CN110584096A - 一种中国被毛孢发酵液酵素及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中国被毛孢发酵液酵素，其制备方法为，由发酵液A、发酵液B、发酵液C按照体积计5％～95％：0％～90％：5％～90％混合，温度20～40℃，发酵1～24个月；发酵结束后发酵液中冲入氮气，氮气温度为30～60℃，流速100～2000ml/min，冲入时长1～3h，同时罐内抽真空，真空度为‑0.01～‑0.07MPa。本发明还公开了含有中国被毛孢发酵液酵素的食品、饮料、化妆品、药品以及其在制备预防和/或治疗糖尿病的制品中的用途。本发明公开的中国被毛孢菌丝体发酵液酵素口感良好，同时解决了发酵液处理的环境污染问题，废弃资源得到了很好的再利用。
Description
技术领域
本发明属于功能食品加工技术领域，具体涉及一种中国被毛孢发酵液酵素及其制备方法。
背景技术
冬虫夏草中内生菌可以应用生物发酵技术进行发酵生产得到相应的菌丝体，其中中国被毛孢(Hirsutella hepiali chen et shen,sp.nov)是公认的唯一冬虫夏草内生真菌代表。中国被毛孢发酵产物菌丝体是“百令胶囊”等药物的主要原料。
中国被毛孢发酵液是指除去中国被毛孢发酵产物菌丝体后剩余的发酵液，数量巨大，由于无法应用而被废弃，造成环境污染、资源浪费。
中国被毛孢发酵液富含营养成分，可以进一步开发利用。酵素是一种通过各种原料自身内生菌发酵产生的具有保健功效的功能食品，近年来有一些文献披露了采用中国被毛孢发酵液制备酵素，比如在专利“一种冬虫夏草真菌发酵液酵素及其制备方法(申请号201410255576.2)”中公开了以中国被毛孢发酵液添加糖类等成分进行发酵制备酵素的方法，这种制备方法得到酵素口感存在明显的苦涩、辣喉缺陷，消费者无法将之作为功能食品或普通食品日常服用。
发明内容
本发明克服了现有技术中中国被毛孢发酵液所制备的酵素口感差的缺陷，提供了一种附合民众口感的酵素。
本发明提供了一种中国被毛孢(Hirsutella hepiali chen et shen，sp.nov) 发酵液酵素制备方法，由发酵液A、发酵液B、发酵液C按照体积计5％～95％： 0％～90％：5％～90％混合，温度20～40℃，发酵1～24个月；发酵结束后发酵液中冲入氮气，氮气温度为30～60℃，流速100～2000ml/min，冲入时长1～3h，同时罐内抽真空，真空度为-0.01～-0.07MPa；
其中所述的发酵液A，其制备方法为：按质量计，将5～95％中国被毛孢发酵液浓缩液和0～60％中国被毛孢菌丝体混合，再加入5～60％糖类进行混合,发酵温度0～20℃之间，发酵1～24个月；发酵液A的发酵温度为0～20℃，可以保证其中的中国被毛孢真菌发酵活性，从而产生更多相应的发酵代谢产物，温度过高使得中国被毛孢真菌活性降低。同时，对比实验表明低温发酵工艺(0～20℃) 制备得到的得酵素比高温(＞20℃)发酵得到的酵素口感中的苦涩、辣喉感明显降低。
其中所述的发酵液B，其制备方法为：按质量计，将5～95％经过灭菌处理的中国被毛孢发酵液浓缩液和0～60％中国被毛孢菌丝体混合，再加入5～60％糖类进行混合,发酵温度20～40℃之间，发酵1～24个月；经过灭菌处理的中国被毛孢发酵浓缩液虽然其中的真菌中国被毛孢已失去活性，但其中仍含有丰富活性成分，可作为发酵原料加以利用。
其中所述的发酵液C，其制备方法为：按质量计，将40～90％沙棘与10～60％糖类混合，温度20～40℃，发酵1～24个月。
其中所述的浓缩，是指将中国被毛孢发酵液在低温35℃以内进行，浓缩体积达到原体积的95％～10％。浓缩可以除去发酵液中的过多水分，使得其发酵效率更高；另外低温浓缩可以保证发酵液中中国被毛孢菌丝保持活性，可以继续发酵。
其中所述的发酵液A、发酵液B、发酵液C，按质量计，优选60％～80％：10％～20％：10％～20％。
