CN111575386B - 一种检测人y-snp基因座的荧光复合扩增试剂盒及应用 - Google Patents
一种检测人y-snp基因座的荧光复合扩增试剂盒及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种检测人Y‑SNP基因座的荧光复合扩增试剂盒，基于一代测序平台使用49组引物组同管扩增49个Y‑SNP基因座，所述49个Y‑SNP基因座为M1746、M119、F333、CTS7370、F3288、CTS4588、F4084、SK1590、M268、M1470、Page59、M122、F1876、CTS1872、F117、P201、P164、M1546、CTS6773、CTS244、CTS11043、Z16480、F1906、F2497、M174、M15、P47、CTS2728、CTS131、M232、CTS4308、CTS270、CTS10760、Z1936、B197、M2019、F1008、CTS207、L62、L278、L985、M60、M168、F1329、F929、M9、M526、M2317、P295，以及对应的复合扩增序列。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种检测人类Y染色体SNP基因座的荧光复合扩增试剂盒，以及该试剂盒的应用。
背景技术
随着Y-STR数据库的建立和现场案件的应用推广，Y-STR作为案件检测标记的使用越来越广泛。但由于位点数量限制，Y-STR比对过程中出现无效比中的情况越来越多。为此，需要一种新型遗传标记进行补充，提高现场物证样本的比中率。
作为第三代遗传标记的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)是指在基因组上单个核苷酸的变异，包括转换、颠换、缺失和插入而形成的遗传标记，其数量很多，多态性丰富。与STR相比，SNP具有数量多、突变率低、遗传稳定、易于自动化、适用于高度降解检材分析等优点，其应用于法医学检案的优越性越来越明显，如用于推测样本的族源、识别身体特征等。Y-SNP复合扩增体系的构建可对法医现场案件样本检测后比中同一Y-STR分型的个体做出进一步确认，在现有法医物证常规检验设备和方法的基础上，增加有效比中率，提高个体识别精准度。此外，对于现场微量降解样本，Y-SNP复合扩增体系也能发挥其识别效果，解决常规试剂盒检测降解样本效果差的难题。
目前，法医遗传学领域，尚无适合东亚群体可快速检测的Y-SNP复合检测体系。现有检测Y-SNP的方法主要基于微测序技术(SNaPshot技术)和二代测序技术，这两种检测技术都存在检测时间长(1-3天时间)、操作步骤多、过程繁琐，而且检测样本需要提取纯化，无法实现直接扩增，加上高额的仪器及耗材费用，难以大规模普及应用。所以，亟需筛选到一组适宜的Y染色体SNP遗传标记，构建一种既操作简单、检测耗时少，又能实现样本快速批量检测的高效能Y-SNP单倍型检测体系，应用于中国人群法医遗传学研究。本发明提供的试剂盒能适应当前案件现场的复杂性，抗干扰能力强，灵敏度高，为破案提供线索与证据，满足刑侦快速、高效工作需求。
发明内容
本发明提供一种检测人Y-SNP基因座的荧光复合扩增试剂盒，该试剂盒特异性好，灵敏度高，抗干扰能力强，可以应用于男性个体识别、家系搜索、族源推断及降解检材的检测。
一种检测人Y-SNP基因座的荧光复合扩增试剂盒，基于一代测序平台使用49组引物组同管扩增49个Y-SNP基因座。所述49个Y-SNP基因座、对应的引物组以及引物组的终浓度分别为：
；各所述引物组中至少一条引物的5’端标记有荧光染料，同一群组使用相同的荧光染料标记，各群组的荧光染料标记不相同。除去扩增M15基因座的为引物对外，其余Y-SNP基因座均采用“三引物”扩增方法，即一条标记荧光素的公共引物，一条野生型非标记引物和一条突变型非标记引物。扩增产物无需处理，直接采用法医领域常用的毛细管电泳检测即可获得结果。
进一步，所述荧光染料选自FAM、HEX、TAMRA、SUM或VIG。
优选地，第一群组采用FAM荧光染料标记；第二组群组采用HEX荧光染料标记；第三群组采用TAMRA荧光染料标记；第四群组采用SUM荧光染料标记；第五群组采用VIG荧光染料标记。
进一步，所述检测人Y-SNP基因座的荧光复合扩增试剂盒还包括复合扩增体系，所述复合扩增体系包括Reaction Mix、热启动U-Taq酶和sdH2O。所述Reaction Mix所含组分：终浓度25-50mM的PH 8.0的Tris-HCl，终浓度20-50mM的KCl，终浓度1.5-3.5mM的MgCl2，终浓度0.15-0.35mM的dNTPs，2％-8％的甘油，终浓度0.5-2mg/mL的SBS，终浓度0.05-0.5mM的(NH4)2SO4。对应的扩增程序为：
进一步，经上述复合扩增反应所得的扩增产物长度均小于180bp。
上述检测人Y-SNP基因座的荧光复合扩增试剂盒可以应用于男性个体识别、家系搜索、族源推断的法医学复合检测，适合法医学常见的降解检材的检测。
基于上述技术方案，本发明所述的复合扩增检测试剂盒具有以下优点：
1、本发明通过前期基础实验及数据统计分析，优选人群中高频的49个Y-SNP基因座，这些基因座可以用于男性个体识别、家系搜索，又可以应用于推断未知样本的族源。
2、所述检测人Y-SNP基因座的荧光复合扩增试剂盒可实现2.5小时内快速批量检测90个样本，且每个样本检测49个Y-SNP基因座，检测效率大大提高；而且整个操作和结果分析方法完全兼容目前法医DNA实验室普及的PCR-毛细管电泳平台，操作方法简单、易于掌握。
3、该试剂盒使用的“三引物法”及扩增体系，具有优选特异性好、抗干扰强的复合扩增引物，可实现样本Y-SNP检测免提取直接扩增，即血液样本直接扩增，而且扩增片段短，适合高度降解DNA模板的检测。
附图说明
图1是实施例4所述样本血斑直接扩增分型图；
图2是实施例5所述不同族群的主要Y-SNP单倍群分布情况图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件(例如参考J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社)或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：49个Y-SNP基因座的筛选。
