CN110578009B - 一种包含人类X染色体40个InDel遗传多态性位点的复合扩增检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种包含人类X染色体40个InDel遗传多态性位点的复合扩增检测试剂盒，通过引物组同时复合扩增40个X染色体InDel位点和1个性别鉴定位点。与传统的STR遗传标记相比，本发明利用的插入缺失遗传标记具有突变率低、灵敏度高的优势；本发明试剂盒涉及的多态性检测位点结合了InDel遗传标记的优点与X染色体特殊的遗传特点，能够为疑难或特殊案件的鉴定提供有效的补充手段。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种检测人类X染色体InDel遗传多态性位点的试剂盒。
背景技术
短串联重复序列（short tandem repeats，STR）分型是目前法医学领域非常重要的技术手段，在DNA数据库建设、个体识别及亲权鉴定方面发挥着不可或缺的作用。但随着人们对STR分型技术的应用越来越广泛，其自身存在的一些技术缺陷也逐渐凸显出来，例如，STR位点的高突变率越来越受到人们的关注，个别位点的突变现象不利于亲权鉴定结果的解释；其次，STR分型的扩增产物片段普遍较长，不利于降解检材的检测分析；再者，具备法医学应用价值的STR位点数目仍然有限，不利于复杂亲缘关系的鉴定等。
插入缺失（insertion-deletion polymorphism，InDel）遗传标记，是由于基因组特定位置插入或缺失一定数目的核苷酸而形成的遗传多态性，其广泛分布于人类基因组中，突变率低；扩增产物片段相对较短，适用于降解检材的检测；因为InDel遗传标记表现为长度多态性，通过对扩增片段的长度分析即能区分不同等位基因，所以利用法医学实验室现有的PCR技术与毛细管电泳分析系统就能实现基因分型，无需额外增加仪器，易于实现与推广；InDel遗传标记在扩增时不会产生影子带或微小突变产物，对分型结果不易造成干扰。
虽然目前关于X-InDel遗传标记的应用在国内外已有一些报道，但能够应用于实际鉴定案例的系统和产品数量仍然不多；而且已报道的一些X-InDel复合扩增检测体系，在检测位点个数方面也没有较大优势，所以仍需要研制开发包含更多检测位点、鉴别能力更强、稳定性更好的多态性基因分型系统。
发明内容
本发明提供一种能够用于检测X染色体插入缺失多态性位点的荧光标记复合扩增试剂盒，能够在一次反应中检测出40个X-InDel位点及1个性别鉴定位点Amelogenin的多态性，为亲权鉴定、个体识别以及高度降解检材的鉴定提供一种新的辅助手段。
一种包含人类X染色体40个InDel遗传多态性位点的复合扩增检测试剂盒，通过引物组同时复合扩增40个X染色体InDel位点和1个性别鉴定位点，所述X染色体InDel位点包括：X-InDel-01(rs3859989)、X-InDel-02(rs57608175)、X-InDel-03(rs4030406)、X-InDel-04(rs3216913)、X-InDel-05(rs2308280)、X-InDel-06(rs59605609)、X-InDel-07(rs56820033)、X-InDel-08(rs79829945)、X-InDel-09(rs16397)、X-InDel-10(rs61260787)、X-InDel-11(rs2307741)、X-InDel-12(rs25581)、X-InDel-13(rs201342692)、X-InDel-14(rs143123845)、X-InDel-15(rs10699224)、X-InDel-16(rs1160845)、X-InDel-17(rs2308033)、X-InDel-18(rs57843641)、X-InDel-19(rs3077884)、X-InDel-20(rs147741942)、X-InDel-21(rs71671860)、X-InDel-22(rs35574346)、X-InDel-23(rs376744795)、X-InDel-24(rs34763847)、X-InDel-25(rs149102585)、X-InDel-26(rs16367)、X-InDel-27(rs10671504)、X-InDel-28(rs58595330)、X-InDel-29(rs16637)、X-InDel-30(rs36094418)、X-InDel-31(rs17394)、X-InDel-32(rs2307707)、X-InDel-33(rs16368)、X-InDel-34(rs3215490)、X-InDel-35(rs60283667)、X-InDel-36(rs3048996)、X-InDel-37(rs35954471)、X-InDel-38(rs363794)、X-InDel-39(rs45449991)、X-InDel-40(rs199731653)，括号中的rs号表示该位点在dbSNP数据库中的编号；所述性别鉴定位点为Amelogenin。各引物对中至少有一条引物的5’端标记有荧光染料。
为了提高检测效率及准确性，复合扩增引物对分为以下四组：
第一组：SEQ ID No.1至SEQ ID No.16、SEQ ID No.81、SEQ ID No.82；
第二组：SEQ ID No.17至SEQ ID No.36；
