CN117070334B - 一种多指标检测试剂盒及pcr反应装置 - Google Patents

一种多指标检测试剂盒及pcr反应装置 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种多指标检测试剂盒及PCR反应装置,其中多指标检测试剂盒包括试剂盒主体和反应区,反应区包括主反应区和副反应区,主反应区包括用于盛放待测样本的主反应腔,副反应区包括用于盛放待测样本的副反应腔,副反应腔与主反应腔连通,主反应腔内部待测样本和副反应腔内部待测样本分别通过荧光采集组件采取荧光反应数据,且主反应腔和副反应腔分别对应荧光采集组件发射的不同光路,从而不同反应腔可以同时对来源于同一待测样本的各自的待测样本进行不同的荧光检测,实现对同一待测样本同时检测多种目标靶基因,缓解了荧光串扰问题,由于多个反应腔内荧光检测在同一时间进行,从而加快了检出速度。

Description

一种多指标检测试剂盒及PCR反应装置
技术领域
本发明涉及分子诊断技术领域,具体为一种多指标检测试剂盒及PCR反应装置。
背景技术
分子诊断技术是指以DNA和RNA为诊断材料,用分子生物学技术通过检测基因的存在、缺陷或表达异常,从而对人体状态和疾病作出诊断的技术。其基本原理是检测DNA或RNA的结构是否变化、量的多少及表达功能是否异常,以确定受检者有无基因水平的异常变化,对疾病的预防、预测、诊断、治疗和预后具有重要意义。通俗简单的讲所有基于分子生物学水平的方法学技术都属于分子诊断技术,比如聚合酶链式反应技术、基因测序技术等等。
聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction, PCR)是一种用于扩增特定DNA片段(目标靶基因)的分子生物学技术,即目标靶基因的特异性体外扩增过程。PCR基本原理为双链DNA在高温下发生变性解链成为单链DNA,当温度降低后又可以复性成双链,通过温度变化可以控制DNA的变性和复性,在待测样本中加入引物、DNA聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)及相应缓冲液(整体称作PCR反应体系),PCR反应体系配合温度控制(也就是升温-降温循环处理)则可以完成目标靶基因的体外复制扩增。
多重PCR (multiplex PCR),又称多重引物PCR或复合PCR ,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多种不同的特定DNA片段的PCR反应,其反应原理,反应试剂和操作过程与一般PCR相同。 一般PCR仅应用一对引物 ,通过 PCR扩增产生一种特定DNA片段,主要用于单一致病因子等的鉴定。多重PCR主要用于多种病原微生物的同时检测或鉴定某些病原微生物、某些遗传病及癌基因的分型鉴定。
使用实时荧光定量法对多重PCR产物进行定性、定量检测时,针对每种目标靶基因均需提供一套由多个光学器件组成的光学检测装置,随着需检测的目标靶基因种类的增多,多重PCR检测的光学检测装置逐渐增多,而在检测不同的目标靶基因时,每套光学检测装置需要逐一对同一个待测样本进行光学检测,完成所有目标靶基因检测时耗费的时间累积叠加,检出速度随之受到极大影响,不利于急需诊断结果的病患的及时救治;同时,在同一个待测样本中同时检测多种目标靶基因时,也会出现荧光串扰问题,导致检测结果不准确,多指标检测的检测上限较低。
现有技术中为了加快检出速度,通常采取的解决办法多数是对DNA片段的特异性体外扩增过程进行加快,也就是不断优化温控装置,实现快速升降温,快速对特定DNA片段进行扩增复制,而这种优化仍然存在极限,且对温控装置的性能要求逐渐提升,优化难度较大。
因此,如何在保证可以检测多指标目标靶基因的情况下,加快检出速度、缓解荧光串扰、提高多指标的上限是一个亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种多指标检测试剂盒及PCR反应装置,以至少部分地缓解了检出速度慢和荧光串扰的问题,提高多指标检测的检测上限。
为实现上述目的,本发明提供了一种技术方案:
一种多指标检测试剂盒,包括:试剂盒主体和反应区,所述反应区包括与所述试剂盒主体连通的主反应区和与所述主反应区连通的至少一个副反应区;
所述主反应区包括用于盛放待测样本的主反应腔,所述副反应区包括用于盛放待测样本的副反应腔,所述副反应腔与所述主反应腔连通。
