CN110564584A - 一种多重pcr反应管及其组装方法和应用 - Google Patents

一种多重pcr反应管及其组装方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种多重PCR反应管及其组装方法，该多重PCR反应管包括反应管、旋盖、盖板、复合膜；其中，所述复合膜与反应管的下部贴合形成密封的反应仓室；所述反应仓室包括至少1个反应室、与各反应室连通的子液道以及与各子液道连通的主液道，所述主液道与位于所述反应管颈部的加液仓连通。本发明还涉及含有上述多重PCR反应管的试剂盒。本发明所述的多重PCR反应管，其结构简单，组装方便，在一个反应管内，将液体分割成多个反应室进行反应，可同时检测多个靶点，可满足当下临床日益增长的多靶点检测需求，其临床应用前景非常广泛。

Description

一种多重PCR反应管及其组装方法和应用
技术领域
本发明涉及多重PCR技术领域，尤其涉及一种多重PCR反应管及其组装方法和应用。
背景技术
分子诊断是精准医疗的技术基础，也是IVD增速最快的子行业，且国内外技术差异最小。分子诊断细分技术多，目前PCR最为成熟且应用最广。多重PCR技术是一种实用的分子诊断技术，该技术能在同一反应体系中同步扩增多个目的片段，具有高效、快捷、敏感、特异等优势，适用于临床对多个靶点的快速检测。
目前国内的核酸诊断试剂主流产品形式是以八排管为反应载体的核酸诊断试剂。该方法的优点是市面通用耗材，基本适配多有的商业化的荧光PCR仪器，价格和成本相对可控。基于该模式的核酸诊断试剂的检测极限单管最多检测四个靶点，如果一个靶点做为质控的话，最多做三个靶点，也就是最多做四重荧光定量PCR，很难满足当下临床日益增长的多靶点检测需求。
发明内容
为了克服现有技术中的缺陷，本发明提供一种多重PCR反应管及其组装方式，以满足当下临床日益增长的多靶点检测需求。
为了实现上述目的，本发明采取的技术措施包括：
本发明的第一个方面是提供一种多重PCR反应管，其包括反应管、旋盖、盖板、复合膜；其中，所述复合膜与反应管的下部贴合形成密封的反应仓室；所述反应仓室包括至少1个反应室、与各反应室连通的子液道以及与各子液道连通的主液道，所述主液道与位于所述反应管颈部的加液仓连通。
进一步地，所述旋盖的内部侧面与所述加液仓顶部的外部侧面匹配连接。
进一步地，所述旋盖的内部侧面与所述加液仓顶部的外部侧面分别设置互相匹配的螺纹以实现两者的螺纹连接。可理解的是，也可设置任一合适的连接方式，例如卡合连接，嵌设连接等。
进一步地，所述旋盖的底部设置卡扣，所述卡扣与设置于所述反应管上的卡环卡合连接。
进一步地，所述旋盖从盖体顶部的内表面向下延伸一储存仓，所述储存仓的上边缘和下边缘处分别单独设置顶部密封套和密封环。
进一步地，所述顶部密封套与所述加液仓的顶部外边缘抵靠，所述密封环与所述加液仓的底部内边缘抵靠。
进一步地，所述旋盖的顶部设置一凹腔，其用于卡设盖板，所述盖板的下表面抵靠所述储存仓的上表面。
进一步地，所述储存仓的底部设置一内嵌槽，所述内嵌槽向下延伸与所述储存仓连通的舌片，所述舌片上设置至少1个凹槽，以用于储存少量试剂。
进一步地，所述加液仓的外部设置凸片。
进一步地，所述反应室的数量为3～11个，更优选为3、5、7、9、11个，可理解的是，其数量也可为基于反应管的尺寸适于分布在反应管上的任一合适数量；所述子液道的数量与所述反应室的数量相匹配，各子液道共同在一端连通与1个主液道。
进一步地，所述加液仓为圆柱形，所述加液仓的外部间隔设置圆环形凸片，最底部的凸片与设置所述反应仓室的反应管下部固定连接(可一体成型或粘附连接)，所述反应管下部为扁平状结构，所述反应室的横截面为半椭圆形，所述卡环的一端通过连接带固定连接于任一所述凸片上。或者，可选的，所述加液仓为矩形，所述加液仓的外部间隔设置矩形外延凸片，最底部的凸片与设置所述反应仓室的反应管下部固定连接(可一体成型或粘附连接)，所述反应管下部为扁平状结构，所述反应室横截面为三角形、矩形、椭圆形或圆形等。
本发明的第二个方面是提供一种任一上述的多重PCR反应管的组装方法，其包括如下步骤：
步骤1)将反应管的下部正面开槽注塑加工成型，将复合膜熔接至反应管的下部正面，以形成密闭的反应室、主液道、子液道；
步骤2)将盖板压入旋盖顶部，将旋盖装配到反应管。
本发明的第三个方面是提供一种含有任一上述的多重PCR反应管的试剂盒。
进一步地，所述试剂盒用于联合检测乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人获得性免疫缺陷病毒(HIV)。
进一步地，在所述试剂盒中的多重PCR反应管的反应室中包被用于扩增目的片段的引物及探针。
进一步地，在所述试剂盒中的多重PCR反应管的反应室中还包被用于扩增内参的引物及探针。
