg Ser Asp Ser Thr Thr Gln Met Ser Ser Thr Pro Glu Val Ala Tyr
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Ser Ser Ala Val Asp Ser Lys Gln Asn Arg Thr Ser Asp Phe Asp Ala
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Asn Trp Lys Phe Met Leu Ser Asp Ser Val Gln Ala Gln Asp Pro Ala
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Tyr Ser Pro Phe Ser Phe Asp Leu Thr Gly Asn Ala Lys Phe Gly Gly
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180 185 190
Trp Tyr Ser Gly Ser Gly Ile Tyr Arg Asp Val Thr Leu Thr Val Thr
195 200 205
Asp Gly Val His Val Gly Asn Asn Gly Val Ala Ile Lys Thr Pro Ser
210 215 220
Leu Ala Thr Gln Asn Gly Gly Asp Val Thr Met Asn Leu Thr Thr Lys
225 230 235 240
Val Ala Asn Asp Thr Glu Ala Ala Ala Asn Ile Thr Leu Lys Gln Thr
245 250 255
Val Phe Pro Lys Gly Gly Lys Thr Asp Ala Ala Ile Gly Thr Val Thr
260 265 270
Thr Ala Ser Lys Ser Ile Ala Ala Gly Ala Ser Ala Asp Val Thr Ser
275 280 285
Thr Ile Thr Ala Ala Ser Pro Lys Leu Trp Ser Ile Lys Asn Pro Asn
290 295 300
Leu Tyr Thr Val Arg Thr Glu Val Leu Asn Gly Gly Lys Val Leu Asp
305 310 315 320
Thr Tyr Asp Thr Glu Tyr Gly Phe Arg Trp Thr Gly Phe Asp Ala Thr
325 330 335
Ser Gly Phe Ser Leu Asn Gly Glu Lys Val Lys Leu Lys Gly Val Ser
340 345 350
Met His His Asp Gln Gly Ser Leu Gly Ala Val Ala Asn Arg Arg Ala
355 360 365
Ile Glu Arg Gln Val Glu Ile Leu Gln Lys Met Gly Val Asn Ser Ile
370 375 380
Arg Thr Thr His Asn Pro Ala Ala Lys Ala Leu Ile Asp Val Cys Asn
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Glu Lys Gly Val Leu Val Val Glu Glu Val Phe Asp Met Trp Asn Arg
405 410 415
Ser Lys Asn Gly Asn Thr Glu Asp Tyr Gly Lys Trp Phe Gly Gln Ala
420 425 430
Ile Ala Gly Asp Asn Ala Val Leu Gly Gly Asp Lys Asp Glu Thr Trp
435 440 445
Ala Lys Phe Asp Leu Thr Ser Thr Ile Asn Arg Asp Arg Asn Ala Pro
450 455 460
Ser Val Ile Met Trp Ser Leu Gly Asn Glu Met Met Glu Gly Ile Ser
465 470 475 480
Gly Ser Val Ser Gly Phe Ser Ala Thr Ser Ala Lys Leu Val Ala Trp
485 490 495
Thr Lys Ala Ala Asp Ser Thr Arg Pro Met Thr Tyr Gly Asp Asn Lys
500 505 510
Ile Lys Ala Asn Trp Asn Glu Ser Asn Thr Met Gly Asp Asn Leu Thr
515 520 525
Ala Asn Gly Gly Val Val Gly Thr Asn Tyr Ser Asp Gly Ala Asn Tyr
530 535 540
Asp Lys Ile Arg Thr Thr His Pro Ser Trp Ala Ile Tyr Gly Ser Glu
545 550 555 560
Thr Ala Ser Ala Ile Asn Ser Arg Gly Ile Tyr Asn Arg Thr Thr Gly
565 570 575
Gly Ala Gln Ser Ser Asp Lys Gln Leu Thr Ser Tyr Asp Asn Ser Ala
580 585 590
Val Gly Trp Gly Ala Val Ala Ser Ser Ala Trp Tyr Asp Val Val Gln
595 600 605
Arg Asp Phe Val Ala Gly Thr Tyr Val Trp Thr Gly Phe Asp Tyr Leu
610 615 620
Gly Glu Pro Thr Pro Trp Asn Gly Thr Gly Ser Gly Ala Val Gly Ser
625 630 635 640
Trp Pro Ser Pro Lys Asn Ser Tyr Phe Gly Ile Val Asp Thr Ala Gly
645 650 655
Phe Pro Lys Asp Thr Tyr Tyr Phe Tyr Gln Ser Gln Trp Asn Asp Asp
660 665 670
Val His Thr Leu His Ile Leu Pro Ala Trp Asn Glu Asn Val Val Ala
675 680 685
Lys Gly Ser Gly Asn Asn Val Pro Val Val Val Tyr Thr Asp Ala Ala
690 695 700
Lys Val Lys Leu Tyr Phe Thr Pro Lys Gly Ser Thr Glu Gln Arg Leu
705 710 715 720
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725 730 735
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740 745 750
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755 760 765
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770 775 780
Gly Asn Ala Ser Val Thr Thr Thr Gly Lys Ala Ala Lys Leu Lys Ala
785 790 795 800
Asp Ala Asp Arg Lys Thr Ile Thr Ala Asp Gly Lys Asp Leu Ser Tyr
805 810 815
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820 825 830
Ala Asn Arg Val Thr Phe Asp Val Lys Gly Ala Gly Lys Leu Val Gly
835 840 845
Val Asp Asn Gly Ser Ser Pro Asp His Asp Ser Tyr Gln Ala Asp Asn
850 855 860
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865 870 875 880
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885 890 895
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915 920 925
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945 950 955 960
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965 970 975
Gln Lys Ile Ser Val Arg Val Thr Met Ile Asp Glu Ile Gly Ala Leu
980 985 990
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1010 1015 1020
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Gln Asn Ile Pro Ala Asp Lys Gln Ser Asp Thr Leu Asp Ala Ile
1085 1090 1095
Lys Asp Gly Ser Thr Thr Val Asp Ala Asn Thr Gly Gly Gly Ala
1100 1105 1110
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Asn Thr Ala Glu Ile Thr Phe Glu Tyr Ala Thr Glu Gln Gln Leu
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1145 1150 1155
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1160 1165 1170
Lys Asn Trp Thr Asp Leu Ala Ala Thr Glu Thr Ile Ala Ala Gln
1175 1180 1185
Glu Ser Ser Asp Arg Val Lys Pro Tyr Thr Tyr Asp Phe Ala Pro
1190 1195 1200
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1220 1225 1230
Leu Lys Thr Ala Thr Ser Lys Phe Val Ala Asn Thr Ser Ala Ala
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Leu Ser Ser Leu Thr Val Asn Gly Thr Lys Val Ser Asp Ser Val
1250 1255 1260
Leu Ala Ala Gly Ser Tyr Asn Thr Pro Ala Ile Ile Ala Asp Val
1265 1270 1275
Lys Ala Glu Gly Glu Gly Asn Ala Ser Val Thr Val Leu Pro Ala
1280 1285 1290
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1310 1315 1320
Pro Ala Asp Ser Asp Glu Arg Asp Gln His Gln His Gln His Gln
1325 1330 1335
His Gln Gln
1340
<210> 4
<211> 1752
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 4
Met Ala Val Arg Arg Leu Gly Gly Arg Ile Val Ala Phe Ala Ala Thr
1 5 10 15
Val Ala Leu Ser Ile Pro Leu Gly Leu Leu Thr Asn Ser Ala Trp Ala
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100 105 110
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115 120 125
Thr Ile Asp Arg Asp Leu Ala Gly Lys Arg Ile Ala Ile Asn Phe Asp
130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
Ala Lys Phe Gly Gly Glu Asn Thr Ile Val Val Lys Val Glu Asn Arg
180 185 190
Leu Pro Ser Ser Arg Trp Tyr Ser Gly Ser Gly Ile Tyr Arg Asp Val
195 200 205
Thr Leu Thr Val Thr Asp Gly Val His Val Gly Asn Asn Gly Val Ala
