CN113122638B - 一种hsa-novel_circ_0006787分子在肝癌治疗中的应用 - Google Patents

一种hsa-novel_circ_0006787分子在肝癌治疗中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物医药领域，涉及一种hsa‑novel_circ_0006787分子在肝癌治疗中的应用，具体为hsa‑novel_circ_0006787分子作为诊断标志物在治疗肝癌中的应用或者作为靶点在抗癌药物研发中的应用；本发明所述的hsa‑novel_circ_0006787分子为在肝癌组织中低表达的circRNA分子，其核酸序列为SEQ ID NO.1。所述诊断肝癌的产品包括芯片、试剂盒、试纸或高通量测序平台等。所述抗癌药物包括增强hsa‑novel_circ_0006787表达的基因药物和化学药物。

Description

一种hsa-novel_circ_0006787分子在肝癌治疗中的应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及一种hsa-novel_circ_0006787分子在肝癌治疗中的应用，具体为hsa-novel_circ_0006787分子作为诊断标志物在治疗肝癌中的应用或者作为靶点在抗癌药物研发中的应用。
背景技术
原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，我国每年因肝癌死亡人数为42.2/10000人，仅次于肺癌和胃癌。治疗肝癌常用方法有手术切除、肝脏移植、辅助治疗、介入治疗等。其中，早期诊断并得到合适治疗或干预的肝癌患者，5年生存率超过50％。但是对那些在相关症状出现后才能被诊断治疗的病人，其5年生存率仅仅为14.1％，因此对肝癌患者的早期筛查及预后判断至关重要。常规的肿瘤标志物筛查可能需要确定患者的实体瘤位置，通过穿刺等方式进行组织活检，不适用于健康人群的疾病筛查，也对患者伤害较大，且不良刺激可能加速肿瘤的生长。肿瘤特异的非编码RNA作为新兴的液体活检检测方法可以作为个性化诊断的肿瘤标志物，在一定程度上替代肿瘤细胞的组织活检。
环RNA(circular RNA,circRNA)是一类非线性的单链非编码RNA，其首尾通过共价键结合形成一个闭合的环状结构。circRNA的环状结构不易被核酸外切酶降解，因而更稳定，具有更长的半衰期。circRNA具有丰富、保守，在唾液、血液和外泌体中稳定表达的特征，并且表现出组织发育阶段的特异性，这使得它有希望成为癌症生物标志物。此外，circRNA在肿瘤发展过程中起着重要的作用，文献(Zhang,H.,et al.,Exosome circRNA secretedfrom adipocytes promotes the growth of hepatocellular carcinoma by targetingdeubiquitination related USP7.Oncogene,2019,38:2844-8)发现脂肪细胞分泌的外泌体circDB可以而促进肝细胞癌生长并且减少DNA损伤。Wang,G.,et al.,Three isoformsof exosomal circPTGR1 promote hepatocellular carcinoma metastasis via themiR449a-MET pathway.EBioMedicine,2019,40:432-445.研究表明较高转移性HCC细胞可能通过外泌体传递circPTGR1，使较低转移或无转移潜能细胞的迁移和侵袭能力增强。
我们发现一种新型circRNA的在肝癌组织中低表达，并且通过靶向调控这种新型circRNA可以抑制肝癌细胞的致瘤性。实验结果表明，该新型circRNA是潜在的肝癌早期诊断的分子标记，也是靶向治疗肝癌的重要分子靶标，对于肝癌的治疗具有重要的临床意义。
发明内容
为了实现本发明的目的，本发明提供了一种hsa-novel_circ_0006787分子及其在肝癌治疗中的应用，具体为hsa-novel_circ_0006787分子作为诊断标志物在治疗肝癌中的应用或者作为靶点在抗癌药物研发中的应用。
本发明所述的hsa-novel_circ_0006787分子为在肝癌组织中低表达的circRNA分子，其核酸序列为SEQ ID NO.1，具体信息如下：
