CN110551081B - 一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭ⅲ的方法 - Google Patents

一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭ⅲ的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110551081B
CN110551081B CN201910917250.4A CN201910917250A CN110551081B CN 110551081 B CN110551081 B CN 110551081B CN 201910917250 A CN201910917250 A CN 201910917250A CN 110551081 B CN110551081 B CN 110551081B
Authority
CN
China
Prior art keywords
extracting
taxus
deacetylbaccatin iii
ethanol
acetone
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910917250.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110551081A (zh
Inventor
葛月兰
高杰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuxi Yew Pharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Wuxi Yeshan Pharmaceutical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wuxi Yeshan Pharmaceutical Co ltd filed Critical Wuxi Yeshan Pharmaceutical Co ltd
Priority to CN201910917250.4A priority Critical patent/CN110551081B/zh
Publication of CN110551081A publication Critical patent/CN110551081A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110551081B publication Critical patent/CN110551081B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D305/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atoms
    • C07D305/14—Heterocyclic compounds containing four-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atoms condensed with carbocyclic rings or ring systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种从南方红豆杉中提取10‑脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，涉及天然产物提取技术领域，该方法包括以下步骤：(1)粉碎；液氮处理；氨气爆破处理；(2)石油醚超声除杂；(3)乙醇高压恒温提取；乙醇超声提取；(4)减压浓缩，丙酮溶解，过滤，浓缩，得粗提取物一；(5)上大孔吸附树脂，依次经碱液洗涤、去离子水洗涤，然后使用乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，得粗提取物二；(6)一次重结晶：采用乙腈进行重结晶；(7)二次重结晶：采用丙酮/石油醚体系进行重结晶；本发明可操作性能强，合理设置每一步骤并严格控制操作参数，可得到纯度和得率优异的10‑脱乙酰基巴卡亭Ⅲ，纯度达到99.3％以上，得率在0.0242％以上。

