CN110592214A

CN110592214A - Pgm2l1基因在制备用于诊断卵巢癌的标记物中的用途及诊断试剂和治疗药物

Info

Publication number: CN110592214A
Application number: CN201910840936.8A
Authority: CN
Inventors: 王录美; 孙小波; 高金莉; 高慧; 邓双双
Original assignee: Shanghai East Hospital Tongji University Affiliated East Hospital
Current assignee: Shanghai East Hospital Tongji University Affiliated East Hospital
Priority date: 2019-09-06
Filing date: 2019-09-06
Publication date: 2019-12-20
Anticipated expiration: 2039-09-06
Also published as: CN110592214B

Abstract

本发明属于基因治疗和医学诊断领域，提供了PGM2L1基因在制备用于诊断卵巢癌的标记物中的用途，还提供了一种用于诊断卵巢癌的试剂或者试剂盒，所述的试剂为检测生物样品中PGM2L1基因表达量的试剂。还提供了一种用于抑制卵巢癌的药物，所述的药物为抑制PGM2L1基因表达量的物质siRNA、shRNA、基于PGM2L1基因抗原蛋白的肿瘤疫苗或抑制PGM2L1基因蛋白活性的蛋白质。本发明发现PGM2L1基因在卵巢癌细胞中特异性高表达，PGM2L1基因成为卵巢癌治疗中的药物靶点。本发明构建的RNA干扰序列对PGM2L1基因进行转录调控，可用于以PGM2L1基因为靶点的卵巢癌治疗。

Description

PGM2L1基因在制备用于诊断卵巢癌的标记物中的用途及诊断试剂和治疗药物

技术领域

本发明属于基因治疗和医学诊断领域，涉及PGM2L1基因，具体来说是PGM2L1基因在制备用于诊断卵巢癌的标记物中的用途及诊断试剂和治疗药物。

背景技术

卵巢癌(Ovarian Cancer)是妇科最常见并严重威胁妇女生命和健康的恶性肿瘤之一，易于转移和广泛播散，其发病率低于子宫颈癌和子宫内膜癌，居妇科恶性肿瘤第3位，但病死率却超过前两者之和，高居妇科癌症之首(Li,W.,et al.,MicroRNA-23b is anindependent prognostic marker and suppresses ovarian cancer progression bytargeting runt-related transcription factor-2.FEBS Lett,2014.588(9):p.1608-15.)。其发病十分隐匿，转移前常无症状，手术不能完全清除病灶，再加上术后化疗作用局限，术后复发率高、预后差，近年，全世界每年新发卵巢癌病例达20余万，死亡人数达14万(Torre,L.A.,et al.,Global cancer statistics,2012.CA Cancer J Clin,2015.65(2):p.87-108.)。卵巢恶性肿瘤组织类型繁多，其中上皮性卵巢癌(Epithelial OvarianCancer,EOC)最常见，约占80-90％(Gao,Y.,et al.,LncRNA-HOST2 regulates cellbiological behaviors in epithelial ovarian cancer through a mechanisminvolving microRNA let-7b.Hum Mol Genet,2015.24(3):p.841-52.)，是目前死亡率最高的妇科恶性肿瘤，高达70％。(Luesley,D.,et al.,Failure of second-looklaparotomy to influence survival in epithelial ovarian cancer.Lancet.1988,2(8611):599-603.)。

葡萄糖磷酸变位酶2样蛋白1(phosphoglucomutase 2-like 1,PGM2L1基因)的分子量为72kDa，与人类PGM2序列同源性约为60％。(Morino,H.,et al.,Phosphoglyceratesand protein phosphorylation:identification of a protein substrate as glucose-1,6-bisphosphate synthetase.J.Neurochem,1991.56(3):1049-57.)在磷酸葡萄糖醛酸酶家族中，围绕可磷酸化丝氨酸的高度保守的TASHNP基序中，PGM2L1基因蛋白不包含脯氨酸，而是包含精氨酸(Shackelford,G.S.,et al.,Evolutionary trace analysis of thealpha-D-phosphohexomutase superfamily.Protein Sci,2004.13(8):2130-8.)。PSORT(Horton,P.,et al.,Better prediction of protein cellular localization siteswith the k nearest neighbors classifier.Int.Conf.Intell.Syst.Mol.Biol,1997；5:147-52.)和Target P(Emanuelsson,O.,et al.,Predicting subcellular localizationof proteins based on their N-terminal amino acid sequence.J.Mol.Biol,2000.300(4):1005-16.)分析表明，人类PGM2L1基因的序列均不包含信号肽、线粒体前肽或核定位信号，是胞质蛋白。

PGM2L1基因(磷酸葡萄糖醛酸酶2-like 1)在大脑中特别丰富(Veiga-da-CunhaM.,et al.,Mammalian phosphomannomutase PMM1 is the brain IMP-sensitiveglucose-1,6-bisphosphatase.J Biol Chem,2008.283(49):33988-93.)是1,6-二磷酸葡萄糖合成酶，作为几个糖磷脂酶的辅助因子，也可能作为糖酵解酶的调节因子，以1,3-二磷酸甘油酸为磷酸供体，一系列1-磷酸糖(包括1-磷酸葡萄糖、1-磷酸甘露糖、1-磷酸核糖和1-磷酸脱氧核糖)为受体，催化合成1,6-二磷酸葡萄糖和其它醛二磷酸盐，其催化活性要比PGM2高5-20倍左右。而与PGM2相比，PGM2L1基因仅具有较低(<5％)的磷酸戊糖变位酶和磷酸葡萄糖变位酶活性。(Maliekal P.,et al.,Molecular identification of mammalianphosphopentomutase and glucose-1,6-bisphosphatesynthase,two members of thealpha-D-phosphohexomutase family.J Biol Chem,2007.282(44):31844-51.)PGM2L1基因转录的cDNA序列如SEQ ID NO:7所示，PGM2L1基因编码的蛋白序列如SEQ ID NO:8所示。

