ES2890556T3

ES2890556T3 - Combinación de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS

Info

Publication number: ES2890556T3
Application number: ES15715805T
Authority: ES
Inventors: Darren Anthony Edward Cross; Catherine Anne Eberlein
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 2014-04-04
Filing date: 2015-04-02
Publication date: 2022-01-20
Anticipated expiration: 2035-04-02
Also published as: EP3125885A1; WO2015150826A1; DK3125885T3; US20210177844A1; KR20160135362A; RU2016140626A; CN106456774A; RU2683276C2; AU2015242407A1; CA2943402A1; HUE055747T2; MA39841A; AU2015242407B2; EP3125885B1; JP2017511341A; MX2016013048A; US20200237758A1; CA2943402C; MX369111B; PL3125885T3

Abstract

Un inhibidor de EGFR para usarse en el tratamiento de cáncer de pulmón de células no pequeñas con mutación de NRAS, donde el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK y la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V y G12R, o una ganancia de número de copias del gen de NRAS.

Description

DESCRIPCIÓN

Combinación de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere a métodos para predecir el desarrollo de resistencia a la terapia del cáncer basada en inhibidores de EGFR. La invención se refiere además a métodos para seleccionar regímenes de tratamiento del cáncer adecuados para pacientes y a métodos para tratar ciertos cánceres resistentes a fármacos, así como a productos para su uso en dichos métodos. En particular, la invención se refiere a métodos y productos para predecir el desarrollo de resistencia a la terapia del cáncer mediada por inhibidores de EGFR, y a métodos y productos para tratar dicho cáncer resistente a fármacos usando una combinación de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR por sus siglas en inglés) se ha identificado como un objetivo para el tratamiento de varios cánceres, en particular, tumores sólidos, ya que participa en la regulación de funciones celulares importantes en la proliferación y supervivencia de las células cancerosas. Se ha observado una mayor expresión de EGFR en cáncer de vejiga, mama, glioblastoma, cabeza y cuello, pulmón y estómago. El desarrollo de cáncer puede estar asociado, por ejemplo, con una mutación activadora en EGFR, y la alta expresión de EGFR a menudo se relaciona con un mal pronóstico. Las mutaciones cancerosas activadoras en EGFR son a menudo mutaciones somáticas de ganancia de función en exones que codifican el dominio tirosina quinasa del receptor. Ejemplos de tales mutaciones, identificadas en adenocarcinomas de pulmón en pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC por sus siglas en inglés), incluyen deleciones en marco de múltiples nucleótidos en el exón 19 (que implican la eliminación de cuatro aminoácidos, Leu-Arg-Glu-Ala), y una sustitución de un solo nucleótido en el nucleótido 2573 (T ^ G) en el exón 21, lo que da como resultado la sustitución de arginina por leucina en la posición 858 (L858R). Se ha descubierto que estas mutaciones aumentan la sensibilidad a los inhibidores de la tirosina quinasa (TKIs por sus siglas en inglés) del EGFR. En consecuencia, las terapias de primera línea dirigidas a EGFR se basan a menudo en la inhibición de la actividad tirosina quinasa del receptor mutante.

Las terapias de primera línea establecidas para pacientes con una mutación activadora en EGFR incluyen el uso de inhibidores de la tirosina quinasa EGFR como gefitinib (Iressa™), erlotinib (Tarceva™) y afatinib (Gilotrif™). Sin embargo, a pesar de las respuestas iniciales a estos inhibidores de la tirosina quinasa EGFR, una proporción significativa de pacientes finalmente muestra progresión de la enfermedad debido a la resistencia adquirida, que se ha demostrado en muchos casos que se asocia con una mutación adicional en EGFR, conocida como T790M.

La resistencia adquirida ha llevado al desarrollo de más inhibidores de la tirosina quinasa, como AZD9291, CO-1686 y WZ4002, que inhiben los receptores de EGFR que poseen las mutaciones activadoras en el dominio de tirosina quinasa, como las mutaciones del exón 19del y L858R, así como la mutación T790M en modelos preclínicos. Sin embargo, es preocupante que los tumores puedan finalmente desarrollar también resistencias a estos fármacos, lo que limita su eficacia a largo plazo en los pacientes. Ji-Young Song et al. describe que la inhibición dual de MEK1 / 2 y EGFR induce sinérgicamente la apoptosis en células de cáncer de pulmón resistentes a EGFR, pero no describe las mutaciones específicas de NRAS.

En vista de esto, existe la necesidad de determinar los mecanismos que subyacen a la resistencia adquirida a los inhibidores de EGFR en la terapia del cáncer y tratar de proporcionar nuevos tratamientos que puedan superar estos mecanismos de resistencia adicionales.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Esta invención se limita al objeto definido en las reivindicaciones; la siguiente descripción está sujeta a esta limitación. Basándose en experimentos de laboratorio con poblaciones de células cancerosas, los presentes inventores han descubierto que la resistencia a la terapia contra el cáncer mediada por inhibidores de EGFR puede estar asociada en algunos pacientes con anomalías genéticas en el gen homólogo del oncogén viral RAS del neuroblastoma (NRAS por sus siglas en inglés) que codifica la proteína homóloga del oncogén viral RAS del neuroblastoma (NRAS), que se manifiesta por ciertas mutaciones que dan como resultado la sustitución del codón en la proteína codificada o mediante una ganancia del número de copias del gen NRAS. Según un aspecto de la presente invención, la resistencia a la terapia contra el cáncer mediada por inhibidores de EGFR puede estar asociada con una mutación de NRAS E63K y / o una mutación G12V NRAS.

La proteína NRAS activa la ruta de la proteína quinasa Ras, Raf, MAP / quinasa quinasa regulada por señal extracelular (MEK), quinasa regulada por señal extracelular (ERK) (ruta Ras / Raf / MEK / ERK) en las células. Esta ruta está corriente abajo del receptor EGFR y juega un papel central en la regulación de una variedad de funciones celulares que dependen del contexto celular, incluida la proliferación celular, diferenciación, supervivencia, inmortalización, invasión y angiogénesis (revisado en Peyssonnaux and Eychene, Biology of the Cell, 2001, 93: 3-62).

De hecho, la cascada Raf-MEK-MAPK dependiente de Ras es una de las rutas de señalización clave responsables de transmitir señales tanto mitogénicas como invasivas desde la superficie celular al núcleo, lo que da como resultado cambios en la expresión génica y el destino celular.

Un numero de mutaciones de NRAS se han identificado previamente en algunos cánceres. Sin embargo, la mutación E63K no se ha descrito previamente y las mutaciones E63K / G12V de la presente invención no se han asociado previamente con resistencia a la inhibición de EGFR en la terapia del cáncer de pulmón.

Sin pretender imponer ninguna teoría, se cree que, en las células adictas a la ruta EGFR, la inhibición de esta ruta también inhibe la ruta Ras / Raf / MEK / ERK (corriente abajo). Sin embargo, las células tratadas crónicamente con inhibidor de EGFR encuentran un mecanismo alternativo para eludir la inhibición de EGFR (p. ej., mediante una mutación activadora en NRAS), que permite que las células sobrevivan en ausencia de señalización de EGFR y, por lo tanto, permite la progresión de la enfermedad en un paciente.

Al detectar uno o más de las presentes mutaciones de NRAS en un paciente (o más específicamente, detectando la mutación(es) relevante en un tejido adecuado o en una muestra de sangre tomada de un paciente), puede ser posible identificar pacientes que hayan desarrollado, o que se predice que desarrollarán, una forma de cáncer que es resistente a la terapia mediada por inhibidores de EGFR.

Los inventores han descubierto además que las células que han desarrollado resistencia a un inhibidor de EGFR basándose en una mutación de NRASdescrita en el presente documento sorprendentemente muestra una mayor sensibilidad a un inhibidor de MEK (que inhibe la ruta Ras / Raf / MEK / ERK) en comparación con una línea celular parental (sensible al inhibidor de EGFr y NRAS tipo salvaje) y en comparación con las líneas de células resistentes al inhibidor de EGFR que son de NRAS de tipo salvaje. Sorprendentemente, parece que este aumento de sensibilidad depende de mantener tanto la inhibición de EGFR en combinación con la inhibición de MEK. Sin desear ceñirse a la teoría, se cree que las células mutantes de EGFR pueden volver a la señalización de EGFR en ausencia de inhibición continuada por un inhibidor de EGFR, de modo que las células ya no sean sensibles a la inhibición de MEK.

Pacientes con cáncer resistente a inhibidores de EGFR que tengan una mutación de NRAS en en su cáncer como se describe en el presente documento puede por lo tanto, beneficiarse del tratamiento usando una combinación de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK. De esta manera, una combinación de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK proporciona una terapia de seguimiento eficaz (por ejemplo, de segunda línea) en pacientes con cáncer que ya han recibido o están recibiendo terapia de inhibición de EGFR.

Una combinación de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK también puede proporcionar una terapia de primera línea eficaz contra el cáncer asociado a EGFR, incluso en pacientes que aún no han sido tratados con un inhibidor de EGFR. En tales pacientes, el tratamiento combinado puede actuar para retrasar o prevenir el desarrollo de resistencias basadas en la activación de NRAS (y la ruta Ras / Raf / MEK / ERK).

Más específicamente, los presentes inventores han determinado que las poblaciones de células resistentes al inhibidor de EGFR que contienen las mutaciones de NRAS E63K, G12V y G12R muestran cada una sensibilidad al tratamiento con un inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR. Como entenderá el experto y se explicará con más detalle a continuación, la implicación de G12V y G12R sugiere que cualquier mutación única en las posiciones 288 o 289 en el gen NRAS puede resultar en sensibilidad a un inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR. En general, el experto en la materia comprenderá que las mutaciones individuales detectables en las posiciones 288 o 289 del gen de NRAS (por ejemplo, de un ADNc) corresponde a las mutaciones de la proteína NRAS G12A, G12D, G12S y G12C además de las mutaciones de la proteína NRAS G12V y G12R que se han descrito experimentalmente a continuación. Por consiguiente, en el presente documento se describe un inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR, para su uso en el tratamiento de cáncer resistente al inhibidor de EGFR que implica la presencia / detección de cualquiera de las mutaciones mencionadas anteriormente.

Por tanto, en un aspecto, la divulgación proporciona un método para seleccionar un paciente con cáncer adecuado para el tratamiento con una combinación de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK, comprendiendo el método;

(a) realizar pruebas en un paciente con cáncer para determinar la presencia de una mutación NRAS; y

(b) seleccionar un paciente como adecuado para el tratamiento con la combinación de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK si está presente una mutación de NRAS;

donde la mutación de NRAS se selecciona del grupo que consiste en: E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

En una realización, la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V y G12R.

Como se describe en el presente documento, la mutación de NRAS se selecciona entre G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

Como se describe en el presente documento, la mutación de NRAS se selecciona entre G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

En una realización, la mutación de NRAS se selecciona entre G12V y G12R.

En una realización la mutación de NRAS es G12R.

En una realización, el inhibidor de EGFR se selecciona de AZD9291 y CO 1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera.

En una realización adicional, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En una realización adicional, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o CO1686; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el inhibidor de MEK es selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización adicional, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el inhibidor de MEK es selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En un aspecto, la divulgación proporciona un método para seleccionar un paciente con cáncer adecuado para el tratamiento con una combinación de un inhibidor de EGFr y un inhibidor de MEK, comprendiendo el método;

(a) realizar pruebas en un paciente con cáncer para determinar la presencia de una mutación de activación de NRAS; y

(b) seleccionar un paciente como adecuado para el tratamiento con la combinación de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK si está presente una mutación de activación de NRAS;

donde la mutación de activación de NRAS se selecciona del grupo que consiste en: una mutación de NRAS E63K; y una mutación NRAS G12V.

En un aspecto adicional, la divulgación proporciona un método para seleccionar un paciente con cáncer adecuado para el tratamiento con una combinación de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK, comprendiendo el método;

(a) realizar pruebas en un paciente con cáncer para determinar la presencia de una ganancia de un número de copias de NRAS; y

(b) seleccionar un paciente como adecuado para el tratamiento con la combinación de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK si está presente una ganancia de un número de copias de NRAS.

En un aspecto adicional, la divulgación proporciona un método para seleccionar un régimen de tratamiento para el cáncer adecuado para un paciente de cáncer, comprendiendo el método:

(a) determinar la presencia de una mutación de NRAS en el paciente; y

(b) seleccionar un régimen de tratamiento para el paciente, que comprende la provisión de una combinación de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK si está presente una mutación de NRAS;

En una realización, la mutación de NRAS se selecciona entre G12V y G12R.

En una realización la mutación de NRAS es G12R.

En una realización adicional, el inhibidor de EGFR se selecciona de AZD9291 y CO1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera.

(a) determinar la presencia de una mutación de NRAS en el paciente; y

donde la mutación de activación de NRAS se selecciona del grupo que consiste en: E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

En una realización, la mutación de NRAS se selecciona entre G12V y G12R.

En una realización la mutación de NRAS es G12R.

(a) determinar la presencia de una mutación de activación de NRAS en el paciente; y

(b) seleccionar un régimen de tratamiento para el paciente, que comprende la provisión de una combinación de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK si está presente una mutación de activación de NRAS; donde la mutación de activación de NRAS se selecciona del grupo que consiste en: una mutación de NRAS E63K; y una mutación NRAS G12V.

(a) determinar la presencia de una ganancia de un número de copias de NRAS en el paciente; y

(b) seleccionar un régimen de tratamiento para el paciente, que comprende la provisión de una combinación de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK si una ganancia de un número de copias de NRAS está presente; En un aspecto adicional, la divulgación proporciona un método para predecir el desarrollo de resistencia adquirida al efecto terapéutico de un inhibidor de EGFR en un paciente con cáncer, comprendiendo el método:

(b) identificar el cáncer como uno que se ha vuelto o se volverá resistente si está presente una mutación de activación de NRAS;

En un aspecto adicional, la divulgación proporciona un método para predecir el desarrollo de resistencia adquirida al efecto terapéutico de un inhibidor de EGFR en un paciente con cáncer, comprendiendo el método:

(b) identificar el cáncer como uno que se ha vuelto o se volverá resistente si está presente una ganancia de un número de copias de NRAS.

En descripciones particulares de cualquiera de los aspectos de la invención, el paciente ha recibido o está recibiendo tratamiento con un inhibidor de EGFR. En otras descripciones, la determinación de la anomalía del gen de NRAS / proteína de NRAS en el paciente se lleva a cabo en una muestra biológica adecuada obtenida del paciente. Esta muestra puede haber sido tomada antes o como parte del método de tratamiento. Esta muestra contendrá típicamente células tumorales, ácido nucleico tumoral o ácido nucleico derivado de las mismas.

En un aspecto adicional, la invención proporciona un método para determinar la probabilidad de efectividad de un tratamiento de combinación que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para tratar el cáncer en un paciente afectado con cáncer que comprende: determinar si el gen de NRAS obtenido a partir de una muestra biológica obtenida de dicho paciente comprende al menos una variación de ácido nucleico, seleccionada entre:

a) una mutación que da como resultado la presencia de lisina en lugar de ácido glutámico en la posición 63 de NRAS;

b) una mutación que da como resultado la presencia de valina, arginina, alanina, ácido aspártico, serina o cisteína en lugar de glicina en la posición 12 de NRAS; o

c) un aumento en el número de copias del gen de NRAS;

donde la muestra biológica es una muestra de tejido o fluido aislado del paciente que comprende células tumorales o ácido nucleico de células tumorales y donde la presencia de al menos una variación de ácido nucleico indica que el tratamiento de combinación comprende un inhibidor de tirosina quinasa EGFR y un inhibidor de MEK es probable que sea eficaz.

Por tanto, la invención proporciona un método para determinar la probabilidad de efectividad de un tratamiento de combinación que comprende un inhibidor de tirosina quinasa EGFR y un inhibidor de MEK para tratar el cáncer en un paciente afectado con cáncer que comprende: determinar si el gen de NRAS obtenido acuerdo partir de una muestra biológica obtenida de dicho paciente comprende al menos una variación de ácido nucleico, seleccionada entre: a) presencia de adenina en lugar de guanina en una posición correspondiente a la base 441 en ADNc de NRAS; b) presencia de un ácido nucleico distinto de guanina en una posición correspondiente a la base 288 en ADNc de NRAS;

c) presencia de un ácido nucleico distinto de guanina en una posición correspondiente a la base 289 en ADNc de NRAS; o

d) un aumento en el número de copias del gen de NRAS;

En una realización, la al menos una variación de ácido nucleico se selecciona de:

a) presencia de adenina en lugar de guanina en una posición correspondiente a la base 441 en ADNc de NRAS; a) presencia de timina en lugar de guanina en una posición correspondiente a la base 289 en ADNc de NRAS; o c) un aumento en el número de copias del gen de NRAS.

a) presencia de adenina en lugar de guanina en una posición correspondiente a la base 441 en ADNc de NRAS; b) presencia de timina en lugar de guanina en una posición correspondiente a la base 289 en ADNc de NRAS; c) presencia de citocina en lugar de guanina en una posición correspondiente a la base 288 en ADNc de NRAS;

o

d) un aumento en el número de copias del gen de NRAS.

En un aspecto adicional, la invención proporciona un método para determinar la probabilidad de efectividad de un tratamiento de combinación que comprende un inhibidor de tirosina quinasa EGFR y un inhibidor de MEK para tratar el cáncer en un paciente afectado con cáncer que comprende: determinar si el gen de NRAS obtenido a partir de una muestra biológica obtenida de dicho paciente comprende al menos una variación de ácido nucleico, seleccionada entre:

a) una mutación que da como resultado una sustitución de lisina por ácido glutámico en la posición 63 de NRAS o una sustitución de valina por glicina en la posición 12 de NRAS; o

b) un aumento en el número de copias del gen de NRAS;

En un aspecto adicional, la invención proporciona un método para determinar la probabilidad de efectividad de un tratamiento de combinación que comprende un inhibidor de tirosina quinasa EGFR y un inhibidor de MEK para tratar el cáncer en un paciente afectado con cáncer que comprende: determinar si el gen de NRAS o proteína obtenida a partir de una muestra biológica obtenida de dicho paciente comprende al menos una variación de, seleccionada entre:

b) un aumento en el número de copias del gen de NRAS;

Como se describe en el presente documento, antes de determinar si la muestra del paciente comprende o no la al menos una variación de ácido nucleico, el paciente ha sido tratado con un inhibidor de EGFR.

DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Figura 1: Tiempo de resistencia - Un gráfico de la concentración de gefitinib frente al tiempo tomado para las células PC9, cultivadas en presencia de gefitinib a esa concentración, para alcanzar aproximadamente el 80% de confluencia (la concentración de gefitinib se duplicó cada vez que se alcanzó esta confluencia). Figura 2: Ejemplo de curva de respuesta a la dosis - Un ejemplo de curva de respuesta a la dosis para células PC9 NRAS (tipo salvaje (WT por sus siglas en inglés)) tratadas con titulaciones de selumetinib. Figura 3: Ejemplo de curva de respuesta a la dosis - Un ejemplo de curva de respuesta a la dosis para células NRAS (E63K) resistentes a PC9 AZD9291 tratadas con titulaciones de selumetinib.

Figura 4: Ejemplo de curva de respuesta a la dosis - Un ejemplo de curva de respuesta a la dosis para células NRAs E63K resistentes a PC9_gefitinib tratadas con titulaciones de selumetinib.

Figura 5: Ejemplo de curva de respuesta a la dosis - Un ejemplo de curva de respuesta a la dosis para células de ganancia de NRAS (WT) resistentes de PC9_afatinib tratadas con titulaciones de selumetinib. Figura 6: Ejemplo de curva de respuesta a la dosis - Un ejemplo de curva de respuesta a la dosis para células NRAS (G12V) resistentes a PC9_AZD9291 tratadas con titulaciones de selumetinib.

Figura 7: Ensayo de activación de ras - Análisis de Western blot que muestra los niveles de NRAS activo, en líneas celulares PC9 y PC9 resistentes a AZD9291 con mutaciones de NRAS E63K (células PC9 AZDR_5) y G12V (células PC9 AZDR_2), tras el tratamiento durante 2 horas con o sin AZD929 160 nM.

Figura 8: Efecto de la eliminación de ARNip de NRAS WT y NRAS E63K en la señalización corriente abajo - Los efectos de la eliminación de la expresión de NRAS o KRAS mediada por ARNip en 48 horas sobre: fosforilación indicativa de actividad de proteínas: EGFR fosforilado (P EGFR); ERK fosforilada (P ERK); NRAS; KRAS; y GAPDH (control de carga); en células PC9, en células resistentes a PC9 AZD9291 (AKA. PC9 AZDR_5) que tiene una mutación de NRAS E63K; y en células PC9 resistentes a gefitinib (AKA. PC9 GR_2) que tiene una mutación de NRAS E63K.