Description

一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法
技术领域
本发明涉及天然产物提取技术领域，具体涉及一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法。
背景技术
南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)是红豆杉科(Taxaceae)红豆杉属(Taxus)在中国的1个变种，是国家一级保护树种。红豆杉植物中的紫杉醇属于二萜类化合物，是目前最有效的抗癌药物，主要用于治疗卵巢癌、乳腺癌，对肺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤、脑瘤也有一定的疗效。红豆杉植物生物合成紫杉醇的最重要前体物质10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)，也是二萜类紫杉烷衍生物，是目前半合成生产紫杉醇或多烯紫杉醇(多烯它赛，docetaxe)的主要原料。
10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ主要分布在一年生红豆杉的枝叶中，其含量在0.1％以上，因枝叶为再生性资源，且10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ在红豆杉中含量比紫杉醇丰富的多，分离提取的收率也高于紫杉醇，使得半合成方法越来越受到重视。
申请号为CN201310125299.9的国内专利公开了一种10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ的高效提取纯化工艺，以有机溶剂浸泡、提取，有机溶剂溶解除杂、萃取和特殊溶剂中纯化处理得到0-去乙酰基巴卡亭Ⅲ。该工艺得到10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ的收率达到67.2％，含量在96.5％以上，其纯度并不优异。
申请号为CN201510603454.2的国内专利公开了一种以曼地亚红豆杉枝叶为原料制备高纯度10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，工艺步骤为：粗提、沉降、吸附、溶解、结晶、重结晶；该方法通过大孔树脂吸附、采用不同单一溶剂对粗品进行溶解，除掉了大量的不溶杂质，再经多次结晶最终得到高纯度的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ，但是其操作较复杂，生产时间长，生产成本较高。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本申请提供了一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，可操作性能强，通过合理设置液氮处理、氨气爆破处理、石油醚超声除杂、乙醇高压恒温提取、乙醇超声提取、大孔树脂吸附、一次重结晶、二次重结晶等步骤，并严格控制操作参数，可得到纯度和得率优异的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ，纯度达到99.3％以上，得率在0.0242％以上。
本发明的技术方案如下：
一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，包括以下步骤：
(1)将南方红豆杉枝叶烘干后，粉碎过筛，得红豆杉粉末；将红豆杉粉末浸入液氮中，浸渍时间为3～4min，浸渍次数为3～5次；然后进行氨气爆破处理，其中反应压力为2～2.5MPa，反应时间为15～25min，红豆杉粉末与液氨的固液比为1:5～8g/mL；然后进行减压爆破；
(2)向经过步骤(1)处理所得的物料中加入石油醚；于30～35℃下超声提取10～15min；过滤，得过滤物；
(3)向过滤物中加入质量浓度为60～70％的乙醇，50～55℃下恒温提取2～3h，提取压力为50～70Mpa；再于50～55℃下超声提取30～40min；
(4)将所得提取液进行减压浓缩，回收溶剂，将所得浓缩物加丙酮进行溶解，然后过滤；过滤后取丙酮液，进行减压浓缩，回收溶剂，得粗提取物一；
(5)向粗提取物一中加入乙醇和正己烷的混合溶剂进行溶解，得溶解液；溶解液上大孔吸附树脂，依次经pH值为9～10的碱液洗涤、去离子水洗涤，然后使用质量浓度为60～75％的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得粗提取物二；
(6)一次重结晶：将所得粗提取物二中加入乙腈；边搅拌边加热至70～73℃，然后再缓慢加入乙腈，直至粗提取物二全部溶解，然后自然冷却至室温，并放置8～12h；经过滤、真空干燥得重结晶粗品；
(7)二次重结晶：将重结晶粗品加入丙酮，将温度控制在40～45℃，缓慢加入丙酮至重结晶粗品全部溶解，然后在搅拌状态下，缓慢加入石油醚，加入完毕后，室温下自然结晶8～12h，过滤，得结晶体，真空干燥得10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ。
优选地，步骤(1)中，粉碎过30～40目筛。
优选地，步骤(2)中，经过步骤(1)处理所得的物料与石油醚的质量体积比为1:5～7g/mL。
