CN113234827B - eEF-2K蛋白及其编码基因在肝脏肿瘤诊断治疗中的应用 - Google Patents

eEF-2K蛋白及其编码基因在肝脏肿瘤诊断治疗中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113234827B
CN113234827B CN202110533581.5A CN202110533581A CN113234827B CN 113234827 B CN113234827 B CN 113234827B CN 202110533581 A CN202110533581 A CN 202110533581A CN 113234827 B CN113234827 B CN 113234827B
Authority
CN
China
Prior art keywords
eef
gene
protein
leu
glu
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110533581.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113234827A (zh
Inventor
杨鹏辉
余灵祥
孙芳
雷光林
严锦
张绍庚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fifth Medical Center of PLA General Hospital
Original Assignee
Fifth Medical Center of PLA General Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fifth Medical Center of PLA General Hospital filed Critical Fifth Medical Center of PLA General Hospital
Priority to CN202110533581.5A priority Critical patent/CN113234827B/zh
Publication of CN113234827A publication Critical patent/CN113234827A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113234827B publication Critical patent/CN113234827B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/11—Protein-serine/threonine kinases (2.7.11)
    • C12Y207/1102—Elongation factor 2 kinase (2.7.11.20), i.e. eEF-2K
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/91—Transferases (2.)
    • G01N2333/912—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/04—Screening involving studying the effect of compounds C directly on molecule A (e.g. C are potential ligands for a receptor A, or potential substrates for an enzyme A)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Virology (AREA)

Abstract

本发明公开了eEF‑2K蛋白及其编码基因在肝脏肿瘤诊断治疗中的应用。本发明还提供了用于抑制eEF‑2K基因表达的物质和/或用于降低eEF‑2K蛋白水平的物质和/或用于抑制eEF‑2K蛋白活性的物质在制备产品中的应用。本发明还保护用于检测eEF‑2K基因的物质和/或用于检测eEF‑2K蛋白的物质在制备诊断或辅助诊断肿瘤的产品中的应用。本发明的发明人发现，eEF‑2K蛋白及其编码基因在肝癌患者肿瘤组织和血浆中高表达，抑制eEF‑2K基因表达可以抑制癌细胞的增殖和侵袭，本发明为肝脏肿瘤的个性化治疗提供了新途径。

Description

eEF-2K蛋白及其编码基因在肝脏肿瘤诊断治疗中的应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及eEF-2K蛋白及其编码基因在肝脏肿瘤诊断治疗中的应用。
背景技术
原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)(以下简称肝癌)是全球最常见的恶性肿瘤之一，发现时大多数患者已处于中、晚期，死亡率和复发率高、预后差。由于肝癌的高发病率和高死亡率，肝癌在世界范围内都被尤为重视，已成为全球性的、严峻的公共卫生问题。目前包括手术切除、消融、分子靶向、综合治疗等常规治疗手段在临床上已初见成效，但效果往往不尽人意。
肝癌的发生和发展是一个复杂的生物学过程。除了病人自身易感的遗传因素之外，各种细胞外因素可导致肝干细胞的异常增殖和分化，并最终导致肝癌的发生和发展。快速增殖与转移是肝癌重要的生物学特点之一，肝癌的快速增殖与转移是导致许多肝癌患者预后较差，5年生存率低的重要因素之一。因此，研究导致肝癌快速增殖与转移的原因，揭示肝癌发病的分子机制对提高肝癌患者预后有着极其重要的作用。
真核延伸因子2激酶(eEF-2K)是非典型α激酶家族的成员，是蛋白质合成的进化保守调节剂。该激酶使eEF-2磷酸化，eEF-2是一种100kDa的蛋白质，可促进核糖体从A到P位的转运，该反应在翻译过程中诱导mRNA沿着核糖体移动。eEF-2K使Thr56上的eEF-2磷酸化，并通过降低延伸因子对核糖体的亲和力终止肽的延伸。eEF-2K的结构域如图1。氨基末端既包含钙调蛋白结合域(aa 51-96)，又包含激酶的催化域。羧基末端包含eEF-2靶向域，这是一个独特的区域，可识别eEF-2，并将底物呈递给氨基末端叶内所含的催化域。Kuriyan团队报告了ChaK催化结构域的晶体结构，该结构具有激酶活性的瞬时受体蛋白通道。eEF-2K的克隆和测序结果显示了其独特的特征，包括磷酸化α螺旋内丝氨酸和苏氨酸残基的能力以及与细菌组氨酸激酶具有序列同源性的催化域。
发明内容
本发明的目的是提供eEF-2K蛋白及其编码基因在肝脏肿瘤诊断治疗中的应用。
本发明提供了eEF-2K基因或eEF-2K蛋白作为靶点在筛选肿瘤药物中的应用。
所述筛选肿瘤药物的方法包括如下步骤：(1)采用候选物质处理表达和/或含有所述eEF-2K基因的体系；设置不采用候选物质处理的平行对照；(2)完成步骤(1)后，检测体系中所述eEF-2K基因的表达水平；与平行对照相比，如果采用候选物质处理的体系中所述eEF-2K基因的表达量显著降低(降低20％以上，较加降低50％以上，更加降低80％以上)、所述候选物质可作为候选的肿瘤药物。
所述筛选肿瘤药物的方法包括如下步骤：(1)采用候选物质处理表达和/或含有所述eEF-2K蛋白的体系；设置不采用候选物质处理的平行对照；(2)完成步骤(1)后，检测体系中所述eEF-2K蛋白的水平和/或活性；与平行对照相比，如果采用候选物质处理的体系中所述eEF-2K蛋白的水平和/或活性显著降低(降低20％以上，较加降低50％以上，更加降低80％以上)、所述候选物质可作为候选的肿瘤药物。
所述体系可为细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。
本发明还提供了用于抑制eEF-2K基因表达的物质和/或用于降低eEF-2K蛋白水平的物质和/或用于抑制eEF-2K蛋白活性的物质在制备产品中的应用。
