CN106456774A - Nras突变的癌症的治疗中使用的egfr抑制剂及mek抑制剂的组合 - Google Patents

Nras突变的癌症的治疗中使用的egfr抑制剂及mek抑制剂的组合 Download PDF

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Abstract

本发明涉及用于通过鉴定E63K NRAS突变、G12V NRAS突变或NRAS基因拷贝数的增加，来鉴定对癌症疗法的抗性的方法。本发明的另一方面涉及可以克服此类抗性机制的治疗方法，该方法包括与MEK抑制剂组合的EGFR抑制剂用于治疗癌症的用途，该癌症是包含选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变的癌症，和/或包含NRAS基因拷贝数的增加的癌症。

Description

NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂及MEK抑制剂的 组合
发明领域
本发明涉及用于预测对基于EGFR抑制剂的癌症疗法的抗性的发展的方法。本发明进一步涉及用于为患者选择适合的癌症治疗方案的方法，并且涉及用于治疗某些耐药的癌症的方法，连同用于在此类方法中使用的产品。具体而言，本发明涉及用于预测对EGFR抑制剂介导的癌症疗法的抗性的发展的方法和产品，并且涉及用于使用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合治疗此类抗性的癌症的方法和产品。
发明背景
表皮生长因子受体(EGFR)已被鉴定为用于治疗多种癌症(特别是实体瘤)的靶标，因为它参与调节在癌细胞的增殖和存活中重要的细胞功能。已经在膀胱癌、乳腺癌、恶性胶质瘤、头颈癌、肺癌以及胃癌中观察到EGFR的表达增加。癌症的发展可例如与EGFR中的激活突变相关联，并且EGFR的高表达经常与预后不良相关。
EGFR中的激活癌性突变经常是外显子中的体细胞功能获得性突变，这些外显子编码所述受体的酪氨酸激酶结构域。在非小细胞肺癌(NSCLC)患者的肺腺癌中确定的此类突变的实例包括多核苷酸在19号外显子中的框内缺失(涉及Leu-Arg-Glu-Ala四个氨基酸的消除)，和在21号外显子中在核苷酸2573处的单核苷酸取代(T→G)，导致在位置858处精氨酸取代亮氨酸(L858R)。已经发现这些突变能提高对EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的敏感性。因此，靶向EGFR的一线疗法通常基于对突变体受体的酪氨酸激酶活性的抑制。
针对具有EGFR中的激活突变的患者而建立的一线疗法包括EGFR TKI的使用，如吉非替尼(吉非替尼)(IressaTM)、埃罗替尼(埃罗替尼)(TarcevaTM)和阿法替尼(afatinib)(GilotrifTM)。然而，尽管对这些EGFR TKI有初始响应，但由于获得性抗性，显著比例的患者最终显示疾病进展，这在许多情况下已显示出与EGFR的额外突变(称为T790M)相关联。
获得性抗性已经导致另外的TKI的发展，如AZD9291、CO-1686和WZ4002，它们抑制在酪氨酸激酶结构域中具有激活突变的EGFR受体，这些激活突变如外显子19del和L858R突变、连同临床前模型中的T790M突变。然而，令人担忧的是肿瘤可能最终发展出对这些药物的抗性，还限制了它们在患者中的长期有效性。
鉴于此，需要确定在癌症疗法中对EGFR抑制剂的获得性抗性的基本机制，并尝试提供可以克服这些另外的抗性机制的新的治疗方法。
发明概述
基于具有癌症细胞群的实验室实验，本发明的发明人已经发现，在一些患者中对EGFR抑制剂介导的癌症疗法的抗性可与神经母细胞瘤RAS病毒癌基因同源基因(NRAS)(该NRAS编码神经母细胞瘤RAS病毒癌基因同源(NRAS)蛋白质)中的遗传异常相关联，通过在所编码的蛋白质中产生密码子取代的某些突变或通过该NRAS基因的拷贝数增加显现出来。根据本发明的一个方面，对EGFR抑制剂介导的癌症疗法的抗性可与E63K NRAS突变和/或G12VNRAS突变相关联。
该NRAS蛋白激活细胞内的Ras、Raf、MAP蛋白激酶/胞外信号调节的激酶(MEK)、胞外信号调节的激酶(ERK)途径(Ras/Raf/MEK/ERK途径)。该途径是EGFR受体的下游，并在调节取决于细胞环境的各种细胞功能中起到中心作用，这些细胞功能包括细胞增殖、分化、存活、永生化、侵袭和血管发生(在Peyssonnaux和Eychene，细胞生物学(Biology of theCell)，2001，93:3-62中综述)。实际上，该Ras-依赖的Raf-MEK-MAPK级联是关键信号传导途径中的一个，其负责将促有丝分裂的信号和侵袭信号从细胞表面输送至细胞核，导致基因表达和细胞命运的变化。
先前许多NRAS突变已被鉴定为在一些癌症中发生。然而，先前没有描述E63K突变，并且先前没有将本发明的E63K/G12V突变与肺癌治疗中对EGFR抑制的抗性相关联。
不希望受到理论的束缚，据信在嗜EGFR途径的细胞中，此途径的抑制也抑制(下游)Ras/Raf/MEK/ERK途径。然而，长期用EGFR抑制剂处理的细胞中发现了可替代性机制以规避EGFR抑制(例如，通过在NRAS中激活突变)，这种机制能够使细胞在EGFR信号传导缺失的情况下生存，并因此允许患者中的疾病进展。
通过检测患者中呈现的NRAS突变的一个或多个(或者更具体地说，检测取自患者的适合组织或血样中的相关的一个或多个突变)，有可能确定已经发展或预测要发展癌症形式(该癌症形式对EGFR抑制剂介导的疗法具有抗性)的患者。
发明人已进一步发现，与两个亲本细胞系(对EGFR抑制剂和NRAS野生型敏感)相比，并与NRAS野生型的抗EGFR抑制剂细胞系相比，已经发展对基于本文所描述NRAS突变的EGFR抑制剂具有抗性的细胞惊人地显示出对MEK抑制剂(其抑制Ras/Raf/MEK/ERK途径)的增加的敏感性。出人意料的是，似乎这一增加的敏感性取决于保持EGFR抑制与MEK抑制两者的组合。不希望受到理论的束缚，据信在由EGFR抑制剂造成的持续抑制缺失的情况下，EGFR突变体细胞可以返回EGFR信号传导，使得这些细胞不再对MEK抑制敏感。
如在本文所描述的在其癌症中携带NRAS突变的抗EGFR抑制剂癌症患者可以因此受益于使用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合进行的治疗。以这种方式，EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合在已经接受或正在接受EGFR抑制疗法的癌症患者中提供了有效的后续(例如二+线)疗法。
即使在还没有用EGFR抑制剂治疗的患者中，EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合也可以提供针对EGFR相关癌症的有效的一线疗法。在此类患者中，联合治疗可以起延迟或防止基于NRAS(和RAS/RAF/MEK/ERK途径)的激活的抗性的发展。
更具体地是，本发明的发明人已经确定，包括NRAS E63K、G12V以及G12R突变的抗EGFR-抑制剂的细胞种群均显示出对用MEK抑制剂和EGFR抑制剂的组合进行的治疗的敏感性。如技术人员所理解并在下文更详细地解释的，G12V和G12R的参与表明在NRAS基因的位置288或289处的任何单个突变都可以导致对MEK抑制剂与EGFR抑制剂的组合的敏感性。总体而言，技术人员将理解的是，除了已经通过下文实验性地描述的G12V和G12R NRAS蛋白突变，在NRAS基因(例如，来自cDNA)的位置288或289处可检测的单突变还对应于NRAS蛋白突变G12A、G12D、G12S以及G12C。因此，在本发明的一方面中，提供了治疗包含上述任何突变的存在/检测的抗EGFR抑制剂的癌症的方法，其中该治疗包括用MEK抑制剂与EGFR抑制剂的组合进行的治疗。
因此，在一方面中，本发明提供了用于选择适合用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合治疗的癌症患者的方法，该方法包括；
(a)测试癌症患者以确定NRAS突变的存在；并且
(b)如果NRAS突变存在，那么将患者选择为适合用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合治疗；
其中该NRAS突变选自下组，该组由以下各项组成：E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S以及G12C。
在一个实施例中，该NRAS突变选自E63K、G12V以及G12R。
在一个实施例中，该NRAS突变选自G12V、G12R、G12A、G12D、G12S以及G12C。
在一个实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S以及G12C。
在一个实施例中，该NRAS突变选自G12V和G12R。
在一个实施例中，该NRAS突变是G12R。
在一个实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或它们中任一者的药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼(selumetinib)或其药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在一方面中，本发明提供了用于选择适合用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合治疗的癌症患者的方法，该方法包括；
(a)测试癌症患者以确定NRAS激活突变的存在；并且
(b)如果NRAS激活突变存在，那么将患者选择为适合用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合治疗；
其中该NRAS激活突变选自下组，该组由以下各项组成：NRAS E63K突变；和NRASG12V突变。
在另一方面中，本发明提供了用于选择适合用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合治疗的癌症患者的方法，该方法包括；
(a)测试癌症患者以确定NRAS拷贝数增加的存在；并且
(b)如果NRAS拷贝数增加存在，那么将患者选择为适合用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合治疗。
在另一方面中，本发明提供了用于为癌症患者选择适合的癌症治疗方案的方法，该方法包括：
(a)在患者中确定NRAS突变的存在；并且
(b)如果NRAS突变存在，那么为患者选择癌症治疗方案，该方案包括EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合的提供；
其中该NRAS突变选自下组，该组由以下各项组成：E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S以及G12C。
在一个实施例中，该NRAS突变选自E63K、G12V以及G12R。
在一个实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S以及G12C。
在一个实施例中，该NRAS突变选自G12V、G12R、G12A、G12D、G12S以及G12C。
在一个实施例中，该NRAS突变选自G12V和G12R。
在一个实施例中，该NRAS突变是G12R。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或它们中任一者的药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另一方面中，本发明提供了用于为癌症患者选择适合的癌症治疗方案的方法，该方法包括：
(a)在患者中确定NRAS突变的存在；并且
(b)如果NRAS突变存在，那么为患者选择癌症治疗方案，该方案包括EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合的提供；
其中该NRAS激活突变选自下组，该组由以下各项组成：E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S以及G12C。
在一个实施例中，该NRAS突变选自E63K、G12V以及G12R。
在一个实施例中，该NRAS突变选自G12V、G12R、G12A、G12D、G12S以及G12C。
在一个实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S以及G12C。
在一个实施例中，该NRAS突变选自G12V和G12R。
在一个实施例中，该NRAS突变是G12R。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或它们中任一者的药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另一方面中，本发明提供了用于为癌症患者选择适合的癌症治疗方案的方法，该方法包括：
(a)在患者中确定NRAS激活突变的存在；并且
(b)如果NRAS激活突变存在，那么为患者选择癌症治疗方案，该方案包括EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合的提供；
其中该NRAS激活突变选自下组，该组由以下各项组成：NRAS E63K突变；和NRASG12V突变。
在另一方面中，本发明提供了用于为癌症患者选择适合的癌症治疗方案的方法，该方法包括：
(a)在患者中确定NRAS拷贝数增加的存在；并且
(b)如果NRAS拷贝数增加存在，那么为患者选择癌症治疗方案，该方案包括EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合的提供；
在另一方面中，本发明提供了用于在癌症患者中预测对EGFR抑制剂的治疗效果的获得性抗性的发展的方法，该方法包括：
(a)在患者中确定NRAS激活突变的存在；并且
(b)如果NRAS激活突变存在，那么鉴定该癌症为已经具有或将要具有抗性的癌症；
其中该NRAS激活突变选自下组，该组由以下各项组成：NRAS E63K突变；和NRASG12V突变。
在另一方面中，本发明提供了用于在癌症患者中预测对EGFR抑制剂的治疗效果的获得性抗性的发展的方法，该方法包括：
(a)在患者中确定NRAS拷贝数增加的存在；并且
(b)如果NRAS拷贝数增加存在，那么鉴定该癌症为已经具有或将要具有抗性的癌症。
在另一方面中，本发明提供了用于在患者中治疗癌症的方法，该方法包括：
(a)在患者中确定NRAS激活突变的存在；并且
(b)如果NRAS激活突变存在，那么用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合治疗该患者；
其中该NRAS激活突变选自下组，该组由以下各项组成：NRAS E63K突变；和NRASG12V突变。
在另一方面中，本发明提供了用于在患者中治疗癌症的方法，该方法包括：
(a)在患者中确定NRAS拷贝数增加的存在；并且
(b)如果NRAS拷贝数增加存在，那么用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合治疗该患者。
在本发明的任何方面的具体实施例中，该患者已经接受或正在接受EGFR抑制剂的治疗。在其他实施例中，在从患者获得的适合的生物样本上进行患者体内的NRAS基因/NRAS蛋白异常的测定。这个样本可以先前被处理或作为治疗方法的一部分被处理。这个样本将典型地包含肿瘤细胞、肿瘤核酸或由此衍生的核酸。
在另一方面中，本发明提供了用于测定包括EGFR抑制剂和MEK抑制剂的联合治疗治疗患有癌症的患者体内的癌症的有效性的可能性的方法，该方法包括：测定获得自所述患者的生物样本的NRAS基因是否包括至少一种核酸变异，该核酸变异选自：
a)一种突变，该突变导致赖氨酸在NRAS的位置63处代替谷氨酸的存在；
b)一种突变，该突变导致缬氨酸、精氨酸、丙氨酸、门冬氨酸、丝氨酸、或半胱氨酸在NRAS的位置12处代替谷氨酸的存在；或
c)NRAS基因拷贝数的增加；
其中该生物样本是分离自包含肿瘤细胞或来自肿瘤细胞的核酸的患者的组织或体液的样本，并且其中该至少一种核酸变异的存在表明包括EGFR酪氨酸激酶抑制剂和MEK抑制剂的联合治疗可能是有效的。
因此，本发明提供了用于测定包括EGFR酪氨酸激酶抑制剂和MEK抑制剂的联合治疗治疗患有癌症的患者体内的癌症的有效性的可能性的方法，该方法包括：测定获得自所述患者的生物样本的NRAS基因是否包括至少一种核酸变异，该核酸变异选自：
a)腺嘌呤在NRAS cDNA中的对应于碱基441的位置处替换鸟嘌呤的存在；
b)在NRAS cDNA中的对应于碱基288的位置处核酸的存在而不是鸟嘌呤的存在；
c)在NRAS cDNA中的对应于碱基289的位置处核酸的存在而不是鸟嘌呤的存在；或
d)NRAS基因拷贝数的增加；
其中该生物样本是分离自包含肿瘤细胞或来自肿瘤细胞的核酸的患者的组织或体液的样本，并且其中该至少一种核酸变异的存在表明包括EGFR酪氨酸激酶抑制剂和MEK抑制剂的联合治疗可能是有效的。
在一个实施例中，该至少一种核酸变异选自：
a)腺嘌呤在NRAS cDNA中的对应于碱基441的位置处替换鸟嘌呤的存在；
b)胸腺嘧啶在NRAS cDNA中的对应于碱基289的位置处替换鸟嘌呤的存在；或
c)NRAS基因拷贝数的增加。
在一个实施例中，该至少一种核酸变异选自：
a)腺嘌呤在NRAS cDNA中的对应于碱基441的位置处替换鸟嘌呤的存在；
b)胸腺嘧啶在NRAS cDNA中的对应于碱基289的位置处替换鸟嘌呤的存在；
c)胞嘧啶在NRAS cDNA中的对应于碱基288的位置处替换鸟嘌呤的存在；或
d)NRAS基因拷贝数的增加。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或它们中任一者的药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另一方面中，本发明提供了用于测定包括EGFR酪氨酸激酶抑制剂和MEK抑制剂的联合治疗治疗患有癌症的患者体内的癌症的有效性的可能性的方法，该方法包括：测定获得自所述患者的生物样本的NRAS基因是否包括至少一种核酸变异，该核酸变异选自：
a)一种突变，该突变导致在NRAS的位置63处赖氨酸取代谷氨酸或在NRAS的位置12处缬氨酸取代甘氨酸；或
b)NRAS基因拷贝数的增加；
其中该生物样本是分离自包含肿瘤细胞或来自肿瘤细胞的核酸的患者的组织或体液的样本，并且其中该至少一种核酸变异的存在表明包括EGFR酪氨酸激酶抑制剂和MEK抑制剂的联合治疗可能是有效的。
在另一方面中，本发明提供了用于在患有癌症的患者体内治疗癌症的方法，该方法包括：(1)测定获得自所述患者的生物样本的NRAS基因是否包括至少一种核酸变异，该核酸变异选自：
a)一种突变，该突变导致在NRAS的位置63处赖氨酸取代谷氨酸或在NRAS的位置12处缬氨酸取代甘氨酸；或
b)NRAS基因拷贝数的增加；
并且(2)如果核酸变异存在，那么用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合治疗该患者；其中该生物样本是分离自包含肿瘤细胞或来自肿瘤细胞的核酸的患者的组织或体液的样本。
在另一方面中，本发明提供了用于测定包括EGFR酪氨酸激酶抑制剂和MEK抑制剂的联合治疗治疗患有癌症的患者体内的癌症的有效性的可能性的方法，该方法包括：测定获得自所述患者的生物样本的NRAS基因或蛋白质是否包括至少一种变异，该变异选自：
a)一种突变，该突变导致在NRAS的位置63处赖氨酸取代谷氨酸或在NRAS的位置12处缬氨酸取代甘氨酸；或
b)NRAS基因拷贝数的增加；
其中该生物样本是分离自包含肿瘤细胞或来自肿瘤细胞的核酸的患者的组织或体液的样本，并且其中该至少一种核酸变异的存在表明包括EGFR酪氨酸激酶抑制剂和MEK抑制剂的联合治疗可能是有效的。
在另一方面中，本发明提供了用于在患有癌症的患者体内治疗癌症的方法，该方法包括：(1)测定获得自所述患者的生物样本的NRAS基因或NRAS蛋白是否包括至少一种变异，该变异选自：
a)一种突变，该突变导致在NRAS的位置63处赖氨酸取代谷氨酸或在NRAS的位置12处缬氨酸取代甘氨酸；或
b)NRAS基因拷贝数的增加；
并且(2)如果该变异存在，那么用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合治疗该患者；其中该生物样本是分离自包含肿瘤细胞或来自肿瘤细胞的核酸的患者的组织或体液的样本。
在一个具体的实施例中，在测定来自患者的样本是否包括至少一种核酸变异之前，将患者用EGFR抑制剂处理。
附图说明
图1：抗性时间-吉非替尼浓度对PC9细胞获取的时间的散点图，PC9细胞在吉非替尼存在下在该浓度下生长，以达到约80％融合(每次达到这一融合时吉非替尼浓度加倍)。
图2：实例剂量应答曲线-针对用司美替尼滴定处理的PC9 NRAS(WT)细胞的实例剂量应答曲线。
图3：实例剂量应答曲线-针对用司美替尼滴定处理的PC9抗AZD9291NRAS(E63K)细胞的实例剂量应答曲线。
图4：实例剂量应答曲线-针对用司美替尼滴定处理的PC9抗吉非替尼NRAS E63K细胞的实例剂量应答曲线。
图5：实例剂量应答曲线-针对用司美替尼滴定处理的PC9抗阿法替尼NRAS(WT)增加细胞的实例剂量应答曲线。
图6：实例剂量应答曲线-针对用司美替尼滴定处理的PC9抗AZD9291NRAS(G12V)细胞的实例剂量应答曲线。
图7：Ras激活测定-蛋白质印迹分析显示，在PC9和具有NRAS E63K(PC9 AZDR_5细胞)和G12V(PC9 AZDR_2细胞)突变的PC9抗AZD9291细胞系中的活性NRAS水平，随后用或不用160nM AZD929处理这些细胞系2小时。
图8：WT NRAS和E63K NRAS的siRNA敲低对下游信号传导的影响-NRAS或KRAS表达的48小时的siRNA介导的敲低对以下项的影响：指示以下蛋白质的活性的磷酸化：磷酸化的EGFR(P EGFR)；磷酸化的ERK(P ERK)；NRAS；KRAS；以及GAPDH(加载对照)；在PC9细胞中，在具有NRAS E63K突变的PC9抗AZD9291细胞(AKA.PC9 AZDR_5)中；以及在具有NRAS E63K突变的PC9抗吉非替尼细胞(AKA.PC9 GR_2)中。
图9：WT NRAS和E63K NRAS的siRNA敲低对增殖的影响-NRAS或KRAS表达的96小时的siRNA介导的敲低对以下各项中的细胞生长的影响：在PC9细胞中，在具有NRAS E63K突变的PC9抗AZD9291细胞(AKA.PC9 AZDR_5)中；以及在具有NRAS E63K突变的PC9抗吉非替尼细胞(AKA.PC9 GR_2)中。
图10：PC9细胞中E63K NRAS的外源过度表达对由吉非替尼或AZD9291造成的生长抑制的抗性的影响-在100nM AZD9291或300nM吉非替尼不存在或存在下，E63K突变的NRAS的过度表达对PC9细胞生长的影响。
序列说明
在本说明书中提及多种序列。具体而言：
SEQ ID NO:1提供了EGFR的氨基酸序列；
SEQ ID NO:2提供了编码EGFR的cDNA序列；
SEQ ID NO:3提供了NRAS的氨基酸序列；
SEQ ID NO:4提供了编码NRAS的cDNA序列；
SEQ ID NO:5提供了MEK1的氨基酸序列；
SEQ ID NO:6提供了编码MEK1的cDNA序列；
SEQ ID NO:7提供了MEK2的氨基酸序列；并且
SEQ ID NO:8提供了编码MEK2的cDNA序列。
发明详述
在本申请的整个说明书和权利要求书中，单数包括复数，除非上下文另有要求。具体而言，使用不定冠词的情况下，本说明书应被理解为考虑复数以及单数，除非上下文另有要求。
除非彼此不相容，否则，本发明特定方面、本发明的实施例或实例所描述的特征、整体、性质、化合物、化学部分或基团应当理解为也适用于本文中所述的任何其他方面、实施例或实例。因此，本文所述的所有实施例、定义、方面和权利要求可以彼此以任意组合进行组合(考虑到上下文，除非这种组合显然是不合适的)，以提供另外的实施例、方面或权利要求。
在本申请的整个说明书和权利要求书中，词语“包括(comprise)”和“包含(contain)”以及这些词的变体，如“包含(comprising)”和“包含(comprises)”，可以意指“包括但不限于”，并且一般不排除其他部分、添加剂、组分、整数或步骤。
除非另有所指，否则根据常规用法使用技术术语。
根据惯例，通常以斜体列举基因并且以普通文本列举蛋白质。根据本技术领域中良好建立的惯例，本文中的基因的名称以斜体文本书写，并且蛋白质的名称以普通文本(即，非斜体)书写。因此，“NRAS”用于表示NRAS蛋白质并且“NRAS”用于表示该基因。虽然在本文中已经做出努力以根据此惯例表示NRAS基因或NRAS蛋白质，但本领域技术人员将理解，基于科学语境，任何对“NRAS”或“NRAS”的引用是否不正确。
分子生物学中常用术语的定义可以在以下各项中找到：本杰明·列文(BenjaminLewin)，《基因V》(Genes V)，由牛津大学出版社(Oxford University Press)出版，1994(ISBN 0-19-854287-9)；肯德鲁(Kendrew)等人(编辑)，《分子生物学百科全书》(TheEncyclopedia of Molecular Biology)，由布莱克威尔科学出版公司(Blackwell ScienceLtd.)出版，1994(ISBN 0-632-02182-9)；以及罗伯特·迈尔(Robert A.Meyers)(编辑)，《分子生物学与生物技术：综合案头参考》(Molecular Biology and Biotechnology:aComprehensive Desk Reference)，由VCH出版公司(VCH Publishers，Inc.)出版，1995(ISBN 1-56081-569-8)。
在本说明书中提及的所有文献出版物和专利文件在此通过引用并入本说明书。
如上文所述的，本发明的发明人已经确定的是，在癌症患者中对EGFR抑制剂介导的疗法的抗性可以与一种或多种NRAS突变相关联，这些突变选自下组，该组由以下各项组成：NRAS E63K突变；和NRAS G12V突变。这些突变据信是NRAS激活突变。这些发明人还已经发现，在癌症患者中对EGFR抑制剂介导的疗法的抗性可以与NRAS拷贝数的增加相关联。此外，这些发明人已经发现，拥有这些NRAS激活突变或NRAS拷贝数增加中的一个或多个的癌症患者可有效的用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合进行治疗，即使该患者展示出(或将展示出)对单独的EGFR抑制剂介导的疗法的抗性。此外，这些发明人已经发现，拥有G12R NRAS突变的癌症患者可有效的用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合进行治疗，即使该患者展示出(或将展示出)对单独的EGFR抑制剂介导的疗法的抗性。本发明允许对癌症患者的更有效的靶向治疗，并且具体而言，允许更有效的癌症的鉴别和治疗(这些癌症已经发展、或将发展对EGFR抑制剂的效果的抗性)。
因此在一方面中，本发明的方法可以用于预测在癌症患者中对EGFR抑制剂的治疗效果的获得性抗性的发展。在这样的方法中，对患者进行测试以确定如本文所描述的NRAS突变或NRAS拷贝数增加的存在，并且如果患者显示出拥有根据本发明的NRAS激活突变或NRAS拷贝数增加，那么癌症被鉴定为正在发展获得性抗性。这样的患者可被描述为对于本文所述的NRAS激活突变或NRAS拷贝数增加是阳性的。
在另一方面中，本发明的方法可以用于选择适合用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合治疗的癌症患者。在这样的方法中，对癌症患者进行测试以确定如本文所描述的NRAS突变或NRAS拷贝数增加的存在，并且如果本文所述的NRAS突变或NRAS拷贝数增加中的一个或多个是存在的，那么将癌症患者选择为适合进行治疗。在一个实施例中，当检测以确定NRAS突变或NRAS拷贝数增加的存在时，该癌症患者是一个已经接受或正在接受EGFR抑制剂的治疗的癌症患者。
本发明的方法还可以用于为癌症患者选择适合的癌症治疗方案。在此方法中，对癌症患者进行测试以确定如本文所述的NRAS突变或NRAS拷贝数增加的存在，并且如果NRAS突变或NRAS拷贝数增加是存在的，那么选择包括提供了EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合的治疗方案。在一个实施例中，当检测以确定NRAS突变的存在时，该癌症患者是一个已经接受或正在接受EGFR抑制剂的治疗的癌症患者。
癌症
许多癌症与EGFR的异常或过度表达和/或其具体配体(例如转化生长因子受体α)的过度表达相关(吉利克(Gullick)，Br Med Bull.47:87-98，1991；Modijtahedi和迪恩(Dean)，国际肿瘤学杂志(Int.J.Oncol.)4:277-296，1994；所罗门(Salomon)等人，CritRev Oncol Hematol.19:183-232，1995)。EGFR的过度表达已与许多人类癌症(包括NSCLC)中的不利的预后相关联。
在一个实施例中，“癌症”是指EGFR相关联的癌症。
用于鉴定和诊断EGFR相关的癌症的方法是本领域的技术人员熟知的。举例来说，各种方法的详情和它们可以使用的环境提供于埃里森(Ellison)等人，临床病理学杂志(JClin Pathol)2013；66:2 79-89中。
例如，EGFR相关的癌症可以是已经响应于或响应于用EGFR抑制剂(如本文所述的任何EGFR抑制剂)治疗的癌症。
EGFR相关的癌症可以是已经或将对如本文所述的一种或多种EGFR抑制剂的治疗效果具有抗性的癌症。此类抗性可以与EGFR中的突变(如T790M)相关联。
EGFR相关的癌症可以是(或以前是)至少部分依赖于EGFR信号传导途径的癌症(或肿瘤)。
EGFR相关的癌症可以与EGFR中的一种或多种突变相关联。此类EGFR突变可以将细胞转化为癌性状态。
与癌症相关联的EGFR突变可以是EGFR激活突变。此类突变通常导致EGFR蛋白的过度表达和/或过度活性。EGFR的任何活性可以被影响。突变可以例如发生于核苷酸序列(例如在编码EGFR的DNA中)中和/或于氨基酸序列(例如在EGFR蛋白的氨基酸序列中)中。突变可以发生于编码不同蛋白质的核苷酸序列或不同蛋白质的氨基酸序列中，其中该突变的作用是产生EGFR蛋白质的过度表达和/或过度活性。典型地，突变是体细胞突变。
突变可以例如是EGFR的酪氨酸激酶结构域中的体细胞功能获得性突变。一些这样的突变增强了癌症对EGFR酪氨酸激酶抑制剂的敏感性。这些突变通常驻留在EGFR基因的外显子18-21内。参见，例如WO 2005/094397和WO 2005/118876。这些突变的实例包括多核苷酸在19号外显子中的框内缺失(涉及亮氨酸-精氨酸-谷氨酸-丙氨酸四个氨基酸的消除)，和在21号外显子中在核苷酸2573处的单核苷酸取代(T→G)，导致在位置858处(L858R)精氨酸取代亮氨酸。这些突变特别地与肺癌，例如非小细胞肺癌(NSCLC)相关联。
L858R是本发明的上下文中特别感兴趣的许多EGFR突变中的一个，因为它经常与响应于EGFR酪氨酸激酶抑制剂(如埃罗替尼、吉非替尼、阿法替尼和AZD9291)的癌症相关联(另外的详情包括在本文其他地方)。在本发明的一个实施例中，EGFR相关的癌症可以是与EGFR突变相关联的癌症，该EGFR突变选自下组，该组由以下各项组成：L858R；和外显子19缺失突变。
另外地或可替代地，EGFR相关的癌症可以与EGFR T790M突变相关联。该突变经常被视为EGFR中的第二位点突变，发生在除了第一初级激活突变以外。典型地，该第二突变在用EGFR抑制剂处理期间出现，并且提供对该抑制剂的抗性机制。该T790M突变具体地与肺癌(例如NSCLC)相关联。AZD9291可以用于EGFR相关的癌症的治疗，该EGFR相关的癌症与外显子19缺失突变、和/或L858R取代突变、以及任选地T790M抗性突变相关联。