可选的,所述主反应腔内部开设有多个微室,所述待测样本被分割并捕获在所述微室内部,并形成多个小样本。
可选的,所述微室内壁设置有亲水层,所述主反应腔内部除所述微室之外的位置设置有疏水层。
可选的,所述微室包括弧面和弯折面,所述弯折面的两侧分别与所述弧面的两侧衔接,且所述弧面朝向所述待测样本进入的方向凸出。
可选的,所述副反应腔的结构与所述主反应腔的结构相同。
可选的,所述主反应区还包括主反应板,所述主反应板与所述试剂盒主体连接,且所述主反应板上开设有进样通道和出样通道;
所述主反应腔设置在所述主反应板上,且所述主反应腔一侧连接所述进样通道,另一侧连接所述出样通道,所述进样通道和所述出样通道在同一时刻,择一与所述试剂盒主体内部的反应腔体连通。
可选的,所述副反应区设置多个,多个所述副反应区沿所述试剂盒主体长度方向X、所述试剂盒主体宽度方向Y和所述试剂盒主体高度方向Z中的一个方向阵列;
或者,多个所述副反应区沿所述试剂盒主体长度方向X、所述试剂盒主体宽度方向Y和所述试剂盒主体高度方向Z中的两个方向阵列;
或者,多个所述副反应区沿所述试剂盒主体长度方向X、所述试剂盒主体宽度方向Y和所述试剂盒主体高度方向Z同时阵列。
可选的,所述副反应区设置两个,两个所述副反应区沿所述试剂盒主体高度方向Z依次排列,所述副反应区包括第一副反应板,所述第一副反应板与所述试剂盒主体连接,所述副反应腔设置在所述第一副反应板上,与所述主反应腔相邻的所述副反应腔通过第一通管与所述主反应腔连接,相邻的所述副反应腔之间均通过第二通管连接,或:
所述副反应区设置两个,两个所述副反应区沿所述试剂盒主体宽度方向Y依次排列,所述副反应区包括第二副反应板,所述第二副反应板与所述试剂盒主体连接,所述副反应腔设置在所述第二副反应板上,所述副反应腔均通过第三通管与所述主反应腔连接,或:
所述副反应区设置多个,多个所述副反应区沿所述试剂盒主体长度方向X和所述试剂盒主体高度方向Z阵列,所述副反应区包括第一副反应区和第二副反应区,所述第一副反应区与所述主反应区相连,所述第二副反应区与所述第一副反应区相连,所述第一副反应区内部开设有第一副反应腔,所述第二副反应区内部开设有第二副反应腔,所述主反应腔和/或所述进样通道通过第四通管与所述第一副反应腔连通,所述第一副反应腔通过第五通管与相邻的所述第二副反应腔连通。
可选的,所述试剂盒主体内具有石蜡油,所述石蜡油进入所述主反应腔后铺设在所述微室的表面。
本发明还提供了一种技术方案:
一种PCR反应装置,包括:荧光采集组件和上述的多指标检测试剂盒,所述多指标检测试剂盒中的所述主反应腔内部待测样本和所述副反应腔内部待测样本分别通过荧光采集组件采取荧光反应数据,且所述主反应腔和所述副反应腔分别对应所述荧光采集组件发射的不同光路。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
1.本发明的多指标检测试剂盒包括试剂盒主体和反应区,反应区包括主反应区和副反应区,主反应区包括用于盛放待测样本的主反应腔,副反应区包括用于盛放待测样本的副反应腔,副反应腔与主反应腔连通,主反应腔和副反应腔内的待测样本来源于同一份待测样本,也就是将同一待测样本分散在至少两个反应腔内;主反应腔内部待测样本和副反应腔内部待测样本可以分别通过荧光采集组件采取荧光反应数据,且主反应腔和副反应腔分别对应荧光采集组件发射的不同光路,从而不同反应腔可以同时对来源于同一待测样本的各自的待测样本进行不同的荧光检测,最终累计后则可以实现对同一待测样本同时检测多种目标靶基因;由于将同一待测样本分散在不同的反应腔内,每一反应腔内仅进行一种或两种目标靶基因的检测,因而可以缓解荧光串扰问题,相较于传统的荧光检测法,本申请提供的试剂盒可以不断增加副反应腔的数量,且不会因为副反应腔数量的增多引起荧光串扰问题的频发、检测结果错误率上升问题,因而提升了多指标检测的检测上限;此外在借助本申请的多指标检测试剂盒对同一待测样本实现多指标检测的过程中,多个反应腔内荧光检测在同一时间进行,相较于传统的荧光检测法,检出时间无需随着检测目标靶基因种类的增加而叠加,从而加快了检出速度。
2.本发明的多指标检测试剂盒的主反应腔内部开设有多个微室,流向主反应腔的待测样本被分割并捕获在微室内部,并形成多个小样本,微室的数量可以是千量级、万量级,当待测样本流向主反应腔的过程中,待测样本被分割并被捕获在多个微室内,从而通过物理结构将待测样本分割为多个小样本,使得一个微室内填充有0个或1个目标靶基因,分割后进行样本扩增,从而便于进行后续的光学检测的定量计算。