210 215 220
Ile Lys Thr Pro Ser Leu Ala Thr Gln Asn Gly Gly Asp Val Thr Met
225 230 235 240
Asn Leu Thr Thr Lys Val Ala Asn Asp Thr Glu Ala Ala Ala Asn Ile
245 250 255
Thr Leu Lys Gln Thr Val Phe Pro Lys Gly Gly Lys Thr Asp Ala Ala
260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Gly Lys Val Leu Asp Thr Tyr Asp Thr Glu Tyr Gly Phe Arg Trp Thr
325 330 335
Gly Phe Asp Ala Thr Ser Gly Phe Ser Leu Asn Gly Glu Lys Val Lys
340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
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405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
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465 470 475 480
Met Glu Gly Ile Ser Gly Ser Val Ser Gly Phe Pro Ala Thr Ser Ala
485 490 495
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500 505 510
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515 520 525
Gly Asp Asn Leu Thr Ala Asn Gly Gly Val Val Gly Thr Asn Tyr Ser
530 535 540
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545 550 555 560
Ile Tyr Gly Ser Glu Thr Ala Ser Ala Ile Asn Ser Arg Gly Ile Tyr
565 570 575
Asn Arg Thr Thr Gly Gly Ala Gln Ser Ser Asp Lys Gln Leu Thr Ser
580 585 590
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595 600 605
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610 615 620
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625 630 635 640
Gly Ala Val Gly Ser Trp Pro Ser Pro Lys Asn Ser Tyr Phe Gly Ile
645 650 655
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660 665 670
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675 680 685
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690 695 700
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705 710 715 720
Thr Glu Lys Arg Leu Ile Gly Glu Lys Ser Phe Thr Lys Lys Thr Thr
725 730 735
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755 760 765
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785 790 795 800
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805 810 815
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820 825 830
Ile Val Pro Asp Ala Ala Asn Arg Val Thr Phe Asp Val Lys Gly Ala
835 840 845
Gly Lys Leu Val Gly Val Asp Asn Gly Ser Ser Pro Asp His Asp Ser
850 855 860
Tyr Gln Ala Asp Asn Arg Lys Ala Phe Ser Gly Lys Val Leu Ala Ile
865 870 875 880
Val Gln Ser Thr Lys Glu Ala Gly Glu Ile Thr Val Thr Ala Lys Ala
885 890 895
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900 905 910
Gly Thr Ser Thr Glu Lys Thr Val Arg Ser Phe Tyr Tyr Ser Arg Asn
915 920 925
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930 935 940
Val Arg Tyr Ser Asp Gly Thr Ser Asp Arg Gln Asn Val Thr Trp Asp
945 950 955 960
Ala Val Ser Asp Asp Gln Ile Ala Lys Ala Gly Ser Phe Ser Val Ala
965 970 975
Gly Thr Val Ala Gly Gln Lys Ile Ser Val Arg Val Thr Met Ile Asp
980 985 990
Glu Ile Gly Ala Leu Leu Asn Tyr Ser Ala Ser Thr Pro Val Gly Thr
995 1000 1005
Pro Ala Val Leu Pro Gly Ser Arg Pro Ala Val Leu Pro Asp Gly
1010 1015 1020
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1025 1030 1035
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1040 1045 1050
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1070 1075 1080
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1130 1135 1140
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1175 1180 1185
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1190 1195 1200
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1205 1210 1215
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1220 1225 1230
Leu Thr Glu Ile Glu Leu Lys Thr Ala Thr Ser Lys Phe Val Thr
1235 1240 1245
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1250 1255 1260
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1265 1270 1275
Ile Ile Ala Asp Val Lys Ala Glu Gly Glu Gly Asn Ala Ser Val
1280 1285 1290
Thr Val Leu Pro Ala His Asp Asn Val Ile Arg Val Ile Thr Glu
1295 1300 1305
Ser Glu Asp His Val Thr Arg Lys Thr Phe Thr Ile Asn Leu Gly
1310 1315 1320
Thr Glu Gln Glu Phe Pro Ala Asp Ser Asp Glu Arg Asp Tyr Pro
1325 1330 1335
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1340 1345 1350
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1355 1360 1365
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1475 1480 1485
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Val Thr Leu Gly Asp Ala Thr Leu Arg Tyr Gly Val Asp Tyr Leu
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1565 1570 1575
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1580 1585 1590
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1685 1690 1695
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1730 1735 1740
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1745 1750
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<211> 1935
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列
<400> 5
Met Ala Val Arg Arg Leu Gly Gly Arg Ile Val Ala Phe Ala Ala Thr
1 5 10 15
Val Ala Leu Ser Ile Pro Leu Gly Leu Leu Thr Asn Ser Ala Trp Ala
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Pro His Asp Tyr Ser Ile Thr Gln Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Glu Ala
100 105 110
Glu Ser Ala Tyr Leu Pro Gly Gly Thr Gly Trp Tyr Arg Lys Ser Phe
115 120 125
Thr Ile Asp Arg Asp Leu Ala Gly Lys Arg Ile Ala Ile Asn Phe Asp
130 135 140
Gly Val Tyr Met Asn Ala Thr Val Trp Phe Asn Gly Val Lys Leu Gly
145 150 155 160
Thr His Pro Tyr Gly Tyr Ser Pro Phe Ser Phe Asp Leu Thr Gly Asn
165 170 175
Ala Lys Phe Gly Gly Glu Asn Thr Ile Val Val Lys Val Glu Asn Arg
180 185 190
Leu Pro Ser Ser Arg Trp Tyr Ser Gly Ser Gly Ile Tyr Arg Asp Val
195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
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275 280 285
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Gly Lys Val Leu Asp Thr Tyr Asp Thr Glu Tyr Gly Phe Arg Trp Thr
325 330 335
Gly Phe Asp Ala Thr Ser Gly Phe Ser Leu Asn Gly Glu Lys Val Lys
340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Gly Val Asn Ser Ile Arg Thr Thr His Asn Pro Ala Ala Lys Ala Leu
385 390 395 400
