CN110579553A - 一种参葵通脉颗粒的质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种参葵通脉颗粒的质量检测方法，该方法包括采用HPLC色谱法检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷的含量，并且采用薄层色谱法分别对炙黄芪、丹参、淫羊藿和陈皮进行检测。本发明提供的参葵通脉颗粒的质量检测方法，工艺设计合理，可操作性强，本发明通过大量实验筛选出最佳的参葵通脉颗粒提取工艺，然后通过大量实验筛选出最优的含量测定方法，包括流动性的组成、梯度系统条件等；并且通过筛选筛选，优选出最佳的薄层色谱鉴别方法。该方法具有鉴别速度快、鉴别准确率高，可以全面对参葵通脉颗粒的质量进行控制，对保证参葵通脉颗粒的质量具有重要的意义。

Description

一种参葵通脉颗粒的质量检测方法

技术领域

本发明涉及一种中药复方的质量检测方法，具体涉及一种参葵通脉颗粒的质量检测方法。属于中药检测和质量控制技术领域。

背景技术

参葵通脉方为江苏省中医院李七一教授经验方，它由炙黄芪、灵芝、仙灵脾、桂枝、丹参、黄蜀葵、茯苓和陈皮组成，对心阳不振，血脉瘀阻型慢性心力衰竭属治疗效果显著，关于该制剂的质量检测方法目前还没有报道，为了更好的控制其疗效，很有必要在现有技术的基础之上，设计研发出一种工艺设计合理，可操作性强的质量检测方法。

发明内容

发明目的：本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种工艺设计合理，可操作性强的参葵通脉颗粒质量检测方法。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种参葵通脉颗粒的质量检测方法，包括以下步骤：

(1)参葵通脉颗粒供试品溶液的制备：

按重量份数取炙黄芪200g、灵芝200g、仙灵脾100g、桂枝100g、丹参100g、黄蜀葵100g、茯苓100g和陈皮60g，加水煎煮三次；第一次加总药材重量12倍体积量的水，先浸泡0.5h，然后加热煎煮1.5h，滤过，取滤液；滤渣加12倍体积量水，加热煎煮1.5h，滤过，取滤液；滤渣再加12倍体积量水，煎煮1.5h，滤过，取滤液，合并三次滤液，减压浓缩至60℃相对密度约1.15～1.20，然后在直管式高速离心机上离心，转速：16000r/min，流量：4～6L/min；取离心液，浓缩，然后加甲醇适量，溶解，摇匀，过0.45μm滤膜，得供试品溶液；

(2)混合对照品溶液的制备：

精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷对照品适量，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，超声10min制成质量浓度分别为15.66μg·mL^-1、109.7μg·mL^-1、17.04μg·mL^-1的混合对照品溶液；

(3)标准曲线的绘制：

取步骤(2)的混合对照品溶液，分别稀释2、4、8、10、16、20倍，精密吸取上述系列浓度的对照品混合液各10μl，注入高效液相色谱仪进行分析；以对照品的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标，得毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷的标准曲线方程分别为y＝24.826x+0.3179，r＝0.9999、y＝12.762x-6.1893，r＝0.9999、y＝12.228x+1.3942，r＝0.9999；

(4)含量测定

取步骤(1)的供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪进行分析，根据毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷对照品的保留时间，将相应峰面积代入步骤(3)的准曲线方程中，计算毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷的含量。

作为优选方案，以上所述的参葵通脉颗粒的质量检测方法，步骤(3)和步骤(4)中的色谱条件为：色谱柱:岛津InertSustainAQ-C18，250mm×4.6mm，5μm；流动相：0.1％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱；柱温：35℃；流速：1.0mL·min-1，检测波长286nm；进样体积：10μL。

作为优选方案，以上所述的参葵通脉颗粒的质量检测方法，梯度洗脱条件为：0～30min，85％A→70％A；30～40min，70％A；40-50min，70％A→85％A；50-60min，85％A。