优选地，步骤(2)中，超声提取时的功率为100～150W；步骤(3)中，超声提取时的功率为300～500W。
优选地，步骤(3)中，红豆杉粉末与乙醇的质量体积比为1:10～15g/mL。
优选地，步骤(5)中，碱液为氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液。
优选地，步骤(5)中，碱液用量为红豆杉粉末投料量的1.5～2倍，去离子水洗涤至大孔树脂柱的流出液呈清亮透明态。
优选地，步骤(5)中，大孔吸附树脂的用量为红豆杉粉末投料量的1.2～1.5倍。
优选地，步骤(7)，丙酮与石油醚的体积比为1:4.5～6。
优选地，步骤(2)、(7)中所用石油醚的沸程为60～90℃。
本发明的有益效果：
1、本发明从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ时，先将红豆杉粉末进行粉碎，进行液氮冷冻后，细胞壁脆性明显增加，有利于10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的分离。然后通过液氨减压爆破，促进红豆杉粉末组织变得更加疏松，进一步提高了10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ与细胞各物质的分离效率，有效提高了产品的得率，且有利于提高产品的纯度。
2、本发明将采用“液氮处理”、“氨气爆破处理”后的物料采用石油醚进行超声提取，石油醚将其中部分杂质进行溶解，并且脱脂脱色效果好，对于提高10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ有较好的效果。
3、本发明在石油醚超声除杂后进行“乙醇高压恒温提取”时，高压可使南方红豆杉细胞瞬间破碎并膨胀，促进细胞内有效成分溶出，而“乙醇超声提取”时，超声波提取时产生空化效应和热效应，通过增大介质分子的运动速度、增大介质的穿透力以提取生物有效成分，从而使细胞内有效成分溶出较彻底，有效提高了10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的得率。“液氮处理”、“氨气爆破处理”结合“乙醇高压恒温提取”结合“乙醇超声提取”，可将南方红豆杉中的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的提取率提升，无需将残渣再次进行提取。
4、本发明采用大孔树脂吸附代替萃取进行进一步纯化，操作更加方便。其中先采用微碱性的减水洗涤，其中氢氧根离子可交换吸附溶液中的阴离子杂质，然后结合去离子水洗，即可去除阴离子杂质，有利于纯化10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ。
5、在后续进行重结晶时，先采用乙腈进行重结晶，加热至较高温度后再缓慢加入适量乙腈使提取物进行溶解，可在乙腈量较少的情况下进行重结晶，既可以去除较多量的杂质，又可使10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的保留量增多，之后采用丙酮/石油醚体系进行二次重结晶，可使剩余杂质较多量的溶解在丙酮/石油醚中，使得到的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的纯度大，同时又可得到较多量的结晶。
6、本发明方法中，可操作性能强，通过液氮处理、氨气爆破处理、石油醚超声除杂、乙醇高压恒温提取、乙醇超声提取、大孔树脂吸附、一次重结晶、二次重结晶等步骤，可得到纯度和得率优异的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ，纯度达到99.3％以上，得率在0.0242％以上。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进行具体描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，包括以下步骤：
(1)将南方红豆杉枝叶烘干后，粉碎过30筛，得红豆杉粉末；将红豆杉粉末浸入液氮中，浸渍时间为4min，浸渍次数为5次；然后进行氨气爆破处理，其中反应压力为2.5MPa，反应时间为20min，红豆杉粉末与液氨的固液比为1:7g/mL；然后进行减压爆破；
(2)向经过步骤(1)处理所得的物料中加入石油醚(沸程为60～90℃),红豆杉粉末与石油醚的质量体积比为1:5g/mL；于35℃下超声提取(常压下)12min，超声提取时的功率为100W；过滤，得过滤物；
(3)向过滤物中加入质量浓度为65％的乙醇，红豆杉粉末与乙醇的质量体积比为1:13g/mL；55℃下恒温提取2.5h，提取压力为60Mpa；再于55℃下超声提取40min，超声提取时的功率为500W；
(4)将所得提取液进行减压浓缩，回收溶剂，将所得浓缩物加丙酮进行溶解，然后过滤；过滤后取丙酮液，进行减压浓缩，回收溶剂，得粗提取物一；
(5)向粗提取物一中加入乙醇和正己烷的混合溶剂进行溶解，得溶解液，其中乙醇和正己烷的体积比为1：4；溶解液上大孔吸附树脂，大孔吸附树脂的用量为红豆杉粉末投料量的1.2倍；依次经pH值为10的氢氧化钠溶液洗涤、去离子水洗涤，氢氧化钠溶液用量为红豆杉粉末投料量的2倍，去离子水洗涤至大孔树脂柱的流出液呈清亮透明态；然后使用质量浓度为70％的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得粗提取物二；