目前有关PGM2L1基因在卵巢癌方面的功能尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于寻找到能够有效用于卵巢癌诊断和治疗的一种特异性基因。

本发明的另一目的在于通过PGM2L1基因，寻找到制备卵巢癌诊断或治疗的药物。

本发明提供了PGM2L1基因在制备用于诊断卵巢癌的标记物中的用途，所述的PGM2L1基因的碱基序列如SEQ ID NO:7所示。

本发明提供了PGM2L1基因作为药物靶点在筛选治疗卵巢癌的药物中的应用，所述的PGM2L1基因的碱基序列如SEQ ID NO:7所示。

本发明提供了一种用于诊断卵巢癌的试剂或者试剂盒，所述的试剂为检测生物样品中PGM2L1基因表达量的试剂，所述的PGM2L1基因的碱基序列如SEQ ID NO:7所示。

进一步的，所述的检测生物样品中PGM2L1基因表达量的试剂选自：对PGM2L1基因具有检测特异性的探针、基因芯片、PCR引物或与PGM2L1基因蛋白特异性结合的抗体、多克隆抗体或单克隆抗体。

进一步的，所述的生物样品选自：获自对象的新鲜组织或细胞、福尔马林固定或石蜡包埋组织或细胞、血液或体液。

本发明提供了一种用于抑制卵巢癌的药物，所述的药物是指抑制PGM2L1基因表达量的物质。

进一步的，所述的抑制PGM2L1基因表达量的物质为siRNA、shRNA、基于PGM2L1基因抗原蛋白的肿瘤疫苗或抑制PGM2L1基因蛋白活性的蛋白质。

进一步的，所述的siRNA的序列如下：

正义链如SEQ ID NO:1所示；

反义链如SEQ ID NO:2所示。

进一步的，所述的siRNA的序列如下：

正义链如SEQ ID NO:3所示；

反义链如SEQ ID NO:4所示。

进一步的，所述的siRNA的序列如下：

正义链如SEQ ID NO:5所示；

反义链如SEQ ID NO:6所示。

本发明人在研究卵巢癌发生发展机制过程中发现PGM2L1基因是一种主要表达于卵巢癌细胞的基因，在其它癌组织、癌细胞中完全不表达或仅有少量表达，本发明首次发现了PGM2L1基因的功能及其应用价值。

OVCAR-3和SKOV-3均是卵巢癌细胞系，且OVCAR-3比SKOV-3恶性程度高，本发明采用Taq-Man荧光定量PCR研究发现：PGM2L1基因在卵巢癌细胞系中特异性高表达，且在恶性程度高的细胞系中呈高表达状态。另外，卵巢癌组织中PGM2L1基因的表达也远远高于卵巢癌癌旁组织。

进一步的，本发明应用RNA干扰技术来研究高表达基因功能，以PGM2L1基因的特异性siRNA干扰其表达，通过transwell和荷瘤实验研究该基因在卵巢癌细胞转移中的作用及其在卵巢癌治疗上的应用。

本发明经实验证明：

1.PGM2L1基因对卵巢癌细胞体外浸润能力的影响：将OVCAR-3细胞接种到6孔板中，24h后，用lipofectamine2000分别转染PGM2L1基因特异性siRNA和阴性对照siRNA，24h后分别将两组细胞用胰酶消化下来，1500rpm离心5min，去上清，PBS洗一遍，用无血清的培养液重悬细胞，计数，使用24-Well Cell Invasion Assay，在上室孔中准确接种OVCAR-3细胞，10⁵细胞/孔，48h后固定、染色、计数发现：穿膜的PGM2L1基因特异性siRNA干扰组细胞数量显著少于对照组。上述结果说明：PGM2L1基因可以显著地促进OVCAR-3细胞的体外浸润能力。

2.PGM2L1基因对卵巢癌细胞体内转移能力的影响：选择4-6周的雌性裸鼠，腹腔注射细胞，2×10⁵细胞/只，接种2周后，注射PGM2L1基因特异性siRNA进行治疗，治疗7-8周后处死小鼠，提取子宫、输卵管组织基因组，建立定量PCR方法，检测组织中人与小鼠β2-微球蛋白分子拷贝数之比，以此计为肿瘤细胞的卵巢癌转移率。统计结果显示：注射PGM2L1基因特异性siRNA的实验组小鼠转移率显著低于对照组。由此可知：PGM2L1基因可以显著地促进OVCAR-3细胞的体内转移能力。

3.收集角质细胞株Hacat，肝癌细胞系Hep3B，肺腺癌上皮细胞系A549，前列腺癌细胞系DU145，结肠癌细胞系HCT1116，乳腺癌细胞系MUF-7，卵巢癌细胞系OVCAR-3和SKOV-3以及一定数量的卵巢癌及癌旁组织样本，抽提RNA并反转录为cDNA。设计荧光定量PCR方法分析PGM2L1基因的表达水平，研究发现：PGM2L1基因在卵巢癌细胞系中特异性高表达，且在恶性程度高的OVCAR-3细胞系中表达水平高于恶性程度低的SKOV-3细胞系。另外，PGM2L1基因在卵巢癌组织中的表达水平远远高于卵巢癌癌旁组织。由此可见PGM2L1基因可以成为治疗卵巢癌尤其是卵巢细胞癌-较好的药物靶点，提高卵巢癌的靶向治疗水平。