第三组：SEQ ID No.37至SEQ ID No.56；
第四组：SEQ ID No.57至SEQ ID No.80；
同一组复合扩增引物对标记相同的荧光染料，各组复合扩增引物对标记的荧光染料互不相同。
所述荧光染料选自FAM、HEX、TAMRA或ROX。
上述四组引物对分别使用FAM、HEX、TAMRA、ROX四种不同的荧光染料进行标记。
具体的位点、引物、荧光标记、浓度如下所示：
本发明所述试剂盒用到的分子量内标使用橙色荧光SIZ进行标记。
本发明所述试剂盒中包含的具体组分如下：
由于X染色体具有特殊的遗传方式，即女性的X染色体可以遗传给儿子或女儿，而男性X染色体只遗传给女儿，这种遗传特点使得X染色体在复杂亲缘关系鉴定中具有重要的应用价值，在一些特殊亲权鉴定中甚至有着比常染色体更高的鉴定效能。例如在祖母-孙女关系（缺乏祖父、父亲、母亲参照样本）、同父异母姐妹关系（缺乏父亲参照样本）、可疑父亲与真实父亲存在父子关系等特殊的亲权鉴定案件中，常染色体多态性遗传标记的应用价值有限，需要配合X染色体多态性位点的检测手段才能准确实现。另外，在常规的父女、母子亲权鉴定中，由于突变导致个别基因座不符合孟德尔遗传规律的现象经常存在，此时错误否定亲权的风险会被增大，客观上就需要X染色体遗传标记组成的分型系统来补充当前常染色体遗传标记系统的不足。
基于上述技术方案，本发明所述的复合扩增检测试剂盒具有以下优点：
（1）与传统的STR遗传标记相比，本发明采用的插入缺失遗传标记具有突变率低、灵敏度高的优势；本发明试剂盒涉及的多态性检测位点结合了InDel遗传标记的优点与X染色体特殊的遗传特点，能够为疑难或特殊案件的鉴定提供有效的补充手段。
（2）引物组采用FAM、HEX、TAMRA、ROX四种不同的荧光染料进行标记，而分子量内标使用橙色荧光SIZ进行标记，利用五色荧光标记检测系统，实现对40个X-InDel多态性位点及1个性别鉴定位点的同时扩增检测，具有良好的鉴别能力。
（3）试剂盒中的复合扩增体系，产物片段长度较短，均在300bp以内，针对降解检材具有良好的分型效率。
（4）样本兼容性较好，适用于血液、唾液斑、毛发、脱落细胞等多种样本类型的检测。
附图说明
图1为实施例1所述包含人类X染色体40个InDel遗传多态性位点的复合扩增检测试剂盒的检测位点排布图；
图2为实施例2所述灵敏度测试实验结果；
图3为实施例3中祖母（a）、母亲（b）与孙女（c）的X-Indel分型图谱；
图4为实施例4中常规STR分型试剂盒对降解样本的分型图谱（a）与实施例1所述复合扩增检测试剂盒对降解样本的分型图谱（b）；
图5为实施例5中40个X-InDel位点在汉族男性人群中的等位基因频率。
具体实施方式
下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件（例如参考J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社）或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：一种包含人类X染色体40个InDel遗传多态性位点的复合扩增检测试剂盒。
1）引物的设计
1-1）40个X-InDel多态性位点的筛选
依据美国国家生物技术信息中心 (National Center for BiotechnologyInformation，NCBI)建立的dbSNP数据库，结合相关文献报道，按照拟定的 InDel 多态性位点筛选条件，从长约150 Mb的X染色体上筛选出40个InDel多态性位点，保证其近乎均衡分布于X染色体上，并具有相当距离的间隔。在此基础，增加Amelogenin作为性别鉴定位点。X-InDel位点的具体筛选标准如下所示：①X-InDel等位基因片段长度差异（插入或缺失的碱基数目）介于3~30bp之间；②位于X染色体内含子区域；③dbSNP数据库中该InDel遗传多态性位点的最低等位基因频率（Minor Allele Frequency，MAF）基本位于0.3-0.5之间；④在中国人群中分布复合Hardy-Weinberg遗传平衡。
根据筛选标准获得的40个X染色体插入缺失位点依次为：X-InDel-01(rs3859989)、X-InDel-02(rs57608175)、X-InDel-03(rs4030406)、X-InDel-04(rs3216913)、X-InDel-05(rs2308280)、X-InDel-06(rs59605609)、X-InDel-07(rs56820033)、X-InDel-08(rs79829945)、X-InDel-09(rs16397)、X-InDel-10(rs61260787)、X-InDel-11(rs2307741)、X-InDel-12(rs25581)、X-InDel-13(rs201342692)、X-InDel-14(rs143123845)、X-InDel-15(rs10699224)、X-InDel-16(rs1160845)、X-InDel-17(rs2308033)、X-InDel-18(rs57843641)、X-InDel-19(rs3077884)、X-InDel-20(rs147741942)、X-InDel-21(rs71671860)、X-InDel-22(rs35574346)、X-InDel