测试Y染色体进化树上大支单倍群位点，分析汉族及其他族群分型结果，统计每个族群单倍群分布情况，结合ISOGG数据库和文献报道信息，筛选东亚和世界其他族群高频基因座，最终筛选49个Y-SNP位点用于扩增体系构建。
所筛选的49个Y-SNP基因座信息如下：
实施例2：Y-SNP基因座“三引物”设计。
“三引物”设计的基本思路是设计两条非标记引物和一条共用的荧光素标记引物。将等位基因特异性碱基置于非标记引物3'末端，如果非标记3'末端特异性碱基与受检样本DNA基因型正确互补配对，则扩增正常；反之，如果非标记引物3'末端的特异性碱基与受检样本DNA基因型错误配对，由于C-Taq DNA聚合酶缺乏3'-5'外切校正活性，DNA链延伸反应就会因为3'-5'-磷酸二酯键形成障碍而受阻，导致无法扩增。由于引物3'末端特异性碱基不同错配效率不同，因此有些特异性碱基即使发生错配也会出现弱效率的扩增，可以在非标记引物设计时引入错配碱基或对3'末端特异性碱基进行化学修饰，以便提高“三引物”扩增的特异性。其中仅有M15基因座是插入缺失位点，因此无需采用“三引物”扩增，只要一对引物即可实现检测目的。
所设计的49个Y-SNP基因座引物序列和荧光标记信息如下：
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实施例3：PCR反应buffer和扩增程序调节。
(1)PCR反应的buffer(即Reaction Mix)包含扩增反应所必须的各种离子和dNTP混合物，根据PCR需要还可以添加一些特异性PCR增强剂。但是为了能够提高PCR反应的扩增特异性、扩增效率以及抗干扰能力，需要对以上各种组分进行浓度的优化。
本发明试剂盒中PCR反应buffer包含的组分优化的浓度范围如下表。
(2)PCR扩增程序和普通PCR一样，需要进行变性、退火、延伸三个步骤的循环，才能富集目的片段。具体扩增程序为：
实施例4：扩增反应体系及数据分析。
本试剂盒中扩增体系组分及含量见下表：
1μL PCR产物，9.5μL去离子甲酰胺和0.5μL AGCU SIZ-500，混匀，95℃3min并立即冰浴3min。使用3500XL型基因分析仪以1.2kv，28s的进样模式进行电泳，整个电泳时间30-40min。电泳数据通过GeneMapper IDX v 1.4分析软件进行等位基因分型。标准血卡直扩检测结果如图1所示，图中自上而下分别为第一群组、第二群组、第三群组、第四群组和第五群组的图谱。
实施例5：不同家系男性个体样本测试。
选取三个不同家系男性个体样本，按实施例4提供的方法进行扩增产物分析，结果如下表：
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结果显示，不同家系样本在49个位点的分型相互有所不同，证明本试剂盒有家系区分的能力。试剂盒完全兼容目前法医DNA实验室普及的PCR-毛细管电泳平台，操作方法简单、易于掌握；同时，本试剂盒优选特异性好、抗干扰强的复合扩增引物，可实现样本Y-SNP检测免提取直接扩增。
实施例6：不同族群样本测试
本试剂盒通过对瑶族、侗族、苗族、土家族及汉族5个族群共300多人份样本扩增-电泳检测-数据分析，最后统计主要单倍群在各族群中分布情况，如图2所示。本实施例测试不同民族的遗传信息，可以发现不同单倍群在不同人群中的差异，所以本发明所述检测人Y-SNP基因座的荧光复合扩增试剂盒对于不同族群有一定的区分能力，可用于家系搜索/族群推断。
SEQUENCE LISTING
<110> 广州市刑事科学技术研究所;广东华美众源生物科技有限公司
<120> 一种检测人Y-SNP基因座的荧光复合扩增试剂盒及应用
<130> 2019
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<170> PatentIn version 3.5
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<210> 62
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 62
gcagtcgagt tgtaactaga tc 22
<210> 63
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 63
attgcagtcg agttgtaact agata 25
<210> 64
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 64
tgcatatgat gtatagatt 19
<210> 65
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 65
tacctgactt caaagtaca 19
<210> 66
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 66
atttacctga cttcaaagta cg 22
<210> 67
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 67
agtctagaaa gcagtggca 19
<210> 68
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 68
ctgacacagg acaggtgag 19
<210> 69
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 69
attctgacac aggacaggtg aa 22
<210> 70
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 70
ctcccatcta ccctagaac 19
<210> 71
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 71
ggctctggtc ctttttcta 19
<210> 72