本发明还提供了一种产品，其活性成分为用于抑制eEF-2K基因表达的物质和/或用于降低eEF-2K蛋白水平的物质和/或用于抑制eEF-2K蛋白活性的物质。
用于抑制eEF-2K基因表达的物质具体可为siRNAl或siRNA2。
本发明还保护siRNAl。
本发明还保护siRNA2。
本发明还保护siRNAl或siRNA2在制备产品中的应用。
本发明还保护一种产品，其活性成分为siRNAl或siRNA2。
以上任一所述siRNAl由正义链1和反义链1组成；所述正义链1如序列表的序列5所示；所述反义链1由序列表的序列6所示。
以上任一所述siRNA2由正义链2和反义链2组成；所述正义链2如序列表的序列7所示；所述反义链2由序列表的序列8所示。
以上任一所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：
(a1)抑制癌细胞增殖；
(a2)促进癌细胞凋亡；
(a3)抑制癌细胞转移；
(a4)抑制癌细胞扩散；
(a5)抑制肿瘤转移；
(a6)抑制肿瘤扩散；
(a7)治疗肿瘤。
本发明还保护eEF-2K基因或eEF-2K蛋白作为靶点在筛选诊断或辅助诊断肿瘤的产品中的应用。
本发明还保护用于检测eEF-2K基因的物质和/或用于检测eEF-2K蛋白的物质在制备诊断或辅助诊断肿瘤的产品中的应用。
本发明还保护一种诊断或辅助诊断肿瘤的产品，包括用于检测eEF-2K基因的物质和/或用于检测eEF-2K蛋白的物质。
所述产品还包括记载有特定方法的载体。
所述特定方法包括如下步骤：
(1)检测供试样本的eEF-2K基因表达水平；所述供试样本分别为待测者的离体样本或健康对照者的离体样本；
(2)与所述健康对照者相比，如果所述待测者的离体样本中eEF-2K基因表达水平上调，则所述待测者为或候选为肿瘤患者，反之则所述待测者不为或候选不为肿瘤患者。
检测供试样本的eEF-2K基因表达水平的方法具体可为：提取总RNA并反转录为cDNA，以cDNA为模板采用qPCR检测eEF-2K基因表达水平(内参基因具体可为GAPDH基因)。qPCR检测eEF-2K基因具体采用特异引物对。
示例性的，所述离体样本可为血液样本，例如血浆。
所述特定方法包括如下步骤：
(1)检测供试样本的eEF-2K蛋白水平；所述供试样本分别为待测者的离体样本或健康对照者的离体样本；
(2)与所述健康对照者相比，如果所述待测者的离体样本中eEF-2K蛋白水平上调，则所述待测者为或候选为肿瘤患者，反之则所述待测者不为或候选不为肿瘤患者。
所述特定方法包括如下步骤：
(1)检测供试组织的eEF-2K基因表达水平；所述供试组织分别为同一待测者的疑似肿瘤组织或该疑似肿瘤组织以外的其他正常组织；
(2)与所述正常组织相比，如果所述疑似肿瘤组织中eEF-2K基因表达水平上调，则所述待测者为或候选为肿瘤患者，反之则所述待测者不为或候选不为肿瘤患者。
所述特定方法包括如下步骤：
(1)检测供试组织的eEF-2K蛋白水平；所述供试组织分别为同一待测者的疑似肿瘤组织或该疑似肿瘤组织以外的其他正常组织；
(2)与所述正常组织相比，如果所述疑似肿瘤组织中eEF-2K蛋白水平上调，则所述待测者为或候选为肿瘤患者，反之则所述待测者不为或候选不为肿瘤患者。
以上任一所述用于检测eEF-2K基因的物质具体可为特异引物对。
本发明还保护特异引物对。
以上任一所述特异引物对由序列表的序列3所示的单链DNA分子和序列表的序列4所示的单链DNA分子组成。
以上任一所述肿瘤为肝脏肿瘤。
以上任一所述肿瘤为肝癌。
以上任一所述肿瘤细胞为肝脏肿瘤细胞。
以上任一所述癌细胞为肝癌细胞。
以上任一所述eEF-2K蛋白为人eEF-2K蛋白。
以上任一所述eEF-2K蛋白是如下(bl)或(b2)：
(bl)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(b2)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺夫和/或添加且具有相同功能的由序列1衍生的蛋白质。
eEF-2K基因即编码eEF-2K蛋白的基因。
以上任一所述eEF-2K基因为人eEF-2K基因。
以上任一所述eEF-2K基因为如下(c1)或(c2)或(c3)：
(c1)编码区如序列表的序列2中第479-2656位核苷酸所示的DNA分子；
(c2)序列表的序列2所示的DNA分子；
(c3)与(c1)或(c2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码eEF-2K蛋白的DNA分子。
本发明的发明人经过大量研究发现，eEF-2K蛋白及其编码基因在肝脏肿瘤患者肿瘤组织和血浆中高表达，这一发现提示通过研究eEF-2K蛋白及其编码基因的生物学功能及其在疾病中的调控机制，能够更全面的理解肝脏肿瘤的发生机理，寻找新的肝脏肿瘤诊断标志物以及治疗靶点。本发明的发明人进一步发现，抑制eEF-2K基因表达可以抑制癌细胞增殖、促进癌细胞凋亡、抑制癌细胞转移、抑制癌细胞扩散。本发明为肝脏肿瘤的个性化治疗提供了新途径。
附图说明
图1为eEF-2K的结构域示意图。
图2为实施例2的结果图(肝癌患者的癌组织及癌旁组织)。
图3为实施例2的结果图(乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织)。
图4为实施例2的结果图(胃癌患者的癌组织及癌旁组织)。
图5为实施例3的结果图。
图6为实施例4的结果图。
图7为实施例5的结果图。
图8为实施例6的结果图。
图9为实施例7的结果图。
图10为实施例8的结果图。
图11为实施例9的结果图。
图12为实施例10的结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。如无特殊说明，实施例中的6孔板均采用2ml的培养体系。
在本发明的具体实施例中，实验都是按照至少重复3次来完成的，结果数据都是以平均值±标准差的方式来表示，采用SPSS 20.0统计软件来进行统计分析，两者之间的差异采用t检验，认为当P<0.05时具有统计学意义。
实施例1、标志物的筛选
收集20例肝癌患者的癌组织及配对癌旁组织(均为解放军总医院临床确诊患者，患者均知情同意，上述所有标本的取得均通过组织伦理委员会的同意)，通过二代测序分析，发掘差异性基因，发现eEF-2K基因在肝癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织。
人cDNA中的eEF-2K基因如序列表的序列2所示(其中第479-2656位为编码区)。eEF-2K基因编码的蛋白质(eEF-2K蛋白)如序列表的序列1所示。
实施例2、eEF-2K基因差异表达验证
一、肝癌患者的癌组织及癌旁组织eEF-2K基因差异表达验证
1、收集96例肝癌患者的癌组织及癌旁组织(均为解放军总医院临床确诊患者，患者均知情同意，上述所有标本的取得均通过组织伦理委员会的同意)。
2、取步骤1的组织，提取总RNA并反转录为cDNA。
3、以步骤2得到的cDNA为模板，采用qPCR的方法检测eEF-2K基因的表达情况(内参基因为GAPDH基因)。
用于检测eEF-2K基因的引物如下：
F1(序列表的序列3)：5’-ATGGCAGACGAAGATCTCATCTTCCGCCTGGAA-3’；
R1(序列表的序列4)：5’-TTACTCCTCCATCTGGGCCCAGGCCTCTT-3’。
用于检测GAPDH基因的引物如下：
F2：5’-GGTGGTCTCCTCTGACTTCAACA-3’；
R2：5’-GTTGCTGTAGCCAAATTCGTTGT-3’。
结果见图2。结果表明，与癌旁组织相比，eEF-2K基因在肝癌组织中表达水平上调，差异具有统计学意义(P<0.001)。
二、乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织eEF-2K基因差异表达验证