GGCATCCGCTTCGATCCTGAAATTCCGCAAACACTACGACTAGAGTTTGCTAAGGCAAACACGAAGATGGCCAAGAACAAACTCGTAGGGACTCCAAACCCCAGTACTCCTCTGCCCAACACTGTACCTCAGTTCATTGCCAGAGAGCCATATGAGCTCACAGTGCCTGCACTTTACCCCAGTAGCCCTGAAGTGTGGGCCCCGTACCCTCTGTACCCAGCGGAGTTAGCGCCTGCTCTACCTCCTCCTGCTTTCACCTATCCCGCTTCACTGCATGCCCAGATGCGCTGGCTCCCTCCCTCCGAGGCTACTTCTCAGGGCTGGAAGTCCCGTCAGTTCTGCTGAATACTAT。
本发明提供了hsa-novel_circ_0006787分子在制备诊断肝癌产品中的应用。
作为本发明优选的技术方案，所述诊断肝癌的产品至少包括利用SYBR Green、TaqMan探针、双杂交探针或复合探针检测hsa-novel_circ_0006787表达量时使用的PCR扩增引物。
在本发明的具体实施方案中，所述PCR扩增引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ IDNO.3所示，具体信息如下：
Forward primer CTGCTTTCACCTATCCCGCT(SEQ ID NO.2)
Reverse primer ATCGAAGCGGATGCCATAGT(SEQ ID NO.3)
进一步，所述诊断肝癌的产品包括芯片、试剂盒、试纸或高通量测序平台等；所述产品的制备方法均为本领域技术人员公知的技术方法即可制备。
所述试剂盒包括检测hsa-novel_circ_0006787表达量的试剂，所述试剂包括与hsa-novel_circ_0006787或其DNA序列结合的核酸，所述核酸包括SYBR Green、TaqMan探针、分子信标、双杂交探针、或复合探针检测hsa-novel_circ_0006787表达量时使用的PCR扩增引物。
所述芯片包括检测hsa-novel_circ_0006787表达量的试剂，所述试剂包括与hsa-novel_circ_0006787或其DNA序列结合的核酸，所述核酸包括能够检测hsa-novel_circ_0006787表达量的探针。
所述试纸包括检测hsa-novel_circ_0006787表达量的试剂，所述试剂包括与hsa-novel_circ_0006787或其DNA序列结合的核酸，所述核酸包括能够检测hsa-novel_circ_0006787表达量的探针。
本发明还提供hsa-novel_circ_0006787分子作为靶点在抗癌药物研发中的应用。
作为本发明优选的技术方案，所述抗癌药物包括增强hsa-novel_circ_0006787表达的基因药物和化学药物，例如激动剂。
进一步，所述激活剂不受限制，只要是可以增加hsa-novel_circ_0006787表达水平或提高hsa-novel_circ_0006787功能活性即可。
所述激活剂包括hsa-novel_circ_0006787分子、促进型转录调控因子、或促进型靶向小分子化合物。
本发明产生的基因药物或化学药物可应用到肝癌，肺癌，结直肠癌，胃癌，乳腺癌等一种或几种。
本发明所述的基因药物或化学药物包括药学上可接受的载体，形式为临床上可接受的形式。
本发明通过实验证明慢病毒过表达hsa-novel_circ_0006787能显著抑制肝癌细胞的增殖和致瘤性，敲低hsa-novel_circ_0006787能促进肝癌细胞的增殖和致瘤性。此外，本发明提供的hsa-novel_circ_0006787分子在肝癌组织中异常低表达，并且和肿瘤的恶性程度有关，可以用作肝癌辅助诊断的主要标志物。
附图说明
图1：hsa-novel_circ_0006787的生物学合成及结构示意图。
图2：hsa-novel_circ_0006787在肝癌病人的肝脏组织和肝癌组织中表达量的检测结果图；其中，Normal代表肝脏组织，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表肝癌组织的不同病理分期，***p＜0.001。
图3：图A为hsa-novel_circ_0006787小干扰RNA(siRNA)在肝癌细胞系PLC/PRF/5中转染敲降效率的qRT-PCR验证图，NC代表阴性对照组；si-circ_0006787代表转染靶向circ_0006787反向剪接位点的siRNA组；图B为hsa-novel_circ_0006787慢病毒在肝癌细胞系PLC/PRF/5中转染过表达效率的qRT-PCR验证图，NC代表阴性对照组；circ_0006787代表过表达circ_0006787组；*p＜0.05，***p＜0.001。