进一步地，所述用于扩增HBV1保守区的引物序列如SEQ ID No.1～2所示，探针序列如SEQ ID No.3所示；用于扩增HBV2保守区的引物序列如SEQ ID No.4～5所示，探针序列如SEQ ID No.6所示；用于扩增HBV3保守区的引物序列如SEQ ID No.7～8所示，探针序列如SEQ ID No.9所示。
进一步地，所述用于扩增HBV1保守区的引物序列如SEQ ID No.1～2所示，探针序列如SEQ ID No.3所示；用于扩增HBV2保守区的引物序列如SEQ ID No.4～5所示，探针序列如SEQ ID No.6所示；用于扩增HBV3保守区的引物序列如SEQ ID No.7～8所示，探针序列如SEQ ID No.9所示。
进一步地，所述用于扩增内参Int1的引物序列如SEQ ID No.10～11所示，探针序列如SEQ ID No.12所示。
进一步地，所述用于扩增HCV1保守区的引物序列如SEQ ID No.13～14所示，探针序列如SEQ ID No.15所示；用于扩增HCV2保守区的引物序列如SEQ ID No.16～17所示，探针序列如SEQ ID No.18所示。
进一步地，所述用于扩增HIV LTR保守区的引物序列如SEQ ID No.19～20所示，探针序列如SEQ ID No.21～22所示；用于扩增HIV GAG保守区的引物序列如SEQ ID No.23～24所示，探针序列如SEQ ID No.25所示；用于扩增HIV POL保守区的引物序列如SEQ IDNo.26～27所示，探针序列如SEQ ID No.28所示。
进一步地，所述用于扩增内参Int2的引物序列如SEQ ID No.29～30所示，探针序列如SEQ ID No.31所示。
进一步地，所述探针采用荧光基团和淬灭基团修饰，所述荧光基团选自FAM、VIC、ROX、CY5；所述淬灭基团选自BHQ1、BHQ2。
进一步地，所述试剂盒中还包括PCR mix，所述PCRmix含Virus Test Taq DNAPolymerase、UNG酶、dUTP、dCTP、dGTP、dATP、Buffer、12％Ficoll、5％鼠李唐、3％甘露醇、0.01％硫柳汞、0.5％tween 2.0和内参1质粒DNA模板共30ul，经液氮制成冰颗粒。
与现有技术相比，本发明采用上述技术方案具有以下有益效果：
本发明所述的一种多重PCR反应管，其结构简单，组装方便，在一个反应管内，将液体分割成多个反应室进行反应，可同时检测1～96靶点，临床应用前景非常广泛。
附图说明
图1为本发明一实施例中组装状态下的一种多重PCR反应管的结构示意图；
图2为如图1所示的多重PCR反应管的部件分解示意图；
图3为如图1所示的多重PCR反应管的旋盖的结构示意图；
图4为如图1所示的多重PCR反应管的替换结构示意图；
图5为本发明另一实施例中的多重PCR反应管的结构示意图；
图6为本发明另一实施例中的多重PCR反应管的结构示意图；
图7为本发明另一实施例中的多重PCR反应管荧光PCR扩增图谱；其中，蓝色为FAM，绿色为VIC，黄色为ROX，红色为Cy5。
其中，图中的附图标记为：
反应管1；旋盖2；盖板3；复合膜4；反应仓室10；反应室11；主液道12；子液道13；加液仓14；卡环15；凸片16；储存仓20；舌片21；密封环22；顶部密封套23；卡扣24；凹槽25；凹腔26；内嵌槽27。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，但不作为本发明的限定。
实施例1
本实施例为一较佳结构形式的多重PCR反应管，如图1～图3所示，该多重PCR反应管主要包括：反应管1，旋盖2，盖板3，复合膜4；反应管1与复合膜4贴合形成反应仓室10，反应仓室10设有7个形状相同(如截面为椭圆形)的反应室11、1个主液道12、7条子液道13和1个加液仓14，其在反应管1顶部的外部还设有1个卡环15；主液道12在反应管下半部正面开槽并与加液仓14底部连通，反应管正面设有7条细浅的凹槽作为子液道13，7条子液道13将7个形状相同的反应室11与主液道12连通；旋盖2设有舌片21、密封环22、顶部密封套23和1个卡扣24，该卡扣24与设置于反应管1上的卡环15卡合连接，舌片21上设有大量小型凹槽25，小型凹槽25可以储存少量试剂。
上述多重PCR反应管的具体结构还包括：旋盖2的内部侧面与加液仓14顶部的外部侧面分别设置互相匹配的螺纹以实现两者的螺纹连接；旋盖2从盖体顶部的内表面向下延伸一储存仓20，所述储存仓20的上边缘和下边缘处分别单独设置与加液仓14的顶部外边缘抵靠的顶部密封套23和与加液仓14的底部内边缘抵靠的密封环22，上述设置可使得加液过程中加液仓除了开口其余均为密封结构，防止样品的污染；旋盖2的顶部设置用于卡设盖板3的凹腔26，在盖合情况下，盖板3的下表面抵靠所述储存仓20的上表面，以防止污染物进入流体通道；储存仓20的底部设置一内嵌槽27，该内嵌槽27向下延伸与储存仓20连通的舌片21，舌片21上设置大量小型凹槽25。