EGFR相关的癌症的实例可以包括：非实体瘤如白血病(例如急性骨髓性白血病)、多发性骨髓瘤、血液学恶性肿瘤(例如骨髓增生异常综合征或骨髓增生综合征)或淋巴瘤；和实体瘤和它们的转移如黑色素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、神经胶质瘤、肝细胞(肝)癌、恶性胶质瘤、甲状腺癌、胆管癌、骨癌、胃癌、脑癌/CNS、头颈癌、肝癌、胃癌、前列腺癌、乳腺癌、肾癌、睾丸癌、卵巢癌、皮肤癌、宫颈癌、肺癌、肌肉癌、神经元癌、食管癌、膀胱癌、肺癌、子宫癌、外阴癌、子宫内膜癌、肾癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胸膜/腹膜膜癌、唾液腺癌、以及表皮肿瘤。
在一个实施例中，该EGFR相关的癌症是实体瘤。
在一个实施例中，该EGFR相关的癌症是肺癌。
在一个实施例中，该EGFR相关的癌症是NSCLC。
在选自该组的癌症或这些癌症的转移的背景下，方法的使用、医学用途、药物组合物、以及本发明的其他方面，被认为是一个合适的实施例。
癌症患者
本发明可以在任何适合的生物体中实践。在一方面中，该患者是动物或人，例如哺乳动物，如温血动物。在一方面中，该患者是人。
典型地，患者显示本文所述的EGFR相关的癌症的一个或多个临床或临床前症状。患者可以已经被临床诊断为正在遭受这样的癌症，或被诊断为易患这样的癌症。
患者可以正在接受或已经接受EGFR抑制剂(如EGFR TKI)的癌症疗法。患者可以是已经发展或可能发展对本文所述的EGFR抑制剂的疗法的获得性抗性的患者。因此本发明的方法可以用于提供二线疗法或后线疗法(subsequent line therapy)。
抗性和获得性抗性
如本文所使用的，对治疗的抗性描述了一种临床情况，其中癌症(或癌症患者)不响应于治疗，或比最初采用该治疗时是更少响应的(经常称作获得性抗性)。
获得性抗性是指一种情况，其中癌症(或癌症患者)是最初响应于试剂(例如EGFR抑制剂)的治疗，但其中随着时间的推移，所述癌症(或患者)变为更少或不响应于试剂的进一步的治疗，并且癌症发生进展。癌症或癌症患者可以随着时间的推移展示抗性的程度(和响应于治疗的程度)。
响应是指治疗产生至少一种临床可检测的如本文所述的治疗效果。如果没有临床可检测的如本文所述的治疗效果，那么患者是无响应的。治疗效果可以例如是如本文所述的抗癌效果。
被预测为正在发展对根据本发明的EGFR抑制剂的获得性抗性的癌症是已经成为、或将成为对EGFR抑制剂的治疗具有抗性的一种癌症。
治疗、疗法以及治疗效果
如本文使用的术语治疗、疗法或治疗效果包括以下及其组合：(1)抑制，例如延缓癌症的开始和/或进展，例如在维持治疗或二级预防的情况下阻止、减少或延缓癌症或其至少一种临床或亚临床症状的发展或其复发；(2)预防或延缓发展于受试者中的癌症的临床症状的出现，该受试者可以被癌症折磨或易患癌症但还没有经历或显示癌症的临床或亚临床症状；和/或(3)缓解和/或治疗癌症(例如，引起癌症或其临床或亚临床症状中的至少一种的消退，治疗患者或使患者进入缓解期)。如本文使用的治疗或疗法可以包括预防或预防处理。
因此，例如，本文的治疗效果可以是指出现于癌症患者中的(1)、(2)以及(3)中的一种或多种。
本文的治疗效果可以是抗癌效果。抗癌效果包括但不限于，肿瘤生长的抑制、肿瘤生长延迟、肿瘤的消退、肿瘤的缩小、停止治疗时肿瘤再生长的时间增加、疾病进展的放缓。
本文提及的一线疗法中的治疗效果可以是指延缓或预防对EGFR抑制剂介导的疗法的获得性抗性的发展，该治疗效果可以例如，通过本文所述的NRAS突变的发展来获得。
典型地，治疗效果提供了临床上可检测的益处。对要治疗的受试者或患者的益处可以是在统计上显著或至少被患者或医师或其他技术人员可感知的。应该理解的是，药物不一定会在被给予该药物的每个患者中产生临床效果；因此，在任何个体患者或甚至在一个特定的患者群体中，治疗可能失败或仅是部分成功的，并且因此相应地理解术语“治疗”、“预防”和“抑制剂”和同源术语的含义。
术语“预防”或“预防性治疗”包括出于养生或者抑制或延迟癌症的开始和/或进展的目的(例如出于降低癌症发生的机会、或预防癌症发生的目的)而提及的治疗或疗法。预防的结果可以是，例如，养生或延迟的癌症的开始和/或进展。应当记得，在任何个体患者或甚至在一个特定的患者群体中，治疗可能失败，并且应相应地理解本段。
根据本发明的癌症的治疗可以通过常规工具如抗肿瘤效果的程度、应答率、疾病进展的时间和/或存活率进行评估。
针对本文EGFR相关的癌症的一线疗法是指向先前没有进行治疗癌症的患者使用EGFR抑制剂给予治疗。
针对本文EGFR相关的癌症的二线疗法是指向先前没有进行治疗癌症的患者使用EGFR抑制剂给予治疗，但其中EGFR相关的癌症在用该EGFR抑制剂治疗期间已经进展(或以其他方式成为抗药的)。
针对本文EGFR相关的癌症的三线疗法是指向先前没有进行治疗癌症的患者(具体而言，先前没有用两种不同的疗法，例如不同的EGFR抑制剂进行治疗的患者)给予治疗。
发明人相信，本文披露的治疗方法和/或医学用途可以，必要时，在针对EGFR相关的癌症的一线、二线、三线或另外的线疗法的环境下是适用的。
EGFR/EGFR
如本文使用的EGFR是指表皮生长因子受体，一般来说是一种跨膜糖蛋白，该跨膜糖蛋白是蛋白激酶超家族中的一员。
EGFR可以是对应于要治疗的种类的任何种类。在一方面中，EGFR是人EGFR。
人EGFR(基因ID:1956)根据可替代性的、经剪接的转录物以不同同种型存在。如本文使用的EGFR可以指这些同种型中的任何一个。
野生型人EGFR基因序列描述于基因ID:1956中。该EGFR基因可以具有对应于基因库(GenBank)登录号X00588.1中的cDNA序列的mRNA表达产物，和具有在UniProtKB/Swiss-Prot P00533.2中的EGFR蛋白质氨基酸序列的蛋白质表达产物(这包括在氨基酸1-24处的24个氨基酸信号序列，该序列在成熟蛋白质中被切割)。本文提及的EGFR基因、mRNA、cDNA或EGFR蛋白质可以是指这一人基因、mRNA(或对应的cDNA)或蛋白质，当上下文允许时具有另外的突变。本文提及的EGFR mRNA、cDNA或蛋白质还可以是指前述的同种型，例如缺乏跨膜结构域和胞内结构域的可溶的同种型，当上下文允许时具有另外的突变。
在一些情况下，EGFR可以指以上的一种变体，例如天然存在的野生型变体(例如来自非肿瘤细胞)。
上述内容比照适用于非人类物种的EGFR。例如，本文提及的EGFR基因、mRNA或EGFR蛋白质可以是指以上人基因、mRNA或蛋白质的物种同系物，当上下文允许时具有另外的突变。
针对如本文使用的EGFR和EGFR突变进行编号的氨基酸序列总体上与以UniProtKB/Swiss-Prot P00533.2(其如以上上述包括在氨基酸1-24处的信号序列)呈现的野生型人类EGFR的氨基酸序列和编号有关。因此例如，提及T790M突变是指在UniProtKB/Swiss-Prot P00533.2中的1210个氨基酸序列中的氨基酸790处的T到M的改变。由于使用参比序列，该T790M突变最初被称作T766M(布兰奇(Blencke)等人，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)278:15435-15440，2003)。
类似地，如本文使用的EGFR cDNA序列编号与基因库X00588.1(具有来自碱基187-3819的蛋白质编码序列)中的野生型EGFR cDNA序列有关。
本文提及的EGFR突变还可以涵盖出现在具有相同功能作用的非人类物种的EGFR中的对应位置处的突变。
抑制剂
如本文提到的抑制剂可以是，例如多肽、核酸、碳水化合物、脂质、小分子量化合物、寡核苷酸、寡肽、siRNA、反义物、重组蛋白、抗体、肽体(peptibody)、或其缀合物或融合蛋白。对于siRNA的综述，参见米亚沃(Milhavet)O，加里(Gary)DS，马特森(Mattson)MP，药理学评论(Pharmacol Rev.)2003年12月；55(4):629-48。对于反义物的综述，参见Opalinska JB，格维茨(Gewirtz)AM，STKE.科学(Sci STKE.)2003年10月28日；2003(206)：第47页。
小分子量化合物可以例如是指具有小于2000道尔顿、1000道尔顿、700道尔顿或500道尔顿的分子量的化合物。
用于在本发明中使用的具体的抑制剂是小分子EGFR TKI。
EGFR抑制剂
EGFR抑制剂通常降低或防止EGFR的表达和/或活性。可以通过测定对EGFR表达和/或活性的抑制影响来鉴别适合的抑制剂。
典型地，抑制剂通过在适合的测定中的至少一个可检测的量来降低表达或活性。抑制剂可以，例如，降低表达或活性至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或至少90％。
许多适合的策略是本领域的普通技术人员已知的，通过这些策略EGFR的表达可以被降低。另外，技术人员也将清楚的是，许多试剂能够降低EGFR活性，包括但不限于本说明书中其他地方提供的实例。
任何适合的EGFR活性，例如，酪氨酸激酶活性可被影响。因此在一方面中，EGFR抑制剂可以包括酪氨酸激酶抑制剂(TKI)。酪氨酸激酶活性的抑制可以在任何适合的测定中被确定，如描述于沃德(Ward)等人，化学医学杂志(J.Med.Chem.)2013,56:7025-7048中的测定。
EGFR酪氨酸激酶抑制剂的实例包括：吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291、CO-1686、WZ4002、PD153035、以及PF 00299804。抑制剂可以包括这些化合物的药学上可接受的盐，如本文其他地方所描述的。此类抑制剂是本领域普通技术人员熟知的。
确立的EGFR TKI，如吉非替尼、埃罗替尼和阿法替尼可用作对抗患者体内的癌症的一线疗法。新近研发的EGFR TKI，包括AZD9291、CO-1686、WZ4002，有时可以用以对抗EGFR相关的癌症(例如，对抗与初始EGFR激活突变和另外的EGFR突变(如T790M)两者相关的癌症)，EGFR相关的癌症中的抗性已经发展至更多确立的EGFR TKI药物中的一种。
以上列出的EGFR TKI中，由吉非替尼；埃罗替尼；阿法替尼；AZD9291；以及CO-1686组成的组代表在本申请的上下文中特别引人关注的实例(其中技术人员理解的是此类EGFRTKI可以各自任选地以药学上可接受的盐的形式使用)。选自该组的EGFR TKI的用途代表本发明的适合的实施例。因此，在提及EGFR抑制剂的任何实施例、方面或权利要求中，可以形成其他的实施例、方面和权利要求，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO1686、或任何其药学上可接受的盐。可以形成其他的实施例、方面和权利要求，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、AZD9291和CO1686。
吉非替尼
EGFR抑制剂可以包括吉非替尼或其药学上可接受的盐。
吉非替尼是一种EGFR TKI药物，该药物被批准用于在多个地区的晚期NSCLC患者中使用。
吉非替尼结构示于以下：
吉非替尼也可以通过以下化学名称已知：N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉-4-基丙氧基)喹唑啉-4-胺。
埃罗替尼
EGFR抑制剂可以包括埃罗替尼或其药学上可接受的盐。
埃罗替尼是一种用于对抗如本文所述的胰腺癌、肺癌和其他癌症的EGFR TKI药物。
埃罗替尼结构示于以下：
埃罗替尼也可以通过以下化学名称已知：N-(3-乙炔基苯基)-6,7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺。
阿法替尼
EGFR抑制剂可以包括阿法替尼或其药学上可接受的盐。
阿法替尼是一种具体地用于对抗如本文所述的NSCLC的EGFR TKI药物。该药物有时可以用于治疗变为或已经变为对用吉非替尼或埃罗替尼的治疗具有抗性的癌症。
阿法替尼结构示于以下：
阿法替尼也可以通过以下化学名称已知：N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[[(3S)-四氢-3-呋喃基]氧基]-6-喹唑啉基]-4(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺。
AZD9291
EGFR抑制剂可以包括AZD9291或其药学上可接受的盐。AZD9291有时可以用于治疗变为或已经变为对用EGFR抑制剂如吉非替尼、埃罗替尼、和/或阿法替尼进行的治疗具有抗性的癌症。
AZD9291具有以下结构：
并且可以通过以下化学名称已知：‘N-(2-{2-二甲基氨基乙基-甲基氨基}-4-甲氧基-5-{[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺’。
AZD9291及其药学上可接受的盐披露于国际专利申请号PCT/GB 2012/051783(公开号WO 2013/014448)中，将其内容通过引用结合在此。
AZD9291的药学上可接受的盐可以包括本文所描述的任何盐，例如甲磺酸盐。
CO-1686-还称为“诺司替尼(rociletinib)”
EGFR抑制剂可以包括CO-1686或其药学上可接受的盐。
Co-1686的化学结构是：
CO-1686可以通过以下化学名称已知：N-(3-{[2-{[4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺。
CO-1686的药学上可接受的盐可以，例如，包括HBr盐。
WZ4002
是一种有效对抗EGFR T790M的突变型可选择的EGFR酪氨酸激酶抑制剂。该化合物描述于由周(Zhou)等人的公开物中。(《自然》462，1070-1074；2009)
NRAS/NRAS
如本文使用的NRAS是指神经母细胞瘤RAS病毒癌基因同系物，并且它由NRAS癌基因编码。
NRAS是Ras基因家族中的一员。哺乳动物的Ras基因家族包括Harvey和Kirstenras基因(HRAS和KRAS)、每个(c-Hras2和c-Kras1)的无活性假基因以及NRAS基因。该RAS蛋白质具有GTP-GDP结合活性和GTP酶活性。
NRAS可以是对应于要治疗的种类的任何种类。在一方面中，NRAS是人NRAS。
(野生型)人NRAS(NRAS)基因描述于基因ID：4893中，并且由7个外显子(-I、1、II、II、IV、V、VI)组成。野生型人NRAS基因典型地具有对应于基因库登录号NM_002524中的cDNA序列的mRNA表达产物，和具有UniProtKB/Swiss-Prot P01111.1中的NRAS蛋白质氨基酸序列。
本文提及的NRAS基因、mRNA、cDNA或NRAS蛋白质可以是指这一人基因、mRNA或对应的cDNA序列、或蛋白质，当上下文允许时具有另外的突变。
在一些情况下，NRAS可以指以上的一种变体，例如天然存在的野生型变体。
上述内容比照适用于非人类物种的NRAS。例如，本文提及的NRAS基因、mRNA、cDNA或NRAS蛋白质可以是指上述人基因、mRNA或蛋白质的物种同系物，当上下文允许时具有另外的突变。
在本文中描述了NRAS氨基酸编号和突变，这与UniProtKB/Swiss-Prot P01111.1中的氨基酸序列相关。因此，例如，本文提及的NRAS突变E63K是指在UniProtKB/Swiss-ProtP01111.1中的189氨基酸序列中的氨基酸编号63处的谷氨酸(E)到赖氨酸(K)的改变。
在基因库登录号NM_002524中的NRAS cDNA序列中，蛋白质编码序列在核苷酸255-824处示出。该570个核苷酸共有编码序列也存在于登录号CCDS877.1下的CCDS数据库中。本文所述的NRAS cDNA序列编号和突变与基因库登录号NM_002524中的cDNA序列相关。
本文提及的NRAS突变还可以涵盖出现在具有相同功能作用的非人类物种的NRAS中的对应位置处的突变。
NRAS激活突变
如本文使用的NRAS激活突变通常导致NRAS蛋白质的过度表达和/或过度活性。突变可以例如出现在核苷酸序列(例如编码NRAS的DNA中)中和/或在氨基酸序列(例如在NRAS蛋白质序列中)中。本文所述的NRAS突变典型地是体细胞突变。
NRAS的任何活性可被，例如，GTP酶活性影响。
本文所述的NRAS激活突变包括：NRAS E63K突变；和NRAS G12V突变。本文所述的NRAS激活突变可以自发地产生癌症发展或者它可以在响应于癌症(或患者)的治疗(如用EGFR抑制剂)的癌症(或癌症患者)中获得。本文所述的另外的NRAS突变是G12R NRAS突变。
NRAS E63K突变
E63K NRAS突变是指在NRAS蛋白质氨基酸序列(SEQ ID NO:3)中对应于E63的氨基酸位置处的氨基酸从谷氨酸(E)到赖氨酸(K)的改变。
氨基酸中的该改变典型地由NRAS基因中的DNA序列中的改变进行编码。典型地，这是在编码序列(NRAS cDNA序列的核苷酸441-443)中的密码子63中的改变。具体而言，该改变可以导致在NRAS cDNA序列中对应于碱基441的位置处的从G到A的改变，意味着在对应于碱基441至443的位置处从GAG至AAG的改变。(它还可以由双核碱基取代引起，如在NRAScDNA序列的对应于碱基441至443的位置处从GAG至AAA)。
NRAS G12V突变
G12V NRAS突变是指在NRAS蛋白质氨基酸序列(SEQ ID No:3)中对应于G12的氨基酸位置处的氨基酸序列从甘氨酸(G)到缬氨酸(V)的改变。
氨基酸中的该改变典型地由NRAS基因中的DNA序列中的改变进行编码。典型地，这是在编码序列(NRAS cDNA序列的核苷酸288-290)中的密码子12中的改变。具体而言，该改变可以导致在NRAS cDNA序列中对应于碱基289的位置处的从G到T的改变，意味着对于碱基288至290的从GGT至GTT的改变。
NRAS G12R突变
G12R NRAS突变是指在NRAS蛋白质氨基酸序列(SEQ ID NO:3)中对应于G12的氨基酸位置处的氨基酸序列从甘氨酸(G)到精氨酸(R)的改变。氨基酸中的该改变典型地由NRAS基因中的DNA序列中的改变进行编码。典型地，这是在编码序列(NRAS cDNA序列的核苷酸288-290)中的密码子12中的改变。具体而言，该改变可以导致在NRAS cDNA序列中对应于碱基288的位置处的从G到C的改变，意味着对于碱基288至290的从GGT至CGT的改变。
NRAS拷贝数增加
NRAS(N-ras)拷贝数增加是指DNA中的变化，该变化导致当与对照细胞相比时NRAS基因的拷贝数增加的出现。对照细胞可以是正常的非癌性细胞或匹配的正常对照细胞，即取自同一患者的非癌性细胞/细胞群。NRAS基因的拷贝数增加也可以相对于正常情况指示的参比拷贝数来衡量。
例如，扩增的突变可以导致与对照细胞相比至少一个NRAS基因拷贝数的增加，如与缺乏拷贝数增加的细胞相比至少2个、3个、4个、5个、6个、7个或8个NRAS基因拷贝数的增加。基因拷贝数可以显示大于1倍、大于2倍、大于3倍或大于4倍的增加。
检测突变和拷贝数增加
根据本发明的一个方面，针对NRAS激活突变的存在对患者进行测试，这些NRAS激活突变选自以下中的任何一个或多个：NRAS E63K突变；和NRAS G12V突变。
根据本发明的另一方面，针对NRAS拷贝数增加的存在对患者进行测试。
可以检测的突变或拷贝数增加的适合的技术包括选自下组的那些，该组由以下各项组成：下一代测序(NGS)；外显子组测序；等位基因特异扩增；以及阵列法基因组比较杂交(aCGH)。
更具体地是，在适合的实施例中，选自NRAS E63K突变、NRAS G12V突变和NRASG12R突变的NRAS激活突变的存在可以通过以下工具被检测：NGS、等位基因特异扩增或外显子组测序。在适合的实施例中，NRAS拷贝数的增加可以通过CGH被确定。
将要理解的是，可以针对此类突变的存在通过在代表突变的患者中测定任何适合的指示物对患者进行测试。例如，指示物可以在以下中变化：序列或基因组DNA的量(例如具体的基因或表达控制元件)；序列或具体的mRNA(或对应的cDNA)的量；序列或蛋白质的量；或蛋白质活性，其代表该突变。适当的情况下，以上中的任何一个可以通过测定基因组DNA、mRNA(或对应的cDNA)或蛋白质的适合的片段进行检测。
针对基因的表达控制元件是指可操作地连接至一个基因并且至少部分控制基因表达的DNA的一段序列，例如启动子或增强子序列。
用于检测以上激活的NRAS突变中的一个或多个突变的适合的指示物可以在以下中变化：NRAS基因的序列或针对基因的表达控制元件；数量(增加)或表达自NRAS基因(或与它对应的cDNA)的NRAS mRNA的序列；数量(增加)或NRAS蛋白质的序列；或NRAS蛋白质的活性(增加)。用于检测NRAS拷贝数增加的适合的指示物将是存在的NRAS基因的拷贝数的增加。适当的情况下，以上中的任何一个可以通过测定NRAS基因组DNA、mRNA(或对应的cDNA)或NRAS蛋白质的适合的片段进行检测。
不希望受到理论的束缚，据信NRAS突变出现在患者体内的肿瘤细胞(典型地是患者体内正在治疗的肿瘤(之一))的DNA中。因此要测定的DNA、mRNA或蛋白质可以是在这样的肿瘤细胞中存在的或表达的DNA、mRNA或蛋白质，典型地是NRAS基因组DNA、NRAS mRNA、或NRAS蛋白质。
可以通过任何适合的工具来检测突变。典型地，该方法包括针对突变的存在测定获得自患者的样本(典型地通过测定所描述的适合的指示物)。因此，本发明的方法可以在体外进行。在一些情况下，该方法可以包括从患者获得适合的样本。
可以使用任何适合的、代表突变的样本。例如，样本可以包括是或疑似是癌性的细胞或组织，或包括癌症/肿瘤核酸。因此这些方法可以包括测试癌性组织或细胞以检测突变的存在。典型地，提及的癌症是患者正在治疗的癌症。适合的样本可以通过活组织检查或其他外科手术获得。因此样本可以是肿瘤活组织检查。在一些情况下，癌症细胞或其DNA可以存在于循环中并且可以从生物学流体如血液、血浆、血清或胸腔积液进行分离。因此这些方法可以包括测试含有癌细胞(这些癌细胞已经从肿瘤块脱离)或来自此类癌细胞的循环的游离DNA的生物学流体以检测突变的存在。
涉及测定NRAS mRNA或NRAS蛋白质(或其片段)的量的改变、或NRAS活性的量的改变、或NRAS基因的拷贝数的改变的方法，典型地包括：
-在适合的样本中检测NRAS mRNA或NRAS蛋白质(或片段)的水平、或NRAS活性的水平、或NRAS基因拷贝数；
-与参比值进行比较来确定水平或拷贝数；并且
-如果确定的水平或拷贝数大于参比值，那么确定NRAS拷贝数增加的存在。
针对NRAS mRNA/蛋白质/NRAS活性的水平的适合的参比值可以参照与受试者和样本类型匹配的对照类群中的中值水平来获得。技术人员将能够选择适当的对照来提供需要的参比值。
针对NRAS基因拷贝数的适合的参比值是2(即两个拷贝/细胞)。
测定NRAS拷贝数增加的存在
NRAS拷贝数中的任何增加可以表示对EGFR介导的癌症疗法的增加的抗性，并且此类增加的抗性可以通过检测NRAS基因拷贝数的增加来表示。NRAS基因拷贝数可以直接测定，或NRAS基因拷贝数可以间接通过测定代表NRAS基因拷贝数的另一种指示物来进行确定。
如以上提到的，NRAS拷贝数增加的存在可以通过CGH测定来检测。可替代地，NRAS拷贝数增加可以通过癌症患者的DNA测序进行检测。
NRAS拷贝数增加还可以通过测定NRAS mRNA的量的增加、或NRAS蛋白质、或NRAS活性的量的增加来检测。NRAS mRNA或NRAS蛋白质的量可以在适合的样本中直接测定。可替代地，适合的样本可以针对代表NRAS mRNA或NRAS蛋白质的量的另一种指示物来进行测定。
mRNA或蛋白质的水平可以通过本领域的技术人员已知的任何适合的工具来确定。
仅仅通过举例的方式，蛋白质(例如NRAS蛋白质)在受试者中的水平可以通过在其中检测蛋白质的测定法来确定，并且通过该蛋白质与特异性结合配偶体的结合确定目前的水平。该结合配偶体可以直接或间接被标记。
与蛋白质结合的抗体或抗体片段表示此类结合配偶体的具体适合的实例，并且这些在免疫测定中使用。可以在本发明的方法中使用的这种免疫测定的适合的实例包括选自下组的那些，该组由以下各项组成：酶联免疫吸附测定(ELISA)；放射免疫测定(RIA)；以及多重免疫测定(如由Luminex公司(Luminex Corporation)生产的LuminexTM测定)。
用于与NRAS特异性结合的抗体可以是获得自杂交瘤的一种。用于生产杂交瘤的程序是本领域的技术人员熟知的。一旦所希望的杂交瘤已被选择并克隆，那么通过在适合的培养基中在体外培养所希望的杂交瘤来生产要得到的抗体。作为替代方法，可以将所希望的杂交瘤直接注射进小鼠中以产生浓缩量的抗体。
关于通过杂交瘤技术生产的抗人类肿瘤的单克隆抗体的专利包括美国专利号4,182,124和4,196,265。本领域关于对癌细胞具有抗原特异性的单克隆抗体的代表是美国专利号4,350,683。
此外，技术人员将会理解，在不需要生产新型抗体的情况下，可以使用大量的NRAS特异性的商购抗体。
可用于确定样本中的NRAS mRNA的量的测定包括实时定量PCR。仅仅通过举例的方式，发明人已经发现，这种技术可以使用可商购的的Taqman引物和来自ABI生命技术公司的探针来实施。
NRAS的任何适合的活性可被测定以确定增加。在一方面中，测定NRAS GTP酶活性以便评估是否展现增加。
确定NRAS E63K突变的存在
在核酸中
患者中的NRAS E63K突变的存在可以通过检测NRAS基因编码序列中的对应的突变来确定。这可以包括例如检测在以下各项中的突变：在基因组DNA序列本身中、或在对应的表达的mRNA(或对应的cDNA)中、或在任何这些多核苷酸中的适合的片段(其中该片段跨越编码E63K突变的核酸突变)中。该突变还可以在核酸中进行检测，该核酸已经基于测试序列使用扩增(如聚合酶链式反应)进行了复制。例如，编码NRAS密码子63的NRAS序列的引物的任一边都用于扩增靶序列，并且突变的存在或不存在可以从该扩增反应或其扩增产物中看出。编码E63K突变的核酸突变的突变位点典型地在NRAS编码序列的密码子63处。这可以理解为，在NRAS编码cDNA序列中的对应于碱基441-443的任何碱基中的改变都导致赖氨酸被编码。具体而言，突变可以出现在编码cDNA的NRAS中的对应于碱基441的位置处。
该突变可以是在NRAS编码序列中的密码子63处的鸟嘌呤(G)到腺嘌呤(A)(G到A，对应于mRNA中的尿苷)的改变。具体而言，该改变可以是在NRAS编码cDNA序列中的对应于碱基441的位置处的从G到A的改变，例如，在对应于核苷酸441-443的位置处的从GAG到AAG的改变。该改变可以是在NRAS编码cDNA序列中的对应于碱基441和443的位置处的从G到A的双改变，例如，在对应于核苷酸441-443的位置处的从GAG到AAA的改变。
可以通过任何适合的工具来检测根据本发明的核酸突变。
典型地，适合的方法包括扩增感兴趣的核酸区域，即含有多肽位点的核酸序列。可使用任何适合的扩增方法，例如，PCR扩增、等位基因特异扩增、基于核酸序列的扩增(NASBA)、连接激活扩增(LAT)、QB复制酶体系连接酶链式反应(LCR)、修复链式反应(RCR)核酸扩增、或通过链置换激活作用进行的核酸扩增(SDA)。优选地使用PCR扩增。
用于核酸序列扩增的跨越上文所述的突变位点的PCR引物可以由本领域技术人员使用例如NRAS基因序列或NRAS cDNA序列来获得。在适合的PCR条件下，这样的一对PCR引物与编码NRAS多肽或其片段的多核苷酸杂交，使得该引物囊括该突变位点。
在适合的PCR条件下，适合的PCR引物通常与对于该突变位点的各自分别的链中的多核苷酸序列5’的有义链或反义链进行杂交。PCR引物可以结合在约200个核苷酸的突变中。任何处于纯化或非纯化形式的核酸标本可以作为一个或多个起始核酸使用，条件是它包括或疑似包括含有多肽位点的特异性核酸序列。因此，该方法可以扩增例如DNA或RNA(包括信使RNA)，其中DNA或RNA可以是单链的或双链的。在RNA被用作模板的情况下，将利用对于将该模板反转录为cDNA最优的酶、和/或条件。此外，可以利用各自包含一条链的DNA-RNA杂合体。一种方法可以例如涉及从用于测定的适合的患者样本中提取核酸。例如，可以提取mRNA并且通过反转录制备对应的cDNA(对应于全部或部分mRNA)。用于mRNA提取和cDNA制备的方法是本领域已知的并且描述于本文中。
检测本文所述的核酸突变典型地包括用选择性地检测该突变的工具接触核酸。典型地，该工具区分在突变位点处的突变序列和在该位点处的野生型序列。该工具可以是可检测地被标记的。
因此，用于检测编码E63K的核酸突变的方法可以包括使适合的样本接触如下工具，该方法用于选择性地检测在对应于编码cDNA的NRAS的碱基441处的位置处包含突变体G的核苷酸序列并且鉴定该位置处的碱基是A。典型地，该工具区分在该位置处的突变体T和野生型C。
该工具可以是，例如，PCR引物、寡核苷酸探针、或序列特异的切割方法，如本文以上描述的那些中的任何一个。
在一些情况下，该扩增方法本身可以用于区分突变体和野生型核酸序列，例如，扩增可以对包含突变的核酸进行选择，使用例如等位基因特异扩增或本领域已知的其他适合的技术。
例如，PCR扩增可以使用PCR引物来进行，该PCR引物在适合的PCR条件下选择性地与突变核酸结合，但不与野生型核酸结合。典型地，此类引物在适合的PCR条件下与编码多核苷酸的NRAS的有义链序列或反义链序列或其在突变位点处包含突变的片段进行杂交，但是在该PCR条件下此类引物与在该位置是野生型的第二个NRAS多核苷酸弱杂交或完全不杂交。
例如，选择性PCR引物在适合的PCR条件下可与编码多核苷酸的NRAS的有义链序列或反义链序列或其在对应于编码cDNA的NRAS的碱基441处的位置处包括突变体A的片段进行杂交，但是在该PCR条件下该选择性PCR引物与在该位置处编码包含野生型G的多核苷酸的第二个NRAS弱杂交或完全不杂交。
使用该引物来进行PCR扩增，并且使用一种适合的第二引物来提供在该突变位点处包含突变(例如突变体T)的PCR扩增子。因此扩增子的检测表示突变的存在。
根据本发明的一个方面，提供了能够选择性地与核酸序列杂交的寡核苷酸，该核酸序列在对应于NRAS蛋白质的位置63的位置处编码赖氨酸。在一个实施例中，该寡核苷酸能够在适合的条件下与编码多核苷酸的NRAS的有义链序列或反义链序列或其在对应于编码cDNA的NRAS的碱基441处的位置处包括突变体A的片段进行杂交，但是与在该位置处编码包含野生型G的多核苷酸的第二个NRAS弱杂交或完全不杂交，该寡核苷酸可以包含可检测的标记或与其相关联。在一个实施例中，该寡核苷酸被使用或适合用作PCR反应中的引物。在另一个实施例中，该寡核苷酸被使用或适合用作杂交探针。
根据本发明的另一方面，提供了能够选择性地与一种核酸序列(该核酸序列在对应于NRAS蛋白质的位置63的位置处编码赖氨酸)杂交的寡核苷酸，用于在检测患者是否具有编码NRAS蛋白中的E63K取代的核酸的方法中使用。
根据本发明的另一方面，提供了能够选择性地与一种核酸序列(该核酸序列在对应于NRAS蛋白质的位置63的位置处编码赖氨酸)杂交的寡核苷酸，用于在选择用如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂联合治疗的患者的方法中使用。
该PCR反应可以将可检测的标记掺入PCR扩增子中，并且该方法可以包括检测该标记。
在其他情况中，扩增的序列可以进一步被分析，在溶液中或在与固体支撑体结合之后，通过通常应用于特异DNA序列的检测的任何方法，如PCR、寡聚体限制(佐伯(Saiki)，等人，生物/科技(Bio/Technology)，3:1008-1012，(1985))、等位基因特异的寡核苷酸(ASO)探针分析(康纳(Conner)，等人，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)，80:278，(1983))、寡核苷酸连接测定(OLAs)(兰德格林(Landgren)，等人，科学(Science)，241:1007，(1988))等等。针对DNA分析的分子技术已经被评述(兰德格林(Landgren)，等人，科学(Science)，242:229-237，(1988))。
在一个实例中，靶核酸可使用如以上所述的至少一个等位基因特异的(突变可选择的)PCR引物来经受PCR扩增。
在另一个实例中，突变可选择的寡核苷酸探针(有时称作等位基因特异的探针)可以用于检测突变的核酸。在此类方法中，扩增的核酸与寡核苷酸探针进行接触，该寡核苷酸探针在适合的杂交条件下选择性地与在突变位点包含突变的核酸进行杂交，但是与在该突变位点是野生型的核酸弱杂交或完全不杂交。探针与核酸结合的检测表明突变的存在。
该探针工具或核酸可在接触步骤之前被固定。在此类方法中，与固定的配偶体结合的组分典型地被标记，并且确定突变的存在包括检测该标记。