图4：过表达hsa-novel_circ_0006787后抑制肝癌细胞致瘤性的结果图；图A为无血清瘤球培养实验结果图；图B为克隆存活实验结果图；图C为transwell细胞迁移实验结果图；图D为异种移植瘤形成实验结果图；NC代表阴性对照组；circ_0006787代表过表达circ_0006787组，*p＜0.05。
图5：敲降hsa-novel_circ_0006787后促进肝癌细胞致瘤性的结果图。图A为无血清瘤球培养实验结果图；图B为克隆存活实验结果图；图C为CCK-8检测细胞增殖实验结果图；图D为transwell细胞迁移实验结果图；NC代表阴性对照组；si-circ_0006787代表敲低circ_0006787组，*p＜0.05。
具体实施方式
以下通过实施例进一步描述本发明，其中包括使用材料及具体来源。但应当理解的是，这些只是示例性的，而非限制本发明。与如下试剂、仪器的类型及型号，或性质或功能相似或相同的材料均可以用于本发明的实施。除非另有所指，本发明中用到的试剂可以是任何合适的市售试剂。
人肝癌细胞系PLC/PRF/5：购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库；MEM培养基：购自Invitrogen，产品目录编号为11965-092；DMEM/F12培养基：购自Invitrogen，产品目录编号为10565-018；血清：购自Gibco，产品目录编号为10099-141；胰酶：购自Invitrogen，产品目录编号为25300-354；碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)：购自Invitrogen，产品目录编号为PHG0023；表皮生长因子(EGF)：购自Invitrogen，产品目录编号为PHG0311；肝生长因子(HGF)：购自PeproTech，产品目录编号为100-39；b27：购自Invitrogen，产品目录编号为17504-044；hsa-novel_circ_0006787过表达慢病毒和siRNA由上海吉玛生物科技有限公司构建。下述示例中的方法如无特殊说明均为普通方法。
实施例1:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa-novel_circ_0006787表达
hsa-novel_circ_0006787的生物学合成及结构示意图如图1所示，hsa-novel_circ_0006787由RBPMS基因第5，6，7号外显子反向剪接所形成。
1.临床样品的采集
本实验室于2018年开始至今从河南大学附属淮河医院和开封肿瘤医院收集了31例原发性肝癌病人的肝癌组织和癌旁正常肝组织。组织标本通过液氮速冻，转存于-80℃冰箱。整个收集及后续实验过程符合医学伦理道德要求并严格遵循病例资料的保密原则。
2.RNA提取及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)
(1)提RNA
将取出的肝脏组织，肝癌组织和肝癌细胞系液氮速冻，保存在零下80℃的冰箱备用。取适量冻存组织，加tri-regent，组织破碎仪裂解细胞；加BCP分层细胞/组织裂解液，12000g 15min 4℃离心，将上清液转移到新的EP管中，加2-protocal(异丙醇)(2-protocal:上清液＝1:1)，上下混匀10多次，放置10min，让RNA充分析出；12000g，10min，4℃离心，弃上清，加入75％DEPC乙醇1ml，洗RNA一次，轻吹起来，7500g 5min 4℃离心；吸净上清液，放置超净台上干燥10min，加入20ul无核酸酶水并置于55℃水浴10分钟，待充分溶解后测定OD260和OD280吸收值，一般认为A260/A280在1.8-2.1之间可以初步判定总RNA质量较好，放置-20℃冰箱保存。
(2)RNA反转录cDNA
①加样顺序：H2O-RNA-Random hexamer
充分混匀，微离后，将PCR管放置PCR仪中，65℃，5min。
②反应体系：
混匀后，加入上述PCR管中，混匀，微离。将PCR管放到PCR仪中，42℃90min，95℃5min。反应结束后，cDNA放到-20℃冰箱中保存。
(3)引物设计
使用Primer Express Version3软件设计hsa-novel_circ_0006787的引物如下：
Forward primer CTGCTTTCACCTATCCCGCT
Reverse primer ATCGAAGCGGATGCCATAGT