Figura 9: Efecto de la eliminación de ARNip de NRAS WT y NRAS E63K sobre la proliferación - Los efectos de la eliminación de la expresión de NRAS o KRAS mediada por ARNip de 96 horas sobre el crecimiento celular en células PC9, en células PC9 resistentes a AZD9291 (AKA. PC9 AZDR_5) que tiene una mutación de NRAS E63K; y en células PC9 resistentes a gefitinib (AKA. PC9 GR_2) que tiene una mutación de NRAS E63K.

Figura 10: Efecto de la sobreexpresión exógena de NRAS E63K sobre la resistencia a la inhibición del crecimiento por gefitinib o AZD9291 en células PC9 - Los efectos de la sobreexpresión de NRAS mutante E63K sobre el crecimiento de células PC9 en ausencia y presencia de ya sea AZD9291 100 nM o gefitinib 300 nM.

DESCRIPCIÓN DE LAS SECUENCIAS

En la presente memoria descriptiva se hace referencia a varias secuencias. En particular:

SEQ ID NO: 1 proporciona la secuencia de aminoácidos del EGFR;

SEQ ID NO: 2 proporciona la secuencia de ADNc que codifica EGFR;

SEQ ID NO: 3 proporciona la secuencia de aminoácidos de NRAS;

SEQ ID NO: 4 proporciona la secuencia de ADNc que codifica NRAS;

SEQ ID NO: 5 proporciona la secuencia de aminoácidos de MEK1;

SEQ ID NO: 6 proporciona la secuencia de ADNc que codifica MEK1;

SEQ ID NO: 7 proporciona la secuencia de aminoácidos de MEK2; y

SEQ ID NO: 8 proporciona la secuencia de ADNc que codifica MEK2.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

A lo largo de la descripción y las reivindicaciones de esta especificación, el singular abarca el plural a menos que el contexto requiera lo contrario. En particular, cuando se usa el artículo indefinido, debe entenderse que la especificación contempla tanto la pluralidad como la singularidad, a menos que el contexto requiera lo contrario.

Las características, números enteros, propiedades, compuestos, restos químicos o grupos descritos junto con un aspecto, realización o ejemplo particular de la invención deben entenderse como aplicables a cualquier otro aspecto, realización o ejemplo aquí descrito a menos que sea incompatible con el mismo. Por consiguiente, todas las realizaciones, definiciones, aspectos y reivindicaciones descritos en el presente documento pueden combinarse entre sí en cualquier combinación (excepto cuando dicha combinación sea claramente inapropiada, considerando el contexto), con el fin de proporcionar más realizaciones, aspectos o reivindicaciones.

A lo largo de la descripción y las reivindicaciones de esta especificación, las palabras "comprende" y "contiene" y variaciones de las palabras, por ejemplo, "comprendiendo" y "que comprende", pueden significar "que incluye pero no se limita a", y en general no excluyen otros restos, aditivos, componentes, números enteros o etapas.

A menos que se indique lo contrario, los términos técnicos se utilizan de acuerdo con el uso convencional. Según la convención, es habitual recitar genes en cursiva y proteínas en texto normal. De acuerdo con una convención bien establecida en este campo técnico, en este documento los nombres de los genes se escriben en cursiva y los nombres de las proteínas se escriben en texto normal (es decir, no en cursiva). Por lo tanto, "NRAS" se utiliza para indicar la proteína NRAS y "NRAS"se utiliza para indicar el gen. Si bien se han realizado esfuerzos en este documento para indicar el gen NRAS o la proteína NRAS según esta convención, el experto en la materia comprenderá, en función del contexto científico, si alguna de las referencias a "NRAS"o" NRAS "son incorrectos.

Las definiciones de términos comunes en biología molecular pueden encontrarse en Benjamin Lewin, Genes V, publicado por Oxford University Press, 1994 (ISBN 0-19- 854287-9); Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, publicado por Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9); y Robert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, publicado por VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8).

Como se describe en el presente documento anteriormente, los presentes inventores han determinado que la resistencia a la terapia mediada por inhibidores de EGFR en pacientes con cáncer puede estar asociada con una o más mutaciones NRAS, seleccionadas del grupo que consiste en: una mutación de NRAS E63K; y una mutación de NRAS G12V. Se cree que estas mutaciones son mutaciones que activan NRAS. Los inventores también han descubierto que la resistencia a la terapia mediada por inhibidores de EGFR en pacientes con cáncer puede estar asociada con una ganancia de un número de copias de NRAS. Además, los inventores han descubierto que los pacientes con cáncer que albergan una o más de estas mutaciones de activación de NRAS o ganancias de umeros de copias de NRAS puede tratarse eficazmente con una combinación de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK, incluso si el paciente muestra (o podría mostrar) resistencia a la terapia mediada por inhibidor de EGFR sola. Además, los inventores han descubierto que los pacientes con cáncer que albergan la mutación NRAS G12R pueden tratarse eficazmente con una combinación de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK, incluso si el paciente muestra (o podría mostrar) resistencia a la terapia mediada por inhibidor de EGFR sola. La presente invención permite un direccionamiento más eficaz de tratamientos a pacientes con cáncer y, en particular, una identificación y tratamiento más eficaces de cánceres que han desarrollado, o desarrollarán, resistencia a los efectos de un inhibidor de EGFR.

Por tanto, en un aspecto, los métodos de la divulgación pueden utilizarse para predecir el desarrollo de resistencia adquirida al efecto terapéutico de un inhibidor de EGFR en un paciente con cáncer. En tal método, se prueba a un paciente para determinar la presencia de una mutación de NRAS o una ganancia de número de copias de NRAS como se describe en este documento, y se identifica que un cáncer está desarrollando resistencia adquirida si se demuestra que un paciente alberga una mutación de activación de NRAS o una ganancia de número de copias de NRAS según la invención. Dicho paciente puede describirse como positivo para una mutación de activación de NRAS o ganancia de número de copias de NRAs descrito en este documento. En un aspecto adicional, los métodos de la divulgación pueden ser usados para seleccionar pacientes con cáncer adecuados para el tratamiento con una combinación de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK. En dicho método, se prueba un paciente con cáncer para determinar la presencia de una mutación de NRAS o una ganancia de número de copias de NRAS como se describe en este documento, y se selecciona como adecuado para tratamiento si una o más de las mutaciones de NRAS descritas en el presente documento, o una ganancia de número de copias de NRAS está presente. Como se describe en este documento, cuando se prueba para determinar la presencia de una mutación de NRAS o una ganancia de número de copias de NRAS, el paciente con cáncer es aquel que ha recibido o está recibiendo tratamiento con un inhibidor de EGFR.

Los métodos de la divulgación también se pueden usar para seleccionar un régimen de tratamiento para cáncer adecuado para un paciente con cáncer. En este método, se prueba a un paciente con cáncer para determinar la presencia de una mutación de NRAS como se describe en este documento o una ganancia de número de copias de NRAS, y un régimen de tratamiento que comprende la provisión de una combinación de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK se selecciona si una mutación de NRAS o una ganancia de número de copias de NRAS está presente. Como se describe en este documento, cuando se prueba para determinar la presencia de una mutación de NRAS, el paciente con cáncer es aquel que ha recibido o está recibiendo tratamiento con un inhibidor de EGFR.

Cáncer

Varios cánceres están asociados con aberrante o sobreexpresión de EGFR y / o sobreexpresión de sus ligandos específicos, por ejemplo, receptor a del factor de crecimiento transformante (Gullick, Br Med Bull. 47: 87 - 98, 1991; Modijtahedi y Dean, Int. J. Oncol. 4: 277-296, 1994; Salomon et al., Crit Rev Onco1Hematol 19: 183-232, 1995). La sobreexpresión de EGFR se ha asociado con un pronóstico adverso en varios cánceres humanos, incluido el NSCLC. Como se describe en el presente documento, "cáncer" se refiere a un cáncer asociado a EGFR.

Los expertos en la técnica conocen bien los métodos para identificar y diagnosticar cánceres asociados a EGFR. A modo de ejemplo, los detalles de varios métodos y las circunstancias en las que pueden usarse se proporcionan en Ellison, et al. J Clin Pathol 2013; 66: 2 79-89. Por ejemplo, un cáncer asociado a EGFR puede ser uno que ha respondido o responde al tratamiento con un inhibidor de EGFR, tal como cualquiera de los inhibidores de EGFR descritos en el presente documento.

Un cáncer asociado a EGFR puede ser uno que se ha vuelto o que se volverá resistente al efecto terapéutico de uno o más inhibidores de EGFR como se describe en el presente documento. Tal resistencia puede estar asociada con una mutación en EGFR, como T790M.

Un cáncer asociado a EGFR puede ser un cáncer (o tumor) que es (o que era) dependiente al menos en parte de la ruta de señalización de EGFR.

Un cáncer asociado a EGFR puede estar asociado con una o más mutaciones en EGFR. Tal mutación de EGFR puede transformar la célula a un estado canceroso.

Una mutación de EGFR que está asociada con cáncer puede ser una mutación de activación de EGFR. Una mutación de este tipo generalmente da como resultado una sobreexpresión y / o una sobreactividad de la proteína EGFR. Cualquier actividad de EGFR puede verse afectada. La mutación puede ocurrir, por ejemplo, en una secuencia de nucleótidos, por ejemplo, en el ADN que codifica EGFR y / o en una secuencia de aminoácidos, por ejemplo, en la secuencia de aminoácidos de la proteína EGFR. La mutación puede ocurrir en una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína diferente, o en la secuencia de aminoácidos de una proteína diferente, donde el efecto de la mutación es producir sobreexpresión y / o sobreactividad de la proteína EGFR. Normalmente, una mutación es una mutación somática.

Una mutación puede ser, por ejemplo, una ganancia somática de una mutación de función en el dominio de tirosina quinasa de EGFR. Algunas de estas mutaciones aumentan la sensibilidad del cáncer a un inhibidor de la tirosina quinasa EGFR. Estas mutaciones generalmente residen dentro de los exones 18-21 del gen EGFR. Ver, por ejemplo, WO2005 / 094397 y WO2005 / 118876. Ejemplos de estas mutaciones incluyen deleciones en marco de múltiples nucleótidos en el exón 19 que implican la eliminación de cuatro aminoácidos, Leu-Arg-Glu-Ala, y una sustitución de un solo nucleótido en el nucleótido 2573 (T ^ G) en el exón 21, lo que da como resultado la sustitución de arginina por leucina en la posición 858 (L858R). Estas mutaciones están particularmente asociadas con el cáncer de pulmón, por ejemplo, el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC).

L858R es una de varias mutaciones de EGFR de particular interés en el contexto de la presente invención, porque con frecuencia se asocia con cánceres que responden a inhibidores de tirosina quinasa de EGFR como erlotinib, gefitinib, afatinib y AZD9291 (se incluyen más detalles en otra parte de este documento). . En una realización de la invención, el cáncer asociado a EGFR puede ser un cáncer asociado con una mutación de EGFR seleccionada del grupo que consiste en: L858R; y mutaciones por deleción del exón 19.

Adicional o alternativamente, un cáncer asociado a EGFR puede asociarse con una mutación EGFR T790M. Esta mutación se ve a menudo como una mutación de segundo sitio en EGFR, que ocurre además de una primera mutación de activación primaria. Normalmente, la mutación secundaria surge durante el tratamiento con un inhibidor de EGFR y proporciona un mecanismo de resistencia al inhibidor. La mutación T790M está particularmente asociada con el cáncer de pulmón, por ejemplo, NSCLC. AZD9291 puede usarse para el tratamiento de cánceres asociados a EGFR asociados con mutaciones por deleción del exón 19 y / o mutaciones por sustitución de L858R y, opcionalmente, mutación de resistencia a T790M.

Los ejemplos de cánceres asociados a EGFR pueden incluir: tumores no sólidos tales como leucemia, por ejemplo, leucemia mieloide aguda, mieloma múltiple, neoplasias hematológicas (por ejemplo, síndrome mielodisplásico o síndrome mieloproliferativo) o linfoma; y tumores sólidos y sus metástasis tales como melanoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), glioma, carcinoma hepatocelular (hígado), glioblastoma, carcinoma de tiroides, conducto biliar, hueso, gástrico, cerebro / SNC, cabeza y cuello, hepático, estómago, próstata, mama, renal, testicular, ovárico, piel, cervical, pulmón, músculo, neuronal, esofágico, vejiga, pulmón, uterino, vulva, endometrial, riñón, colorrectal, páncreas, membranas pleurales / peritoneales, glándula salival, y tumores epidermoides.

Como se describe en el presente documento, el cáncer asociado a EGFR es un tumor sólido.

Como se describe en el presente documento, el cáncer asociado a EGFR es cáncer de pulmón.

En una realización, el cáncer asociado a EGFR es NSCLC.

El uso de los métodos, usos médicos, composiciones farmacéuticas y otros aspectos de la divulgación en el contexto de cánceres seleccionados de este grupo, o metástasis de tales cánceres, debe considerarse un aspecto adecuado de la divulgación.

Paciente con cáncer

La invención se puede practicar en cualquier organismo adecuado. En un aspecto, el paciente es un animal o un ser humano, por ejemplo, un mamífero, tal como un mamífero de sangre caliente. En una aspecto, el paciente es un humano.

Normalmente, un paciente muestra uno o más síntomas clínicos o preclínicos de un cáncer asociado a EGFR descrito en el presente documento. Es posible que se haya diagnosticado clínicamente que un paciente padece un cáncer de este tipo o que es susceptible de padecerlo.

Un paciente puede estar recibiendo, o puede haber recibido, terapia contra el cáncer con un inhibidor de EGFR, tal como un TKI de EGFR. Un paciente puede ser uno que ya ha desarrollado, o que es probable que desarrolle, una resistencia adquirida a la terapia con un inhibidor de EGFR, como se describe en el presente documento. Por tanto, los presentes métodos se pueden usar para proporcionar una terapia de segunda línea o posterior.

Resistencia y resistencia adquirida

Como se usa en el presente documento, la resistencia a un tratamiento describe una situación clínica en la que un cáncer (o un paciente con cáncer) no responde al tratamiento, o responde menos que cuando se aplicó inicialmente el tratamiento (a menudo denominado resistencia adquirida).

La resistencia adquirida se refiere a una situación en la que un cáncer (o un paciente con cáncer) responde inicialmente al tratamiento con un agente (por ejemplo, un inhibidor de EGFR), pero en la que, con el tiempo, el cáncer (o el paciente) se vuelve menos sensible o no responde a un tratamiento adicional con el agente y el cáncer progresa. Un cáncer o un paciente con cáncer puede exhibir grados de resistencia (y por lo tanto grados de respuesta al tratamiento) a lo largo del tiempo.

Por responsivo se entiende que el tratamiento produce al menos un efecto terapéutico clínicamente detectable como se describe en el presente documento. Un paciente es no responsivo si no hay un efecto terapéutico clínicamente detectable como se describe en el presente documento. Un efecto terapéutico puede ser, por ejemplo, un efecto anticanceroso como se describe en el presente documento.

Un cáncer que se predice que desarrollará una resistencia adquirida a un inhibidor de EGFR de acuerdo con la invención es un cáncer que ya se ha vuelto, o que llegará a ser, resistente al tratamiento con un inhibidor de EGFR.

Tratamiento, terapia y efecto terapéutico.

Los términos tratamiento, terapia o efecto terapéutico como se usan en este documento incluyen lo siguiente y combinaciones de los mismos: (1) inhibir, por ejemplo, retrasar el inicio y / o progresión del cáncer, por ejemplo detener, reducir o retrasar el desarrollo del cáncer, o una recaída del mismo en caso de tratamiento de mantenimiento o profilaxis secundaria, o de al menos un síntoma clínico o subclínico del mismo; (2) prevenir o retrasar la aparición de síntomas clínicos de cáncer que se desarrollan en un sujeto que puede estar afectado o predispuesto al cáncer pero que todavía no experimenta ni muestra síntomas clínicos o subclínicos de cáncer; y / o (3) aliviar y / o curar el cáncer (p.ej, provocando la regresión del cáncer o al menos uno de sus síntomas clínicos o subclínicos, curando a un paciente o poniendo a un paciente en remisión). Un tratamiento o terapia como se usa en este documento puede incluir profilaxis o tratamiento profiláctico. Así, por ejemplo, el efecto terapéutico en el presente documento puede referirse a uno o más de (1), (2) y (3) que ocurren en un paciente con cáncer.

Un efecto terapéutico en la presente puede ser un efecto anticanceroso. Los efectos anticancerígenos incluyen, pero no se limitan a, inhibición del crecimiento tumoral, retraso del crecimiento tumoral, regresión del tumor, encogimiento del tumor, aumento del tiempo hasta el recrecimiento del tumor al cesar el tratamiento, ralentización de la progresión de la enfermedad.

Un efecto terapéutico en una terapia de primera línea a la que se hace referencia en este documento puede referirse a retrasar o prevenir el desarrollo de resistencia adquirida a la terapia mediada por inhibidores de EGFr , que puede, por ejemplo, adquirirse mediante el desarrollo de una mutación de NRAS descrita en este documento. Normalmente, un efecto terapéutico proporciona un beneficio que es clínicamente detectable. El beneficio para un sujeto o paciente a tratar puede ser estadísticamente significativo o al menos perceptible para el paciente o para el médico u otra persona experta. Se entenderá que un medicamento no producirá necesariamente un efecto clínico en cada paciente al que se administra; por lo tanto, en cualquier paciente individual o incluso en una población de pacientes en particular, un tratamiento puede fallar o tener éxito solo en parte, y los significados de los términos "tratamiento", "profilaxis" e "inhibidor" y de términos afines deben entenderse respectivamente.

El término "profilaxis" o "tratamiento profiláctico" incluye una referencia a tratamientos o terapias con el fin de preservar la salud o inhibir o retrasar el inicio y / o progresión del cáncer, por ejemplo, con el fin de reducir la posibilidad de, o prevenir la ocurrencia del cáncer. El resultado de la profilaxis puede ser, por ejemplo, la preservación de la salud o el retraso del inicio y / o progresión del cáncer. Se recordará que, en cualquier paciente individual o incluso en una población de pacientes particular, un tratamiento puede fallar, y este párrafo debe entenderse en consecuencia.

El tratamiento del cáncer de acuerdo con la invención puede evaluarse por medios convencionales tales como la extensión del efecto antitumoral, la tasa de respuesta, el tiempo hasta la progresión de la enfermedad y / o la tasa de supervivencia.

Una terapia de primera línea para el cáncer asociado a EGFR en la presente se refiere a la terapia administrada a un paciente que no ha sido tratado previamente para el cáncer usando un inhibidor de EGFR.

Una terapia de segunda línea para el cáncer asociado a EGFR en este documento se refiere a la terapia administrada a un paciente que ha sido tratado previamente por el cáncer con un inhibidor de EGFR, pero donde el cáncer asociado a EGFR había progresado (o se había vuelto resistente) durante el tratamiento con el inhibidor de EGFR.

Una terapia de tercera línea para el cáncer asociado con EGFR en la presente se refiere a la terapia administrada a un paciente que ha sido tratado previamente por el cáncer, en particular, que ha sido tratado previamente con dos terapias diferentes, por ejemplo diferentes inhibidores de EGFR.

Los inventores creen que los métodos de tratamiento y / o usos médicos descritos en este documento pueden, según sea necesario, ser aplicables en el contexto de terapias de primera, segunda, tercera o más líneas para cánceres asociados con EGFR.

EGFR IEGFR

EGFR, como se usa en el presente documento, se refiere al receptor del factor de crecimiento epidérmico, en general una glicoproteína transmembrana que es un miembro de la superfamilia de proteínas quinasas.

El EGFR puede ser de cualquier especie correspondiente a la especie a tratar. En un aspecto, EGFR es EGFR humano.

EGFR humano (Gene ID: 1956) existe en diferentes isoformas de acuerdo con transcripciones empalmadas alternativamente. EGFR, como se usa en este documento, puede referirse a cualquiera de estas isoformas.

Una secuencia del gen EGFR humano de tipo salvaje se describe en Gene ID: 1956. El gen EGFR puede tener el producto de expresión de ARNm correspondiente a la secuencia de ADNc en el número de acceso de GenBank X00588.1, y el producto de expresión de proteína que tiene la secuencia de aminoácidos de la proteína EGFR en UniProtKB / Swiss-Prot P00533.2 (esto incluye una secuencia de 24 aminoácidos señal en los aminoácidos 1-24 que se escinde en la proteína madura). La referencia en el presente documento al gen EGFR, ARNm, ADNc o proteína EGFR puede referirse a este gen, ARNm (o ADNc correspondiente) o proteína humana, con mutación adicional según lo permita el contexto. Un ARNm, ADNc o proteína de EGFR a los que se hace referencia en el presente documento también puede referirse a una isoforma de los anteriores, por ejemplo, una isoforma soluble que carece de un dominio transmembrana y un dominio intracelular, con mutación adicional según lo permita el contexto.