-23(rs376744795)、X-InDel-24(rs34763847)、X-InDel-25(rs149102585)、X-InDel-26(rs16367)、X-InDel-27(rs10671504)、X-InDel-28(rs58595330)、X-InDel-29(rs16637)、X-InDel-30(rs36094418)、X-InDel-31(rs17394)、X-InDel-32(rs2307707)、X-InDel-33(rs16368)、X-InDel-34(rs3215490)、X-InDel-35(rs60283667)、X-InDel-36(rs3048996)、X-InDel-37(rs35954471)、X-InDel-38(rs363794)、X-InDel-39(rs45449991)、X-InDel-40(rs199731653)，性别鉴定位点为Amelogenin；其中括号中的rs号表示该位点在dbSNP数据库中的编号。筛选所得的检测位点排布如图1所示，其扩增所得的产物片段长度较短，均在300bp以内。
1-2）X-InDel位点引物序列的确定
基于Amelogenin位点和上述筛选的X-InDel位点所设计的引物组如SEQ NO IDNo.01-82所示。各引物对的Tm值相接近，保证在同一退火温度下具有近似的扩增效率；同时引物之间不会形成发夹结构、二聚体结构，以免影响扩增效率；引物序列中不存在SNP位点，有效避免SNP位点导致的扩增失败或影响扩增效率。
2）引物浓度优化
由于每个多态性位点的扩增产物片段大小和引物的扩增效率差别较大，要使试剂盒中每个位点间的检测结果达到较好的均衡性，就需要对各个位点的引物进行浓度优化。具体优化结果如下：
3）复合扩增检测试剂盒的建立
在确立了引物浓度后建立复合扩增检测试剂盒。所述复合扩增检测试剂盒中含有PCR反应缓冲液2.5×Reaction Mix，1mL，Mix成分包含Tris-HCl缓冲液，Mg2+、KCl+、dNTPs以及PCR增强剂；基因组DNA，10ng；引物混合物，0.5mL；5U/μL的热启动Taq酶，100μL；sdH2O，0.925mL。
4）复合扩增检测试剂盒的应用
包括如下步骤：
扩增体系：
扩增程序：
毛细管电泳检测PCR产物：将12.0μL去离子甲酰胺与0.5μL AGCU Marker SIZ-500混合，加入1.0μL扩增产物或X-InDel Ladder标准品，混匀后3000 r/min离心1min，95℃变性3分钟后冰浴3min，电泳检测。
实施例2：包含人类X染色体40个InDel遗传多态性位点的复合扩增检测试剂盒的灵敏度测试。
以实施例1所述复合扩增检测试剂盒进行灵敏度测试，配制扩增体系时将标准基因组DNA的模板量分别设定为1ng、0.5ng、0.25ng、0.125ng、62.5pg、31.25pg。按照实施例1所述的扩增体系与程序进行扩增检测。获得的检测结果如图2所示：当模板量高于或等于62.5pg时，各检测位点均能正常出峰，且色间峰高的均衡性良好；当模板量进一步降低至31.25pg时， rs16637、rs36094418两个位点的等位基因峰高低于分析阈值；说明本发明所述试剂盒有效检测样本的灵敏度为62.5pg。
实施例3：祖母-母亲-孙女亲缘关系鉴定。
样本来源为志愿者提供，样本类型为唾液斑；DNA采用chelex-100法进行提取。取2×1.2mm唾液斑，加入80μL浓度为5%的chelex-100溶液，56℃孵育30min，充分震荡后，95℃保温8min，震荡混匀，12000rpm离心取上清。
扩增检测：按照实施例1所述的扩增条件与检测条件进行。
应用毛细管电泳检测分析系统对扩增产物进行检测，并采用数据分析软件GeneMapper® ID-X对结果进行分析。
分型图谱如图3所示，图中a、b、c分别为祖母、母亲与孙女的X-InDel；具体分型结果如下所示：
结果显示：孙女与母亲在每个X-InDel位点上均有一个相同的等位基因；同时，孙女与祖母在每个X-InDel位点上也均有一个相同的等位基因。由于孙女X染色体位点的等位基因应一半来自母亲，一半来自父亲，而父亲的X-InDel等位基因从祖母中得来，因此判定，本案例不排除该祖母与孙女存在亲祖孙关系。
实施例4：对降解样本进行检测分析。
收集高度降解样本；分别利用常规STR分型试剂盒（专利ZL201310364183.0）、实施例1所述复合扩增检测试剂盒对高度降解样本进行PCR扩增，均按照各试剂盒适合的扩增条件进行；扩增结果通过毛细管电泳检测分析系统进行检测，并采用软件GeneMapper® ID-X进行分析；结果如图4所示。
图4中a为常规STR分型试剂盒对高度降解样本的分型图谱，其在CFS1PO、Penta D、D18S51、D6S1043、FGA等多个大片段位点处出现检测失败或等位基因丢失现象。
图4中b为利用实施例1所述复合扩增检测试剂盒对高度降解样本的分型图谱，结果显示除rs56820033位点以外，其他所有位点的全部等位基因均检测成功；由此说明，本发明所述试剂盒对于降解检材的分型鉴定具有较好的优势。
实施例5：统计40个X-InDel位点在汉族男性群体中的遗传学参数。
为进一步验证本发明所述复合扩增检测体系的个体识别能力，随机收集150份汉族男性样本，按照实施例1所述的实验条件进行检测，得出40个X-InDel位点的基因分型；