(4)real-time PCR
将cDNA稀释至4ng/μL作为荧光定量PCR反应的模板。使用针对hsa-novel_circ_0006787、内参基因的正向引物，反向引物及2×SYBR Green qPCR Mixture，在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行扩增。
反应体系如下：
PCR条件为：50℃ 20秒；95℃ 10分钟；95℃ 1分钟；60℃ 1分钟，重复40个循环；测得样品hsa-miR-149-3p/内参基因扩增的CT值。
3.数据处理与分析
肝组织和肝癌组织样品hsa-novel_circ_0006787表达量的比值使用2-ΔΔCT法进行计算。具体结果如下表所示：
表1.荧光定量PCR检测肝组织和肝癌组织中hsa-novel_circ_0006787的表达水平。
表1中，“1-10”为Ⅰ期肝癌组织病例，“11-20”为Ⅱ期肝癌组织病例，“21-27”为Ⅲ期肝癌组织病例，“28-31”为Ⅳ期肝癌组织病例。
经SPSS软件进行统计分析，hsa-novel_circ_0006787在肝组织和肝癌组织中的表达水平具有显著差异(P＜0.001)。
结果见图2，qRT-PCR结果显示，与正常肝脏组织相比，hsa-novel_circ_0006787在肝癌组织中表达显著下调，并且和肝癌恶性程度相关。因此，hsa-novel_circ_0006787可以作为检测肝癌的标志物。
实施例2:过表达hsa-novel_circ_0006787的慢病毒载体抑制肝癌细胞的致瘤性
1.病毒载体构建
将hsa-novel_circ_0006787的cDNA序列插入到慢病毒表达载体，构建过表达hsa-novel_circ_0006787的病毒载体。hsa-novel_circ_0006787的序列图谱由发明人提供，病毒载体委托上海吉玛科技有限公司构建。
2.细胞系及细胞培养
取人肝癌细胞系PLC/PRF/5细胞，用添加10％胎牛血清、1％双抗的MEM培养基于5％CO2培养箱中37℃培养。
3.病毒转染
(1)慢病毒转染前18-24小时，将贴壁细胞以1×105/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×105/孔左右。
(2)第二天，用含有6μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原培养基，加入适量病毒悬液。37℃孵育。
(3)继续培养24小时，用新鲜培养基替换含有病毒的培养基。
(4)感染72～96h后，观察荧光表达情况。
(5)将细胞扩大到12孔板，加入含0.8μg/ml puromycin的培养基进行筛选培养。
(6)将经puromycin筛选的细胞扩大培养，一部分细胞收集后经荧光定量PCR检测过表达效果。
图3的qRT-PCR结果显示，慢病毒感染过表达hsa-novel_circ_0006787(图B)的效果是显著的。
4.无血清瘤球培养
不同处理后的PLC/PRF/5细胞用胰酶消化后，再用含20ng/mL碱性成纤维细胞生长因子、20ng/mL表皮生长因子、10ng/mL肝生长因子、2％b27、1％甲基纤维素和1％双抗的DMEM/F12培养基重悬，将细胞悬液以100个细胞/0.1ml种入无贴壁因子的96孔板,于5％CO2培养箱中37℃培养；每过5天，补充50ul培养基；10-15天形成直径200um左右微囊球，显微镜下统计瘤球数量。
5.克隆存活实验
(1)取实验组和对照组细胞消化离心，重悬细胞沉淀，计数。
(2)细胞悬液等比例梯度稀释至150个细胞/mL，6孔板中每个孔加入2mL细胞悬液，设置3个复孔，置于细胞培养箱中培养。
(3)培养约两周后长出肉眼可见细胞菌落，拿出。PBS洗涤3遍，75％乙醇固定5分钟，弃去75％乙醇，晾干。加入结晶紫染色液1mL，染色0.5h。移弃结晶紫染色液，PBS清洗2遍，将染色完毕的细胞板置于白纸上拍照。
(4)集落克隆结果分析：计算集落克隆数目，进行结果趋势比较。
6.Transwell细胞迁移实验
(1)将细胞进行消化离心，弃去培养基用1mL含0.05％-0.2％BSA的无血清DMEM培养基重悬细胞沉淀，进行计数，将细胞制成密度为2.5×105的细胞悬液。
(2)先将小室用无血清MEM进行润湿，取600μL空MEM至24孔板中，将小室轻轻放置孔中，接着吸取200μL MEM培养基轻轻滴加至小室内部。
(3)小室湿润之后弃去小室上、下的MEM培养基。在24孔板中加入600μL MEM完全培养基，用镊子将小室轻轻放置孔中(切勿在小室底部产生气泡)，向小室中滴加100μL混匀后的细胞悬液，即每孔内含有25000个细胞，然后将培养板放在培养箱中进行培养。