(6)一次重结晶：将所得粗提取物二中加入乙腈；边搅拌边加热至70℃，然后再缓慢加入乙腈，直至粗提取物二全部溶解，然后自然冷却至室温，并放置10h；经过滤、真空干燥得重结晶粗品；
(7)二次重结晶：将重结晶粗品加入丙酮，将温度控制在40℃，缓慢加入丙酮至重结晶粗品全部溶解，然后在搅拌状态下，缓慢加入石油醚(沸程为60～90℃)，丙酮与石油醚的体积比为1:5；加入完毕后，室温下自然结晶10h，过滤，得结晶体，真空干燥得10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ。
实施例2：
一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，包括以下步骤：
(1)将南方红豆杉枝叶烘干后，粉碎过40筛，得红豆杉粉末；将红豆杉粉末浸入液氮中，浸渍时间为3min，浸渍次数为3次；然后进行氨气爆破处理，其中反应压力为2MPa，反应时间为20min，红豆杉粉末与液氨的固液比为1:6g/mL；然后进行减压爆破；
(2)向经过步骤(1)处理所得的物料中加入石油醚(沸程为60～90℃),红豆杉粉末与石油醚的质量体积比为1:6g/mL；于30℃下超声提取13min，超声提取时的功率为100W；过滤，得过滤物；
(3)向过滤物中加入质量浓度为65％的乙醇，红豆杉粉末与乙醇的质量体积比为1:12g/mL；50℃下恒温提取2.5h，提取压力为60Mpa；再于50℃下超声提取35min，超声提取时的功率为500W；
(4)将所得提取液进行减压浓缩，回收溶剂，将所得浓缩物加丙酮进行溶解，然后过滤；过滤后取丙酮液，进行减压浓缩，回收溶剂，得粗提取物一；
(5)向粗提取物一中加入乙醇和正己烷的混合溶剂进行溶解，得溶解液，其中乙醇和正己烷的体积比为1：6；溶解液上大孔吸附树脂，大孔吸附树脂的用量为红豆杉粉末投料量的1.5倍；依次经pH值为10的氢氧化钾溶液洗涤、去离子水洗涤，氢氧化钾溶液用量为红豆杉粉末投料量的1.5倍，去离子水洗涤至大孔树脂柱的流出液呈清亮透明态；然后使用质量浓度为65％的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得粗提取物二；
(6)一次重结晶：将所得粗提取物二中加入乙腈；边搅拌边加热至72℃，然后再缓慢加入乙腈，直至粗提取物二全部溶解，然后自然冷却至室温，并放置12h；经过滤、真空干燥得重结晶粗品；
(7)二次重结晶：将重结晶粗品加入丙酮，将温度控制在45℃，缓慢加入丙酮至重结晶粗品全部溶解，然后在搅拌状态下，缓慢加入石油醚(沸程为60～90℃)，丙酮与石油醚的体积比为1:4.5；加入完毕后，室温下自然结晶12h，过滤，得结晶体，真空干燥得10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ。
实施例3：
一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，包括以下步骤：
(1)将南方红豆杉枝叶烘干后，粉碎过30筛，得红豆杉粉末；将红豆杉粉末浸入液氮中，浸渍时间为4min，浸渍次数为5次；然后进行氨气爆破处理，其中反应压力为2.5MPa，反应时间为25min，红豆杉粉末与液氨的固液比为1:8g/mL；然后进行减压爆破；
(2)向经过步骤(1)处理所得的物料中加入石油醚(沸程为60～90℃),红豆杉粉末与石油醚的质量体积比为1:7g/mL；于35℃下超声提取15min，超声提取时的功率为120W；过滤，得过滤物；
(3)向过滤物中加入质量浓度为65％的乙醇，红豆杉粉末与乙醇的质量体积比为1:12g/mL；52℃下恒温提取3h，提取压力为60Mpa；再于50℃下超声提取40min，超声提取时的功率为400W；
(4)将所得提取液进行减压浓缩，回收溶剂，将所得浓缩物加丙酮进行溶解，然后过滤；过滤后取丙酮液，进行减压浓缩，回收溶剂，得粗提取物一；
(5)向粗提取物一中加入乙醇和正己烷的混合溶剂进行溶解，得溶解液，其中乙醇和正己烷的体积比为1：4；溶解液上大孔吸附树脂，大孔吸附树脂的用量为红豆杉粉末投料量的1.3倍；依次经pH值为10的氢氧化钾溶液洗涤、去离子水洗涤，氢氧化钾溶液用量为红豆杉粉末投料量的2倍，去离子水洗涤至大孔树脂柱的流出液呈清亮透明态；然后使用质量浓度为75％的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得粗提取物二；
(6)一次重结晶：将所得粗提取物二中加入乙腈；边搅拌边加热至70℃，然后再缓慢加入乙腈，直至粗提取物二全部溶解，然后自然冷却至室温，并放置10h；经过滤、真空干燥得重结晶粗品；
(7)二次重结晶：将重结晶粗品加入丙酮，将温度控制在40℃，缓慢加入丙酮至重结晶粗品全部溶解，然后在搅拌状态下，缓慢加入石油醚(沸程为60～90℃)，丙酮与石油醚的体积比为1:5.5；加入完毕后，室温下自然结晶9h，过滤，得结晶体，真空干燥得10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ。
实施例4：
一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，包括以下步骤：
(1)将南方红豆杉枝叶烘干后，粉碎过30筛，得红豆杉粉末；将红豆杉粉末浸入液氮中，浸渍时间为4min，浸渍次数为5次；然后进行氨气爆破处理，其中反应压力为2MPa，反应时间为22min，红豆杉粉末与液氨的固液比为1:6.5g/mL；然后进行减压爆破；