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 72
attggctctg gtcctttttc tg 22
<210> 73
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 73
cactaaaatt tgacgttca 19
<210> 74
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 74
acccctcact tctgcacta 19
<210> 75
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 75
attacccctc acttctgcac tg 22
<210> 76
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 76
cagagcacaa atcctgaac 19
<210> 77
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 77
catgcgcata tacaatcaa 19
<210> 78
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 78
ttaaatgagg cccaccac 18
<210> 79
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 79
agattgagat ttaagtcagc ag 22
<210> 80
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 80
attagattga gatttaagtc agcaa 25
<210> 81
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 81
attcttgtct tagagatgct ga 22
<210> 82
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 82
ccctgttccc aaacccaa 18
<210> 83
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 83
attccctgtt cccaaaccca g 21
<210> 84
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 84
aagcattcaa ttaataaagc cgtc 24
<210> 85
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 85
tcagtgaact ccaaataaag atac 24
<210> 86
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 86
atttcagtga actccaaata aagatat 27
<210> 87
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 87
accacaacag gcaaacctta a 21
<210> 88
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 88
ctagttgaaa tttattgacg atgg 24
<210> 89
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 89
attctagttg aaatttattg acgatga 27
<210> 90
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 90
aagaaaagca gacttaaagt c 21
<210> 91
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 91
attagttcag gctacaatac g 21
<210> 92
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 92
atgattatta gttcaggcta caataca 27
<210> 93
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 93
caacccagta ccagaaatga a 21
<210> 94
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 94
gaatggtgtt tgtgtccaaa t 21
<210> 95
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 95
attgaatggt gtttgtgtcc aaag 24
<210> 96
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 96
ttcaacatag taaaggccat a 21
<210> 97
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 97
cttttgttgc tctgctttgg 20
<210> 98
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 98
attcttttgt tgctctgctt tgt 23
<210> 99
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 99
atattaaaaa ggagtctggc 20
<210> 100
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 100
tctaaatttt tgaagtcccg 20
<210> 101