因此，PGM2L1基因具有促进肿瘤细胞转移能力的作用，在卵巢癌细胞中特异性高表达，PGM2L1基因可以成为卵巢癌治疗，尤其是抗转移治疗中的药物靶点；我们所构建的RNA干扰序列可以在以PGM2L1基因为靶点的卵巢癌治疗中发挥有效作用；对PGM2L1基因进行转录调控，也可以用于卵巢癌生物治疗。

本发明首次发现了PGM2L1基因在卵巢癌细胞中的功能及其应用价值。本发明还进一步提供了PGM2L1基因在制备卵巢癌诊断或治疗药物中的应用。

附图说明

图1：不同癌细胞系中PGM2L1基因的含量检测；

图2：卵巢癌和癌旁组织中PGM2L1基因的含量检测；

图3：PGM2L1基因表达的RNA干扰分析。

图4：改变PGM2L1基因表达水平对OVCAR-3细胞穿膜的影响，其中右上图为阴性对照组细胞穿膜情况，右下图为转染PGM2L1基因特异性siRNA4的细胞穿膜情况，左边柱状图为两组细胞穿膜数统计结果。

图5：疑似EOC患者中手术确诊者和手术排除EOC者样本组织中PGM2L1基因的含量检测；

具体实施方式

现结合实施例和附图，对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。

本发明所用试剂和原料均市售可得或可按文献方法制备。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人《分子克隆：实验室指南》(NewYork：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

实施例1：

本发明收集角质细胞株Hacat，肝癌细胞系Hep3B，肺腺癌上皮细胞系A549，前列腺癌细胞系DU145，结肠癌细胞系HCT1116，乳腺癌细胞系MUF-7，卵巢癌细胞系OVCAR-3和SKOV-3以及一定数量的卵巢癌及癌旁组织样本，抽提RNA并反转录为cDNA，采用Real-timePCR方法分析PGM2L1基因的表达水平，具体方法如下：

1.采集样本及RNA抽提：

(1)样品收集

a、组织样本在上海长海医院病理科采集。剪取适量病人的卵巢癌和癌旁组织，PBS洗3遍，放入含1ml Trizol的离心管中，用匀浆机将组织匀浆，放置冰上15min。

b、细胞样本为本实验中心保存。6孔板中培养的细胞用PBS洗3遍，加入1ml Trizol裂解，移入1.5ml离心管中，放置冰上15min。

(2)每管加入200μl氯仿(三氯甲烷)，剧烈振荡摇晃混匀，静置冰上15min。12000g4℃离心20min，离心后样品分为三层，取上层无色水相，水相体积约为所用TRIzol体积的50-60％。

(3)加入等体积的异丙醇，轻轻摇匀5-6次，-20℃放置过夜。12000g 4℃离心20min，离心后在管侧和管底出现白色胶状沉淀。

(4)小心去上清，用DEPC处理的75℅乙醇(1ml/管)重悬RNA沉淀。12000g 4℃离心5min。重复该步骤1次。

(5)去上清，将留有沉淀的离心管开盖放置于超净台室温自然干燥，直至沉淀变成半透明状，干燥过程约5-10min。加入适量已温热过的DEPC水(约10-40μl)，冰上静置溶解10min，震荡混匀。

(6)取少量RNA(1.5-2.0μl)使用Eppendorf紫外分光光度仪测定OD值(OD260值)，RNA纯度为OD260/OD280＝1.8-2，以评估其浓度和质量。符合定量检测要求的样本进行下一步反应。

2.反转录成cDNA

取RNA 500ng为模板，用随机反转录引物进行反转录。使用TaKaRa反转录试剂，按照下列成分加入体系。以上步骤所用的tip头、EP管均经过DEPC水处理后高压灭菌。

3.PGM2L1基因的实时定量

采用TaKaRa公司的SYBR Premix Ex Taq^TM试剂和美国Applied Biosystems公司的：Step Plus One实时定量PCR仪，按照下述体系进行PCR反应：

Premix Ex Taq<sup>TM</sup>(2×)	10μl
		上游引物(10μM)	0.4μl(终浓度0.2μM)
下游引物(10μM)	0.4μl(终浓度0.2μM)
		ROX Reference Dye(50×)	0.4μl
反转录产物	1μl
		ddH<sub>2</sub>O	7.8μl
总体系	20μl

通过预实验确定PGM2L1基因引物的合适退火温度，最终确定以下条件：

本实验采用标准反转录产物倍比稀释法建立标准曲线，每20μl体系分别添加标准反转录产物2,1,0.5,0.25,0.125μl，每种浓度设立3个平行复管。

按照上述Real-time PCR条件，对前期制备的各样本的反转录产物进行检测。每批次PCR均设立标准曲线作为批次间参照，并依据标准曲线设立CT值阈值。每样本均做3个平行复管，取其平均值分析，每个PCR测定中都包括阴性(水)对照。为防止污染，所有反应均在专区的清洁实验台进行，模板添加和引物添加不在同区操作。为防止引物二聚体和非特异性扩增，所有反应均在冰上操作。

研究发现：PGM2L1基因在OVCAR-3和SKOV-3中高表达，并且OVCAR-3中PGM2L1基因的表达量高于SKOV-3中PGM2L1基因的表达量，而在角质细胞株Hacat、肺腺癌上皮细胞系A549和结肠癌细胞系HCT1116中低表达，在肝癌细胞系Hep3B，前列腺癌细胞系DU145和乳腺癌细胞系MUF-7中几乎不表达，说明PGM2L1基因在卵巢癌细胞系中特异性高表达，且在恶性程度高的细胞系中呈高表达状态(图1)。