En algunos casos, EGFR puede referirse a una variante de lo anterior, por ejemplo, una variante de tipo salvaje de origen natural (por ejemplo, de una célula no tumoral).

Lo anterior se aplica mutatis mutandis para EGFR de una especie no humana. Por ejemplo, la referencia en el presente documento al gen EGFR, ARNm o proteína de EGFR puede referirse a homólogos de especies del gen, ARNm o proteína humanos, con mutación adicional según lo permita el contexto.

La numeración de la secuencia de aminoácidos para las mutaciones de EGFR y EGFR como se usa en este documento se hace generalmente con referencia a la secuencia de aminoácidos y la numeración de EGFR humano de tipo salvaje como se presenta en UniProtKB / Swiss-Prot P00533.2 (que como arriba incluye una secuencia señal en los aminoácidos 1-24). Así, por ejemplo, la referencia a una mutación T790M se refiere a un cambio de T a M en el aminoácido 790 en la secuencia de 1210 aminoácidos en UniProtKB / Swiss-Prot P00533.2. Debido a la secuencia de referencia utilizada, la mutación T790M se denominó inicialmente T766M (Blencke et al. J. Biol. Chem. 278: 15435 15440, 2003).

De manera similar, la numeración de la secuencia de ADNc de EGFR como se usa en este documento se hace con referencia a la secuencia de ADNc de EGFR de tipo salvaje en GenBank X00588.1 (con la secuencia de codificación de proteínas de las bases 187-3819).

La referencia a mutaciones de EGFR en el presente documento también puede abarcar mutaciones que se producen en posiciones correspondientes en EGFR de una especie no humana que tiene el mismo efecto funcional.

Inhibidor

Un inhibidor como se menciona en este documento puede ser, por ejemplo, un polipéptido, ácido nucleico, carbohidrato, lípido, compuesto de bajo peso molecular, un oligonucleótido, un oligopéptido, ARNip, antisentido, una proteína recombinante, un anticuerpo, un pepticuerpo o conjugados o proteínas de fusión de los mismos. Para una revisión de ARNip ver Milhavet O, Gary d S, Mattson MP. (Pharmacol Rev. Diciembre de 2003; 55 (4): 629-48. Para una revisión de antisentido, consulte Opalinska JB, Gewirtz AM. Sci STKE. 28 de octubre de 2003; 2003 (206): pe47.

Un compuesto de bajo peso molecular puede referirse, por ejemplo, a un compuesto con un peso molecular de menos de 2000 Dalton, 1000 Dalton, 700 Dalton o 500 Dalton. Los inhibidores particulares para su uso en la presente invención son TKIs EGFR de molécula pequeña.

Inhibidor de EGFR

Un inhibidor de EGFR generalmente reduce o previene la expresión y / o actividad de EGFR. Puede identificarse un inhibidor adecuado ensayando el efecto inhibidor sobre la expresión y / o actividad de EGFR.

Normalmente, un inhibidor reduce la expresión o la actividad en al menos una cantidad detectable en un ensayo adecuado. Un inhibidor puede, por ejemplo, reducir la expresión o actividad en al menos un 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 o al menos un 90%.

Los expertos en la técnica conocen muchas estrategias adecuadas mediante las cuales se puede reducir la expresión de EGFR. Además, el experto en la materia también conocerá muchos agentes capaces de reducir la actividad de EGFR, incluidos, pero no limitados a, los ejemplos proporcionados en otra parte de esta especificación.

Cualquier actividad de EGFR adecuada puede verse afectada, por ejemplo, la actividad de tirosina quinasa. Por tanto, en un aspecto, un inhibidor de EGFR puede comprender un inhibidor de tirosina quinasa (TKI). La inhibición de la actividad tirosina quinasa puede determinarse en cualquier ensayo adecuado, tal como el ensayo descrito en Ward et.al. J. Med. Chem. 2013, 56: 7025-7048.

Ejemplos de inhibidores de tirosina quinasa EGFR incluyen: gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291, CO-1686, WZ4002, PD153035 y PF 00299804. Los inhibidores pueden incluir sales farmacéuticamente aceptables de estos compuestos, como se describe en otra parte del presente documento. Tales inhibidores son bien conocidos por los expertos en la materia.

Los inhibidores de la tirosina quinasa EGFR establecidos, tales como gefitinib, erlotinib y afatinib, pueden utilizarse como terapia de primera línea contra el cáncer en pacientes. Los inhibidores de la tirosina quinasa EGFR desarrollados más recientemente, incluidos AZD9291, CO-1686, WZ4002, a veces se pueden usar contra el cáncer asociado a EGFR cuando se ha desarrollado resistencia a uno de los medicamentos TKI de EGFR más establecidos (por ejemplo, contra el cáncer asociado con ya sea una mutación de activación de EGFR primaria y una mutación adicional de EGFR, como T790M).

De los TKI EGFR mencionados anteriormente, el grupo que consiste en: gefitinib; erlotinib; afatinib; AZD9291; y CO-1686 representan ejemplos de particular interés en el contexto de la presente invención, (cuando el experto en la materia entiende que dichos TKIs de EGFR pueden usarse cada uno opcionalmente en forma de una sal farmacéuticamente aceptable). El uso de un TKI de EGFR seleccionado de este grupo representa una realización adecuada de la presente invención. Por tanto, en cualquier realización, aspecto o reivindicación donde se menciona un inhibidor de EGFR, pueden formarse realizaciones, aspectos y reivindicaciones adicionales donde el inhibidor de EGFR se selecciona entre gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291 y CO1686, o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los mismos. . Pueden formarse realizaciones, aspectos y reivindicaciones adicionales en los que el inhibidor de EGFR se seleccione entre gefitinib, AZD9291 y C01686.

Gefitinib

Un inhibidor de EGFR puede comprender gefitinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Gefitinib es un fármaco TKI de EGFR que está aprobado para su uso en NSCLC avanzado en varios territorios.

La estructura de gefitinib se muestra a continuación:

Gefitinib también puede ser conocido por el nombre químico N- (3-cloro-4-fluorofenil) -7-metoxi-6- (3-morfolin-4-ilpropoxi) quinazolin-4-amina.

Erlotinib

Un inhibidor de EGFR puede comprender Erlotinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Erlotinib es un fármaco TKI de EGFR utilizado contra cánceres de páncreas, pulmón y otros cánceres como se describe en el presente documento.

La estructura Erlotinib se muestra a continuación:

Erlotinib también puede ser conocido por el nombre químico N-(3-etinilfenil) -6,7-bis (2-metoxietoxi)

quinazolin-4-amina.

Afatinib

Un inhibidor de EGFR puede comprender afatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Afatinib es un fármaco TKI de EGFR utilizado particularmente contra NSCLC, como se describe en el presente documento. El medicamento a veces se puede usar para tratar cánceres que son, o se han vuelto, resistentes al tratamiento con gefitinib o erlotinib.

La estructura afatinib se muestra a continuación:

Afatinib también puede ser conocido por el nombre químico N-[4 -[(3-cloro-4-fluorofenil) amino] -7 -[[(3S) -tetrahidro-3-furanil] oxi] -6-quinazolinil] -4 (dimetilamino) -2-butenamida.

AZD9291

Un inhibidor de EGFR puede comprender AZD9291 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. AZD9291 a veces se puede usar para tratar cánceres que son, o se han vuelto, resistentes al tratamiento con inhibidores de EGFR como gefitinib, erlotinib y / o afatinib.

AZD9291 tiene la estructura:

y también se conoce por el nombre químico: "N-(2-{2-dimetilaminoetil-metilamino}-4-metoxi-5-{[4-(1-metilindol-3-il)pirimidin-2-il]amino}fenil)prop-2-enamida". AZD9291 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo se describen en la solicitud de patente internacional número PCT / GB2012 / 051783 (número de publicación WO2013 / 014448). Una sal farmacéuticamente aceptable de AZD9291 puede comprender cualquiera de las sales descritas en este documento, por ejemplo, una sal mesilato.

CO-1686 - también conocido como "rociletinib"

Un inhibidor de EGFR puede comprender CO-1686 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La estructura química del CO-1686 es:

CO-1686 también se conoce por el nombre químico: N-(3 - {[2 - {[4-(4-acetilpiperazin-1-il) -2-metoxifenil] amino} -5 -(trifluorometil) pirimidin-4-il] amino} fenil) prop-2-enamida . Una sal farmacéuticamente aceptable de CO-1686 puede comprender, por ejemplo, una sal de HBr.

WZ4002

Es un inhibidor de tirosina quinasa de EGFR selectivo para mutantes eficaz contra EGFR T790M. Este compuesto se describe en una publicación de Zhou et al. (Nature 462, 1070-1074; 2009)

NRAS INRAS NRAS, como se usa en este documento, se refiere al homólogo del oncogén viral RAS de neuroblastoma, y está codificado por el oncogén NRAS.

NRAS es un miembro de la familia de genes Ras. La familia de genes Ras de mamíferos incluye los genes ras de Harvey y Kirsten (HRAS y KRAS), un pseudogen inactivo de cada uno (c-Hras2 y c-Kras1) y el gen de NRAS. Las proteínas RAS tienen unión a GTP-GDP y actividad GTPasa.

NRAS puede ser de cualquier especie correspondiente a la especie a tratar. En un aspecto, NRAS es NRAS humano. Un gen NRAS (NRAS) humano (de tipo salvaje) se describe en Gene ID: 4893 y consta de 7 exones (-I, 1, II, II, IV, V, VI). El gen Nr As humano de tipo salvaje tiene típicamente un producto de expresión de ARNm correspondiente a la secuencia de ADNc en el número de acceso de GenBank NM_002524, y un producto de expresión de proteína que tiene la secuencia de aminoácidos de la proteína NRAS en UniProtKB / Swiss-Prot P01111.1.

La referencia en el presente documento al gen de NRAS, ARNm, ADNc o proteína de NRAS puede referirse a este gen, ARNm o secuencia ADNc correspondiente, o proteína humanos, con mutación adicional según lo permita el contexto.

En algunos casos, NRAS puede referirse a una variante de cualquiera de los anteriores, por ejemplo, una variante de origen natural de tipo salvaje.

Lo anterior se aplica mutatis mutandis para NRAS de una especie no humana. Por ejemplo, la referencia en el presente documento al gen de NRAS, ARNm, ADNc o proteína de NRAS puede referirse a homólogos de especies del gen, ARNm o proteína humanos anteriores, con mutación adicional según lo permita el contexto.

La numeración de aminoácidos y las mutaciones de NRAS se describen en el presente documento con referencia a la secuencia de aminoácidos en UniProtKB / Swiss-Prot P01111.1. Así, por ejemplo, la referencia en el presente documento a la mutación de NRAS E63K se refiere a un cambio del ácido glutámico (E) por lisina (K) en el aminoácido número 63 en la secuencia de aminoácidos 189 en UniProtKB / Swiss-Prot P01111.1. En la secuencia de ADNc de NRAS en el número de acceso de GenBank NM_002524, la secuencia de codificación de la proteína se muestra en los nucleótidos 255-824. La secuencia codificante consensuada de 570 nucleótidos también se presenta en la base de datos CCDS con el número de acceso CCDS877.1. La numeración de la secuencia de ADNc de NRAS y las mutaciones descritas en el presente documento se refieren a la secuencia de ADNc en el número de acceso de GenBank NM 002524.

La referencia a mutaciones de NRAS en el presente documento también puede abarcar mutaciones que se producen en posiciones correspondientes en NRAS de una especie no humana que tiene el mismo efecto funcional.

Mutación de activación de NRAS

Una mutación de activación de NRAS como se usa en este documento generalmente da como resultado una sobreexpresión y / o una sobreactividad de la proteína NRAS. Una mutación puede ocurrir, por ejemplo, en una secuencia de nucleótidos (por ejemplo, en el ADN que codifica NRAS) y / o en una secuencia de aminoácidos, (por ejemplo, en la secuencia de la proteína de NRAS). Una mutación de NRAS descrita en este documento es típicamente una mutación somática.

Cualquier actividad de NRAS puede verse afectada, por ejemplo, por la actividad de GTPasa.

Las mutaciones de activación de NRAS descritas en este documento incluyen: una mutación de NRAS E63K; una mutación NRAS G12V. Una mutación de activación de NRAS descrita en el presente documento puede surgir espontáneamente con el desarrollo del cáncer o puede adquirirse en un cáncer (o un paciente con cáncer) en respuesta al tratamiento del cáncer (o del paciente), como con un inhibidor de EGFR. Una mutación de NRAS adicional descrita en este documento es una mutación de NRAS G12R.

Mutación de NRAS E63K

Una mutación de NRAS E63K se refiere a un cambio en el aminoácido de ácido glutámico (E) a lisina (K) en la posición de aminoácido correspondiente a E63 en la secuencia de aminoácidos de la proteína NRAS (SEQ ID NO: 3).

El cambio de aminoácido suele estar codificado por un cambio en la secuencia de ADN en el gen de NRAS. Normalmente, se trata de un cambio en el codón 63 de la secuencia codificante (nucleótidos 441 -443 de la secuencia de ADNc de NRAS). En particular, el cambio puede resultar de un cambio de G a A en una posición correspondiente a la base 441 en la secuencia de ADNc de NRAS, que significa un cambio de GAG a AAG en una posición correspondiente a las bases 441 a 443. (También puede surgir de una doble sustitución de nucleobase, tal como de GAG a AAA en una posición correspondiente a las bases 441 a 443 de la secuencia de ADNc de NRAS).

Mutación de NRAS G12V

Una mutación de NRAS G12V se refiere a un cambio en la secuencia de aminoácido de glicina (G) a valina (V) en la posición de aminoácido correspondiente a G12 en la secuencia de aminoácidos de la proteína de NRAS (SEQ ID NO: 3).

El cambio de aminoácido suele estar codificado por un cambio en la secuencia de ADN en el gen de NRAS. Normalmente, se trata de un cambio en el codón 12 de la secuencia codificante (nucleótidos 288-290 de la secuencia de ADNc de NRAS). En particular, el cambio puede resultar de un cambio de G a T en una posición correspondiente a la base 298 en la secuencia de ADNc de NRAS, que significa un cambio de GGT a GTT para las bases 288 a 290.

Mutación de NRAS G12R

Una mutación de NRAS G12R se refiere a un cambio en la secuencia de aminoácido de glicina (G) a arginina (R) en la posición de aminoácido correspondiente a G12 en la secuencia de aminoácidos de la proteína de NRAS (SEQ ID NO: 3). El cambio de aminoácido suele estar codificado por un cambio en la secuencia de ADN en el gen de NRAS. Normalmente, se trata de un cambio en el codón 12 de la secuencia codificante (nucleótidos 288-290 de la secuencia de ADNc de NRAS). En particular, el cambio puede resultar de un cambio de G a C en una posición correspondiente a la base 288 en la secuencia de ADNc de NRAS, que significa un cambio de GGT a CGT para las bases 288 a 290.

Ganancia de número de copias NRAS

Una ganancia de número de copias de NRAS (N-ras) se refiere a un cambio en el ADN que da como resultado la presencia de un mayor número de copias del gen de NRAS en comparación con las células de control. Una célula de control podría ser una célula normal no cancerosa o una célula de control normal emparejada, es decir, una célula no cancerosa / población de células tomada del mismo paciente. El mayor número de copias del gen de NRAS también puede medirse en relación con un número de copias de referencia indicativo de una situación normal.

Por ejemplo, una mutación amplificadora puede resultar en un aumento en el número de copias del gen NRAS de al menos 1 en comparación con las células de control, como al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 en comparación con las células que carecen de la ganancia de número de copias. El número de copias del gen puede mostrar un aumento de veces mayor que 1, mayor que 2, mayor que 3 o mayor que 4.

Detección de mutaciones y ganancia de número de copias.

De acuerdo con un aspecto de la invención, los pacientes se someten a pruebas para determinar la presencia de una mutación de activación de NRAS seleccionada entre uno o más de: una mutación de NRAS E63K; y una mutación de NRAS G12V.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, los pacientes se someten a pruebas para determinar la presencia de una ganancia de número de copias de NRAS.

Las técnicas adecuadas mediante las cuales se pueden detectar mutaciones o ganancia de número de copias incluyen las seleccionadas del grupo que consiste en: secuenciación de próxima generación (NGS por sus siglas en inglés); secuenciación del exoma; amplificación específica de alelos e hibridación genómica comparativa de matrices (aCGH por sus siglas en inglés).

Más particularmente, en una realización adecuada, la presencia de una mutación de activación de NRAS seleccionada entre una mutación de NRAS E63K, una mutación de NRAS G12V y una mutación de NRAS G12R puede detectarse mediante NGS, amplificación específica de alelo o secuenciación de exoma. En una forma de realización adecuada, una ganancia de número de copias de NRAS puede ser determinado por aCGH.

Se entenderá que se puede analizar en un paciente la presencia de dicha mutación analizando cualquier indicador adecuado en el paciente que sea representativo de la mutación. Por ejemplo, un indicador puede ser un cambio en: la secuencia o cantidad de ADN genómico (por ejemplo, un gen particular o un elemento de control de la expresión); la secuencia o cantidad de un ARNm particular (o el correspondiente ADNc); la secuencia o cantidad de una proteína; o actividad proteica, que es representativa de la mutación. Cuando sea apropiado, cualquiera de los anteriores puede detectarse ensayando un fragmento adecuado de ADN genómico, ARNm (o ADNc correspondiente) o proteína.

Un elemento de control de la expresión de un gen se refiere a una secuencia de ADN que está operativamente unida a un gen y que controla al menos parcialmente la expresión del gen, por ejemplo, una secuencia promotora o potenciadora.

Un indicador adecuado para determinar una o más de las mutaciones de activación de NRAS anteriores puede ser un cambio en: la secuencia de los genes de NRAS o elemento de control de la expresión del gen; la cantidad (un aumento) o secuencia de ARNm de NRAS expresado a partir del gen de NRAS (o ADNc correspondiente); la cantidad (un aumento) o secuencia de la proteína de NRAS; o la actividad de la proteína de NRAS (un aumento). Un indicador adecuado para determinar un aumento en el número de copias de NRAS será un aumento en el número de copias del gen de NRAS presente. Cuando sea apropiado, cualquiera de los anteriores puede detectarse ensayando un fragmento adecuado de ADN genómico de NRAS, ARNm (o ADNc correspondiente) o proteína de NRAS. Sin pretender imponer ninguna teoría, se cree que las mutaciones de NRAS se producen en el ADN de las células tumorales del paciente, típicamente (uno de) los tumores que se están tratando en el paciente. Por lo tanto, el ADN, ARNm o proteína que se analiza puede ser ADN, ARNm o proteína presente o expresado en dicha célula tumoral, típicamente ADN genómico de NRAS, ARNm de Nr AS o proteína de NRAS.

Una mutación puede detectarse por cualquier medio adecuado. Normalmente, el método comprende analizar una muestra obtenida de un paciente para determinar la presencia de la mutación (normalmente analizando un indicador adecuado como se describe). Por tanto, los presentes métodos pueden llevarse a cabo in vitro. En algunos casos, el método puede comprender obtener una muestra adecuada de un paciente.

Puede usarse cualquier muestra adecuada, representativa de la mutación. Por ejemplo, una muestra puede comprender células o tejido que son, o se sospecha que son cancerosos, o comprenden ácido nucleico de cáncer / tumor. Por tanto, los métodos pueden comprender analizar tejido o células cancerosas para determinar la presencia de una mutación. Normalmente, el cáncer al que se hace referencia es el cáncer por el que se está tratando al paciente. Pueden obtenerse muestras adecuadas mediante biopsia u otro procedimiento quirúrgico. Por tanto, una muestra puede ser una biopsia de tumor. En algunos casos, las células cancerosas, o su ADN, pueden estar presentes en la circulación y pueden aislarse de fluidos biológicos tales como sangre, plasma, suero o derrame pleural. Por tanto, los métodos pueden comprender la prueba de fluidos biológicos que contienen ya sea células cancerosas que se han desprendido de la masa tumoral o ADN libre circulante de dichas células cancerosas para determinar la presencia de una mutación.

Métodos que implican analizar un cambio en una cantidad de ARNm de NRAS o proteína de NRAS (o fragmento de la misma), o para un cambio en la cantidad de actividad de NRAS, o para un cambio en el número de copias de gen de NRAS, típicamente comprenden:

• determinar el nivel de ARNm de NRAS o proteína (o fragmento) de NRAS, o el nivel de actividad de NRAS, o el número de copias del gen de NRAS, en una muestra adecuada;

• comparar el nivel determinado o el número de copia con un valor de referencia; y

• determinar la presencia de una ganancia de número de copias de NRAS si el nivel o número de copias determinado es mayor que el valor de referencia.

Puede obtenerse un valor de referencia adecuado para el nivel de actividad de ARNm de NRAS / proteína / NRAS con referencia al nivel medio en una población de control emparejada con el sujeto y el tipo de muestra. El experto en la materia podrá seleccionar un control apropiado para proporcionar el valor de referencia requerido.