(4)培养44h时将小室取出收集结果，先将小室放置在新的外用24板中，按照上室体积为100μL，下室体积为600μL的标准先将小室用PBS进行轻柔清洗三遍，接着置于4％多聚甲醛中固定10min，之后再用PBS清洗三遍，最后用0.2％的结晶紫进行染色20min，染色结束后用缓慢的流水冲洗并用棉签擦净小室上表面的细胞，然后用显微镜拍照观察传至小室下的细胞情况，每个样品随机拍5张，通过计算平均值进行统计。
7.异种移植瘤实验
(1)裸鼠准备，雄性5周龄BALB/c Nude小鼠，体重18-20g，购买自北京维通利华实验动物技术有限公司(许可证号：SYXK(京)2017-0022)，饲养SPF级实验动物饲养房，12:12光照/暗循环、恒温恒湿培养。
(2)细胞准备，扩大培养实验组与空白对照组细胞，消化离心收集细胞，细胞计数。将细胞悬液配制为密度1×106个/150uL的细胞悬液。
(3)成瘤过程，将细胞重悬液注射至裸鼠左右两腹侧腋窝和腹股沟皮下部位，每个部位注射1×106个细胞。注射后维持原饲养环境条件，每隔两天用游标卡尺测量裸鼠肿瘤体积大小，记录。肿瘤生长到1cm3后，乙醚吸入麻醉后处死裸鼠，拍照。取出瘤体，称重，拍照。
8.数据处理与分析
使用SPSS 23.0软件对结果进行统计分析。使用Graph Pad Prism 7.0软件作图。根据情况采用配对t检验进行统计学分析。数据以至少三次独立实验的均数±标准差的形式表示，P＜0.05被认为有统计学意义。
图4的结果显示，过表达hsa-novel_circ_0006787后抑制肝癌细胞致瘤性。图A为过表达hsa-novel_circ_0006787能降低肝癌细胞瘤球的形成能力。图B为过表达hsa-novel_circ_0006787能降低肝癌细胞克隆存活能力。图C为过表达hsa-novel_circ_0006787能降低肝癌细胞的侵袭迁移能力。图D为过表达hsa-novel_circ_0006787能降低肝癌细胞在裸鼠体内的成瘤能力。
从瘤球形成、克隆存活、侵袭迁移能力和异种移植瘤的形成等多个实验验证，过表达hsa-novel_circ_0006787的慢病毒载体能抑制肝癌细胞的致瘤性。hsa-novel_circ_0006787可以作为靶向治疗肝癌的一个新靶点。
实施例3:敲低hsa-novel_circ_0006787促进肝癌细胞的致瘤性来反向验证hsa-novel_circ_0006787可以作为治疗肝癌的新靶点
1.小干扰RNA(siRNA)构建
靶向hsa-novel_circ_0006787反向剪接位点的特异性小干扰RNA(siRNA)及阴性对照(si-NC)由吉玛基因(上海)合成，hsa-novel_circ_0006787的序列图谱由发明人提供。siRNA靶序列如下：
TGAATACTATGGCATCCGC
2.siRNA转染
利用Lipofectamine 3000(Invitrogen，Carlsbad，CA，USA)将50nM的siRNA转染入肝癌细胞中。荧光定量PCR检测干扰效果。
图3的qRT-PCR结果显示，siRNA敲低hsa-novel_circ_0006787(图A)的效果是显著的。
3.CCK-8实验
(1)将细胞消化离心收集后进行细胞计数。将细胞悬液调整至浓度8×104/mL，将细胞悬液混匀后铺入96孔板中，每孔为100μL细胞悬液，即每孔8000个细胞。每组细胞4个复孔，此外每个板子设置两个含有培养基的孔作为空白对照(每孔同样加入100μL空培养基)。
(2)在细胞培养8h左右待细胞贴壁后，向第一个细胞培养板中每孔加10μL CCK-8反应液，37℃避光孵育2h，检测450nm处的OD值，作为第一天的初始值。
(3)接下来的四天需在相同时间点加CCK8试剂测OD值观察细胞的增殖变化。
(4)连续五天检测细胞OD值后，用Graphpad Prime 6软件进行数据分析。
无血清瘤球实验，克隆存活实验，Transwell细胞迁移实验及数据处理和分析同上。
图5结果显示，敲低hsa-novel_circ_0006787后促进肝癌细胞致瘤性。图A为敲低hsa-novel_circ_0006787能增强肝癌细胞瘤球的形成能力。图B为敲低hsa-novel_circ_0006787能增强肝癌细胞克隆存活能力。图C为敲低hsa-novel_circ_0006787能促进肝癌细胞的增殖能力。图D为敲低hsa-novel_circ_0006787能促进肝癌细胞的侵袭迁移能力。