Ile Asp Val Cys Asn Glu Lys Gly Val Leu Val Val Glu Glu Val Phe
405 410 415
Asp Met Trp Asn Arg Ser Lys Asn Gly Asn Thr Glu Asp Tyr Gly Lys
420 425 430
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435 440 445
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485 490 495
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515 520 525
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565 570 575
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580 585 590
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660 665 670
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835 840 845
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885 890 895
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Thr Ile Asp Arg Asp Leu Ala Gly Lys Arg Ile Ala Ile Asn Phe Asp
100 105 110
Gly Val Tyr Met Asn Ala Thr Val Trp Phe Asn Gly Val Lys Leu Gly
115 120 125
Thr His Pro Tyr Gly Tyr Ser Pro Phe Ser Phe Asp Leu Thr Gly Asn
130 135 140
Ala Lys Phe Gly Gly Glu Asn Thr Ile Val Val Lys Val Glu Asn Arg
145 150 155 160
Leu Pro Ser Ser Arg Trp Tyr Ser Gly Ser Gly Ile Tyr Arg Asp Val
165 170 175
Thr Leu Thr Val Thr Asp Gly Val His Val Gly Asn Asn Gly Val Ala
180 185 190
Ile Lys Thr Pro Ser Leu Ala Thr Gln Asn Gly Gly Asp Val Thr Met
195 200 205
Asn Leu Thr Thr Lys Val Ala Asn Asp Thr Glu Ala Ala Ala Asn Ile
210 215 220
Thr Leu Lys Gln Thr Val Phe Pro Lys Gly Gly Lys Thr Asp Ala Ala
225 230 235 240
Ile Gly Thr Val Thr Thr Ala Ser Lys Ser Ile Ala Ala Gly Ala Ser
245 250 255
Ala Asp Val Thr Ser Thr Ile Thr Ala Ala Ser Pro Lys Leu Trp Ser
260 265 270
Ile Lys Asn Pro Asn Leu Tyr Thr Val Arg Thr Glu Val Leu Asn Gly
275 280 285
Gly Lys Val Leu Asp Thr Tyr Asp Thr Glu Tyr Gly Phe Arg Trp Thr
290 295 300
Gly Phe Asp Ala Thr Ser Gly Phe Ser Leu Asn Gly Glu Lys Val Lys
305 310 315 320
Leu Lys Gly Val Ser Met His His Asp Gln Gly Ser Leu Gly Ala Val
325 330 335
Ala Asn Arg Arg Ala Ile Glu Arg Gln Val Glu Ile Leu Gln Lys Met
340 345 350
Gly Val Asn Ser Ile Arg Thr Thr His Asn Pro Ala Ala Lys Ala Leu
355 360 365
Ile Asp Val Cys Asn Glu Lys Gly Val Leu Val Val Glu Glu Val Phe
370 375 380
Asp Met Trp Asn Arg Ser Lys Asn Gly Asn Thr Glu Asp Tyr Gly Lys
385 390 395 400
Trp Phe Gly Gln Ala Ile Ala Gly Asp Asn Ala Val Leu Gly Gly Asp
405 410 415
Lys Asp Glu Thr Trp Ala Lys Phe Asp Leu Thr Ser Thr Ile Asn Arg
420 425 430
Asp Arg Asn Ala Pro Ser Val Ile Met Trp Ser Leu Gly Asn Glu Met
435 440 445
Met Glu Gly Ile Ser Gly Ser Val Ser Gly Phe Pro Ala Thr Ser Ala
450 455 460
Lys Leu Val Ala Trp Thr Lys Ala Ala Asp Ser Thr Arg Pro Met Thr
465 470 475 480
Tyr Gly Asp Asn Lys Ile Lys Ala Asn Trp Asn Glu Ser Asn Thr Met
485 490 495
Gly Asp Asn Leu Thr Ala Asn Gly Gly Val Val Gly Thr Asn Tyr Ser
500 505 510
Asp Gly Ala Asn Tyr Asp Lys Ile Arg Thr Thr His Pro Ser Trp Ala
515 520 525
Ile Tyr Gly Ser Glu Thr Ala Ser Ala Ile Asn Ser Arg Gly Ile Tyr
530 535 540
Asn Arg Thr Thr Gly Gly Ala Gln Ser Ser Asp Lys Gln Leu Thr Ser
545 550 555 560
Tyr Asp Asn Ser Ala Val Gly Trp Gly Ala Val Ala Ser Ser Ala Trp
565 570 575
Tyr Asp Val Val Gln Arg Asp Phe Val Ala Gly Thr Tyr Val Trp Thr
580 585 590
Gly Phe Asp Tyr Leu Gly Glu Pro Thr Pro Trp Asn Gly Thr Gly Ser
595 600 605
Gly Ala Val Gly Ser Trp Pro Ser Pro Lys Asn Ser Tyr Phe Gly Ile
610 615 620
Val Asp Thr Ala Gly Phe Pro Lys Asp Thr Tyr Tyr Phe Tyr Gln Ser
625 630 635 640
Gln Trp Asn Asp Asp Val His Thr Leu His Ile Leu Pro Ala Trp Asn
645 650 655
Glu Asn Val Val Ala Lys Gly Ser Gly Asn Asn Val Pro Val Val Val
660 665 670
Tyr Thr Asp Ala Ala Lys Val Lys Leu Tyr Phe Thr Pro Lys Gly Ser
675 680 685
Thr Glu Lys Arg Leu Ile Gly Glu Lys Ser Phe Thr Lys Lys Thr Thr
690 695 700
Ala Ala Gly Tyr Thr Tyr Gln Val Tyr Glu Gly Ser Asp Lys Asp Ser
705 710 715 720
Thr Ala His Lys Asn Met Tyr Leu Thr Trp Asn Val Pro Trp Ala Glu
725 730 735
Gly Thr Ile Ser Ala Glu Ala Tyr Asp Glu Asn Asn Arg Leu Ile Pro
740 745 750
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755 760 765
Ala Lys Leu Lys Ala Asp Ala Asp Arg Lys Thr Ile Thr Ala Asp Gly
770 775 780
Lys Asp Leu Ser Tyr Ile Glu Val Asp Val Thr Asp Ala Asn Gly His
785 790 795 800
Ile Val Pro Asp Ala Ala Asn Arg Val Thr Phe Asp Val Lys Gly Ala
805 810 815
Gly Lys Leu Val Gly Val Asp Asn Gly Ser Ser Pro Asp His Asp Ser
820 825 830
Tyr Gln Ala Asp Asn Arg Lys Ala Phe Ser Gly Lys Val Leu Ala Ile
835 840 845
Val Gln Ser Thr Lys Glu Ala Gly Glu Ile Thr Val Thr Ala Lys Ala
850 855 860
Asp Gly Leu Gln Ser Ser Thr Val Lys Ile Ala Thr Thr Ala Val Pro
865 870 875 880
Gly Thr Ser Thr Glu Lys Thr Val Arg Ser Phe Tyr Tyr Ser Arg Asn
885 890 895
Tyr Tyr Val Lys Thr Gly Asn Lys Pro Ile Leu Pro Ser Asp Val Glu
900 905 910
Val Arg Tyr Ser Asp Gly Thr Ser Asp Arg Gln Asn Val Thr Trp Asp
915 920 925
Ala Val Ser Asp Asp Gln Ile Ala Lys Ala Gly Ser Phe Ser Val Ala
930 935 940
Gly Thr Val Ala Gly Gln Lys Ile Ser Val Arg Val Thr Met Ile Asp
945 950 955 960
Glu Ile Gly Ala Leu Leu Asn Tyr Ser Ala Ser Thr Pro Val Gly Thr
965 970 975
Pro Ala Val Leu Pro Gly Ser Arg Pro Ala Val Leu Pro Asp Gly Thr
980 985 990
Val Thr Ser Ala Asn Phe Ala Val His Trp Thr Lys Pro Ala Asp Thr
995 1000 1005
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1010 1015 1020
Val Phe Gly Lys Glu Phe Lys Val Thr Ala Thr Ile Arg Val Gln
1025 1030 1035
Arg Ser Gln Val Thr Ile Gly Ser Ser Val Ser Gly Asn Ala Leu
1040 1045 1050
Arg Leu Thr Gln Asn Ile Pro Ala Asp Lys Gln Ser Asp Thr Leu
1055 1060 1065
Asp Ala Ile Lys Asp Gly Ser Thr Thr Val Asp Ala Asn Thr Gly
1070 1075 1080
Gly Gly Ala Asn Pro Ser Ala Trp Thr Asn Trp Ala Tyr Ser Lys
1085 1090 1095
Ala Gly His Asn Thr Ala Glu Ile Thr Phe Glu Tyr Ala Thr Glu
1100 1105 1110
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1115 1120 1125
Ala Val Arg Phe Pro Asp Ala Gly Lys Thr Lys Ile Gln Ile Ser
1130 1135 1140
Ala Asp Gly Lys Asn Trp Thr Asp Leu Ala Ala Thr Glu Thr Ile
1145 1150 1155
Ala Ala Gln Glu Ser Ser Asp Arg Val Lys Pro Tyr Thr Tyr Asp
1160 1165 1170
Phe Ala Pro Val Gly Ala Thr Phe Val Lys Val Thr Val Thr Asn
1175 1180 1185
Ala Asp Thr Thr Thr Pro Ser Gly Val Val Cys Ala Gly Leu Thr