Un valor de referencia adecuado para el número de copias del gen de NRAS es 2 (es decir, dos copias por célula).

Determinar la presencia de una ganancia de un número de copias de NRAS

Cualquier aumento en el número de copias de NRAS puede ser indicativo de una mayor resistencia a la terapia contra el cáncer mediada por EGFR, y tal mayor resistencia puede estar indicada determinando un aumento en el número de copia del gen de NRAS. El número de copias del gen de NRAS se puede analizar directamente, o el número de copias del gen de NRAS puede determinarse indirectamente ensayando otro indicador que sea representativo del número de copias del gen de NRAS.

Como se mencionó anteriormente, la presencia de una ganancia de número de copias del gen de NRAS puede detectarse mediante ensayos de aCGH. Alternativamente, una ganancia de número de copias de NRAS puede detectarse mediante la secuenciación del ADN del paciente con cáncer.

Una ganancia de número de copias de NRAS también puede detectarse determinando un aumento en la cantidad de ARNm de NRAS o proteína de NRAS, o un aumento en la cantidad de actividad de NRAS. La cantidad de ARNm NRAS o de proteína de NRAS se pueden analizar directamente en una muestra adecuada. Alternativamente, se puede analizar una muestra adecuada para otro indicador que sea representativo de la cantidad de ARNm NRAS o de proteína de NRAS.

Los niveles de ARNm o proteína pueden determinarse mediante cualquier medio adecuado conocido por los expertos en la técnica.

Simplemente a modo de ejemplo, el nivel de proteína (por ejemplo, proteína NRAS) en el sujeto puede determinarse por medio de un ensayo en el que se detecta la proteína, y se determina el nivel presente, mediante la unión de la proteína a una pareja de unión específica. La pareja de unión puede estar marcada directa o indirectamente.

Los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos que se unen a la proteína representan ejemplos particularmente adecuados de tales parejas de unión, y estos pueden usarse en inmunoensayos. Los ejemplos adecuados de inmunoensayos de este tipo que pueden usarse en los métodos de la invención incluyen los seleccionados del grupo que consiste en: ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA por sus siglas en inglés); radioinmunoensayo (RIA por sus siglas en inglés); e inmunoensayos multiplex (tales como ensayos Luminex™ producidos por Luminex Corporation).

Un anticuerpo para la unión específica a NRAS puede ser uno obtenido de un hibridoma. Los expertos en la técnica conocen bien los procedimientos para la producción de hibridomas. Una vez que se ha seleccionado y clonado el hibridoma deseado, el anticuerpo resultante se produce mediante cultivo in vitro del hibridoma deseado en un medio adecuado. Como método alternativo, el hibridoma deseado se puede inyectar directamente en ratones para producir cantidades concentradas de anticuerpo.

Las patentes relacionadas con anticuerpos monoclonales contra tumores humanos producidos por tecnología de hibridomas incluyen las patentes estadounidenses números 4,182,124 y 4,196,265. Representante de la técnica relacionada con anticuerpos monoclonales que tienen especificidad por antígenos en células de carcinoma es la patente estadounidense número 4,350,683.

Además, la persona experta apreciará que existe una gran cantidad de anticuerpos específicos para NRAS disponibles comercialmente, y que estos pueden usarse sin la necesidad de producir nuevos anticuerpos.

Ensayos que pueden usarse para determinar la cantidad de ARNm NRAS en una muestra incluye PCR cuantitativa en tiempo real. Simplemente a modo de ejemplo, los inventores han descubierto que esta técnica se puede practicar usando cebadores Taqman disponibles comercialmente y sondas de ABI Lifetechnologies.

Puede analizarse cualquier actividad adecuada de NRAS para determinar un aumento. En un aspecto, se analiza la actividad de GTPasa NRAS para evaluar si se presenta o no un aumento.

Determinación de la presencia de una mutación de NRAS E63K

En ácido nucleico

La presencia de una mutación de NRAS E63K en un paciente puede determinarse detectando la mutación correspondiente en la secuencia de codificación de genes de NRAS. Esto puede implicar, por ejemplo, la detección de una mutación en la propia secuencia de ADN genómico, o en el ARNm expresado correspondiente (o ADNc correspondiente), o en un fragmento adecuado de cualquiera de estos polinucleótidos, en el que el fragmento abarca la mutación del ácido nucleico que codifica la mutación de E63K. La mutación también se puede detectar en un ácido nucleico que se ha replicado basándose en la secuencia de prueba usando amplificación, como la reacción en cadena de la polimerasa. Por ejemplo, los cebadores a ambos lados de la secuencia codificante de NRAS, el codón 63 de NRAS se usa para amplificar la secuencia diana y la presencia o ausencia de la mutación puede discernirse a partir de esta reacción de amplificación o su producto de amplificación. El sitio de mutación de una mutación de ácido nucleico que codifica la mutación de E63k se encuentra típicamente en el codón 63 de la secuencia codificante de NRAS. Esto puede entenderse como un cambio en cualquiera de las bases correspondientes a las bases 441-443 en la secuencia de ADNc codificante de NRAS que da como resultado la codificación de una lisina. En particular, una mutación puede ocurrir en una posición correspondiente a la base 441 en el ADNc que codifica el NRAS.

La mutación puede ser un cambio de guanina (G) a adenina (A) (G a A, correspondiente a uridina en el ARNm) en el codón 63 en la secuencia codificante de NRAS. En particular el cambio puede ser un cambio de G a A en una posición correspondiente a la base 441 en la secuencia de codifica ADNc de NRAS, que ejemplo , un cambio de GAG a AAG en una posición correspondiente a los nucleótidos 441 a 443. el cambio puede ser un doble cambio de G a A en una posición correspondiente a la base 441 y 443 en la secuencia codificante de ADNc de NRAS, por ejemplo, un cambio de GAG a AAA en una posición correspondiente a las bases 441 a 443. Una mutación de ácido nucleico según la invención puede detectarse por cualquier medio adecuado. Normalmente, un método adecuado comprende amplificar la región de ácido nucleico de interés, es decir, la secuencia de ácido nucleico que contiene el locus polimórfico. Se puede utilizar cualquier método de amplificación adecuado, por ejemplo, amplificación por PCR, amplificación específica de alelo, amplificación basada en secuencia de ácido nucleico (NASBA por sus siglas en inglés), amplificación activada por ligación (LAT por sus siglas en inglés), reacción en cadena de ligasa (LCR por sus siglas en inglés) del sistema de replicasa QB, amplificación de ácido nucleico de reacción en cadena de reparación (RCR por sus siglas en inglés) o amplificación de ácido nucleico mediante activación por desplazamiento de cadena (SDA por sus siglas en inglés). Preferiblemente se usa amplificación por PCR.

Los expertos en la técnica pueden derivar cebadores de PCR para la amplificación de la secuencia de ácido nucleico que abarca el sitio de mutación descrito anteriormente en el presente documento utilizando, por ejemplo, la secuencia de genes de NRAS o la Secuencia de ADNc de NRAS. Dicho par de cebadores de PCR se hibridan en condiciones de PCR adecuadas con un polinucleótido que codifica el polipéptido de NRAS o un fragmento del mismo, de manera que los cebadores rodean el sitio de mutación.

Un cebador de PCR adecuado generalmente se hibrida en condiciones de PCR adecuadas con una hebra sentido o hebra antisentido de una secuencia polinucleotídica 5' en cada hebra respectiva al sitio de mutación. Un cebador de PCR puede unirse dentro de aproximadamente 200 nucleótidos de la mutación. Cualquier muestra de ácido nucleico, en forma purificada o no purificada, puede utilizarse como ácido(s) nucleico de partida, siempre que contenga, o se sospeche que contenga, la secuencia de ácido nucleico específica que contiene el locus polimórfico. Por tanto, el proceso puede amplificar, por ejemplo, ADN o ARN, incluido el ARN mensajero, en el que el ADN o ARN puede ser monocatenario o bicatenario. En el caso de que se utilice ARN como plantilla, se utilizarían enzimas y / o condiciones óptimas para la transcripción inversa de la plantilla a ADNc. Además, se puede utilizar un híbrido de ADN-ARN que contenga una hebra de cada uno. Un método puede implicar, por ejemplo, la extracción de ácidos nucleicos de una muestra de paciente adecuada para el ensayo. Por ejemplo, se puede extraer ARNm y preparar el correspondiente ADNc (a todo o parte del ARNm) mediante transcripción inversa. Los métodos para la extracción de ARNm y la preparación de ADNc se conocen en la técnica y se describen en el presente documento.

La detección de una mutación de ácido nucleico descrita en el presente documento comprende típicamente poner en contacto ácidos nucleicos con un medio para detectar selectivamente la mutación. Normalmente, los medios distinguen entre la secuencia mutante en el sitio de mutación y la secuencia de tipo salvaje en ese sitio. Los medios pueden estar marcados de forma detectable.

Por tanto, un método para la detección de una mutación de ácido nucleico que codifica E63K puede comprender poner en contacto una muestra adecuada con un medio para detectar selectivamente una secuencia de nucleótidos que contiene una G mutante en la posición correspondiente a la base 441 de NRAS que codifica el ADNc e identifica que la base en la posición es A. Normalmente, el medio distingue entre el T mutante y el C de tipo salvaje en esta posición.

Los medios pueden ser, por ejemplo, un cebador de PCR, una sonda oligonucleotídica o un medio de escisión específico de secuencia, tal como cualquiera de los descritos en este documento.

En algunos casos, el método de amplificación en sí mismo puede usarse para distinguir entre las secuencias de ácidos nucleicos mutantes y de tipo salvaje, por ejemplo, la amplificación puede ser selectiva para el ácido nucleico que contiene la mutación, usando por ejemplo amplificación específica de alelo u otras técnicas adecuadas que son conocidas en la técnica.

Por ejemplo, la amplificación por PCR se puede llevar a cabo usando un cebador de PCR que se une selectivamente a un ácido nucleico mutante, pero no al ácido nucleico de tipo salvaje en condiciones de PCR adecuadas. Normalmente, dicho cebador se hibrida en condiciones de PCR adecuadas con la secuencia de la hebra sentido o la secuencia de la hebra antisentido de un NRAS-polinucleótido codificante o un fragmento del mismo que contiene una mutación en el sitio de la mutación, pero que se hibrida débilmente o no se hibrida con un segundo polinucleótido de NRAS que es de tipo salvaje en esta posición, en las condiciones de PCR.

Por ejemplo, un cebador de PCR selectivo se puede hibridar en condiciones de PCR adecuadas con la secuencia de hebra sentido o la secuencia de hebra antisentido de un NRAS-polinucleótido codificante o un fragmento del mismo que incluye un mutante A en la posición correspondiente a la base 441 de ADNc codificante de NRAS el pero se hibrida débilmente o no se hibrida en absoluto con un segundo polinucleótido codificante de NRAS que contiene un G de tipo salvaje en esta posición, en las condiciones de PCR.

La amplificación por PCR se puede llevar a cabo usando este cebador y un segundo cebador adecuado para proporcionar un amplicón de p Cr que contiene una mutación (por ejemplo, T mutante) en el sitio de la mutación. Por tanto, la detección del amplicón indica la presencia de la mutación.

Según un aspecto de la divulgación, se proporciona un oligonucleótido capaz de hibridar selectivamente con una secuencia de ácido nucleico que codifica una lisina en la posición correspondiente a la posición 63 de la proteína de NRAS como se describe en el presente documento, el oligonucleótido es capaz de hibridar en condiciones adecuadas para la secuencia de hebra sentido o la secuencia de hebra antisentido de un NRAS-polinucleótido codificante o un fragmento del mismo que incluye un mutante A en la posición correspondiente a la base 441 de ADNc codificante de NRAS pero se hibrida débilmente o no se hibrida en un segundo polinucleótido codificante de NRAS que contiene un G de tipo salvaje en esta posición. El oligonucleótido puede contener o estar asociado con un marcador detectable. Como se describe en el presente documento, el oligonucleótido se usa o es adecuado para usarse como cebador en una reacción de PCR. Como se describe en el presente documento, el oligonucleótido se usa o es adecuado para usarse como sonda de hibridación.

Según otro aspecto de la divulgación, se proporciona un oligonucleótido capaz de hibridar selectivamente con una secuencia de ácido nucleico que codifica una lisina en la posición correspondiente a la posición 63 de la proteína de NRAS para su uso en un método para determinar si un paciente tiene o no ácido nucleico que codifica la sustitución E63K en la proteína de NRAS.

Según otro aspecto de la divulgación, se proporciona un oligonucleótido capaz de hibridar selectivamente con una secuencia de ácido nucleico que codifica una lisina en la posición correspondiente a la posición 63 de la proteína de NRAS para su uso en un método de selección de un paciente para el tratamiento de combinación con un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento.

La reacción de PCR puede incorporar un marcador detectable en el amplicón de PCR, y el método puede comprender detectar el marcador.

En otros casos, las secuencias amplificadas se pueden analizar además, ya sea en solución o después de unirse a un soporte sólido, mediante cualquier método normalmente aplicado a la detección de una secuencia de ADN específica, como PCR, restricción de oligómeros (Saiki, et. Al., Bio / Technology, 3: 1008-1012, (1985)), análisis de sonda de oligonucleótidos específicos de alelo (ASO por sus siglas en inglés) (Conner, et. Al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80: 278, (1983)), ensayos de ligación de oligonucleótidos (OLA por sus siglas en inglés) (Landgren y col., Science, 241: 1007, (1988)) y similares. Se han revisado las técnicas moleculares para el análisis de ADN (Landgren, et. Al., Science, 242: 229-237, (1988)).

En un ejemplo, el ácido nucleico diana puede someterse a amplificación por PCR usando al menos un cebador de PCR específico de alelo (selectivo de mutación), como se describió anteriormente.

En otro ejemplo, se puede usar una sonda oligonucleotídica selectiva de mutación (a veces denominada sonda específica de alelo) para detectar el ácido nucleico mutado. En tal método, el ácido nucleico amplificado se pone en contacto con una sonda oligonucleotídica que hibrida selectivamente con el ácido nucleico que contiene una mutación en el sitio de la mutación, pero hibrida débilmente o no hibrida en absoluto el ácido nucleico que es de tipo salvaje en el sitio de la mutación, en condiciones de hibridación adecuadas. La detección de la unión de la sonda al ácido nucleico indica la presencia de la mutación.

Tanto los medios de sonda o los ácidos nucleicos pueden inmovilizarse antes de la etapa de contacto. En tal método, el componente que se une a la pareja inmovilizada típicamente se marca y la determinación de la presencia de la mutación incluye detectar el marcador.

Una sonda de oligonucleótidos adecuada para su uso en el método puede, por ejemplo, hibridar con un polinucleótido que codifica NRAS o un fragmento del mismo, en el que la secuencia de la sonda incluye una base complementaria a un A mutante en una posición correspondiente a la base 441 de ADNc de NRAS, y en el que la sonda se hibrida débilmente o no se hibrida en absoluto con un polinucleótido que contiene un C de tipo salvaje en esta posición en condiciones de hibridación adecuadas.

Los métodos para diseñar sondas de oligonucleótidos específicas de alelo se conocen en la técnica. Generalmente, estos son polinucleótidos monocatenarios cortos diseñados para hibridar exactamente con una secuencia diana en un conjunto dado de condiciones. Un cebador o sonda para su uso en el presente documento es generalmente un polinucleótido monocatenario corto que se hibrida específicamente con una secuencia diana en un conjunto de condiciones dado. Un cebador o sonda tiene típicamente una longitud de al menos 8 nucleótidos, por ejemplo, al menos 10, 12, 14, 16, 18, 20, 30 nucleótidos, hasta aproximadamente 50 nucleótidos. Una sonda o cebador puede tener, por ejemplo, no más de 15, 20, 25 o 20 nucleótidos de longitud, tal como 8-15, 10-20 o 10-30 nucleótidos de longitud. Una sonda de oligonucleótidos específica de alelo puede ser, por ejemplo, 14-17 pares de bases, como por ejemplo, aproximadamente 17 bases.

Los métodos para detectar una mutación de ácido nucleico en el presente documento también pueden incluir técnicas basadas en secuencias de matriz de chips a gran escala. Southern, EM, Trends in Genetics, 12: 110-115 (marzo de 1996) y Cheng et al., Molecular Diagnosis, 1: 183-200 (septiembre de 1996) cubren una revisión de las diferencias en la aplicación y el desarrollo de matrices de chips. Una metodología adicional para el análisis a gran escala en "chips de A d N" se describe en detalle en Hacia et al., Nature Genetics, 14: 441-447 (1996).

Una mutación de NRAS E63K descrita en el presente documento puede detectarse analizando un cambio de ácido glutámico (E) a lisina (K) en una posición de aminoácido correspondiente al aminoácido E63 en la secuencia de aminoácidos de la proteína de NRAS o un fragmento adecuado de la misma que incluye el aminoácido 63. Esto puede realizarse mediante cualquier método adecuado.

Por ejemplo, la presencia de la proteína de NRAS (o un fragmento de la misma) que tiene la mutación de E63K puede determinarse mediante un ensayo en el que la proteína de NRAS mutada o un fragmento de la misma se detecta mediante la unión de la proteína de NRAS mutada o el fragmento a una pareja de unión específica. La pareja de unión específica se une a la proteína de NRAS mutante o al fragmento que lleva la mutación de E63K y no a la proteína de NRAS o fragmento sin la mutación. La pareja de unión puede estar marcada directa o indirectamente.

Los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos que se unen a la proteína mutante representan ejemplos particularmente adecuados de tales parejas de unión, y estos pueden usarse en inmunoensayos. Los ejemplos adecuados de inmunoensayos de este tipo que pueden usarse en los métodos de la invención incluyen los seleccionados del grupo que consiste en: ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA por sus siglas en inglés); radioinmunoensayo (RIA por sus siglas en inglés); e inmunoensayos multiplex (tales como ensayos Luminex™ producidos por Luminex Corporation). Se puede utilizar la transferencia Western.

Un anticuerpo para detectar específicamente el mutante de NRAS E63K puede ser un anticuerpo obtenido de un hibridoma. Los métodos para obtener anticuerpos a partir de hibridomas se describen en otra parte del presente documento.

Según un aspecto de la divulgación, se proporciona un anticuerpo capaz de unirse selectivamente a un polipéptido EGFR que contiene una lisina en la posición correspondiente a la posición 63 de la proteína de NRAS, donde el anticuerpo se une preferentemente a un polipéptido que tiene lisina en la posición correspondiente a la posición 63 de la proteína de NRAs sobre una que tiene ácido glutámico en dicha posición.

Según otro aspecto de la divulgación, se proporciona un anticuerpo capaz de unirse selectivamente a un polipéptido EGFR que contiene una lisina en la posición correspondiente a la posición 63 de la proteína de NRAS, para su uso en un método para determinar si un paciente tiene o no una porteína de NRAS con una lisina correspondiente a la posición 63 de la proteína de NRAS, en la que el anticuerpo se une preferentemente a un polipéptido que tiene lisina en la posición correspondiente a la posición 63 de la proteína de NRAS sobre uno que tiene ácido glutámico en dicha posición. En un aspecto particular de la divulgación, dicho método se usa para seleccionar al paciente para el tratamiento de combinación con un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento.

Un ensayo puede comprender poner en contacto la pareja de unión específica con una muestra adecuada como cualquiera de las descritas en el presente documento. En algunos ejemplos, las proteínas en general o la proteína de NRAS específicamente pueden extraerse primero de una muestra de paciente, y la pareja de unión específica puede ponerse en contacto con el extracto de proteína. Los métodos para la extracción de la proteína son conocidos en la técnica. La proteína NRAS se puede extraer de una muestra de un paciente por cualquier medio adecuado. Por ejemplo, pueden usarse anticuerpos que se unen específicamente a la proteína NRAS. Los anticuerpos que se unen a NRAS se pueden obtener usando hibridomas usando métodos similares a los descritos anteriormente.

La proteína o proteínas extraídas pueden considerarse aisladas. El término "aislado" como se usa en este documento generalmente significa un componente biológico (como una molécula de ácido nucleico o proteína) que ha sido sustancialmente separado o purificado de otros componentes biológicos en la célula del organismo en el que el componente se encuentra naturalmente, es decir, otros ADN y ARN cromosómicos y extracromosómicos, y proteínas. En un aspecto, las proteínas o los ácidos nucleicos extraídos se han separado hasta el punto de que pueden interactuar con los reactivos en una reacción deseada, por ejemplo, con un cebador o sonda, o con un anticuerpo. Los ácidos nucleicos y las proteínas que se han "aislado" incluyen ácidos nucleicos y proteínas purificados mediante métodos de purificación estándar. El término también abarca ácidos nucleicos y proteínas preparados mediante expresión recombinante en una célula huésped, así como ácidos nucleicos, proteínas y péptidos sintetizados químicamente.