在本实施例中，加液仓14为圆柱形，其外部间隔设置圆环形凸片16，最底部的凸片16与设置有反应仓室10的反应管1下部的顶部一体成型，反应管1下部为扁平状结构，且其设置的反应室11的横截面为半椭圆形，卡环15的一端通过连接带粘附连接于任一凸片16上，卡环与连接带为一体成型结构；另外，反应管1下部还设置有利于辅助流体流动的额外凹槽，分布于主液道12、子液道13和反应室11的两侧。
本实施例中反应室11的数量可进行相应改动，如图4的A和B所示，其设置的反应室和子液道的数量分别为5个和3个。
本实施例所述的多重PCR反应管的组装方法具体如下：
将反应管1下部的正面注塑加工分别对应于反应仓室10各流体通道的凹槽，将注塑加工好的反应管1的正面熔接复合膜4，形成密闭的反应室11、主液道12、子液道13；将盖板3压入旋盖2顶部的凹腔26，然后将旋盖2的卡扣24装配到反应管1上设有的卡环15内，再将旋盖从上方旋入反应管1内。
实施例2
本实施例为实施例1所述的多重PCR反应管的替换结构形式，如图5所示，其区别主要在于：多重PCR反应管不设置盖板，卡环和卡扣；其旋盖2顶部优选密封结构；且加液仓14为矩形，其外部间隔设置矩形外延凸片16，最底部的凸片16与设置有反应仓室(包括反应室11、主液道12、子液道1/3)的反应管1下部的顶部一体成型，反应管1下部为扁平状结构，且其设置的反应室11的横截面为椭圆形。如图5的A、B、C所示，其设置的反应室和子液道的数量分别为7个、5个和3个
实施例3
本实施例为实施例1所述的多重PCR反应管的替换结构形式，如图6所示，其区别主要在于：多重PCR反应管不设置盖板，卡环和卡扣；其旋盖2顶部优选密封结构；且加液仓14为矩形，其外部间隔设置矩形外延凸片16，最底部的凸片16与设置有反应仓室(包括反应室11、主液道12、子液道1/3)的反应管1下部的顶部一体成型，反应管1下部为扁平状结构，且其设置的反应室11的横截面为三角形。如图6的A、B所示，其设置的反应室和子液道的数量分别为9个和11个。
应用实施例1
本应用实施剂为术前三项乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人获得性免疫缺陷病毒联合检测试剂盒，其采用图4中具有5反应室的反应管，应用该反应管，可实现多病原体多靶点筛查。
(1)反应体系生产制备
1)多靶点：筛选HBV三个保守区域，HCV两个保守区域及HIV LTR\GAG\POL三个保守区设计引物及探针，三个基因8个位点同时进行扩增，保证其检出效率，并且放置两个内参，一个控制试剂盒的有效性，一个测试核酸提取的有效性，这是现有技术中其他核酸检测试剂盒难以企及的。
用于扩增上述靶点的引物及探针序列具体如下：
2)引物及探针烘干：将上述引物及探针各500nM烘干至各自的反应室内，烘干条件为37度，快速烘干。
3)焊膜：引物探针烘干于反应室内后，焊接膜，形成封闭的仓室。
4)PCR mix造粒：PCRmix含2U Virus Test Taq DNA Polymerase，2U UNG酶，500nMdUTP，500nM dCTP，500nM dGTP，500nM dATP，Tris 20mM，KCl50mM，(NH4)2SO4 10mM，12％Ficoll，5％鼠李唐，3％甘露醇，0.01％硫柳汞，0.5％tween 2.0和10000拷贝内参1质粒DNA模板共30ul，经液氮制成冰颗粒。
5)冻干：冰颗粒迅速置于冻干机中，冻干。
6)封装：冻干的PCR mix于高纯度氮气流水线中分装至反应管加液仓中，包装出厂。
(2)样本提取与检测：
1)双盲分组：300份临床样本，平均分为3等份，每份1ml，编号后，发于3个实验室，进行实验。
2)DNA提取：应用默礼生物核酸提取仪提取DNA，简单介绍如下：1ml血清加入10ul内参2假病毒颗粒，然后取500ul于核酸提取仪，提取核酸，提取过程经历裂解，洗涤1，洗涤2，最后DNA于200ul洗脱液洗脱。
3)上样检测：取200ulDNA洗脱液，加入反应管加液仓中溶解PCR mix冻干颗粒后，瞬时离心后，上机检测。
4)反应程序：50度2分钟，95度2分钟；65度2分钟(逆转录)；95度10秒，60度20秒，5循环；95度10秒，60度20秒并收集荧光，40循环。
(3)结果分析：
1)反应室2：内参1-Cy5有S曲线，且Ct值<25，试剂有效。
2)反应室5：内参2-Cy5有S曲线，且Ct值<25，提取过程有效，同时满足上述情况，结果有效。