1190 1195 1200
Glu Ile Glu Leu Lys Thr Ala Thr Ser Lys Phe Val Thr Asn Thr
1205 1210 1215
Ser Ala Ala Leu Ser Ser Leu Thr Val Asn Gly Thr Lys Val Ser
1220 1225 1230
Asp Ser Val Leu Ala Ala Gly Ser Tyr Asn Thr Pro Ala Ile Ile
1235 1240 1245
Ala Asp Val Lys Ala Glu Gly Glu Gly Asn Ala Ser Val Thr Val
1250 1255 1260
Leu Pro Ala His Asp Asn Val Ile Arg Val Ile Thr Glu Ser Glu
1265 1270 1275
Asp His Val Thr Arg Lys Thr Phe Thr Ile Asn Leu Gly Thr Glu
1280 1285 1290
Gln Glu Phe Pro Ala Asp Ser Asp Glu Arg Asp Tyr Pro Ala Ala
1295 1300 1305
Asp Met Thr Val Thr Val Gly Ser Glu Gln Thr Ser Gly Thr Ala
1310 1315 1320
Thr Glu Gly Pro Lys Lys Phe Ala Val Asp Gly Asn Thr Ser Thr
1325 1330 1335
Tyr Trp His Ser Asn Trp Thr Pro Thr Thr Val Asn Asp Leu Trp
1340 1345 1350
Ile Ala Phe Glu Leu Gln Lys Pro Thr Lys Leu Asp Ala Leu Arg
1355 1360 1365
Tyr Leu Pro Arg Pro Ala Gly Ser Lys Asn Gly Ser Val Thr Glu
1370 1375 1380
Tyr Lys Val Gln Val Ser Asp Asp Gly Thr Asn Trp Thr Asp Ala
1385 1390 1395
Gly Ser Gly Thr Trp Thr Thr Asp Tyr Gly Trp Lys Leu Ala Glu
1400 1405 1410
Phe Asn Gln Pro Val Thr Thr Lys His Val Arg Leu Lys Ala Val
1415 1420 1425
His Thr Tyr Ala Asp Ser Gly Asn Asp Lys Phe Met Ser Ala Ser
1430 1435 1440
Glu Ile Arg Leu Arg Lys Ala Val Asp Thr Thr Asp Ile Ser Gly
1445 1450 1455
Ala Thr Val Thr Val Pro Ala Lys Leu Thr Val Asp Arg Val Asp
1460 1465 1470
Ala Asp His Pro Ala Thr Phe Ala Thr Lys Asp Val Thr Val Thr
1475 1480 1485
Leu Gly Asp Ala Thr Leu Arg Tyr Gly Val Asp Tyr Leu Leu Asp
1490 1495 1500
Tyr Ala Gly Asn Thr Ala Val Gly Lys Ala Thr Val Thr Val Arg
1505 1510 1515
Gly Ile Asp Lys Tyr Ser Gly Thr Val Ala Lys Thr Phe Thr Ile
1520 1525 1530
Glu Leu Lys Asn Ala Pro Ala Pro Glu Pro Thr Leu Thr Ser Val
1535 1540 1545
Ser Val Lys Thr Lys Pro Ser Lys Leu Thr Tyr Val Val Gly Asp
1550 1555 1560
Ala Phe Asp Pro Ala Gly Leu Val Leu Gln His Asp Arg Gln Ala
1565 1570 1575
Asp Arg Pro Pro Gln Pro Leu Val Gly Glu Gln Ala Asp Glu Arg
1580 1585 1590
Gly Leu Thr Cys Gly Thr Arg Cys Asp Arg Val Glu Gln Leu Arg
1595 1600 1605
Lys His Glu Asn Arg Glu Ala His Arg Thr Gly Leu Asp His Leu
1610 1615 1620
Glu Phe Val Gly Ala Ala Asp Gly Ala Val Gly Glu Gln Ala Thr
1625 1630 1635
Phe Lys Val His Val His Ala Asp Gln Gly Asp Gly Arg His Asp
1640 1645 1650
Asp Ala Asp Glu Arg Asp Ile Asp Pro His Val Pro Val Asp His
1655 1660 1665
Ala Val Gly Glu Leu Ala Arg Ala Ala Cys His His Val Ile Gly
1670 1675 1680
Leu Arg Val Asp Thr His Arg Leu Lys Ala Ser Gly Phe Gln Ile
1685 1690 1695
Pro Ala Asp Asp Met Ala Glu Ile Asp Arg Ile Thr Gly Phe His
1700 1705 1710
Arg Phe Glu Arg His Val Gly
1715 1720
<210> 13
<211> 1396
<212> PRT
<213> 环状芽孢杆菌
<400> 13
Met Arg Arg Ile Asn Phe Asn Asp Asn Trp Arg Phe Gln Arg Glu Ile
1 5 10 15
Ser Thr Ser Leu Arg Glu Ala Gln Lys Pro Ser Phe Asn Asp His Ser
20 25 30
Trp Arg Gln Leu Ser Leu Pro His Asp Trp Ser Ile Glu Leu Asp Phe
35 40 45
Asn Lys Asp Ser Leu Ala Thr His Glu Gly Gly Tyr Leu Asp Gly Gly
50 55 60
Val Gly Trp Tyr Arg Lys Thr Phe Thr Val Pro Ser Ala Met Glu Gly
65 70 75 80
Lys Arg Ile Ser Leu Asp Phe Asp Gly Val Tyr Met Asn Ser Thr Thr
85 90 95
Tyr Leu Asn Gly Glu Glu Leu Gly Thr Tyr Pro Phe Gly Tyr Asn Ala
100 105 110
Phe Ser Tyr Asp Ile Thr Asp Lys Leu Phe Met Asp Gly Arg Glu Asn
115 120 125
Val Leu Ala Val Lys Val Asp Asn Thr Gln Pro Ser Ser Arg Trp Tyr
130 135 140
Ser Gly Ser Gly Ile Tyr Arg Asn Val Tyr Leu Thr Val Thr Asn Pro
145 150 155 160
Val His Val Ala Arg Tyr Gly Thr Phe Val Thr Thr Pro Asp Leu Glu
165 170 175
Ser Ala Tyr Ala Ala Arg Lys Ala Glu Val Asn Ile Lys Thr Lys Ile
180 185 190
Asn Asn Asp Ser Asp Ala Ala Val Gln Val Lys Val Lys Ser Thr Ile
195 200 205
Tyr Asp Thr Asp Gly Lys Glu Val Ala Ser Val Val Ser Gln Glu Lys
210 215 220
Thr Ala Ala Ala Gly Thr Thr Ala His Phe Glu Asp Asn Thr Val Ile
225 230 235 240
Glu Asn Pro Glu Leu Trp Ser Leu Asp Asn Pro Tyr Arg Tyr Lys Leu
245 250 255
Val Thr Asp Val Leu Ile Gly Gly Glu Thr Val Asp Thr Tyr Glu Thr
260 265 270
Arg Phe Gly Ala Arg Phe Phe Lys Phe Asp Ala Asn Glu Gly Phe Ser
275 280 285
Leu Asn Gly Lys Pro Met Lys Leu Tyr Gly Val Ser Met His His Asp
290 295 300
Leu Gly Ala Leu Gly Ala Ala Thr Asn Ala Arg Ala Val Glu Arg Gln
305 310 315 320
Leu Gln Ile Met Lys Asp Met Gly Val Asn Ala Ile Arg Gly Thr His
325 330 335
Asn Pro Val Ser Pro Glu Phe Leu Glu Ala Val Asn Asn Leu Gly Leu
340 345 350
Leu Leu Ile Glu Glu Ala Phe Asp Cys Trp Ser Gln Ser Lys Lys Thr
355 360 365
Tyr Asp Tyr Gly Arg Phe Phe Thr Arg Trp Ala Glu His Asp Val Lys
370 375 380
Glu Met Val Asp Arg Gly Lys Asn Glu Pro Ser Ile Ile Met Trp Ser
385 390 395 400
Ile Gly Asn Glu Ile Tyr Asp Thr Thr Ser Pro Ser Gly Val Glu Thr
405 410 415
Ala Arg Asn Leu Val Arg Trp Ile Lys Glu Ile Asp Thr Thr Arg Pro
420 425 430
Thr Thr Ile Gly Glu Asp Lys Thr Arg Gly Asp Lys Val Asn Val Thr
435 440 445
Pro Ile Asp Pro Asn Ile Leu Glu Ile Phe His Thr Val Asp Val Val
450 455 460
Gly Leu Asn Tyr Ser Glu Asn Asn Tyr Val Gly Tyr His Glu Gln His
465 470 475 480
Pro Asn Trp Lys Leu Tyr Gly Ser Glu Thr Ser Ser Ala Thr Arg Ser
485 490 495
Arg Gly Val Tyr Thr His Pro Tyr Glu Tyr Asn Leu Gly Thr Lys Tyr
500 505 510
Asp Asp Leu Gln Gln Ser Ser Tyr Asp Asn Asp Tyr Val Pro Trp Gly
515 520 525
Arg Thr Ala Glu Asp Ala Trp Lys Ser Asp Arg Asp Leu Lys His Phe
530 535 540
Ala Gly Gln Phe Ile Trp Thr Gly Phe Asp Tyr Ile Gly Glu Pro Thr
545 550 555 560
Pro Tyr Tyr Asp Ser Tyr Pro Ala Lys Ser Ser Tyr Phe Gly Ala Val
565 570 575
Asp Thr Ala Gly Phe Pro Lys Asp Ile Phe Tyr Tyr Tyr Gln Ser Gln
580 585 590
Trp Lys Lys Glu Pro Met Val His Leu Leu Pro His Trp Asn Trp Thr
595 600 605
Glu Gly Glu Pro Val Arg Val Leu Ala Tyr Thr Asn Ala His Gln Val
610 615 620
Glu Leu Phe Leu Asn Gly Lys Ser Leu Gly Val Arg Gly Tyr Glu Asn
625 630 635 640
Lys Lys Thr Ser Trp Gly Ala Pro Tyr Lys Glu Thr Lys Asp Gly Lys
645 650 655
Thr Tyr Leu Glu Trp Ala Val Pro Phe Lys Ala Gly Thr Leu Glu Ala
660 665 670
Val Ala Met Asp Glu Asn Gly Lys Glu Ile Ala Arg Asp Gln Val Thr
675 680 685
Thr Ala Gly Ala Pro Ala Ala Val Lys Leu Thr Ala Asp Arg Lys Val