En otro ejemplo, la presencia de la proteína de NRAS (o un fragmento de la misma) que tiene la mutación E63K puede determinarse mediante un ensayo en el que se determina la secuencia de aminoácidos de la proteína de NRAS o el fragmento en el aminoácido 63, por ejemplo, mediante secuenciación de aminoácidos o utilizando medios de escisión específicos de secuencia.

En tal ensayo, la proteína de NRAS o un fragmento de la misma que abarca el aminoácido 63 se aísla típicamente de una muestra de paciente usando los métodos descritos en este documento anteriormente. La proteína aislada o el fragmento pueden luego someterse a secuenciación al menos en la medida en que se determine el aminoácido en la posición 63. En la técnica se conocen métodos adecuados de secuenciación.

Determinación de la presencia de una mutación de NRAS G12V

En ácido nucleico

La presencia de una mutación de NRAS G12V en un paciente puede determinarse detectando la mutación correspondiente en la secuencia de codificación de genes de NRAS.

Los métodos descritos anteriormente en relación con la mutación E63K se aplican mutatis mutandis a la mutación G12V, excepto para la ubicación del sitio de la mutación.

El sitio de mutación de una mutación de ácido nucleico que codifica la mutación de G12V se encuentra típicamente en el codón 12 de la secuencia codificante de NRAS. Esto puede entenderse como un cambio en cualquiera de las bases correspondientes a las bases 288-290 en la secuencia de ADNc de NRAS que da como resultado la codificación de una valina. En particular, una mutación puede ocurrir en una posición correspondiente a la base 289 en el ADNc de NRAS.

La mutación puede ser un cambio de G a T en el codón 12 en la secuencia codificante de NRAS. En particular el cambio puede ser un cambio de G a T en una posición correspondiente a la base 289 en la secuencia de ADNc de NRAS, que ejemplo , un cambio de GGT a GTT en una posición correspondiente a los nucleótidos 288 a 290.

Según un aspecto de la divulgación, se proporciona un oligonucleótido capaz de hibridar selectivamente con una secuencia de ácido nucleico que codifica una valina en la posición correspondiente a la posición 12 de la proteína de NRAS. Como se describe en el presente documento, el oligonucleótido es capaz de hibridarse en condiciones adecuadas con la secuencia de hebra sentido o la secuencia de hebra antisentido de un NRAS-polinucleótido codificante o un fragmento del mismo que incluye un T mutante en la posición correspondiente a la base 289 de ADNc codificante de NRAS pero se hibrida débilmente o no se hibrida en absoluto con un segundo polinucleótido codificante de NRAS que contiene un G de tipo salvaje en esta posición. El oligonucleótido puede contener o estar asociado con un marcador detectable. Como se describe en el presente documento, el oligonucleótido se usa o es adecuado para usarse como cebador en una reacción de PCR. Como se describe en el presente documento, el oligonucleótido se usa o es adecuado para usarse como sonda de hibridación.

Según otro aspecto de la divulgación, se proporciona un oligonucleótido capaz de hibridar selectivamente con una secuencia de ácido nucleico que codifica una valina en la posición correspondiente a la posición 12 de la proteína de NRAS para su uso en un método para determinar si un paciente tiene o no ácido nucleico que codifica la sustitución G12V en la proteína de NRAS.

Según otro aspecto de la divulgación, se proporciona un oligonucleótido capaz de hibridar selectivamente con una secuencia de ácido nucleico que codifica una valina en la posición correspondiente a la posición 12 de la proteína de NRAS para su uso en un método de selección de un paciente para el tratamiento de combinación con un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento.

En proteína

Una mutación de NRAS G12V descrita en el presente documento puede detectarse analizando un cambio de glicina (G) a valina (V) en una posición de aminoácido correspondiente al G12 en la secuencia de aminoácidos de la proteína de NRAS o un fragmento adecuado de la misma que incluye el aminoácido 12. Esto puede realizarse mediante cualquier método adecuado.

La determinación de la presencia de una mutación G12V también puede incluir determinar un aumento en la cantidad de proteína de NRAS.

Según un aspecto de la divulgación, se proporciona un anticuerpo capaz de unirse selectivamente a un polipéptido EGFR que contiene una valina en la posición correspondiente a la posición 12 de la proteína de NRAS, donde el anticuerpo se une preferentemente a un polipéptido que tiene valina en la posición correspondiente a la posición 12 de la proteína de NRAS sobre una que tiene glicina en dicha posición.

Según otro aspecto de la divulgación, se proporciona un anticuerpo capaz de unirse selectivamente a un polipéptido EGFR que contiene una valina en la posición correspondiente a la posición 12 de la proteína de NRAS, para su uso en un método para determinar si un paciente tiene o no una porteína de NRAS con una valina correspondiente en la posición 12 de la proteína de NRAS, en la que el anticuerpo se une preferentemente a un polipéptido que tiene valina en la posición correspondiente a la posición 12 de la proteína de NRAS sobre uno que tiene glicina en dicha posición. En un aspecto particular de la divulgación, dicho método se usa para seleccionar al paciente para el tratamiento de combinación con un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento.

Determinación de la presencia de una mutación de NRAS G12R

En ácido nucleico

La presencia de una mutación de NRAS G12R en un paciente puede determinarse detectando la mutación correspondiente en la secuencia de codificación de genes de NRAS.

El sitio de mutación de una mutación de ácido nucleico que codifica la mutación de G12R se encuentra típicamente en el codón 12 de la secuencia codificante de NRAS. Esto puede entenderse como un cambio en cualquiera de las bases correspondientes a las bases 288-290 en la secuencia de ADNc de NRAS que da como resultado la codificación de una una arginina. En particular, una mutación puede ocurrir en una posición correspondiente a la base 288 en el ADNc de NRAS.

La mutación puede ser un cambio de G a C en el codón 12 en la secuencia codificante de NRAS. En particular el cambio puede ser un cambio de G a C en una posición correspondiente a la base 288 en la secuencia de ADNc de NRAS, por ejemplo , un cambio de GGT a CGT en una posición correspondiente a los nucleótidos 288 a 290.

En proteína

Una mutación de NRAS G12R descrita en el presente documento puede detectarse analizando un cambio de glicina (G) a arginina (R) en una posición de aminoácido correspondiente al G12 en la secuencia de aminoácidos de la proteína de NRAS o un fragmento adecuado de la misma que incluye el aminoácido 12. Esto puede realizarse mediante cualquier método adecuado.

Los métodos descritos anteriormente en relación con la mutación E63K se aplican mutatis mutandis a la mutación G12R, excepto para la ubicación del sitio de la mutación.

La determinación de la presencia de una mutación G12R también puede incluir determinar un aumento en la cantidad de proteína de NRAS.

Tratamientos según la invención

Según la divulgación, los pacientes con cáncer asociado a EGFR que albergan una mutación de activación de NRAS o una ganancia de número de copias del gen NRAS según la invención se puede tratar eficazmente con una combinación de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK. Normalmente, el paciente con cáncer con la mutación de NRAS o ganancia de número de copias del gen de NRAS ya ha recibido, o está recibiendo terapia con un inhibidor de EGFR. El paciente puede mostrar síntomas de resistencia adquirida al tratamiento con un inhibidor de EGFR solo. En esta situación, el inhibidor de EGFR en el tratamiento de combinación puede ser el mismo inhibidor que se usó en el tratamiento del paciente (y al cual el paciente ha adquirido resistencia). Sin embargo, también se prevé un tratamiento en el que el inhibidor de EGFR en el tratamiento de combinación es un inhibidor diferente al utilizado en el tratamiento. En ese caso, el inhibidor de EGFR en el tratamiento de combinación es generalmente de la misma generación o de una generación superior que el inhibidor de EGFR usado en el tratamiento del paciente y al que se ha adquirido resistencia.

Como se describe en este documento, después de determinar la presencia de una mutación de NRAS E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S o G12C o una ganancia de número de copias del gen de NRAS en un paciente, la divulgación también puede proporcionar una terapia de primera línea para el cáncer asociado a EGFR en un paciente que aún no ha recibido tratamiento con un inhibidor de EGFR. En esta terapia de primera línea, se administra al paciente una combinación de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK para retrasar o prevenir el desarrollo de resistencia adquirida al inhibidor de EGFR (por ejemplo, por la aparición de una mutación de NRAS como se describe en este documento).

En una realización, el inhibidor de EGFR se selecciona de AZD9291 y CO1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera.

En una realización adicional, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En una realización adicional, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o CO1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera, y el inhibidor de MEK es selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otra realización, después de determinar la presencia de una mutación de activación de NRAS E63K o G12V o una ganancia de número de copias del gen de NRAs en un paciente, la invención también puede proporcionar una terapia de primera línea para el cáncer asociado a EGFR en un paciente que aún no ha recibido tratamiento con un inhibidor de EGFR. En esta terapia de primera línea, se administra al paciente una combinación de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK para retrasar o prevenir el desarrollo de resistencia adquirida al inhibidor de EGFR (por ejemplo, por la aparición de una mutación de activación de NRAS como se describe en este documento).

En los presentes métodos, se administra una combinación de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK a un paciente en una cantidad terapéuticamente eficaz.

Se entenderá que la referencia en el presente documento a un tratamiento de combinación que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK abarca una combinación que comprende uno o más inhibidores de EGFR y uno o más inhibidores de MEK, y que una combinación de, o una combinación que comprende, un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK abarca una combinación de uno o más inhibidores de EGFR y / o uno o más inhibidores de MEK. Las combinaciones específicas de inhibidores de EGFR e inhibidores de MEK se consideran en otra parte de la especificación.

Inhibidores de MEK

Un inhibidor de MEK como se usa en este documento generalmente tiene una actividad que inhibe la ruta Ras / Raf / MEK / ERK. Un inhibidor puede actuar sobre un componente en cualquier etapa de la ruta, actuando para inhibir, por ejemplo, la expresión y / o la actividad de un componente de la ruta.

Un inhibidor de MEK puede ser, por ejemplo, un compuesto de bajo peso molecular.

Un inhibidor de MEK puede inhibir la expresión génica, por ejemplo, interfiriendo con la estabilidad o traducción del ARNm. Un inhibidor de MEK puede seleccionarse de un oligonucleótido antisentido, ARN de interferencia pequeño (ARNip), que a veces se conoce como ARN de interferencia corto o ARN silenciador, o ARN en horquilla corta (shARN), que a veces se conoce como ARN en horquilla pequeña. Tal inhibidor de MEK puede inhibir la expresión del gen mek1 y / o mek2, por ejemplo interfiriendo con la estabilidad o traducción del ARNm. Normalmente, un inhibidor reduce la expresión o la actividad en al menos una cantidad detectable en un ensayo adecuado. Un inhibidor puede, por ejemplo, reducir la expresión o actividad en al menos un 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 o al menos un 90%.

Los ejemplos adecuados de inhibidores de MEK se consideran en las siguientes páginas de esta descripción. Sin limitación, los inhibidores de MEK adecuados para su uso en el contexto de la presente invención incluyen los seleccionados del grupo que consiste en: selumetinib; trametinib; MEK-162; y cobimetinib; así como las sales farmacéuticamente aceptables de estos inhibidores.

Selumetinib

La estructura química del Selumetinib es:

También se le conoce por el nombre químico: Ácido (2-hidroxi-etoxi) -amida)' '(6- (4-bromo-2-cloro-fenilamino) -7-fluoro-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico. Igualmente, se le puede conocer por el nombre químico: '5 -[(4-bromo-2-clorofenil) amino] -4-fluoro-N-(2-hidroxietoxi) -1-metil-1H-bencimidazol-6-carboxamida'.

Selumetinib también se puede proporcionar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, tal como una sal de hidrogenosulfato; es decir, hidrogenosulfato de selumetinib. (es decir, 1: 1 fármaco: H²SO⁴). En una realización adecuada, un inhibidor de MEK puede comprender selumetinib o sus sales farmacéuticamente aceptables tales como la sal de hidrogenosulfato.

Trametinib

La estructura química del Trametinib es:

También se le conoce por el nombre químico: N-(3- {3-ciclopropil-5 -[(2-fluoro-4-yodofenil) amino] -6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidropirido [ 4 , 3-d] pirimidin-1 (2h ) -il} fenil) acetamida.

El trametinib también se puede proporcionar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable y, a menos que el contexto requiera lo contrario, las referencias a trametinib en la presente descripción también deben considerarse para abarcar tales sales farmacéuticamente aceptables.

MEK-162

La estructura química del MEK-162 es:

También se le conoce por el nombre químico: 5 -[(4-bromo-2-fluorofenil) amino] -4-fluoro-N-(2-hidroxietoxi) -1-metil-1H-bencimidazol-6-carboxamida. MEK-162 también se puede proporcionar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable y, a menos que el contexto requiera lo contrario, las referencias a MEK-162 en la presente descripción también deben considerarse para abarcar tales sales farmacéuticamente aceptables.

Cobimetinib

La estructura química del cobimetinib es:

El cobimetinib también se le conoce por el nombre químico: {3,4-difluoro-2 - [(2-fluoro-4-yodofenil) amino] fenil} {3-hidroxi-3 - [(2S) -piperidin-2-il] azetidin-1-il} metanona. Cobimetinib también se puede proporcionar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, tal como una sal de fumarato de cobimetinib (2: 1 fármaco: ácido fumárico) A menos que el contexto requiera lo contrario, las referencias a cobimetinib en la presente divulgación también deben considerarse para abarcar sales farmacéuticamente aceptables tales como la sal fumarato.

En una realización adecuada, un inhibidor de MEK puede inhibir la actividad tanto de MEK1 como de MEK2 (un denominado "inhibidor de MEK1 / 2"). En un aspecto, un inhibidor de MEK puede inhibir la expresión y / o actividad de una proteína MEK1 o MEK2.

MEK1

MEK1, como se usa en este documento, se refiere a proteína quinasa quinasa 1 activada por mitógenos.

MEK1 puede ser de cualquier especie correspondiente a la especie a tratar. En un aspecto,

MEK1 es MEK1 humano.

Un gen de MEK1 humano (de tipo salvaje) se describe en Gene ID: 5604. El gen mek1 humano de tipo salvaje tiene típicamente un producto de expresión de ARNm con una secuencia correspondiente a la secuencia de ADNc de MEK1 en el número de acceso de GenBank NM_002755.3, y un producto de expresión de proteína que tiene la secuencia de aminoácidos de la proteína de MEK1 en UniProtKB / Swiss-Prot Q02750. En la secuencia de ADNc de MEK1 en el número de acceso de GenBank NM_002755, la secuencia de codificación de la proteína se muestra en los nucleótidos 476-1657. La secuencia codificante consensuada también se presenta en la base de datos CCDS con el número de acceso

CCDS10216.1

Referencia en el presente documento al gen mek1 (gen MEK1), ARNm, ADNc o proteína de MEK1 pueden referirse a este gen humano, ARNm o la correspondiente secuencia de ADNc, o proteína.

En algunos casos, MEK1 puede referirse a una variante de cualquiera de los anteriores, tales como una variante de origen natural.

Lo anterior se aplica mutatis mutandis para MEK1 de una especie no humana. Por ejemplo, la referencia en el presente documento al gen mek1, ARNm, ADNc o proteína de MEK1 puede referirse a homólogos de especies del gen humano anteriore, ARNm o proteína.

MEK2

MEK2, como se usa en este documento, se refiere a proteína quinasa quinasa 2 activada por mitógenos.

MEK2 puede ser de cualquier especie correspondiente a la especie a tratar. En un aspecto,

MEK2 es MEK2 humano.

Un gen de MEK2 humano (de tipo salvaje) se describe en Gene ID: 5605. El gen mek2 humano de tipo salvaje tiene típicamente un producto de expresión de ARNm con la secuencia correspondiente la secuencia de ADNc de MEK2 en el número de acceso de GenBank NM_030662.3, y un producto de expresión de proteína que tiene la secuencia de aminoácidos de la proteína de MEK2 en UniProtKB / Swiss-Prot P36507. En la secuencia de ADNc de MEK2 en el número de acceso de GenBank NM_030662, la secuencia de codificación de la proteína se muestra en los nucleótidos 255-1457. La secuencia codificante consensuada también se presenta en la base de datos CCDS con el número de acceso CCDS12120.1.

Referencia en el presente documento al gen mek2 (gen MEK2), ARNm, ADNc o proteína de MEK2 pueden referirse a este gen humano, ARNm o la correspondiente secuencia de ADNc, o proteína.

En algunos casos, MEK2 puede referirse a una variante de cualquiera de los anteriores, tales como una variante de origen natural.

Lo anterior se aplica mutatis mutandis para MEK2 de una especie no humana. Por ejemplo, la referencia en el presente documento al gen mek2, ARNm, ADNc o proteína de MEK2 puede referirse a homólogos de especies del gen humano anteriore, ARNm o proteína.

Inhibidores de MEK1 y MEK2

Un inhibidor de MEK puede inhibir cualquier actividad adecuada de MEK1 o MEK2, por ejemplo, actividad de proteína quinasa. La inhibición de la actividad de la proteína quinasa se puede determinar en un ensayo adecuado, por ejemplo, como se describe en Yeh et al. Clin Cancer Res 1 de marzo de 2007 13; 1576.

Un inhibidor de MEK puede seleccionarse, por ejemplo, de cualquiera de un inhibidor de MEK competitivo con ATP, un inhibidor de MEK no competitivo con ATP o un inhibidor de m Ek no competitivo con ATP.

Los inhibidores de MEK adecuados, que inhiben la actividad de MEK1 y / o MEK2 incluyen selumetinib.

Combinaciones específicas de inhibidores de EGFR e inhibidores de MEK para su uso en pacientes cuyos tumores contienen una mutación de NRAS E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S o G12C o una ganancia de número de copias del gen de NRAS.

En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el gefitinib del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el selumetinib del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el gefitinib del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el trametinib del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el gefitinib del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el MEK-162 del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el gefitinib del t K i de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el cobimetinib del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el erlotinib del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el selumetinib del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el erlotinib del t K i de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el trametinib del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el erlotinib del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el MEK-162 del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el erlotinib del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el cobimetinib del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el Afatinib del t Ki de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el selumetinib del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el Afatinib del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el trametinib del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el afatinib del TKI de EGFR

(o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el inhibidor de MEK, MEK-162 (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el Afatinib del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el Cobimetinib del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el AZD9291 del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el selumetinib del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el AZD9291 del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el trametinib del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el AZD9291 del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el MEK-162 del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el AZD9291 del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el Cobimetinib del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo).

En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el CO-1686 del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el selumetinib del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el CO-1686 del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el trametinib del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el CO-1686 del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el MEK-162 del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo). En una realización adecuada, un tratamiento de combinación puede comprender el CO-1686 del TKI de EGFR (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y el Cobimetinib del inhibidor de MEK (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo).

Inhibidores de NRAS

Un inhibidor de MEK puede inhibir la actividad asociada con la señalización de NRAS, ya que MEK1 y / o MEK2 son componentes corriente abajo de la ruta de señalización de NRAS.

Por ejemplo, un inhibidor de MEK puede inhibir la expresión del gen de NRAS, por ejemplo interfiriendo con la estabilidad o traducción del ARNm. Ejemplos de ARNip que se dirigen a la expresión del gen NRAS se proporcionan en los Ejemplos.

Otros agentes

Se puede administrar una combinación de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK de acuerdo con la invención a un paciente con cáncer como única terapia. Alternativamente, el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK se pueden administrar en combinación con cirugía o radioterapia adicional o un agente quimioterapéutica adicional o un anticuerpo terapéutico.

Administración combinada

Según la invención, los componentes de un tratamiento de combinación se pueden administrar en combinación o en conjunción entre sí. Un tratamiento de combinación puede tomar la forma de una preparación combinada, por ejemplo, una preparación combinada de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK. Una combinación puede comprender formulaciones separadas de uno o más de los componentes, por ejemplo, formulaciones separadas de inhibidor de EGFR e inhibidor de MEK. Los componentes en una combinación (por ejemplo, formulaciones separadas) se pueden administrar secuencialmente, por separado y / o simultáneamente como se describe en el presente documento en relación con los métodos de tratamiento de combinación. Así, por ejemplo, se puede administrar un inhibidor de EGFR por separado, secuencial o simultáneamente con un inhibidor de MEK.

En una realización, los componentes se administran simultáneamente (opcionalmente de forma repetida). En una realización, los componentes se administran secuencialmente (opcionalmente de forma repetida). En una realización, los componentes se administran por separado (opcionalmente de forma repetida).

El experto en la materia entenderá que cuando se administran de forma secuencial o en serie formulaciones separadas de los agentes en una combinación, esto podría ser en la administración de los agentes en cualquier orden. Por tanto, cuando un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK se administran secuencialmente o en serie, esto podría ser la administración de un inhibidor de EGFR seguida de un inhibidor de MEK, o la administración de un inhibidor de MEK seguida de un inhibidor de EGFR.

En una realización, se pueden administrar formulaciones separadas de agentes en patrones de dosificación alternativos.