(2)向经过步骤(1)处理所得的物料中加入石油醚(沸程为60～90℃),红豆杉粉末与石油醚的质量体积比为1:7g/mL；于30℃下超声提取10min，超声提取时的功率为120W；过滤，得过滤物；
(3)向过滤物中加入质量浓度为65％的乙醇，红豆杉粉末与乙醇的质量体积比为1:10g/mL；50℃下恒温提取3h，提取压力为70Mpa；再于50℃下超声提取35min，超声提取时的功率为450W；
(4)将所得提取液进行减压浓缩，回收溶剂，将所得浓缩物加丙酮进行溶解，然后过滤；过滤后取丙酮液，进行减压浓缩，回收溶剂，得粗提取物一；
(5)向粗提取物一中加入乙醇和正己烷的混合溶剂进行溶解，得溶解液，其中乙醇和正己烷的体积比为1：5；溶解液上大孔吸附树脂，大孔吸附树脂的用量为红豆杉粉末投料量的1.5倍；依次经pH值为9的氢氧化钠溶液洗涤、去离子水洗涤，氢氧化钠溶液洗涤用量为红豆杉粉末投料量的1.5倍，去离子水洗涤至大孔树脂柱的流出液呈清亮透明态；然后使用质量浓度为70％的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得粗提取物二；
(6)一次重结晶：将所得粗提取物二中加入乙腈；边搅拌边加热至73℃，然后再缓慢加入乙腈，直至粗提取物二全部溶解，然后自然冷却至室温，并放置8h；经过滤、真空干燥得重结晶粗品；
(7)二次重结晶：将重结晶粗品加入丙酮，将温度控制在45℃，缓慢加入丙酮至重结晶粗品全部溶解，然后在搅拌状态下，缓慢加入石油醚(沸程为60～90℃)，丙酮与石油醚的体积比为1:5；加入完毕后，室温下自然结晶12h，过滤，得结晶体，真空干燥得10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ。
实施例5：
一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，包括以下步骤：
(1)将南方红豆杉枝叶烘干后，粉碎过40筛，得红豆杉粉末；将红豆杉粉末浸入液氮中，浸渍时间为3min，浸渍次数为3次；然后进行氨气爆破处理，其中反应压力为2.5MPa，反应时间为15min，红豆杉粉末与液氨的固液比为1:5g/mL；然后进行减压爆破；
(2)向经过步骤(1)处理所得的物料中加入石油醚(沸程为60～90℃),红豆杉粉末与石油醚的质量体积比为1:5g/mL；于32℃下超声提取12min，超声提取时的功率为150W；过滤，得过滤物；
(3)向过滤物中加入质量浓度为60％的乙醇，红豆杉粉末与乙醇的质量体积比为1:15g/mL；55℃下恒温提取2.5h，提取压力为50Mpa；再于55℃下超声提取30min，超声提取时的功率为500W；
(4)将所得提取液进行减压浓缩，回收溶剂，将所得浓缩物加丙酮进行溶解，然后过滤；过滤后取丙酮液，进行减压浓缩，回收溶剂，得粗提取物一；
(5)向粗提取物一中加入乙醇和正己烷的混合溶剂进行溶解，得溶解液，其中乙醇和正己烷的体积比为1：5；溶解液上大孔吸附树脂，大孔吸附树脂的用量为红豆杉粉末投料量的1.2倍；依次经pH值为10的氢氧化钾溶液洗涤、去离子水洗涤，氢氧化钾溶液用量为红豆杉粉末投料量的2倍，去离子水洗涤至大孔树脂柱的流出液呈清亮透明态；然后使用质量浓度为60％的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得粗提取物二；
(6)一次重结晶：将所得粗提取物二中加入乙腈；边搅拌边加热至70℃，然后再缓慢加入乙腈，直至粗提取物二全部溶解，然后自然冷却至室温，并放置10h；经过滤、真空干燥得重结晶粗品；
(7)二次重结晶：将重结晶粗品加入丙酮，将温度控制在40℃，缓慢加入丙酮至重结晶粗品全部溶解，然后在搅拌状态下，缓慢加入石油醚(沸程为60～90℃)，丙酮与石油醚的体积比为1:4.5；加入完毕后，室温下自然结晶10h，过滤，得结晶体，真空干燥得10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ。
实施例6：
一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，包括以下步骤：
(1)将南方红豆杉枝叶烘干后，粉碎过35筛，得红豆杉粉末；将红豆杉粉末浸入液氮中，浸渍时间为4min，浸渍次数为5次；然后进行氨气爆破处理，其中反应压力为2.5MPa，反应时间为25min，红豆杉粉末与液氨的固液比为1:6g/mL；然后进行减压爆破；
(2)向经过步骤(1)处理所得的物料中加入石油醚(沸程为60～90℃),红豆杉粉末与石油醚的质量体积比为16g/mL；于35℃下超声提取15min，超声提取时的功率为100W；过滤，得过滤物；
(3)向过滤物中加入质量浓度为70％的乙醇，红豆杉粉末与乙醇的质量体积比为1:12g/mL；52℃下恒温提取3h，提取压力为50～70Mpa；再于52℃下超声提取40min，超声提取时的功率为300W；
(4)将所得提取液进行减压浓缩，回收溶剂，将所得浓缩物加丙酮进行溶解，然后过滤；过滤后取丙酮液，进行减压浓缩，回收溶剂，得粗提取物一；
(5)向粗提取物一中加入乙醇和正己烷的混合溶剂进行溶解，得溶解液，其中乙醇和正己烷的体积比为1：5；溶解液上大孔吸附树脂，大孔吸附树脂的用量为红豆杉粉末投料量的1.3倍；依次经pH值为9.5的氢氧化钠溶液洗涤、去离子水洗涤，氢氧化钠溶液洗涤用量为红豆杉粉末投料量的1.5倍，去离子水洗涤至大孔树脂柱的流出液呈清亮透明态；然后使用质量浓度为75％的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得粗提取物二；