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 101
atttctaaat ttttgaagtc cca 23
<210> 102
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 102
acctttagct agattgacta aga 23
<210> 103
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 103
gtataaaatt cattaatgcc tct 23
<210> 104
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 104
attgtataaa attcattaat gcctcc 26
<210> 105
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 105
tatactctgg tgtgttgttg c 21
<210> 106
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 106
ctggggtctc aggtatgatt c 21
<210> 107
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 107
attctggggt ctcaggtatg attt 24
<210> 108
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 108
atccagtgtg tgtctgcttt 20
<210> 109
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 109
ctccagtagt aaaaagatgg ac 22
<210> 110
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 110
attcctccag tagtaaaaag atggaa 26
<210> 111
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 111
ttacccaggc tggagtgc 18
<210> 112
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 112
atggtggtgt gcacctgc 18
<210> 113
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 113
attatggtgg tgtgcacctg t 21
<210> 114
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 114
acaatctgtt ctccaatcc 19
<210> 115
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 115
tacccgtgtc tgaaattct 19
<210> 116
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 116
atttacccgt gtctgaaatt cc 22
<210> 117
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 117
atataaatag gtaagagaaa ctcct 25
<210> 118
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 118
gaaacacact ctgaaacaca t 21
<210> 119
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 119
attgaaacac actctgaaac acac 24
<210> 120
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 120
cttacaggtt ttgggaagg 19
<210> 121
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 121
ctaactgatc aatgtacttt gtc 23
<210> 122
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 122
attctaactg atcaatgtac tttgta 26
<210> 123
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 123
taaacacata cagactctgt cttt 24
<210> 124
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 124
taaccactgt gtgcctgat 19
<210> 125
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 125
atttaaccac tgtgtgcctg a 21
<210> 126
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 126
tgcagagagc ttggagataa tt 22
<210> 127
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 127
tgttttaatt cttcagctag ca 22
<210> 128
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 128
atttgtttta attcttcagc tagcg 25
<210> 129
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 129