另外，卵巢癌组织中PGM2L1基因的表达也远远高于卵巢癌癌旁组织(图2)。

实施例2：

1.siRNA(small interfering RNA)的设计：通过BLAST检索，在PGM2L1基因的特异性序列区域设计五对siRNA，如表1所示：

表1：siRNA的序列

上述序列中，3’端加TT是为了加强siRNA的稳定性。

利用RT-PCR证实：将siRNA转染OVCAR-3细胞(购自上海中科院细胞库)。转染方法：取对数生长的细胞，接种于培养板，加培养液，培养48h(细胞长至70-90％满)，按lipofectamine2000(invitrogen)说明书进行转染实验，24h后收RNA用Real-time PCR检测PGM2L1基因的表达情况。

结果：与阴性对照组相比，siRNA1、siRNA2及siRNA3干扰组的PGM2L1基因表达明显降低，siRNA2干扰效果最好(图3)。

实施例3：PGM2L1基因对肿瘤细胞体外浸润能力的影响

将OVCAR-3细胞接种到6孔板中，24h后，用lipofectamine2000分别转染PGM2L1基因特异性siRNA和阴性对照siRNA，24h后分别将两组细胞用胰酶消化下来，1500rpm离心5min，去上清，PBS洗一遍，用无血清的培养液重悬细胞，计数，使用24-Well Cell InvasionAssay，在上室孔中准确接种OVCAR-3细胞，10⁵细胞/孔，48h后固定、染色、计数发现：穿膜的PGM2L1基因特异性siRNA干扰组细胞数量显著少于对照组(图4)。

上述结果说明：PGM2L1基因可以显著地促进OVCAR-3细胞的体外浸润能力。

实施例4：PGM2L1基因对肿瘤细胞体内转移能力的影响

选择4-6周的雌性裸鼠，腹腔注射细胞，2×10⁵细胞/只，接种2周后，注射PGM2L1基因特异性siRNA进行治疗，治疗7-8周后处死小鼠，提取子宫、输卵管组织基因组，建立定量PCR方法，检测组织中人与小鼠β2-微球蛋白分子拷贝数之比，以此计为肿瘤细胞的卵巢癌转移率。

统计结果显示：注射PGM2L1基因特异性siRNA的实验组小鼠转移率显著低于对照组。由此可知：PGM2L1基因可以显著地促进OVCAR-3细胞的体内转移能力(表2)。

表2 PGM2L1基因低表达对OVCAR-3卵巢癌细胞转移的影响

实施例5：

免疫学手段是一种很有潜力的诊治恶性肿瘤的方法，也是近年来抗肿瘤研究热点之一，其首要目标在于确认肿瘤抗原，以有针对性地实施治疗。本发明采集同期收治入院的疑似EOC患者术后组织样本，共43例。待手术确诊后，43例患者中36例确诊为EOC，另外7例则为卵巢良性肿瘤。检测并比较36例EOC患者和7例卵巢良性肿瘤患者术后组织中PGM2L1基因的含量。

Real-time PCR结果发现，卵巢良性肿瘤组中PGM2L1基因的含量较低，但EOC组PGM2L1基因的表达高于卵巢良性肿瘤组约3.087倍(见图5)。

由此可见PGM2L1基因可以成为治疗卵巢癌尤其是卵巢细胞癌-较好的药物靶点，其严格的限制性分布为精确的卵巢癌免疫疗法提供了新的可能。

本发明阐述的是该基因在卵巢癌转移方面的重要功能及其与卵巢癌的相关性，足见PGM2L1基因具有有效的免疫原性和潜在的临床应用价值。首先，鉴于该基因在卵巢癌转移中的重要作用及其在卵巢癌细胞中特异性高表达，该基因可以作为人及其它哺乳动物的抗卵巢癌转移治疗的药物靶点，减少卵巢癌转移率，提高卵巢癌的治疗水平。其次，所构建的siRNA可以在以PGM2L1基因为靶点的卵巢癌治疗中发挥有效作用，并且PGM2L1基因特异性启动子也可用于卵巢癌的治疗。该基因还可以用来开发各种试剂或手段用于卵巢癌治疗。

以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可作出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。

序列表

<110> 上海市东方医院(同济大学附属东方医院)