其中所述的氮气，温度优选为40℃，流速优选为1000ml/min，冲入时长优选为2h，同时罐内抽真空，真空度优选为为-0.04Mpa。
其中所述的发酵液A制备方法优选为：按质量计，将60％～90％中国被毛孢发酵液浓缩液和0～20％中国被毛孢菌丝体混合，再加入5～60％糖类进行混合，发酵温度4～10℃之间，发酵6～12个月。
其中所述的发酵液B制备方法优选为：按质量计，将60％～90％经过灭菌处理的中国被毛孢发酵液浓缩液和0～20％中国被毛孢菌丝体混合，再加入5～60％糖类进行混合，发酵温度25～35℃之间，发酵6～12个月。
其中所述的发酵液C制备方法优选为：按质量计，将60～90％沙棘与10～40％糖类混合，发酵温度25～35℃之间，发酵6～12个月。
其中所述的发酵液A、发酵液B的制备方法中，可以加入其它发酵原料进行发酵；其中所述的其它发酵原料为水果、蔬菜和/或中药材和/或真菌、益生细菌中的一种或多种或其提取液。还可以加入内生菌生长因子，比如维生素、矿物质、微量元素等。这样可以提高发酵效率。
其中所述的糖类为蔗糖(比如白糖、红糖)、果糖、葡萄糖中的一种或多种。
对比实验表明在发酵液中加入沙棘发酵液混合发酵后，沙棘酵素原本酸涩味消失，并且得到的最终产品原有的苦涩、辣喉感明显降低，味道酸甜，口感明显提升。不添加沙棘酵素或者把沙棘替换为红枣或香蕉及蔬菜等原料进行发酵，口感依旧苦涩、辣喉。
本发明所公开的酵素在发酵结束后容器底部充入的氮气，对发酵液进行搅拌，同时对容器抽真空。此操作可以有效的除去酵素液体中大量挥发性成分。影响口感的化学成分复杂，很多挥发性成分如挥发酸具有辛辣、燥热、酸涩等味， SO2有刺鼻、苦涩味，这些成分会严重影响口感，通过氮气搅拌可以去除大部分挥发性成分，可以明显改善口感。按照GB15037-2006中测定方法对本发明制备得到的虫草酵素中的挥发酸及SO2含量，其中挥发酸含量由＞5.0g/L降到＜ 1.0g/L，总SO2含量由＞300mg/L降到＜50mg/L。
本发明还公开了一种的中国被毛孢发酵液酵素。是由以上所述的制备方法制备得到。
本发明还公开了含有中国被毛孢发酵液酵素的食品、饮料、化妆品、药品。
通过上述方法得到的中国被毛孢真菌发酵液酵素可以直接灌装饮用，也可以在干燥设备中进行干燥，得到的酵素粉剂，作为食品、化妆品、药品添加剂使用，也可以加工成各种剂型直接食用。
本发明还公开了中国被毛孢发酵液酵素在制备预防和/或治疗糖尿病的制品中的用途。经患者服用验证表明本发明公开的酵素具有一定的辅助降血糖效果。
本发明提供了一种利用废弃的中国被毛孢菌丝体发酵液制备酵素的方法，本发明通过中国被毛孢真菌发酵液的低温浓缩、中国被毛孢真菌发酵液的低温发酵、加入沙棘发酵液混合发酵、发酵液中充入氮气搅拌等工艺，有效地去除了最终酵素产品所带有的苦涩、辣喉口味，另外，经患者服用验证表明本发明的产品具有一定的具有辅助降血糖功效。本发明使得中国被毛孢菌丝体发酵液酵素成为一种口感良好，并具有保健功效的日常饮品。同时也解决了发酵液处理的环境污染问题，废弃资源得到了很好的再利用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
中国被毛孢菌丝体、发酵液可以按现有技术进行发酵获得。
实施例1
步骤1，发酵液A的制备：将50kg中国被毛孢发酵液采用低温真空干燥法进行浓缩处理，得到20kg中国被毛孢浓缩发酵液，将其放入到不锈钢罐中。将 2kg中国被毛孢菌丝体、30kg白糖和洗净、切块的苹果30kg、葡萄10kg、桃子 10kg、香菇5kg，以及500g双歧杆菌，50g维生素C，10g肌醇，10g维生素B 加入到中国被毛孢浓缩发酵液中，搅拌均匀，在5℃发酵6个月，得到发酵液A。
步骤2，发酵液B的制备：将高温灭菌处理的中国被毛孢发酵浓缩液10kg、白糖40kg和洗净、切块的苹果30kg、黄瓜30kg加入到不锈钢罐中搅拌均匀，在温度30℃发酵6个月，得到发酵液B。