作为优选方案，以上所述的参葵通脉颗粒的质量检测方法，还包括薄层鉴别：

(1)炙黄芪的定性鉴别：

取上述步骤(1)离心后浓缩液1mL，加入25mL甲醇，超声30min，过滤后置于蒸发皿中，105℃水浴蒸干；蒸干后放置常温，加30mL水溶解，转移至分液漏斗中，加入20mL水饱和正丁醇溶液萃取，共3次；用氨试液洗涤合并的正丁醇液3次，每次20mL；待分层，弃去氨液，取正丁醇液蒸干，残渣以甲醇1mL使全部溶解，得参葵通脉炙黄芪供试品溶液；

取1g黄芪对照药材，加50mL甲醇，超声处理30min后，将滤液蒸干，加入15mL水溶解全部残渣，加入20mL水饱和正丁醇溶液萃取，共3次；用氨试液洗涤合并的正丁醇液3次，每次20mL；待分层，弃去氨液，取正丁醇液蒸干，残渣以甲醇1mL使全部溶解，得黄芪对照药材溶液；

吸取参葵通脉炙黄芪供试品溶液和参葵通脉黄芪对照药材溶液各10μl，点于硅胶G薄层板上，以体积比为13:6:2的三氯甲烷-甲醇-10％氢氧化钠溶液的下层溶液为展开剂，以10％硫酸乙醇液显色，于105℃加热至斑点清晰，日光下检视；在相同色谱位置上参葵通脉炙黄芪供试品与黄芪对照药材均显相同颜色的斑点；

(2)丹参定性鉴别

取上述步骤(1)离心后浓缩液1mL，以20ml水稀释，并用稀盐酸调pH至2后，用乙醚萃取2次，每次20ml，合并萃取后收集的乙醚液，105℃水浴挥干，残渣加2ml乙醇溶解，得参葵通脉丹参供试品溶液；

取1g丹参对照药材，加水100ml，煮沸30min，过滤，滤液浓缩至20ml，放至室温，并用稀盐酸调pH至2后，用乙醚萃取2次，每次20ml，合并萃取后收集的乙醚液，105℃水浴挥干，残渣加2ml乙醇溶解，得丹参对照药材溶液；

吸取上述参葵通脉丹参供试品溶液和丹参对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:2:0.1苯-乙酸乙酯-甲酸作为展开剂，喷以1％三氯化铁与1％铁氰化钾1:1混合液后，105℃恒温加热至斑点显色清晰，365nm紫外灯光检视。在相同色谱位置上，参葵通脉丹参供试品与丹参对照药材显相同的紫色斑点；

(3)淫羊藿定性鉴别

取上述步骤(1)离心后浓缩液1ml，加20ml乙醇超声处理20min。过滤，滤液蒸干，残渣加1ml乙醇溶解作为参葵通脉颗粒淫羊藿供试品溶液；

另取淫羊藿对照药材0.5g，加水100ml煮沸30min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇20ml溶解制成淫羊藿对照药材溶液；

吸取参葵通脉颗粒淫羊藿供试品溶液和淫羊藿对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15:10:10的乙酸丁酯-甲酸-水为展开剂，展开，喷以5％三氯化铝，105℃恒温加热至斑点显色清晰，365nm紫外灯光检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点；

(4)陈皮定性鉴别

取上述步骤(1)离心后浓缩液1ml，加20ml甲醇超声处理20min，过滤，滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为参葵通脉颗粒陈皮供试品溶液；

另取陈皮对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声20min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解制作成陈皮对照药材溶液；

吸取参葵通脉颗粒陈皮供试品溶液和陈皮对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15:10:10的乙酸丁酯-甲酸-水为展开剂，展开，喷以5％三氯化铝，105℃恒温加热至斑点显色清晰，365nm紫外灯光检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。

参葵通脉颗粒提取物制备的筛选实验

1、提取物制备：按重量份数取炙黄芪200g、灵芝200g、仙灵脾100g、桂枝100g、丹参100g、黄蜀葵100g、茯苓100g和陈皮60g，加水煎煮三次；第一次加总药材重量12倍体积量的水，先浸泡0.5h，然后加热煎煮1.5h，滤过，取滤液；滤渣加12倍体积量水，加热煎煮1.5h，滤过，取滤液；滤渣再加12倍体积量水，煎煮1.5h，滤过，取滤液，合并三次滤液，减压浓缩至60℃相对密度约1.15～1.20，然后在直管式高速离心机上离心，转速：16000r/min，流量：4～6L/min；取离心液，浓缩，得到。