<120> PGM2L1基因在制备用于诊断卵巢癌的标记物中的用途及诊断试剂和治疗药物

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

gcuccgcugg gauaagaaut t 21

<210> 2

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

auucuuaucc cagcggagct t 21

<210> 3

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gggaaacugg ugcucagaut t 21

<210> 4

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

aucugagcac caguuuccct t 21

<210> 5

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

cuaccguuaa auguccaaat t 21

<210> 6

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

uuuggacauu uaacgguagt t 21

<210> 7

<211> 8477

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 7

atctgggact gttgttctct cgcggcgcga ccgcctcagt cacttcgccc agagacccgg 60

acctggtccg ctggggagca ggcggccata aaccccctct ctcccggttc cctgacgccg 120

cggcaggagc tgttacaaac accctgcggt tggtctccga tgcccttcag tgaggtgggg 180

acgcctggac cctggtgagc gaaccccaag ccacccccca ccccaactca gtgtcttcgc 240

cggcccccgg cccgtacgcc tgtctggtcg ccatggctga aaacacagag ggggatctga 300

actccaacct gctccacgcc ccctaccaca ccggggaccc tcagctggac acggccatcg 360

ggcagtggct ccgctgggat aagaatccca aaacaaaaga gcagattgaa aacctgttac 420

ggaatgggat gaacaaggag ctgcgagatc gtctttgttg ccgaatgact tttgggactg 480

caggacttcg ttctgccatg ggggcagggt tttgctatat taatgacctt acagtaatac 540

agtcaacaca ggggatgtac aaataccttg agagatgttt ctcagacttc aagcagagag 600

gctttgtggt tgggtatgac actcggggtc aagtaactag cagctgcagc agccagaggc 660

ttgctaaact cactgctgca gtcttgctgg ccaaagatgt tcctgtgtac cttttttcaa 720

gatatgttcc tacacctttt gtaccatatg cagttcagaa gctcaaagca gttgcaggtg 780

tgatgattac tgcctctcac aaccgcaagg aagacaatgg atacaaggtt tactgggaaa 840

ctggtgctca gatcacatct cctcatgata aagaaattct aaaatgtata gaagaatgtg 900

tggaaccctg gaatggttcc tggaatgata atttagtgga taccagcccg ctgaagagag 960

accctctgca ggacatttgc aggagataca tggaagatct gaaaaagatc tgtttttaca 1020

gggagttaaa ctcgaagacc accttgaaat ttgtgcacac atcttttcat ggggtcggac 1080

atgactatgt gcagttggct tttaaagtgt ttggttttaa gcctccaatt ccagtaccag 1140

aacaaaaaga tcctgatcca gacttttcta ccgttaaatg tccaaatcct gaagaaggag 1200

aatctgtgct ggaactttcc ttgagactgg cagagaaaga aaatgcccgg gtagtgctag 1260

ccacagatcc tgatgcagac agactggcag cagcagaact tcaggagaat ggttgttgga 1320

aagttttcac agggaatgag ttggcagctt tgtttggatg gtggatgttt gattgctgga 1380

agaaaaataa atcaagaaat gctgatgtga agaacgttta tatgttagcc accacagtct 1440

cttctaaaat tctgaaggca attgcactta aagaaggatt tcattttgaa gaaacattac 1500

caggttttaa atggattgga agtaggataa tagacctcct ggaaaatggg aaagaagtcc 1560

tttttgcatt tgaagagtct attggttttc tctgtggaac ttcagttttg gataaagatg 1620

gggtgagtgc agctgttgtg gttgctgaga tggcatctta cctggaaacc atgaatataa 1680

cattgaaaca gcaactggtt aaggtttatg aaaaatatgg ttatcatatt tcaaaaactt 1740

cctatttctt gtgttatgaa ccacctacca tcaaaagtat atttgaaagg cttcgtaatt 1800

ttgattctcc aaaagaatat ccaaaatttt gtggaacatt tgctatattg catgtacggg 1860

acgttaccac tggatatgac agtagccagc ctaataagaa atcagtgctg cctgtgagta 1920

aaaacagcca aatgattaca tttacttttc aaaatggctg tgttgctacc cttcggacaa 1980

gtggaacaga accaaagata aagtattatg cagagatgtg tgcgtcacct gaccagagtg 2040

acactgcttt actggaggaa gaactgaaga aactcattga tgctctgata gagaattttc 2100

ttcagcctag taagaatgga ctgatctggc gttctgttta ggggtacacc aatatgtcat 2160

gacactgtgt gggcatatgg aacagagcaa ccgagaactg catacattga accttgtgtt 2220

agcattctct ctctatctca tctggccgag tatctttttc cttttatttt ctttcttttt 2280

ggtcaactgg ctagactaaa caaagtataa gtttgaaatg aaatggtcta gagggaaatg 2340

attcaaattt tttcataatt caaacaaaag ttattacact aaaagtatta tagtaacgta 2400

ttgtccttcc gttaacagaa acatcacaat tcaaaagtga gttttcttat tatagtgtga 2460

ttaagcctag ttctgtatct cgtaattgtg tatagcatgg taaaagaaaa aaaaaaagac 2520