用于在该方法中使用的适合的寡核苷酸探针可以例如与编码多核苷酸的NRAS或其片段杂交，其中该探针的序列包括在对应于NRAS cDNA的碱基441处的位置处与突变体A互补的碱基，并且其中该探针在适合的杂交条件下与在该位置包含野生型C的多核苷酸弱杂交或完全不杂交。
设计等位基因特异的寡核苷酸探针的方法是本领域内已知的。通常这些是短的、单链的多核苷酸，它们被工程化以在给出的一系列条件下准确地与靶序列杂交。用于本文使用的引物或探针通常是短的、单链的多核苷酸，这些多核苷酸在给出的一系列条件下特异地与靶序列杂交。引物或探针典型地具有至少8个核苷酸的长度，例如，至少10个、12个、14个、16个、18个、20个、30个核苷酸，多至约50个核苷酸。探针或引物可以例如是长度不超过15个、20个、25个或20个核苷酸，如长度为8-15个、10-20个或10-30个核苷酸。等位基因特异的寡核苷酸探针可以例如是14-17个碱基对，如例如约17个碱基。
本文检测核酸突变的方法还可以包括大规模芯片阵列基于序列的技术。关于芯片阵列的应用和发展的综述由萨瑟恩(Southern)，E.M.，遗传学趋势(Trends In Genetics)，12:110-115(1996年三月)和成(Cheng)等人，分子诊断(Molecular Diagnosis)，1:183-200(1996年九月)覆盖。关于在‘DNA芯片’上的大规模分析的另外的方法论详细描述于海瑟(Hacia)等人，自然遗传学(Nature Genetics)，14:441-447(1996)中。
本文所描述的NRAS E63K突变可以通过测定在对应于NRAS蛋白质的氨基酸序列中的氨基酸E63或其包含氨基酸63的适合的片段的氨基酸位置处的从谷氨酸(E)到赖氨酸(K)的改变来进行检测。这可以通过任何适合的方法来完成。
例如，具有E63K突变的NRAS蛋白质(或其片段)的存在可以通过一个测定来确定，在该测定中通过该突变的NRAS蛋白质或片段与特异性结合配偶体的结合来检测该突变的NRAS蛋白质或其片段。该特异性结合配偶体与携带该E63K突变的突变体NRAS蛋白质或片段结合，并且不与不具有该突变的NRAS蛋白质或片段结合。该结合配偶体可以直接或间接被标记。
与突变体蛋白质结合的抗体或抗体片段表示此类结合配偶体的特别适合的实例，并且这些在免疫测定中使用。可以在本发明的方法中使用的这种免疫测定的适合的实例包括选自下组的那些，该组由以下各项组成：酶联免疫吸附测定(ELISA)；放射免疫测定(RIA)；以及多重免疫测定(如由Luminex公司(Luminex Corporation)生产的LuminexTM测定)。可以使用蛋白质印迹法。
特别地，用于检测该突变体E63K NRAS的抗体可以是获得自杂交瘤的抗体。本文其他地方描述了用于从杂交瘤获得抗体的方法。
根据本发明的一个方面，提供了能够选择性地与在对应于NRAS蛋白质的位置63的位置处包含赖氨酸的EGFR多肽结合的抗体，其中该抗体优先地与在对应于NRAS蛋白质的位置63的位置处具有赖氨酸的多肽结合，优于与在所述位置处具有谷氨酸的多肽的结合。
根据本发明的另一方面，提供了能够选择性地与在对应于NRAS蛋白质的位置63的位置处包含赖氨酸的EGFR多肽结合的抗体，用于在确定患者是否具有对应于NRAS蛋白质的位置63的赖氨酸的NRAS蛋白质的方法中使用，其中该抗体优先地与在对应于NRAS蛋白质的位置63的位置处具有赖氨酸的多肽结合，优于与在所述位置处具有谷氨酸的多肽的结合。在一个具体的实施例中，此方法用于选择用如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂联合治疗的患者。
测定可以包括使特异性结合配偶体与适合的样本(如本文所述的那些中的任何一个)进行接触。在一些实例中，通常蛋白质或特别地NRAS蛋白质可以首先从患者样本提取出来，并且将该特异性结合配偶体与该蛋白提取物进行接触。用于蛋白质提取的方法是本领域内已知的。NRAS蛋白质可以通过任何适合的工具从患者样本提取出来。例如，可以使用与NRAS蛋白质特异性结合的抗体。可以使用杂交瘤使用类似于以上所述的那些方法获得结合NRAS的抗体。
提取的一种蛋白质或多种蛋白质可视为分离的蛋白质。如本文使用的术语“分离”是指一种生物组分(如核酸分子或蛋白质)已经基本上从该组分天然存在的生物体的细胞中的其他生物组分(即其他染色体和染色体外DNA和RNA以及蛋白质)分离或纯化出来。在一方面中，提取的蛋白质或核酸已经分离至如下程度以便它们能与所希望的反应中的试剂，例如与引物或探针、或与抗体相互作用。已经“分离”的核酸和蛋白质包括通过标准纯化方法纯化的核酸和蛋白质。该术语还涵盖通过在一个宿主细胞中重组表达所制备的核酸和蛋白质以及化学合成的核酸、蛋白质和多肽。
在另一个实例中，具有E63K突变的NRAS蛋白质(或其片段)的存在可以通过一个测定被确定，在该测定中NRAS蛋白质或片段在氨基酸63处的氨基酸序列被确定，例如通过氨基酸测序或使用序列特异性切割工具。
在这样的测定中，跨越氨基酸63的NRAS蛋白质或其片段使用上文所述的方法典型地从患者样本进行分离。然后分离的蛋白质或片段可以进行测序，至少到确定在位置63处的氨基酸的程度。适合的测序方法在本领域内是已知的。
确定NRAS G12V突变的存在
在核酸中
患者中的NRAS G12V突变的存在可以通过检测NRAS基因编码序列中的对应的突变来确定。
以上所述的关于E63K突变的方法比照适用于G12V突变，除了突变位点的位置之外。
编码G12V突变的核酸突变的突变位点典型地在NRAS编码序列的密码子12处。这可以理解为在NRAS cDNA序列中的对应于碱基288-290的任何碱基中的、导致缬氨酸被编码的改变。具体而言，突变可以出现在NRAS cDNA中的对应于碱基289的位置处。
该突变可以是在NRAS编码序列中的密码子12处的从G到T的改变。具体而言，该改变可以是在NRAS cDNA序列中的对应于碱基289的位置处的从G到T的改变，例如，在对应于核苷酸288-290的位置处的从GGT到GTT的改变。
根据本发明的一个方面，提供了能够选择性地与核酸序列杂交的寡核苷酸，该核酸序列在对应于NRAS蛋白质的位置12的位置处编码缬氨酸。在一个实施例中，该寡核苷酸能够在适合的条件下与编码多核苷酸的NRAS的有义链序列或反义链序列或其在对应于编码cDNA的NRAS的碱基289处的位置处包括突变体T的片段进行杂交，但是与在该位置处编码包含野生型G的多核苷酸的第二个NRAS弱杂交或完全不杂交，该寡核苷酸可以包含可检测的标记或与其相关联。在一个实施例中，该寡核苷酸被使用或适合用作PCR反应中的引物。在另一个实施例中，该寡核苷酸被使用或适合用作杂交探针。
根据本发明的另一方面，提供了能够选择性地与一种核酸序列(该核酸序列在对应于NRAS蛋白质的位置12的位置处编码缬氨酸)杂交的寡核苷酸，用于在检测患者是否具有编码NRAS蛋白中的G12V取代的核酸的方法中使用。
根据本发明的另一方面，提供了提供了能够选择性地与一种核酸序列(该核酸序列在对应于NRAS蛋白质的位置12的位置处编码缬氨酸)杂交的寡核苷酸，用于在选择用如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂联合治疗的患者的方法中使用。
在蛋白质中
本文所描述的NRAS G12V突变可以通过测定在对应于NRAS蛋白质的氨基酸序列中的G12或其包含氨基酸12的适合的片段的氨基酸位置处的从甘氨酸(G)到缬氨酸(V)的改变来进行检测。这可以通过任何适合的方法来完成。
以上所述的关于E63K突变的方法比照适用于G12V突变，除了突变位点的位置之外。
确定G12V突变的存在还可以包括确定NRAS蛋白质的量的增加。
根据本发明的一个方面，提供了能够选择性地与在对应于NRAS蛋白质的位置12的位置处包含缬氨酸的EGFR多肽结合的抗体，其中该抗体优先地与在对应于NRAS蛋白质的位置12的位置处具有缬氨酸的多肽结合，优于与在所述位置处具有甘氨酸的多肽的结合。
根据本发明的另一方面，提供了能够选择性地与在对应于NRAS蛋白质的位置12的位置处包含缬氨酸的EGFR多肽结合的抗体，用于在确定患者是否具有对应于NRAS蛋白质的位置12的位置处的缬氨酸的NRAS蛋白质的方法中使用，其中该抗体优先地与在对应于NRAS蛋白质的位置12的位置处具有缬氨酸的多肽结合，优于与在所述位置处具有甘氨酸的多肽的结合。在一个具体的实施例中，此方法用于选择用如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂联合治疗的患者。
确定NRAS G12R突变的存在
在核酸中
患者中的NRAS G12R突变的存在可以通过检测NRAS基因编码序列中的对应的突变来确定。
以上所述的关于E63K突变的方法比照适用于G12V突变，除了突变位点的位置之外。
编码G12R突变的核酸突变的突变位点典型地在NRAS编码序列的密码子12处。这可以理解为在NRAS cDNA序列中的对应于碱基288-290的任何碱基中的、导致精氨酸被编码改变。具体而言，突变可以出现在NRAS cDNA中的对应于碱基288的位置处。
该突变可以是在NRAS编码序列中的密码子12处的从G到C的改变。具体而言，该改变可以是在NRAS cDNA序列中的对应于碱基288的位置处的从G到C的改变，例如，在对应于核苷酸288-290的位置处的从GGT到CGT的改变。
在蛋白质中
本文所描述的NRAS G12R突变可以通过测定在对应于NRAS蛋白质的氨基酸序列中的G12或其包含氨基酸12的适合的片段的氨基酸位置处的从甘氨酸(G)到精氨酸(R)的改变来进行检测。这可以通过任何适合的方法来完成。
以上所述的关于E63K突变的方法比照适用于G12R突变，除了突变位点的位置之外。
确定G12R突变的存在还可以包括确定NRAS蛋白质的量的增加。
根据本发明的治疗
根据本发明，拥有根据本发明的NRAS激活突变或NRAS基因的拷贝数增加的EGFR相关的癌症患者可以有效地用EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合进行治疗。
典型地，具有NRAS突变或NRAS基因的拷贝数增加的的癌症患者已经接受或正在接受EGFR抑制剂的治疗。该患者可以表现出对单独用EGFR抑制剂治疗的获得性抗性的症状。在这种情形下，在该联合治疗中的EGFR抑制剂可以是用于患者的治疗(并且其是对于具有获得性抗性的患者的治疗来说的)中的相同的抑制剂。然而，还考虑了其中该联合治疗中的EGFR抑制剂与治疗中使用的是不同的抑制剂的治疗。在那种情况下，在该联合治疗中的EGFR抑制剂比在患者的治疗中使用的并对此已经获得抗性的EGFR抑制剂通常具有相同的世代或更高的世代。
在另一个实施例中，在患者中确定NRAS E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S或G12C突变或NRAS基因拷贝数增加的存在之后，本发明还可以提供在还未接受EGFR抑制剂治疗的患者体内的针对EGFR相关的癌症的一线疗法。在该一线疗法中，向患者给予EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合以延迟或预防对EGFR抑制剂的获得性抗性的发展(例如通过如本文所述的NRAS突变的发生)。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或它们中任一者的药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或它们中任一者的药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，在患者中确定E63K或G12V NRAS激活突变或NRAS基因拷贝数增加的存在之后，本发明还可以提供在还未接受EGFR抑制剂治疗的患者体内的针对EGFR相关的癌症的一线疗法。在该一线疗法中，向患者给予EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合以延迟或预防对EGFR抑制剂的获得性抗性的发展(例如通过如本文所述的NRAS激活突变的发生)。
在本发明的方法中，以治疗有效量向患者给予EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合。
要理解的是，本文提到的包括EGFR抑制剂和MEK抑制剂的联合治疗涵盖了包括一种或多种EGFR抑制剂和一种或多种MEK抑制剂的组合，并且具有或包括EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合涵盖了一种或多种EGFR抑制剂和/或一种或多种MEK抑制剂的组合。EGFR抑制剂和MEK抑制剂的特定组合在本说明书别处考虑。
MEK抑制剂
如本文使用的MEK抑制剂通常具有抑制Ras/Raf/MEK/ERK途径的活性。抑制剂可以在所述途径的任何阶段作用于组分，以抑制例如所述途径的组分的表达和/或活性。
MEK抑制剂可以例如是小分子量化合物。
MEK抑制剂可以抑制基因表达，例如通过干扰mRNA稳定性或翻译。MEK抑制剂可以选自反义寡核苷酸、小干扰RNA(siRNA)(有时称作短干扰RNA或沉默RNA)、或短发夹RNA(shRNA)(有时称作小发夹RNA)。此类MEK抑制剂可以抑制mek1和/或mek2基因的表达，例如通过干扰mRNA稳定性或翻译。
典型地，抑制剂通过在适合的测定中的至少一个可检测的量来降低表达或活性。抑制剂可以，例如，降低表达或活性至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或至少90％。
MEK抑制剂的适合实例在本披露的以下各页中被考虑。不受限地，适合用于在本发明的上下文中使用的MEK抑制剂包括选自下组的那些，该组由以下各项组成：司美替尼；曲美替尼；MEK-162；以及考比替尼(Cobimetinib)；连同这些抑制剂的药学上可接受的盐。
司美替尼
司美替尼的化学结构是：
它也可以通过以下化学名称已知：‘(6-(4-溴-2-氯-苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-甲酸(2-羟基-乙氧基)-酰胺)’。等同地，它也可以通过以下化学名称已知：‘5-[(4-溴-2-氯苯基)氨基]-4-氟-N-(2-羟基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺’。
司美替尼还能以药学上可接受的盐的形式提供，如硫酸氢盐；即司美替尼硫酸氢盐。(即1:1药物:H2SO4)。在适合的实施例中，MEK抑制剂可以包括司美替尼，或其药学上可接受的盐如硫酸氢盐。
曲美替尼
曲美替尼的化学结构是：
它也可以通过以下化学名称已知：N-(3-{3-环丙基-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基}苯基)乙酰胺。
曲美替尼还能以药学上可接受的盐的形式提供，并且除非本文另作要求，本披露中提及的曲美替尼还应该涵盖此类药学上可接受的盐。
MEK-162
MEK-162的化学结构是：
它也可以通过以下化学名称已知：5-[(4-溴-2-氟苯基)氨基]-4-氟-N-(2-羟基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺。MEK-162还能以药学上可接受的盐的形式提供，并且除非本文另作要求，本披露中提及的MEK-162还应该涵盖此类药学上可接受的盐。
考比替尼
考比替尼的化学结构是：
考比替尼也可以通过以下化学名称已知：{3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]苯基}{3-羟基-3-[(2S)-哌啶-2-基]氮杂环丁烷-1-基}甲酮。
考比替尼还能以药学上可接受的盐的形式提供，如考比替尼的富马酸盐(2:1药物:富马酸)。除非本文另作要求，本披露中提及的考比替尼还应该涵盖药学上可接受的盐如富马酸盐。
在适合的实施例中，MEK抑制剂可以抑制MEK1和MEK2两者的活性(所谓的“MEK1/2抑制剂”)。在一方面中，MEK抑制剂可以抑制MEK1或MEK2蛋白质的表达和/或活性。
MEK1
如本文使用的MEK1是指促分裂原活化蛋白激酶激酶1。
MEK1可以是对应于要治疗的种类的任何种类。在一方面中，MEK1是人MEK1。
(野生型)人MEK1基因描述于基因ID：5604中。野生型人mek1基因典型地具有对应于基因库登录号NM_002755.3中的MEK1cDNA序列的序列的mRNA表达产物，和具有UniProtKB/Swiss-Prot Q02750中的MEK1蛋白质氨基酸序列的蛋白质表达产物。在列于基因库登录号NM_002755.3中的MEK1 cDNA序列中，蛋白质编码序列在核苷酸476-1657处示出。该共有编码序列也存在于登录号CCDS10216.1下的CCDS数据库中。
本文提及的mek1基因(MEK1基因)、mRNA、cDNA或MEK1蛋白质可以是指人基因、mRNA或对应的cDNA序列、或蛋白质。
在一些情况下，MEK1还可以指以上中任一种的变体，如天然存在的变体。
上述内容比照适用于非人类物种的MEK1。例如，本文提及的mek1基因、mRNA、cDNA或MEK1蛋白质可以是指以上人基因、mRNA或蛋白质的物种同系物。
MEK2
如本文使用的MEK2是指促分裂原活化蛋白激酶激酶2。
MEK2可以是对应于要治疗的种类的任何种类。在一方面中，MEK2是人MEK2。
(野生型)人MEK2基因描述于基因ID:5605中。野生型人mek2基因典型地具有对应于基因库登录号NM_030662.3中的MEK2 cDNA序列的序列的mRNA表达产物，和具有UniProtKB/Swiss-Prot P36507中的MEK2蛋白质氨基酸序列的蛋白质表达产物。在基因库登录号NM_030662.3中的MEK2cDNA序列中，蛋白质编码序列在核苷酸255-1457处示出。该共有编码序列也存在于登录号CCDS12120.1下的CCDS数据库中。
本文提及的mek2基因(MEK2基因)、mRNA、cDNA或MEK2蛋白质可以是指这一人基因、mRNA或对应的cDNA序列、或蛋白质。
在一些情况下，MEK2还可以指以上中任一种的变体，如天然存在的变体。
上述内容比照适用于非人类物种的MEK2。例如，本文提及的mek2基因、mRNA、cDNA或MEK2蛋白质可以是指以上人基因、mRNA或蛋白质的物种同系物。
MEK1和MEK2的抑制剂
MEK抑制剂可以抑制MEK1或MEK2的任何适合的活性，例如蛋白激酶活性。蛋白激酶活性的抑制可以在适合的测定中被确定，例如如在叶(Yeh)等人，临床癌症研究(ClinCancer Res)2007年3月1日13；1576中所描述的。
MEK抑制剂可以例如，选自ATP竞争性MEK抑制剂、非ATP竞争性MEK抑制剂、或ATP非竞争性MEK抑制剂中的任何一种。
抑制MEK1和/或MEK2的活性的适合的MEK抑制剂包括司美替尼。
EGFR抑制剂和MEK抑制剂的特定组合用于在患者中使用，已经发现该患者的癌症包括NRAS E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S或G12C突变或NRAS基因拷贝数的增加。
在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI吉非替尼(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂司美替尼(或其药学上可接受的盐)。在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI吉非替尼(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂曲美替尼(或其药学上可接受的盐)。在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI吉非替尼(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂MEK-162(或其药学上可接受的盐)。在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI吉非替尼(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂考比替尼(或其药学上可接受的盐)。
在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI埃罗替尼(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂司美替尼(或其药学上可接受的盐)。在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI埃罗替尼(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂曲美替尼(或其药学上可接受的盐)。在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI埃罗替尼(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂MEK-162(或其药学上可接受的盐)。在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI埃罗替尼(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂考比替尼(或其药学上可接受的盐)。
在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI阿法替尼(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂司美替尼(或其药学上可接受的盐)。在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI阿法替尼(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂曲美替尼(或其药学上可接受的盐)。在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI阿法替尼(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂MEK-162(或其药学上可接受的盐)。在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI阿法替尼(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂考比替尼(或其药学上可接受的盐)。
在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI AZD9291(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂司美替尼(或其药学上可接受的盐)。在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI AZD9291(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂曲美替尼(或其药学上可接受的盐)。在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI AZD9291(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂MEK-162(或其药学上可接受的盐)。在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI AZD9291(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂考比替尼(或其药学上可接受的盐)。
在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI CO-1686(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂司美替尼(或其药学上可接受的盐)。在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI CO-1686(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂曲美替尼(或其药学上可接受的盐)。在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI CO-1686(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂MEK-162(或其药学上可接受的盐)。在适合的实施例中，联合治疗可以包括EGFR TKI CO-1686(或其药学上可接受的盐)和MEK抑制剂考比替尼(或其药学上可接受的盐)。
NRAS的抑制剂
MEK抑制剂可以抑制与NRAS信号传导相关联的活性，因为MEK1和/或MEK2是NRAS信号传导途径的下游组件。
例如，MEK抑制剂可以抑制NRAS基因的表达，例如通过干扰mRNA稳定性或翻译。靶向NRAS基因的表达的siRNA的实例提供于实例部分中。
其他试剂
根据本发明的EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合可以作为单一疗法给予至癌症患者。可替代地，EGFR抑制剂和MEK抑制剂可以与另外的外科或放射治疗或另外的化疗剂或治疗性抗体组合给予。
组合给予
根据本发明，联合治疗的各组分可以彼此组合或结合给予。联合治疗可以处于组合制剂的形式，例如EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合制剂。组合可以包括组分的一种或多种的单独的配制品，例如EGFR抑制剂和MEK抑制剂的单独的配制品。
组合中的各组分(例如单独的配制品)可以按本文关于联合治疗方法所述的顺序地、分别地和/或同时地被给予。因此，例如，EGFR抑制剂可以与MEK抑制剂分别地、顺序地或同时地被给予。
在一个实施例中，同时地(任选地重复地)给予这些组分。在一个实施例中，顺序地(任选地重复地)给予这些组分。在一个实施例中，分别地(任选地重复地)给予这些组分。
技术人员将理解的是，在组合中的试剂的单独配制品顺序地或连续地给予的情况下，可以按任何顺序给予这些试剂。因此，在EGFR抑制剂和MEK抑制剂顺序地或连续地给予的情况下，可以给予EGFR抑制剂随后是MEK抑制剂，或给予MEK抑制剂随后是EGFR抑制剂。
在一个实施例中，试剂的单独配制品可按可替代的剂量模式给予。
在顺序地或分别地给予单独配制品的情况下，给予该第二(或随后的)配制品的延迟不应该使该联合治疗的有益治疗作用丧失。
组合产物
本文所述的联合治疗的组分可以作为组合产物被提供。
组合产物典型地包括：
(a)EGFR抑制剂；和
(b)MEK抑制剂；如本文所述的。
通过本文所述的方法，该组合产物对于治疗EGFR相关的癌症是有用的。
组合产物可以包括
(a)EGFR抑制剂；和
(b)MEK抑制剂；
联合药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体。
如本文所定义的组合产物可以处于各组分的组合制剂的形式。因此组合产物可以处于EGFR抑制剂、和MEK抑制剂的组合制剂的形式。
如本文所定义的组合产物可以包括部件试剂盒，该部件试剂盒包括产物中的各种试剂的单独配制品。因此，该部件试剂盒可以包括如本文所述的EGFR抑制剂、和MEK抑制剂的单独配制品。
组合产物可以包括部件试剂盒，该部件试剂盒包括
(a)EGFR抑制剂或其药学上可接受的盐，联合药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体；
和：
(b)MEK抑制剂或其药学上可接受的盐，联合药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体；
其中这些组分以适合于顺序地、分别地和/或同时地给予至癌症患者的形式被提供，癌症患者的肿瘤细胞包含E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S或G12C NRAS突变。
在另外的实施例中，这些肿瘤细胞包含选自E63K、G12V和G12R的NRAS突变。
在另外的实施例中，这些肿瘤细胞包含选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，这些肿瘤细胞包含E63K、G12V或G12R NRAS突变。
在一个实施例中，这些肿瘤细胞包含G12R NRAS突变。
组合产物可以包括部件试剂盒，该部件试剂盒包括
(a)EGFR抑制剂，联合药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体；
和：
(a)MEK抑制剂，联合药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体；
其中这些组分以适合于顺序地、分别地和/或同时地给予至癌症患者的形式被提供，癌症患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或具有E63K和/或G12V NRAS激活突变的NRAS蛋白质。
该部件试剂盒可以包括：
包含组合产物中的第一组分联合药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体的一个第一容器；和
包含组合产物中的第二或任何随后的组分的一个第二或随后的容器，每种组分分别地联合药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体，以及
用于包含所述第一容器和第二容器以及任何随后的容器的容器装置。
如本文所定义的组合产物可以包括药物组合物，该药物组合物包含：
(a)EGFR抑制剂；和
(b)MEK抑制剂。
药物组合物通常包括药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体。
组合产物可以包括药物组合物，该药物组合物包含：
(a)EGFR抑制剂，联合药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体；和
(b)MEK抑制剂，联合药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体。
本发明的组合产物可以包括多于一种EGFR抑制剂，和/或多于一种MEK抑制剂。组合产物可以包括一种或多种选自上文所述的那些其他的活化剂。
本文所述的部件试剂盒可以进一步包括顺序地、分别地和/或同时地给予这些组分用于治疗癌症的说明书。
在一个实施例中，如本文所述的组合产物进一步包括说明书，这些说明书表明本文所定义的产物可以通过本文所述的方法用于治疗EGFR相关的癌症。产物可以包括说明书，这些说明书表明该产物用于在如本文所述的癌症患者中在如本文所述的癌症的治疗中使用。例如，产物可以包括说明书，这些说明书表明该产物可以用于在已经接受或正在接受EGFR抑制剂疗法并针对根据本发明的NRAS突变或NRAS基因拷贝数的增加而测试为阳性的患者中治疗癌症。在另一个实例中，产物可以包括说明书，这些说明书表明该产物可以作为一线疗法用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或具有E63K和/或G12V NRAS激活突变的NRAS蛋白质。在另一个实例中，产物可以包括说明书，这些说明书表明该产物可以用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，所述患者的肿瘤细胞包含G12R NRAS突变。在一个实施例中，产物包括说明书，这些说明书表明该产物可以用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，所述患者的肿瘤细胞包含E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S或G12C NRAS突变。
医疗方法和医疗用途
本发明还涉及用于在在患者中治疗EGFR相关的癌症的方法，该方法包括给予如本文所述的组合产物或药用组合物，其中所述患者具有选自下组的NRAS激活突变，该组由以下各项组成：NRAS E63K突变；和NRAS G12V突变或NRAS基因拷贝数的增加。