3)实验结果：三个实验室，应用上述试剂盒分别检测300例临床样本，检测结果完全一致。与之对照的商业化试剂，有1例HBV检测结果为阴性，1例HIV结果为灰度区，而本实施例中HBV三个靶点有两个靶点为强阳性，一个靶点为阴性；HIV两个靶点为阳性，一个为阴性。上述结果表明，应用本实施例所述的试剂盒及反应管，可以实现对单管对多个传染性病原体多靶点同时检测，检测结果的敏感性和特异性高于市面商业化试剂盒，具有非常广泛的临床应用场景，技术新颖度高。
由上述实施例及应用实施例可知，本发明所述的多重PCR反应管，其结构简单，组装方便，在一个反应管内，将液体分割成多个反应室进行反应，可同时检测多个靶点，可满足当下临床日益增长的多靶点检测需求，其临床应用前景非常广泛。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。
序列表
<110> 默礼生物（杭州）有限公司
<120> 一种多重PCR反应管及其组装方法和应用
<160> 31
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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<211> 22
<212> DNA
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<400> 1
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<400> 14
gcagaccact atggctctcc 20
<210> 15
<211> 27
<212> DNA
<213> HCV1-P1 探针(Artificial Sequence)
<400> 15
ctagccatgg cgttagtayg agtgtcg 27
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> HCV2-F1 引物(Artificial Sequence)
<400> 16
catggcgtta gtaygagtgt 20
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> HCV2-R1 引物(Artificial Sequence)
<400> 17
ctggcaattc cggtgtactc 20
<210> 18
<211> 22
<212> DNA
<213> HCV2-P1 探针(Artificial Sequence)
<400> 18
ccgcagacca ctatggctct cc 22
<210> 19
<211> 24
<212> DNA
<213> hiL-f 引物(Artificial Sequence)
<400> 19
aagcctcaat aaagcttgcc ttga 24
<210> 20
<211> 19
<212> DNA
<213> hiL-r 引物(Artificial Sequence)
<400> 20
gttcgggcgc cactgctag 19
<210> 21
<211> 26
<212> DNA
<213> hiL-p 探针(Artificial Sequence)
<400> 21
tctggtaact agagatccct cagacc 26
<210> 22
<211> 26
<212> DNA
<213> hiL-p2 探针(Artificial Sequence)
<400> 22
tctggtaact agagatccct cagacc 26
<210> 23
<211> 30
<212> DNA
<213> hiG-f 引物(Artificial Sequence)
<400> 23
agtrggggga caycargcag chatgcarat 30
<210> 24
<211> 28
<212> DNA
<213> hiG-r 引物(Artificial Sequence)
<400> 24
tactagtagt tcctgctatr tcacttcc 28
<210> 25
<211> 26
<212> DNA
<213> hiG-p 探针(Artificial Sequence)
<400> 25
atcaatgarg argctgcaga atggga 26
<210> 26
<211> 28
<212> DNA
<213> hiP-f 引物(Artificial Sequence)
<400> 26
gcagtattya tycacaattt taaaagaa 28
<210> 27
<211> 21
<212> DNA
<213> hiP-r 引物(Artificial Sequence)