Cuando la administración de formulaciones separadas es secuencial o separada, el retraso en la administración de la segunda (o posterior) formulación no debe ser tal que pierda el efecto terapéutico beneficioso del tratamiento de combinación.

Productos combinados

Los componentes de un tratamiento de combinación descritos en este documento se pueden proporcionar como un producto de combinación.

Un producto combinado normalmente comprende:

(a) un inhibidor de EGFR; y

(b) un inhibidor de MEK; como se describe en este documento.

El producto de combinación es útil para tratar el cáncer asociado a EGFR, mediante un método descrito en el presente documento.

Un producto de combinación puede comprender

(a) un inhibidor de EGFR; y

(b) un inhibidor de MEK;

en asociación con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.

Un producto de combinación, como se define aquí, puede estar en forma de una preparación combinada de los componentes. Por tanto, un producto de combinación puede estar en forma de una preparación combinada de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK.

Un producto de combinación, como se define aquí, puede comprender un kit de piezas que comprenden formulaciones separadas de cada uno de los agentes en el producto. Por tanto, el kit de piezas puede comprender formulaciones separadas de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento.

Un producto de combinación puede comprender un kit de piezas que comprende

(a) un inhibidor de EGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable;

y:

(b) un inhibidor de MEK o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable;

en el que los componentes se proporcionan en una forma adecuada para la administración secuencial, separada y / o simultánea a un paciente con cáncer cuyas células tumorales comprenden una mutación de NRAS E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S o G12C.

En realizaciones adicionales, las células tumorales comprenden una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R.

Como se describe en el presente documento, las células tumorales comprenden una mutación de NRAS seleccionada entre G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

En una realización adicional, el inhibidor de EGFR se selecciona de AZD9291 y CO1686; o una sal farmacéuticamente aceptable misma.

En realizaciones adicionales, las células tumorales comprenden una mutación de NRAS E63K, G12V o G12R.

En una realización, las células tumorales comprenden una mutación de NRAS G12R.

Un producto de combinación puede comprender un kit de partes que comprende

(a) un inhibidor de EGFR, en asociación con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable; y:

(b) un inhibidor de MEK, en asociación con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable; en el que los componentes se proporcionan en una forma adecuada para la administración secuencial, separada y / o simultánea a un paciente con cáncer cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS o la proteína de NRAS con la mutación de activación de NRAS E63K y / o G12V.

El kit de piezas puede comprender:

un primer recipiente que comprende el primero de los componentes del producto de combinación, en asociación con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable; y

un segundo o un recipiente posterior que comprende el segundo o cualquiera de los componentes siguientes en el producto de combinación, respectivamente, cada componente en asociación con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable, y

un medio del contenedor para contener dicho primer y segundo y cualquier contenedor posterior.

Un producto de combinación, como se define en el presente documento, puede comprender una composición farmacéutica que comprende:

(a) un inhibidor de EGFR; y

(b) un inhibidor de MEK.

Una composición farmáceutica generalmente comprende un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.

Un producto de combinación uede comprender una composición farmacéutica que comprende:

(a) un inhibidor de EGFR, en asociación con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable; y

(b) un inhibidor de MEK, en asociación con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.

Un producto de combinación de la invención puede comprender más de un inhibidor de EGFR y / o más de un inhibidor de MEK. Un producto de combinación puede comprender uno o más de otros agentes activos, seleccionados de los descritos en el presente documento.

Un kit de piezas como se describe en el presente documento puede comprender además instrucciones para administrar los componentes de forma secuencial, separada y / o simultánea para el tratamiento del cáncer.

En una realización, un producto de combinación como se describe en el presente documento comprende además instrucciones que indican que el producto, como se define en el presente documento, se puede usar para tratar el cáncer asociado a EGFR mediante un método descrito en el presente documento. Un producto puede comprender instrucciones que indiquen que el producto es para uso en el tratamiento de un cáncer como se describe en este documento en un paciente con cáncer como se describe en este documento. Por ejemplo, un producto puede incluir instrucciones que indiquen que el producto se puede usar para tratar el cáncer en un paciente que ha recibido o está recibiendo terapia con un inhibidor de EGFR, y cuyo resultado es positivo para una mutación de NRAS o una ganancia de número de copias del gen de NRAS según la invención. En otro ejemplo, un producto puede incluir instrucciones que indiquen que el producto puede usarse para tratar el cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS o proteína de NRAS con mutación de activación de NRAS E63K y / o G12V, como terapia de primera línea. En otro ejemplo, un producto puede incluir instrucciones que indiquen que el producto puede usarse para tratar el cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de NRAS G12R. En una realización, un producto incluye instrucciones que indican que el producto puede usarse para tratar cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de NRAS E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S o G12C.

Métodos médicos y usos médicos.

En un aspecto, la invención se refiere a un producto de combinación, como se define en el presente documento, que comprende

(a) un inhibidor de EGFR; y

(b) un inhibidor de MEK;

para uso secuencial, por separado y / o simultáneamente en cualquiera de los métodos descritos en el presente documento.

Se describe además un producto de combinación que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S. y G12C; o una ganancia de número de copias del gen de NRAS; en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK están cada uno en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable, y en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK se proporcionan en una forma adecuada para la administración separada, simultánea y / o secuencial.

Se proporciona además un producto de combinación que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R; o una ganancia de número de copias del gen de NRAS; en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK están cada uno en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable, y en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK se proporcionan en una forma adecuada para la administración separada, simultánea y / o secuencial.

En realizaciones adicionales el inhibidor de EGFR se selecciona de AZD9291 y CO1686; o una sal farmacéuticamente aceptable misma.

En realizaciones adicionales, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En realizaciones adicionales, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o CO1686; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el inhibidor de MEK es selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En realizaciones adicionales, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el inhibidor de MEK es selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Se proporciona además un producto de combinación que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de activación de NRAS seleccionada entre del grupo que consiste en: una mutación de NRAS E63K y una mutación de NRAS G12V; o una ganancia de número de copias del gen de NRAS; en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK están cada uno en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable, y en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK se proporcionan en una forma adecuada para la administración separada, simultánea y / o secuencial.

En un aspecto adicional, la divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK (cada uno opcionalmente en forma de una sal farmacéuticamente aceptable) en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; o una ganancia de número de copias NRAS.

En un aspecto adicional, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK (cada uno opcionalmente en forma de una sal farmacéuticamente aceptable) en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R, correspondiente a la posición en la proteína de NRAS; o una ganancia de número de copias de NRAS.

En un aspecto adicional, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de activación de NRAS seleccionada del grupo que consiste en: E63K y G12V correspondientes a la posición en la proteína de NRAS; o una ganancia de número de copias NRAS.

La divulgación también se refiere al uso de un producto de combinación o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, o una ganancia de número de copias de NRAS. Por consiguiente, la divulgación se refiere al uso de un producto de combinación o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS, donde la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, o una ganancia de número de copias de NRAS.

La divulgación también se refiere al uso de un producto de combinación o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

Por consiguiente, la divulgación se refiere al uso de un producto de combinación o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS, donde la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C. Como se describe en el presente documento, la mutación de NRAS se selecciona entre G12R, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C. En una realización adicional, el cáncer con mutación de NRAS es cáncer con mutación de NRAS G12R. En una realización adicional, el cáncer con mutación de NRAS tiene una ganancia de número de copias de NRAS.

La invención también se refiere al uso de un producto de combinación o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R.

Por consiguiente, la invención se refiere al uso de un producto de combinación o composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS donde la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V y G12R. Como se describe en el presente documento, la mutación de NRAS se selecciona entre G12R, G12A, G12d , G12S y G12C. Como se divulga en el presente documento, el cáncer con mutación de NRAS tiene una ganancia de número de copias de NRAS. La invención también se refiere al uso de un producto de combinación o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de activación de NRAS seleccionada entre del grupo que consiste en: una mutación de NRAS E63K y una mutación de NRAS G12V, o una ganancia de número de copias de NRAS.

La divulgación también se refiere a un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para un uso combinado en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; o una ganancia de número de copias de NRAS.

Por consiguiente, la divulgación se refiere a un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para el uso combinado en el tratamiento de cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, o una ganancia de número de copias de NRAS.

La divulgación también se refiere a un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para uso combinado en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C. De esta forma, la divulgación se refiere a un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para su uso combinado en el tratamiento de cáncer con mutación de NRAS, en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

La invención también se refiere a un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para un uso combinado en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R; o una ganancia de número de copias de NRAS.

Por consiguiente, la invención se refiere a un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para el uso combinado en el tratamiento de cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V y G12R, o una ganancia de número de copias de NRAS.

En realizaciones adicionales, el cáncer con mutación de NRAS es cáncer con mutación de NRAS G12R.

La invención también se refiere a un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para un uso combinado en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de activación de NRAS seleccionada del grupo que consiste en: una mutación de NRAS E63K y una mutación de NRAS G12V; o una ganancia de número de copias de NRAS.

También se divulga un inhibidor de EGFR para usarse en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidores de MEK.

Por consiguiente, se describe un inhibidor de EGFR para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK.

También se describe un inhibidor de EGFR para su uso en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; y en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK.

Por consiguiente, se describe un inhibidor de EGFR para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; y en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK.

También se proporcionan un inhibidor de EGFR para usarse en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidores de MEK.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V y G12R o una ganancia de número de copias de NRAS y en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK.

También se proporciona un inhibidor de EGFR para su uso en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R; y en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK. Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V y G12R; y en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK.

En realizaciones adicionales el inhibidor de EGFR se selecciona de AZD9291 y CO1686; o una sal farmacéuticamente aceptable misma. En realizaciones adicionales, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En realizaciones adicionales, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o CO1686; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el inhibidor de MEK es selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En realizaciones adicionales, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el inhibidor de MEK es selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. También se proporcionan un inhibidor de EGFR para usarse en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de activación de NRAS seleccionada entre del grupo que consiste en: una mutación de NRAS E63K y una mutación de NRAS G12V; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK.

También se divulga un inhibidor de MEK para usarse en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de EGFR.

Por consiguiente, se describe un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de EGFR.

También se describe un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; y en el que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de EGFR.

Por consiguiente, se describe un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; y en el que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de MEK.

También se proporcionan un inhibidor de MEK para usarse en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de EGFR.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K; G12V y G12R; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de EGFR.

También se proporciona un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R, y en el que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de EGFR. Por consiguiente se proporciona un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V y G12R; y en el que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de EGFR.

También se proporciona un inhibidor de MEK para usarse en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de activación de NRAS seleccionada entre del grupo que consiste en: una mutación de NRAS E63K y una mutación de NRAS G12V; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de EGFR.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR.

Por consiguiente, la divulgación se refiere al uso de un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR.

Por consiguiente, la divulgación se refiere al uso de un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR.

La invención también se refiere al uso de un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR.

Por consiguiente, la invención se refiere al uso de un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V y G12R; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR.

La invención también se refiere al uso de un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R; y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR.

Por consiguiente, la invención se refiere al uso de un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR.

La invención también se refiere al uso de un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de activación de NRAS seleccionada del grupo que consiste en: una mutación de NRAS E63K y una mutación de NRAS G12V; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR.

El medicamento (por ejemplo, un producto de combinación como se describe en este documento) puede comprender el inhibidor de MEK y el inhibidor de EGFR.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK.

Por consiguiente, la divulgación se refiere al uso de un inhibidor de EGFR para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK.

Por consiguiente, la divulgación se refiere al uso de un inhibidor de EGFR para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK.

La invención también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK.

Por consiguiente, la invención se refiere al uso de un inhibidor de EGFR para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V y G12R; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK.

La invención también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R; y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK. Por consiguiente, la invención se refiere al uso de un inhibidor de EGFR para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V y G12R, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK.

La invención también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de activación de NRAS seleccionada del grupo que consiste en: una mutación de NRAS E63K y una mutación de NRAS G12V; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con el inhibidor de MEK.

Por consiguiente, la divulgación se refiere al uso de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con el inhibidor de MEK.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con el inhibidor de m Ek .

Por consiguiente, la divulgación se refiere al uso de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con el inhibidor de MEK.

La invención también se refiere al uso de un inhibidor de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con el inhibidor de MEK.

Por consiguiente, la invención se refiere al uso de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V y G12R; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con el inhibidor de MEK.

La invención también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R; y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con el inhibidor de MEK.

Por consiguiente, la invención se refiere al uso de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V y G12R; y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con el inhibidor de MEK.

La invención también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el paciente tiene una mutación de activación de NRAS seleccionada del grupo que consiste en: una mutación de NRAS E63K y una mutación de NRAS G12V; o una ganancia de número de copias de NRAS, y en el que el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con el inhibidor de MEK.

El medicamento puede ser un producto de combinación como se describe en este documento.

La divulgación también proporciona un producto de combinación que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK están cada uno en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable, y en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK se proporcionan en una forma adecuada para la administración separada, simultánea y / o secuencial a un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS, o mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

En consecuencia, la divulgación proporciona un producto de combinación que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS, en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK están cada uno en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable, y en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK se proporcionan en una forma que es adecuada para la administración separada, simultánea y / o secuencial y en el que la mutación NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, o una ganancia de número de copias del gen de NRAS.

La divulgación también proporciona un producto de combinación que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK están cada uno en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable, y en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK se proporcionan en una forma adecuada para la administración separada, simultánea y / o secuencial a un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C. En consecuencia, la divulgación proporciona un producto de combinación que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS, en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK están cada uno en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable, y en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK se proporcionan en una forma adecuada para la administración separada, simultánea y / o secuencial y en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

La invención también proporciona un producto de combinación que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK están cada uno en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable, y en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK se proporcionan en una forma adecuada para la administración separada, simultánea y / o secuencial a un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS, o mutación de la proteína de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R. En consecuencia, la invención proporciona un producto de combinación que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS, en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK están cada uno en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable, y en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK se proporcionan en una forma que es adecuada para la administración separada, simultánea y / o secuencia! y en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V y G12R, o una ganancia de número de copias del gen de NRAS.

La invención también proporciona un producto de combinación que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK están cada uno en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable, y en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK se proporcionan en una forma adecuada para la administración separada, simultánea y / o secuencial a un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R.

En consecuencia, la invención proporciona un producto de combinación que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS, en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK están cada uno en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable, y en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK se proporcionan en una forma adecuada para la administración separada, simultánea y / o secuencial y en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V y G12R.

La invención también proporciona un producto de combinación que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente, en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK están cada uno en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable, y en el que el inhibidor de EGFR y el inhibidor de MEK se proporcionan en una forma adecuada para la administración separada, simultánea y / o secuencial a un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS o la proteína de NRAS con una mutación de activación de NRAS E63K y/ o G12V.

La divulgación también se refiere a una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK en asociación con un vehículo o diluyente adyuvantes farmacéuticamente aceptables como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS, o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C. Por consiguiente, la divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK en asociación con un vehículo o diluyentes adyuvantes farmacéuticamente aceptables como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS donde la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, o una ganancia de número de copias del gen de NRAS.

La divulgación además se refiere a una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente, cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

Por consiguiente, la divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK en asociación con un vehículo o diluyente adyuvantes farmacéuticamente aceptables como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación NRAS donde la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

La invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK en asociación con un vehículo o diluyente adyuvantes farmacéuticamente aceptables como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS, o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V y G12R.

Por consiguiente, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK en asociación con un vehículo o diluyentes adyuvantes farmacéuticamente aceptables como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS donde la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V y G12R, o una ganancia de número de copias del gen de NRAS.

La invención además se refiere a una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK en asociación con un vehículo o diluyente adyuvante farmacéuticamente aceptable como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente, cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V y G12R. Por consiguiente, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK en asociación con un vehículo o diluyente adyuvantes farmacéuticamente aceptables como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación NRAS donde la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V y G12R.

En realizaciones adicionales, el cáncer con mutación de NRAS es cáncer con mutación de NRAS G12R,

La invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK en asociación con un vehículo o diluyente adyuvantes farmacéuticamente aceptables como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS o una proteína de NRAS con mutación de activación de NRAS E63K y / o G12V.

Aún más, la divulgación se refiere al uso de un producto de combinación o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS, o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

Por consiguiente, se divulga el uso de un producto de combinación o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS, donde la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, o una ganancia de número de copias del gen de NRAS.

Aún más, la divulgación se refiere al uso de un producto de combinación o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

Por consiguiente, se divulga el uso de un producto de combinación o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en donde la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

Aún más, la invención se refiere al uso de un producto de combinación o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS, o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V y G12R.

Por consiguiente, se proporciona el uso de un producto de combinación o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de

cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación NRAS se selecciona entre E63K, G12V y G12R, o una ganancia del número de copias del gen de NRAS.

Aún más, la invención se refiere al uso de un producto de combinación o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V y G12R.

Por consiguiente, se proporciona el uso de un producto de combinación o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en donde la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V y G12R.

Aún más, la invención se refiere al uso de un producto de combinación o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS o una proteína de NRAS con mutación de activación de NRAS E63K y / o G12V.

La divulgación también se refiere a un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para su uso en combinación en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS, o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

La divulgación también se refiere a un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para su uso combinado en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C. Por consiguiente, la divulgación se refiere a un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para el uso combinado en el tratamiento de cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C. La invención también se refiere a un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para su uso combinado en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS, o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V y G12R.

Por consiguiente, la invención se refiere a un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para el uso combinado en el tratamiento de cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V y G12R, o una ganancia de número de copias del gen de NRAs .

La invención también se refiere a un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para un uso combinado en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada entre E63K, G12v y G12R.

Por consiguiente, la invención se refiere a un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para el uso combinado en el tratamiento de cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V y G12R. Como se describe en el presente documento, la mutación de NRAS se selecciona entre G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

La invención también se refiere a un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para su uso combinado en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS o la proteína de NRAS con mutación de activación de NRAS E63K y / o G12V.

También se describe un inhibidor de EGFR para su uso en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK a un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12s y G12C. Por consiguiente, se describe un inhibidor de EGFR para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación en NRAS en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK y la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, o una ganancia de número de copias del gen NRAS.

También se describe un inhibidor de EGFR para su uso en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK a un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

Por consiguiente, se describe un inhibidor de EGFR para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK y la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C.

También se proporciona un inhibidor de EGFR para su uso en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK a un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V y G12R.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK y la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V y G12R, o una ganancia de número de copias del gen de NRAS.

También se proporciona un inhibidor de EGFR para su uso en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK a un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y G12R.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK y la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V y G12R.

También se proporciona un inhibidor de EGFR para su uso en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente en el que el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK a un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS o una proteína de NRAS con mutación de activación de NRAS E63K y / o G12V.

También se describe un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, en el que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de EGFR.

Por consiguiente, se describe un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; o una ganancia de número de copias del gen de NRAS, y en el que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de EGFR.

También se describe un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, y en el que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de EGFR.

Por consiguiente, se describe un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, y en el que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de MEK.

También se proporciona un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V y G12R, en la que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de EGFR.

también proporciona un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada entre E63K, G12V y

G12R, en el que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de EGFR. Por consiguiente se proporciona un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona entre E63k , G12V y G12R; y en el que el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de EGFR.

También se proporciona un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS o una proteína de NRAS con mutación de activación de NRAS E63K y / o G12V, donde el inhibidor de MEK se administra en combinación con un inhibidor de EGFR.

La divulgación También se refiere al uso de un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS , o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, donde el tratamiento comprende administrar el inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; donde el tratamiento comprende administrar el inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de MEK para su la fabricación de un medicamento para tratar cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS, o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V y G12R, donde el tratamiento comprende administrar el inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V y G12R; donde el tratamiento comprende administrar el inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR.

Como se describe en el presente documento, la mutación de NRAS es G12R.

Como se describe en el presente documento, el inhibidor de EGFR se selecciona de AZD9291 y CO1686; o una sal farmacéuticamente aceptable misma.

Como se describe en el presente documento, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Como se describe en el presente documento, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o CO1686; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el inhibidor de MEK es selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Como se describe en el presente documento, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el inhibidor de MEK es selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para tratar cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS o una proteína de NRAS con mutación de activación de NRAS E63K y / o G12V, donde el tratamiento comprende administrar el inhibidor de MEK en combinación con un inhibidor de EGFR.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS, o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, donde el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de EGFR.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; donde el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR para la fabricación de un medicamento para tratar cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS, o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V y G12R, donde el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V y G12R; donde el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK.

Como se describe en el presente documento, la mutación de NRAS es G12R.

Como se describe en el presente documento, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el inhibidor de MEK es selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR para la fabricación de un medicamento para tratar cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS o una proteína de NRAS con mutación de activación de NRAS E63K y / o G12V, donde el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR y un inhibider de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS, o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, donde el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con el inhibidor de MEK.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; donde el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con el inhibidor de MEK.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para tratar cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS, o una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V y G12R, donde el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con el inhibidor de MEK.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una mutación de la proteína de NRAS seleccionada de E63K, G12V y G12R; donde el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con el inhibidor de MEK.

Como se describe en el presente documento, la mutación de NRAS es G12R.