3.本发明的多指标检测试剂盒的荧光采集组件包括相机和扫描头,扫描头用于照射主反应腔中的待测样本,相机用于拍摄微室中的小样本;在扫描头发出的光线的照射下,具有目标靶基因的微室中的小样本会被检测出荧光,而不具有目标靶基因的微室中的小样本不会被检测出荧光,然后通过相机拍摄主反应腔,通过这种方式,可以实现对待测样本中目标靶基因数量的绝对计数定量,能够提升检测结果的准确性。
4.本发明的多指标检测试剂盒的微室内壁设置有亲水层,主反应腔内部除微室之外的位置设置有疏水层,由于待测样本为液体,因此可以使待测样本主要分布到微室中,避免太多待测样本残留在主反应腔的流道中,能够进一步地将小样本捕获到微室中。
5.本发明的多指标检测试剂盒的微室呈扇形结构,其包括弧面和弯折面,弯折面的两端分别与弧面的两端衔接,且弧面朝向待测样本进入的方向凸出,当待测样本进入微室时,这里的弧面的拦截力相较于弯折面面的拦截力较大,待测样本更容易通过弧面被捕获在微室内。
本发明附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出,部分将从下面的描述中变得明显,或通过本发明的实践了解到。
附图说明
图1为现有技术中的扩增曲线图;
图2为本发明的多指标检测试剂盒的结构示意图;
图3为本发明的多指标检测试剂盒隐去第一封膜和第二封膜后的结构示意图;
图4为本发明的多指标检测试剂盒的主反应区内部结构的局部放大图;
图5为本发明的多指标检测试剂盒的微室的局部放大图;
图6为本发明的多指标检测试剂盒的第二种结构示意图;
图7为本发明的多指标检测试剂盒的第三种结构示意图;
图8为本发明的多指标检测试剂盒隐去副反应区的结构示意图;
图9为本发明的多指标检测试剂盒的盒体的结构示意图;
图10为图9的仰视图;
图11为本发明的多指标检测试剂盒的切换阀的内部结构示意图。
图中:
1、试剂盒主体;11、盒体;111、第一圈过液孔;112、第二圈过液孔;113、中心通孔;12、顶盖;13、底座;14、切换阀;141、中转存储腔;142、第一进出口;143、第二进出口; 101、预处理腔;102、样品腔;103、清洗液腔;104、缓冲液腔;105、废液腔;106、一次引物探针;107、石蜡油腔;108、预留腔;2、主反应区;21、主反应腔;211、微室;2111、弧面;2112、弯折面;212、阻隔壁;22、主反应板;23、进样通道;24、出样通道;25、第一封膜;3、副反应区;31、副反应腔; 32、第一副反应板;33、第二副反应板;34、第一副反应腔;35、第二副反应腔;36、第二封膜;41、第一通管;42、第二通管;43、第三通管;44、第四通管;45、第五通管。
实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
在本发明中,除非另有明确的规定和限定,术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义理解,例如,可以是固定连接,也可以是可拆卸连接,或一体地连接;可以是机械连接,也可以是电连接;可以是直接相连,也可以通过中间媒介间接相连,可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言,可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
现有技术中,待测样本的目标靶基因在复制扩增过程中,还需对复制扩增产物进行检测从而进行定性、定量判断。现有的检测方法为荧光检测法,也就是利用光学检测系统对复制扩增产物进行光学照射处理并检测照射后复制扩增产物所传递的荧光信号,最终根据荧光信号对待测样本完成定性、定量检测。定性是指判断待测样本是否携带目标靶基因,定量是指计算待测样本携带了多少量的目标靶基因。这种检测方式被称为实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qPCR)。qPCR反应是在PCR反应体系中针对一种目标靶基因加入一种报告基团,当目标靶基因每经历一个反应循环(也就是经历一次复制后)报告基团发出的荧光信号强度就会增强一次,PCR仪器的光学检测系统可以通过检测待测样本每个反应循环后的荧光信号强度变化,实现对反应产物量变化的实时监测,并生成反应上述关系的扩增曲线图,如图1所示,横坐标代表反应循环数,即循环数,纵坐标代表荧光信号强度,即荧光强度。