<400> 27
gctgtcyctg taataraccc g 21
<210> 28
<211> 22
<212> DNA
<213> hiP-p 探针(Artificial Sequence)
<400> 28
gggattgggg rtacastgca gg 22
<210> 29
<211> 22
<212> DNA
<213> Int2-f 引物(Artificial Sequence)
<400> 29
actggtcact tgatctataa gc 22
<210> 30
<211> 18
<212> DNA
<213> Int2-r 引物(Artificial Sequence)
<400> 30
acacccatgc gtacttga 18
<210> 31
<211> 25
<212> DNA
<213> Int2-p 探针(Artificial Sequence)
<400> 31
cctcttgttc atctcagcag cctcc 25

Claims (10)

1.一种多重PCR反应管，其特征在于，包括反应管(1)、旋盖(2)、盖板(3)、复合膜(4)；其中，所述复合膜(4)与反应管(1)的下部贴合形成密封的反应仓室(10)；所述反应仓室(10)包括至少1个反应室(11)、与各反应室(11)连通的子液道(13)以及与各子液道(13)连通的主液道(12)，所述主液道(12)与位于所述反应管(1)颈部的加液仓(14)连通。
2.根据权利要求1所述的多重PCR反应管，其特征在于，所述旋盖(2)的内部侧面与所述加液仓(14)顶部的外部侧面匹配连接。
3.根据权利要求2所述的的多重PCR反应管，其特征在于，所述旋盖(2)的内部侧面与所述加液仓(14)顶部的外部侧面分别设置互相匹配的螺纹以实现两者的螺纹连接。
4.根据权利要求1所述的多重PCR反应管，其特征在于，所述旋盖(2)的底部设置卡扣(24)，所述卡扣与设置于所述反应管(1)上的卡环(15)卡合连接。
5.根据权利要求1所述的多重PCR反应管，其特征在于，所述旋盖(2)从盖体顶部的内表面向下延伸一储存仓(20)，所述储存仓(20)的上边缘和下边缘处分别单独设置顶部密封套(23)和密封环(22)。
6.根据权利要求5所述的多重PCR反应管，其特征在于，所述顶部密封套(23)与所述加液仓(14)的顶部外边缘抵靠，所述密封环(22)与所述加液仓(14)的底部内边缘抵靠。
7.根据权利要求5所述的多重PCR反应管，其特征在于，所述旋盖(2)的顶部设置一凹腔(26)，其用于卡设盖板(3)，所述盖板(3)的下表面抵靠所述储存仓(20)的上表面。
8.根据权利要求5所述的多重PCR反应管，其特征在于，所述储存仓(20)的底部设置一内嵌槽(27)，所述内嵌槽(27)向下延伸与所述储存仓(20)连通的舌片(21)，所述舌片(21)上设置至少1个凹槽(25)。
9.一种如权利要求1～8中任一项所述的多重PCR反应管的组装方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1)将反应管(1)的下部正面开槽注塑加工成型，将复合膜(4)熔接至反应管(1)的下部正面，以形成密闭的反应室(11)、主液道(12)、子液道(13)；
步骤2)将盖板(3)压入旋盖(2)顶部，将旋盖(2)装配到反应管(1)。
10.一种含有权利要求1～9中任一项所述的多重PCR反应管的试剂盒。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112760208A (zh) * 2020-12-31 2021-05-07 苏州安基生物科技有限公司 一种恒温pcr反应管及其使用方法
CN117070334A (zh) * 2023-10-13 2023-11-17 鲲鹏基因（北京）科技有限责任公司 一种多指标检测试剂盒及pcr反应装置
CN118546774A (zh) * 2024-07-29 2024-08-27 南京英诺唯真生物科技有限公司 一种实时荧光pcr分析仪及其检测方法

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080038737A1 (en) * 2006-05-01 2008-02-14 Cepheid Methods and apparatus for sequential amplification reactions
WO2008155599A1 (en) * 2007-06-20 2008-12-24 Taag-Genetics Sa Nested multiplex amplification method for identification of multiple biological entities