tgataataga atctcttgag gg 22
<210> 130
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 130
tggaagaaac ttctttgttg tt 22
<210> 131
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 131
atttggaaga aacttctttg ttgtc 25
<210> 132
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 132
ggagtgcatc tgctttaaaa 20
<210> 133
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 133
gtggtcccat cacccagt 18
<210> 134
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 134
attgtggtcc catcacccag c 21
<210> 135
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 135
tttgagtatt gaaatgcata atg 23
<210> 136
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 136
ggcctaagat ggttgaatg 19
<210> 137
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 137
attggcctaa gatggttgaa tc 22
<210> 138
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 138
aggaaatttg tgttttccaa ac 22
<210> 139
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 139
aaaagtctgg cactacagtg ag 22
<210> 140
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 140
gccaaaagtc tggcactaca gtgat 25
<210> 141
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 141
tctgggtggg tagaggctta t 21
<210> 142
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 142
actacatcag cctcaaatgc c 21
<210> 143
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 143
attactacat cagcctcaaa tgct 24
<210> 144
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 144
aaataggaga cccattattt tac 23
<210> 145
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 145
ttccacaaag atgatattac c 21
<210> 146
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 146
gcattccaca aagatgatat taca 24
Claims (5)
1.一种检测人Y-SNP基因座的荧光复合扩增试剂盒，其特征在于，基于一代测序平台使用49组引物组同管扩增49个Y-SNP基因座，所述引物组分为5个群组，
第一群组为：
扩增M1746基因座的引物组如SEQ ID No.001~ SEQ ID No.003所示，引物终浓度为0.1μM；扩增M119基因座的引物组如SEQ ID No.004~ SEQ ID No.006所示，引物终浓度为0.1 μM；扩增F333基因座的引物组如SEQ ID No.007~ SEQ ID No.009所示，引物终浓度为0.15 μM；扩增CTS7370基因座的引物组如SEQ ID No.010~ SEQ ID No.012所示，引物终浓度为0.15 μM；扩增F3288基因座的引物组如SEQ ID No.013~ SEQ ID No.015所示，引物终浓度为0.1 μM；扩增CTS4588基因座的引物组如SEQ ID No.016~ SEQ ID No.018所示，引物终浓度为0.12 μM；扩增F4084基因座的引物组如SEQ ID No.019~ SEQ ID No.021所示，引物终浓度为0.15 μM；扩增SK1590基因座的引物组如SEQ ID No.022~ SEQ ID No.024所示，引物终浓度为0.12 μM；扩增M268基因座的引物组如SEQ ID No.025~ SEQ ID No.027所示，引物终浓度为0.15 μM；扩增M1470基因座的引物组如SEQ ID No.028~ SEQ ID No.030所示，引物终浓度为0.1 μM；扩增Page59基因座的引物组如SEQ ID No.031~ SEQ ID No.033所示，引物终浓度为0.1 μM；扩增M122基因座的引物组如SEQ ID No.034~ SEQ ID No.036所示，引物终浓度为0.1 μM；扩增F1876基因座的引物组如SEQ ID No.037~ SEQ ID No.039所示，引物终浓度为0.2 μM；扩增CTS1872基因座的引物组如SEQ ID No.040~ SEQ ID No.042所示，引物终浓度为0.12 μM；
第二群组为：
