CN108440616B

CN108440616B - 一种虎杖苷的提取分离方法

Info

Publication number: CN108440616B
Application number: CN201810534608.0A
Authority: CN
Inventors: 杨丽梅; 郭占伟; 杨杰; 陈谷林
Original assignee: Yunnan Haifeng Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Yunnan Haifeng Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2018-05-30
Filing date: 2018-05-30
Publication date: 2021-03-26
Anticipated expiration: 2038-05-30
Also published as: CN108440616A

Abstract

本发明公开了一种虎杖苷提取分离的方法，该方法以虎杖叶为原料，采用醇提、乙醚脱酯、水溶过滤、树脂柱层析分离等工艺过程，制得含量在70%以上的虎杖苷，分离效果显著，再通过简单的重结晶就可以得到含量98%以上的产品；本方法工艺简单，回收率高，纯度高，适合工业化生产。

Description

一种虎杖苷的提取分离方法

技术领域

本发明涉及一种从虎杖叶中提取分离虎杖苷的方法，属于化合物分离领域。

背景技术

虎杖苷又叫白黎芦醇苷（Polydatin），主要来源于蓼科植物虎杖的干燥根茎和根，化学名为3,4'-5-Trihydroxystilbene-3-beta-D-glucopyranoside，其化学结构式如式I所示；虎杖苷是一种天然活性成分，虎杖苷具有镇咳、去痰、平喘、抗菌、清除自由基、调血脂、降低胆固醇的功效。因其能抑制溶酶体酶的释放故而对金黄色葡萄球菌、卡他球菌、甲型或乙型链球菌、大肠杆菌等有抑制作用。改善微循环，阻止微循环中白细胞粘,降血脂、抗脂质过氧化，从而对心血管系统具有影响；对呼吸系统具有止咳,平喘作用；对消化系统具有保肝利胆作用；另外还有抗病原微生物作用、抗菌作用、抗病毒作用、抗肿瘤作用、抗氧化作用。

式I；

虎杖苷的提取已见于很多报道，主要从虎杖根中提取，而从虎杖叶中提取虎杖苷的研究资料却很少；虎杖苷在虎杖根中含量较高，因此生产方法都是以虎杖根为原料，从而造成了资源的枯竭；其实虎杖叶中的虎杖苷含量并不低，基本在2.0%左右，高的能达到4%，完全可以作为提取虎杖苷的原料；但虎杖叶中含有羟基蒽醌类成分、二苯乙烯类成分、黄酮类、香豆素类化合物、甾醇、色素和鞣质等，其中主要有大黄素、大黄、大黄素-6-甲醚、大黄素3-D-葡萄糖苷和叶绿素等。叶中的杂质比较多，成分复杂，从虎杖叶中提取虎杖苷难度大，参照虎杖根中提取分离虎杖苷的方法，不能从叶中得到纯度高的虎杖苷；因此开发一种从虎杖叶中提取、分离虎杖苷的工艺，保护资源，提高资源利用率，是很有必要的。

发明内容

本发明目的在于提供一种从虎杖叶中提取分离虎杖苷的方法，该方法以虎杖叶为原料；通过以下技术方案实现本发明目的：

（1）将干燥虎杖叶粉碎后，按每公斤虎杖叶粉添加5～7L乙醇-水溶液的比例，在虎杖叶粉中加入乙醇-水溶液，然后在50～60℃下浸提4～6小时，过滤，滤渣再次用乙醇-水溶液50～60℃下浸提1～2次，收集合并滤液，滤液经浓缩回收乙醇得到浸膏，浸膏密度为1.15～1.20；

（2）在浸膏中边搅拌边加入其质量5～7倍的乙醚，加完后继续搅拌10～15min，静置2～4h，除去乙醚层，剩余物再用浸膏质量4～6倍的乙醚重复提取2～3次；乙醚提取后的糖浆状物挥干除去乙醚；

（3）在除去乙醚的提取物中加入其质量 8～10倍的水，加热煮沸搅拌20～35min后，倒出水提取液，剩余物再用提取物质量6～8倍的水重复煮沸提取2～3次，合并水提取液，静置12小时后，抽取上清液，过滤；