KR20110134623A (ko) * 2010-06-09 2011-12-15 김영태 유체 증폭기
US20120094373A1 (en) * 2010-10-14 2012-04-19 Genereach Biotechnology Corp. Container for nucleic acid amplification reaction
CN104263640A (zh) * 2014-10-15 2015-01-07 常州百代生物科技有限公司 将引物或引物、探针固定于固相载具用于pcr的方法
KR20160061552A (ko) * 2014-11-21 2016-06-01 단국대학교 천안캠퍼스 산학협력단 분리된 다수의 주입 챔버가 구비된 유전자 증폭 튜브
CN106676000A (zh) * 2016-12-30 2017-05-17 上海星耀医学科技发展有限公司 多腔室基因分析反应装置
CN107058063A (zh) * 2017-06-12 2017-08-18 博奥生物集团有限公司 一种基于微流控芯片的用于多重核酸扩增产物荧光检测的方法
CN109295182A (zh) * 2018-09-30 2019-02-01 苏州百源基因技术有限公司 一种pcr预分装试剂和预装pcr试剂的反应管
CN110142066A (zh) * 2019-04-25 2019-08-20 深圳市刚竹医疗科技有限公司 微流控芯片及分析系统

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080038737A1 (en) * 2006-05-01 2008-02-14 Cepheid Methods and apparatus for sequential amplification reactions
WO2008155599A1 (en) * 2007-06-20 2008-12-24 Taag-Genetics Sa Nested multiplex amplification method for identification of multiple biological entities
KR20110134623A (ko) * 2010-06-09 2011-12-15 김영태 유체 증폭기
US20120094373A1 (en) * 2010-10-14 2012-04-19 Genereach Biotechnology Corp. Container for nucleic acid amplification reaction
CN104263640A (zh) * 2014-10-15 2015-01-07 常州百代生物科技有限公司 将引物或引物、探针固定于固相载具用于pcr的方法
KR20160061552A (ko) * 2014-11-21 2016-06-01 단국대학교 천안캠퍼스 산학협력단 분리된 다수의 주입 챔버가 구비된 유전자 증폭 튜브
CN106676000A (zh) * 2016-12-30 2017-05-17 上海星耀医学科技发展有限公司 多腔室基因分析反应装置
CN107058063A (zh) * 2017-06-12 2017-08-18 博奥生物集团有限公司 一种基于微流控芯片的用于多重核酸扩增产物荧光检测的方法
CN109295182A (zh) * 2018-09-30 2019-02-01 苏州百源基因技术有限公司 一种pcr预分装试剂和预装pcr试剂的反应管
CN110142066A (zh) * 2019-04-25 2019-08-20 深圳市刚竹医疗科技有限公司 微流控芯片及分析系统

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112760208A (zh) * 2020-12-31 2021-05-07 苏州安基生物科技有限公司 一种恒温pcr反应管及其使用方法
CN117070334A (zh) * 2023-10-13 2023-11-17 鲲鹏基因（北京）科技有限责任公司 一种多指标检测试剂盒及pcr反应装置
CN117070334B (zh) * 2023-10-13 2024-01-26 鲲鹏基因（北京）科技有限责任公司 一种多指标检测试剂盒及pcr反应装置
CN118546774A (zh) * 2024-07-29 2024-08-27 南京英诺唯真生物科技有限公司 一种实时荧光pcr分析仪及其检测方法

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