1、收集98例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织(均为解放军总医院临床确诊患者，患者均知情同意，上述所有标本的取得均通过组织伦理委员会的同意)。
2、取步骤1的组织，提取总RNA并反转录为cDNA。
3、以步骤2得到的cDNA为模板，采用qPCR的方法检测eEF-2K基因的表达情况(内参基因为GAPDH基因)。
方法同步骤一的3。
结果见图3。结果表明，与癌旁组织相比，eEF-2K基因在乳腺癌组织中表达水平无显著差异。
三、胃癌患者的癌组织及癌旁组织eEF-2K基因差异表达验证
1、收集82例胃癌患者的癌组织及癌旁组织(均为解放军总医院临床确诊患者，患者均知情同意，上述所有标本的取得均通过组织伦理委员会的同意)。
2、取步骤1的组织，提取总RNA并反转录为cDNA。
3、以步骤2得到的cDNA为模板，采用qPCR的方法检测eEF-2K基因的表达情况(内参基因为GAPDH基因)。
结果见图4。结果表明，与癌旁组织相比，eEF-2K基因在胃癌组织中表达水平显著降低，达极显著水平(P<0.001)。
综上所述，eEF-2K蛋白水平升高和/或eEF-2K蛋白编码基因的表达水平升高可以作为肝癌特异性的临床诊疗标志物。
实施例3、eEF-2K基因在肝癌患者血浆中的表达水平
1、收集56例健康人血浆标本和88例肝癌患者的血浆标本(均为解放军总医院临床确诊患者，患者均知情同意，上述所有标本的取得均通过组织伦理委员会的同意)。
2、取步骤1的血浆标本，提取总RNA并反转录为cDNA。
3、以步骤2得到的cDNA为模板，采用qPCR的方法检测eEF-2K基因的表达情况(内参基因为GAPDH基因)。引物同实施例2的步骤一的3。
结果见图5。结果表明，与健康人血浆中的表达水平相比，eEF-2K基因在肝癌患者血浆中表达水平上调，差异具有统计学意义(P<0.001)。
实施例4、eEF-2K基因在患者癌组织和癌旁组织的ROC曲线分析
以实施例2的步骤一的结果为原始数据，使用R语言中的pROC包分析eEF-2K基因的受试者工作特征，计算二项精确置信空间，绘制ROC曲线。
结果如图6所示。AUC值为0.883，且具有较好的特异性和敏感性，说明eEF-2K基因应用于肝癌的诊断具有较高的准确性。
实施例5、eEF-2K基因在肝癌细胞系中的差异表达
供试细胞：分别为正常肝细胞系MIHA(中科院上海细胞库，资源编号：YS4004C)、人肝癌细胞株MHCC97-L(北京协和细胞库，资源编号：BJ-ATCC0107)、人肝癌细胞株LM3(北京协和细胞库，资源编号：BJ-ATCC0038)、人肝癌细胞株HepG2(北京协和细胞库，资源编号：BJ-ATCC0075)和人肝癌细胞株Huh-7(北京协和细胞库，资源编号：BJ-ATCC0073)
提取供试细胞的总RNA，并反转录为cDNA，以cDNA为模板，采用qPCR的方法检测eEF-2K基因的表达情况(内参基因为GAPDH基因)。引物同实施例2的步骤一的3。
结果见图7。结果表明，与正常肝细胞系MIHA相比，eEF-2K基因在人肝癌细胞株MHCC-97L、LM3、HepG2和Huh-7中表达均上调，差异具有统计学意义(P<0.001)。
实施例6、eEF-2K基因的沉默
1、针对eEF-2K基因设计siRNA。
siRNA为由正义链和反义链组成的双链RNA。
阴性对照siRNA(siRNA NC)：
正义链：5’-UUCUCCGAACGUGUCACGU-3’；
反义链：5’-ACGUGACACGUUCGGAGAA-3’。
siRNA1：
正义链(序列表的序列5)：5’-UCUUGAUCAGAACUUCAUCAU-3’；
反义链(序列表的序列6)：5’-GAUGAAGUUCUGAUCAAGAUG-3’。
siRNA2：
正义链(序列表的序列7)：5’-AAAUCCUUUGGUUUUGUUCUC-3’；
反义链(序列表的序列8)：5’-GAACAAAACCAAAGGAUUUGA-3’。
2、siRNA转染细胞
(1)将人肝癌细胞株(Huh-7细胞)按2×105个细胞/孔接种到六孔细胞培养板中，置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h。
(2)完成步骤(1)后转染供试siRNA(siRNA的工作浓度为50nM)，然后培养48h。
供试siRNA分别为siRNA NC或siRNA1或siRNA2。
转染siRNA借助脂质体3000转染试剂(Invitrogen公司)，转染方法参照体转染试剂的说明书。
3、完成步骤2后，收集细胞，提取总RNA并反转录为cDNA，以cDNA为模板，采用qPCR检测eEF-2K基因的表达情况(内参基因为GAPDH基因)。引物同实施例2的步骤一的3。
结果见图8。结果表明，相比转染siRNA NC，转染siRNA1或siRNA2均能够显著降低eEF-2K基因的表达，差异具有统计学意义(P<0.001)。
实施例7、CCK8检测细胞增殖实验
1、将对数增殖期的人肝癌细胞株(Huh-7细胞)接种于96孔板，每孔2×103个细胞，置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h。
2、完成步骤1后转染供试siRNA(siRNA的工作浓度为50nM)，然后培养。
供试siRNA分别为实施例6中的siRNA NC或siRNA1或siRNA2。
转染siRNA借助脂质体3000转染试剂(Invitrogen公司)，转染方法参照体转染试剂的说明书。
培养时间分别设置为24h、48h、72h或96h。
3、完成步骤2后，加入CCK8试剂(10μl/孔)，孵育2h，然后使用酶标仪检测A450nm的吸光值。
结果见图9。结果表明，相比转染siRNA NC，转染siRNA1或siRNA2均能够抑制肝癌细胞增殖，差异具有统计学意义(P<0.001)。
实施例8、软琼脂克隆形成实验
1、将对数增殖期的人肝癌细胞株(Huh-7细胞)接种于6孔板，每孔1.5×105个细胞，置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h。
2、完成步骤1后转染供试siRNA(siRNA的工作浓度为50nM)，然后培养24h。
供试siRNA分别为实施例6中的siRNA NC或siRNA1或siRNA2。
转染siRNA借助脂质体3000转染试剂(Invitrogen公司)，转染方法参照体转染试剂的说明书。
3、完成步骤2后，收集细胞，采用含20％胎牛血清的DMEM培养基调整细胞浓度为5×103个细胞/ml，得到细胞悬液。
4、分别制备1.2％(质量百分含量)的低溶点琼脂糖溶液和0.7％(质量百分含量)的低溶点琼脂糖溶液，高压灭菌后，维持在40℃水浴中。
5、取1体积份1.2％的低溶点琼脂糖溶液与1体积份2×DMEM培养基，混匀，然后加入庆大霉素(使其在体系中的浓度为100μg/mL)和小牛血清(使其在体系中的体积百分含量为20％)，得到混合液。取3m1混合液注入直径6cm的平皿中并放置5min冷却凝固，作为底层琼脂置于温箱中备用。
6、取1体积份0.7％的低溶点琼脂糖溶液与1体积份2×DMEM培养基，混匀，取2m1然后加入0.2ml步骤3得到的细胞悬液，充分混匀后注入步骤5制备的平皿中，形成双琼脂层。每个实验组重复4个样本。待上层琼脂凝固后，将平皿置入37℃，5％CO2温箱中培养，每3天加1.5m1DMEM培养基，培养14天。
7、取出步骤6的平皿，用lml 0.005％的龙胆紫溶液染色90min。把平皿放置在倒置显微镜下观察，每组细胞随机选取10个低倍视野，镜下计算形成的细胞克隆数。
结果如图10所示。结果表明，相比转染siRNA NC，转染siRNA1或siRNA2的处理组单细胞克隆集落形成数显著降低。
实施例9、eEF-2K基因对肝癌细胞凋亡的影响