aggtaaatgt tatataattg tagggttagt taaggaaatt agtccataaa attggcaaga 2580

aaatggtact ttccttgatt gttatgaaaa agtgtcattg tgacatcaca ggtattaatt 2640

tacaaattag agtatttgaa ataggatatt tagcatttct gtagtttaga acagatgtta 2700

cagtgtgtgg ttttggcatg tctgtttcag gtgcccttgg tgcagtataa atttactgta 2760

tgtatttaaa attctgatgt ttactgaaca taaaacaata gtggcaacac tcctattggc 2820

tttgttctta tcaaatttct cagtgccttc tcagggtctg gtgtgaacag aaaaaacagt 2880

gttcctgcat ttaccataat ttaatcagtc aatttgcaga tagctaagga aaatcttcca 2940

aaatctgtag gtgcttcctc tatatcaagt gagtttgctg attttaaaat cttaggaata 3000

taaataaaga tcttaataaa agcaagctta atgtagttaa ggatcttcat attagaattg 3060

tgtcatttat caaacctttt attacagaaa aaaatctgaa ctgagaaagg agctctgaat 3120

ttatttgaca gtctaacttt tgaattacat ttttgtaagt agatttattc ttttatttta 3180

tgaagtaatg ttaattttac taagaataaa acatccaaat tttaagtatt atgaaatact 3240

aaaactacat gttttaaaac agaggtccag tttattctaa catcttgctg acttctgtag 3300

aatttctgat tgcatgacta ttatttatct tcttttagtg tagaaaataa ttttttacaa 3360

aaagtcactt ttgggctggg cgcagtggct cacgcctgta atcccagcac tttgggaggc 3420

tgaggcaggt ggatcacaat gtcaggagtt tgagactagc ctggccaata tggtgaaacc 3480

ctgtctctac taaaaataca aaaattagcc gggtgtggtg gtgggcacct gtagtcccag 3540

ctactcggga ggctgaggca ggagaattgc ttgaacctag gaggctgaga ttgcagtgag 3600

ccgaaatcac gccactacac tccagcctgg gcaacagagg gagactccat ctcaaaaaaa 3660

aaaaaagtca cttttggcta atcatgcagt cttctgaaaa ggtttaatag agaaatgctg 3720

tttaggctgg gcttggtggc tcacatctgt aataccagcg ctttgggagg ctgaggcagg 3780

aggattgctt gaggccagga gtttaagtta cagaactatg atcacactgc cgcactgaag 3840

cctggatgac agagtgagac cttatctcaa aaaaaaaaaa aaaaagagag agagagagaa 3900

aaagaaatgc tgtgtttaat cttcttaaaa tgtatcttgt cctacatagt tctcagaata 3960

catatggggt atagttagga gataacaata acaagaccta aacaaattgc ttatgggaga 4020

tagcactgta attagagaat ttatttcata taaaataata atataaagtt tgaactgatt 4080

agaatgttcc ttaaatcatg gtttcgtttg ttgcagctgt cagctaacat ttggttgagc 4140

tcatataatc caaacctaat tgtccaacta ttgtattgcc actattgtta atttgttcct 4200

tccttacttt cttattgttg gatcttatat gactgtatga ctgtagataa tagacagcta 4260

gctaaatgta gagcaccatt tttctcaatg agtttgtttt caaaggcttt gcactggaga 4320

agatatgtgt agaatttttg ttttattttt aaaatgtgta aaacatcttt tgttttatat 4380

gcttttaaga atgtagattg taatttagga aatggcatat attctgcaaa gtggtataat 4440

gttgtatata tgaaaaacag gtatatttgg tttagttctg tgtttcagtg actgataaac 4500

aaaaatgaag ctaaaatgaa tcaacggctc attcatagtt actaaagcca tgtcatgact 4560

gtcattctat tatgaagaaa acagttttat ttgagtgctt taatataatg caacatttaa 4620

gtcatcttaa ggtgaaaagt tattgaagtg ttcttctctc aagttaacaa aattttacaa 4680

atgttcctga agtgtatcga ttgagggaat tattttattc tagcctgtca tgagtctgtc 4740

tgagcatgat acttaacatg aacttgatgt agtaggtgca catttgccta acaggataaa 4800

ttcagtgata gcccaagctg gtcaggagag acagaagtgc tggctaggag gtctcagcct 4860

cgggcactac aatgtttatc tttttctttt tgaacaatat tgtgaaaatg attgcattct 4920

cattgagcat gaaagtcaaa actggaattt tctaaagctt tggagaaaag gagagaatta 4980

gtagggcaag atcaaagcat acattggaaa taaacagtag aaataagcaa acaatataaa 5040

gagacacggg aaatgcttct cgtgaagggc aaatgtaaca ccataacagt agggaataaa 5100

ctgtgtccca cctgtttact tgtgtttatt tgttgttatg atgagtatgc acctaccatt 5160

ttcctttatt gtgatcacta aaatgaggcc aaggtttagg aggtgagaaa aagtatccct 5220

tttacggatt cagttcctgc taggatgttg tatcagaatc atgtgagaac tcaggaagag 5280

gtagagcaga aataaaaagg aagaaaatgt agattagaaa ataagacttc tgagaaaaag 5340

ttcaaggaat aaagattgtt tgactctgga gaggagaaag ctgttgagat agtttgctaa 5400

gtttgctaat aaagctttat tgagtctttt attgaagggt tcaaagtaag aaatactatg 5460

ccatagtgtt ctccatctct agtgaagaca gaaccagagg gaataaggat ctttttttta 5520

aagacagcat ggaaagttta agatttagga acttcttgag aaatcttcat aatatcttct 5580

attcaaaatc ttttttttat ttttaaggga ataaaaattt taaaaattaa gagatataca 5640