在一个实施例中，提供了用于在在患者中治疗EGFR相关的癌症的方法，该方法包括给予如本文所述的组合产物或药用组合物，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变，或NRAS拷贝数增加。
在一个实施例中，所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变。
在另一个实施例中，所述患者具有选自E63K、G12V和G12R的NRAS突变。
在另外的实施例中，所述患者具有选自G12R、G12A、G12D、G12S或G12C的NRAS突变。
在一方面中，本发明涉及如本文所定义的组合产物，该组合产物包括
(a)EGFR抑制剂；和
(b)MEK抑制剂；
用于在本文所述的任何方法中顺序地、分别地和/或同时地使用。
进一步提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合产物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变或NRAS基因拷贝数增加；其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂各自联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂，并且其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂以适合于分别的、同时的和/或顺序的给予的形式被提供。
进一步提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合产物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，其中所述患者具有选自E63K、G12V和G12R的NRAS突变或NRAS基因拷贝数增加；其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂各自联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂，并且其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂以适合于分别的、同时的和/或顺序的给予的形式被提供。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
进一步提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合产物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，其中所述患者具有选自下组的NRAS激活突变，该组由以下各项组成：NRAS E63K突变和NRAS G12V突变、或NRAS基因拷贝数增加；其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂各自联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂，并且其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂以适合于分别的、同时的和/或顺序的给予的形式被提供。
在另一方面中，本发明提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂(各自任选地处于药学上可接受的盐的形式)联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂的药物组合物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变，或NRAS基因拷贝数的增加。
在另一方面中，本发明提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂(各自任选地处于药学上可接受的盐的形式)联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂的药物组合物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，其中所述患者具有选自对应于NRAS蛋白质中的位置的E63K、G12V和G12R的NRAS突变；或NRAS基因拷贝数的增加。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另一方面中，本发明提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂的药物组合物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，其中所述患者具有选自下组的NRAS激活突变，该组由以下各项组成：对应于NRAS蛋白质中的位置的E63K和G12V；或NRAS基因拷贝数的增加。
本发明还涉及如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变，或NRAS基因拷贝数的增加。因此，本发明还涉及如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产治疗NRAS突变的癌症的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，或NRAS基因拷贝数的增加。
本发明还涉及如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变。
因此，本发明还涉及如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产治疗NRAS突变的癌症的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。在另一个实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。在另一个实施例中，该NRAS突变的癌症是G12R NRAS突变的癌症。在另一个实施例中，该NRAS突变的癌症具有NRAS拷贝数的增加。
本发明还涉及如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自E63K、G12V和G12R的NRAS突变。
因此，本发明还涉及如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产治疗NRAS突变的癌症的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。在另一个实施例中，该NRAS突变的癌症具有NRAS拷贝数的增加。
本发明还涉及如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自下组的NRAS激活突变，该组由以下各项组成：NRAS E63K突变和NRAS G12V突变、或NRAS拷贝数的增加。
本发明还涉及EGFR抑制剂和MEK抑制剂在患者中治疗EGFR相关的癌症中的组合使用，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变；或NRAS拷贝数的增加。
因此，本发明还涉及用于在治疗NRAS突变的癌症或NRAS拷贝数的增加中组合使用的EGFR抑制剂和MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
本发明还涉及用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中组合使用的EGFR抑制剂和MEK抑制剂，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变。因此，本发明还涉及用于在治疗NRAS突变的癌症中组合使用的EGFR抑制剂和MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
本发明还涉及用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中组合使用的EGFR抑制剂和MEK抑制剂，其中所述患者具有选自E63K、G12V和G12R的NRAS突变，或NRAS拷贝数的增加。
因此，本发明还涉及用于在治疗NRAS突变的癌症或NRAS拷贝数的增加中组合使用的EGFR抑制剂和MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变的癌症是G12R NRAS突变的癌症。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
本发明还涉及用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中组合使用的EGFR抑制剂和MEK抑制剂，其中所述患者具有选自下组的NRAS激活突变，该组由以下各项组成：NRAS E63K突变和NRAS G12V突变、或NRAS拷贝数的增加。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变或NRAS拷贝数的增加，并且其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
因此，提供了用于在治疗NRAS突变的癌症或NRAS拷贝数的增加中使用的EGFR抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，并且其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变；并且其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
因此，提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，并且其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中所述患者具有选自E63K、G12V和G12R的NRAS突变或NRAS拷贝数的增加，并且其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
因此，提供了用于在治疗NRAS突变的癌症或NRAS拷贝数的增加中使用的EGFR抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R；并且其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中所述患者具有选自E63K、G12V和G12R的NRAS突变，并且其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
因此，提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R；并且其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变的癌症是G12R NRAS突变的癌症。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中所述患者具有选自下组的NRAS激活突变，该组由以下各项组成：NRAS E63K突变和NRAS G12V突变、或NRAS拷贝数的增加，并且其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的MEK抑制剂，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变或NRAS拷贝数的增加，并且其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
因此，提供了用于在治疗NRAS突变的癌症或NRAS拷贝数的增加中使用的MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，并且其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的MEK抑制剂，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变；并且其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
因此，提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，并且其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的MEK抑制剂，其中所述患者具有选自E63K、G12V和G12R的NRAS突变或NRAS拷贝数的增加，并且其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
因此，提供了用于在治疗NRAS突变的癌症或NRAS拷贝数的增加中使用的MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R；并且其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的MEK抑制剂，其中所述患者具有选自E63K、G12V和G12R的NRAS突变，并且其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
因此，提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R；并且其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变的癌症是G12R NRAS突变的癌症。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的MEK抑制剂，其中所述患者具有选自下组的NRAS激活突变，该组由以下各项组成：NRAS E63K突变和NRAS G12V突变；或具有NRAS拷贝数的增加，并且其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
本发明还涉及MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变或NRAS拷贝数的增加，并且其中所述治疗包括该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
因此，本发明涉及MEK抑制剂用于生产治疗NRAS突变的癌症或NRAS拷贝数的增加的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，并且其中所述治疗包括该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
本发明还涉及MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变，并且其中所述治疗包括该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
因此，本发明涉及MEK抑制剂用于生产治疗NRAS突变的癌症的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，并且其中所述治疗包括该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
本发明还涉及MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自E63K、G12V和G12R的NRAS突变或NRAS拷贝数的增加，并且其中所述治疗包括该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
因此，本发明涉及MEK抑制剂用于生产治疗NRAS突变的癌症或NRAS拷贝数的增加的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，并且其中所述治疗包括该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
本发明还涉及MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自E63K、G12V和G12R的NRAS突变，并且其中所述治疗包括该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
因此，本发明涉及MEK抑制剂用于生产治疗NRAS突变的癌症的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，并且其中所述治疗包括该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变的癌症是G12R NRAS突变的癌症。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
本发明还涉及MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自下组的NRAS激活突变，该组由以下各项组成：NRAS E63K突变和NRASG12V突变；或具有NRAS拷贝数的增加，并且其中所述治疗包括该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
该药物(例如如本文所述的组合产物)可以包括MEK抑制剂和EGFR抑制剂。
本发明还涉及EGFR抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变或NRAS拷贝数的增加，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
因此，本发明涉及EGFR抑制剂用于生产治疗NRAS突变的癌症或NRAS拷贝数的增加的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
本发明还涉及EGFR抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
因此，本发明涉及EGFR抑制剂用于生产治疗NRAS突变的癌症的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
本发明还涉及EGFR抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自E63K、G12V和G12R的NRAS突变或NRAS拷贝数的增加，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
因此，本发明涉及EGFR抑制剂用于生产治疗NRAS突变的癌症或NRAS拷贝数的增加的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
本发明还涉及EGFR抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自E63K、G12V和G12R的NRAS突变，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
因此，本发明涉及EGFR抑制剂用于生产治疗NRAS突变的癌症的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变的癌症是G12R NRAS突变的癌症。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
本发明还涉及EGFR抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自下组的NRAS激活突变，该组由以下各项组成：NRAS E63K突变和NRASG12V突变、或NRAS拷贝数的增加，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
本发明还涉及EGFR抑制剂和MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变或NRAS拷贝数的增加，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与该MEK抑制剂组合给予。
因此，本发明涉及EGFR抑制剂和MEK抑制剂用于生产治疗NRAS突变或NRAS拷贝数的增加的癌症的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与该MEK抑制剂组合给予。
本发明还涉及EGFR抑制剂和MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS突变，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与该MEK抑制剂组合给予。
因此，本发明涉及EGFR抑制剂和MEK抑制剂用于生产治疗NRAS突变的癌症的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与该MEK抑制剂组合给予。
本发明还涉及EGFR抑制剂和MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自E63K、G12V和G12R的NRAS突变或NRAS拷贝数的增加，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与该MEK抑制剂组合给予。
因此，本发明涉及EGFR抑制剂和MEK抑制剂用于生产治疗NRAS突变或NRAS拷贝数的增加的癌症的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与该MEK抑制剂组合给予。
本发明还涉及EGFR抑制剂和MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自E63K、G12V和G12R的NRAS突变，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与该MEK抑制剂组合给予。
因此，本发明涉及EGFR抑制剂和MEK抑制剂用于生产治疗NRAS突变的癌症的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与该MEK抑制剂组合给予。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变的癌症是G12R NRAS突变的癌症。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
本发明还涉及EGFR抑制剂和MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者具有选自下组的NRAS激活突变，该组由以下各项组成：NRASE63K突变和NRAS G12V突变；或具有NRAS拷贝数的增加，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与该MEK抑制剂组合给予。
该药物可以是如本文所述的组合产物。
还提供了用于在患者中治疗EGFR相关的癌症的方法，该方法包括给予如本文所述的组合产物或药物组合物。
本发明还提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合产物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂各自联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂，并且其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂以适合于分别地、同时地和/或顺序地给予至患者的形式被提供，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，或选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变。
因此，本发明提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合产物，用于在治疗NRAS突变的癌症中使用，其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂各自联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂，并且其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂以适合于分别地、同时地和/或顺序地给予的形式被提供，并且其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，或NRAS基因拷贝数的增加。
本发明还提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合产物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂各自联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂，并且其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂以适合于分别地、同时地和/或顺序地给予至患者的形式被提供，所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变。
因此，本发明提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合产物，用于在治疗NRAS突变的癌症中使用，其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂各自联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂，并且其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂以适合于分别地、同时地和/或顺序地给予的形式被提供，并且其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
本发明还提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合产物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂各自联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂，并且其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂以适合于分别地、同时地和/或顺序地给予至患者的形式被提供，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，或选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变。
因此，本发明提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合产物，用于在治疗NRAS突变的癌症中使用，其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂各自联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂，并且其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂以适合于分别地、同时地和/或顺序地给予的形式被提供，并且其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，或NRAS基因拷贝数的增加。
本发明还提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合产物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂各自联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂，并且其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂以适合于分别地、同时地和/或顺序地给予至患者的形式被提供，所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变。
因此，本发明提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合产物，用于在治疗NRAS突变的癌症中使用，其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂各自联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂，并且其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂以适合于分别地、同时地和/或顺序地给予的形式被提供，并且其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变的癌症是G12R NRAS突变的癌症。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
本发明还提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂的组合产物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂各自联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂，并且其中该EGFR抑制剂和MEK抑制剂以适合于分别地、同时地和/或顺序地给予至患者的形式被提供，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，或具有E63K和/或G12V NRAS激活突变的NRAS蛋白质。
本发明还涉及包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂的药物组合物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，或选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变。因此，本发明提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂的药物组合物，用于在治疗NRAS突变的癌症中使用，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，或NRAS基因拷贝数的增加。
本发明还涉及包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂的药物组合物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变。
因此，本发明提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂的药物组合物，用于在治疗NRAS突变的癌症中使用，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