1、将对数增殖期的人肝癌细胞株(Huh-7细胞)接种于12孔板，每孔1.0×105个细胞，置于37℃，5％CO2培养箱中培养24h。
2、完成步骤1后转染供试siRNA(siRNA的工作浓度为50nM)，然后培养24h。
供试siRNA分别为实施例6中的siRNA NC或siRNA1或siRNA2。
转染siRNA借助脂质体3000转染试剂(Invitrogen公司)，转染方法参照体转染试剂的说明书。
3、完成步骤2后，收集细胞，Annexin/FITC染色检测细胞凋亡。
结果见图11。结果表明，相比转染siRNA NC，转染siRNA1或siRNA2的处理组细胞凋亡率升高(P<0.0001)。
实施例10、细胞迁移及侵袭实验
1、无菌条件下将Matrigel冰浴融化，用pH7.2的PBS缓冲液稀释至20倍体积，然后50μl/孔铺在Transwell小室的聚碳酸醋膜上，37℃放置4h，待Matrigel胶聚合成凝胶后取出，轻轻吸出上层析出液。然后，每孔加入50μl的含2％BSA的DMEM培养液对基底膜进行水化处理，37℃放置30min。
2、将对数增殖期的人肝癌细胞株(Huh-7细胞)接种于24孔板，每孔5×104个细胞，置于37℃，5％CO2培养箱中培养24h。
3、完成步骤2后转染供试siRNA(siRNA的工作浓度为50nM)，然后培养24h。
供试siRNA分别为实施例6中的siRNA NC或siRNA1或siRNA2。
转染siRNA借助脂质体3000转染试剂(Invitrogen公司)，转染方法参照体转染试剂的说明书。
4、完成步骤3后，更换为无血清DMEM培养基培养12h，收集细胞，采用无血清DMEM培养基调整细胞浓度为5×105个细胞/ml，得到细胞悬液。
5、取步骤4制备的细胞悬液(迁移实验为100μl，侵袭实验为200μl)加入到完成步骤1的Transwell小室中，在24孔板下室加入500μl含10％FBS的1640培养基，然后在细胞培养箱中培养24h。
6、完成步骤5后，把小室细胞先用pH7.2的PBS缓冲液漂洗2遍，然后放入DAPI工作液中室温染色5-20min，然后用pH7.2的PBS缓冲液漂洗2遍，然后放入荧光显微镜下观察并计数。
结果见图12(A为迁移试验，B为侵袭试验)。结果表明，相比转染siRNA NC，转染siRNA1或siRNA2的处理组的肝癌细胞的迁移及侵袭能力均有明显下降。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。
序列表
<110> 中国人民解放军总医院第五医学中心
<120> eEF-2K蛋白及其编码基因在肝脏肿瘤诊断治疗中的应用
<130> GNCYX211333
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 725
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Ala Asp Glu Asp Leu Ile Phe Arg Leu Glu Gly Val Asp Gly Gly
1 5 10 15
Gln Ser Pro Arg Ala Gly His Asp Gly Asp Ser Asp Gly Asp Ser Asp
20 25 30
Asp Glu Glu Gly Tyr Phe Ile Cys Pro Ile Thr Asp Asp Pro Ser Ser
35 40 45
Asn Gln Asn Val Asn Ser Lys Val Asn Lys Tyr Tyr Ser Asn Leu Thr
50 55 60
Lys Ser Glu Arg Tyr Ser Ser Ser Gly Ser Pro Ala Asn Ser Phe His
65 70 75 80
Phe Lys Glu Ala Trp Lys His Ala Ile Gln Lys Ala Lys His Met Pro
85 90 95
Asp Pro Trp Ala Glu Phe His Leu Glu Asp Ile Ala Thr Glu Arg Ala
100 105 110
Thr Arg His Arg Tyr Asn Ala Val Thr Gly Glu Trp Leu Asp Asp Glu
115 120 125
Val Leu Ile Lys Met Ala Ser Gln Pro Phe Gly Arg Gly Ala Met Arg
130 135 140
Glu Cys Phe Arg Thr Lys Lys Leu Ser Asn Phe Leu His Ala Gln Gln
145 150 155 160
Trp Lys Gly Ala Ser Asn Tyr Val Ala Lys Arg Tyr Ile Glu Pro Val
165 170 175
Asp Arg Asp Val Tyr Phe Glu Asp Val Arg Leu Gln Met Glu Ala Lys
180 185 190
Leu Trp Gly Glu Glu Tyr Asn Arg His Lys Pro Pro Lys Gln Val Asp
195 200 205
Ile Met Gln Met Cys Ile Ile Glu Leu Lys Asp Arg Pro Gly Lys Pro
210 215 220
Leu Phe His Leu Glu His Tyr Ile Glu Gly Lys Tyr Ile Lys Tyr Asn
225 230 235 240
Ser Asn Ser Gly Phe Val Arg Asp Asp Asn Ile Arg Leu Thr Pro Gln
245 250 255
Ala Phe Ser His Phe Thr Phe Glu Arg Ser Gly His Gln Leu Ile Val
260 265 270
Val Asp Ile Gln Gly Val Gly Asp Leu Tyr Thr Asp Pro Gln Ile His
275 280 285
Thr Glu Thr Gly Thr Asp Phe Gly Asp Gly Asn Leu Gly Val Arg Gly
290 295 300
Met Ala Leu Phe Phe Tyr Ser His Ala Cys Asn Arg Ile Cys Glu Ser
305 310 315 320
Met Gly Leu Ala Pro Phe Asp Leu Ser Pro Arg Glu Arg Asp Ala Val
325 330 335
Asn Gln Asn Thr Lys Leu Leu Gln Ser Ala Lys Thr Ile Leu Arg Gly
340 345 350
Thr Glu Glu Lys Cys Gly Ser Pro Gln Val Arg Thr Leu Ser Gly Ser
355 360 365
Arg Pro Pro Leu Leu Arg Pro Leu Ser Glu Asn Ser Gly Asp Glu Asn
370 375 380
Met Ser Asp Val Thr Phe Asp Ser Leu Pro Ser Ser Pro Ser Ser Ala
385 390 395 400
Thr Pro His Ser Gln Lys Leu Asp His Leu His Trp Pro Val Phe Ser
405 410 415
Asp Leu Asp Asn Met Ala Ser Arg Asp His Asp His Leu Asp Asn His
420 425 430
Arg Glu Ser Glu Asn Ser Gly Asp Ser Gly Tyr Pro Ser Glu Lys Arg
435 440 445