gatgactttt taagggtcct tctttccagc acattttttt taaaaactca ggttagaaca 5700

aaaatgtcat aaagggcact aaaagtaaca tttgggtttc actccatatc tagaagaatt 5760

tagctcacaa aacaattttt gtgtgttttg agtaactgat gcataagtgc aatgaataat 5820

tttcctgctt cactgttatt tttaatttaa cctggcaaat taagtgagac ttgaacaaaa 5880

ttttgttcat cttgaagaat gtatagtggc ttaggttatt tgaggttttc gttttgaata 5940

tatatgttgt tattttgatg tagatacgtt agcagatgga gaggttctaa gagattggat 6000

actttggaat gtctttatat aggaaataga cctcccattt cttaagcaag ttgcttctgg 6060

aattgatgca acagggatat tagctgtagt ttaatggata agttgttcta tgagctgctg 6120

ctatcagtac ttttttccac attttccatt gatatttgtg atgcttgaaa aatccaaact 6180

tcacttggat acatttaatt ttatgccttt ttctctctac ctcccacttt tcctaggcac 6240

ccttgcacat tttgttactg tgaaggacta ttgccctgtt acctcactga taagaaatct 6300

caactgtatt cattcagaat gctttaagct tagtcataaa ctacatttgc ctatggacct 6360

ttggttattt tgttaatgtt gtcattatat ttaagactta ttgtaggaag taattttaaa 6420

tctatttcat aacctgtttt gatctgtctg catactgcta tatgttaatt tattacggcc 6480

ttttacaatt cacttgtcat ctgagattgt tctagaaact gatgaggaaa gagtcgtact 6540

aaccaaaatg aatgggcaat tgacataaca ttctatttca ggtttccttg tacttgggga 6600

gccaaagcac aagatctaag gaaatcttat tcacatttgt ccctcagagc atcttaccct 6660

aagccataga ggtataaata gtaagatgag aattgctcat tgtctgactc cttgcacagc 6720

atgaatttaa ttctagttgg aaacaaagtt agtgttgact actggttacc ttaaagtatt 6780

caccatacta tatatttatt agaccatctt tcctctttgt ttattcaaga ctatgtactt 6840

ataaaagaga acctataaga atgtgtagag tgaccaaata gggacaaagt gacataccta 6900

gagtttgctg ctcaaatttt tccactagcg taaccctaaa gcagaggggc atgatgaagg 6960

gggaaggggt tctgagagca aaatcagaat cagcctacca ctgacatgaa gtgtgttctg 7020

tctttaaaat gtaagtgaat tttgcattct ttataataaa acttttaata taaaaatgat 7080

atgtttaatc tttactgaaa cttatgccac cacaaaggag caccatgttc atcacgtggc 7140

tgctcagttt tctcccccag tgccctcacc cccagtggag gcaagtcctt gagctacaca 7200

cactggctgt agtgcaagat atataaacat aggccgggct cggtggctca tgcctgtaat 7260

cctagcactt tgggaggccg aagcaggtgg atcatctgag gtcgggagat tgagactagc 7320

ctgaccgaca tggagaaacc ctgtgtccac taaaaataca aaattagccg ggtgtggtgg 7380

cacatgcctg taatcccagc tactcgggag gctgaggcag gagaatcact tgaacccagg 7440

aggtggaggt tgtggtgagc caagatcgcg ccgttgcact ccagcctggg caacaagagt 7500

gaaactccat ctcaaaaaaa aaaaaaaaag atatataaac atagaacata tccagactat 7560

ttcctgccct tggaatctga ccttcagaag gattaatgcc aaactaaact gacctgaaac 7620

agttttgtta ctattggcat tccttgacta aaaaggacca cctgatgctc agtcccgaga 7680

gtaggaatcg tggtttatta tttttcatat ccataccacc tagttcagta cctgttatag 7740

agtgtttaat tgctgatact aggaattaag ggatttttta aaagtagcaa atagtttaag 7800

gaacaatcaa aaaatgaatt ttctaattca gttttttcaa tgaagtccca tcactgaact 7860

ttataatgta atgtttatta agcagacatc cccttaaata ctcagtttct ttggagagag 7920

caaagcatat ctctctgtgg aaattatata taatgcctgg tattttacac tcaaagcaag 7980

gtgttggcca ggaaggtaaa gaaatggtgt ctatgtagac ttaatatcac tagtctaagt 8040

gtcattttga gcctagtagc actaccttcc aagtgagtca caacaaattt gatcctattt 8100

ggtatgtttt tgtccactgt tatgattcat catgtatctt acaagagcca ctcaagcaag 8160

actctgcttc tatgtatggt gaggccttgt tgttctaggc tagaataaac tctttgtatg 8220

cctcattgaa tatgccaggt aaaatttatg cagtcaagaa tgaattattt ttctgactaa 8280

agtgtgtagc agtagttcaa aattgtgccc ttgttttaac agtttctgtc aacatcttct 8340

catttttccc tacaaaaaca ccagggtgta ttataagtac tgcctgtgag aatttgcact 8400

ttatgtattt gtgtgtggat ttcttgtggt tttagccaaa tgaagtgtta tcagtaataa 8460

acaggtctct tcatagg 8477

<210> 8

<211> 622

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 8

Met Ala Glu Asn Thr Glu Gly Asp Leu Asn Ser Asn Leu Leu His Ala

1 5 10 15

Pro Tyr His Thr Gly Asp Pro Gln Leu Asp Thr Ala Ile Gly Gln Trp

20 25 30

Leu Arg Trp Asp Lys Asn Pro Lys Thr Lys Glu Gln Ile Glu Asn Leu