根据扩增曲线图可以对待测样本进行定性、定量分析。具体的,定性判断是,如果待测样本中存在目标靶基因,则光学检测系统会生成如图1所示的扩增曲线,如果待测样本中不存在目标靶基因,则光学检测系统会生成一条直线,因为不存在目标靶基因,所以随着扩增实验的进行,不会存在目标靶基因的复制扩增,因而也就不会出现荧光值的变化,所以光学检测系统从始至终接收到均是同样的荧光值,因此是一条直线,以此完成对待测样本的定性判断。定量判断是,在待测样本进行qPCR反应过程中,还会同时进行已知参照品的qPCR反应,且两者的实验条件完全一致,参照品是已知浓度的含有待测目标靶基因的样品,将参照品最终生成的扩增曲线与待测样本最终生成的扩增曲线进行对比计算,则可以计算出待测样本中目标靶基因的浓度,这种定量方式称为相对定量,依赖于参照品的扩增曲线和待测样本的扩增曲线,以及扩增效率等因素,容易出现定量结果不准确的问题。
使用qPCR法对多重PCR产物进行定性、定量检测时,针对每种目标靶基因均需提供一套由多个光学器件组成的光学检测装置,对多重PCR产物进行检测则需要多套光学检测装置,多套光学检测装置组成一个光学检测系统。使用光学检测系统对同一待测样本进行多种目标靶基因检测时,每套光学检测装置需要对同一个待测样本逐一、依次、按序进行光学检测,那么完成所有目标靶基因检测时耗费的时间会累积叠加,检出速度随之受到极大影响,不利于急需诊断结果的病患的及时救治,例如,每套光学检测装置完成检测需耗时0.01秒,n套则需要n*0.01秒的时间,要检测的目标靶基因种类越多,耗时越久。
此外应理解的是,对于不同的目标靶基因有不同的光学检测装置,两者是一一对应的关系,例如a光学检测装置用于检测目标靶基因A,b光学检测装置用于检测目标靶基因B,在同一待测样本中如果仅仅存在目标靶基因A时,分别使用a光学检测装置和b光学检测装置去检测该待测样本,原则上仅有a光学检测装置最终会生成如图1所示的扩增曲线,b光学检测装置会生成一条直线,两条线会展示在同一个图中,实验人员根据图可以判断出在该待测样本中仅存在目标靶基因A。但实际上有可能出现的问题是,b光学检测装置由于跟a光学检测装置不同,但两者有可能因为光学检测性能极度接近,致使b光学检测装置在检测该待测样本时,最终也生成了一条类似该曲线(该曲线可以为蓝色曲线,不同曲线可通过颜色进行区分)的扩增曲线,使实验人员得出判断,该待测样本中存在目标靶基因A和目标靶基因B的错误定性,这种被称为荧光串扰,也是荧光串扰问题发生的一种原因,当然还有其他可能的原因导致荧光串扰,致使定性结果出现错误,荧光串扰的原因很多,这是荧光检测法无可避免的问题。通常如果我们仅需对待测样本检测一种或两种目标靶基因时,可以选择光学检测性能差别较大的两套光学检测装置去检测,这样不容易引发荧光串扰问题。但是如果在同一个待测样本中同时检测更多种目标靶基因时,因为光学检测装置的种类有限,那么势必会出现我们所选择的两套光学检测装置的光学检测性能接近,从而出现荧光串扰问题,那么这种多目标靶基因检测因为荧光串扰问题存在上限,也就是说在同一待测样本中同时检测的目标靶基因种类有限,例如6种就是极限了,当超过6种时,检测结果的错误率会升高。
综上,在现有技术中对同一待测样本进行多目标靶基因检测时存在两个问题。问题一是:要检测的目标靶基因种类多时,检测时间会叠加,最终完成该待测样本的检测的时间过久;问题二是:要检测的目标靶基因种类多时,势必会引起荧光串扰的问题,检测结果的错误率升高,因而对同一待测样本的多目标靶基因检测存在种类上限,不能无限制增多。因此,如何在保证可以检测多指标目标靶基因的情况下,加快检出速度、提高多指标的上限是一个亟待解决的问题。
本公司之前申请过关于试剂盒的专利,专利号为“CN202110518972.X”,由于该专利无法解决多指标检测时的荧光串扰问题、检测上限问题,因此本申请在上述专利的基础之上进行了改进,改进后本申请能够解决上述问题。
本公开实施例提供了一种多指标检测试剂盒,可以应用于PCR反应装置,并通过PCR反应装置中的荧光采集组件采集多指标检测试剂盒中待测样本的反应数据。