2、层次分析法确定权重系数

根据参葵通脉活性成分的药理作用及中医辨证分析，本发明比较毛蕊异黄酮葡萄糖苷量、丹酚酸B含量、淫羊藿苷含量和干膏率4个评价指标的相对重要性，并构成两两比较矩阵，见表1。根据表中判断的结果对数据进行归一化处理，计算得毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B、淫羊藿苷和浸膏率得权重系数分别为0.4609、0.3104、0.1560、0.0726。一致性比例因子CR＝0.0407＜0.10，表明此判断矩阵满足一致性要求，权重系数有效。

表1指标成对比较的判断矩阵

3、正交试验设计与结果正交实验设计根据单因素考察试验结果，以提取时间(A)、提取次数(B)和溶剂倍数(C)为考察因素，安排L9(34)正交试验，因素水平表见表2。考察指标为毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B、淫羊藿苷和浸膏率，试验安排及结果见表3，方差分析见表4。综合评分＝[(毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量/毛蕊异黄酮葡萄糖苷最大含量)*0.4609+(丹酚酸B含量/丹酚酸B最大含量)*0.3104+(淫羊藿苷含量/淫羊藿苷最大含量)*0.1560+(浸膏率/浸膏率最大值)*0.0726]*100。

表2因素水平表

表3提取工艺正交试验设计及结果

表4方差分析表

注：F0.01(1，2)＝99，F0.05(1，2)＝19

结果显示，参葵通脉方活性成分提取结果的影响大小顺序为B>C>A>D，即提取次数>溶剂倍数>提取时间。由方差分析可知，因素B提取次数对提取工艺有显著性影响(P<0.05)。以综合评分为考察指标，最佳提取工艺为A3B3C1，即以12倍量水提取3次，每次1.5h。

提取工艺验证：

称取2倍处方量药材，共3份，按最佳提取工艺A3B3C1进行3次验证试验，结果3种活性成分和浸膏率的含量稳定，RSD值均在5％以内(见表5)，表明该工艺可行性高，稳定性好，可用于工艺化生产。

表5提取工艺验证结果

计算毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷的含量分别为53.872、1075.416、643.220μg/mL。

有益效果：本发明提供的参葵通脉颗粒的质量检测方法具有以下优点：

本发明提供的参葵通脉颗粒的质量检测方法，工艺设计合理，可操作性强，本发明通过大量实验筛选出最佳的参葵通脉颗粒提取工艺，然后通过大量实验筛选出最优的含量测定方法，包括流动性的组成、梯度系统条件等；并且通过筛选筛选，优选出最佳的薄层色谱鉴别方法。该方法具有鉴别速度快、鉴别准确率高，可以全面对参葵通脉颗粒的质量进行控制，对保证参葵通脉颗粒的质量具有重要的意义。

附图说明

图1为混合对照品的HPLC色谱图。

图2为参葵通脉颗粒供试品溶液的HPLC色谱图。

具体实施方式

下面通过实施例详细描述本发明，该实施例不应解释为对本发明的限制。

实施例1

一种参葵通脉颗粒的质量检测方法，其包括以下步骤：

(1)参葵通脉颗粒供试品溶液的制备：

按重量份数取炙黄芪200g、灵芝200g、仙灵脾100g、桂枝100g、丹参100g、黄蜀葵100g、茯苓100g和陈皮60g，加水煎煮三次；第一次加总药材重量12倍体积量的水，先浸泡0.5h，然后加热煎煮1.5h，滤过，取滤液；滤渣加12倍体积量水，加热煎煮1.5h，滤过，取滤液；滤渣再加12倍体积量水，煎煮1.5h，滤过，取滤液，合并三次滤液，减压浓缩至60℃相对密度约1.15～1.20，然后在直管式高速离心机上离心，转速：16000r/min，流量：4～6L/min；取离心液，浓缩，然后加甲醇适量，溶解，摇匀，过0.45μm滤膜，得供试品溶液；

(2)混合对照品溶液的制备：

精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷对照品适量，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，超声10min制成质量浓度分别为15.66μg·mL^-1、109.7μg·mL^-1、17.04μg·mL^-1的混合对照品溶液；