本发明还涉及包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂的药物组合物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，或选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变。
因此，本发明提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂的药物组合物，用于在治疗NRAS突变的癌症中使用，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，或NRAS基因拷贝数的增加。
本发明还涉及包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂的药物组合物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变。
因此，本发明提供了包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂的药物组合物，用于在治疗NRAS突变的癌症中使用，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变的癌症是G12R NRAS突变的癌症。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
本发明还涉及包含如本文所述的EGFR抑制剂和MEK抑制剂联合药学上可接受的佐剂、载体或稀释剂的药物组合物，用于在患者中治疗EGFR相关的癌症，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，或具有E63K和/或G12V NRAS激活突变的NRAS蛋白质。
本发明还进一步涉及如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，或选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变。
因此，提供了如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产治疗NRAS突变的癌症的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，或NRAS基因拷贝数的增加。
本发明还进一步涉及如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变。
因此，提供了如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产治疗NRAS突变的癌症的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
本发明还进一步涉及如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，或选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变。
因此，还提供了如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产治疗NRAS突变的癌症的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，或NRAS基因拷贝数的增加。
本发明还进一步涉及如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变。
因此，提供了如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产治疗NRAS突变的癌症的药物的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变的癌症是G12R NRAS突变的癌症。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
本发明还进一步涉及如本文所述的组合产物或药物组合物用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，或具有E63K和/或G12V NRAS激活突变的NRAS蛋白质。
本发明还涉及用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中组合使用的EGFR抑制剂和MEK抑制剂，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，或选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变。
因此，本发明涉及用于在治疗NRAS突变的癌症中组合使用的EGFR抑制剂和MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C；或NRAS拷贝数的增加。
本发明还涉及用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中组合使用的EGFR抑制剂和MEK抑制剂，其中所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变。
因此，本发明还涉及用于在治疗NRAS突变的癌症中组合使用的EGFR抑制剂和MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
本发明还涉及用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中组合使用的EGFR抑制剂和MEK抑制剂，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，或选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变。
因此，本发明还涉及用于在治疗NRAS突变的癌症中组合使用的EGFR抑制剂和MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，或NRAS拷贝数的增加。
本发明还涉及用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中组合使用的EGFR抑制剂和MEK抑制剂，其中所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变。
因此，本发明还涉及用于在治疗NRAS突变的癌症中组合使用的EGFR抑制剂和MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变的癌症是G12R NRAS突变的癌症。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
本发明还涉及用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中组合使用的EGFR抑制剂和MEK抑制剂，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，或具有E63K和/或G12V NRAS激活突变的NRAS蛋白质。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予至患者，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，或选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变。
因此还提供了在治疗NRAS突变的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予，并且该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，或NRAS基因拷贝数的增加。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予至患者，所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变。
因此还提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予，并且该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予至患者，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变。
因此还提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予，并且该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，或NRAS基因拷贝数的增加。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予至患者，所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变。
因此还提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予，并且该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变的癌症是G12R NRAS突变的癌症。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予至患者，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或具有E63K和/或G12V NRAS激活突变的NRAS蛋白质。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的MEK抑制剂，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变，其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
因此，还提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C或NRAS基因拷贝数的增加，并且其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的MEK抑制剂，其中所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变，其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
因此，还提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，并且其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的MEK抑制剂，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变，其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
因此，还提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R或NRAS基因拷贝数的增加，并且其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的MEK抑制剂，其中所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变，其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
因此，还提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，并且其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变的癌症是G12R NRAS突变的癌症。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
还提供了用于在患者中在治疗EGFR相关的癌症中使用的MEK抑制剂，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或具有E63K和/或G12V NRAS激活突变的NRAS蛋白质，其中该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
本发明还涉及MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变，其中所述治疗包括该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
本发明还涉及MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变，并且其中所述治疗包括该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
本发明还涉及MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变，其中所述治疗包括该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
本发明还涉及MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变，并且其中所述治疗包括该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变是G12R。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
本发明还涉及MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或具有具有E63K和/或G12V NRAS激活突变的NRAS蛋白质，其中所述治疗包括该MEK抑制剂与EGFR抑制剂组合给予。
本发明还涉及EGFR抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变，其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
本发明还涉及EGFR抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
本发明还涉及EGFR抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变，其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
本发明还涉及EGFR抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变是G12R。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
本发明还涉及EGFR抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或具有具有E63K和/或G12V NRAS激活突变的NRAS蛋白质，其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予。
本发明还涉及EGFR抑制剂和MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变，其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与该MEK抑制剂组合给予。
本发明还涉及EGFR抑制剂和MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C的NRAS蛋白质突变，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与该MEK抑制剂组合给予。
本发明还涉及EGFR抑制剂和MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变，其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与该MEK抑制剂组合给予。
本发明还涉及EGFR抑制剂和MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，其中所述患者的肿瘤细胞包含选自E63K、G12V和G12R的NRAS蛋白质突变，并且其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与该MEK抑制剂组合给予。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变是G12R。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或CO1686；或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
本发明还涉及EGFR抑制剂和MEK抑制剂用于生产在患者中治疗EGFR相关的癌症的药物的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加或具有具有E63K和/或G12VNRAS激活突变的NRAS蛋白质，其中所述治疗包括该EGFR抑制剂与该MEK抑制剂组合给予。
该药物可以是如本文所述的组合产物。
另外的实施例
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗NRAS突变的癌症的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗NRAS突变的癌症的用途，其中该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗NRAS突变的癌症的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R。
在另外的实施例中，该NRAS突变是G12R。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗E63K和/或G12VNRAS突变的癌症的用途。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗G12R NRAS突变的癌症的用途。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗患者中的癌症的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗E63K NRAS突变的癌症的用途。
因此，提供了用于在E63K NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗G12V NRAS突变的癌症的用途。
因此，提供了用于在G12V NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂。
在另一个实施例中，提供了用于在G12R NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂。
在本文所述的任何实施例中，该EGFR抑制剂可以选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、达克替尼(dacomitinib)、AZD9291以及CO-1686(其中前述的全部可以处于药学上可接受的盐的形式，条件是存在至少一个允许此类盐形成的官能团)。
在本文所述的任何实施例中，该EGFR抑制剂可以选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291以及CO-1686(其中前述的全部可以处于药学上可接受的盐的形式，条件是存在至少一个允许此类盐形成的官能团)。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂(各自任选地处于药学上可接受的盐的形式)用于治疗NRAS突变的癌症的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C。
在另外的实施例中，该NRAS突变是G12R。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂(各自任选地处于药学上可接受的盐的形式)用于治疗NRAS突变的癌症的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂(各自任选地处于药学上可接受的盐的形式)用于治疗NRAS突变的癌症的用途，其中该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
因此在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗E63K和/或G12V NRAS突变的癌症的用途，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂(各自任选地处于药学上可接受的盐的形式)用于治疗G12R NRAS突变的癌症的用途，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在G12R NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂用于治疗患者中的癌症的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在患者中的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗E63K NRAS突变的癌症的用途，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在E63K NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗G12V NRAS突变的癌症的用途，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在G12V NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂(各自任选地处于药学上可接受的盐的形式)用于治疗G12R NRAS突变的癌症的用途，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在G12R NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686，或其药学上可接受的盐。
在本文所述的任何实施例中，该MEK抑制剂可以选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼(其中前述的全部可以处于药学上可接受的盐的形式，条件是存在至少一个允许此类盐形成的官能团)。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂(各自任选地处于药学上可接受的盐的形式)用于治疗NRAS突变的癌症的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂(各自任选地处于药学上可接受的盐的形式)用于治疗NRAS突变的癌症的用途，其中该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂(各自任选地处于药学上可接受的盐的形式)用于治疗NRAS突变的癌症的用途，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
因此在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗E63K和/或G12V NRAS突变的癌症的用途，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂(各自任选地处于药学上可接受的盐的形式)用于治疗G12R NRAS突变的癌症的用途，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在G12R NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂用于治疗患者中的癌症的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗E63K NRAS突变的癌症的用途，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在E63K NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗G12V NRAS突变的癌症的用途，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在G12V NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂(各自任选地处于药学上可接受的盐的形式)用于治疗G12R NRAS突变的癌症的用途，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在G12R NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼，或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了用于在NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了用于在NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了用于在NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂用于治疗E63K和/或G12VNRAS突变的癌症的用途，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在E63K和/或G12V NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂用于治疗患者中的癌症的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在患者中的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗E63K NRAS突变的癌症的用途，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在E63K NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗G12V NRAS突变的癌症的用途，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在G12V NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了用于在G12R NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO-1686或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼或其药学上可接受的盐。
在本文所述的任何实施例中，该MEK抑制剂可以是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，并且其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，并且其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，并且其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗E63K和/或G12VNRAS突变的癌症的用途，其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在E63K和/或G12V NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了用于在G12R NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了用于治疗患者中的癌症的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在患者中的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗E63K NRAS突变的癌症的用途，其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在E63K NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合用于治疗G12V NRAS突变的癌症的用途，其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在G12V NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在本文所述的任何实施例中，该EGFR抑制剂可以选自吉非替尼和AZD9291，并且该MEK抑制剂是司美替尼(其中前述中的任一种可以处于药学上可接受的盐的形式)。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂用于治疗E63K和/或G12VNRAS突变的癌症的用途，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼和AZD9291或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在E63K和/或G12V NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼和AZD9291或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了用于在G12R NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼和AZD9291或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了用于在G12R NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了用于在G12R NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂用于治疗患者中的癌症的用途，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼和AZD9291；或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在患者中的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼和AZD9291；或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂用于治疗E63K NRAS突变的癌症的用途，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼和AZD9291或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在E63K NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼和AZD9291或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供了EGFR抑制剂组合MEK抑制剂用于治疗G12V NRAS突变的癌症的用途，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼和AZD9291或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