（4）滤液通过R型树脂柱吸附虎杖苷，树脂柱先用水洗，然后用质量浓度20～25%的洗脱液洗脱杂质，最后用质量浓度30～35%的洗脱液，加压洗脱，收集虎杖苷段洗脱液，浓缩，干燥即得到虎杖苷粗品，其中洗脱液为乙醇-水溶液、甲醇-水溶液或丙酮-水溶液；

（5）将虎杖苷粗品用乙酸乙酯重结晶2～3次，真空干燥即得虎杖苷。

所述虎杖叶粉碎为20～40目。

所述步骤（1）中乙醇-水溶液的质量浓度为70～75%。

所述R型树脂为Chroma-R204树脂，目数为100～120目。

所述步骤（4）中用2～3倍柱体积的水洗柱子，用2～3倍柱体积的质量浓度20～25%的洗脱液洗柱子。

本发明方法的优点和技术效果：提取时采用70-75%的乙醇水提取，保证了虎杖苷的提取率，提取率达90%以上；首先根据羟基蒽醌类、色素类、甾醇类、脂溶性成分易溶于乙醚，而虎杖苷难溶于乙醚的特性，对提取所得浸膏采用乙醚洗的方式，除去大量脂溶性成分杂质。其次，根据虎杖苷易溶于热水的特性，对乙醚洗后的浸膏用热水溶解，除去水不溶性成分；经过除质，除去了大量杂质，减少了后续纯化处理的难度；然后采用分离效果好的层析树脂Chroma-R204树脂对虎杖苷进行层析分离，通过梯度洗脱除去大量杂质和富集虎杖苷，一次层析就可以产出含量达到70%以上的虎杖苷，分离效果显著，再通过简单的重结晶就可以得到含量98%以上的产品；采用树脂柱层析分离，具有吸附量大、可重复利用、易于产业化放大、成本低等优点，且本方法工艺简单，回收率高，适合工业化生产。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围不局限于所述内容，本发明方法中如无特殊说明，均采用常规方法，使用试剂如无特殊说明，均采用常规方法配制的试剂或市售常规试剂。

实施例1：取干燥的虎杖叶1kg，粉碎至20目，加入7L乙醇-水溶液（质量百分比浓度为70%），在50℃下浸提6小时，过滤，滤渣再次加入5L乙醇-水溶液（质量百分比浓度为70%）在50℃下浸提4小时，过滤，合并二次过滤所得滤液，滤液减压浓缩回收乙醇，浓缩至浸膏密度为1.15，得浸膏；在浸膏中边搅拌边加入其质量5倍的乙醚，加完后继续搅拌10分钟，静置2小时，除去乙醚层，糖浆状物再用浸膏质量4倍的乙醚重复提取2次，乙醚提取后的糖浆状物挥干除去乙醚,得脱酯浸膏；在脱酯浸膏中加入其质量8倍的水，加热煮沸搅拌30分钟，倾倒出水提取液，再用脱酯浸膏质量6倍的水重复煮沸提取2次，合并水提取液，静置12小时后，抽取上清液，过滤；滤液使用加压计量泵通过Chroma-R204型树脂（100-120目）柱吸附虎杖苷，树脂柱先用2倍柱体积的水洗，然后用3倍柱体积的质量浓度20%的丙酮-水溶液洗脱杂质，最后用质量浓度30%的丙酮-水溶液加压洗脱虎杖苷（加压压力2公斤），流速为每小时2个柱体积，洗出液采用TLC薄层检测，收集虎杖苷段洗脱液；浓缩干燥后得到浓缩物36.2g，用乙酸乙酯溶解后浓缩，放置结晶，过滤，重复结晶二次，得晶体12.1g，含量99.4%。