Como se describe en el presente documento, el inhibidor de EGFR es AZD9291 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el inhibidor de MEK es selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La divulgación también se refiere al uso de un inhibidor de EGFR y un inhibidor de MEK para la fabricación de un medicamento para tratar cáncer asociado a EGFR en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS o una proteína de NRAS con mutación de activación de NRAS E63K y / o G12V, donde el tratamiento comprende administrar el inhibidor de EGFR en combinación con el inhibidor de MEK.

Otras realizaciones

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS E63K.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS G12V.

En una realización adicional, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS G12R.

En cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento, el inhibidor de EGFR se puede seleccionar entre gefitinib, erlotinib, afatinib, dacomitinib, AZD9291 y CO-1686 (donde todo lo mencionado anteriormente puede estar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, siempre que haya al menos un grupo funcional que permita que se formen tales sales).

En cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento, el inhibidor de EGFR se puede seleccionar entre gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291 y CO-1686 (donde todo lo mencionado anteriormente puede estar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, siempre que haya al menos un grupo funcional que permita que se formen tales sales).

Por consiguiente, se describe un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C; y en el que el inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291 y CO-1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En una realización la mutación de NRAS es G12R.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona de E63k , G12V y G12R; y en el que el inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291 y CO-1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Por consiguiente, se describe un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona de G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, en el que el inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291 y CO-1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS G12R, en el que el inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291 y CO-1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de un número de copias del gen de NRAS, en el que el inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291 y CO-1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS E63K, en el que el inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291 y CO-1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS G12V, en el que el inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291 y CO-1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento el inhibidor de MEK se puede seleccionar entre Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib (donde todo lo mencionado anteriormente puede estar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, siempre que haya al menos grupo funcional que permita que se formen tales sales).

Por consiguiente, se describe un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS, en el que la mutación de NRAS se selecciona de e63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, y en el que el inhibidor de MEK se selecciona de Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Por consiguiente, se describe un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS, en el que la mutación de NRAS se selecciona de G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, en el que el inhibidor de MEK se selecciona de Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS, en el que la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V y G12R; y en el que el inhibidor de MEK se selecciona de Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS G12R, en el que el inhibidor de MEK se selecciona de Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS E63K, en el que el inhibidor de MEK se selecciona de Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS G12V, en el que el inhibidor de MEK se selecciona de Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Por consiguiente se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS G12R, en el que el inhibidor de MEK se selecciona de Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Como se divulga en el presente documento, se proporciona el inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, en el que el inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291 y CO-1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, y en el que el inhibidor de MEK se selecciona de Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Como se describe en el presente documento, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona de G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, en el que el inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291 y CO-1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, y en el que el inhibidor de MEK se selecciona de Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En una realización se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS en el que la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V y G12R, en el que el inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib, Erlotinib, Afatinib, AZD9291 y CO-1686; o una sal farmacéuticamente de los mismos, y en el que el inhibidor de MEK se selecciona de Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS E63K y / o G12V, en el que la Inhibidor de EGFR se selecciona de de gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291 y CO-1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, y en el que el inhibidor de MEK se selecciona de Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Por consiguiente se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de un número de copias del gen de NRAS, en el que el inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291 y CO-1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, y en el que el inhibidor de MEK se selecciona de Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS E63K, en el que el inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib, Erlotinib, Afatinib, AZD9291 y CO-1686; o una sal farmacéuticamente de los mismos, y en el que el inhibidor de MEK se selecciona de Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS G12V, en el que el inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib, Erlotinib, Afatinib, AZD9291 y CO-1686; o una sal farmacéuticamente de los mismos, y en el que el inhibidor de MEK se selecciona de Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En una realización se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS G12R, en el que el Inhibidor de EGFR se selecciona de de gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291 y CO-1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, y en el que el inhibidor de MEK se selecciona de Selumetinib, Trametinib, MEK-162 y Cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento, el inhibidor de MEK puede ser selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Como se divulga en el presente documento, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS, en el que la mutación de NRAS se selecciona de e 63K, G12V, G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, y en el que el inhibidor de MEK es Selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Como de divulga en el presente documento, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS, en el que la mutación de NRAS se selecciona de G12R, G12A, G12D, G12S y G12C, en el que el inhibidor de MEK es Selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS, en el que la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V y G12R; y en el que el inhibidor de MEK es Selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Por consiguiente se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS E63K y / o G12V, en el que el inhibidor de MEK es Selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS G12R, en el que el inhibidor de MEK es Selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de un número de copias del gen de NRAS, en el que el inhibidor de MEK es Selumetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Por consiguiente se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS E63K, en el que el inhibidor de MEK es Selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Por consiguiente se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS G12V, en el que el inhibidor de MEK es Selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento, el inhibidor de EGFR puede seleccionarse de gefitinib y AZD9291 y el inhibidor de MEK es selumetinib (donde cualquiera de los mencionados anteriormente puede estar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable).

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS E63K y / o G12V, en el que la Inhibidor de EGFR se selecciona de de gefitinib y AZD9291; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, y en el que el inhibidor de MEK es Selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS G12R, en el que el Inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib y AZD9291; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, y en el que el inhibidor de MEK es Selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS G12R, en el que el Inhibidor de EGFR se selecciona de de AZD9291 y CO1686; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, y en el que el inhibidor de MEK es Selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS o G12R, en el que el Inhibidor de EGFR es AZD9291 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y en el que el inhibidor de MEK es Selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Por consiguiente se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de un número de copias del gen de NRAS, en el que el inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib y AZD9291; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, y en el que el inhibidor de MEK es Selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS E63K, en el que el Inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib y AZD9291; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, y en el que el inhibidor de MEK es Selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Por consiguiente, se proporciona un inhibidor de EGFR en combinación con un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento del cáncer con mutación de NRAS G12V, en el que el Inhibidor de EGFR se selecciona de gefitinib y AZD9291; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, y en el que el inhibidor de MEK es Selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En cualquier realización en el presente documento que describa "cáncer con mutación de NRAS E63K", el cáncer puede ser "cáncer de pulmón con mutación de NRAS E63K" o "cáncer de pulmón de células no pequeñas con mutación de NRAS E63K" o "cáncer con mutación de NRAS E63K que se ha tratado previamente con un TKI EGFR".

En cualquier realización en el presente documento que describa "cáncer con mutación de NRAS G12V", el cáncer puede ser "cáncer de pulmón con mutación de NRAS G12V" o "cáncer de pulmón de células no pequeñas con mutación de NRAS G12v " o un "cáncer con mutación de NRAS G12V que se ha tratado previamente con un TKI de EGFR". El mismo patrón se puede aplicar a las otras mutaciones de la proteína de NRAS para proporcionar realizaciones adicionales, como se describe en el presente documento.

En cualquier realización en el presente documento que describa "cáncer con mutación de NRAS", el cáncer puede definirse además como "cáncer de pulmón con mutación de NRAS" o "cáncer de pulmón de células no pequeñas con mutación de NRAS" o "cáncer con mutación de NRAS que se ha tratado previamente con un TKI de EGFR".

En cualquiera de las realizaciones en el presente documento que describa "cáncer en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de un número de copias del gen de NRAS" el cáncer puede ser "cáncer de pulmón de células no pequeñas cuyas células tumorales comprenden una ganancia de un número de copias del gen de NRAS" o "cáncer en un paciente cuyas células tumorales comprenden una ganancia de número de copias del gen de NRAS en el que el cáncer se ha tratado previamente con un TKI de EGFR".

Sinergia del tratamiento combinado

Se espera que un tratamiento de combinación de la presente invención produzca un efecto sinérgico o beneficioso en el tratamiento de un cáncer en un sujeto. Tal efecto se puede determinar, por ejemplo, por uno o más de la extensión del efecto antitumoral, la tasa de respuesta, el tiempo hasta la progresión de la enfermedad o la tasa de supervivencia.

En un aspecto, se logra un efecto sinérgico o beneficioso si el efecto es terapéuticamente superior, medido por, por ejemplo, el grado de respuesta, la tasa de respuesta / recuperación, el tiempo hasta la progresión de la enfermedad, los efectos secundarios experimentados o el período de supervivencia, al que se puede lograr al aplicar uno de los componentes del tratamiento de combinación, por ejemplo, a su dosis o concentración convencional.

Se puede obtener un efecto sinérgico o beneficioso si el efecto combinado es terapéuticamente superior a la suma de los efectos individuales logrados usando uno de los componentes de la combinación, y / o si se logra un efecto en un grupo de pacientes que no responde ( o responde pobremente) a uno de los componentes individualmente.

Además, un tratamiento de combinación puede definirse como que proporciona un efecto sinérgico o beneficioso si uno de los componentes se aplica a su dosis o concentración convencional, y el otro componente(s) se aplica a una dosis o concentración reducida y el efecto terapéutico es equivalente o mejor que el que se puede lograr aplicando cantidades convencionales de los componentes del tratamiento de combinación.

En particular, se puede considerar que hay sinergia o beneficio si una dosis convencional de uno de los componentes del tratamiento combinado puede reducirse sin detrimento de uno o más de: el grado de respuesta, la tasa de respuesta, el tiempo hasta la progresión de la enfermedad y los datos de supervivencia, en particular sin detrimento de la duración de la respuesta, pero con menos efectos secundarios y / o menos molestos que los que se producen cuando se utilizan dosis o concentraciones convencionales de cada componente.

Formulaciones y rutas de administración

Una composición farmacéutica o un producto de combinación para su uso in vivo típicamente comprende un agente o agentes activos (por ejemplo, un inhibidor de EGFR y / o un inhibidor de MEK como se describe en el presente documento), en mezcla con uno o más excipientes, vehículos o diluyentes, adyuvantes, cargas, tampones, estabilizadores, conservadores, lubricantes, u otros materiales farmacéuticamente aceptables bien conocidos por los expertos en la técnica.

Los excipientes farmacéuticamente aceptables útiles en la presente invención son convencionales. Remington's Pharmaceutical Sciences, de EW Martin, Mack Publishing Co, Easton, PA, 15a edición (1975), describe composiciones y formulaciones adecuadas para la administración farmacéutica de los compuestos descritos en este documento.

Dichas formulaciones pueden contener además de forma rutinaria concentraciones farmacéuticamente aceptables de sal, agentes tamponantes, conservantes, antioxidantes y / o vehículos compatibles.

Las formulaciones también pueden incluir antioxidantes y / o conservantes. Como antioxidantes se pueden mencionar tocoferoles, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, sales de ácido sulfuroso (por ejemplo, sulfato de sodio, bisulfito de sodio, acetona bisulfito de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio, formaldehído sulfoxilato de sodio, tiosulfato de sodio) y ácido nordihidroguaiarético. Los conservadores adecuados pueden ser, por ejemplo, fenol, clorobutanol, alcohol bencílico, metil parabeno, propil parabeno, cloruro de benzalconio y cloruro de cetilpiridinio.

Las formulaciones se pueden presentar en forma de dosificación unitaria.

Las composiciones y productos descritos en el presente documento pueden administrarse a células diana (o al tejido, órgano o sujeto que comprende las células diana), por cualquier medio adecuado.

Los ejemplos de vías de administración y / o medios de administración para la administración a un sujeto incluyen: oral, parenteral, transdérmica, intradérmica, inter-arterial o intravenosa o tópica. En un ejemplo, la administración puede ser por inyección o infusión intravenosa, inter-arterial o subcutánea, o por administración oral.

Una composición o producto puede ser para administración oral. En un aspecto, una composición oral puede comprender una forma de dosificación oral que comprende un agente activo en combinación con un potenciador para mejorar la biodisponibilidad y / o absorción del agente.

Las formulaciones adecuadas para la administración oral (por ejemplo, por ingestión) pueden presentarse como unidades discretas tales como cápsulas, sellos o comprimidos, cada uno de los cuales contiene una cantidad predeterminada del agente activo; como polvo o gránulos; como una solución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión líquida de agua en aceite; como un bolo; como un electuario; o como una pasta.

En un ejemplo, una composición o producto puede ser para administración parenteral. Las preparaciones parenterales pueden administrarse por una o más vías, tales como intravenosa, subcutánea, intradérmica e infusión; un ejemplo particular es el intravenoso. Una formulación descrita en el presente documento puede administrarse usando una jeringa, inyector, émbolo para formulaciones sólidas, bomba o cualquier otro dispositivo reconocido en la técnica para la administración parenteral.

Una composición o producto puede ser para administración tópica, por ejemplo en la piel.

Cantidades/dosislteraoéuticamente eficaces

Las cantidades reales (p. ej., niveles de dosificación) o concentraciones de ingrediente activo (p. ej., inhibidor de EGFR o inhibidor de MEK u otro agente activo) en las composiciones, p. ej., composiciones farmacéuticas, pueden variarse para obtener una cantidad de ingrediente activo que sea eficaz para lograr la respuesta terapéutica deseada, para un sujeto, composición y modo de administración en particular (denominada en el presente documento cantidad o dosis "terapéuticamente eficaz").

El nivel de dosificación seleccionado puede depender, por ejemplo, de la actividad del ingrediente activo particular, la gravedad de la afección que se está tratando y la afección y, si es apropiado, el historial médico previo del sujeto que se está tratando. Sin embargo, está dentro del conocimiento de la técnica comenzar con las dosis a niveles inferiores a los requeridos para lograr el efecto deseado y aumentar gradualmente la dosis hasta que se logre el efecto deseado.

La dosificación de un inhibidor en una combinación descrita en este documento para un sujeto o paciente dado puede ser determinada por un médico tratante u otra persona experta, teniendo en cuenta varios factores que se sabe que modifican la acción de los fármacos, incluida la gravedad y el tipo de enfermedad o condición, peso corporal, sexo, dieta, hora y vía de administración, otros medicamentos y otros factores relevantes, por ejemplo, factores clínicos. Las dosis terapéuticamente eficaces se pueden determinar mediante métodos in vitro o in vivo.

La cantidad terapéuticamente eficaz a utilizar dependerá, por ejemplo, de los objetivos terapéuticos, la vía de administración y el estado del sujeto. Por consiguiente, se prefiere que el terapeuta u otra persona experta titule la dosis y modifique la vía de administración según sea necesario para obtener el efecto terapéutico óptimo. Una dosis diaria típica puede variar desde aproximadamente 0,0001 mg / kg hasta 250 mg / kg o más, dependiendo de los factores mencionados anteriormente. Normalmente, el médico u otra persona experta administrará el inhibidor o la combinación (por ejemplo, el producto de combinación), como se describe en el presente documento, hasta que se alcance una dosis que logre el efecto deseado. Cuando se administran formulaciones separadas de agentes en una combinación, la secuencia en la que se pueden administrar los agentes en la combinación (es decir, si y en qué punto tiene lugar la administración secuencial, separada y / o simultánea) puede ser determinada por el médico o un experto.

La administración de una combinación de agentes puede tener lugar como se describió anteriormente, por ejemplo, pueden administrarse secuencialmente, por separado y / o simultáneamente formulaciones separadas de agentes.

Sales farmacéuticamente aceptables

La invención también se refiere a sales farmacéuticamente aceptables de inhibidores de EGFR e inhibidores de MEK específicos a los que se hace referencia en el presente documento. En consecuencia, la referencia en el presente documento a "inhibidor de EGFR" o "inhibidor de MEK" puede interpretarse para abarcar tanto los inhibidores específicos nombrados como sus sales farmacéuticamente aceptables.

Se puede considerar que los usos y aplicaciones descritos para un inhibidor designado se aplican mutatis mutandis a sus sales farmacéuticamente aceptables.

El término "farmacéuticamente aceptable" como se usa en el presente documento pertenece a compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son, dentro del alcance del buen juicio médico, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de un sujeto (por ejemplo, humano) sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, en consonancia con una relación beneficio/riesgo razonable.

Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y / o manipular una sal correspondiente de un agente descrito en este documento (por ejemplo, un inhibidor de EGFR o un inhibidor de MEK), por ejemplo, una sal farmacéuticamente aceptable.

Una sal adecuada farmacéuticamente aceptable puede ser, por ejemplo, una sal de adición de ácido que sea suficientemente básica, por ejemplo una sal de adición de ácido con un ácido orgánico o inorgánico. Dichas sales de adición de ácido incluyen, pero no se limitan a, sales de furmarato, metanosulfonato, clorhidrato, bromohidrato, citrato y maleato y sales formadas con ácido fosfórico y sulfúrico. Una sal adecuada farmacéuticamente aceptable puede ser, por ejemplo, una sal que sea suficientemente ácida, por ejemplo una sal de metal alcalino o alcalinotérreo. Tales sales de metales alcalinos o alcalinotérreos incluyen, pero no se limitan a, una sal de metal alcalino, por ejemplo, sodio o potasio, una sal de metal alcalinotérreo, por ejemplo, calcio o magnesio, una sal de amonio o una sal de amina orgánica, por ejemplo, trietilamina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, morfolina, /V-metilpiperidina, W-etilpiperidina, dibencilamina o aminoácidos como lisina. Una sal puede ser, por ejemplo, una sal mesilato o una sal de HBr.

EJEMPLOS

La invención se describirá ahora mediante ejemplos específicos y con referencia a las figuras adjuntas, que se proporcionan únicamente con fines ilustrativos y no deben interpretarse como limitantes de las enseñanzas de la presente.

Ejemplo 1. Generación de población de células resistentes a PC9 gefitinib y población de células resistentes a PC9 AZD9291

Reactivos

Medio RPMI-1640 (Sigma R7509)

Solución salina tamponada con fosfato Dulbeccos (PBS) (Sigma D8537)

L-glutamina 200 mM (100 x) (Gibco, Life Technologies 25030)

Suero de ternera fetal (Sigma F7524)

TrypLE Express (Gibco, Life Technologies 12605)

AZD9291 y gefitinib (preparado internamente)

Medios de cultivo

Medio RPMI-1640

Suero de ternera fetal al 10%

L-glutamina 2 mM

Células

Células derivadas de CPCNP humano PC9.

Todos los reactivos, compuestos y células están disponibles en fuentes comerciales.

Generación de poblaciones de células resistentes a gefitinib PC9, AZD9291 o afatinib mediante un método de dosis escalada

Las células PC9 se sembraron a 5 x 105 células en varios matraces T75 frescos en medio de cultivo e incubadas a 37 °C, 5% de CO². Al día siguiente, el medio de los matraces se retiró y se reemplazó con medio de cultivo fresco suplementado con ya sea gefitinib 20 nM, AZD9291 10 nM o afaitnib 0,8 nM (estas concentraciones representan la concentración de ya sea gefitinib, AZD9291 o afatinib necesaria para inhibir el crecimiento de células PC9 en 50 % (EC⁵⁰) como se determinó previamente). Las células se devolvieron a la incubadora y el cultivo continuó en medio suplementado con gefitinib 20 nM, AZD9291 10 nM o afatinib 0,8 nM con cambios de medio cada 2-3 días.

Para cada uno de los matraces de PC9 inicialmente la mayoría de las células en el cultivo murieron y se desprendieron del matraz, estas células se eliminaron a medida que se cambiaba el medio. Un pequeño número de células permanecieron adheridas al matraz y comenzaron a crecer como colonias resistentes. El crecimiento de estas colonias continuó hasta que el matraz tuvo una confluencia de aproximadamente un 80%. En esta etapa, se retiró el medio del matraz y se añadieron 10 ml de PBS. El PBS se lavó suavemente sobre las células y se retiró. Se agregaron 2 ml de TrypLE Express y se balanceó el matraz para asegurar la cobertura de todas las células con la solución de tripsina. Las células se incubaron a 37 °C, 5% CO²durante 10 minutos. A continuación, se golpeó suavemente el matraz para desalojar todas las células y las células se resuspendieron en un total de 10 ml de medio de cultivo suplementado con gefitinib, AZD9291 o afatinib como anteriormente. Las células se contaron y se utilizaron para sembrar 5 x 105 células en matraces T75 frescos en medio de cultivo suplementado con ya sea gefitinib 40 nM, AZD9291 20 nM o afatinib 1,6 nM (es decir, una duplicación de la concentración de gefitinib, AZD9291 o afatinib).

Para cada uno de los matraces PC9, el cultivo y el pase de las células se continuó como se describió anteriormente con las concentraciones de gefitinib, AZD9291 o afatinib duplicadas cada vez que las células resistentes alcanzaron aproximadamente un 80% de confluencia hasta que se alcanzó una concentración máxima de gefitinib 1500 nM, AZD9291 160 nM o afatinib 1500 nM. Para cada población resistente, se registró el tiempo necesario para alcanzar cada duplicación de la concentración (es decir, el tiempo necesario para que las células PC9 alcancen aproximadamente el 80% de confluencia) y se representó gráficamente frente a la concentración. La Figura 1 muestra datos de ejemplo graficados para el tiempo necesario para generar una población de células PC9 resistentes a gefitinib. Los datos indican que una vez que las células se han vuelto resistentes a ~320 nm de Gefitinib (~62 días), aumentos adicionales en la concentración del inhibidor tienen menos efecto sobre la tasa de crecimiento y la supervivencia de las células. Esto sugiere que estas células PC9 han adquirido un mecanismo de resistencia durante los primeros 62 días que puede eludir la inhibición de EGFR y permitir que las células sobrevivan incluso cuando la concentración de gefitinib aumenta más a 1500 nM.