Gly Glu Leu Asp Asp Pro Glu Pro Arg Glu His Gly His Ser Tyr Ser
450 455 460
Asn Arg Lys Tyr Glu Ser Asp Glu Asp Ser Leu Gly Ser Ser Gly Arg
465 470 475 480
Val Cys Val Glu Lys Trp Asn Leu Leu Asn Ser Ser Arg Leu His Leu
485 490 495
Pro Arg Ala Ser Ala Val Ala Leu Glu Val Gln Arg Leu Asn Ala Leu
500 505 510
Asp Leu Glu Lys Lys Ile Gly Lys Ser Ile Leu Gly Lys Val His Leu
515 520 525
Ala Met Val Arg Tyr His Glu Gly Gly Arg Phe Cys Glu Lys Gly Glu
530 535 540
Glu Trp Asp Gln Glu Ser Ala Val Phe His Leu Glu His Ala Ala Asn
545 550 555 560
Leu Gly Glu Leu Glu Ala Ile Val Gly Leu Gly Leu Met Tyr Ser Gln
565 570 575
Leu Pro His His Ile Leu Ala Asp Val Ser Leu Lys Glu Thr Glu Glu
580 585 590
Asn Lys Thr Lys Gly Phe Asp Tyr Leu Leu Lys Ala Ala Glu Ala Gly
595 600 605
Asp Arg Gln Ser Met Ile Leu Val Ala Arg Ala Phe Asp Ser Gly Gln
610 615 620
Asn Leu Ser Pro Asp Arg Cys Gln Asp Trp Leu Glu Ala Leu His Trp
625 630 635 640
Tyr Asn Thr Ala Leu Glu Met Thr Asp Cys Asp Glu Gly Gly Glu Tyr
645 650 655
Asp Gly Met Gln Asp Glu Pro Arg Tyr Met Met Leu Ala Arg Glu Ala
660 665 670
Glu Met Leu Phe Thr Gly Gly Tyr Gly Leu Glu Lys Asp Pro Gln Arg
675 680 685
Ser Gly Asp Leu Tyr Thr Gln Ala Ala Glu Ala Ala Met Glu Ala Met
690 695 700
Lys Gly Arg Leu Ala Asn Gln Tyr Tyr Gln Lys Ala Glu Glu Ala Trp
705 710 715 720
Ala Gln Met Glu Glu
725
<210> 2
<211> 7398
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 2
gctcaaccta gaccagcccc agcttcagcc tcagctcccc tccttcctgg atcgagcgcc 60
cgcactcccg gccctgcagc cacccgagtc ccgctcgctg tcgcctgcac gcgagtcccc 120
cctggcacgc gctcccacat cccgggatcg tcccaacggc ccctgcgccc ttcctgggat 180
cactccgact gccccgcgcg ccctgggatc ggtccatcta ccccgcgtgg ccccagctgc 240
ttgcccggag cgccagctag cgctccccgc tctccgctcc ccggcactct cggggggccc 300
gcccgccctg caccctggag ctccgggccg cgagcctctg ccaactcctc tggaccctcg 360
cggccgtggg cagcggctgc cgcgcctgtc tgcccgaggg aggaccttcg cctctgcatt 420
tgtccagtaa ctctggctgt gccggatact gcttgggtaa aacgggcacc ccaggaacat 480
ggcagacgaa gatctcatct tccgcctgga aggcgttgat ggcggccagt ccccccgagc 540
tggccatgat ggtgattctg atggggacag cgacgatgag gaaggttact tcatctgccc 600
catcacggat gacccaagct cgaaccagaa tgtcaattcc aaggttaata agtactacag 660
caacctaaca aaaagtgagc ggtatagctc cagcgggtcc ccggcaaact ccttccactt 720
caaggaagcc tggaagcacg caatccagaa ggccaagcac atgcccgacc cctgggctga 780
gttccacctg gaagatattg ccaccgaacg tgctactcga cacaggtaca acgccgtcac 840
cggggaatgg ctggatgatg aagttctgat caagatggca tctcagccct tcggccgagg 900
agcaatgagg gagtgcttcc ggacgaagaa gctctccaac ttcttgcatg cccagcagtg 960
gaagggcgcc tccaactacg tggcgaagcg ctacatcgag cccgtagacc gggatgtgta 1020
ctttgaggac gtgcgtctac agatggaggc caagctctgg ggggaggagt ataatcggca 1080
caagcccccc aagcaggtgg acatcatgca gatgtgcatc atcgagctga aggacagacc 1140
gggcaagccc ctcttccacc tggagcacta catcgagggc aagtacatca agtacaactc 1200
caactctggc tttgtccgcg atgacaacat ccgcctgacg ccgcaggcct tcagccactt 1260
cacttttgag cgttccggcc atcagctgat agtggtggac atccagggag ttggggatct 1320
ctacactgac ccacagatcc acacggagac gggcactgac tttggagacg gcaacctagg 1380
tgtccgcggg atggcgctct tcttctactc tcatgcctgc aaccggattt gcgagagcat 1440
gggccttgct ccctttgacc tctcgccccg ggagagggat gcagtgaatc agaacaccaa 1500
gctgctgcaa tcagccaaga ccatcttgag aggaacagag gaaaaatgtg ggagccccca 1560
agtaaggacc ctctctggga gccggccacc cctgctccgt cccctttcag agaactctgg 1620
agacgagaac atgagcgacg tgaccttcga ctctctccct tcttccccat cttcggccac 1680
accacacagc cagaagctag accacctcca ttggccagtg ttcagtgacc tcgataacat 1740