690 695 700
Ile Lys Ala Asp Gly Thr Asp Leu Ser Phe Ile Thr Ala Glu Ile Val
705 710 715 720
Asp Ser Lys Gly Asn Val Val Pro Asn Ala Asp His Leu Ile Gln Phe
725 730 735
His Leu Ser Gly His Gly Glu Leu Ala Gly Val Asp Asn Gly Asp Ala
740 745 750
Ala Ser Val Glu Arg Tyr Lys Asp Asn Lys Arg Lys Ala Phe Ser Gly
755 760 765
Lys Ala Leu Ala Ile Val Gln Ser Asn Lys Leu Asp Gly Asn Ile Thr
770 775 780
Leu His Ala Ser Ala Glu Gly Leu Ser Ser Gly Asn Val Thr Ile Phe
785 790 795 800
Thr Thr Ala Ser Ala Asp Gln Asn Ser Ile Thr Ile Ala Gly Ile Asp
805 810 815
Glu Val Asn Val Leu Val Asp Phe Asn Val Val Pro Glu Leu Pro Ser
820 825 830
Gln Ile Lys Val Tyr Tyr Ser Asp Ser Thr Val Glu Met Lys Pro Val
835 840 845
Thr Trp Asp Ala Val Asp Pro Asn Leu Leu Asn Thr Ala Gly Lys Ile
850 855 860
Ile Val Glu Gly Thr Val Glu Gly Thr Asp Lys Lys Ala Lys Ala Leu
865 870 875 880
Leu Ile Val Lys Gly Asn Gly Gln Glu Asn Ser Glu Tyr Arg Ile Asp
885 890 895
Leu Phe Ser Pro Asp Pro Lys Leu Ile Ser Thr Glu Leu Thr Val Glu
900 905 910
Lys Thr Asn Ile Met Glu Asp Asp Phe Ile Asp Ile Lys Val Ile Gly
915 920 925
Gln Leu Glu Asn Lys Glu Val Val Asp Leu Ser Asn Phe Met Pro Ile
930 935 940
Tyr Glu Phe Asp Cys Asp Ile Ile Lys Ile Glu Gly Asn Lys Leu Tyr
945 950 955 960
Ala Leu Glu Glu Gly Leu Val Lys Val Thr Ala Ala Val Thr Tyr Lys
965 970 975
Gly Arg Thr Val Thr Ser Pro Glu Met Met Leu Lys Ile Thr Lys Asn
980 985 990
Pro Val Pro Lys Thr Ile Thr His Ile Asp Ser Ile Thr Val Val Ala
995 1000 1005
Gly Lys Gly Glu Ala Pro Val Leu Pro Ala Thr Ala Val Ala His
1010 1015 1020
Phe Asp Arg Gly Met Pro Arg Asp Val Lys Val Lys Trp Glu Ile
1025 1030 1035
Val Asn Pro Ala Leu Tyr Gln Asn Leu Gly Glu Phe Thr Val Ser
1040 1045 1050
Gly Asp Val Glu Gly Thr Glu Ile Lys Ala Gln Ala Lys Val Met
1055 1060 1065
Val Arg Ser Ala Leu Ala Ile Glu Thr Ile Ser Met Ala Val Leu
1070 1075 1080
Pro Asn Gln Lys Pro Glu Leu Pro Gln Lys Val Thr Val Tyr Tyr
1085 1090 1095
Ser Asp Gly Thr Glu Glu Gln Ala Asp Val Asp Trp Asp Ala Met
1100 1105 1110
Pro Ser Ala Glu Leu Lys Ser Glu Gly Val Val Lys Val Lys Gly
1115 1120 1125
Ser Val Lys Gly Val Asp Leu Lys Ala Thr Ala Gln Ile Arg Val
1130 1135 1140
Thr Ser Glu Val Gly Gly Val Gln Asn Ile Ser Arg Ala Lys Asn
1145 1150 1155
Gly Tyr Glu Tyr Pro Lys Ala Glu Ala Ser Phe Thr Asn Thr Gly
1160 1165 1170
Pro Gly Ser Asn Asp Arg Ile Glu Ala Ile Asn Asp Asp Val Ile
1175 1180 1185
Ser Tyr Asp Ala Glu Pro His Asn Arg Trp Thr Asn Trp Gln Pro
1190 1195 1200
Thr Pro Arg Pro Gly Asp Trp Val Ser Ile Thr Phe Gly Asp Ser
1205 1210 1215
Lys Pro Arg Lys Tyr Asp Ile Asp Ser Met Glu Ile His Trp Tyr
1220 1225 1230
Glu Asp Leu Gly Thr Ser Ser Pro Ala Tyr Phe Arg Ile Gln Tyr
1235 1240 1245
Lys Ser Gly Asp Glu Trp Lys Asp Val Ser Gly Leu Lys Thr Asn
1250 1255 1260
Pro Ser Asn Thr Val Leu Arg Gln Ala Asn Val Tyr Thr Phe Asp
1265 1270 1275
Lys Val Arg Thr Ser Ala Ile Arg Val Asp Met Thr Ala Lys Thr
1280 1285 1290
Gly Lys Ser Leu Ala Ile Thr Glu Ile Lys Val Phe Ser Lys Trp
1295 1300 1305
Ala Lys Ala His Thr His Pro Met Val Thr Asp Ile Lys Leu Gly
1310 1315 1320
Asp Leu Ser Ile Leu Asp Asp Phe Ser Lys Lys Gly Asp Asn Asn
1325 1330 1335
Glu Leu Thr Phe Gln Val Lys Asp Pro Arg Asp Ile Pro Glu Ile
1340 1345 1350
Lys Val Lys Ala Glu Asp Asn Thr Ser Ile Thr Ile Ile Pro Thr
1355 1360 1365
Phe Thr Ala Pro Ser Thr Ala Lys Ile Ile Ala Lys Ser Glu Asp
1370 1375 1380
Gly Met Lys Val Glu Ile Tyr Asn Ile Arg Phe Thr Glu
1385 1390 1395
<210> 14
<211> 1737
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属的种
<400> 14
Met Lys Lys Ala Ile Ser Cys Val Phe Leu Ile Ser Ala Leu Ile Leu
1 5 10 15
Ser Ser Phe Gln Val Pro Val Gln Gly Gln Ala Met Ser Lys Thr Thr
20 25 30
Ser Ala Ala Gly Asn Ser Val Ser Tyr Asp Gly Glu Arg Arg Val Asn
35 40 45
Phe Asn Glu Asn Trp Arg Phe Gln Arg Glu Thr Asn Gly Ser Ile Ala
50 55 60
Gly Ala Gln Asn Pro Gly Phe Asp Asp Ser Ser Trp Arg Lys Leu Asn
65 70 75 80
Leu Pro His Asp Trp Ser Ile Glu Leu Asp Phe Asn Lys Asn Ser Leu
85 90 95
Ala Thr His Glu Gly Gly Tyr Leu Asp Gly Gly Ile Gly Trp Tyr Arg
100 105 110
Lys Thr Phe Thr Ile Pro Glu Ser Met Lys Gly Lys Arg Ile Ser Leu
115 120 125
Asp Phe Asp Gly Val Tyr Met Asn Ser Thr Thr Tyr Leu Asn Gly Glu
130 135 140
Val Leu Gly Thr Tyr Pro Phe Gly Tyr Asn Ala Phe Ser Tyr Asp Ile
145 150 155 160
Ser Asp Lys Leu Tyr Lys Asp Gly Arg Ala Asn Val Leu Val Val Lys
165 170 175
Val Asn Asn Thr Gln Pro Ser Ser Arg Trp Tyr Ser Gly Ser Gly Ile
180 185 190
Tyr Arg Asn Val Tyr Leu Thr Val Thr Asp Pro Ile His Val Ala Arg
195 200 205
Tyr Gly Thr Phe Val Thr Thr Pro Asn Leu Glu Lys Ser Ile Lys Glu
210 215 220
Asp Arg Ala Asp Val Asn Ile Lys Thr Lys Ile Ser Asn Asp Ala Ala
225 230 235 240
Glu Ala Lys Gln Val Lys Ile Lys Ser Thr Ile Tyr Asp Gly Ala Gly
245 250 255
Asn Thr Val Gln Thr Val Glu Thr Glu Glu Lys Thr Ala Ala Ala Gly
260 265 270
Thr Val Thr Pro Phe Glu Gln Asn Thr Val Ile Lys Gln Pro Lys Leu
275 280 285
Trp Ser Ile Asp Lys Pro Tyr Arg Tyr Asn Leu Val Thr Glu Val Ile
290 295 300
Val Gly Gly Gln Thr Val Asp Thr Tyr Glu Thr Lys Phe Gly Val Arg
305 310 315 320
Tyr Phe Lys Phe Asp Glu Asn Glu Gly Phe Ser Leu Asn Gly Glu Tyr
325 330 335
Met Lys Leu His Gly Val Ser Met His His Asp Leu Gly Ala Leu Gly
340 345 350
Ala Ala Thr Asn Ala Arg Gly Val Glu Arg Gln Met Gln Ile Met Lys
355 360 365
Asp Met Gly Val Asn Ala Ile Arg Val Thr His Asn Pro Ala Ser Pro
370 375 380
Glu Leu Leu Glu Ala Ala Asn Lys Leu Gly Leu Phe Ile Ile Glu Glu
385 390 395 400
Ala Phe Asp Ser Trp Ala Gln Ser Lys Lys Pro Tyr Asp Tyr Gly Arg
405 410 415
Phe Phe Asn Ala Trp Ala Glu His Asp Ile Lys Glu Met Val Asp Arg
420 425 430
Gly Lys Asn Glu Pro Ala Ile Ile Met Trp Ser Ile Gly Asn Glu Ile
435 440 445
Tyr Asp Thr Thr Asn Ala Ala Gly Val Glu Thr Ala Arg Asn Leu Val
450 455 460
Gly Trp Val Lys Glu Ile Asp Thr Thr Arg Pro Thr Thr Ile Gly Glu
465 470 475 480
Asp Lys Thr Arg Gly Asp Lys Val Asn Val Thr Pro Ile Asn Ser Tyr
485 490 495
Ile Lys Glu Ile Phe Asn Ile Val Asp Val Val Gly Leu Asn Tyr Ser
500 505 510