从瘤球形成、克隆存活、侵袭迁移能力和CCK-8等多个实验验证，敲低hsa-novel_circ_0006787能促进肝癌细胞的致瘤性。反向验证了hsa-novel_circ_0006787可以作为靶向治疗肝癌的一个新靶点。
以上所述的实施例是示例性的，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，对于本领域的普通技术人员，在不脱离本发明技术原理的前体下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 内蒙古医科大学；河南大学；鹤壁市人民医院
<120> 一种hsa-novel_circ_0006787分子在肝癌治疗中的应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 352
<212> DNA
<213> hsa-novel_circ_0006787
<400> 1
ggcatccgct tcgatcctga aattccgcaa acactacgac tagagtttgc taaggcaaac 60
acgaagatgg ccaagaacaa actcgtaggg actccaaacc ccagtactcc tctgcccaac 120
actgtacctc agttcattgc cagagagcca tatgagctca cagtgcctgc actttacccc 180
agtagccctg aagtgtgggc cccgtaccct ctgtacccag cggagttagc gcctgctcta 240
cctcctcctg ctttcaccta tcccgcttca ctgcatgccc agatgcgctg gctccctccc 300
tccgaggcta cttctcaggg ctggaagtcc cgtcagttct gctgaatact at 352
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> Forward primer
<400> 2
ctgctttcac ctatcccgct 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> Reverse primer
<400> 3
atcgaagcgg atgccatagt 20

Claims (9)

1.检测hsa-novel_circ_0006787分子表达水平的引物在制备诊断肝癌的产品中的应用，其特征在于，所述的hsa-novel_circ_0006787分子核苷酸序列为SEQ ID NO.1。
2.如权利要求1所述的检测hsa-novel_circ_0006787分子表达水平的引物在制备诊断肝癌的产品中的应用，其特征在于，所述诊断肝癌的产品包括利用TaqMan探针检测hsa-novel_circ_0006787表达量时使用的PCR扩增引物。
3.如权利要求1所述的检测hsa-novel_circ_0006787分子表达水平的引物在制备诊断肝癌的产品中的应用，其特征在于，所述诊断肝癌的产品包括利用双杂交探针检测hsa-novel_circ_0006787表达量时使用的PCR扩增引物。
4.如权利要求1所述的检测hsa-novel_circ_0006787分子表达水平的引物在制备诊断肝癌的产品中的应用，其特征在于，所述诊断肝癌的产品包括利用复合探针检测hsa-novel_circ_0006787表达量时使用的PCR扩增引物。
5.如权利要求1所述的检测hsa-novel_circ_0006787分子表达水平的引物在制备诊断肝癌的产品中的应用，其特征在于，所述诊断肝癌的产品包括芯片。
6.如权利要求1所述的检测hsa-novel_circ_0006787分子表达水平的引物在制备诊断肝癌产品中的应用，其特征在于，所述诊断肝癌的产品包括试剂盒。
7.如权利要求1所述的检测hsa-novel_circ_0006787分子表达水平的引物在制备诊断肝癌产品中的应用，其特征在于，所述诊断肝癌的产品包括试纸。
8.hsa-novel_circ_0006787分子在制备治疗肝癌药物中的应用，其特征在于，所述的hsa-novel_circ_0006787分子核苷酸序列为SEQ ID NO.1。
9.如权利要求8所述的hsa-novel_circ_0006787分子在制备治疗肝癌药物中的应用，其特征在于，所述治疗肝癌药物为增强hsa-novel_circ_0006787分子表达水平的基因药物。
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