ggcatccaga gaccatgatc atctagacaa ccaccgggag tctgagaata gtggggacag 1800
cggatacccc agtgagaagc ggggtgagct ggatgaccct gagccccgag aacatggcca 1860
ctcatacagt aatcggaagt acgagtctga cgaagacagc ctgggcagct ctggacgggt 1920
atgtgtagag aagtggaatc tcctcaactc ctcccgcctc cacctgccga gggcttcggc 1980
cgtggccctg gaagtgcaaa ggcttaatgc tctggacctc gaaaagaaaa tcgggaagtc 2040
cattttgggg aaggtccatc tggccatggt gcgctaccac gagggtgggc gcttctgcga 2100
gaagggcgag gagtgggacc aggagtcggc tgtcttccac ctggagcacg cagccaacct 2160
gggcgagctg gaggccatcg tgggcctggg actcatgtac tcgcagttgc ctcatcacat 2220
cctagccgat gtctctctga aggagacaga agagaacaaa accaaaggat ttgattactt 2280
actaaaggcc gctgaagctg gcgacaggca gtccatgatc ctagtggcgc gagcttttga 2340
ctctggccag aacctcagcc cggacaggtg ccaagactgg ctagaggccc tgcactggta 2400
caacactgcc ctggagatga cggactgtga tgagggcggt gagtacgacg gaatgcagga 2460
cgagccccgg tacatgatgc tggccaggga ggccgagatg ctgttcacag gaggctacgg 2520
gctggagaag gacccgcaga gatcagggga cttgtatacc caggcagcag aggcagcgat 2580
ggaagccatg aagggccgac tggccaacca gtactaccaa aaggctgaag aggcctgggc 2640
ccagatggag gagtaaccag gaaaatcact gccggctagt cccaagcaaa cgggctagga 2700
ggaaagatta aaaaaacaac aacaacaact tatttagttt ggggagggga agcattttta 2760
agtgtgttgt aaaatcaaat tttatatttc attttttgac tcttgaaaaa tgtctttgct 2820
ccttggcagc taccagcaga gactctatag ctgtctctta gggcagtatt ttggggaagt 2880
ggggcttgaa gaagcagcct aatgaaccaa cataccgttt tgtgtgtggt tttttttgtt 2940
tgtttgtttg tttgttttga gacagagtct tgctctgtca cccaggctgg agtgcagtga 3000
catgatctta gctcactgca acctccgcct cctgggttca agtgattctc ctgcctcagc 3060
ctcccaagta gctgggatta ctggtgcaca ccaccacact cagctaattt ttgcattttt 3120
agtagagatg gggtttcacc atgttggcca ggctggtctc gaactcctaa cctcaggtga 3180
tccacctgcc tcagcctccc aaagtgctgg gattacaggt gtgagccacc atgcctgccc 3240
attttgtggt tctattttca tttttatttc tttttttttt tttgtcacga gatataagaa 3300
agtgcttttt gccttgaatg gacaatttta gggctgtgct cactagtctt ttcaggctgg 3360
actgaaatgt cgggcccatg gagccctgtg ttttgtgcat cgggatgaga aatgaagcac 3420
ttcacgctgg ctttcctaag tcacggggcg tgtattgccg tggcttagtg caaagcattc 3480
tttctcagag catttagagg catgcgtggc attttttcag tgggtgtgag attgcacaat 3540
acccaggctc ccttctactg tggggaaggg cctgcatgtt ggctgttttt taaacttcta 3600
gttcaatttc cttccataat gctactgatt ttctggcata cagccgaatt ccatctttta 3660
agcatgcttt ctacggtggg cttttcaaaa caggtttgag ttttgtatgc acacgtttac 3720
tacctctaac tcctacatca gctagtgtgg aagagggtgc acctcaaagc ttttacacgt 3780
aaggacagcg gcttggaatg tgagagcctt ttctccaagc agacccacac tctgcatctc 3840
agtggcagct cccacaacgt gactgcaatg tctcttatac agtattcctt ggtgttttct 3900
tagtgtctgg atgttcttac gtgaaatctg ctccccagcc ctggtccttg gcattttctg 3960
cttgaagctg ggctgatttt cttgtaattt acagcaggac gctttcagca gcagtctctt 4020
gggattttat ctaagatgtt tgaggatgag agggcaagaa ctataaacac tcattaattc 4080
tagtagtctc cccatggcca gacaatggcg attgttattt aatgagcttt tcctttcaat 4140
ggaattcagc tctcacatta gtatgatttc atttgatgtt tcaaatagca aagatgctag 4200
gtgcggtggc tcccgcctgt aatctcagca ctttgaggag ggccaaggtg ggaggattgc 4260
ttgagctcag gacttcaaga ccagcctggg taaacatggc gagaccctgt ctctaccaaa 4320
acaacaaaaa aaagacagac tgctttgatc aaccctaaat gcaaaagcag cctatttttc 4380
tttgtttaaa agtcaaaaca taaaaaagca gagtataaca tacaaaccat tcttaactat 4440
tcattaaaat gggtccttca acaccttagt ggggtttgtt gttgttgctt atgcagagag 4500
attattttct ttttattatt ttataatttt tgaaatagag atggggtctc actgtgttgc 4560
ccaggctggt ctcgaactcc tggacttaag tgagcctccc gcctcagtct cccaaagcgc 4620
