CN104130298A - 一种从虎杖中提取虎杖苷及白藜芦醇的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于提取、分离方法领域，具体涉及一种从虎杖为原料中提取、分离虎杖苷及白藜芦醇的方法。所解决的技术问题为有效利用虎杖资源，同时提取、分离虎杖苷及白藜芦醇。具体地，本发明方法是以虎杖为原料，用乙醇回流提取，提取液浓缩后以大孔树脂进行吸附，解吸附后浓缩洗脱液喷雾至粉即得虎杖提取物，其中虎杖苷的重量含量为30%～50%以上，白藜芦醇重量含量为1～5%以上。

Description

一种从虎杖中提取虎杖苷及白藜芦醇的方法

技术领域

本发明属于虎杖提取物生产工艺，特别涉及一种以虎杖为原料从中来提取不同重量含量的虎杖苷及白藜芦醇的生产工艺。

背景技术

虎杖（学名：Reynoutria japonica Houtt.）又名酸筒杆、酸桶芦、大接骨、斑庄根。茎直立，高1-2米，粗壮，空心，具明显的纵棱，具小突起，无毛。产陕西南部、甘肃南部、华东、华中、华南等地。根状茎供药用，有活血、散瘀、通经、镇咳等功效。

虎杖苷(Polydatin，PD)是从蓼科蓼属——虎杖 (Polygonum Cuspidatum Sieb．et Zucc)的干燥根茎中提取的，也可称为白藜芦醇苷。虎杖苷在植物中分布广，含量高，具有较强的生物活性。现代药理学研究表明，PD对心肌细胞、血管平滑肌细胞、抗血小板聚集、改善微循环 等有显著作用，此外还能减轻多种因素造成的组织器官损伤，具有保护肝细胞，降血脂及抗脂质过氧化等作用；通过 PD对大鼠心肌细胞的研究表明，其强心作用可能是通过增加单个细胞中的游离钙离子浓度而直接增强心肌收缩性；PD的这种效应，使其在理论上具有比洋地黄类强心苷更优越的强心功能，它不但使心肌收缩更有力，而且使心肌舒张更彻底，从而大大的提高心肌工作效率。

PD对细胞内钙、pH有双向调节作用：正常情况下PD既促 进VSMC外钙离子进入细胞内，又能诱导细胞内钙 释放，增加细胞内游离钙；同时升高pH 以提高血管张力。休克时降低细胞内钙浓度及降低细胞内pH 以降低血管张力，使血管扩张；能通过促进细胞外钠离子内流使用细胞去极化来调节血管，其作用可能与钠、钾通道开放有关，并受B肾上腺素能受体、H2受体系统及鸟苷酸环化酶系统的反向调节。

抗血小板聚集和改善微循环：单春文等研究发现PD在体内外都有抑制花生四烯酸(AA)、二 磷酸腺苷(ADP)和肾上腺素(AD)诱导的兔血小板 聚集作用；其抑制强度随着PD浓度的降低而减弱，存在量效关系，这对防治血栓栓塞性疾病有一定的应用价值。另外注射PD，可使烧伤大鼠的心输出量 恢复至烧伤前的91％，心室功能达100％，全身外周阻力恢复到接近正常，大鼠成活率明显提高。主要原因是PD静脉注射能促进微循环中出现动脉血 流，减轻烧伤后微血栓形成，改善微循环 。

 PD有保护肝脏，抑制类脂质过氧化物在肝脏堆积的作用：黄兆胜等研究PD对 CC1 损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用，发现它能有效地保护损伤的肝细胞，在1×10^-7～1×10^-4 mmol/L浓度范围内使细胞存活率显著提高，1×10 mmol/L使肝细胞存活率达88.7％ ，接近于正常培养肝细胞水平。

将PD用于过氧化玉米饲养的大鼠降血脂实验，证明PD对 肝损害大鼠的治疗作用；能减少大鼠肝中过氧化类 脂化合物的堆积，降低血清中AST和ALT的水平， 降低LPO和减少血清FFA，阻止鼠肝内微粒体ADP 和N—ADPH诱导过氧化物的生成，抑制血清TG和 LPL—ch的提高，还可减少鼠肝中C软脂酸脂肪的生成。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于以虎杖为生产原料，其中虎杖中虎杖苷的重量含量是0.1%～1%，从中提取分离更高重量含量的虎杖苷及白藜芦醇。其货源有充足的保障，而且不受季节、产地的影响可以持续化生产，具有很高的经济效益和社会效益。

本发明所采取的技术方案是：

1、一种以虎杖为原料来提取分离虎杖苷及白藜芦醇的生产工艺，有效的利用虎杖壳资源。其中虎杖原料中虎杖苷的重量含量是0.1%～1%。其特征在于：以虎杖为原料，用乙醇回流提取，提取液浓缩至小体积后冷藏，将上述浓缩液进行柱层析吸附分离，浓缩、干燥，得到粉末状的虎杖提取物，其中虎杖苷的重量含量为30%～50%以上，白藜芦醇重量含量为1～5%以上；

2、如权利要求1所述以虎杖为原料从中提取虎杖苷及白藜芦醇的方法，包括如下步骤：

1）前处理：将原料粉碎；

2） 提取：将粉碎后的原料置于原料重量10～15倍的15～75％乙醇中提取2次，温度为50～100℃；

3）浓缩、过滤：将提取液浓缩、过滤；

4）将3）用树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液为无色，然后依次用10%～100%不同浓度的乙醇溶液分次进行洗脱分离，将所需组分减压浓缩喷雾至粉末状，其中虎杖苷的重量含量为30%～50%以上，白藜芦醇重量含量为1～5%以上。