Glu Asn Asn Tyr Asp Gly Tyr His Lys Gln Asn Pro Ser Trp Lys Leu
515 520 525
Tyr Gly Ser Glu Thr Ser Ser Ala Thr Arg Ser Arg Gly Val Tyr Thr
530 535 540
His Pro Tyr Gln Tyr Asn Gln Ser Thr Lys Tyr Ala Asp Leu Gln Gln
545 550 555 560
Ser Ser Tyr Asp Asn Asp Tyr Val Gly Trp Gly Arg Thr Ala Glu Asp
565 570 575
Ala Trp Lys Tyr Asp Arg Asp Leu Lys His Ile Ala Gly Gln Phe Ile
580 585 590
Trp Thr Gly Phe Asp Tyr Ile Gly Glu Pro Thr Pro Tyr Tyr Asn Ser
595 600 605
Tyr Pro Ala Lys Ser Ser Tyr Phe Gly Ala Val Asp Thr Ala Gly Phe
610 615 620
Pro Lys Asp Ile Phe Tyr Tyr Tyr Gln Ser Gln Trp Lys Lys Glu Pro
625 630 635 640
Met Val His Leu Leu Pro His Trp Asn Trp Lys Glu Gly Glu Lys Val
645 650 655
Arg Val Leu Ala Tyr Thr Asn Ala Ser Lys Val Glu Leu Val Leu Asn
660 665 670
Gly Glu Ser Leu Gly Glu Lys Asn Tyr Asp Asn Lys Gln Thr Ser Trp
675 680 685
Gly Ala Pro Tyr Lys Glu Thr Lys Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Glu Trp
690 695 700
Ala Val Pro Phe Lys Pro Gly Lys Leu Glu Ala Val Ala Lys Asp Glu
705 710 715 720
Asn Gly Lys Val Ile Ala Arg Asp Gln Val Val Thr Ala Gly Glu Pro
725 730 735
Ala Ser Val Arg Leu Thr Ala Asp Arg Lys Val Val Lys Ala Asp Gly
740 745 750
Thr Asp Leu Ser Phe Ile Thr Ala Asp Ile Val Asp Ser Lys Gly Ile
755 760 765
Val Val Pro Asp Ala Asp His Leu Ile Thr Phe Asn Val Thr Gly Gln
770 775 780
Gly Glu Leu Ala Gly Val Asp Asn Gly Asn Ala Ser Ser Val Glu Arg
785 790 795 800
Tyr Lys Asp Asn Lys Arg Lys Ala Phe Ser Gly Lys Ala Leu Ala Ile
805 810 815
Val Gln Ser Ser Lys Leu Ser Gly Lys Ile Thr Val His Ala Ser Val
820 825 830
Ala Gly Leu Ser Ser Asp Ser Thr Ser Val Phe Thr Val Thr Pro Ala
835 840 845
Asp His Asp Lys Lys Ile Val Ala Gly Ile Asp Asp Val Asn Leu Thr
850 855 860
Val Asp Val Asn Glu Ala Pro Lys Leu Pro Ser Glu Ile Lys Val Tyr
865 870 875 880
Tyr Ser Asp Glu Ser Ala Ala Ala Lys Asn Val Thr Trp Asp Glu Val
885 890 895
Asp Pro Lys Gln Tyr Ser Thr Val Gly Glu Phe Thr Val Glu Gly Ser
900 905 910
Val Glu Gly Thr Ser Leu Lys Ala Lys Ala Phe Val Ile Val Lys Gly
915 920 925
Ile Val Ala Val Lys Pro Tyr Ser Thr Ala Thr Lys Val Gly Val Gln
930 935 940
Pro Val Leu Pro Glu Lys Ala Thr Leu Leu Tyr Ser Asp Gly Thr Thr
945 950 955 960
Lys Gly Ala Thr Val Thr Trp Asp Glu Ile Pro Glu Asp Lys Leu Ala
965 970 975
Lys Glu Gly Arg Phe Thr Val Glu Gly Ser Val Glu Gly Thr Asp Leu
980 985 990
Lys Ala Asn Val Tyr Val Arg Val Thr Asn Glu Val Lys Ser Val Asn
995 1000 1005
Ile Met Leu Gln Glu Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Lys Leu Glu Ala
1010 1015 1020
Thr Phe Thr Asn Pro Ala Asp Asn Leu Gln His Leu Asn Asp Gly
1025 1030 1035
Ile Lys Ser Tyr Thr Asn Asn Pro Val Asn Arg Trp Thr Asn Trp
1040 1045 1050
Thr Arg Thr Pro Arg Asp Ala Gly Asp Ser Ile Thr Val Asn Phe
1055 1060 1065
Gly Lys Lys His Val Ile Asn Asn Leu Asp Leu Phe Val Phe Thr
1070 1075 1080
Asp Ser Gly Thr Val Val Pro Glu Lys Ala Glu Val Gln Tyr Trp
1085 1090 1095
Asp Gly Thr Ala Trp Lys Asp Val Glu Asn Leu Thr Gln Pro Ser
1100 1105 1110
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1115 1120 1125
Thr Glu Lys Leu Lys Phe His Leu Thr Pro Ser Val Lys Gly Lys
1130 1135 1140
Phe Leu Ala Leu Thr Glu Ala Glu Val Tyr Ala Asp Gln Ile Val
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Met Gly Glu Thr Ala Lys Leu Gln Ser Ile Thr Val Asn Gly Lys
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Ala Leu Glu Gly Phe Asp His Ala Lys Lys Asn Tyr Glu Leu Val
1175 1180 1185
Leu Pro Tyr Gly Ser Glu Leu Pro Lys Ile Glu Ala Ala Ala Ala
1190 1195 1200
Asp Asn Ala Thr Val Thr Ile Leu Pro Ala Phe Ser Tyr Pro Gly
1205 1210 1215
Thr Ala Lys Leu Phe Val Thr Ser Glu Asp Gly Lys Val Thr Thr
1220 1225 1230
Glu Tyr Ser Ile Gly Val Ser Thr Glu Glu Pro Lys Leu Val Ser
1235 1240 1245
Ala Glu Leu Ser Ala Asp Lys Thr Asn Val Met Glu Asp Asp Ile
1250 1255 1260
Ile Asp Leu Lys Val Ile Gly Leu Phe Glu Ser Lys Glu Lys Ile
1265 1270 1275
Asp Val Thr Asp Ser Gln Pro Thr Tyr Glu Phe Asp Gln Gln Ile
1280 1285 1290
Ile Lys Ile Glu Gly Asn Lys Leu Tyr Ala Leu Glu Thr Gly Asn
1295 1300 1305
Val Lys Val Lys Val Thr Val Thr Tyr Lys Gly Val Ser Val Thr
1310 1315 1320
Thr Pro Ala Leu Glu Phe Thr Ile Ala Lys Asn Pro Ala Pro Lys
1325 1330 1335
Tyr Ile Thr Ser Leu Glu Pro Val Thr Val Val Val Lys Lys Gly
1340 1345 1350
Glu Ala Pro Glu Leu Pro Ala Thr Val Val Ala His Tyr Asn Arg
1355 1360 1365
Gly Ile Pro Arg Asp Val Lys Val Lys Trp Glu Arg Ile Asn Pro
1370 1375 1380
Ser Lys Tyr Gln Gln Leu Gly Glu Phe Thr Val Ser Gly Met Val
1385 1390 1395
Glu Gly Thr Asp Ile Lys Ala Gln Ala Lys Val Ile Val Lys Gly
1400 1405 1410
Ala Val Ala Val Glu Asp Ile Arg Met Ala Val Leu Leu Lys Gln
1415 1420 1425
Met Pro Gln Leu Pro Gly Lys Val Thr Val Tyr Tyr Ser Asp Gly
1430 1435 1440
Ala Glu Glu Gln Arg Ala Val Lys Trp Glu Glu Ile Pro Gln Glu
1445 1450 1455
Glu Leu Glu Asn Val Gly Glu Phe Lys Val Lys Gly Asp Val Asn
1460 1465 1470
Gly Val Lys Leu Lys Ala Thr Ala Thr Ile Arg Val Thr Asp Glu
1475 1480 1485
Val Gly Gly Glu Gln Asn Ile Ser Arg Ala Lys Asn Gly Tyr Glu
1490 1495 1500
Tyr Pro Lys Ala Glu Ala Ser Phe Thr Asn Asn Gly Pro Gly Ser
1505 1510 1515
Ser Asp Arg Ile Glu Ala Ile Asn Asp Asp Val Ile Ser Tyr Glu
1520 1525 1530
Ala Asn Pro His Asn Arg Trp Thr Asn Trp Gln Pro Val Pro Arg
1535 1540 1545
Ala Gly Asp Trp Val Ser Ile Thr Phe Gly Asp Tyr Glu Pro Thr
1550 1555 1560
Glu Tyr Asp Val Asp Ser Met Glu Ile His Trp Phe Ala Asp His
1565 1570 1575
Gly Thr Ser Tyr Pro Glu Arg Phe Gln Ile Glu Tyr Lys Ser Gly
1580 1585 1590
Asp Ser Trp Lys Glu Val Thr Ser Leu Lys Ser Asp Pro Ala Ser
1595 1600 1605
Pro Ala Leu Gly Lys Ala Asn Val Tyr Ser Phe Asp Arg Val Lys
1610 1615 1620
Thr Ser Ala Ile Arg Val Lys Met Thr Ala Gln Ala Gly Lys Ser
1625 1630 1635
Leu Ala Ile Thr Glu Leu Lys Val Phe Ser Lys Trp Pro Lys Ala
1640 1645 1650
Gly Thr Glu Pro Glu Val Thr Asp Ile Lys Val Gly Gly Lys Ser
1655 1660 1665
Ile Leu Glu Asp Phe Glu Gln Lys Gly Asp His Tyr Glu Val Thr
1670 1675 1680
Ile Asp Ala Gly Asp Ala Asn Val Met Pro Lys Ile Asn Val Lys
1685 1690 1695
Ala Lys Asp Gln Thr Ser Ile Thr Ile Val Pro Ala Val Thr Ser
1700 1705 1710