参照图2-图11所示,一种多指标检测试剂盒包括试剂盒主体1和反应区,反应区包括与试剂盒主体1连通的主反应区2和与主反应区2连通的至少一个副反应区3;主反应区2包括用于盛放待测样本的主反应腔21,副反应区3包括用于盛放待测样本的副反应腔31,副反应腔31与主反应腔21连通,主反应腔21和副反应腔31内的待测样本来源于同一份待测样本,也就是将同一待测样本分散在至少两个反应腔内;主反应腔21内部待测样本和副反应腔31内部待测样本可以分别通过荧光采集组件采取荧光反应数据,且主反应腔21和副反应腔31分别对应荧光采集组件发射的不同光路,从而不同反应腔可以同时对来源于同一待测样本的各自的待测样本进行不同的荧光检测,最终累计后则可以实现对同一待测样本同时检测多种目标靶基因;由于将同一待测样本分散在不同的反应腔内,每一反应腔内仅进行一种或两种目标靶基因的检测,因而可以缓解荧光串扰问题,相较于传统的荧光检测法,本申请提供的试剂盒可以不断增加副反应腔31的数量,且不会因为副反应腔31数量的增多引起荧光串扰问题的频发、检测结果错误率上升问题,因而提升了多指标检测的检测上限;此外在借助本申请的多指标检测试剂盒对同一待测样本实现多指标检测的过程中,多个反应腔内荧光检测在同一时间进行,相较于传统的荧光检测法,检出时间无需随着检测目标靶基因种类的增加而叠加,从而加快了检出速度。
其中,荧光采集组件可发射出多个光路照射反应区,且每个光路均为独立光路,即主反应区2对应一道光路,每个副反应区3也各自对应一道光路,每道光路进行不同的荧光检测,从而同一时间可以检测多种目标靶基因,加快检出速度,而且需要检测的目标靶基因种类较多时,可以尽量多的设置副反应区3,由于光路和反应区一一对应,从而缓解了荧光串扰的问题,最终也提高了多指标检测的检测上限。
在一些实施例中,主反应腔21内部开设有多个微室211,流向主反应腔21的待测样本被分割并捕获在微室211内部,并形成多个小样本(小样本只是对待测样本被分割后的命名),微室211的数量可以是千量级、万量级,当待测样本流向主反应腔21的过程中,待测样本被分割并被捕获在多个微室211内,从而通过物理结构将待测样本分割为多个小样本,使得一个微室211内填充有0个或1个目标靶基因,分割后进行样本扩增,从而便于进行后续的光学检测的定量计算。
在一些实施例中,荧光采集组件可以包括相机和扫描头,扫描头用于照射主反应腔21中的待测样本,相机用于拍摄微室211中的小样本,在扫描头发出的光线的照射下,具有目标靶基因的微室211中的小样本会被检测出荧光(对待测样本进行定性分析),而不具有目标靶基因的微室211中的小样本不会被检测出荧光,然后通过相机拍摄主反应腔21(通过相机对检测出荧光的微室211进行拍摄并记录),通过这种方式,可以实现对待测样本中目标靶基因数量的绝对计数定量(对待测样本进行定量分析),其他副反应腔31内的目标靶基因数量可以参考主反应腔21的计算结果进行推算,当然副反应腔31也可以同主反应腔21一样设置微室211进行绝对计数定量,通过该种设计能够提升检测结果定量的准确性,从而能够实现同时对待测样本进行定性、定量分析。当然荧光采集组件中也可以仅包括相机不包括扫描头,在这种情况下,因为待测样本中本身含有荧光物质,在进行扩增实验后荧光物质会被激活发出荧光从而可以通过相机拍摄记录。
相机可以为CCD相机,当待测样本被分隔在多个微室211后,先进行复制扩增,复制扩增结束后再进行检测,此处所使用的检测方法为成像法,也就是在旁侧设置CCD相机,CCD相机可以在同一照片上显示所有微室211的成像情况,当微室211内存在目标靶基因时,会出现亮点,当微室211内不存在目标靶基因时,则会是暗部,通过统计亮点数量则可以得知待测样本的目标靶基因含量,完成定性、定量判断。
上述的微室211内壁设置有亲水层,主反应腔21内部除微室211之外的位置设置有疏水层,由于待测样本为液体,因此可以使待测样本主要分布到微室211中,避免太多待测样本残留在主反应腔21的流道中,能够进一步地将小样本捕获到微室211中。
上述的微室211呈扇形结构,其包括弧面2111和弯折面2112,弯折面2112的两侧分别与弧面2111的两侧衔接,且弧面2111朝向待测样本进入的方向凸出,当待测样本进入微室211时,这里的弧面2111的拦截力相较于弯折面2112的拦截力较大,待测样本更容易通过弧面2111被捕获在微室211内。当然微室211的形状还可以是其他任意形状,扇形形状可以使填充满一个微室211所需的待测样本体积减少,以节省样本的消耗。弧面2111的弧度为20°~180°的范围内,优选为90°~120°。