扩增F117基因座的引物组如SEQ ID No.043~ SEQ ID No.045所示，引物终浓度为0.08μM；扩增P201基因座的引物组如SEQ ID No.046~ SEQ ID No.048所示，引物终浓度为0.1 μM；扩增P164基因座的引物组如SEQ ID No.049~ SEQ ID No.051所示，引物终浓度为0.1 μM；扩增M1546基因座的引物组如SEQ ID No.052~ SEQ ID No.054所示，引物终浓度为0.15μM；扩增CTS6773基因座的引物组如SEQ ID No.055~ SEQ ID No.057所示，引物终浓度为0.1 μM；扩增CTS244基因座的引物组如SEQ ID No.058~ SEQ ID No.060所示，引物终浓度为0.12 μM；扩增CTS11043基因座的引物组如SEQ ID No.061~ SEQ ID No.063所示，引物终浓度为0.12 μM；扩增Z16480基因座的引物组如SEQ ID No.064~ SEQ ID No.066所示，引物终浓度为0.15 μM；扩增F1906基因座的引物组如SEQ ID No.067~ SEQ ID No.069所示，引物终浓度为0.08 μM；扩增F2497基因座的引物组如SEQ ID No.070~ SEQ ID No.072所示，引物终浓度为0.12 μM；扩增M174基因座的引物组如SEQ ID No.073~ SEQ ID No.075所示，引物终浓度为0.2 μM；扩增M15基因座的引物组如SEQ ID No.076~ SEQ ID No.077所示，引物终浓度为0.1 μM；
第三群组为：
扩增P47基因座的引物组如SEQ ID No.078~ SEQ ID No.080所示，引物终浓度为0.2 μM；扩增CTS2728基因座的引物组如SEQ ID No.081~ SEQ ID No.083所示，引物终浓度为0.2μM；扩增CTS131基因座的引物组如SEQ ID No.084~ SEQ ID No.086所示，引物终浓度为0.2μM；扩增M232基因座的引物组如SEQ ID No.087~ SEQ ID No.089所示，引物终浓度为0.15μM；扩增CTS4308基因座的引物组如SEQ ID No.090~ SEQ ID No.092所示，引物终浓度为0.1 μM；扩增CTS270基因座的引物组如SEQ ID No.093~ SEQ ID No.095所示，引物终浓度为0.15 μM；扩增CTS10760基因座的引物组如SEQ ID No.096~ SEQ ID No.098所示，引物终浓度为0.12 μM；
第四群组为：
扩增Z1936基因座的引物组如SEQ ID No.099~ SEQ ID No.101所示，引物终浓度为0.15 μM；扩增B197基因座的引物组如SEQ ID No.102~ SEQ ID No.104所示，引物终浓度为0.1 μM；扩增M2019基因座的引物组如SEQ ID No.105~ SEQ ID No.107所示，引物终浓度为0.12 μM；扩增F1008基因座的引物组如SEQ ID No.108~ SEQ ID No.110所示，引物终浓度为0.1 μM；扩增CTS207基因座的引物组如SEQ ID No.111~ SEQ ID No.113所示，引物终浓度为0.1 μM；扩增L62基因座的引物组如SEQ ID No.114~ SEQ ID No.116所示，引物终浓度为0.15 μM；扩增L278基因座的引物组如SEQ ID No.117~ SEQ ID No.119所示，引物终浓度为0.15 μM；扩增L985基因座的引物组如SEQ ID No.120~ SEQ ID No.122所示，引物终浓度为0.1 μM；
第五群组为：
扩增M60基因座的引物组如SEQ ID No.123~ SEQ ID No.125所示，引物终浓度为0.12μM；扩增M168基因座的引物组如SEQ ID No.126~ SEQ ID No.128所示，引物终浓度为0.12μM；扩增F1329基因座的引物组如SEQ ID No.129~ SEQ ID No.131所示，引物终浓度为0.2μM；扩增F929基因座的引物组如SEQ ID No.132~ SEQ ID No.134所示，引物终浓度为0.15μM；扩增M9基因座的引物组如SEQ ID No.135~ SEQ ID No.137所示，引物终浓度为0.1 μM；扩增M526基因座的引物组如SEQ ID No.138~ SEQ ID No.140所示，引物终浓度为0.12 μM；扩增M2317基因座的引物组如SEQ ID No.141~ SEQ ID No.143所示，引物终浓度为0.08 μM；扩增P295基因座的引物组如SEQ ID No.144~ SEQ ID No.146所示，引物终浓度为0.15 μM；
在各所述引物组中，扩增各基因座的每组引物中至少一条引物的5’端标记有荧光染料，同一群组使用相同的荧光染料标记，各群组的荧光染料标记不相同。
2.根据权利要求1所述的检测人Y-SNP基因座的荧光复合扩增试剂盒，其特征在于，第一群组采用FAM荧光染料标记；第二组群组采用HEX荧光染料标记；第三群组采用TAMRA荧光染料标记；第四群组采用SUM荧光染料标记；第五群组采用VIG荧光染料标记。
3.根据权利要求1所述的检测人Y-SNP基因座的荧光复合扩增试剂盒，其特征在于，还包括复合扩增体系，所述复合扩增体系包括Reaction Mix、热启动U-Taq酶和sdH2O，所述Reaction Mix所含的组分：终浓度25-50 mM的PH 8.0的Tris-HCl ，终浓度20-50 mM的KCl，终浓度1.5-3.5 mM的MgCl2，终浓度0.15-0.35 mM的dNTPs，2%-8%的甘油，终浓度0.5-2 mg/mL的SBS，终浓度0.05-0.5 mM的(NH4)2SO4。
4.根据权利要求3所述的检测人Y-SNP基因座的荧光复合扩增试剂盒，其特征在于，复合扩增反应的扩增程序为： 95℃预变性5分钟；94℃变性20秒，58℃退火60秒，62℃ 延伸60秒，共15个循环；94℃变性20秒，56℃退火60秒，62℃ 延伸60秒，共15个循环；最后60℃终延伸20分钟。
5.权利要求1至4任一项所述的检测人Y-SNP基因座的荧光复合扩增试剂盒在男性个体识别、家系搜索或族源推断的法医学复合检测中的应用。
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