35 40 45

Leu Arg Asn Gly Met Asn Lys Glu Leu Arg Asp Arg Leu Cys Cys Arg

50 55 60

Met Thr Phe Gly Thr Ala Gly Leu Arg Ser Ala Met Gly Ala Gly Phe

65 70 75 80

Cys Tyr Ile Asn Asp Leu Thr Val Ile Gln Ser Thr Gln Gly Met Tyr

85 90 95

Lys Tyr Leu Glu Arg Cys Phe Ser Asp Phe Lys Gln Arg Gly Phe Val

100 105 110

Val Gly Tyr Asp Thr Arg Gly Gln Val Thr Ser Ser Cys Ser Ser Gln

115 120 125

Arg Leu Ala Lys Leu Thr Ala Ala Val Leu Leu Ala Lys Asp Val Pro

130 135 140

Val Tyr Leu Phe Ser Arg Tyr Val Pro Thr Pro Phe Val Pro Tyr Ala

145 150 155 160

Val Gln Lys Leu Lys Ala Val Ala Gly Val Met Ile Thr Ala Ser His

165 170 175

Asn Arg Lys Glu Asp Asn Gly Tyr Lys Val Tyr Trp Glu Thr Gly Ala

180 185 190

Gln Ile Thr Ser Pro His Asp Lys Glu Ile Leu Lys Cys Ile Glu Glu

195 200 205

Cys Val Glu Pro Trp Asn Gly Ser Trp Asn Asp Asn Leu Val Asp Thr

210 215 220

Ser Pro Leu Lys Arg Asp Pro Leu Gln Asp Ile Cys Arg Arg Tyr Met

225 230 235 240

Glu Asp Leu Lys Lys Ile Cys Phe Tyr Arg Glu Leu Asn Ser Lys Thr

245 250 255

Thr Leu Lys Phe Val His Thr Ser Phe His Gly Val Gly His Asp Tyr

260 265 270

Val Gln Leu Ala Phe Lys Val Phe Gly Phe Lys Pro Pro Ile Pro Val

275 280 285

Pro Glu Gln Lys Asp Pro Asp Pro Asp Phe Ser Thr Val Lys Cys Pro

290 295 300

Asn Pro Glu Glu Gly Glu Ser Val Leu Glu Leu Ser Leu Arg Leu Ala

305 310 315 320

Glu Lys Glu Asn Ala Arg Val Val Leu Ala Thr Asp Pro Asp Ala Asp

325 330 335

Arg Leu Ala Ala Ala Glu Leu Gln Glu Asn Gly Cys Trp Lys Val Phe

340 345 350

Thr Gly Asn Glu Leu Ala Ala Leu Phe Gly Trp Trp Met Phe Asp Cys

355 360 365

Trp Lys Lys Asn Lys Ser Arg Asn Ala Asp Val Lys Asn Val Tyr Met

370 375 380

Leu Ala Thr Thr Val Ser Ser Lys Ile Leu Lys Ala Ile Ala Leu Lys

385 390 395 400

Glu Gly Phe His Phe Glu Glu Thr Leu Pro Gly Phe Lys Trp Ile Gly

405 410 415

Ser Arg Ile Ile Asp Leu Leu Glu Asn Gly Lys Glu Val Leu Phe Ala

420 425 430

Phe Glu Glu Ser Ile Gly Phe Leu Cys Gly Thr Ser Val Leu Asp Lys

435 440 445

Asp Gly Val Ser Ala Ala Val Val Val Ala Glu Met Ala Ser Tyr Leu

450 455 460

Glu Thr Met Asn Ile Thr Leu Lys Gln Gln Leu Val Lys Val Tyr Glu

465 470 475 480

Lys Tyr Gly Tyr His Ile Ser Lys Thr Ser Tyr Phe Leu Cys Tyr Glu

485 490 495

Pro Pro Thr Ile Lys Ser Ile Phe Glu Arg Leu Arg Asn Phe Asp Ser

500 505 510

Pro Lys Glu Tyr Pro Lys Phe Cys Gly Thr Phe Ala Ile Leu His Val

515 520 525

Arg Asp Val Thr Thr Gly Tyr Asp Ser Ser Gln Pro Asn Lys Lys Ser

530 535 540

Val Leu Pro Val Ser Lys Asn Ser Gln Met Ile Thr Phe Thr Phe Gln

545 550 555 560

Asn Gly Cys Val Ala Thr Leu Arg Thr Ser Gly Thr Glu Pro Lys Ile

565 570 575

Lys Tyr Tyr Ala Glu Met Cys Ala Ser Pro Asp Gln Ser Asp Thr Ala

580 585 590

Leu Leu Glu Glu Glu Leu Lys Lys Leu Ile Asp Ala Leu Ile Glu Asn

595 600 605

Phe Leu Gln Pro Ser Lys Asn Gly Leu Ile Trp Arg Ser Val

610 615 620

Claims

1.PGM2L1基因在制备用于诊断卵巢癌的标记物中的用途，所述的PGM2L1基因的碱基序列如SEQ ID NO:7所示。

2.PGM2L1基因作为药物靶点在筛选治疗卵巢癌的药物中的应用，所述的PGM2L1基因的碱基序列如SEQ ID NO:7所示。

3.一种用于诊断卵巢癌的试剂或者试剂盒，其特征在于，所述的试剂为检测生物样品中PGM2L1基因表达量的试剂，所述的PGM2L1基因的碱基序列如SEQ ID NO:7所示。

4.根据权利要求3所述的一种用于诊断卵巢癌的试剂或者试剂盒，其特征在于，所述的检测生物样品中PGM2L1基因表达量的试剂选自：对PGM2L1基因具有检测特异性的探针、基因芯片、PCR引物或与PGM2L1基因蛋白特异性结合的抗体、多克隆抗体或单克隆抗体。

5.根据权利要求3所述的一种用于诊断卵巢癌的试剂或者试剂盒，其特征在于，所述的生物样品选自：获自对象的新鲜组织或细胞、福尔马林固定或石蜡包埋组织或细胞、血液或体液。

6.一种用于抑制卵巢癌的药物，其特征在于，所述的药物是指抑制PGM2L1基因表达量的物质。

7.根据权利要求6所述的一种用于抑制卵巢癌的药物，其特征在于，所述的抑制PGM2L1基因表达量的物质为siRNA、shRNA、基于PGM2L1基因抗原蛋白的肿瘤疫苗或抑制PGM2L1基因蛋白活性的蛋白质。

8.根据权利要求7所述的一种用于抑制卵巢癌的药物，其特征在于，所述的siRNA的序列如下：

正义链如SEQ ID NO:1所示；

反义链如SEQ ID NO:2所示。

9.根据权利要求7所述的一种用于抑制卵巢癌的药物，其特征在于，所述的siRNA的序列如下：

正义链如SEQ ID NO:3所示；

反义链如SEQ ID NO:4所示。

10.根据权利要求7所述的一种用于抑制卵巢癌的药物，其特征在于，所述的siRNA的序列如下：

正义链如SEQ ID NO:5所示；

反义链如SEQ ID NO:6所示。