上述的主反应腔21内部还设置有阻隔壁212,阻隔壁212设置在微室211的一侧,对进入主反应腔21的待测样本进行阻隔,使待测样本能够先铺满微室211。
需要说明的是,副反应腔31的结构与主反应腔21的结构相同,因此副反应腔31所实现的效果也与主反应腔21相同,因此这里不再赘述。
在一些实施例中,主反应区2还包括主反应板22,主反应板22与试剂盒主体1连接,且主反应板22上开设有进样通道23和出样通道24;主反应腔21设置在主反应板22上,且主反应腔21一侧连接进样通道23,另一侧连接出样通道24,进样通道23和出样通道24在同一时刻,择一与试剂盒主体1内部的反应腔体连通,即当需要进液时,进样通道23与反应腔体连通,出样通道24被封堵,待测样本通过进样通道23流入主反应腔21,当检测完成后,待测样本通过出样通道24流回反应腔体,由于进出液的方式为现有技术,因此这里先不做具体介绍。
在一些实施例中,主反应区2的一侧具有第一封膜25,且第一封膜25的至少一部分附在主反应腔21上,副反应区3的一侧具有第二封膜36,且第二封膜36的至少一部分附在副反应腔31上,第一封膜25和第二封膜36为透明材质,荧光采集组件的光路分别穿过第一封膜25射入主反应腔21内部,穿过第二封膜36射入副反应腔31内部,从而对待测样本进行荧光检测。
上述的主反应区2与试剂盒主体1一体成型或焊接连接。
上述的荧光采集组件设置在第一封膜25和第二封膜36的一侧,光路分别穿过第一封膜25、第二封膜36照射待测样本。应理解的是,荧光采集组件可以是现有技术中任何可实现目标靶基因检测的结构,此处仅是提供了一种可能的方式。
在一些实施例中,如图2所示,副反应区3设置多个,多个副反应区3沿试剂盒主体长度方向X、试剂盒主体宽度方向Y和试剂盒主体高度方向Z中的一个方向阵列;或者,多个副反应区3沿试剂盒主体长度方向X、试剂盒主体宽度方向Y和试剂盒主体高度方向Z中的两个方向阵列;或者,多个副反应区3沿试剂盒主体长度方向X、试剂盒主体宽度方向Y和试剂盒主体高度方向Z同时阵列;从而副反应区3可具有多种排布方式,下述举例三种方式。
第一种排布方式:如图3所示,副反应区3可以设置两个,两个副反应区3沿试剂盒主体高度方向Z依次排列;副反应区3包括第一副反应板32,第一副反应板32与试剂盒主体1连接,副反应腔31设置在第一副反应板32上,此时主反应板22和第一副反应板32可以焊接在试剂盒主体1上;其中,与主反应腔21相邻的副反应腔31通过第一通管41与主反应腔21连接,相邻的副反应腔31之间均通过第二通管42连接,待测样本进入主反应腔21后通过第一通管41进入相邻的副反应腔31,然后再通过第二通管42进入其他的副反应腔31,直至主反应腔21和副反应腔31填满待测样本,然后通过荧光采集组件检测。这里的荧光采集组件中设置有多个独立的光学通道,多个光学通道分别对应主反应腔21和副反应腔31,即主反应腔21和副反应腔31与光学通道一一对应,一个光学通道用于检测一种目标靶基因。
第二种排布方式:如图6所示,副反应区3可以设置两个,两个副反应区3沿试剂盒主体宽度方向Y依次排列;副反应区3包括第二副反应板33,第二副反应板33与试剂盒主体1连接,副反应腔31设置在第二副反应板33上;主反应板22和第二副反应板33均可以通过连接杆连接在试剂盒主体1上;副反应腔31均通过第三通管43与主反应腔21连接,待测样本进入主反应腔21后通过第三通管43依次进入副反应腔31,直至主反应腔21和副反应腔31填满待测样本,然后通过荧光采集组件检测。这里的荧光采集组件中设置有多个独立的光学通道,第一个光学通道设置在主反应腔21的外侧,第二个光学通道设置在主反应腔21和副反应腔31之间,除第一个光学通道和第二个光学通道之外的光学通道均设置在相邻的副反应腔31之间,使一个光学通道对应一个副反应腔31。即主反应腔21和副反应腔31分别与光学通道一一对应,一个光学通道用于检测一种目标靶基因。
上述的主反应腔21的背部(即远离第一封膜25的一侧)设置有阻光板,避免不同的光线之间的影响。
应理解的是,上述副反应区3的设置数量还可以是大于两个。