计算40个X-InDel位点的等位基因频率（Allelic Frequency，AF）、个体识别率（Discrimination Power，DP）、累计个体识别率（Cumulative Discrimination Power,CDP）、三联体平均排除率（MECTrio）、二联体平均排除率（MECDuo）等遗传学参数；
图5为40个X-InDel位点在汉族男性人群中的等位基因频率；其中，该群体平均FIns为0.5140。
下表为40个X-InDel位点在汉族男性人群中的群体遗传学参数：
在汉族男性群体中，40个X-InDel位点的累计个体识别率CDP为0.999999999754018；40个X-InDel位点的MECTrio为0.99999986，MECDuo为0.99992。
SEQUENCE LISTING
<110> 广东华美众源生物科技有限公司;广州市刑事科学技术研究所;无锡中德美联生物技术有限公司
<120> 一种包含人类X染色体40个InDel遗传多态性位点的复合扩增检测试剂盒
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 33
gtctgcttac agggcttaag g 21
<210> 34
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 34
atattttgaa acaaattgta tt 22
<210> 35
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 35
caacacaacc cagactttat gc 22
<210> 36
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 36
tggtgtagtg gttaagcatg ca 22
<210> 37
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 37
agcaagagac taaaaagaaa cca 23
<210> 38
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 38
aagtctctct ttggcctttg ct 22
<210> 39
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 39
aaaaagaatt caacctgcca tac 23
<210> 40
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 40
atctctgagt agaaagtagt gatg 24
<210> 41
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 41
tgtcattagt taagggtcag ggtc 24
<210> 42
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 42
tcctcttccc taatcaaaat caaat 25
<210> 43
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 43
tgagtatctt tgcaaatgta t 21
<210> 44
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 44
ggcttaaatc aaaacttatt gaac 24
<210> 45
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 45
cccctctcct gggcacgtg 19
<210> 46
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 46
ggacgaggcg ggagttc 17
<210> 47
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 47
tggtctttga ttcctcagcc tcca 24
<210> 48
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 48
tctatatact caaattctaa tct 23
<210> 49
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 49
aagtccatac tgattaaata tg 22
<210> 50
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 50
gacatgtcca agcttatttc ag 22
<210> 51
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 51
taaaatagaa ggacattata tgtaa 25
<210> 52
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 52