(3)标准曲线的绘制：

取步骤(2)的混合对照品溶液，分别稀释2、4、8、10、16、20倍，精密吸取上述系列浓度的对照品混合液各10μl，注入高效液相色谱仪进行分析；如图1，随着分析时间延长，峰依次为毛蕊异黄酮葡萄糖苷，丹酚酸B和淫羊藿苷；以对照品的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标，得毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷的标准曲线方程分别为y＝24.826x+0.3179，r＝0.9999、y＝12.762x-6.1893，r＝0.9999、y＝12.228x+1.3942，r＝0.9999；

(5)含量测定

取步骤(1)的供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪进行分析，如图2，根据毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷对照品的保留时间，将相应峰面积代入步骤(3)的准曲线方程中，计算毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷的含量分别为53.872、1075.416、643.220μg/mL。

步骤(3)和步骤(4)中的色谱条件为：色谱柱:岛津InertSustain AQ-C18，250mm×4.6mm，5μm；流动相：0.1％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱(0～30min，85％A→70％A；30～40min，70％A；40-50min，70％A→85％A；50-60min，85％A)；柱温：35℃；流速：1.0mL·min-1，检测波长286nm；进样体积：10μL。

所述的参葵通脉颗粒的质量检测方法，其还包括薄层鉴别：

(1)炙黄芪的定性鉴别：

取权利要求1中的步骤(1)离心后浓缩液，参葵通脉颗粒供试品溶液1mL，加入25mL甲醇，超声30min，过滤后置于蒸发皿中，105℃水浴蒸干；蒸干后放置常温，加30mL水溶解，转移至分液漏斗中，加入20mL水饱和正丁醇溶液萃取，共3次；用氨试液洗涤合并的正丁醇液3次，每次20mL；待分层，弃去氨液，取正丁醇液蒸干，残渣以甲醇1mL使全部溶解，得参葵通脉炙黄芪供试品溶液；

取1g黄芪对照药材，加50mL甲醇，超声处理30min后，将滤液蒸干，加入15mL水溶解全部残渣，加入20mL水饱和正丁醇溶液萃取，共3次；用氨试液洗涤合并的正丁醇液3次，每次20mL；待分层，弃去氨液，取正丁醇液蒸干，残渣以甲醇1mL使全部溶解，得黄芪对照药材溶液；

吸取参葵通脉炙黄芪供试品溶液和参葵通脉黄芪对照药材溶液各10μl，点于硅胶G薄层板上，以体积比为13:6:2的三氯甲烷-甲醇-10％氢氧化钠溶液的下层溶液为展开剂，以10％硫酸乙醇液显色，于105℃加热至斑点清晰，日光下检视；在相同色谱位置上参葵通脉炙黄芪供试品与黄芪对照药材均显相同颜色的斑点；

(2)丹参定性鉴别

取权利要求1中的步骤(1)离心后浓缩液1mL，加10ml水稀释，并用稀盐酸调pH至2后，用乙醚萃取2次，每次20ml，合并萃取后收集的乙醚液，105℃水浴挥干，残渣加2ml乙醇溶解，得参葵通脉丹参供试品溶液；

取1g丹参对照药材，加水100ml，煮沸30min，过滤，滤液浓缩至20ml，放至室温，并用稀盐酸调pH至2后，用乙醚萃取2次，每次20ml，合并萃取后收集的乙醚液，105℃水浴挥干，残渣加2ml乙醇溶解，得丹参对照药材溶液；

吸取上述参葵通脉丹参供试品溶液和丹参对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:2:0.1苯-乙酸乙酯-甲酸作为展开剂，喷以1％三氯化铁与1％铁氰化钾1:1混合液后，105℃恒温加热至斑点显色清晰，365nm紫外灯光检视。在相同色谱位置上，参葵通脉丹参供试品与丹参对照药材显相同的紫色斑点；

(3)淫羊藿定性鉴别

取权利要求1中的步骤(1)离心后浓缩液1ml，加20ml乙醇超声处理20min。过滤，滤液蒸干，残渣加1ml乙醇溶解作为参葵通脉颗粒淫羊藿供试品溶液；

另取淫羊藿对照药材0.5g，加水100ml煮沸30min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇20ml溶解制成淫羊藿对照药材溶液；