第三种排布方式:如图7所示,副反应区3可以设置多个,多个副反应区3沿试剂盒主体长度方向X和试剂盒主体高度方向Z阵列,即多个副反应区3沿试剂盒主体长度方向X和试剂盒主体高度方向Z阵列形成“井”字状的排布结构,副反应区3包括第一副反应区和第二副反应区,第一副反应区与主反应区2相连,第二副反应区与第一副反应区相连;第一副反应区内部开设有第一副反应腔34,第二副反应区内部开设有第二副反应腔35,主反应腔21和/或进样通道23通过第四通管44与第一副反应腔34连通,第一副反应腔34通过第五通管45与第二副反应腔35连通;待测样本进入主反应腔21后通过第四通管44进入第一副反应腔34,然后再通过第五通管45进入第二副反应腔35,直至所有反应腔(包括主反应腔21、第一副反应腔34、第二副反应腔35)填满待测样本,然后通过荧光采集组件检测。这里的荧光采集组件中设置有多个独立的光学通道,每个光学通道对应一个反应腔,一个光学通道用于检测一种目标靶基因。
在一些实施例中,试剂盒主体1内具有石蜡油,例如,石蜡油进入主反应腔21后铺设在微室211的表面,当微室211内的目标靶基因扩增时,能够避免目标靶基因溢出微室211,还可以防止微室211内的小样本的蒸发。
在一些实施例中,试剂盒主体1包括盒体11、顶盖12、底座13和切换阀14;盒体11顶部设置顶盖12,底部设置底座13,切换阀14设置在盒体11内部;盒体11构造有中心通孔113,中心通孔113贯通盒体11的顶壁与底壁,中心通孔113的四周构造有多个彼此隔离的反应腔体,底壁上构造有过液孔;切换阀14内构造有中转存储腔141以及与中转存储腔141贯通的第一进出口142、第二进出口143,切换阀14能够被驱动围绕中心通孔113的轴线旋转,以实现第一进出口142、第二进出口143中的任意一个与多个反应腔体中的一个贯通;过液孔分布在两个预设直径且同心设置的分布圆上,分为第一圈过液孔111和第二圈过液孔112,第二圈过液孔112所在分布圆的半径可大于或者小于第一圈过液孔111所在分布圆的半径;反应腔体包括预处理腔101、样品腔102、清洗液腔103、缓冲液腔104、废液腔105、一次引物探针106、石蜡油腔107和预留腔108,各个腔室的腔底壁上分别构造有对应的第一圈过液孔111,可以理解的,通过相应的控制系统(控制驱动部件)驱动切换阀14旋转预设的角度,从而使第一进出口142、第二进出口143中的一个与前述八个腔室中的一个具有的第一圈过液孔111对齐(形成贯通),从而实现将贯通的腔室中的液体从腔室中转移到中转存储腔141中,或者从中转存储腔141中转移到相应的腔室中,可见,切换阀14实现了现有技术中的移液枪的功能。另外,各个腔室内的液体可由电脑自动执行所需要配置的顺序和数量,系统由高精度电机提供精准的定量。多个反应腔体的形状被合理选择,例如三角形、四角形、多边形、圆形等,具体依据腔室的设置个数与盒体11的空间大小被选择并布置。这里的液体的进出可通过活塞头运动来进出,由于进出液的方式为现有技术,因此这里先不做具体介绍。
综上,本实施例提供的多指标检测试剂盒包括试剂盒主体1和反应区,反应区包括主反应区2和副反应区3,主反应区2包括用于盛放待测样本的主反应腔21,副反应区3包括用于盛放待测样本的副反应腔31,副反应腔31与主反应腔21连通,主反应腔21和副反应腔31内的待测样本来源于同一份待测样本,也就是将同一待测样本分散在至少两个反应腔内;主反应腔21内部待测样本和副反应腔31内部待测样本可以分别通过荧光采集组件采取荧光反应数据,且主反应腔21和副反应腔31分别对应荧光采集组件发射的不同光路;由于荧光采集组件可发射出多个光路照射反应区,即主反应区2对应一道光路,副反应区3对应一道光路,当副反应区3的数量为多个时,每个副反应区各自对应一道光路,从而不同反应腔可以同时对来源于同一待测样本的各自的待测样本进行不同的荧光检测,最终累计后则可以实现对同一待测样本同时检测多种目标靶基因;由于将同一待测样本分散在不同的反应腔内,每一反应腔内仅进行一种或两种目标靶基因的检测,因而可以缓解荧光串扰问题,相较于传统的荧光检测法,本申请提供的多指标检测试剂盒可以不断增加副反应腔31的数量,且不会因为副反应腔31数量的增多引起荧光串扰问题的频发、检测结果错误率上升问题,因而提升了多指标检测的检测上限;此外在借助本申请的多指标检测试剂盒对同一待测样本实现多指标检测的过程中,多个反应腔内荧光检测在同一时间进行,相较于传统的荧光检测法,检出时间无需随着检测目标靶基因种类的增加而叠加,从而加快了检出速度。
此外,本公开实施例还提供了一种PCR反应装置,包括荧光采集组件和上述的多指标检测试剂盒,多指标检测试剂盒中的主反应腔21内部待测样本和副反应腔31内部待测样本分别通过荧光采集组件采取荧光反应数据,且主反应腔21和副反应腔31分别对应荧光采集组件发射的不同光路。因为也具有如上所述的相同或者类似的技术效果,在此不再一一赘述,具体可参照上述的多指标检测试剂盒的描述。