ccaaagtgct gagattgcag g 21
<210> 53
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 53
cttcttgtgt tcttacacag 20
<210> 54
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 54
acatttgggg tagcatactg tca 23
<210> 55
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 55
aacatttgtc tgaccagtgc aaaa 24
<210> 56
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 56
cttcccccgc cccacaaaat actt 24
<210> 57
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 57
atgaagtctg gtattggctt taaaa 25
<210> 58
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 58
ttttatttcc tcacttctcc acc 23
<210> 59
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 59
tgttaaatca ccctagttct a 21
<210> 60
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 60
taacatggaa tgtttgtata 20
<210> 61
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 61
aatgatacct tcaaaatcgg c 21
<210> 62
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 62
cttgtgaaaa gtcttccaaa 20
<210> 63
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 63
ggttacactc aggctgcctg ggat 24
<210> 64
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 64
caaaagaaaa gcagtaaaaa gca 23
<210> 65
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 65
atttgaatgt tcgtgtcttt 20
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 66
aaaagggcaa aataaggcct a 21
<210> 67
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 67
agatgtaaat attgttaaca ta 22
<210> 68
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 68
acaatacaac tttctatgtc ttc 23
<210> 69
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 69
tctcgtgacg aatgatgtaa aag 23
<210> 70
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 70
aacttaatgt ctatttaata 20
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 71
ttgaataaat ctttaccaca aa 22
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
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gaaaatagca aatgttcata ta 22
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<211> 20
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<213> 人工序列
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ccataaatta tcatcacaat 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 74
acacaatcaa tcaaaatatg aata 24
<210> 75
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 75