因此，提供了用于在G12V NRAS突变的癌症的治疗中使用的EGFR抑制剂组合MEK抑制剂，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼和AZD9291或其药学上可接受的盐，并且其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
在本文描述“E63K NRAS突变的癌症”的任何实施例中，该癌症可以是“E63K NRAS突变的肺癌”或“E63K NRAS突变的非小细胞肺癌”或“先前已经用EGFR TKI治疗过的E63KNRAS突变的癌症”。
在本文描述“G12V NRAS突变的癌症”的任何实施例中，该癌症可以是“G12V NRAS突变的肺癌”或“G12V NRAS突变的非小细胞肺癌”或“先前已经用EGFR TKI治疗过的E63KNRAS突变的癌症”。如本文所述的，相同的类型可以应用至其他NRAS蛋白质突变以提供另外的实施例。
在本文描述“NRAS突变的癌症”的任何实施例中，该癌症可以进一步被定义为“NRAS突变的肺癌”或“NRAS突变的非小细胞肺癌”或“先前已经用EGFR TKI治疗过的NRAS突变的癌症”。
在本文描述“患者中的癌症，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加”的任何实施例中，该癌症可以是“非小细胞肺癌，其肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加”或“患者中的癌症，所述患者的肿瘤细胞包含NRAS基因拷贝数的增加，其中该癌症先前已经用EGFR TKI治疗过”。
联合治疗的协同作用
本发明的联合治疗预期在受试者中的治疗癌症方面产生协同的或有益的作用。这样的作用可以例如通过抗肿瘤作用的范围、应答速率、疾病进展的时间、或存活率中的一种或多种来进行确定。
在一方面中，如果按照通过例如，应答程度、应答速率/治愈速率、疾病进展的时间、经历的副作用、或存活期所测量的，这种作用在治疗上优于采用联合治疗的组分中的一种(例如以其常规剂量或浓度)可达到的效果，那么实现协同的或有益的作用。
如果组合作用在治疗上优于使用组合的组分中的一种达到的各个作用的总和，和/或如果在不个别地响应(或弱响应)于组分中的一种的一组患者中作用所达到的作用，那么可以获得协同的或有益的作用。
此外，如果组分中的一种以其常规剂量或浓度使用，并且其他的一种或多种组分以减少的剂量或浓度使用并且治疗效果等同于或好于使用联合治疗的组分的常规量所达到的治疗效果，那么联合治疗可以被定义为提供协同的或有益的作用。
具体而言，如果联合治疗的组分中的一种的常规剂量可被降低，不损害以下项中的一种或多种：应答程度、应答速率、疾病进展的时间和存活数据，具体是不损害响应的持续时间，但是比当使用每种组分的常规剂量或浓度时出现的令人烦恼的副作用具有更少和/或更小的副作用，那么可认为存在协作或益处。
配制品和递送途径
用于体内使用的药物组合物或组合产物典型地包含一种或多种活性剂(例如如本文所述的EGFR抑制剂和/或MEK抑制剂)，混合一种或多种药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂、佐剂、填充剂、缓冲剂、稳定剂、防腐剂、润滑剂或本领域技术人员熟知的其他材料。
本文中有用的药学上可接受的赋形剂是常规的。雷明顿药物科学(Remington’sPharmaceutical Sciences)，由E.W.马丁(Martin)编写，麦克出版公司(Mack PublishingCo.)，伊斯顿(Easton)，宾夕法尼亚州(PA)，第15版(1975)，描述了适用于本文披露的化合物的药物递送的组合物和配制品。
此类配制品还可以常规地含有药学上可接受的浓度的盐、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂和/或相容性载体。
配制品还可以包括抗氧化剂和/或防腐剂。作为抗氧化剂可以举出生育酚，丁基羟基苯甲醚，丁基羟基甲苯，亚硫酸盐(例如硫酸钠、亚硫酸氢钠、丙酮亚硫酸氢钠、焦亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、甲醛次硫酸氢钠、硫代硫酸钠)以及去甲二氢愈创木酸。合适的防腐剂例如可以是苯酚、氯代丁醇、苄醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯扎氯铵和西吡氯铵。
配制品可以以单位剂型存在。
通过任何合适的装置，组合物和本文中所述的产品可被传递到靶细胞(或包含靶细胞的组织、器官或受试者)中。
用于递送至受试者的给予途径和/或递送装置的实例包括：口服、胃肠外、经皮、皮内、动脉内或静脉内或局部。在一个实例中，给予可以通过静脉内、动脉内或皮下注射或输注，或通过口服给予。
组合物或产物可以用于口服给予。在一方面中，口腔组合物可以包括含有活性剂组合增强剂以改善药剂的生物利用度和/或吸收的口服剂型。
适合用于口服给予(例如通过摄食)的配制品可以作为不连续单位呈现，如各自含有预先确定的量的活性剂的胶囊、扁囊剂或片剂；呈粉剂或颗粒剂；呈水性或非水性液体中的溶液或混悬液；或呈水包油型液体乳剂或油包水型液体乳剂；呈大丸剂；呈药糖剂；或呈糊剂。
在一个实例中，组合物或产物可以用于胃肠外给予。胃肠外制剂可以通过一个或多个途径如静脉内、皮下、皮内和输注给予；一个具体的实例是静脉内。本文所披露的配制品可以使用注射器、喷射器、用于固体配制品的柱塞、泵、或在本领域中公认的用于胃肠外给予的任何其他装置来给予。
组合物或产品可以用于局部给予，例如到皮肤上。
量/剂量/治疗有效的
在组合物(例如药物组合物)中的活性成分(例如EGFR抑制剂、或MEK抑制剂、或其他活性剂)的实际量(例如剂量水平)或浓度可以改变，以便获得活性成分的量，该量对于具体的受试者、组合物、和给予模式是有效的以实现所希望的治疗响应(本文中称作“治疗有效的”量或剂量)。
所选的剂量水平可以例如，取决于具体的活性成分的活性，所治疗的病症的严重性和条件，并且如果合适的话，所治疗的受试者的先前病史。然而，在低于获得所希望的作用所需的水平上开始化合物的剂量并逐渐增加剂量直至获得所希望的作用属于本领域的基本技能。
对于给定的受试者或患者的本文所述的组合中的抑制剂的剂量可以由主治医师或其他技术人员来确定，考虑到已知的各种因素以改善药物作用，这些因素包括疾病或病症的严重性和类型、体重、性别、饮食、给予时间和给予途径、其他药物和其他相关因素(如临床因素)。治疗有效剂量可以通过体外或体内方法来确定。
将要使用的治疗有效量将取决于例如，治疗目标、给予途径、和受试者的状况。因此，对于治疗师或其他技术人员来说根据需要以获得最佳的治疗效果来滴定剂量并修改给予途径是优选的。典型的每日剂量范围可能是从约0.0001mg/kg至达到250mg/kg或更多，取决于上文提到的因素。典型地，临床医师或其他技术人员将管理如本文所述的该抑制剂或组合(例如组合产品)，直到达到实现所希望的效果的剂量。在组合中的试剂的单独配制品被给予的情况下，其中所述组合中的试剂可被给予(即，是否和在什么时间点发生顺序的、分别的和/或同时的给予)的顺序可以由医师或技术人员来确定。
给予试剂的组合可以如前文所述的发生，例如试剂的单独配制品可以顺序地、分别地和/或同时地给予。
药学上可接受的盐
本发明还涉及本文提到的特定的EGFR抑制剂和MEK抑制剂的药学上可接受的盐。因此，本文中提及的“EGFR抑制剂”或“MEK抑制剂”可被解释为涵盖具体命名的抑制剂和它们的药学上可接受的盐。
针对命名的抑制剂所描述的用途和应用可以被认为比照适用于其药学上可接受的盐。
如此处使用的术语“药学上可接受的”从属于以下化合物、材料、组合物和/或剂型，其在正确医学判断范围内，适合用于接触受试者(例如人类)的组织而没有过度的毒性、刺激性、过敏响应或其他问题或并发症，与合理的效益/风险比相称。
可以方便地或令人希望地制备、纯化、和/或处理本文所述的试剂(例如EGFR抑制剂或MEK抑制剂)的对应的盐，例如药学上可接受的盐。
适合的药学上可接受的盐可以是例如足够碱性的酸加成盐，例如与无机酸或有机酸的酸加成盐。这样的酸加成盐包括但不限于，富马酸盐、甲磺酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、柠檬酸盐和马来酸盐以及与磷酸和硫酸形成的盐。适合的药学上可接受的盐可以是例如足够酸性的盐，例如碱金属盐或碱土金属盐。这样的碱金属盐或碱土金属盐包括但不限于，例如钠或钾的碱金属盐，例如钙或镁的碱土金属盐，铵盐，或有机胺盐(例如三乙胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺)，吗啉，N-甲基哌啶，N-乙基哌啶，二苄胺或氨基酸(如赖氨酸)。盐可以例如是甲磺酸盐或HBr盐。
实例
本发明现在将通过具体实例的方式并参考附图进行描述，它们被提供仅用于说明目的而不应被解释为限制本文的教导。
实例1.PC9抗吉非替尼细胞种群和PC9抗AZD9291细胞种群的生成
试剂
RPMI-1640培养基(西格玛(Sigma)R7509)
杜尔贝科(Dulbecco)磷酸盐缓冲盐水(PBS)(西格玛D8537)
L-谷氨酰胺200mM(100x)(Gibco，生命技术公司25030)
胎牛血清(西格玛F7524)
TrypLE Express(Gibco，生命技术公司12605)
AZD9291和吉非替尼(内部)
生长培养基
RPMI-1640培养基
10％胎牛血清
2mM L-谷氨酰胺
细胞
PC9人NSCLC衍生的细胞
所有的试剂、化合物和细胞可从商业来源获得。
使用剂量升级方法的PC9抗吉非替尼、AZD9291或阿法替尼的细胞种群的生成
在多个新鲜T75烧瓶中在生长培养基中以5x 105个细胞接种PC9细胞，并在37℃、5％CO2下孵育。第二天将烧瓶中的培养基去除并用补充有20nM吉非替尼、10nM AZD9291或0.8nM阿法替尼(这些浓度表示所需的抑制PC9细胞的生长为先前测定的50％(EC50)的吉非替尼、AZD9291或阿法替尼的浓度)的新鲜生长培养基替换。将这些细胞返回至培养箱中并在补充有20nM吉非替尼、10nM AZD9291或0.8nM阿法替尼的培养基中持续培养，伴随每隔2-3天更换培养基。
对于每个PC9烧瓶，最初培养中的大多数细胞死亡并变得从烧瓶分开，随着更换培养基将这些细胞去除。剩余的少数细胞附着在烧瓶中，并开始成长为抗性菌落。这些菌落持续生长直至该烧瓶被约80％充满。在此阶段将培养基从烧瓶中去除并添加10ml的PBS。PBS轻轻地洗过细胞并被去除。添加2ml的TrypLE Express并且摇晃烧瓶以确保所有的细胞被该胰蛋白酶溶液覆盖。将这些细胞在37℃、5％CO2下孵育10分钟。然后将烧瓶轻轻打开以去除所有的细胞，并将这些细胞重新悬浮于补充有如以上的吉非替尼、AZD9291或阿法替尼的总计10ml的生长培养基中。将这些细胞进行计数并且用于在新鲜的T75烧瓶中在补充有40nM吉非替尼、20nM AZD9291或1.6nM阿法替尼(即双倍的吉非替尼、AZD9291或阿法替尼浓度)的生长培养基中接种5x 105个细胞。
针对每个PC9烧瓶，如以上所述的用吉非替尼、AZD9291或阿法替尼继续进行这些细胞的培养和传代，每当抗性细胞达到约80％融合时，将吉非替尼、AZD9291或阿法替尼的浓度加倍，直至达到1500nM吉非替尼、160nM AZD9291或1500nM阿法替尼的最大浓度。针对每一个抗性种群记录达到各浓度加倍所用的时间(即，针对PC9细胞达到约80％融合所用的时间)，并对浓度作图。图1示出了针对生成抗吉非替尼的PC9细胞的种群所用的时间绘制的实例数据。数据表明，一旦这些细胞已经成为抗约320nm吉非替尼(约62天)，抑制剂浓度的进一步增加对细胞的生长速率和存活的影响较小。这表明，这些PC9细胞在第一个62天已获得抗性机制，该机制可以规避EGFR抑制并甚至当吉非替尼的浓度进一步提高到1500nM时允许这些细胞存活。
这些抗性细胞被维持为抗吉非替尼的细胞种群。对生成的这些抗性种群进行了扩展并冻结了细胞样本，用于进一步的分子概况分析以鉴定种群内的潜在的抗性机制。
使用AZD9291的单一浓度的PC9抗AZD9291细胞种群的生成。
在一个新鲜T75烧瓶中在生长培养基中以5x 105个细胞接种PC9细胞，并在37℃、5％CO2下孵育。第二天将烧瓶中的培养基去除并用补充有160nM AZD9291(先前确定为AZD9291的临床相关浓度)的新鲜生长培养基替换。将这些细胞返回至培养箱中并在补充有160nM AZD9291的培养基中持续培养，伴随每隔2-3天更换培养基。最初培养中的大多数细胞死亡并变得与烧瓶分开，随着更换培养基将这些细胞去除。剩余的非常少数的细胞附着在烧瓶上，并开始成长为抗性菌落。这些菌落持续生长直至该烧瓶被约80％充满(在培养中约70天)。
对该细胞种群进行了扩展并冻结了细胞样本，用于进一步的分析以鉴定种群内的潜在的抗性机制。
实例2.吉非替尼、AZD9291和阿法替尼抗性的PC9细胞种群的基因图谱和NRAS变更 的鉴定
从抗性细胞制备细胞沉淀
将PC9吉非替尼抗性的、PC9 AZD9291抗性的和PC9阿法替尼抗性的细胞种群的样本在T75烧瓶中培养直至它们约80％融合。如先前所述的用胰蛋白酶处理细胞并重新悬浮于10ml的总体积的PBS中。将这些细胞通过在1000rpm下离心5分钟进行沉淀并在另外的10mL的PBS中洗涤。沉淀这些细胞并且去除尽可能多的PBS。在进一步处理之前将这些细胞沉淀在-20℃下冻结最多1周。
必要时，使用类似的方法从其他细胞种群(例如亲本PC9细胞)获得细胞沉淀。
从细胞中制备DNA
根据生产商的说明，使用Allprep DNA/RNA/miRNA Universal试剂盒(凯杰公司(Qiagen))来制备DNA样本，并且包括RNA酶步骤以防止RNA遗留。
使用至少两种下述平台：下一代测序(NGS)和阵列法基因组比较杂交(aCGH)，使用这些DNA样本来确定DNA突变和/或基因拷贝数改变的存在。
NRAS E63K、G12V和G12R突变的鉴定
针对抗吉非替尼的、抗AZD9291的和抗阿法替尼的PC9细胞种群进行NGS。使用Qiagen GeneRead系统(多路PCR引物，靶向来自20种肺癌相关的基因的所有外显子)进行分析以富集纯化的DNA，随后使用Illumina技术测序。通过使用桑格测序，生命技术公司IonTorrent PGM测序，或Agilent HaloplexTM富集，随后通过Illumina测序来测序一样本亚组而确认结果。通过色谱图的直接读取和基于新一代测序的方法，通过标准方法论-测序阅读QC、比对人类基因组参照hg19、变体识别和目测后的突变的召唤来解释桑格测序。
总的说来，许多PC9抗吉非替尼细胞系(PC9 IR-GM、PC9 IRLR、PC9 IR-4、PCR Ir-6)和抗AZD9291细胞系(PC9 9291-5，PC9 9291_6、PC9 9291-LOB_1、PC9 9291-3和PC99291-2)连同亲本PC9细胞系被分析。
在一个抗吉非替尼细胞系(PC9 IR-LR)中并还在一个抗AZD9291细胞系(PC99291-LOB_1)中发现了新的NRAS突变，E63K。
使用Qiagen GeneRead体系、和HaloplexTM(安捷伦科技公司(AgilentTechnologies))体系的分析表明，在测试的亲本PC9细胞系或其他抗吉非替尼或抗AZD9291细胞系中未出现显著水平的编码E63K突变的对应的DNA突变(C到T)(参见下面表1和表2)。因此，E63K突变似乎没有预先存在，但是响应于EGFR抑制而获得。
如以上所述针对E63K突变进行NGS分析。
表1-GeneRead结果
给出的第一个数字表示读取的数目，并且在括号中的数字表示来自测序的平均phred得分(低于25分将被认为是杂音)。该E63K(C到T)突变是粗体的。
表2-Haloplex结果
给出的第一个数字表示读取的数目，并且在括号中的数字表示来自测序的平均phred得分。该E63K(C到T)突变是粗体的。
当针对EGFR T790M突变测试细胞系时，发现没有一个E63K抗性细胞系具有该突变。在其他抗吉非替尼细胞系(PC9 IR-4、PC9 IR-GM和PC9 Ir-6)中检测到该T709M突变，但是其不存在于任何抗AZD9291细胞系中。
NRAS拷贝数增加的鉴定
使用具有亲本PC9细胞和PC9抗阿法替尼细胞(PC9_阿法替尼_5)的CGH来鉴定NRAS拷贝数的增加。下面详述了NRAS基因拷贝数的增加，在估计的拷贝数(表3)和log2拷贝数比率(表4)中：
基因ID 基因符号 样本 估计的_拷贝_数
4893 NRAS PC9_阿法替尼-5 8.479034525
4893 NRAS PC9亲本的平均数 3.296191359
表3-与PC9亲本细胞系的平均数相比，在阿法替尼_5中预估的NRAS基因拷贝数
基因ID 基因符号 样本 Log2_比率
4893 NRAS PC9_阿法替尼-5 2.0839
4893 NRAS PC9亲本的平均数 0.7208
表4-与PC9亲本细胞系的平均数相比，在PC9_抗阿法替尼_5中的NRAS基因拷贝数的Log2比率
使用Perl Script计算以上数值。所得的log2数据随后被分析、格式化、和可视化。将>1的阈值和<-0.5的倍数变化应用至数据中以便使来自所有样本的CGH数据可视化。从所得的可视化中可知，相比于亲本PC9细胞系的平均数，NRAS基因被确定为表示拷贝数增加。使用如上所述的NGS，也在2PC9抗AZD9291种群中检测到了NRAS基因拷贝增加表5
样本 也称为 NRAS增加
PC9 IR4 9291R_2 PC9 GR6 AZDR_2 2.4
PC9 IR4 9291R_3 PC9 GR6 AZDR_3 3.68
表5-通过序列分析检测NRAS基因拷贝数增加。数值表示相对于各自的亲本细胞的、呈倍数变化的增加。
实例4.对司美替尼(MEK抑制剂)和EGFR抑制剂的抗性细胞系的敏感性分析
使用细胞测定(使用Sytox Green染色作为终点)来测定一组典型的途径抑制剂对细胞生长和存活的影响。
试剂
RPMI-1640培养基(西格玛R7509)
杜尔贝科氏磷酸盐缓冲盐水(PBS)(西格玛D8537)
L-谷氨酰胺200mM(100x)(Gibco，生命技术公司25030)
胎牛血清(西格玛F7524)
TrypLE Express(Gibco，生命技术公司12605)
AZD9291和吉非替尼(内部)
生长培养基
RPMI-1640培养基
10％胎牛血清
2mM L-谷氨酰胺
Sytox Green溶液-Sytox Green染色，将英杰公司(Invitrogen)S7020 5mM原溶液稀释于2μM的含有5mM EDTA pH 7.5的TBS中
0.25％皂苷溶液/孔(西格玛-奥德里奇(Sigma-Aldrich)目录号84510)。(在含有5mM EDTA pH 7.5的TBS和灭菌的过滤器中制备皂苷2.5％原溶液)
测试的细胞系：
PC9(NRAS WT)
PC9_IRGM(NRAS WT)(AKA.PC9 GR_1)
PC9_9291R LOB1(NRAS E63K)(AKA PC9 AZDR_5)
PC9_IRLR(NRAS E63K)(AKA.PC9 GR_2)
PC9_9291R_3(NRAS G12V)(AKA.PC9 AZDR_2)
PC9_9291R_5(NRAS WT)(AKA.PC9 AZDR_3)
PC9_阿法替尼_5(NRAS WT增加)(AKA.PC9 AR_5)
PC9_IR4_9291R_2(NRAS WT增加)(AKA.PC9 GR6 AZDR_2)
PC9_IR4_9291R_3(NRAS WT增加)(AKA.PC9 GR6 AZDR_3)
方法
将细胞系以70μL的RPMI培养基/孔中的1000个细胞/孔置于384孔平板中，该RPMI培养基包含10％胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺和初始的EGFR抑制剂。
允许这些细胞在37℃、5％CO2下附接过夜。第二天使用Echo液体处理器Labcyte(加利福尼亚州，美国)将测试化合物的滴定添加至测定平板中，并且将处理的细胞在37℃、5％CO2下再孵育72小时。作为11点剂量响应(具有10μM的顶浓度和1/3的稀释液)，对每种化合物进行试验。将经化合物处理的平板孵育72小时后，每孔添加5μL的2μM SYTOX Green核酸染色(生命技术公司(佩斯利(Paisley)，英国)，并且将这些平板在室温下孵育一小时。在Acumen TTP LabTech Ltd.(墨尔本，英国)上测量每孔荧光细胞的数量，该数量表示死细胞数。每孔添加10μL的0.25％皂苷西格玛(多塞特(Dorset)，英国)并且将这些平板在室温下孵育过夜。每孔荧光细胞的总数在Acumen上获得。从细胞的总数中减去死亡细胞的数量并且将活细胞数作图以从剂量响应曲线中确定EC50值。
观察到，当与其中NRAS突变没被检测到的亲本细胞系和其他细胞系相比时，已经获得NRAS突变的细胞系对司美替尼更敏感。
下表(表6)示出了整个NRAS WT和测试的突变体细胞系的EC50μM的值。数据表明，当组合初始的EGFR抑制剂治疗并与亲本细胞系相比时，已经获得NRAS突变的细胞系对司美替尼更敏感。相比之下，当组合初始的EGFR抑制剂治疗时，其中没有检测到NRAS突变的细胞系对司美替尼不敏感。
细胞系 司美替尼μM
PC9(NRAS WT) 6.95
PC9_IRGM(NRAS WT) 7.24
PC9_IRLR(NRAS E63K) 0.62
PC9_阿法替尼_5(NRAS增加) 0.89
PC9_9291R_3(NRAS G12V) 1.4
PC9_9291R_LOB1(NRAS E63K) 0.167
PC9_9291R_LOB3(NRAS G12R) 0.14
PC9_IR4_9291R_2(NRAS WT增加) 0.54
PC9_IR4_9291R_3(NRAS WT增加) 0.13
表6将细胞系用司美替尼的剂量滴定进行处理并且从剂量响应曲线中确定EC50μM值。实例剂量响应曲线示于图2-6中。
实例5：在存活的抗吉非替尼或抗AZD9291细胞种群中的NRAS E63K突变的功能角 色的分析
为了研究新颖的NRAS E63K突变是否是驱动吉非替尼或AZD9291抗性细胞的存活的激活突变，本发明中使用一系列的技术：
(a)RAS激活测定以将亲本PC9细胞(WT NRAS)中的活性NRAS的基础水平与具有突变体NRAS的抗性细胞中的活性NRAS的基础水平进行比较。
(b)WT和突变体NRAS表达的siRNA敲低来研究对下游信号传导和细胞生长的影响。
(c)在PC9细胞中的NRAS WT和NRAS E63K突变体变体的外源表达来研究吉非替尼或AZD9291对细胞生长抑制的影响。
(a).RAS激活测定。
方法
将PC9细胞和PC9 AZD9291抗性细胞在不含有AZD9291的培养基中培养4天。然后将细胞置于6孔板和血清中饥饿过夜。第二天将这些细胞用补充有或没有160nM AZD9291的培养基处理2小时。制备裂解物并将活性NRAS使用GST-RAS结合域下拉测定法(赛默科技公司(Thermo Scientific))进行分离。将拉下的裂解物通过蛋白质印迹法使用NRAS特异性抗体进行分析。
结果
在亲本PC-9细胞中的基础的活性NRAS水平相比在其中E63K或G12V NRAS突变已检测到的抗PC-9细胞种群是较低的。此外，用160nM AZD9291处理亲本PC-9细胞2小时导致磷酸化EGFR和活性NRAS的下降。相比之下，突变体NRAS细胞中磷酸化EGFR的下降不与活性NRAS的相应下降相关联，表明在这些细胞中NRAS的组成型激活独立于EGFR的组成型激活。结果示于图7中。
(b)NRAS和KRAS siRNA处理对PC9、PC9抗吉非替尼和PC9抗AZD9291细胞种群的影响的分析
将PC9、PC9抗吉非替尼和PC9抗AZD9291细胞以5x 105个细胞/孔平铺于6孔板中，该板在适当情况下在每孔2ml的补充有EGFR抑制剂的生长培养基中(抗性细胞在EGFR抑制剂的存在下生长)。将这些细胞在37℃、5％CO2下孵育过夜。第二天将这些细胞用来自Dharmacon的如表7中详述的终浓度为20nM的siRNA进行处理。
表7NRAS和KRAS siRNA构建体的序列。
每种siRNA构建体在Optimem(生命技术公司)介质中使用RNA iMAX(英杰公司)作为转染试剂进行制备。针对每孔：将2.5μl的siRNA(20μM原溶液)与250μL的Optimem混合；并将2.5μL的RNA iMAX与250μL的Optimem混合。将这2种溶液通过移液混合在一起，并在室温下静置5分钟。然后将最终的500μL溶液移液到6孔板中的适当的2mL的生长培养基中。将这些板轻轻旋涡并在37℃、5％CO2下进一步培养过夜。第二天收获每孔细胞并进行细胞数计数。
然后将来自每次转染的细胞的样本以3000个细胞/孔接种于96孔板中，该板在100μL的补充有EGFR抑制剂的生长培养基中，适当情况下对于每个转染条件跨越5个重复孔。将细胞的其余部分重新铺板于新鲜6孔板中。将96孔板和6孔板都返回至培养箱中用于进一步生长。
第二天，从该6孔板制备裂解物以使得用siRNA处理48小时后，可以评估蛋白表达的敲低。针对以下水平通过蛋白质印迹法分析裂解物：磷酸化的EGFR，磷酸化的ERK、NRAS和KRAS。GAPDH的水平被用作所有细胞样本的上样对照。(图8)
允许96孔板中的对应细胞再生长5天，这之后通过每孔加入100μL 4％甲醛将它们在室温下固定30分钟。将孔用PBS洗涤，将细胞核通过加入Hoechst(1/5000稀释液)在室温下染色30分钟。使用Cellomics Arrayscan以10×放大率计数9个视野/孔将细胞数进行计数。将平均细胞数作图(图9)。
蛋白质印迹法的结果表明，在所有细胞系中通过使用的全部3个NRAS siRNA构建体敲低NRAS表达，但未观察到NTC或KRAS的siRNA构建体对NRAS表达的影响。另一方面，只有KRAS_1构建体引起KRAS表达的敲低而对NRAS的表达(图8)没有影响。
通过所述的siRNA转染对细胞生长的影响表明，在其中新颖的NRAS突变已被鉴定的抗吉非替尼和抗AZD9291细胞系中，NRAS表达的敲低显著抑制细胞生长而KRAS表达的敲低对细胞生长没有影响。相比之下，NRAS或KRAS的敲低都不影响PC9亲本细胞的生长(图9)。
这个数据表明，NRAS E63K突变是激活突变并且它驱动抗性细胞的存活。
(c)在PC9细胞中的NRAS WT和NRAS E63K突变体DNA变体的过表达的分析来研究吉非替尼或AZD9291对细胞生长抑制的影响。
将PC9细胞用对照DNA构建体(pcDNA3.1+对照)，或设计来表达E63K突变体NRAS的构建体(pcDNA 3.1+/NRAS E63K(生命科技有限公司))进行转染。表达MaxCyte转染技术被用于电穿孔PC9细胞96小时。转染前的一天进行PC9细胞传代。在转染当天收获细胞并以9x107个细胞每600μL MaxCyte缓冲液进行重新悬浮。将100μL的细胞悬浮液转移到MaxCyte槽中并将细胞用20μg DNA构建体进行电穿孔。电穿孔之后，针对每种情况将细胞转移至6孔板中并在37℃下孵育30分钟，这之后将它们以4x 105个细胞/孔接种于6孔板中。过夜培养之后收获这些细胞并在384孔板中以1000个细胞/孔进行再铺板。第二天将这些细胞用100nMAZD9291或300nM吉非替尼进行给予并再次平板孵育96小时。使用如前文所述的sytoxgreen方法确定活细胞数。图10显示，当细胞过度表达E63K突变体NRAS时，由AZD9291和吉非替尼抑制的细胞生长降低。
含有NRAS G12R突变的细胞种群对MEK抑制剂(司美替尼)的敏感性
使用如前文阐明的标准方法制备抗AZD9291 PC9细胞系。培养并分析一系列的此类抗性细胞种群。发现一个这样的细胞种群含有所述NRAS G12R突变，并且该种群也显示相比于亲本细胞系对MEK抑制剂司美替尼的敏感性的>5倍增加。
序列表
<110> 阿斯利康AB和阿斯利康英国有限公司(AstraZeneca AB and AstraZeneca UKLimited)
<120> 新方法
<130> 200196-WO-PCT
<140> US 62/013573
<141> 2014-06-18
<150> US 61/975088
<151> 2014-04-04
<160> 17
<170> PatentIn 3.5版本
<210> 1
<211> 1210
<212> PRT (1-蛋白质)
智人
<213> 氨基酸序列： NP_005219.2
<400> 1
Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln
20 25 30
Gly Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe
35 40 45
Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn Cys Glu Val Val Leu Gly Asn
50 55 60
Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys
65 70 75 80
Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr Val Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val
85 90 95
Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr
100 105 110
Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn
115 120 125
Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu
130 135 140
His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu
145 150 155 160
Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met
165 170 175
Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu Gly Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro
180 185 190
Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp Gly Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln
195 200 205
Lys Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala Gln Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg
210 215 220
Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys
225 230 235 240
Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp
245 250 255
Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro
260 265 270
Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly
275 280 285
Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His