(6)一次重结晶：将所得粗提取物二中加入乙腈；边搅拌边加热至72℃，然后再缓慢加入乙腈，直至粗提取物二全部溶解，然后自然冷却至室温，并放置12h；经过滤、真空干燥得重结晶粗品；
(7)二次重结晶：将重结晶粗品加入丙酮，将温度控制在40～45℃，缓慢加入丙酮至重结晶粗品全部溶解，然后在搅拌状态下，缓慢加入石油醚(沸程为60～90℃)，丙酮与石油醚的体积比为1:6；加入完毕后，室温下自然结晶8h，过滤，得结晶体，真空干燥得10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ。
对比例1：
与实施例6不同的是，步骤(1)为：将南方红豆杉枝叶烘干后，粉碎过35筛，得红豆杉粉末。
其余步骤均与实施例6一致。
对比例2：
与实施例不同的是，步骤(1)为：将南方红豆杉枝叶烘干后，粉碎过35筛，得红豆杉粉末；将红豆杉粉末浸入液氮中，浸渍时间为4min，浸渍次数为5次。
其余步骤均与实施例6一致。
对比例3：
与实施例不同的是，步骤(1)为：将南方红豆杉枝叶烘干后，粉碎过35筛，得红豆杉粉末；将红豆杉粉末进行氨气爆破处理，其中反应压力为2.5MPa，反应时间为25min，红豆杉粉末与液氨的固液比为1:6g/mL；然后进行减压爆破。
其余步骤均与实施例6一致。
对比例4：
与实施例6不同的是，将经过步骤(1)处理所得的物料直接进行步骤(3)中的乙醇高压恒温提取、乙醇超声提取。
其余步骤均与实施例6一致。
鉴别：
取实施例1-6以及对比例1-4中的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ0.2g，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。再取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》四部通则0502)试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(8:12:0.8)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10％硫酸乙醇溶液，110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定：
按干燥品计算，本品含10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ不得少于0.02％。照高效液相色谱法(通则0512)测定。
对照品溶液的制备：取五氧化二磷减压干燥3小时以上的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取五氧化二磷减压干燥3小时以上的实施例1-6以及对比例1-4中的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
测定结果分析：
采用同一红豆杉的枝叶作为原料，测定实施例1-6以及对比例1-4中得到的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)的纯度和得率，具体如表1所示。
表1 10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的纯度和得率
10-DABⅢ纯度/％ 10-DABⅢ得率/％
实施例1 99.32 0.0296
实施例2 99.53 0.0254
实施例3 99.61 0.0275
实施例4 99.54 0.0287
实施例5 99.37 0.0242
实施例6 99.42 0.0269
对比例1 99.18 0.0126
对比例2 99.22 0.0168
对比例3 99.31 0.0215
对比例4 99.01 0.0271
由表1可知，通过本发明实施例1-6可知，通过合理设置液氮处理、氨气爆破处理、石油醚超声除杂、乙醇高压恒温提取、乙醇超声提取、大孔树脂吸附、一次重结晶、二次重结晶等步骤，可得到高纯度和得率的10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ，含量可达到99.3％以上，且得率在0.0242％以上。又对比例1-4与实施例6相比可知，采用液氮处理、氨气爆破处理对于提高10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的得率效果明显，特别是氨气爆破；同时对于10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的纯度有一定影响。石油醚超声除杂对于10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的得率几乎无影响，但是对于提高10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的纯度明显。本发明方法总体步骤可操作性强，利于推广应用。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，对于本领域的普通技术人员而言，在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。