ataaattagg gagtaaaagt t 21
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<211> 21
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<213> 人工序列
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cttgtttact ttatctcaga t 21
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<212> DNA
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ttctatctaa ctatgtgtct g 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 78
gtttgcttga tcctgagagg t 21
<210> 79
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 79
ttatcatatc aacccaatac a 21
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 80
aatatataag tttcatttcc ct 22
<210> 81
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 81
attttgacca ttgtttgcgt taac 24
<210> 82
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 82
taggaactgt aaaatcagga ccac 24
Claims (8)
1.一种包含人类X染色体40个InDel遗传多态性位点的复合扩增检测试剂盒，其特征在于，通过引物组同时复合扩增40个X染色体InDel位点和1个性别鉴定位点，所述X染色体InDel位点在dbSNP数据库中的编号包括：rs3859989、rs57608175、rs4030406、rs3216913、rs2308280、rs59605609、rs56820033、rs79829945、rs16397、rs61260787、rs2307741、rs25581、rs201342692、rs143123845、rs10699224、rs1160845、rs2308033、rs57843641、rs3077884、rs147741942、rs71671860、rs35574346、rs376744795、rs34763847、rs149102585、rs16367、rs10671504、rs58595330、rs16637、rs36094418、rs17394、rs2307707、rs16368、rs3215490、rs60283667、rs3048996、rs35954471、rs363794、rs45449991、rs199731653；所述性别鉴定位点为Amelogenin；
所述引物组包括：扩增rs3859989的引物对SEQ ID No.01和SEQ ID No.02，浓度均为0.07μM；扩增rs57608175的引物对SEQ ID No.03和SEQ ID No.04，浓度均为0.07μM；扩增rs4030406的引物对SEQ ID No.05和SEQ ID No.06，浓度均为0.04μM；扩增rs3216913的引物对SEQ ID No.07和SEQ ID No.08，浓度均为0.06μM；扩增rs2308280的引物对SEQ IDNo.09和SEQ ID No.10，浓度均为0.07μM；扩增rs59605609的引物对SEQ ID No.11和SEQ IDNo.12，浓度均为0.10μM；扩增rs56820033的引物对SEQ ID No.13和SEQ ID No.14，浓度均为0.20μM；扩增rs79829945的引物对SEQ ID No.15和SEQ ID No.16，浓度均为0.05μM；扩增rs16397的引物对SEQ ID No.17和SEQ ID No.18，浓度均为0.08μM；扩增rs61260787的引物对SEQ ID No.19和SEQ ID No.20，浓度均为0.10μM；扩增rs2307741的引物对SEQ ID No.21和SEQ ID No.22，浓度均为0.08μM；扩增rs25581的引物对SEQ ID No.23和SEQ ID No.24，浓度均为0.08μM；扩增rs201342692的引物对SEQ ID No.25和SEQ ID No.26，浓度均为0.13μM；扩增rs143123845的引物对SEQ ID No.27和SEQ ID No.28，浓度均为0.08μM；扩增rs10699224的引物对SEQ ID No.29和SEQ ID No.30，浓度均为0.09μM；扩增rs1160845的引物对SEQ ID No.31和SEQ ID No.32，浓度均为0.13μM；扩增rs2308033的引物对SEQ IDNo.33和SEQ ID No.34，浓度均为0.07μM；扩增rs57843641的引物对SEQ ID