290 295 300
Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu
305 310 315 320
Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val
325 330 335
Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn
340 345 350
Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp
355 360 365
Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr
370 375 380
Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu
385 390 395 400
Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp
405 410 415
Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln
420 425 430
His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu
435 440 445
Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser
450 455 460
Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu
465 470 475 480
Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu
485 490 495
Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro
500 505 510
Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn
515 520 525
Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly
530 535 540
Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro
545 550 555 560
Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro
565 570 575
Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val
580 585 590
Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp
595 600 605
Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys
610 615 620
Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly
625 630 635 640
Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu
645 650 655
Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met Arg Arg Arg His
660 665 670
Ile Val Arg Lys Arg Thr Leu Arg Arg Leu Leu Gln Glu Arg Glu Leu
675 680 685
Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly Glu Ala Pro Asn Gln Ala Leu Leu
690 695 700
Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Phe Lys Lys Ile Lys Val Leu Gly Ser
705 710 715 720
Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Leu Trp Ile Pro Glu Gly Glu
725 730 735
Lys Val Lys Ile Pro Val Ala Ile Lys Glu Leu Arg Glu Ala Thr Ser
740 745 750
Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Ser
755 760 765
Val Asp Asn Pro His Val Cys Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser
770 775 780
Thr Val Gln Leu Ile Thr Gln Leu Met Pro Phe Gly Cys Leu Leu Asp
785 790 795 800
Tyr Val Arg Glu His Lys Asp Asn Ile Gly Ser Gln Tyr Leu Leu Asn
805 810 815
Trp Cys Val Gln Ile Ala Lys Gly Met Asn Tyr Leu Glu Asp Arg Arg
820 825 830
Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Thr Pro
835 840 845
Gln His Val Lys Ile Thr Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu Leu Gly Ala
850 855 860
Glu Glu Lys Glu Tyr His Ala Glu Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp
865 870 875 880
Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu His Arg Ile Tyr Thr His Gln Ser Asp
885 890 895
Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ser
900 905 910
Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala Ser Glu Ile Ser Ser Ile Leu Glu
915 920 925
Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr
930 935 940
Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met Ile Asp Ala Asp Ser Arg Pro Lys
945 950 955 960
Phe Arg Glu Leu Ile Ile Glu Phe Ser Lys Met Ala Arg Asp Pro Gln
965 970 975
Arg Tyr Leu Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro
980 985 990
Thr Asp Ser Asn Phe Tyr Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp
995 1000 1005
Asp Val Val Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe
1010 1015 1020
Phe Ser Ser Pro Ser Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu Ser Ser Leu
1025 1030 1035
Ser Ala Thr Ser Asn Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn
1040 1045 1050
Gly Leu Gln Ser Cys Pro Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg
1055 1060 1065
Tyr Ser Ser Asp Pro Thr Gly Ala Leu Thr Glu Asp Ser Ile Asp
1070 1075 1080
Asp Thr Phe Leu Pro Val Pro Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro
1085 1090 1095
Lys Arg Pro Ala Gly Ser Val Gln Asn Pro Val Tyr His Asn Gln
1100 1105 1110
Pro Leu Asn Pro Ala Pro Ser Arg Asp Pro His Tyr Gln Asp Pro
1115 1120 1125
His Ser Thr Ala Val Gly Asn Pro Glu Tyr Leu Asn Thr Val Gln
1130 1135 1140
Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe Asp Ser Pro Ala His Trp Ala
1145 1150 1155
Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp Asn Pro Asp Tyr Gln
1160 1165 1170
Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn Gly Ile Phe Lys
1175 1180 1185
Gly Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg Val Ala Pro Gln
1190 1195 1200
Ser Ser Glu Phe Ile Gly Ala
1205 1210
<210> 2
<211> 5616
<212> DNA
智人
<213> cDNA序列： NM_005228.3
<400> 2
ccccggcgca gcgcggccgc agcagcctcc gccccccgca cggtgtgagc gcccgacgcg 60
gccgaggcgg ccggagtccc gagctagccc cggcggccgc cgccgcccag accggacgac 120
aggccacctc gtcggcgtcc gcccgagtcc ccgcctcgcc gccaacgcca caaccaccgc 180
gcacggcccc ctgactccgt ccagtattga tcgggagagc cggagcgagc tcttcgggga 240
gcagcgatgc gaccctccgg gacggccggg gcagcgctcc tggcgctgct ggctgcgctc 300
tgcccggcga gtcgggctct ggaggaaaag aaagtttgcc aaggcacgag taacaagctc 360
acgcagttgg gcacttttga agatcatttt ctcagcctcc agaggatgtt caataactgt 420
gaggtggtcc ttgggaattt ggaaattacc tatgtgcaga ggaattatga tctttccttc 480
ttaaagacca tccaggaggt ggctggttat gtcctcattg ccctcaacac agtggagcga 540
attcctttgg aaaacctgca gatcatcaga ggaaatatgt actacgaaaa ttcctatgcc 600
ttagcagtct tatctaacta tgatgcaaat aaaaccggac tgaaggagct gcccatgaga 660
aatttacagg aaatcctgca tggcgccgtg cggttcagca acaaccctgc cctgtgcaac 720
gtggagagca tccagtggcg ggacatagtc agcagtgact ttctcagcaa catgtcgatg 780
gacttccaga accacctggg cagctgccaa aagtgtgatc caagctgtcc caatgggagc 840
tgctggggtg caggagagga gaactgccag aaactgacca aaatcatctg tgcccagcag 900
tgctccgggc gctgccgtgg caagtccccc agtgactgct gccacaacca gtgtgctgca 960
ggctgcacag gcccccggga gagcgactgc ctggtctgcc gcaaattccg agacgaagcc 1020
acgtgcaagg acacctgccc cccactcatg ctctacaacc ccaccacgta ccagatggat 1080
gtgaaccccg agggcaaata cagctttggt gccacctgcg tgaagaagtg tccccgtaat 1140
tatgtggtga cagatcacgg ctcgtgcgtc cgagcctgtg gggccgacag ctatgagatg 1200
gaggaagacg gcgtccgcaa gtgtaagaag tgcgaagggc cttgccgcaa agtgtgtaac 1260
ggaataggta ttggtgaatt taaagactca ctctccataa atgctacgaa tattaaacac 1320
ttcaaaaact gcacctccat cagtggcgat ctccacatcc tgccggtggc atttaggggt 1380
gactccttca cacatactcc tcctctggat ccacaggaac tggatattct gaaaaccgta 1440
aaggaaatca cagggttttt gctgattcag gcttggcctg aaaacaggac ggacctccat 1500
gcctttgaga acctagaaat catacgcggc aggaccaagc aacatggtca gttttctctt 1560
gcagtcgtca gcctgaacat aacatccttg ggattacgct ccctcaagga gataagtgat 1620
ggagatgtga taatttcagg aaacaaaaat ttgtgctatg caaatacaat aaactggaaa 1680
aaactgtttg ggacctccgg tcagaaaacc aaaattataa gcaacagagg tgaaaacagc 1740
tgcaaggcca caggccaggt ctgccatgcc ttgtgctccc ccgagggctg ctggggcccg 1800
gagcccaggg actgcgtctc ttgccggaat gtcagccgag gcagggaatg cgtggacaag 1860
tgcaaccttc tggagggtga gccaagggag tttgtggaga actctgagtg catacagtgc 1920
cacccagagt gcctgcctca ggccatgaac atcacctgca caggacgggg accagacaac 1980
tgtatccagt gtgcccacta cattgacggc ccccactgcg tcaagacctg cccggcagga 2040
gtcatgggag aaaacaacac cctggtctgg aagtacgcag acgccggcca tgtgtgccac 2100
ctgtgccatc caaactgcac ctacggatgc actgggccag gtcttgaagg ctgtccaacg 2160
aatgggccta agatcccgtc catcgccact gggatggtgg gggccctcct cttgctgctg 2220
gtggtggccc tggggatcgg cctcttcatg cgaaggcgcc acatcgttcg gaagcgcacg 2280
ctgcggaggc tgctgcagga gagggagctt gtggagcctc ttacacccag tggagaagct 2340
cccaaccaag ctctcttgag gatcttgaag gaaactgaat tcaaaaagat caaagtgctg 2400
ggctccggtg cgttcggcac ggtgtataag ggactctgga tcccagaagg tgagaaagtt 2460
aaaattcccg tcgctatcaa ggaattaaga gaagcaacat ctccgaaagc caacaaggaa 2520
atcctcgatg aagcctacgt gatggccagc gtggacaacc cccacgtgtg ccgcctgctg 2580
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ctggactatg tccgggaaca caaagacaat attggctccc agtacctgct caactggtgt 2700
gtgcagatcg caaagggcat gaactacttg gaggaccgtc gcttggtgca ccgcgacctg 2760
gcagccagga acgtactggt gaaaacaccg cagcatgtca agatcacaga ttttgggctg 2820
gccaaactgc tgggtgcgga agagaaagaa taccatgcag aaggaggcaa agtgcctatc 2880
aagtggatgg cattggaatc aattttacac agaatctata cccaccagag tgatgtctgg 2940
agctacgggg tgaccgtttg ggagttgatg acctttggat ccaagccata tgacggaatc 3000
cctgccagcg agatctcctc catcctggag aaaggagaac gcctccctca gccacccata 3060
tgtaccatcg atgtctacat gatcatggtc aagtgctgga tgatagacgc agatagtcgc 3120
ccaaagttcc gtgagttgat catcgaattc tccaaaatgg cccgagaccc ccagcgctac 3180
cttgtcattc agggggatga aagaatgcat ttgccaagtc ctacagactc caacttctac 3240
cgtgccctga tggatgaaga agacatggac gacgtggtgg atgccgacga gtacctcatc 3300
ccacagcagg gcttcttcag cagcccctcc acgtcacgga ctcccctcct gagctctctg 3360
agtgcaacca gcaacaattc caccgtggct tgcattgata gaaatgggct gcaaagctgt 3420
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gaggacagca tagacgacac cttcctccca gtgcctgaat acataaacca gtccgttccc 3540
aaaaggcccg ctggctctgt gcagaatcct gtctatcaca atcagcctct gaaccccgcg 3600
cccagcagag acccacacta ccaggacccc cacagcactg cagtgggcaa ccccgagtat 3660
ctcaacactg tccagcccac ctgtgtcaac agcacattcg acagccctgc ccactgggcc 3720
cagaaaggca gccaccaaat tagcctggac aaccctgact accagcagga cttctttccc 3780
aaggaagcca agccaaatgg catctttaag ggctccacag ctgaaaatgc agaataccta 3840
agggtcgcgc cacaaagcag tgaatttatt ggagcatgac cacggaggat agtatgagcc 3900
ctaaaaatcc agactctttc gatacccagg accaagccac agcaggtcct ccatcccaac 3960
agccatgccc gcattagctc ttagacccac agactggttt tgcaacgttt acaccgacta 4020
gccaggaagt acttccacct cgggcacatt ttgggaagtt gcattccttt gtcttcaaac 4080
tgtgaagcat ttacagaaac gcatccagca agaatattgt ccctttgagc agaaatttat 4140
ctttcaaaga ggtatatttg aaaaaaaaaa aaagtatatg tgaggatttt tattgattgg 4200
ggatcttgga gtttttcatt gtcgctattg atttttactt caatgggctc ttccaacaag 4260
gaagaagctt gctggtagca cttgctaccc tgagttcatc caggcccaac tgtgagcaag 4320
gagcacaagc cacaagtctt ccagaggatg cttgattcca gtggttctgc ttcaaggctt 4380
ccactgcaaa acactaaaga tccaagaagg ccttcatggc cccagcaggc cggatcggta 4440
ctgtatcaag tcatggcagg tacagtagga taagccactc tgtcccttcc tgggcaaaga 4500
agaaacggag gggatggaat tcttccttag acttactttt gtaaaaatgt ccccacggta 4560
cttactcccc actgatggac cagtggtttc cagtcatgag cgttagactg acttgtttgt 4620
cttccattcc attgttttga aactcagtat gctgcccctg tcttgctgtc atgaaatcag 4680
caagagagga tgacacatca aataataact cggattccag cccacattgg attcatcagc 4740
atttggacca atagcccaca gctgagaatg tggaatacct aaggatagca ccgcttttgt 4800
tctcgcaaaa acgtatctcc taatttgagg ctcagatgaa atgcatcagg tcctttgggg 4860
catagatcag aagactacaa aaatgaagct gctctgaaat ctcctttagc catcacccca 4920
accccccaaa attagtttgt gttacttatg gaagatagtt ttctcctttt acttcacttc 4980
aaaagctttt tactcaaaga gtatatgttc cctccaggtc agctgccccc aaaccccctc 5040
cttacgcttt gtcacacaaa aagtgtctct gccttgagtc atctattcaa gcacttacag 5100
ctctggccac aacagggcat tttacaggtg cgaatgacag tagcattatg agtagtgtgg 5160
aattcaggta gtaaatatga aactagggtt tgaaattgat aatgctttca caacatttgc 5220
agatgtttta gaaggaaaaa agttccttcc taaaataatt tctctacaat tggaagattg 5280
gaagattcag ctagttagga gcccaccttt tttcctaatc tgtgtgtgcc ctgtaacctg 5340
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catccaattt atcaaggaag aaatggttca gaaaatattt tcagcctaca gttatgttca 5460
gtcacacaca catacaaaat gttccttttg cttttaaagt aatttttgac tcccagatca 5520
gtcagagccc ctacagcatt gttaagaaag tatttgattt ttgtctcaat gaaaataaaa 5580
ctatattcat ttccactcta aaaaaaaaaa aaaaaa 5616
<210> 3
<211> 189
<212> PRT (1-蛋白质)
<213> 智人
氨基酸序列： NP_002515.1
<400> 3
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Gly Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Asn His Phe Val Asp Glu Tyr
20 25 30
Asp Pro Thr Ile Glu Asp Ser Tyr Arg Lys Gln Val Val Ile Asp Gly
35 40 45
Glu Thr Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Glu Tyr
50 55 60
Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met Arg Thr Gly Glu Gly Phe Leu Cys
65 70 75 80
Val Phe Ala Ile Asn Asn Ser Lys Ser Phe Ala Asp Ile Asn Leu Tyr
85 90 95
Arg Glu Gln Ile Lys Arg Val Lys Asp Ser Asp Asp Val Pro Met Val
100 105 110
Leu Val Gly Asn Lys Cys Asp Leu Pro Thr Arg Thr Val Asp Thr Lys
115 120 125
Gln Ala His Glu Leu Ala Lys Ser Tyr Gly Ile Pro Phe Ile Glu Thr
130 135 140
Ser Ala Lys Thr Arg Gln Gly Val Glu Asp Ala Phe Tyr Thr Leu Val
145 150 155 160
Arg Glu Ile Arg Gln Tyr Arg Met Lys Lys Leu Asn Ser Ser Asp Asp
165 170 175
Gly Thr Gln Gly Cys Met Gly Leu Pro Cys Val Val Met
180 185
<210> 4
<211> 4454
<212> DNA
<213> 智人
cDNA序列 NM_002524.4
<400> 4
gaaacgtccc gtgtgggagg ggcgggtctg ggtgcggcct gccgcatgac tcgtggttcg 60
gaggcccacg tggccggggc ggggactcag gcgcctgggg cgccgactga ttacgtagcg 120
ggcggggccg gaagtgccgc tccttggtgg gggctgttca tggcggttcc ggggtctcca 180
acatttttcc cggctgtggt cctaaatctg tccaaagcag aggcagtgga gcttgaggtt 240
cttgctggtg tgaaatgact gagtacaaac tggtggtggt tggagcaggt ggtgttggga 300
aaagcgcact gacaatccag ctaatccaga accactttgt agatgaatat gatcccacca 360
tagaggattc ttacagaaaa caagtggtta tagatggtga aacctgtttg ttggacatac 420
tggatacagc tggacaagaa gagtacagtg ccatgagaga ccaatacatg aggacaggcg 480
aaggcttcct ctgtgtattt gccatcaata atagcaagtc atttgcggat attaacctct 540
acagggagca gattaagcga gtaaaagact cggatgatgt acctatggtg ctagtgggaa 600
acaagtgtga tttgccaaca aggacagttg atacaaaaca agcccacgaa ctggccaaga 660
gttacgggat tccattcatt gaaacctcag ccaagaccag acagggtgtt gaagatgctt 720
tttacacact ggtaagagaa atacgccagt accgaatgaa aaaactcaac agcagtgatg 780
atgggactca gggttgtatg ggattgccat gtgtggtgat gtaacaagat acttttaaag 840
ttttgtcaga aaagagccac tttcaagctg cactgacacc ctggtcctga cttccctgga 900
ggagaagtat tcctgttgct gtcttcagtc tcacagagaa gctcctgcta cttccccagc 960
tctcagtagt ttagtacaat aatctctatt tgagaagttc tcagaataac tacctcctca 1020
cttggctgtc tgaccagaga atgcacctct tgttactccc tgttattttt ctgccctggg 1080
ttcttccaca gcacaaacac acctctgcca ccccaggttt ttcatctgaa aagcagttca 1140
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tctaaagtag caactgctgg tgattttttt tttcttttta ctgttgaact tagaactatg 1260
ctaatttttg gagaaatgtc ataaattact gttttgccaa gaatatagtt attattgctg 1320
tttggtttgt ttataatgtt atcggctcta ttctctaaac tggcatctgc tctagattca 1380
taaatacaaa aatgaatact gaattttgag tctatcctag tcttcacaac tttgacgtaa 1440
ttaaatccaa ctttcacagt gaagtgcctt tttcctagaa gtggtttgta gacttccttt 1500
ataatatttc agtggaatag atgtctcaaa aatccttatg catgaaatga atgtctgaga 1560