步骤3，发酵液C的制备：洗净、晾干后的沙棘20kg加入桃5kg、红糖20kg 混合，放入到不锈钢罐中30℃发酵6个月，得到发酵液C。
步骤4，将发酵液A、B、C混合，在温度30℃发酵6个月。
步骤5，发酵结束后在发酵罐底部通入40℃氮气，搅拌，流速500ml/min，冲入2h，罐内抽真空度为-0.04MPa。得到中国被毛孢真菌发酵液酵素。
按照GB15037-2006测定方法对步骤4得到的酵素(未经氮气处理)中挥发酸、SO2含量进行检测，其中挥发酸含量为：6.2g/L，SO2含量为360mg/L。对步骤5得到酵素(经氮气处理)中挥发酸、SO2含量进行检测，其中挥发酸含量为： 0.6g/L，SO2含量为35mg/L。
制备得到的酵素口感酸甜，其中苦涩、辣喉感明显减弱。
实施例2
步骤1，发酵液A的制备：将50kg中国被毛孢发酵液采用低温真空干燥法进行浓缩处理，得到30kg中国被毛孢浓缩发酵液，放入到不锈钢罐中，再加入 20kg葡萄糖，搅拌均匀，在15℃发酵10个月，得到发酵液A。
步骤2，发酵液B的制备：将经高温浓缩法得到的5kg中国被毛孢发酵浓缩液和葡萄糖10kg加入到不锈钢罐中搅拌均匀，在温度20℃发酵10个月，得到发酵液B。
步骤3，发酵液C的制备：洗净、晾干后的沙棘2kg加入葡萄糖2kg混合放入到不锈钢罐中20℃发酵10个月，得到发酵液C。
步骤4，将发酵液A、B、C混合，在温度20℃发酵10个月。
步骤5，发酵结束后在发酵罐底部通入30℃氮气，搅拌，流速300ml/min，冲入2h，罐内抽真空度为-0.02MPa。得到中国被毛孢真菌发酵液酵素。
按照GB15037-2006测定方法对步骤4得到的酵素(未经氮气处理)与步骤 5得到酵素(经氮气处理)中挥发酸、SO2含量分别进行检测。步骤4得到的酵素的挥发酸含量为：6.5g/L，SO2含量为380mg/L。步骤5得到的酵素挥发酸含量为：0.8g/L，SO2含量为42mg/L。
制备得到的酵素口感酸甜，其中苦涩味明显减弱。
实施例3
步骤1，发酵液A的制备：将50kg中国被毛孢发酵液采用低温真空干燥法进行浓缩处理，得到40kg中国被毛孢浓缩发酵液，放入到不锈钢罐中。将10kg 红糖和洗净、切块的苹果2kg、南瓜2kg、灵芝1kg，加入到中国被毛孢浓缩发酵液中，搅拌均匀，在20℃发酵24个月，得到发酵液A。
步骤2，发酵液C的制备：洗净、晾干后的沙棘2kg加入红糖1kg混合放入到不锈钢罐中40℃发酵24个月，得到发酵液C。
步骤3，将发酵液A、C混合，在温度40℃发酵24个月。
步骤4，发酵结束后在发酵罐底部通入50℃氮气，搅拌，流速1000ml/min，冲入3h，罐内抽真空度为-0.07MPa。得到中国被毛孢真菌发酵液酵素。
按照GB15037-2006测定方法对步骤3得到的酵素(未经氮气处理)与步骤 4得到酵素(经氮气处理)中挥发酸、SO2含量分别进行检测。步骤3得到的酵素的挥发酸含量为：6.8g/L，SO2含量为420mg/L。步骤4得到的酵素中挥发酸含量为：0.2g/L，SO2含量为22mg/L。
制备得到的酵素口感酸甜，其中苦涩味明显减弱。
实施例4
步骤1，发酵液A的制备：将50kg中国被毛孢发酵液采用低温真空干燥法进行浓缩处理，得到40kg中国被毛孢浓缩发酵液，放入到不锈钢罐中。将10kg 中国被毛孢菌丝体、10kg白糖和洗净、切块的苹果2kg、南瓜2kg、灵芝1kg，加入到中国被毛孢浓缩发酵液中，搅拌均匀，在20℃发酵24个月，得到发酵液A。
步骤2，发酵液B的制备：将1kg高温灭菌处理的中国被毛孢发酵浓缩液、 1kg白糖加入到不锈钢罐中搅拌均匀，在温度40℃发酵24个月，得到发酵液B。
步骤3，发酵液C的制备：洗净、晾干后的沙棘2kg加入红糖1kg混合放入到不锈钢罐中40℃发酵24个月，得到发酵液C。