实施例2：取干燥的虎杖叶1kg，粉碎至30目，加入6L乙醇-水溶液（质量百分比浓度为72%），在55℃下浸提5小时，过滤，滤渣再次加入5L乙醇-水溶液（质量百分比浓度为72%）在60℃下浸提4小时，过滤，合并二次过滤所得滤液，滤液减压浓缩回收乙醇，浓缩至浸膏密度为1.18，在浸膏中边搅拌边加入其质量6倍的乙醚，加完乙醚后继续搅拌12分钟，静置3小时，除去乙醚层，糖浆状物再用浸膏质量5倍的乙醚重复提取2次，乙醚提取后的糖浆状物挥干除去乙醚；在除去乙醚的提取物中加入其质量9倍的水，加热煮沸搅拌20分钟，倾到出水提取液，再用除去乙醚的提取物质量7倍的水重复煮沸提取2次，合并水提取液，放置12小时后，抽取上清液，过滤；滤液使用加压计量泵通过Chroma-R204型树脂柱（100～120目）吸附虎杖苷，树脂柱先用2倍柱体积的水洗，然后用3倍柱体积的质量浓度25%的甲醇-水溶液洗脱杂质，最后用质量浓度33%的甲醇-水溶液加压洗脱虎杖苷（加压压力2公斤），流速为每小时2个柱体积，洗出液采用TLC板图检测，收集虎杖苷段洗脱液；浓缩后得到浓缩物38.4g，用乙酸乙酯溶解后浓缩，放置结晶，过滤，重结晶一次，得晶体14.2g，含量98.4%。

实施例3：取干燥的虎杖叶1kg，粉碎至40目，加入7L乙醇-水溶液（质量百分比浓度为75%），在60℃下浸提4小时，过滤，滤渣再次加入6L乙醇-水溶液（质量百分比浓度为75%）在55℃下浸提5小时，过滤后，再浸提一次，合并3次过滤所得滤液，滤液减压浓缩回收乙醇，浓缩至浸膏密度为1.2，在浸膏中边搅拌边加入其质量7倍的乙醚，加完乙醚后继续搅拌15分钟，静置4小时，除去乙醚层，糖浆状物再用浸膏质量6倍的乙醚重复提取3次，乙醚提取后的糖浆状物挥干除去乙醚；在除去乙醚的提取物中加入其质量10倍的水，加热煮沸搅拌35分钟，倾到出水提取液，再用除去乙醚的提取物质量8倍的水重复煮沸提取3次，合并水提取液，放置12小时后，抽取上清液，过滤；滤液使用加压计量泵通过Chroma-R204型树脂柱（100～120目）吸附虎杖苷，树脂柱先用3倍柱体积的水洗，然后用2倍柱体积的质量浓度23%的乙醇-水溶液洗脱杂质，最后用质量浓度35%的乙醇-水溶液加压洗脱虎杖苷（加压压力2公斤），流速为每小时2个柱体积，洗出液采用TLC板图检测，收集虎杖苷段洗脱液；浓缩后得到浓缩物37.6g，用乙酸乙酯溶解后浓缩，放置结晶，过滤，重结晶一次，得晶体13.5g，含量98.8%。

实施例4：取干燥的虎杖叶10kg，粉碎至30目，加入60L乙醇-水溶液（质量百分比浓度为72%），在55℃下浸提5小时，过滤，滤渣再次加入50L乙醇-水溶液（质量百分比浓度为73%）在50℃下浸提5小时，过滤，合并二次过滤所得滤液，滤液减压浓缩回收乙醇，浓缩至浸膏密度为1.17，在浸膏中边搅拌边加入其质量5倍的乙醚，加完乙醚后继续搅拌10分钟，静置2小时，除去乙醚层，糖浆状物再用浸膏质量4倍的乙醚重复提取2次，乙醚提取后的糖浆状物挥干除去乙醚；在除去乙醚的提取物中加入其质量8倍的水，加热煮沸搅拌35分钟，倾出水提取液，再用除去乙醚的提取物质量6倍的水重复煮沸提取2次，合并水提取液，放置12小时后，抽取上清液，过滤；滤液使用加压计量泵通过Chroma-R204型树脂（100-120目）柱吸附虎杖苷，树脂柱先用2倍柱体积的水洗，然后用3倍柱体积的质量浓度24%的乙醇-水洗脱杂质，最后用质量浓度34%的乙醇-水溶液加压洗脱虎杖苷（加压压力2公斤），流速为每小时2个柱体积，洗出液采用TLC板图检测，收集虎杖苷段洗脱液；浓缩后得到浓缩物384g，用乙酸乙酯溶解后浓缩，放置结晶，过滤，重结晶一次，得晶体126g，含量98.2%。