吸取参葵通脉颗粒淫羊藿供试品溶液和淫羊藿对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15:10:10的乙酸丁酯-甲酸-水为展开剂，展开，喷以5％三氯化铝，105℃恒温加热至斑点显色清晰，365nm紫外灯光检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点；

(4)陈皮定性鉴别

取权利要求1中的步骤(1)离心后浓缩液1ml，加20ml甲醇超声处理20min，过滤，滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为参葵通脉颗粒陈皮供试品溶液；

另取陈皮对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声20min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解制作成陈皮对照药材溶液；

吸取参葵通脉颗粒陈皮供试品溶液和陈皮对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15:10:10的乙酸丁酯-甲酸-水为展开剂，展开，喷以5％三氯化铝，105℃恒温加热至斑点显色清晰，365nm紫外灯光检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。

含量测定方法的方法学验证：

1、精密度实验：

取上述混合对照品溶液，按上述色谱条件注入HPLC测定6次，记录毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷的峰面积。精密度RSD见表6，结果显示该方法精密度良好。

2、重复性实验

按上述供试品溶液制备方法，制备得到6份供试品。按上述色谱条件分别注入HPLC进行测定，记录峰面积，RSD见表6，结果显示该方法重复性良好。

3、稳定性实验

取上述供试品溶液，按上述色谱条件，于0h、2h、4h、8h、12h、24h分别进样，测定峰面积。RSD见表6，结果显示供试品溶液在室温放置24h内基本稳定。

表6精密度、重复性及稳定性RSD值

4、回收率实验

取已知3种成分含量的供试品溶液，平行6份，置于50mL容量瓶中，精密加入含有毛蕊异黄酮葡萄糖苷(25.3μg/mL)、丹酚酸B(562.1μg/mL)和淫羊藿苷(324.7μg/mL)的对照品溶液，加甲醇适量，超声(280W，50kHz)，放冷，补足甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，即得。按上述色谱条件测定。结果见表7。

表7加样回收实验结果

毛蕊异黄酮葡萄糖苷加样回收表

丹酚酸B加样回收表

。

以上表明，本发明建立的参葵通脉颗粒的质量检测方法精密度、重复性、稳定性和准确度好，对保证参葵通脉颗粒的质量和临床疗效具有重要的应用价值。

Claims (4)

1.一种参葵通脉颗粒的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)参葵通脉颗粒供试品溶液的制备：

按重量份数取炙黄芪200g、灵芝200g、仙灵脾100g、桂枝100g、丹参100g、黄蜀葵100g、茯苓100g和陈皮60g，加水煎煮三次；第一次加总药材重量12倍体积量的水，先浸泡0.5h，然后加热煎煮1.5h，滤过，取滤液；滤渣加12倍体积量水，加热煎煮1.5h，滤过，取滤液；滤渣再加12倍体积量水，煎煮1.5h，滤过，取滤液，合并三次滤液，减压浓缩至60℃相对密度约1.15～1.20，然后在直管式高速离心机上离心，转速：16000r/min，流量：4～6L/min；取离心液，浓缩，然后加甲醇适量，溶解，摇匀，过0.45μm滤膜，得供试品溶液；

(2)混合对照品溶液的制备：

精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷对照品适量，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，超声10min制成质量浓度分别为15.66μg·mL^-1、109.7μg·mL^-1、17.04μg·mL^-1的混合对照品溶液；

(3)标准曲线的绘制：

取步骤(2)的混合对照品溶液，分别稀释2、4、8、10、16、20倍，精密吸取上述系列浓度的对照品混合液各10μl，注入高效液相色谱仪进行分析；以对照品的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标，得毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷的标准曲线方程分别为y＝24.826x+0.3179，r＝0.9999、y＝12.762x-6.1893，r＝0.9999、y＝12.228x+1.3942，r＝0.9999；

(4)含量测定

取步骤(1)的供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪进行分析，根据毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷对照品的保留时间，将相应峰面积代入步骤(3)的准曲线方程中，计算毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷的含量。

2.根据权利要求1所述的参葵通脉颗粒的质量检测方法，其特征在于：步骤(3)和步骤(4)中的色谱条件为：色谱柱:岛津InertSustain AQ-C18，250mm×4.6mm，5μm；流动相：0.1％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱；柱温：35℃；流速：1.0mL·min-1，检测波长286nm；进样体积：10μL。