步骤4，将发酵液A、B、C混合，在温度40℃发酵24个月。得到中国被毛孢真菌发酵液酵素。
按照GB15037-2006测定方法对步骤4得到的酵素中挥发酸、SO2含量分别进行检测。测得步骤4得到的酵素的中挥发酸含量为：7.8g/L，SO2含量为380mg/L。
酵素口感较差，有苦涩、辣喉感。
实施例5
步骤1，同实施例1相同。
步骤2，发酵液B的制备：同实施例1相同。
步骤3，将发酵液A、B混合，在温度40℃发酵24个月。
步骤4，同实施例1中步骤5相同。得到中国被毛孢真菌发酵液酵素。
按照GB15037-2006测定方法对步骤4得到的酵素中挥发酸、SO2含量分别进行检测。测得步骤4得到的酵素的挥发酸含量为：0.5g/L，SO2含量为32mg/L。酵素口感不佳，仍有一定的苦涩、辣喉感。
实施例6
步骤1发酵液A的制备，步骤2发酵液B的制备与实施例1相同。
步骤3，发酵液C的制备：洗净、晾干后的红枣20kg，加入桃5kg、红糖20kg 混合，放入到不锈钢罐中30℃发酵6个月，得到发酵液C。
步骤4、步骤5与实施例1相同。
按照GB15037-2006测定方法对步骤4得到的酵素(未经氮气处理)中挥发酸、SO2含量进行检测，其中挥发酸含量为：6.4g/L，SO2含量为350mg/L。对步骤5得到酵素(经氮气处理)中挥发酸、SO2含量进行检测，其中挥发酸含量为： 0.6g/L，SO2含量为32mg/L。
制备得到的酵素口感不佳，仍有苦涩、辣喉感。
用其他水果，比如苹果、葡萄、香蕉、利、桃子、南瓜等单独或任意多种混合发酵以替代沙棘以得到发酵液C，而最终制得的酵素均存在与实施例6相近的口感不佳，苦涩、辣喉感较强的现象。
实施例7
为验证本发明所公开的酵素的降血糖效果，选了18例服用本发明产品的糖尿病患者，结果显示，服用实施例1酵素的患者或空腹血糖下降幅度≥10％，餐后2小时血糖下降幅度≥10％，达到保健食品降血糖效果的评价标准，表明本发明产品具有一定辅助降血糖保健功效。
1.受试者选择
选择经饮食控制或口服降糖药治疗后病情较稳定，不需要更换药物品种及剂量，仅服用维持量的成年II型糖尿病患者(DM)，即空腹血糖≥7mmol/L (126mg/dl)或餐后2小时血糖≥11.1mmol/L(200mg/dl)。
2.试验方法
试验前对每一位受试者按性别、年龄、不同劳动强度、理想体重参照原来生活习惯规定相应的饮食，试食期间坚持饮食控制，治疗糖尿病的药物种类和剂量不变。试食组在服药的基础上，按推荐服用方法服用量每日服用受试样品。受试样品给予时间2个月。
2.1服用方法和服用量
每次服用实施例1样品50ml，每日早晚随餐各一次，直接口服。
2.2疗效判断标准
2.2.1空腹血糖
观察试食前后空腹血糖值、空腹血糖下降百分率、空腹血糖有效率。
2.2.2餐后2小时血糖
观察试食前后食用100g精粉馒头后2小时血糖值、餐后2小时血糖下降百分率、餐后2小时血糖有效率。
2.2.3功效判定标准：
有效：
(1)试验后空腹血糖恢复正常(≤5.6mmol/L)，或空腹血糖下降幅度≥10％。
(2)试验后餐后2小时血糖恢复正常(≤7.8mmol/L)，或餐后2小时血糖下降幅度≥10％。
无效：未达到有效标准。
3.结论：
由表1可见，试食实施例2个月后，试食组试食后的空腹血糖与试食前相比有所下降，有显著性差异(p＜0.01)；试食后试食组空腹血糖下降百分点＞10％由表2可见，试食实施例2个月后，试食组试食后餐后2h血糖与试食前相比有所下降，并有显著性差异(p＜0.01)；试食后试食组餐后2h血糖与对照组相比下降百分点＞10％，实验结果表明本发明的产品具有一定的降血糖保健功效。
表1受试者试食前后空腹血糖变化
| II型糖尿病病例 | 试食前(mmol/L) | 试食后(mmol/L) | 下降百分率％ |
| 18 | 7.32±1.66 | 6.60±2.31<sup>*</sup> | 10.78±16.12 |
*与试食前比较P＜0.01