Claims (10)

1.一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将南方红豆杉枝叶烘干后，粉碎过筛，得红豆杉粉末；将红豆杉粉末浸入液氮中，浸渍时间为3～4min，浸渍次数为3～5次；然后进行氨气爆破处理，其中反应压力为2～2.5MPa，反应时间为15～25min，红豆杉粉末与液氨的固液比为1:5～8g/mL；然后进行减压爆破；
(2)向经过步骤(1)处理所得的物料中加入石油醚；于30～35℃下超声提取10～15min；过滤，得过滤物；
(3)向过滤物中加入质量浓度为60～70％的乙醇，50～55℃下恒温提取2～3h，提取压力为50～70Mpa；再于50～55℃下超声提取30～40min；
(4)将所得提取液进行减压浓缩，回收溶剂，将所得浓缩物加丙酮进行溶解，然后过滤；过滤后取丙酮液，进行减压浓缩，回收溶剂，得粗提取物一；
(5)向粗提取物一中加入乙醇和正己烷的混合溶剂进行溶解，得溶解液；溶解液上大孔吸附树脂，依次经pH值为9～10的碱液洗涤、去离子水洗涤，然后使用质量浓度为60～75％的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得粗提取物二；
(6)一次重结晶：将所得粗提取物二中加入乙腈；边搅拌边加热至70～73℃，然后再缓慢加入乙腈，直至粗提取物二全部溶解，然后自然冷却至室温，并放置8～12h；经过滤、真空干燥得重结晶粗品；
(7)二次重结晶：将重结晶粗品加入丙酮，将温度控制在40～45℃，缓慢加入丙酮至重结晶粗品全部溶解，然后在搅拌状态下，缓慢加入石油醚，加入完毕后，室温下自然结晶8～12h，过滤，得结晶体，真空干燥得10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ。
2.根据权利要求1所述的从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，其特征在于，步骤(1)中，粉碎过30～40目筛。
3.根据权利要求1所述的从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，其特征在于，步骤(2)中，经过步骤(1)处理所得的物料与石油醚的质量体积比为1:5～7g/mL。
4.根据权利要求1所述的从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，其特征在于，步骤(2)中，超声提取时的功率为100～150W；步骤(3)中，超声提取时的功率为300～500W。
5.根据权利要求1所述的从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，其特征在于，步骤(3)中，红豆杉粉末与乙醇的质量体积比为1:10～15g/mL。
6.根据权利要求1所述的从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，其特征在于，步骤(5)中，碱液为氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液。
7.根据权利要求6所述的从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，其特征在于，步骤(5)中，碱液用量为红豆杉粉末投料量的1.5～2倍，去离子水洗涤至大孔树脂柱的流出液呈清亮透明态。
8.根据权利要求1所述的从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，其特征在于，步骤(5)中，大孔吸附树脂的用量为红豆杉粉末投料量的1.2～1.5倍。
9.根据权利要求1所述的从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，其特征在于，步骤(7)，丙酮与石油醚的体积比为1:4.5～6。
10.根据权利要求1所述的从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，其特征在于，步骤(2)、(7)中所用石油醚的沸程为60～90℃。
CN201910917250.4A 2019-09-26 2019-09-26 一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭ⅲ的方法 Active CN110551081B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910917250.4A CN110551081B (zh) 2019-09-26 2019-09-26 一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭ⅲ的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910917250.4A CN110551081B (zh) 2019-09-26 2019-09-26 一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭ⅲ的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110551081A CN110551081A (zh) 2019-12-10
CN110551081B true CN110551081B (zh) 2021-06-11