No.35和SEQ IDNo.36，浓度均为0.07μM；扩增rs3077884的引物对SEQ ID No.37和SEQ ID No.38，浓度均为0.09μM；扩增rs147741942的引物对SEQ ID No.39和SEQ ID No.40，浓度均为0.05μM；扩增rs71671860的引物对SEQ ID No.41和SEQ ID No.42，浓度均为0.13μM；扩增rs35574346的引物对SEQ ID No.43和SEQ ID No.44，浓度均为0.15μM；扩增rs376744795的引物对SEQ IDNo.45和SEQ ID No.46，浓度均为0.13μM；扩增rs34763847的引物对SEQ ID No.47和SEQ IDNo.48，浓度均为0.06μM；扩增rs149102585的引物对SEQ ID No.49和SEQ ID No.50，浓度均为0.15μM；扩增rs16367的引物对SEQ ID No.51和SEQ ID No.52，浓度均为0.10μM；扩增rs10671504的引物对SEQ ID No.53和SEQ ID No.54，浓度均为0.15μM；扩增rs58595330的引物对SEQ ID No.55和SEQ ID No.56，浓度均为0.18μM；扩增rs16637的引物对SEQ IDNo.57和SEQ ID No.58，浓度均为0.14μM；扩增rs36094418的引物对SEQ ID No.59和SEQ IDNo.60，浓度均为0.31μM；扩增rs17394的引物对SEQ ID No.61和SEQ ID No.62，浓度均为0.08μM；扩增rs2307707的引物对SEQ ID No.63和SEQ ID No.64，浓度均为0.16μM；扩增rs16368的引物对SEQ ID No.65和SEQ ID No.66，浓度均为0.10μM；扩增rs3215490的引物对SEQ ID No.67和SEQ ID No.68，浓度均为0.15μM；扩增rs60283667的引物对SEQ IDNo.69和SEQ ID No.70，浓度均为0.06μM；扩增rs3048996的引物对SEQ ID No.71和SEQ IDNo.72，浓度均为0.15μM；扩增rs35954471的引物对SEQ ID No.73和SEQ ID No.74，浓度均为0.10μM；扩增rs363794的引物对SEQ ID No.75和SEQ ID No.76，浓度均为0.10μM；扩增rs45449991的引物对SEQ ID No.77和SEQ ID No.78，浓度均为0.10μM；扩增rs199731653的引物对SEQ ID No.79和SEQ ID No.80，浓度均为0.20μM；扩增Amelogenin的引物对SEQ IDNo.81和SEQ ID No.82，浓度均为0.07μM；各引物对中至少有一条引物的5’端标记有荧光染料；
复合扩增引物对分为四组：
第一组：SEQ ID No.1至SEQ ID No.16、SEQ ID No.81、SEQ ID No.82；
第二组：SEQ ID No.17至SEQ ID No.36；
第三组：SEQ ID No.37至SEQ ID No.56；
第四组：SEQ ID No.57至SEQ ID No.80；
同一组复合扩增引物对标记相同的荧光染料，各组复合扩增引物对标记的荧光染料互不相同。
2.根据权利要求1所述的包含人类X染色体40个InDel遗传多态性位点的复合扩增检测试剂盒，其特征在于，所述荧光染料选自FAM、HEX、TAMRA或ROX。
3.根据权利要求2所述的包含人类X染色体40个InDel遗传多态性位点的复合扩增检测试剂盒，其特征在于，扩增第一组位点的引物对采用FAM标记；扩增第二组位点的引物对采用HEX标记；扩增第三组位点的引物对采用TAMRA标记；扩增第四组位点的引物对采用ROX标记。
4.根据权利要求1所述的包含人类X染色体40个InDel遗传多态性位点的复合扩增检测试剂盒，其特征在于，还包括用于40个X染色体InDel位点及1个性别鉴定位点复合扩增的扩增组分：2.5×Reaction Mix、5U/μL的热启动Taq酶、sdH2O。
5.根据权利要求4所述的包含人类X染色体40个InDel遗传多态性位点的复合扩增检测试剂盒，其特征在于，还包括复合扩增位点的等位基因分型标准物混合物和荧光分子量标准品AGCU Marker SIZ-500。
6.根据权利要求4或5所述的包含人类X染色体40个InDel遗传多态性位点的复合扩增检测试剂盒，其特征在于，采用PCR复合扩增，经毛细管电泳检测扩增产物。
7.根据权利要求6所述的包含人类X染色体40个InDel遗传多态性位点的复合扩增检测试剂盒，其特征在于，所述扩增产物长度小于300bp。
8.权利要求1～7任一项所述的包含人类X染色体40个InDel遗传多态性位点的复合扩增检测试剂盒在亲权鉴定、个体识别以及高度降解检材鉴定中的应用。
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| PB01 | Publication | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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