表2受试者试食后餐后2小时血糖变化
| 例数 | 试食前(mmol/L) | 试食后(mmol/L) | 下降百分率％ |
| 18 | 10.56±2.67 | 9.56±2.11<sup>*</sup> | 10.35±16.25 |
*与试食前比较P＜0.01。
Claims (10)
1.一种中国被毛孢发酵液酵素的制备方法，由发酵液A、发酵液B、发酵液C按照质量计5％～95％：0％～90％：5％～90％混合，优选60％～80％：10％～20％：10％～20％混合；温度20～40℃，发酵1～24个月；发酵结束后发酵液中冲入氮气，氮气温度为30～60℃，流速100～2000ml/min，冲入时长1～3h，同时罐内抽真空，真空度为-0.01～-0.07MPa；
其中所述的发酵液A，其制备方法为：按质量计，将5～95％中国被毛孢发酵液浓缩液和0～60％中国被毛孢菌丝体混合，再加入5～60％糖类进行混合,发酵温度0～20℃之间，发酵1～24个月；
其中所述的发酵液B，其制备方法为：按质量计，将5～95％经过灭菌处理的中国被毛孢发酵液浓缩液和0～60％中国被毛孢菌丝体混合，再加入5～60％糖类进行混合,发酵温度20～40℃之间，发酵1～24个月；
其中所述的发酵液C，其制备方法为：按质量计，将40～90％沙棘与10～60％糖类混合，温度20～40℃，发酵1～24个月。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征是所述的氮气温度为40℃，流速1000ml/min，冲入时长2h，同时罐内抽真空，真空度为-0.04Mpa。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征是所述的发酵液A制备方法为：按质量计，将60％～90％中国被毛孢发酵液浓缩液和0～20％中国被毛孢菌丝体混合，再加入5～60％糖类进行混合，发酵温度4～10℃之间，发酵6～12个月。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征是所述的发酵液B制备方法为：按质量计，将60％～90％经过灭菌处理的中国被毛孢发酵液浓缩液和0～20％中国被毛孢菌丝体混合，再加入5～60％糖类进行混合，发酵温度25～35℃之间，发酵6～12个月。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征是所述的发酵液C制备方法为：按质量计，将60～90％沙棘与10～40％糖类混合，发酵温度25～35℃之间，发酵6～12个月。
6.如权利要求1～5任一所述的制备方法，其中所述的发酵液A、发酵液B的制备方法中，可以加入其它发酵原料进行发酵；其中所述的其它发酵原料为水果、蔬菜和/或中药材和/或真菌、益生细菌中的一种或多种或其提取液。
7.如权利要求1、3、4、5所述的制备方法，其中所述的其中所述的糖类为蔗糖、果糖、葡萄糖中的一种或多种。
8.权利要求1所述的制备方法制备得到的中国被毛孢发酵液酵素。
9.含有权利要求8所述的中国被毛孢发酵液酵素的食品、饮料、化妆品、药品。
10.权利要求8所述的中国被毛孢发酵液酵素在制备预防和/或治疗糖尿病的制品中的用途。
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| CN106333199A (zh) * | 2016-08-22 | 2017-01-18 | 内蒙古宇航人高技术产业有限责任公司 | 一种沙棘果蔬复合酵素液的制备方法 |
| CN106520434A (zh) * | 2016-10-25 | 2017-03-22 | 青海珠峰冬虫夏草工程技术研究有限公司 | 一种冬虫夏草水果酒的生产方法 |
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