tgggattaca ggcaggagcc actgagccca gccaagactt cagtgttgac tgctttggag 4680
gcacaaaccc atgcaagcgt tagttccaaa gttcagtgtg tacccttaaa tgaacaatga 4740
agcaggtaaa attacccttg aaaaaaatcc cttggaccac ccataaatga cagtgacttt 4800
ttcaatatgg actcatcata gccagttttc cttttgaagt tggaactgat cacccttttg 4860
tcatctgtac cagatcagta gttggcttgt gttacatttt gtgtgtgtgt gtgcgtgttt 4920
taaaccagtg catataaatt gtatgttaaa tgtaagtaac tttaagttga cttatctctt 4980
cacagtaatc aagcctcacg taattcatgc tttttaaatt cagccagccc cccctctctg 5040
aaattttatt atgtaaataa tttgtgttcc ctgatcactc gtttaagttc ttagttgtat 5100
gtcatctctt ctctagcagg aattggcaaa cttttttgta aaggggtaga aagtgaagat 5160
tttaggcttt gcaggccata tagcctctgc tgcaaatgct cagccctgct gttgtaatgt 5220
aaaagctgcc acagacacta catgaacacg aatgagtgtg gctggtgttc caataaaact 5280
ttatttacac aaacgggtgg cccttttggg ctgtagtttg tcaacccttg ctctaaccct 5340
tgactgagag ctactttatt aagccctgag ggcaggagct atcccaattt tgtgttcccc 5400
agggcaccaa aacacagtgc tttggcatag agtaggcact caacaagtgt gtgaacagat 5460
ggagagccag ccctagtcag tgcactcacc ctttgaggct ctggttcctc caaacaatga 5520
ttcgttgtct ggattggctg gaactgtcac ccccgcaatt ctactcccca cccacccatg 5580
tgaccttaat gtcagttgct ggtctgttgc tcttcgggga gggagagatg gcctggatac 5640
agagctaagc aaatgcttct ttaagggccc ttaaaagtga aaagtaactt gcaagaggtt 5700
gagatccttc tgagctagga gaacttattc caccttcaaa acctagtttg ggctgggtgc 5760
agtggctcac gccactttgg gaggctgagg tgggcggatc acctgaagtc agctactcgg 5820
gaggctgagg caggagaatc gcttgaaccc aggaggcaga ggttgcagtg agccgagatt 5880
gcgtcactgc actccagcct gggcgacaga gtgagactcc gtctcgaaac caaaaacaag 5940
aaaaacccct agttttgtgc cttctgaaga tagttaggac atcttctttt tccgcaaatg 6000
ctggacatgc caaaaaccta acgcaaaacc caggacattc cagcccaact gggacgatat 6060
cagagaccat cttcaagtgc aagaagcagg tgaaagccca ggaaattggc agagccagga 6120
ttatcatcca gtactttcat ttcacaaatg gagaaaccga ggttctgcca gctagatttt 6180
ttttcacagt gtcactgcta gcaagccact aagctggagc tgggatttga gagctgctgc 6240
tatttagagg atcttgggaa taaaatttaa actggagttt aatggccctt tcagttttgc 6300
tataggcaag agaataaaat gaatgaatgg ataggtggct ttatgggtgt aagaaagaag 6360
cgaaaaaaac tcccaaaccc cagtgttcct gaatatctgt tctccccctg accactctgg 6420
gaatttatca aatgcagctt tgacctccaa gccaagtaaa ctgctcttgt tgctatttta 6480
gtggtttttg tttttttaag acacaaggtc tcactttgtt actcaggctg gagtgcagtg 6540
gcatgatcat aactcattgt aggctcaacc tcctgggccc cagtgatcct cctgcctcag 6600
cctctcaagt agctaaaact acagatgtgc accatcacat ctggctaatt tttttttttt 6660
tttttttgag gtggagtctc gctctgttgc ccagattcaa gtgcaatggc acgttttggc 6720
tcactgcaac ctctgcctcc caggttcaag cgattctccc tgtctcggcc tcccgagtag 6780
ctgggactac aggcacctgc caccacgcgc agctaatgtt tgtattttta gtagagacgg 6840
gggtttcacc atgttggcca ggctggtttc aaactcctga cattaggtga tccacctgcc 6900
tcggcctccc aaagtgctgg gattacaggc atgagccacc gtgccaagcc acgcctggct 6960
aattttttaa aattattttt tgcagagaca gagtttcact atgttgccca ggctggtctt 7020
gaactccttg gcctcaagtg atcctcccac ctcagcctcc caaagcattg gggttacagg 7080
cgtgagccac tgcacctggc cctgttttca tggcttttat ttcctttcat cccacacatt 7140
tgtctgcagt actagacatg ttttacaaat caacaagttt acacaagtat atgcagcttg 7200
ttttgggggg aaaggagaca aaatatgcat attttctgtg tggatttgtg cctcttaatt 7260
gtgtttctag tctctaaggt gaccctttaa cctactcaag atggggccca gagaagtggc 7320
ctgcgttaca gatttatttt ggcatatgta ctaagttcca ttttctcttt acaaataaag 7380
tgttttcttt cttttctg 7398
<210> 3
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
atggcagacg aagatctcat cttccgcctg gaa 33