Estas células resistentes se mantuvieron como una población de células resistentes a gefitinib. Las poblaciones resistentes generadas se expandieron y las muestras de células se congelaron para un perfil molecular adicional para identificar posibles mecanismos de resistencia dentro de la población.

Generación de poblaciones de células resistentes a AZD9291 PC9 utilizando una única concentración de AZD9291.

Las células PC9 se sembraron a 5 x 105 células en un matraz T75 fresco en medio de cultivo e incubadas a 37 °C, 5% de CO². Al día siguiente, se retiró el medio en el matraz y se reemplazó con medio de cultivo fresco suplementado con AZD9291 160 nM (previamente determinado como una concentración clínicamente relevante de AZD9291). Las células se devolvieron a la incubadora y el cultivo continuó en medio suplementado con AZD9291 160 nM con cambios de medio cada 2-3 días. Inicialmente la mayoría de las células en el cultivo murieron y se desprendieron del matraz, estas células se eliminaron a medida que se cambiaba el medio. Un pequeño número de células permanecieron adheridas al matraz y comenzaron a crecer como colonias resistentes. El crecimiento de estas colonias continuó hasta que el matraz tuvo una confluencia de aproximadamente un 80% (~70 días en cultivo).

Las poblaciones de células se expandieron y las muestras de células se congelaron para un análisis adicional para identificar posibles mecanismos de resistencia dentro de la población.

Ejemplo 2. Perfil genético de poblaciones de células PC9 resistentes a gefitinib, AZD9291 y afatinib e identificación de alteraciones de NRAS.

Preparación de sedimentos celulares a partir de células resistentes.

Se cultivaron muestras de las poblaciones de células resistentes a gefitinib PC9, AZD9291 PC9 y afatinib PC9 en matraces T75 hasta que tuvieron una confluencia de aproximadamente un 80%. Las células se tripsinizaron como se describió anteriormente y se resuspendieron en un volumen total de 10 ml de PBS. Las células se sedimentaron centrifugando a 1.000 rpm durante 5 minutos y se lavaron con 10 ml más de PBS. Las células fueron sedimentaron nuevamente y se eliminó tanto PBS como fue posible. Los sedimentos celulares se congelaron a -20 °C durante un máximo de 1 semana antes de su procesamiento adicional. Se utilizaron métodos similares para obtener sedimentos celulares de otras poblaciones de células, por ejemplo, células PC9 parentales, según fuera necesario.

Preparación de ADN a partir de células.

Las muestras de ADN se prepararon utilizando el kit Allprep DNA / RNA / miRNA Universal (Qiagen) de acuerdo con las instrucciones del fabricante, e incluyendo un paso de RNasa para evitar el arrastre de ARN.

Las muestras de ADN se utilizaron para determinar la presencia de mutaciones de ADN y / o cambios en el número de copias de genes utilizando al menos dos plataformas: secuenciación de próxima generación (NGS por sus siglas en inglés) e hibridación genómica comparativa de matrices (aCGH por sus siglas en inglés).

Identificación de las mutaciones de NRAS E63K, G12V y G12R

Se llevó a cabo NGS para las poblaciones de células PC9 resistentes a gefitinb, resistentes a AZD9291 y resistentes a afatinib. El análisis se llevó a cabo utilizando el sistema Qiagen GeneRead (cebadores de PCR multiplexados dirigidos a todos los exones de 20 genes relacionados con el cáncer de pulmón) para enriquecer el ADN purificado, seguido de la secuenciación utilizando la tecnología Illumina. Los resultados se validaron secuenciando un subconjunto de las muestras utilizando secuenciación Sanger, secuenciación PGM de Life Technologies Ion Torrent o enriquecimiento Agilent Haloplex™ seguido de secuenciación Illumina. La secuenciación de Sanger se interpretó mediante la lectura directa de cromatogramas y métodos basados en la secuenciación de próxima generación mediante metodologías estándar - secuenciación de lectura de control de calidad, alineación con la referencia del genoma humano hg19, identificación de variantes y llamada de mutaciones después de la inspección visual.

En general, se analizaron varias líneas celulares PC9 resistentes a gefitinib (PC9 IR-GM, PC9 IRLR, PC9 IR-4, PCR IR-6) y líneas celulares resistentes a AZD9291 (PC9 9291-5, PC9 9291_6, PC9 9291-LOB_1, PC9 9291-3 y PC9 9291-2), así como la línea celular parental PC9. Se encontró una nueva mutación de NRAS E63K en una línea celular resistente a gefitinib (PC9 IR-LR) y también en una línea celular resistente a AZD9291 (PC99291-LOB1).

El análisis utilizando el sistema Qiagen GeneRead y el sistema Haloplex™ (Agilent Technologies) mostró que la mutación de ADN correspondiente (C a T) que codifica la mutación de E63K no ocurrió a un nivel significativo (por encima del ruido) en la línea celular parental PC9 u otras líneas celulares resistentes a gefitinib o resistentes a AZD9291 probadas (consulte las Tablas 1 y 2 a continuación). En consecuencia, la mutación de E63K no parece ser preexistente, sino que se adquiere en respuesta a la inhibición de EGFR.

El análisis de NGS se llevó a cabo como se describió anteriormente para la mutación de E63K.

Tabla 1- Resultados de GeneRead

El primer número dado indica el número de lecturas y el número entre paréntesis indica la puntuación phred media de la secuenciación (una puntuación inferior a 25 se consideraría ruido). La mutación E63K (C a T) está en negrita.

Tabla 2- Resultados de Haloplex

El primer número dado indica el número de lecturas y el número entre paréntesis indica la puntuación phred media de la secuenciación. La mutación E63K (C a T) está en negrita. Cuando se analizaron las líneas celulares para la mutación de EGFR T790M, se encontró que ninguna de las líneas celulares resistentes a E63K tenía esta mutación. La mutación de T709M se detectó en otras líneas celulares resistentes a gefitinib (PC9 IR-4, PC9 IR-GM y PC9 IR-6), pero no estuvo presente en ninguna de las líneas celulares resistentes a AZD9291.

identificación de ganancia de número de copias de NRAS

Ganancia de número de copias de NRAS se identificó utilizando aCGH con células PC9 parentales y células PC9 resistentes a afatinib (PC9_afatinib_5). La ganancia de número de copias del gen de NRAS se detalla a continuación, tanto en el número de copias estimado (Tabla 3) como en la proporción del número de copias log2 (Tabla 4):

Tabla 3 - Número estimado de copias del gen de NRAS en afatinib _5 en comparación con el promedio de las líneas celulares

Tabla 4 - relación Log2 de número de copias del gen de NRAS en PC9_afatinib resistente_5 en comparación con el promedio l lín l l r r n l P

Los valores anteriores se calcularon utilizando un script de Perl. Los datos de log2 resultantes se analizaron, formatearon y visualizaron posteriormente. Se aplicó un umbral de cambio > 1 y <-0,5 veces a los datos para visualizar los datos de aCGH de todas las muestras. A partir de la visualización resultante, se identificó que el gen de NRAS mostraba una ganancia en el número de copias, en comparación con el promedio de las líneas celulares PC9 parentales usando NGS como se describe anteriormente. La ganancia de número de copias del gen de NRAS también se detectó en poblaciones resistentes a 2PC9 AZD9291 Tabla 5

Tabla 5 - Detección de ganancia de número de copias del gen de NRAS mediante análisis de secuenciación. Los valores re resentan la anancia como cambio de veces en relación con las res ectivas células arentales.

Ejemplo 4. Análisis de sensibilidad de líneas celulares resistentes a una combinación de selumetinib (inhibidor de MEK) e inhibidor de EGFR

Los efectos de un panel de inhibidores de la ruta canónica sobre el crecimiento y la supervivencia celular se midieron usando un ensayo celular usando tinción Sytox Green como punto final.

Reactivos

Medio RPMI-1640 (Sigma R7509)

Solución salina tamponada con fosfato Dulbeccos's (PBS) (Sigma D8537)

L-glutamina 200 mM (100 x) (Gibco, Life Technologies 25030)

Suero de ternera fetal (Sigma F7524)

TrypLE Express (Gibco, Life Technologies 12605)

AZD9291 y gefitinib (preparado internamente)

Medios de cultivo

Medio RPMI-1640

Suero de ternera fetal al 10%

L-glutamina 2 mM

Solución Sytox Green - Tinción Sytox Green, stock de Invitrogen S7020 5 mM diluido a 2 |jM en TBS que contiene e DtA 5 mM pH 7,5

Solución de saponina al 0,25% por pocillo (número de catálogo Sigma-Aldrich 84510). (Solución madre de saponina al 2,5% preparada en TBS que contiene EDTA 5 mM pH 7,5 y esterilizada por filtración) Líneas celulares probadas:

PC9 (NRAS WT)

PC9_IRGM (NRAS WT) (AKA. PC9 GR_1

PC9_9291 R LOB1 (NRAS E63K) (También conocido como PC9 AZDR_5)

PC9 IRLR (NRAS E63K) (AKA. PC9 GR_2)

PC9_9291R3 (NRAS G12V) (AKA. PC9 AZDR_2)

PC9_9291 R5 (NRAS WT) (AKA. PC9 AZDR_3)

PC9_afatinib_5 (ganancia de NRAS WT) (AKA. PC9 AR_5)

PC9_IR4_9291 R _2 (ganancia de NRAS WT) (AKA. PC9 GR6 AZDR 2)

PC9_IR4_9291 R_3 (ganancia de NRAS WT) (AKA. PC9 GR6 AZDR 3)

Métodos

Las líneas celulares se sembraron en placas de 384 pocillos a 1000 células por pocillo en 70 j L por pocillo de medio RPMI que contenía suero fetal de ternera al 10%, L - glutamina 2 mM e inhibidor de EGFR de origen.

Se permitió que las células se unieran durante la noche a 37 °C, 5% de CO². Al día siguiente, se añadieron titulaciones del compuesto de prueba a las placas de ensayo usando un Echo Liquid Handler Labcyte (California, EE. UU.) y las células tratadas se incubaron durante 72 horas más a 37 °C, 5% de CO². Cada compuesto se probó como una respuesta a la dosis de 11 puntos con una concentración máxima de 10 j M y diluciones 1 en 3. Después de 72 horas de incubación de las placas tratadas con el compuesto, se añadieron por pocillo 5 j L de tinción de SYTOX Green Nucleic Acid 2 j M, Life Technologies (Paisley, Reino Unido) y las placas se incubaron a temperatura ambiente durante una hora. El número de células fluorescentes por pocillo se midió en Acumen TTP LabTech Ltd. (Melbourn, Reino Unido), este número representa el recuento de células muertas. Se añadieron 10 j l de saponina Sigma al 0,25% (Dorset, Reino Unido) por pocillo y las placas se incubaron durante la noche a temperatura ambiente. El número total de células fluorescentes por pocillo se obtuvo en el Acumen. El número de células muertas se restó del número total de células y el número de células vivas se representó para determinar los valores de EC⁵⁰de las curvas de respuesta a la dosis.

Se observó que las líneas celulares que habían adquirido una mutación de NRAS eran más sensibles a selumetinib en comparación con las células parentales y otras líneas celulares en las que no se había detectado una mutación de NRAS.

La Tabla a continuación (Tabla 6) muestra los valores de EC⁵⁰j M en las líneas celulares de NRAS WT y mutantes ensayadas. Los datos indican que las líneas celulares que han adquirido una mutación de NRAS son más sensibles a selumetinib cuando se tratan en combinación con el inhibidor de EGFR de origen y se comparan con la línea celular parental. Por el contrario, las líneas celulares en las que no se detectó ninguna mutación de NRAS no son sensibles a selumetinib cuando se tratan en combinación con el inhibidor de EGFR de origen.

Tabla 6 Las líneas celulares se trataron con titulaciones de dosis de selumetinib y los valores de EC⁵⁰pM se determinaron a partir de las curvas de respuesta a la dosis. Las curvas de respuesta a la dosis de ejemplo se muestran en las Fi uras 2 a 6.

Ejemplo 5: Análisis del papel funcional de la mutación de NRAS E63K en la supervivencia de poblaciones de células resistentes a gefitinib o AZD9291

Para investigar si la nueva mutación de NRAS E63K es una mutación activadora que impulsa la supervivencia de las células resistentes a gefitinib o AZD9291, los inventores utilizaron una variedad de técnicas:

(a) Ensayos de activación de RAS para comparar los niveles basales de NRAS activo en células PC9 parentales (WT NRAS) con los niveles basales de NRAS activo en células resistentes con NRAS mutante.

(b) anulación de la expresión de ARNip de la expresión de NRAS WT y mutante para investigar los efectos sobre la señalización corriente abajo y el crecimiento celular.

(c) Expresión exógena de variantes mutantes NRAS WT y NRAS E63K en células PC9 para investigar los efectos sobre la inhibición del crecimiento celular por gefitinib o AZD9291.

(a). Ensayos de activación de RAS.

Métodos

Se cultivaron células resistentes a PC9 y PC9 AZD9291 en medio que no contenía AZD9291 durante 4 días. A continuación, las células se sembraron en placas de 6 pocillos y se privaron de suero durante la noche. Al día siguiente, las células se trataron durante 2 horas con medio suplementado con o sin AZD9291 160 nM. Se prepararon lisados y se aisló el NRAS activo usando un ensayo de extracción del dominio de unión de GST-RAS (Thermo Scientific). Los lisados de extracción se analizaron mediante transferencia Western utilizando un anticuerpo específico de NRAS. Resultados

Los niveles de NRAS activos basales fueron más bajos en las células PC-9 parentales en comparación con las poblaciones de células PC-9 resistentes en las que se había detectado una mutación de NRAS E63K o G12V. Además, el tratamiento de las células PC-9 parentales con AZD9291 160 nM durante 2 horas provocó una disminución del EGFR fosforilado y del NRAS activo. Por el contrario, en las células NRAS mutantes, una disminución del EGFR fosforilado no se asoció con una disminución correspondiente del NRAS activo, lo que sugiere una activación constitutiva de NRAS independiente del EGFR en estas células. Los resultados de muestran en la Figura 7.

(b) Análisis del efecto del tratamiento con ARNip de NRAS y KRAS en poblaciones de células PC9, resistentes a gefitinib PC9 y resistentes a AZD9291 PC9.

Se sembraron células PC9, resistentes a gefitinib PC9 y resistentes a AZD9291 PC9 5 x 105 células por pocillo en placas de 6 pocillos en 2 ml por pocillo de medio de cultivo suplementado con inhibidor de EGFR cuando fuera apropiado (se cultivaron células resistentes en presencia de inhibidor de EGFR). Las células se incubaron durante la noche a 37 °C, 5% de CO². Al día siguiente, las células se trataron con una concentración final de ARNip 20 nM de Dharmacon como se detalla en la Tabla 7.

Tabla 7 Secuencias ara construcciones de ARNi de NRAS KRAS.

Cada construcción de ARNip se preparó en medio Optimem (Life Technologies) utilizando ARN iMAX (Invitrogen) como reactivo de transfección. Para cada pozo: Se mezclaron 2,5 pl de ARNip (solución madre 20 pM) con 250 pl de Optimem; y se mezclaron 2,5 pl de ARN iMAX con 250 pl de Optimem. Las 2 soluciones se mezclaron pipeteando y se dejaron reposar durante 5 minutos a temperatura ambiente. A continuación, se pipeteó la solución final de 500 pl en los 2 ml apropiados de medio de cultivo en las placas de 6 pocillos. Las placas se agitaron suavemente y se incubaron durante la noche a 37 °C, 5% de CO². Al día siguiente, se recogió cada pocillo de células y se contó el número de células.

A continuación, se sembró una muestra de células de cada transfección en placas de 96 pocillos a 3.000 células por pocillo en 100 pl de medio de cultivo suplementado con inhibidor de EGFR cuando fuera apropiado a través de 5 pocillos replicados para cada condición de transfección. El resto de las células se volvieron a sembrar en placas de 6 pocillos frescos. Las placas de 96 y 6 pocillos se devolvieron a la incubadora para un crecimiento adicional.

Al día siguiente, se prepararon lisados a partir de las placas de 6 pocillos para poder evaluar la eliminación de la expresión de proteínas después de 48 horas de tratamiento con ARNip. Los lisados se analizaron mediante western blot para los niveles de: EGFR fosforilado, ERK fosforilado, NRAS y KRAS. Los niveles de GAPDH se utilizaron como control de carga en todas las muestras de células. (Figura 8)

Las células correspondientes en las placas de 96 pocillos se dejaron crecer durante 5 días más, después de lo cual se fijaron mediante la adición de 100 pl de formaldehído al 4% por pocillo durante 30 minutos a temperatura ambiente. Los pocillos se lavaron con PBS y los núcleos se tiñeron mediante la adición de Hoechst (dilución 1 en 5.000) durante 30 minutos a temperatura ambiente. El número de células se contó usando el Cellomics Arrayscan contando 9 campos por pocillo con un aumento de 10 x. Se grafica el número medio de células (Figura 9).

Los resultados de las transferencias de Western indicaron que la expresión de NRAS fue anulada en todas las líneas celulares por las 3 construcciones de ARNip de NRAS utilizadas, pero que no se observó ningún efecto sobre la expresión de NRAS con la construcción de ARNip de NTC o KRAS. Por otro lado, solo la construcción KRAS_1 causó la caída de la expresión de KRAS sin afectar la expresión de NRAS. (Figura 8).

El efecto sobre el crecimiento celular por las transfecciones de ARNip indicó que en las líneas celulares resistentes a gefitinib y resistentes a AZD9291 en las que se identificó la nueva mutación NRAS, la eliminación de la expresión de NRAS inhibió significativamente el crecimiento celular mientras que la eliminación de la expresión de KRAs no tuvo ningún efecto sobre crecimiento celular. Por el contrario, ni la eliminación de NRAS o KRAS tuvo un efecto sobre el crecimiento de las células parentales PC9 (Figura 9).

Estos datos sugieren que la mutación de NRAS E63K es una mutación activadora y que está impulsando la supervivencia de las células resistentes.

(c) Análisis sobre la expresión exógena de variantes mutantes de ADN de NRAS WT y NRAS E63K en células PC9 para investigar los efectos sobre la inhibición del crecimiento celular por gefitinib o AZD9291.

Las células PC9 se transfectaron con un constructo de ADN de control, un control de pcDNA 3.1+ o un constructo diseñado para expresar el mutante de NRAS E63K, pcDNA 3.1+ / NRAS E63K, (Life Technologies Ltd.). Para la expresión de 96 horas, se utilizó la tecnología de transfección MaxCyte para electroporar las células PC9. Las células PC9 se pasaron el día antes de la transfección. El día de la transfección, las células se recolectaron y se resuspendieron a 9 x 107 células por 600 pL de tampón MaxCyte. Se transfirieron 100 pl de suspensión celular a una cubeta MaxCyte y las células se sometieron a electroporación con una construcción de ADN de 20 pg. Después de la electroporación, las células para cada condición se transfirieron a una placa de 6 pocillos y se incubaron a 37 °C durante 30 minutos, después de lo cual se sembraron en una placa de 6 pocillos a 4 x 105 células por pocillo. Después de la incubación durante la noche, las células se recolectaron y se volvieron a sembrar en placas de 384 pocillos a 1.000 células / pocillo. Al día siguiente, las células se dosificaron con ya sea AZD9291 100 nM o gefitinib 300 nM y las

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un inhibidor de EGFR para usarse en el tratamiento de cáncer de pulmón de células no pequeñas con mutación de NRAS, donde el inhibidor de EGFR se administra en combinación con un inhibidor de MEK y la mutación de NRAS se selecciona de E63K, G12V y G12R, o una ganancia de número de copias del gen de NRAS.

2. Un inhibidor de EGFR para usarse según la reivindicación 1, donde el inhibidor de EGFR se selecciona entre gefitinib, erlotinib, afatinib, AZD9291 y CO1686; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

3. Un inhibidor de EGFR para usarse según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, donde el inhibidor de EGFR se selecciona entre AZD9291 y CO 1686; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

4. Un inhibidor de EGFR para usarse según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde el inhibidor de MEK se selecciona de selumetinib, trametinib, MEK-162 y cobimetinib; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

5. Un inhibidor de EGFR para usarse según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde el inhibidor de EGFR es AZD9291 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

6. Un inhibidor de EGFR para usarse según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde el inhibidor de MEK es selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

7. Un inhibidor de EGFR para usarse como se reivindica en la reivindicación 1, donde el inhibidor de EGFR es AZD9291 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y el inhibidor de MEK es selumetinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.