3.根据权利要求2所述的参葵通脉颗粒的质量检测方法，其特征在于：梯度洗脱条件为：0～30min，85％A→70％A；30～40min，70％A；40-50min，70％A→85％A；50-60min，85％A。

4.根据权利要求1所述的参葵通脉颗粒的质量检测方法，其特征在于：还包括薄层鉴别：

(1)炙黄芪的定性鉴别：

取权利要求1中的步骤(1)离心后浓缩液，参葵通脉颗粒供试品溶液1mL，加入25mL甲醇，超声30min，过滤后置于蒸发皿中，105℃水浴蒸干；蒸干后放置常温，加30mL水溶解，转移至分液漏斗中，加入20mL水饱和正丁醇溶液萃取，共3次；用氨试液洗涤合并的正丁醇液3次，每次20mL；待分层，弃去氨液，取正丁醇液蒸干，残渣以甲醇1mL使全部溶解，得参葵通脉炙黄芪供试品溶液；

取1g黄芪对照药材，加50mL甲醇，超声处理30min后，将滤液蒸干，加入15mL水溶解全部残渣，加入20mL水饱和正丁醇溶液萃取，共3次；用氨试液洗涤合并的正丁醇液3次，每次20mL；待分层，弃去氨液，取正丁醇液蒸干，残渣以甲醇1mL使全部溶解，得黄芪对照药材溶液；

吸取参葵通脉炙黄芪供试品溶液和参葵通脉黄芪对照药材溶液各10μl，点于硅胶G薄层板上，以体积比为13:6:2的三氯甲烷-甲醇-10％氢氧化钠溶液的下层溶液为展开剂，以10％硫酸乙醇液显色，于105℃加热至斑点清晰，日光下检视；在相同色谱位置上参葵通脉炙黄芪供试品与黄芪对照药材均显相同颜色的斑点；

(2)丹参定性鉴别

取权利要求1中的步骤(1)离心后浓缩液1mL，加20ml水稀释，并用稀盐酸调pH至2后，用乙醚萃取2次，每次20ml，合并萃取后收集的乙醚液，105℃水浴挥干，残渣加2ml乙醇溶解，得参葵通脉丹参供试品溶液；

取1g丹参对照药材，加水100ml，煮沸30min，过滤，滤液浓缩至20ml，放至室温，并用稀盐酸调pH至2后，用乙醚萃取2次，每次20ml，合并萃取后收集的乙醚液，105℃水浴挥干，残渣加2ml乙醇溶解，得丹参对照药材溶液；

吸取上述参葵通脉丹参供试品溶液和丹参对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:2:0.1苯-乙酸乙酯-甲酸作为展开剂，喷以1％三氯化铁与1％铁氰化钾1:1混合液后，105℃恒温加热至斑点显色清晰，365nm紫外灯光检视。在相同色谱位置上，参葵通脉丹参供试品与丹参对照药材显相同的紫色斑点；

(3)淫羊藿定性鉴别

取权利要求1中的步骤(1)离心后浓缩液1ml，加20ml乙醇超声处理20min。过滤，滤液蒸干，残渣加1ml乙醇溶解作为参葵通脉颗粒淫羊藿供试品溶液；

另取淫羊藿对照药材0.5g，加水100ml煮沸30min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇20ml溶解制成淫羊藿对照药材溶液；

吸取参葵通脉颗粒淫羊藿供试品溶液和淫羊藿对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15:10:10的乙酸丁酯-甲酸-水为展开剂，展开，喷以5％三氯化铝，105℃恒温加热至斑点显色清晰，365nm紫外灯光检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点；

(4)陈皮定性鉴别

取权利要求1中的步骤(1)离心后浓缩液1ml，加20ml甲醇超声处理20min，过滤，滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为参葵通脉颗粒陈皮供试品溶液；

另取陈皮对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声20min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解制作成陈皮对照药材溶液；

吸取参葵通脉颗粒陈皮供试品溶液和陈皮对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15:10:10的乙酸丁酯-甲酸-水为展开剂，展开，喷以5％三氯化铝，105℃恒温加热至斑点显色清晰，365nm紫外灯光检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。