Pro Ser Thr Ala Lys Val Ile Ala Lys Ser Glu Asp Gly Lys Lys
1715 1720 1725
Val Lys Val Tyr Ser Ile His Tyr Lys
1730 1735
<210> 15
<211> 1025
<212> PRT
<213> 乳酸克鲁维酵母
<400> 15
Met Ser Cys Leu Ile Pro Glu Asn Leu Arg Asn Pro Lys Lys Val His
1 5 10 15
Glu Asn Arg Leu Pro Thr Arg Ala Tyr Tyr Tyr Asp Gln Asp Ile Phe
20 25 30
Glu Ser Leu Asn Gly Pro Trp Ala Phe Ala Leu Phe Asp Ala Pro Leu
35 40 45
Asp Ala Pro Asp Ala Lys Asn Leu Asp Trp Glu Thr Ala Lys Lys Trp
50 55 60
Ser Thr Ile Ser Val Pro Ser His Trp Glu Leu Gln Glu Asp Trp Lys
65 70 75 80
Tyr Gly Lys Pro Ile Tyr Thr Asn Val Gln Tyr Pro Ile Pro Ile Asp
85 90 95
Ile Pro Asn Pro Pro Thr Val Asn Pro Thr Gly Val Tyr Ala Arg Thr
100 105 110
Phe Glu Leu Asp Ser Lys Ser Ile Glu Ser Phe Glu His Arg Leu Arg
115 120 125
Phe Glu Gly Val Asp Asn Cys Tyr Glu Leu Tyr Val Asn Gly Gln Tyr
130 135 140
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145 150 155 160
Lys Tyr Val Ser Glu Gly Glu Asn Leu Val Val Val Lys Val Phe Lys
165 170 175
Trp Ser Asp Ser Thr Tyr Ile Glu Asp Gln Asp Gln Trp Trp Leu Ser
180 185 190
Gly Ile Tyr Arg Asp Val Ser Leu Leu Lys Leu Pro Lys Lys Ala His
195 200 205
Ile Glu Asp Val Arg Val Thr Thr Thr Phe Val Asp Ser Gln Tyr Gln
210 215 220
Asp Ala Glu Leu Ser Val Lys Val Asp Val Gln Gly Ser Ser Tyr Asp
225 230 235 240
His Ile Asn Phe Thr Leu Tyr Glu Pro Glu Asp Gly Ser Lys Val Tyr
245 250 255
Asp Ala Ser Ser Leu Leu Asn Glu Glu Asn Gly Asn Thr Thr Phe Ser
260 265 270
Thr Lys Glu Phe Ile Ser Phe Ser Thr Lys Lys Asn Glu Glu Thr Ala
275 280 285
Phe Lys Ile Asn Val Lys Ala Pro Glu His Trp Thr Ala Glu Asn Pro
290 295 300
Thr Leu Tyr Lys Tyr Gln Leu Asp Leu Ile Gly Ser Asp Gly Ser Val
305 310 315 320
Ile Gln Ser Ile Lys His His Val Gly Phe Arg Gln Val Glu Leu Lys
325 330 335
Asp Gly Asn Ile Thr Val Asn Gly Lys Asp Ile Leu Phe Arg Gly Val
340 345 350
Asn Arg His Asp His His Pro Arg Phe Gly Arg Ala Val Pro Leu Asp
355 360 365
Phe Val Val Arg Asp Leu Ile Leu Met Lys Lys Phe Asn Ile Asn Ala
370 375 380
Val Arg Asn Ser His Tyr Pro Asn His Pro Lys Val Tyr Asp Leu Phe
385 390 395 400
Asp Lys Leu Gly Phe Trp Val Ile Asp Glu Ala Asp Leu Glu Thr His
405 410 415
Gly Val Gln Glu Pro Phe Asn Arg His Thr Asn Leu Glu Ala Glu Tyr
420 425 430
Pro Asp Thr Lys Asn Lys Leu Tyr Asp Val Asn Ala His Tyr Leu Ser
435 440 445
Asp Asn Pro Glu Tyr Glu Val Ala Tyr Leu Asp Arg Ala Ser Gln Leu
450 455 460
Val Leu Arg Asp Val Asn His Pro Ser Ile Ile Ile Trp Ser Leu Gly
465 470 475 480
Asn Glu Ala Cys Tyr Gly Arg Asn His Lys Ala Met Tyr Lys Leu Ile
485 490 495
Lys Gln Leu Asp Pro Thr Arg Leu Val His Tyr Glu Gly Asp Leu Asn
500 505 510
Ala Leu Ser Ala Asp Ile Phe Ser Phe Met Tyr Pro Thr Phe Glu Ile
515 520 525
Met Glu Arg Trp Arg Lys Asn His Thr Asp Glu Asn Gly Lys Phe Glu
530 535 540
Lys Pro Leu Ile Leu Cys Glu Tyr Gly His Ala Met Gly Asn Gly Pro
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Gly Ser Leu Lys Glu Tyr Gln Glu Leu Phe Tyr Lys Glu Lys Phe Tyr
565 570 575
Gln Gly Gly Phe Ile Trp Glu Trp Ala Asn His Gly Ile Glu Phe Glu
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Asp Val Ser Thr Ala Asp Gly Lys Leu His Lys Ala Tyr Ala Tyr Gly
595 600 605
Gly Asp Phe Lys Glu Glu Val His Asp Gly Val Phe Ile Met Asp Gly
610 615 620
Leu Cys Asn Ser Glu His Asn Pro Thr Pro Gly Leu Val Glu Tyr Lys
625 630 635 640
Lys Val Ile Glu Pro Val His Ile Lys Ile Ala His Gly Ser Val Thr
645 650 655
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Asp Lys Asp Thr Gly Lys Thr Ile Asp Val Pro Ser Leu Lys Pro Glu
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705 710 715 720
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725 730 735
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740 745 750
Ser Ser Gly Leu His Phe Ile Leu Asp Lys Leu Leu Gly Lys Ile Glu
755 760 765
Ser Leu Lys Val Lys Gly Lys Glu Ile Ser Ser Lys Phe Glu Gly Ser
770 775 780
Ser Ile Thr Phe Trp Arg Pro Pro Thr Asn Asn Asp Glu Pro Arg Asp
785 790 795 800
Phe Lys Asn Trp Lys Lys Tyr Asn Ile Asp Leu Met Lys Gln Asn Ile
805 810 815
His Gly Val Ser Val Glu Lys Gly Ser Asn Gly Ser Leu Ala Val Val
820 825 830
Thr Val Asn Ser Arg Ile Ser Pro Val Val Phe Tyr Tyr Gly Phe Glu
835 840 845
Thr Val Gln Lys Tyr Thr Ile Phe Ala Asn Lys Ile Asn Leu Asn Thr
850 855 860
Ser Met Lys Leu Thr Gly Glu Tyr Gln Pro Pro Asp Phe Pro Arg Val
865 870 875 880
Gly Tyr Glu Phe Trp Leu Gly Asp Ser Tyr Glu Ser Phe Glu Trp Leu
885 890 895
Gly Arg Gly Pro Gly Glu Ser Tyr Pro Asp Lys Lys Glu Ser Gln Arg
900 905 910
Phe Gly Leu Tyr Asp Ser Lys Asp Val Glu Glu Phe Val Tyr Asp Tyr
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Pro Gln Glu Asn Gly Asn His Thr Asp Thr His Phe Leu Asn Ile Lys
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Asn Phe Lys Ile Ser Asp Glu Tyr Gly Val Asp Glu Ala Ala His Ala
965 970 975
Cys Asp Val Lys Arg Tyr Gly Arg His Tyr Leu Arg Leu Asp His Ala
980 985 990
Ile His Gly Val Gly Ser Glu Ala Cys Gly Pro Ala Val Leu Asp Gln
995 1000 1005
Tyr Arg Leu Lys Ala Gln Asp Phe Asn Phe Glu Phe Asp Leu Ala
1010 1015 1020
Phe Glu
1025

Claims (15)

1.一种乳产品，其包含总量为至少11wt％的原位产生的DP3+低聚半乳糖(GOS)，并且其中该原位产生的DP3+GOS构成总游离碳水化合物的至少35wt％。
2.如权利要求1所述的乳产品，其是重构乳粉如重构脱脂乳粉，浓缩乳如炼乳，或乳粉如脱脂乳粉。
3.如前述权利要求中任一项所述的乳产品，其包含至少40wt％，优选至少45wt％、至少50wt％、至少55wt％、至少57wt％或至少60wt％的干物质。
4.如前述权利要求中任一项所述的乳产品，其包含总量为至少10wt％的乳蛋白。
5.如前述权利要求中任一项所述的乳产品，其不包含添加的乳糖。
6.如前述权利要求中任一项所述的乳产品，其中总游离碳水化合物的至少50wt％，优选至少55wt％或至少60wt％是原位产生的DP2+GOS。
7.一种用于产生乳产品的方法，其包括：
(e)提供包含至少20wt％乳糖的乳底物，
(f)使该乳底物与具有转半乳糖基活性的酶接触至少45分钟，
(g)使该酶完全或部分失活，和
(h)由此获得乳产品，其中总游离碳水化合物的至少35wt％是原位产生的DP3+低聚半乳糖(GOS)。
8.如权利要求7所述的方法，其中该乳底物是重构乳粉如重构脱脂乳粉，或浓缩乳如炼乳。
9.如权利要求7-8中任一项所述的方法，其中该乳底物包含总量为至少10wt％的乳蛋白。
10.如权利要求7-9中任一项所述的方法，其中该乳底物不包含添加的乳糖。
11.如权利要求7-10中任一项所述的方法，其中该乳底物包含至少40wt％，优选至少45wt％、至少50wt％、至少55wt％或至少60wt％的干物质。
12.如权利要求7-11中任一项所述的方法，其中该乳产品中总游离碳水化合物的至少50wt％，优选至少55wt％、至少57wt％或至少60wt％是原位产生的DP2+GOS。
13.如权利要求7-12中任一项所述的方法，其中该具有转半乳糖基活性的酶是β-半乳糖苷酶，该β-半乳糖苷酶当使用13LAU(C)/g乳糖的酶浓度在50℃下在60％的脱脂乳粉溶液中24小时后测量时，其转半乳糖基活性与水解活性的比率为至少1，优选至少2、至少3或至少4。