本发明所述柱层析树脂选自型号为AB-8、HP-20、D101、HZ816、XAD-2、XAD-4、XAD-16、DM-130、LSD-10、LSD-40、LSA-21、LSA-30、FU-02等型号树脂。

本发明的有益效果是：

1）虎杖苷在植物中分布广，含量高，具有较强的生物活性。现代药理学研究表明，PD对心肌细胞、血管平滑肌细胞、抗血小板聚集、改善微循环 等有显著作用，此外还能减轻多种因素造成的组织器官损伤，具有保护肝细胞，降血脂及抗脂质过氧化等作用。虎杖苷已广泛用于药品中；

2）本发明提取溶剂为低碳醇，而且其货源有充足的保障，不受季节的影响可以持续化生产，节约成本，柱层析洗脱溶剂为醇，不致给成品带来任何无机物残留而涉及质量问题，因此此发明具有很高的经济效益和社会效益；

3）本发明柱层析过程中用低碳醇梯度洗脱，不同的醇浓度洗脱分离，可得到不同的虎杖苷的重量含量。

附图说明

HPLC检测方法：

检测波长：303nm；

色谱柱：C18—ODS柱   250×4.6mm  5μ；

流动相：乙腈：0.5%磷酸=3：7 ；

流速：1.0ml/min；

柱温箱：30℃。

附图1：虎杖苷重量含量为30%的HPLC图谱。

具体实施方式

实施例1：

1）前处理：将虎杖作为原料粉碎；

2）提取：将粉碎后的原料置于原料重量15倍的15%乙醇中提取2次，温度为50℃；

 3）浓缩、过滤：将提取液浓缩、过滤；

 4）将3）用XAD-16型号树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液为无色，然后依次用10%醇、20%醇、40%醇、60%醇、100%不同浓度的乙醇溶液分次进行洗脱分离，将20%醇部分减压浓缩喷雾至粉末状，其中虎杖苷的重量含量为30%；将60%醇部分减压浓缩喷雾至粉末状，白藜芦醇重量含量之和为1%。

实施例2：

1）前处理：将虎杖作为原料粉碎；

2）提取：将破碎后的原料置于原料重量13倍的35%乙醇中提取2次，温度为70℃；

3）浓缩、过滤：将提取液浓缩、过滤；

4）将3）用AB-8型号树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液为无色，然后依次用10%醇、20%醇、40%醇、60%醇、100%不同浓度的乙醇溶液分次进行洗脱分离，将40%醇部分减压浓缩喷雾至粉末状，其中虎杖苷的重量含量为45%；将20%醇部分减压浓缩喷雾至粉末状，白藜芦醇重量含量之和为1.5%。

实施例3：

1）前处理：将虎杖作为原料粉碎；

2）提取：将破碎后的原料置于原料重量10倍的55%乙醇中提取2次，温度为70℃；

3）浓缩、过滤：将提取液浓缩、过滤；

4）将3）用HP-20型号树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液为无色，然后依次用10%醇、20%醇、40%醇、60%醇、100%不同浓度的乙醇溶液分次进行洗脱分离，将40%醇部分减压浓缩喷雾至粉末状，其中虎杖苷的重量含量为50%；将60%醇部分减压浓缩喷雾至粉末状，白藜芦醇重量含量之和为2%。

实施例4：

1）前处理：将虎杖作为原料粉碎；

2）提取：将破碎后的原料置于原料重量14倍的75%乙醇中提取2次，温度为90℃；

3）浓缩、过滤：将提取液浓缩、过滤；

4）将3）用DM-130型号树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液为无色，然后依次用10%醇、20%醇、40%醇、60%醇、100%不同浓度的乙醇溶液分次进行洗脱分离，将40%醇部分减压浓缩喷雾至粉末状，其中虎杖苷的重量含量为33%；将60%醇部分减压浓缩喷雾至粉末状，白藜芦醇重量含量之和为5%。

实施例5：

1）前处理：将虎杖作为原料粉碎；

2）提取：将破碎后的原料置于原料重量12倍的75%乙醇中提取2次，温度为100℃；

3）浓缩、过滤：将提取液浓缩、过滤；

4）将3）用D101型号树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液为无色，然后依次用10%醇、20%醇、40%醇、60%醇、100%不同浓度的乙醇溶液分次进行洗脱分离，将60%醇部分减压浓缩喷雾至粉末状，其中虎杖苷的重量含量为40%；将40%醇部分减压浓缩喷雾至粉末状，白藜芦醇重量含量之和为2%。

Claims (2)

1.一种以虎杖为原料来提取分离虎杖苷及白藜芦醇的生产工艺，有效的利用虎杖壳资源，其中虎杖原料中虎杖苷的重量含量是0.1%～1%，其特征在于：以虎杖为原料，用乙醇回流提取，提取液浓缩至小体积后冷藏，将上述浓缩液进行柱层析吸附分离，浓缩、干燥，得到粉末状的虎杖提取物，其中虎杖苷的重量含量为30%～50%以上，白藜芦醇重量含量为1～5%以上。

2.如权利要求1所述以虎杖为原料从中提取虎杖苷及白藜芦醇的方法，包括如下步骤：

 1）前处理：将原料粉碎；

 2）提取：将粉碎后的原料置于原料重量10～15倍的15～75％乙醇中提取2次，温度为50～100℃；

 3）浓缩、过滤：将提取液浓缩、过滤；

 4）将3）用树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液为无色，然后依次用10%～100%不同浓度的乙醇溶液分次进行洗脱分离，将所需组分减压浓缩喷雾至粉末状，其中虎杖苷的重量含量为30%～50%以上，白藜芦醇重量含量为1～5%以上。