在本发明的描述中,需要理解的是,指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系,仅是为了便于描述本发明和简化描述,而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作,因此不能理解为对本发明的限制。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、 “示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (7)

1.一种多指标检测试剂盒,其特征在于,包括:试剂盒主体和反应区,所述反应区包括与所述试剂盒主体连通的主反应区和与所述主反应区连通的至少一个副反应区;
所述主反应区包括用于盛放待测样本的主反应腔,所述副反应区包括用于盛放待测样本的副反应腔,所述副反应腔与所述主反应腔连通;
所述主反应腔内部开设有多个微室,所述待测样本被分割并捕获在所述微室内部,并形成多个小样本;
所述微室内壁设置有亲水层,所述主反应腔内部除所述微室之外的位置设置有疏水层;
所述微室包括弧面和弯折面,所述弯折面的两侧分别与所述弧面的两侧衔接,且所述弧面朝向所述待测样本进入的方向凸出;
所述主反应腔内部还设置有阻隔壁,所述阻隔壁设置在所述微室的一侧。
2.根据权利要求1所述的多指标检测试剂盒,其特征在于,所述副反应腔的结构与所述主反应腔的结构相同。
3.根据权利要求1或2所述的多指标检测试剂盒,其特征在于,所述主反应区还包括主反应板,所述主反应板与所述试剂盒主体连接,且所述主反应板上开设有进样通道和出样通道;
所述主反应腔设置在所述主反应板上,且所述主反应腔一侧连接所述进样通道,另一侧连接所述出样通道,所述进样通道和所述出样通道在同一时刻,择一与所述试剂盒主体内部的反应腔体连通。
4.根据权利要求3所述的多指标检测试剂盒,其特征在于,所述副反应区设置多个,多个所述副反应区沿所述试剂盒主体长度方向(X)、所述试剂盒主体宽度方向(Y)和所述试剂盒主体高度方向(Z)中的一个方向阵列;
或者,多个所述副反应区沿所述试剂盒主体长度方向(X)、所述试剂盒主体宽度方向(Y)和所述试剂盒主体高度方向(Z)中的两个方向阵列;
或者,多个所述副反应区沿所述试剂盒主体长度方向(X)、所述试剂盒主体宽度方向(Y)和所述试剂盒主体高度方向(Z)同时阵列。
5.根据权利要求4所述的多指标检测试剂盒,其特征在于,
所述副反应区设置两个,两个所述副反应区沿所述试剂盒主体高度方向(Z)依次排列,所述副反应区包括第一副反应板,所述第一副反应板与所述试剂盒主体连接,所述副反应腔设置在所述第一副反应板上,与所述主反应腔相邻的所述副反应腔通过第一通管与所述主反应腔连接,相邻的所述副反应腔之间均通过第二通管连接,或;
所述副反应区设置两个,两个所述副反应区沿所述试剂盒主体宽度方向(Y)依次排列,所述副反应区包括第二副反应板,所述第二副反应板与所述试剂盒主体连接,所述副反应腔设置在所述第二副反应板上,所述副反应腔均通过第三通管与所述主反应腔连接,或;
所述副反应区设置多个,多个所述副反应区沿所述试剂盒主体长度方向(X)和所述试剂盒主体高度方向(Z)阵列,所述副反应区包括第一副反应区和第二副反应区,所述第一副反应区与所述主反应区相连,所述第二副反应区与所述第一副反应区相连,所述第一副反应区内部开设有第一副反应腔,所述第二副反应区内部开设有第二副反应腔,所述主反应腔和/或所述进样通道通过第四通管与所述第一副反应腔连通,所述第一副反应腔通过第五通管与相邻的所述第二副反应腔连通。
6.根据权利要求1或2所述的多指标检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒主体内具有石蜡油,所述石蜡油进入所述主反应腔后铺设在所述微室的表面。
7.一种PCR反应装置,其特征在于,包括荧光采集组件和权利要求1-6任一项所述的多指标检测试剂盒,所述多指标检测试剂盒中的所述主反应腔内部待测样本和所述副反应腔内部待测样本分别通过荧光采集组件采取荧光反应数据,且所述主反应腔和所述副反应腔分别对应所述荧光采集组件发射的不同光路。
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