实施例5：取干燥的虎杖叶10kg，粉碎至40目，加入70L乙醇-水溶液（质量百分比浓度为74%），在60℃下浸提4小时，过滤，滤渣再次加入55L乙醇-水溶液（质量百分比浓度为71%）在60℃下浸提4小时，过滤，合并二次过滤所得滤液，滤液减压浓缩回收乙醇，浓缩至浸膏密度为1.15，在浸膏中边搅拌边加入其质量6倍的乙醚，加完后继续搅拌12分钟，静置3小时，除去乙醚层，糖浆状物再用浸膏质量5倍的乙醚重复提取2次，乙醚提取后的糖浆状物挥干除去乙醚，在除去乙醚的提取物中加入其质量9倍的水，加热煮沸搅拌30分钟，倾倒出水提取液，再用除去乙醚的提取物质量7倍的水重复煮沸提取2次，合并水提取液，放置12小时后，抽取上清液，过滤；滤液使用加压计量泵通过Chroma-R204型树脂柱吸附虎杖苷，树脂柱先用2倍柱体积的水洗，然后用3倍柱体积的质量浓度20%的丙酮-水洗脱杂质，最后用质量浓度30%的丙酮-水溶液加压洗脱虎杖苷（加压压力1.5公斤），流速为每小时2个柱体积，洗出液采用TLC板图检测，收集虎杖苷段洗脱液；浓缩后得到浓缩物370g，用乙酸乙酯溶解后浓缩，放置结晶，过滤，重结晶二次，得晶体116g，含量99.3%。

实施例6：取干燥的虎杖叶10kg，粉碎至20目，加入65L乙醇-水溶液（质量百分比浓度为70%），在50℃下浸提6小时，过滤，滤渣再次加入55L乙醇-水溶液（质量百分比浓度为71%）在50℃下浸提6小时，过滤，在重复浸提一次，合并3次过滤所得滤液，滤液减压浓缩回收乙醇，浓缩至浸膏密度为1.17，在浸膏中边搅拌边加入其质量7倍的乙醚，加完乙醚后继续搅拌15分钟，静置3小时，除去乙醚层，糖浆状物再用浸膏质量5倍的乙醚重复提取2次，乙醚提取后的糖浆状物挥干乙醚；在除去乙醚的提取物中加入其质量9倍的水，加热煮沸搅拌25分钟，倾出水提取液，再用除去乙醚的提取物质量6倍的水重复煮沸提取2次，合并水提取液，放置12小时后，抽取上清液，过滤；滤液使用加压计量泵通过Chroma-R204型树脂柱吸附虎杖苷，树脂柱先用3倍柱体积的水洗，再用2倍柱体积的质量浓度22%的甲醇-水洗脱杂质，最后用质量浓度33%的甲醇-水溶液加压洗脱虎杖苷（加压压力1.5公斤），流速为每小时2个柱体积，洗出液采用TLC板图检测，收集虎杖苷段洗脱液；浓缩后得到浓缩物380g，用乙酸乙酯溶解后浓缩，放置结晶，过滤，重结晶二次，得晶体123g，含量99.5%。

Claims

1.一种虎杖苷的提取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

（5）将虎杖苷粗品用乙酸乙酯重结晶2～3次，真空干燥即得虎杖苷;

所述R型树脂为Chroma-R204树脂，粒径为100～120目；

所述步骤（1）中乙醇-水溶液的质量浓度为70～75%。

2.根据权利要求1所述的虎杖苷的提取分离方法，其特征在于：虎杖叶粉碎为20～40目。

3.根据权利要求1所述的虎杖苷的提取分离方法，其特征在于：步骤（4）中用2～3倍柱体积的水洗柱子，用2～3倍柱体积的质量浓度20～25%的洗脱液洗柱子。