Family

ID=68741564

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910917250.4A Active CN110551081B (zh) 2019-09-26 2019-09-26 一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭ⅲ的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110551081B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111253344A (zh) * 2020-02-27 2020-06-09 东北林业大学 一种红豆杉枝叶中紫杉醇的提取方法
CN111253345B (zh) * 2020-03-02 2021-11-23 东北林业大学 一种红豆杉枝叶中紫杉醇的提取方法
CN112694458A (zh) * 2020-12-29 2021-04-23 重庆臻源红豆杉发展有限公司 一种10-去乙酰基巴卡亭ⅲ提取纯化方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101397284A (zh) * 2007-09-30 2009-04-01 桂林市振达生物科技有限责任公司 从红豆杉中提取分离紫杉醇及其它紫杉烷类化合物的方法
CN103145653A (zh) * 2013-04-12 2013-06-12 江苏斯威森生物医药工程研究中心有限公司 一种10-去乙酰基巴卡亭ⅲ的高效提取纯化工艺
WO2016025673A1 (en) * 2014-08-14 2016-02-18 Shell Oil Company Process for preparing furfural from biomass

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002038556A2 (en) * 2000-11-08 2002-05-16 Actipharm, Inc. Process for mass production of gmp paclitaxel and related taxanes
CN103319441B (zh) * 2013-06-17 2016-01-06 江苏红豆杉药业有限公司 一种从红豆杉枝叶中分离提纯10-去乙酰基巴卡亭ⅲ的方法
CN105085443A (zh) * 2015-09-21 2015-11-25 四川农业大学 一种以曼地亚红豆杉枝叶为原料制备高纯度10-脱乙酰基巴卡亭ⅲ的方法
CN107880001B (zh) * 2017-12-28 2020-06-23 云南汉德生物技术有限公司 一种从红豆杉中提取10-去乙酰基巴卡亭ⅲ的方法
CN108457111A (zh) * 2018-03-05 2018-08-28 安徽工业大学 一种液氮耦合氨气爆破预处理生物质的方法
CN110092767A (zh) * 2019-06-06 2019-08-06 梅州市中大南药发展有限公司 一种从红豆杉中同时富集纯化紫杉醇和10-dab iii的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101397284A (zh) * 2007-09-30 2009-04-01 桂林市振达生物科技有限责任公司 从红豆杉中提取分离紫杉醇及其它紫杉烷类化合物的方法
CN103145653A (zh) * 2013-04-12 2013-06-12 江苏斯威森生物医药工程研究中心有限公司 一种10-去乙酰基巴卡亭ⅲ的高效提取纯化工艺
WO2016025673A1 (en) * 2014-08-14 2016-02-18 Shell Oil Company Process for preparing furfural from biomass

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A Large Scale Process for Paclitaxel and other Taxanes from the Needles of Taxus x Media Hicksii and Taxus Floridana Using Reverse Phase Column Chromatography;Koppalcva V. Rao等;《J.LIQ.CHROM.& REL.TECHNOL.》;20060822;第19卷(第3期);第427-447页 *
南方红豆杉有效成分研究;王炳义;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》;20131215(第S2期);第B016-472页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN110551081A (zh) 2019-12-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110551081B (zh) 一种从南方红豆杉中提取10-脱乙酰基巴卡亭ⅲ的方法
JP3299753B2 (ja) １０−デアセチルバッカチン▲ｉｉｉ▼を得る方法
SK292000A3 (en) Isolation and purification of paclitaxel and other related taxanes by industrial preparative low pressure chromatography on a polymeric resin column
CN112209979B (zh) 自甘草酸单铵盐母液膏中联合分离高纯度甘草苷、去苦味甘草甜味素及甘草总黄酮生产工艺
CN108440616B (zh) 一种虎杖苷的提取分离方法
Kim et al. A simultaneous microwave-assisted extraction and adsorbent treatment process under acidic conditions for recovery and separation of paclitaxel from plant cell cultures
CN103275039B (zh) 一种从紫杉醇浸膏分离纯化紫杉醇的方法
CN103319441A (zh) 一种从红豆杉枝叶中分离提纯10-去乙酰基巴卡亭ⅲ的方法
CN101530607B (zh) 生姜中姜酚类物质的高效提取方法
CN113354658A (zh) 一种高含量银杏内酯b纯化生产的方法
CN102627576A (zh) 一种秋水仙碱的制备方法
CN112521349B (zh) 一种紫杉醇的纯化方法
CN108794551B (zh) 一种从栀子黄色素废液中制备高纯度栀子苷的方法
CN114671754B (zh) 一种脱落酸粗品提纯方法
CN101955507A (zh) 柳穿鱼苷对照品的制备方法
CN112321664B (zh) 提取分离纯化桦褐孔菌醇的方法
CN112094184B (zh) 一种从银杏叶提取物层析废水中提取莽草酸的方法
CN110698532B (zh) 一种海参皂苷Cladoloside A的提取方法
CN112694458A (zh) 一种10-去乙酰基巴卡亭ⅲ提取纯化方法
CN112480040A (zh) 一种高纯度紫杉醇的制备工艺
CN109280065B (zh) 一种提取和分离芒果苷的方法
CN104892551A (zh) 一种从红豆杉枝叶中分离提纯10-去乙酰基巴卡亭iii的方法
CN111547718A (zh) 复合型活性炭及其在纯化他克莫司中的应用
CN111253344A (zh) 一种红豆杉枝叶中紫杉醇的提取方法
CN115572286B (zh) 一种从水飞蓟宾结晶残液中回收水飞蓟素的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information

Address after: No.111, Qinxin Road, Donggang Town, Xishan District, Wuxi City, Jiangsu Province

Applicant after: Wuxi Yeshan Pharmaceutical Co.,Ltd.

Address before: 214199 red bean Industrial Park, Donggang Town, Xishan District, Jiangsu, Wuxi

Applicant before: JIANGSU YEW PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

CB02 Change of applicant information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: 111 Qinxin Road, Donggang Town, Xishan District, Wuxi City, Jiangsu Province, 214000

Patentee after: Wuxi yew Pharmaceutical Co.,Ltd.

Address before: 111 Qinxin Road, Donggang Town, Xishan District, Wuxi City, Jiangsu Province, 214000

Patentee before: Wuxi Yeshan Pharmaceutical Co.,Ltd.

CP01 Change in the name or title of a patent holder