tacgtctgtg acttatctac cattgaagga aagctatatc tatttgagag cagatgccat 1620
tttgtacatg tatgaaattg gttttccaga ggcctgtttt ggggctttcc caggagaaag 1680
atgaaactga aagcacatga ataatttcac ttaataattt ttacctaatc tccacttttt 1740
tcataggtta ctacctatac aatgtatgta atttgtttcc cctagcttac tgataaacct 1800
aatattcaat gaacttccat ttgtattcaa atttgtgtca taccagaaag ctctacattt 1860
gcagatgttc aaatattgta aaactttggt gcattgttat ttaatagctg tgatcagtga 1920
ttttcaaacc tcaaatatag tatattaaca aattacattt tcactgtata tcatggtatc 1980
ttaatgatgt atataattgc cttcaatccc cttctcaccc caccctctac agcttccccc 2040
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acagtttcaa aacttgaaca atccagttag catcacagag aaagaaattc ttctgcattt 2160
gctcattgca ccagtaactc cagctagtaa ttttgctagg tagctgcagt tagccctgca 2220
aggaaagaag aggtcagtta gcacaaaccc tttaccatga ctggaaaact cagtatcacg 2280
tatttaaaca tttttttttc ttttagccat gtagaaactc taaattaagc caatattctc 2340
atttgagaat gaggatgtct cagctgagaa acgttttaaa ttctctttat tcataatgtt 2400
ctttgaaggg tttaaaacaa gatgttgata aatctaagct gatgagtttg ctcaaaacag 2460
gaagttgaaa ttgttgagac aggaatggaa aatataatta attgatacct atgaggattt 2520
ggaggcttgg cattttaatt tgcagataat accctggtaa ttctcatgaa aaatagactt 2580
ggataacttt tgataaaaga ctaattccaa aatggccact ttgttcctgt ctttaatatc 2640
taaatactta ctgaggtcct ccatcttcta tattatgaat tttcatttat taagcaaatg 2700
tcatattacc ttgaaattca gaagagaaga aacatatact gtgtccagag tataatgaac 2760
ctgcagagtt gtgcttctta ctgctaattc tgggagcttt cacagtactg tcatcatttg 2820
taaatggaaa ttctgctttt ctgtttctgc tccttctgga gcagtgctac tctgtaattt 2880
tcctgaggct tatcacctca gtcatttctt ttttaaatgt ctgtgactgg cagtgattct 2940
ttttcttaaa aatctattaa atttgatgtc aaattaggga gaaagatagt tactcatctt 3000
gggctcttgt gccaatagcc cttgtatgta tgtacttaga gttttccaag tatgttctaa 3060
gcacagaagt ttctaaatgg ggccaaaatt cagacttgag tatgttcttt gaatacctta 3120
agaagttaca attagccggg catggtggcc cgtgcctgta gtcccagcta cttgagaggc 3180
tgaggcagga gaatcacttc aacccaggag gtggaggtta cagtgagcag agatcgtgcc 3240
actgcactcc agcctgggtg acaagagaga cttgtctcca aaaaaaaagt tacacctagg 3300
tgtgaatttt ggcacaaagg agtgacaaac ttatagttaa aagctgaata acttcagtgt 3360
ggtataaaac gtggttttta ggctatgttt gtgattgctg aaaagaattc tagtttacct 3420
caaaatcctt ctctttcccc aaattaagtg cctggccagc tgtcataaat tacatattcc 3480
ttttggtttt tttaaaggtt acatgttcaa gagtgaaaat aagatgttct gtctgaaggc 3540
taccatgccg gatctgtaaa tgaacctgtt aaatgctgta tttgctccaa cggcttacta 3600
tagaatgtta cttaatacaa tatcatactt attacaattt ttactatagg agtgtaatag 3660
gtaaaattaa tctctatttt agtgggccca tgtttagtct ttcaccatcc tttaaactgc 3720
tgtgaatttt tttgtcatga cttgaaagca aggatagaga aacactttag agatatgtgg 3780
ggttttttta ccattccaga gcttgtgagc ataatcatat ttgctttata tttatagtca 3840
tgaactccta agttggcagc tacaaccaag aaccaaaaaa tggtgcgttc tgcttcttgt 3900
aattcatctc tgctaataaa ttataagaag caaggaaaat tagggaaaat attttatttg 3960
gatggtttct ataaacaagg gactataatt cttgtacatt atttttcatc tttgctgttt 4020
ctttgagcag tctaatgtgc cacacaatta tctaaggtat ttgttttcta taagaattgt 4080
tttaaaagta ttcttgttac cagagtagtt gtattatatt tcaaaacgta agatgatttt 4140
taaaagcctg agtactgacc taagatggaa ttgtatgaac tctgctctgg agggagggga 4200
ggatgtccgt ggaagttgta agacttttat ttttttgtgc catcaaatat aggtaaaaat 4260
aattgtgcaa ttctgctgtt taaacaggaa ctattggcct ccttggccct aaatggaagg 4320
gccgatattt taagttgatt attttattgt aaattaatcc aacctagttc tttttaattt 4380
ggttgaatgt tttttcttgt taaatgatgt ttaaaaaata aaaactggaa gttcttggct 4440
tagtcataat tctt 4454
<210> 5
<211> 393
<212> PRT(1-蛋白质)
<213> 智人
氨基酸序列 NP-002746.1
<400> 5
Met Pro Lys Lys Lys Pro Thr Pro Ile Gln Leu Asn Pro Ala Pro Asp
1 5 10 15
Gly Ser Ala Val Asn Gly Thr Ser Ser Ala Glu Thr Asn Leu Glu Ala
20 25 30
Leu Gln Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu Leu Asp Glu Gln Gln Arg Lys
35 40 45
Arg Leu Glu Ala Phe Leu Thr Gln Lys Gln Lys Val Gly Glu Leu Lys
50 55 60
Asp Asp Asp Phe Glu Lys Ile Ser Glu Leu Gly Ala Gly Asn Gly Gly
65 70 75 80
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85 90 95
Lys Leu Ile His Leu Glu Ile Lys Pro Ala Ile Arg Asn Gln Ile Ile
100 105 110
Arg Glu Leu Gln Val Leu His Glu Cys Asn Ser Pro Tyr Ile Val Gly
115 120 125
Phe Tyr Gly Ala Phe Tyr Ser Asp Gly Glu Ile Ser Ile Cys Met Glu
130 135 140
His Met Asp Gly Gly Ser Leu Asp Gln Val Leu Lys Lys Ala Gly Arg
145 150 155 160
Ile Pro Glu Gln Ile Leu Gly Lys Val Ser Ile Ala Val Ile Lys Gly
165 170 175
Leu Thr Tyr Leu Arg Glu Lys His Lys Ile Met His Arg Asp Val Lys
180 185 190
Pro Ser Asn Ile Leu Val Asn Ser Arg Gly Glu Ile Lys Leu Cys Asp
195 200 205
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Gly Thr Arg Ser Tyr Met Ser Pro Glu Arg Leu Gln Gly Thr His Tyr
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Ser Val Gln Ser Asp Ile Trp Ser Met Gly Leu Ser Leu Val Glu Met
245 250 255
Ala Val Gly Arg Tyr Pro Ile Pro Pro Pro Asp Ala Lys Glu Leu Glu
260 265 270
Leu Met Phe Gly Cys Gln Val Glu Gly Asp Ala Ala Glu Thr Pro Pro
275 280 285
Arg Pro Arg Thr Pro Gly Arg Pro Leu Ser Ser Tyr Gly Met Asp Ser
290 295 300
Arg Pro Pro Met Ala Ile Phe Glu Leu Leu Asp Tyr Ile Val Asn Glu
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Pro Pro Pro Lys Leu Pro Ser Gly Val Phe Ser Leu Glu Phe Gln Asp
325 330 335
Phe Val Asn Lys Cys Leu Ile Lys Asn Pro Ala Glu Arg Ala Asp Leu
340 345 350
Lys Gln Leu Met Val His Ala Phe Ile Lys Arg Ser Asp Ala Glu Glu
355 360 365
Val Asp Phe Ala Gly Trp Leu Cys Ser Thr Ile Gly Leu Asn Gln Pro
370 375 380
Ser Thr Pro Thr His Ala Ala Gly Val
385 390
<210> 6
<211> 2603
<212> DNA
<213> 智人
cDNA序列： NM_002755.3
<400> 6
aggcgaggct tccccttccc cgcccctccc ccggcctcca gtccctccca gggccgcttc 60
gcagagcggc taggagcacg gcggcggcgg cactttcccc ggcaggagct ggagctgggc 120
tctggtgcgc gcgcggctgt gccgcccgag ccggagggac tggttggttg agagagagag 180
aggaagggaa tcccgggctg ccgaaccgca cgttcagccc gctccgctcc tgcagggcag 240
cctttcggct ctctgcgcgc gaagccgagt cccgggcggg tggggcgggg gtccactgag 300
accgctaccg gcccctcggc gctgacggga ccgcgcgggg cgcacccgct gaaggcagcc 360
ccggggcccg cggcccggac ttggtcctgc gcagcgggcg cggggcagcg cagcgggagg 420
aagcgagagg tgctgccctc cccccggagt tggaagcgcg ttacccgggt ccaaaatgcc 480
caagaagaag ccgacgccca tccagctgaa cccggccccc gacggctctg cagttaacgg 540
gaccagctct gcggagacca acttggaggc cttgcagaag aagctggagg agctagagct 600
tgatgagcag cagcgaaagc gccttgaggc ctttcttacc cagaagcaga aggtgggaga 660
actgaaggat gacgactttg agaagatcag tgagctgggg gctggcaatg gcggtgtggt 720
gttcaaggtc tcccacaagc cttctggcct ggtcatggcc agaaagctaa ttcatctgga 780
gatcaaaccc gcaatccgga accagatcat aagggagctg caggttctgc atgagtgcaa 840
ctctccgtac atcgtgggct tctatggtgc gttctacagc gatggcgaga tcagtatctg 900
catggagcac atggatggag gttctctgga tcaagtcctg aagaaagctg gaagaattcc 960
tgaacaaatt ttaggaaaag ttagcattgc tgtaataaaa ggcctgacat atctgaggga 1020
gaagcacaag atcatgcaca gagatgtcaa gccctccaac atcctagtca actcccgtgg 1080
ggagatcaag ctctgtgact ttggggtcag cgggcagctc atcgactcca tggccaactc 1140
cttcgtgggc acaaggtcct acatgtcgcc agaaagactc caggggactc attactctgt 1200
gcagtcagac atctggagca tgggactgtc tctggtagag atggcggttg ggaggtatcc 1260
catccctcct ccagatgcca aggagctgga gctgatgttt gggtgccagg tggaaggaga 1320
tgcggctgag accccaccca ggccaaggac ccccgggagg ccccttagct catacggaat 1380
ggacagccga cctcccatgg caatttttga gttgttggat tacatagtca acgagcctcc 1440
tccaaaactg cccagtggag tgttcagtct ggaatttcaa gattttgtga ataaatgctt 1500
aataaaaaac cccgcagaga gagcagattt gaagcaactc atggttcatg cttttatcaa 1560
gagatctgat gctgaggaag tggattttgc aggttggctc tgctccacca tcggccttaa 1620
ccagcccagc acaccaaccc atgctgctgg cgtctaagtg tttgggaagc aacaaagagc 1680
gagtcccctg cccggtggtt tgccatgtcg cttttgggcc tccttcccat gcctgtctct 1740
gttcagatgt gcatttcacc tgtgacaaag gatgaagaac acagcatgtg ccaagattct 1800
actcttgtca tttttaatat tactgtcttt attcttatta ctattattgt tcccctaagt 1860
ggattggctt tgtgcttggg gctatttgtg tgtatgctga tgatcaaaac ctgtgccagg 1920
ctgaattaca gtgaaatttt ggtgaatgtg ggtagtcatt cttacaattg cactgctgtt 1980
cctgctccat gactggctgt ctgcctgtat tttcgggatt ctttgacatt tggtggtact 2040
ttattcttgc tgggcatact ttctctctag gagggagcct tgtgagatcc ttcacaggca 2100
gtgcatgtga agcatgcttt gctgctatga aaatgagcat cagagagtgt acatcatgtt 2160
attttattat tattatttgc ttttcatgta gaactcagca gttgacatcc aaatctagcc 2220
agagcccttc actgccatga tagctggggc ttcaccagtc tgtctactgt ggtgatctgt 2280
agacttctgg ttgtatttct atatttattt tcagtatact gtgtgggata cttagtggta 2340
tgtctcttta agttttgatt aatgtttctt aaatggaatt attttgaatg tcacaaattg 2400
atcaagatat taaaatgtcg gatttatctt tccccatatc caagtaccaa tgctgttgta 2460
aacaacgtgt atagtgccta aaattgtatg aaaatccttt taaccatttt aacctagatg 2520
tttaacaaat ctaatctctt attctaataa atatactatg aaataaaaaa aaaaggatga 2580
aagctaaaaa aaaaaaaaaa aaa 2603
<210> 7
<211> 400
<212> PRT (1-蛋白质)
<213> 智人
氨基酸序列： NP_109587.1
<400> 7
Met Leu Ala Arg Arg Lys Pro Val Leu Pro Ala Leu Thr Ile Asn Pro
1 5 10 15
Thr Ile Ala Glu Gly Pro Ser Pro Thr Ser Glu Gly Ala Ser Glu Ala
20 25 30
Asn Leu Val Asp Leu Gln Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu Leu Asp Glu
35 40 45
Gln Gln Lys Lys Arg Leu Glu Ala Phe Leu Thr Gln Lys Ala Lys Val
50 55 60
Gly Glu Leu Lys Asp Asp Asp Phe Glu Arg Ile Ser Glu Leu Gly Ala
65 70 75 80
Gly Asn Gly Gly Val Val Thr Lys Val Gln His Arg Pro Ser Gly Leu
85 90 95
Ile Met Ala Arg Lys Leu Ile His Leu Glu Ile Lys Pro Ala Ile Arg
100 105 110
Asn Gln Ile Ile Arg Glu Leu Gln Val Leu His Glu Cys Asn Ser Pro
115 120 125
Tyr Ile Val Gly Phe Tyr Gly Ala Phe Tyr Ser Asp Gly Glu Ile Ser
130 135 140
Ile Cys Met Glu His Met Asp Gly Gly Ser Leu Asp Gln Val Leu Lys
145 150 155 160
Glu Ala Lys Arg Ile Pro Glu Glu Ile Leu Gly Lys Val Ser Ile Ala
165 170 175
Val Leu Arg Gly Leu Ala Tyr Leu Arg Glu Lys His Gln Ile Met His
180 185 190
Arg Asp Val Lys Pro Ser Asn Ile Leu Val Asn Ser Arg Gly Glu Ile
195 200 205
Lys Leu Cys Asp Phe Gly Val Ser Gly Gln Leu Ile Asp Ser Met Ala
210 215 220
Asn Ser Phe Val Gly Thr Arg Ser Tyr Met Ala Pro Glu Arg Leu Gln
225 230 235 240
Gly Thr His Tyr Ser Val Gln Ser Asp Ile Trp Ser Met Gly Leu Ser
245 250 255
Leu Val Glu Leu Ala Val Gly Arg Tyr Pro Ile Pro Pro Pro Asp Ala
260 265 270
Lys Glu Leu Glu Ala Ile Phe Gly Arg Pro Val Val Asp Gly Glu Glu
275 280 285
Gly Glu Pro His Ser Ile Ser Pro Arg Pro Arg Pro Pro Gly Arg Pro
290 295 300
Val Ser Gly His Gly Met Asp Ser Arg Pro Ala Met Ala Ile Phe Glu
305 310 315 320
Leu Leu Asp Tyr Ile Val Asn Glu Pro Pro Pro Lys Leu Pro Asn Gly
325 330 335
Val Phe Thr Pro Asp Phe Gln Glu Phe Val Asn Lys Cys Leu Ile Lys
340 345 350
Asn Pro Ala Glu Arg Ala Asp Leu Lys Met Leu Thr Asn His Thr Phe
355 360 365
Ile Lys Arg Ser Glu Val Glu Glu Val Asp Phe Ala Gly Trp Leu Cys
370 375 380
Lys Thr Leu Arg Leu Asn Gln Pro Gly Thr Pro Thr Arg Thr Ala Val
385 390 395 400
<210> 8
<211> 1759
<212> DNA
<213> 智人
cDNA序列： NM_030662.3
<400> 8
cccctgcctc tcggactcgg gctgcggcgt cagccttctt cgggcctcgg cagcggtagc 60
ggctcgctcg cctcagcccc agcgcccctc ggctaccctc ggcccaggcc cgcagcgccg 120
cccgccctcg gccgccccga cgccggcctg ggccgcggcc gcagccccgg gctcgcgtag 180
gcgccgaccg ctcccggccc gccccctatg ggccccggct agaggcgccg ccgccgccgg 240
cccgcggagc cccgatgctg gcccggagga agccggtgct gccggcgctc accatcaacc 300
ctaccatcgc cgagggccca tcccctacca gcgagggcgc ctccgaggca aacctggtgg 360
acctgcagaa gaagctggag gagctggaac ttgacgagca gcagaagaag cggctggaag 420
cctttctcac ccagaaagcc aaggtcggcg aactcaaaga cgatgacttc gaaaggatct 480
cagagctggg cgcgggcaac ggcggggtgg tcaccaaagt ccagcacaga ccctcgggcc 540
tcatcatggc caggaagctg atccaccttg agatcaagcc ggccatccgg aaccagatca 600
tccgcgagct gcaggtcctg cacgaatgca actcgccgta catcgtgggc ttctacgggg 660
ccttctacag tgacggggag atcagcattt gcatggaaca catggacggc ggctccctgg 720
accaggtgct gaaagaggcc aagaggattc ccgaggagat cctggggaaa gtcagcatcg 780
cggttctccg gggcttggcg tacctccgag agaagcacca gatcatgcac cgagatgtga 840
agccctccaa catcctcgtg aactctagag gggagatcaa gctgtgtgac ttcggggtga 900
gcggccagct catcgactcc atggccaact ccttcgtggg cacgcgctcc tacatggctc 960
cggagcggtt gcagggcaca cattactcgg tgcagtcgga catctggagc atgggcctgt 1020
ccctggtgga gctggccgtc ggaaggtacc ccatcccccc gcccgacgcc aaagagctgg 1080
aggccatctt tggccggccc gtggtcgacg gggaagaagg agagcctcac agcatctcgc 1140
ctcggccgag gccccccggg cgccccgtca gcggtcacgg gatggatagc cggcctgcca 1200
tggccatctt tgaactcctg gactatattg tgaacgagcc acctcctaag ctgcccaacg 1260
gtgtgttcac ccccgacttc caggagtttg tcaataaatg cctcatcaag aacccagcgg 1320
agcgggcgga cctgaagatg ctcacaaacc acaccttcat caagcggtcc gaggtggaag 1380
aagtggattt tgccggctgg ttgtgtaaaa ccctgcggct gaaccagccc ggcacaccca 1440
cgcgcaccgc cgtgtgacag tggccgggct ccctgcgtcc cgctggtgac ctgcccaccg 1500
tccctgtcca tgccccgccc ttccagctga ggacaggctg gcgcctccac ccaccctcct 1560
gcctcacccc tgcggagagc accgtggcgg ggcgacagcg catgcaggaa cgggggtctc 1620
ctctcctgcc cgtcctggcc ggggtgcctc tggggacggg cgacgctgct gtgtgtggtc 1680
tcagaggctc tgcttcctta ggttacaaaa caaaacaggg agagaaaaag caaaaaaaaa 1740
aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 1759
<210> 9
<211> 19
<212> RNA
<213> 合成的
非靶向对照（NTC）
<400> 9
ugguuuacau gucgacuaa 19
<210> 10
<211> 19
<212> RNA
<213> 合成的
非靶向对照（NTC）
<400> 10
ugguuuacau guuguguga 19
<210> 11
<211> 19
<212> RNA
<213> 合成的
非靶向对照（NTC）
<400> 11
ugguuuacau guuuucuga 19
<210> 12
<211> 19
<212> RNA
<213> 合成的
非靶向对照（NTC）
<400> 12
ugguuuacau guuuuccua 19
<210> 13
<211> 19
<212> RNA
<213> 智人
NRAS_1
<400> 13
gagcagauua agcgaguaa
19
<210> 14
<211> 19
<212> RNA
<213> 智人
NRAS_2
<400> 14
gaaauacgcc aguaccgaa 19
<210> 15
<211> 19
<212> RNA
<213> 智人
NRAS_3
<400> 15
guggugaugu aacaagaua 19
<210> 16
<211> 19
<212> RNA
<213> 智人
KRAS_1
<400> 16
gaaguuaugg aauuccuuu 19
<210> 17
<211> 19
<212> RNA
<213> 智人
KRAS_2
<400> 17
ggagggcuuu cuuugugua 19

Claims (8)

1.一种用于在治疗NRAS突变的癌症中使用的EGFR抑制剂，其中该EGFR抑制剂与MEK抑制剂组合给予，并且该NRAS突变选自E63K、G12V、G12R、G12A、G12D、G12S和G12C，或NRAS基因拷贝数的增加。
2.一种用于如权利要求1所述的用途的EGFR抑制剂，其中该EGFR抑制剂选自吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼、AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
3.一种用于如权利要求1或权利要求2所述的用途的EGFR抑制剂，其中该EGFR抑制剂选自AZD9291和CO1686；或其药学上可接受的盐。
4.一种用于如权利要求1至3中的任一项所述的用途的EGFR抑制剂，其中该MEK抑制剂选自司美替尼、曲美替尼、MEK-162和考比替尼；或其药学上可接受的盐。
5.一种用于如权利要求1至4中的任一项所述的用途的EGFR抑制剂，其中该NRAS突变的癌症是NRAS突变的非小细胞肺癌。
6.一种用于如权利要求1至5中的任一项所述的用途的EGFR抑制剂，其中该NRAS突变选自E63K、G12V和G12R，或NRAS基因拷贝数的增加。
7.一种用于如权利要求1至6中的任一项所述的用途的EGFR抑制剂，其中该EGFR抑制剂是AZD9291或其药学上可接受的盐。
8.一种用于如权利要求1至7中的任一项所述的用途的EGFR抑制剂，其中该MEK抑制剂是司美替尼或其药学上可接受的盐。
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