14.如权利要求7-13中任一项所述的方法，其中该具有转半乳糖基活性的酶具有如下氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸1-1304至少50％，如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同并且具有900-1350个氨基酸，优选1300-1305个氨基酸、更优选1302或1304个氨基酸的长度。
15.一种可通过如权利要求7-14中任一项所述的方法获得的乳产品。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021155674A1 (zh) * 2020-02-07 2021-08-12 中国农业大学 一种沙质微泡菌β-半乳糖苷酶及其编码基因与应用
CN114214304A (zh) * 2021-10-20 2022-03-22 江南大学 GOS转化率提升的β-半乳糖苷酶突变体及其应用
CN114806906A (zh) * 2022-05-31 2022-07-29 江南大学 一株产中性乳糖酶的乳酸克鲁维酵母
CN115243550A (zh) * 2020-03-10 2022-10-25 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 乳糖降低的乳制品粉

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3624593A1 (en) * 2017-05-15 2020-03-25 Novozymes A/S Glycosylated beta-galactosidase compositions having improved transgalactosylating activity
CN111849940B (zh) * 2020-07-28 2022-03-25 量子高科(广东)生物有限公司 一种β-半乳糖苷酶的制备方法及其应用
WO2022148871A1 (en) * 2021-01-11 2022-07-14 Société des Produits Nestlé S.A. Dairy dessert product and method of preparation thereof
WO2022189568A2 (en) 2021-03-11 2022-09-15 Chr. Hansen A/S Fermented milk-based product comprising galacto-oligosaccharides and methods thereof
EP4101301A1 (de) 2021-06-08 2022-12-14 DMK Deutsches Milchkontor GmbH Verfahren zur herstellung von galactooligosacchariden
WO2023083971A1 (en) 2021-11-12 2023-05-19 Novozymes A/S Method for producing a dairy product
CN116250562A (zh) * 2021-12-01 2023-06-13 可口可乐公司 制备含低聚半乳糖且无乳糖的乳制品的方法及其乳制品
WO2023118436A1 (en) * 2021-12-22 2023-06-29 Novozymes A/S Method of producing a milk-based product
EP4249600A1 (de) 2022-03-24 2023-09-27 DMK Deutsches Milchkontor GmbH Galactooligosaccharid-zubereitungen mit gelförmiger konsistenz

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0458358A1 (en) * 1990-05-25 1991-11-27 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. Process for producing skim milk powder of high galacto-oligosaccharide content
JPH1118763A (ja) * 1997-07-03 1999-01-26 Yakult Honsha Co Ltd β−ガラクトシダーゼの改質方法
US20020086358A1 (en) * 2000-05-26 2002-07-04 Flemming Jorgensen Enzyme isolated from a Bifidobacterium
US20090297660A1 (en) * 2008-06-02 2009-12-03 Kraft Food Holdings, Inc. Cheese Products Containing Galacto-Oligosaccharides And Having Reduced Lactose Levels
WO2010098561A2 (ko) * 2009-02-24 2010-09-02 주식회사 제노포커스 고당전이 활성의 신규한 베타-갈락토시다제 및 그 용도
CN101831389A (zh) * 2010-04-19 2010-09-15 江南大学 一种产β-D-半乳糖苷酶的菌株及用该酶生产低聚半乳糖的方法
CN101932248A (zh) * 2007-12-03 2010-12-29 诺维信公司 产生乳制品的方法
US20110189342A1 (en) * 2010-02-01 2011-08-04 Jeong Hea-Seok High-purity galactooligosaccharides and uses thereof
CN104334720A (zh) * 2012-06-08 2015-02-04 杜邦营养生物科学有限公司 具有转半乳糖基化活性的多肽
CN104812908A (zh) * 2013-07-23 2015-07-29 新克莱玛有限公司 强化作为母乳成分的半乳糖乳糖的低聚半乳糖的制备方法
CN106455600A (zh) * 2014-03-06 2017-02-22 阿拉食品公司 含低聚半乳糖和单糖的减乳糖乳产品以及生产方法

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2431297C3 (de) 1974-06-27 1978-06-01 Tokyo Tanabe Co., Ltd., Tokio Biochemisches Verfahren zur Herstellung einer extrazellulären ß- Galactosidase, welche säureaktiv und säurestabil ist
US7317091B2 (en) * 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
FI20065593L (fi) 2006-09-26 2008-03-27 Valio Oy Menetelmä galakto-oligosakkarideja sisältävien tuotteiden valmistamiseksi ja niiden käyttö
CN101103743B (zh) 2007-08-07 2010-05-19 山东大学 一种含低聚半乳糖的低乳糖乳清粉的制备方法
TWI527522B (zh) 2010-08-13 2016-04-01 愛之味股份有限公司 製備富含半乳寡醣及低乳糖之易吸收乳製品之方法及以該方法製備之機能性乳製品
EP2526784A1 (en) 2011-05-24 2012-11-28 Nestec S.A. Milk oligosaccharide-galactooligosaccharide composition for infant formula containing the soluble oligosaccharide fraction present in milk, and having a low level of monosaccharides, and a process to produce the composition
US9840723B2 (en) * 2013-05-14 2017-12-12 Novozymes A/S Process for simultaneous saccharfication and fermentation of whey permeate
AU2014363517B2 (en) 2013-12-11 2018-06-28 International N&H Denmark Aps A method for preparing a dairy product having a stable content of galacto-oligosaccharide(s)
CN106061293A (zh) 2014-03-05 2016-10-26 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 液体乳糖酶组合物
KR20150116114A (ko) 2014-04-04 2015-10-15 농업회사법인 (주) 다미안 고순도 갈락토올리고당을 함유하는 변비개선용 요구르트 믹스 조성물
GB201419900D0 (en) * 2014-11-07 2014-12-24 Dupont Nutrition Biosci Aps Method
EP3624593A1 (en) * 2017-05-15 2020-03-25 Novozymes A/S Glycosylated beta-galactosidase compositions having improved transgalactosylating activity

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0458358A1 (en) * 1990-05-25 1991-11-27 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. Process for producing skim milk powder of high galacto-oligosaccharide content
JPH1118763A (ja) * 1997-07-03 1999-01-26 Yakult Honsha Co Ltd β−ガラクトシダーゼの改質方法
US20020086358A1 (en) * 2000-05-26 2002-07-04 Flemming Jorgensen Enzyme isolated from a Bifidobacterium
CN101932248A (zh) * 2007-12-03 2010-12-29 诺维信公司 产生乳制品的方法
US20090297660A1 (en) * 2008-06-02 2009-12-03 Kraft Food Holdings, Inc. Cheese Products Containing Galacto-Oligosaccharides And Having Reduced Lactose Levels
WO2010098561A2 (ko) * 2009-02-24 2010-09-02 주식회사 제노포커스 고당전이 활성의 신규한 베타-갈락토시다제 및 그 용도
US20110189342A1 (en) * 2010-02-01 2011-08-04 Jeong Hea-Seok High-purity galactooligosaccharides and uses thereof
CN101831389A (zh) * 2010-04-19 2010-09-15 江南大学 一种产β-D-半乳糖苷酶的菌株及用该酶生产低聚半乳糖的方法
CN104334720A (zh) * 2012-06-08 2015-02-04 杜邦营养生物科学有限公司 具有转半乳糖基化活性的多肽
CN104812908A (zh) * 2013-07-23 2015-07-29 新克莱玛有限公司 强化作为母乳成分的半乳糖乳糖的低聚半乳糖的制备方法
CN106455600A (zh) * 2014-03-06 2017-02-22 阿拉食品公司 含低聚半乳糖和单糖的减乳糖乳产品以及生产方法

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021155674A1 (zh) * 2020-02-07 2021-08-12 中国农业大学 一种沙质微泡菌β-半乳糖苷酶及其编码基因与应用
CN115243550A (zh) * 2020-03-10 2022-10-25 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 乳糖降低的乳制品粉
CN114214304A (zh) * 2021-10-20 2022-03-22 江南大学 GOS转化率提升的β-半乳糖苷酶突变体及其应用
CN114214304B (zh) * 2021-10-20 2023-07-18 江南大学 GOS转化率提升的β-半乳糖苷酶突变体及其应用
CN114806906A (zh) * 2022-05-31 2022-07-29 江南大学 一株产中性乳糖酶的乳酸克鲁维酵母
CN114806906B (zh) * 2022-05-31 2023-02-21 江南大学 一株产中性乳糖酶的乳酸克鲁维酵母

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