<210> 4
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ttactcctcc atctgggccc aggcctctt 29
<210> 5
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
ucuugaucag aacuucauca u 21
<210> 6
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
gaugaaguuc ugaucaagau g 21
<210> 7
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
aaauccuuug guuuuguucu c 21
<210> 8
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
gaacaaaacc aaaggauuug a 21

Claims (1)

1.siRNA在制备产品中的应用；
所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：
(a1)抑制癌细胞增殖；
(a2)促进癌细胞凋亡；
(a3)抑制癌细胞转移；
(a4)抑制癌细胞扩散；
(a5)抑制肿瘤转移；
(a6)抑制肿瘤扩散；
(a7)治疗肿瘤；
所述siRNA为siRNAl，由正义链1和反义链1组成；所述正义链1如序列表的序列5所示；所述反义链1由序列表的序列6所示；
所述癌细胞为肝癌细胞；
所述肿瘤为肝癌。
CN202110533581.5A 2021-05-17 2021-05-17 eEF-2K蛋白及其编码基因在肝脏肿瘤诊断治疗中的应用 Active CN113234827B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110533581.5A CN113234827B (zh) 2021-05-17 2021-05-17 eEF-2K蛋白及其编码基因在肝脏肿瘤诊断治疗中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110533581.5A CN113234827B (zh) 2021-05-17 2021-05-17 eEF-2K蛋白及其编码基因在肝脏肿瘤诊断治疗中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113234827A CN113234827A (zh) 2021-08-10
CN113234827B true CN113234827B (zh) 2023-01-13

Family

ID=77134541

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110533581.5A Active CN113234827B (zh) 2021-05-17 2021-05-17 eEF-2K蛋白及其编码基因在肝脏肿瘤诊断治疗中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113234827B (zh)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103992236B (zh) * 2014-04-29 2016-05-18 于非 一种新型靶向性抗肿瘤药物及其制备方法与应用
CN105797142B (zh) * 2016-03-14 2017-12-19 江苏省人民医院 含eEF2K抑制剂的肿瘤放射增敏剂
CN110261598B (zh) * 2019-06-20 2022-09-16 上海中医药大学 eEF2K作为筛选促进或抑制血管新生的药物靶点的用途
CN110596390B (zh) * 2019-09-20 2023-01-06 四川大学华西医院 Eef2k自身抗体检测试剂在制备肺癌检测试剂盒中的用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN113234827A (zh) 2021-08-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5172736B2 (ja) Ｅｍｌ４−ａｌｋ融合遺伝子
Kauppi et al. The Three-dimensional Structure of Mammalian Ribonucleotide Reductase Protein R2 Reveals a More-accessible Iron-radical Site thanEscherichia coliR2
EP1914240B1 (en) EML4-ALK fusion gene
CN106755372B (zh) 一种分子标志物在口腔鳞状细胞癌诊断和治疗中的应用
CN109680064B (zh) Ythdf2基因在尿路上皮癌诊断、预防和治疗中的应用
CN107586850B (zh) 非编码基因在肝癌诊疗中的应用
CN110244056B (zh) Znf521基因在制备肝癌治疗药物、诊断及预后评估试剂中的应用
KR101154130B1 (ko) 전이에 관련된 인자 및 그 용도
CN109022461B (zh) 一种PTEN基因的上游开放阅读框45aa-uORF核苷酸序列及其编码的多肽的应用
CN113234827B (zh) eEF-2K蛋白及其编码基因在肝脏肿瘤诊断治疗中的应用
CN114796525B (zh) 细胞周期调控蛋白抑制剂在肿瘤治疗中的应用
CN106636444B (zh) Fam78a基因的用途
Wang et al. LINC00106 prevents against metastasis of thyroid cancer by inhibiting epithelial-mesenchymal transition.
CN110229900A (zh) 与乳腺癌诊疗相关的基因hsa_circ_0103520及其应用
CN110592214B (zh) Pgm2l1基因在制备用于诊断卵巢癌的标记物中的用途及诊断试剂和治疗药物
CN107502658A (zh) 针对epcr基因或epcr蛋白的表达制备癌症诊断和治疗产品的方法
CN108926713A (zh) 钙调磷酸酶调节蛋白1.4或其类似物在制备抑制肝癌的药物中的应用
CN108619516A (zh) Her2-565核酸片段及her2-20kd肽段的抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用
CN107058534B (zh) 一种肝癌的生物标记物ensg00000248884及其应用
CN113122638B (zh) 一种hsa-novel_circ_0006787分子在肝癌治疗中的应用
Chen et al. The mechanism of PDX in regulating cervical cancer HeLa cell proliferation and tumor formation
CN107723369B (zh) Setd1b蛋白及其编码基因在肝癌诊断治疗中的应用
CN113789380B (zh) 一种长链非编码RNA lncRNA JPX作为骨肉瘤分子标志物的应用
CN111118139B (zh) 一种骨质疏松的分子靶标及其应用
KR101127566B1 (ko) ｔｒａｎｓｇｅｌｉｎ ２ 유전자 발현을 억제하여 암세포의화합물 또는 방사선에 대한 민감도를 증진하는 방법

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant