CN110527639A - 一种美极梅奇酵母及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种美极梅奇酵母T‑2，其保藏编号为：CGMCC No.18253，以及该美极梅奇酵母在果品杀菌保鲜中的应用。尤其是该美极梅奇酵母在抑制杀灭灰霉病菌和/或链格孢菌当中的应用。将所述美极梅奇酵母进行发酵，获得发酵液，将所述发酵液用于果品杀菌保鲜。将所述美极梅奇酵母进行发酵，获得其代谢产物，将所述代谢产物用于果品杀菌保鲜；所述代谢产物为液体代谢产物或气体代谢产物。上述代谢产物还可作为一种用于果品杀菌保鲜的杀菌剂。该技术不但能够作为水果杀菌剂并且安全性好，耐低温，无副作用，操作简便实用性强。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种美极梅奇酵母及其应用。
背景技术
蓝莓(Vaccinium spp.)，属杜鹃花科，越橘属植物，是一种多年生小灌木浆果果树，起源于北美。我国蓝莓产区主要分布在辽宁，黑龙江，吉林，山东沿海一带以及云南，贵州等地区。蓝莓果实含有多种营养成分，不仅能增强视力防止眼球疲劳，还能抗氧化、抗老化、降血压、降胆固醇等等，因此被称为五大健康水果之一。近年来，我国蓝莓生产规模逐渐扩大，但蓝莓属于浆果类水果，水分含量很高，果皮较薄，硬度较小，又由于采摘期集中，正值高温多雨季节，采前及收贮运过程中潜伏的微生物容易在采后适宜的条件下集中发病，最终导致果实出现失水、软化、真菌感染腐烂、品质裂变等问题凸显，使其商品性降低或丧失，严重影响了蓝莓产业的发展。也有将蓝莓速冻后超低温冷藏再进行加工，但速冻后蓝莓营养价值受到很大影响，因此急需一种操作简单适宜于产业化推广的蓝莓保鲜技术。
目前，应用杀菌剂防治采后病害是降低果品损失的重要手段，因传统的化学药剂不但会加重环境污染，破坏生态系统平衡，还会对人们的生存健康带来巨大的安全隐患。而且，连续使用相同类型的化学药剂易引起病原菌形成抗性，防治效果变差。除此以外，还可以通过低温冷藏、辐照处理、气调保鲜、包装保鲜等方法防治蓝莓采后病害。然而，这些方法都有一定的缺点，因此急需找寻一种操作简单适宜于产业化推广的蓝莓保鲜技术。生物防治作为替代化学杀菌剂的环境友好、新型安全的方法,成为近年来学者研究的热点，加强生物防治的研究,提倡绿色发展已是当前农业经济发展的一项刻不容缓的任务。
目前已研究的可作为水果采后病害拮抗菌的微生物包括细菌、霉菌和酵母菌等。其中酵母菌因具有拮抗效果好、繁殖速度快、抗逆能力强、安全性高、遗传稳定、抑菌谱较广以及可以和化学杀菌剂共同使用等优点而成为水果采后生物防治研究的热点，酵母菌对水果采后霉菌病害的控制效果明显,但其缺点也同样存在。到目前为止,酵母菌的应用并不广泛,其商业化之路也十分艰难。究其原因主要有：1)研究酵母菌的时间较短、深度尚浅,文献报道的拮抗酵母大多用来防治采后水果伤口处的病原菌,而不是直接用在水果表皮防止正常水果的病原菌入侵；2)在实际生产条件下,酵母菌受外界环境的影响较大,比如湿度、温度和酸碱度都会对酵母菌的活力造成很大的影响,酵母菌的活力一旦下降,就无法对病害起到应有的控制效果；3)目前使用拮抗酵母菌与化学杀菌剂相比成本较高,也没有化学杀菌剂的防治效果稳定；4)酵母菌不能长期在室温贮藏,使用期限短,并且不如化学试剂使用方便。这一系列的因素都影响了拮抗酵母菌的进一步开发与利用,阻碍了酵母菌作为水果保鲜剂和生防制剂在生产中的使用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种美极梅奇酵母和利用该美极梅奇酵母控制蓝莓等浆果类果品采后真菌感染腐坏的应用技术，该技术不但能够作为水果杀菌剂并且安全性好，无副作用，操作简便实用性强。
本发明的目的在于提供一种美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)，菌株为T-2，保藏号为：CGMCC No.18253。
本发明的目的还在于提供美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)发酵液，所述发酵液是将所述的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌株扩大培养后得到的；作为优选，扩大培养的条件为：培养基：含有氨苄青霉素25～50mg/L的酵母蛋白胨葡萄糖(YPD)液体培养基(1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖，其余为去离子水)；培养条件：25～28℃和180～200r/min条件下培养48～72h。所述发酵液可用于果品杀菌保鲜。
本发明第三个目的在于提供一种杀菌剂，其活性成分为上述美极梅奇酵母和/或其的代谢物。其代谢物可以从美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2发酵液中获得或从发酵过程中的发酵气体中获得，所述发酵过程具体为：在液体培养基YPD(1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖，其余为去离子水)中培养美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2 CGMCC No.18253菌株25～28℃和180～200r/min条件下培养48～72h除去液体培养物(即发酵液)中的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2 CGMCC No.18253菌株，即得到其液体代谢物，收集发酵过程中的气体即得到其气体代谢物。
上述技术方案中，所述杀菌剂杀灭的病原菌为灰霉病菌Botrytis cinerea和链格孢菌Alternaria tenuissima。
本发明的再一目的是提供所述的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2 CGMCC No.18253菌株和/或其代谢物，在制备病原菌抑制剂、病害抑制剂、生物农药或水果杀菌剂、保鲜剂中的应用。
本发明的再一目的是提供果品杀菌保鲜方法，将果品在含有所述的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2 CGMCC No.18253菌株和/或其代谢物的菌剂中浸泡后晾干低温贮藏即可；优选地，菌株或菌剂的细胞浓度为：106cfu/ml-109cfu/ml。
本发明的再一目的是提供果品杀菌保鲜方法，将果品在含有所述美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2 CGMCC No.18253菌株的气体代谢物的环境下低温贮藏。
本发明的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)，菌株号为T-2，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.18253。
所述美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2为从蓝莓果实表面分离得到。
所述美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2 CGMCC No.18253的5.8S rDNA基因、ITS1/LR3R序列、26S rDNA序列如SEQ ID No.1所示。
所述美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2 CGMCC No.18253的形态学特征：菌体营养细胞呈球形，卵形或近球形，单边或多边出芽生殖；在YPD琼脂培养基上产生红色色素，菌落为白色不透明，扁平或圆形，边缘整齐，菌落无褶皱(图1.)。
本发明的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2 CGMCC No.18253菌株能够很好的用于病原菌的防治，尤其是蓝莓采后灰霉病菌Botrytis cinerea和链格孢菌(Alternaria tenuissima)的防治，能够用于制备水果杀菌剂或保鲜剂，无副作用，不会给环境及生态造成巨大压力。
本发明的优点和有益效果为：
生物杀菌剂相对于化学农药而言有天然优势,避免了农药残留、环境污染、抗药性等问题，而且低毒、环保、持效，自然界生态兼容性较好，是化学农药试剂应用最有前景的替代手段之一。酵母菌因其遗传稳定、抑菌谱广、对营养条件要求低、生长迅速、能够在水果表面快速定殖等诸多优点而受到广泛关注。在作为生防菌应用方面，它拥有自己独特的优势：1)对环境的污染较少，不产生毒素；2)不产生抗生素，对人类相对比较安全；3)相对于其他真菌而言，不产生致敏孢子；4)所需营养比较简单；5)适合商业化大规模生产；6)酵母菌细胞结构简单，基因组较小，比较容易在分子水平上进行操作。因此，它具有很好的应用前景。
美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2属酵母菌，具有以下特点：
(1)定殖速度快，耐低温：本发明的美极梅奇酵母T-2在20℃能够迅速在蓝莓果实上定值，且耐0～4℃低温，其生长势良好，相比现有的已知美极梅奇酵母株和其他属酵母菌株在4℃下均生长势弱，因此该菌株极耐低温，克服了现有已知酵母菌不耐低温的缺点，适宜制备水果杀菌剂或保鲜剂，该酵母菌在低温贮藏果品的环境下仍然能够生长杀菌。
(2)安全性高：本发明的美极梅奇酵母因其从蓝莓果实上分离得到，其安全性高。
(3)保鲜效果好：实验对比表明，采用本发明中的水果杀菌保鲜方法进行处理的蓝莓果实在20℃(因为病原菌发病条件的最适温度在20～25摄氏度，因此本实验将温度条件设在20℃下。)下贮藏20天，腐烂率仅为20.0％，对照组腐烂率已经达到88％，蓝莓果实的品质和风味保持较好。采用108cfu/ml的菌液对果实进行浸泡处理，可以使蓝莓果实保持较高的硬度、维生素C含量和较低的腐烂率，并一定程度上减缓了可溶性固形物的含量的降低。研究表明，PAL是苯丙烷代谢的第一限速酶，催化苯丙烷代谢的初始反应合成肉桂酸，过氧化物酶(POD)能催化形成木质素，提高果实硬度，并清除过多积累的H2O2，减少水果腐烂现象。因此两种酶活性的提高，增强了果实的抗逆性，延缓了果实的衰老。而采用本发明方法有效的激活了蓝莓果实的超氧化物歧化酶(PAL)和过氧化物酶(POD)等抗氧化酶的活性，从而可以达到对果品保鲜的目的。
(4)操作简便，实用性强：已有多个文献报道，酵母菌可以用于果实保鲜。与其他酵母菌相比，文献报道的拮抗酵母大多用来防治采后水果伤口处的病原菌,而不是直接用在水果表皮防止正常水果的病原菌入侵，而美极梅奇酵母T-2产生的气体产物却可以直接通过熏蒸的方式作用于果实表面，阻止病原菌的入侵。而不需要与果实有任何的接触，这样酵母菌作为一种生物菌剂，由于所需营养比较简单；其在果品贮藏中应用具有处理成本低、用量少、使用安全方便等优点，本发明操作简便，无需大的设备，适合商业化大规模生产，克服了现有的技术难点与问题，具有良好的应用前景。
生物材料保藏说明
分类命名：美极梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)
菌株编号：T-2
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所
保藏日期：2019年07月22日
保藏中心登记入册编号：CGMCC No.18253.
附图说明
图1为本发明的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌株在显微镜下细胞形态及芽殖；
图2为本发明的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌株28℃下在YPD培养基中的生长曲线；
图3为本发明的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌株和汉逊德巴利酵母菌株4℃下的生长动态曲线，分别为a和b；
图4为本发明的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌株在不同温度条件下对灰霉菌和链格孢菌的抑制效果，分别为a和b；
图5本发明的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌株PAL酶活和POD酶活活性的变化；
图6本发明的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌株挥发性代谢物对采后蓝莓自然腐烂的抑制效果。
对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，可以根据以上附图获得其他的相关附图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面结合具体实施例进一步说明本发明的技术方案。
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中所用到的病原菌公众可从野外采集，也可从中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心获得，以重复本申请实验。
实施例一
本发明美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2的分离与菌株鉴定
1、样品采集
新鲜蓝莓购于天津市红旗农贸水果批发市场。
2、菌株的分离筛选及拮抗筛选
从新鲜蓝莓上分离菌株，采用常规梯度稀释涂布分离，用YPD琼脂(含有氨苄青霉素25mg/L)培养基在28℃，180rpm条件下培养，挑取菌落形态差异较大并可纯培养的菌落，在YPD琼脂培养基上(含有氨苄青霉素25mg/L)纯化保存，并以蓝莓采后灰霉病菌和链格孢菌为靶标病原菌进行拮抗菌的初筛和多次复筛，最终得到一株抑菌活性强的类酵母菌菌株，命名其为T-2。
3、菌株的鉴定
对菌株T-2进行形态学和部分保守序列的分析。进行形态学和分子生物学鉴定。
结果表明，T-2的形态学特征：菌体营养细胞呈卵形，或近球形，多为单边出芽生殖或少为多边出芽生殖；在YPD琼脂培养基上，28℃下生长48小时，产生红色色素，菌落为白色不透明，扁平或圆形，边缘整齐，菌落无褶皱。利用酵母菌通用引物ITS1/LR3R进行PCR扩增，得到其ITS1/LR3R序列以及26S rDNA核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示，T-2为美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)。
实施例二
本发明的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2低温耐受性试验。
目前，文献报道的酵母菌(Metschnikowia sp.)适宜生长温度范围一般为20～30℃，在40℃以上条件下不能生长。如授权专利《一种美极梅奇酵母及其应用》CN105349442B、授权专利《一株抑制真菌的美极梅奇酵母及其应用》CN 103642705中美极梅奇酵母和授权专利《一株汉逊德巴利酵母菌株及其应用》CN 104988082B中汉逊德巴利酵母菌株在环境温度为4℃下均生长势弱。但本申请中所述的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2在4℃下生长势良好如图3(a)所示，说明其极耐低温，具有极高的低温耐受性。
具体试验方法如下：
将等量的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌株(1×106cfu/ml)菌体接种含有1升的YPD液体培养基(含有氨苄青霉素25mg/L)锥形瓶中，然后分别在4℃、20℃条件下摇瓶培养(180-200rmp/min)条件下培养9d。其中，第一次取样在2h，而后每个处理每间隔24h取样一次，用梯度稀释平板计数法进行菌落数统计，计量单位为cfu/ml。然后统计结果换算成对数，进行分析。美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌株在不同温度下生长曲线见图3(a)，而授权专利《一株汉逊德巴利酵母菌株及其应用》CN 104988082B中汉逊德巴利酵母菌株不同温度下生长曲线见图3(b)，从图中可以看出，美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2在4℃条件下从第一天开始菌落数明显高于汉逊德巴利酵母菌株XBL01，近高出2倍，且第四天美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌落数达到最高，菌落数的对数值达6.5，说明本申请中所述的菌株与现有的酵母菌株相比具有极高的低温耐受性。说明本发明菌株适宜做低温水果保鲜剂。
实施例三
因蓝莓属于小浆果类水果，而这一类水果当中也包括葡萄、草莓、樱桃、樱桃番茄等，已有文献证明([1]李宁.葡萄采后致腐菌检测及真菌源激发子诱导抗病研究[D].杨凌，西北农林科技大学2005.[2]Reglinski T.Inhibition of Botrytis cinerea growth andsuppression of botrytis bunch rot in grapes using chitosan[J].PlantPathology,2010,59(5):882–890.[3]杜小琴,何靖柳,秦文,等.甜樱桃果实采后病原菌及植物精油对其抑制效果研究进展[J].食品工业科技,2015(21):368-371.[4]Alique R,Zamorano J P,Martínez M A,et al.Effect of hea and cold treatments onrespiratory metabolism and shelf-life o sweet cherry,type picota cv“Ambrunés”[J].Postharvest Biology and Technology,2005,35(2):153-165.[5]WilliamsonB，TudzynskiB，TudzynskiP.Botrytiscinerea:the cause of grey mould disease[J].Molecular Plant Pathology,2007,8(5):561－580.)这一类采后水果主要的真菌病害为灰霉菌和链格孢菌，因此本实验中主要以这两种真菌病害为靶向菌，进行实验。
美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌株在4℃、20℃和28℃条件下对蓝莓采后灰霉病菌和链格孢病菌的抑制效果。
具体试验方法如下：
新鲜蓝莓购买后，经美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌液浓度1×108cfu/ml浸泡30～60s后，自然条件下晾干，再将处理后的蓝莓分别放入灰霉病菌和链格孢病菌菌液浓度均为1×105cfu/ml中20～30s，自然条件下晾干，以浸泡无菌水为对照组处理(其余条件与美极梅奇酵母T-2菌液处理组相同)，放在水果篮中用保鲜膜密封，以保持相对湿度90％～95％。分别置于4℃、20℃和28℃条件下贮藏，每天观察其腐烂情况，并计算其腐烂率(腐烂率(％)＝腐烂果实的个数/果实总数×100％)。从而得出其防效，每个处理50个蓝莓果实，每个处理重复3次，整个试验重复2次。
对灰霉菌的抑制结果如图4(a)所示，随着贮藏时间的延长，不同温度条件下蓝莓果实的腐烂率逐渐增加，与对照组相比，相同时间内经过美极梅奇酵母T-2处理后，蓝莓果实的腐烂率显著降低，且在贮藏第9天时处理组腐烂率从低到高的顺序依次为：4℃(22％)、20℃(40％)、28℃(48％)，对照组的腐烂率从低到高的顺序依次为：4℃(70％)、28℃(90％)、20℃(88％)。从而可以得出美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌液浓度为1×108cfu/ml在4℃、20℃和28℃条件下其防效分别为：68.6％、54.5％和46.7％，从而可以得出所述的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2对灰霉菌的抑制作用很强。
对链格孢菌的抑制结果如图4(b)所示，随着贮藏时间的延长，不同温度条件下蓝莓果实的腐烂率逐渐增加，与对照组相比，相同时间内经过美极梅奇酵母T-2处理后，蓝莓果实的腐烂率显著降低，在贮藏第9天时处理组腐烂率从低到高的顺序依次为：4℃(18％)、28℃(26％)、20℃(40％)，对照组的腐烂率从低到高的顺序依次为：4℃(56％)、20℃(78％)、28℃(80％)。从而可以得出美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌液浓度为1×108cfu/ml在4℃、20℃和28℃条件下其防效分别为：67.9％、48.7％和67.5％，因此上述所述的美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2对链格孢菌的抑制作用很强。
蓝莓属于小浆果类水果，而这一类水果当中也包括葡萄、草莓、樱桃、樱桃番茄等，这一类采后水果主要的真菌病害为灰霉菌和链格孢菌，因此该酵母菌在此浆果类水果中的杀菌保鲜效果良好。
实施例四
美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌株在20℃条件下对采后蓝莓自然腐烂的抑制效果。
具体试验方法如下：新鲜蓝莓购买后，经美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌液浓度1×108cfu/ml浸泡30～60s后，自然条件下晾干，以浸泡无菌水为对照组处理，放在水果篮中用保鲜膜密封，以保持相对湿度90％～95％。将蓝莓放在20℃条件下贮藏，观察并记录其腐烂率(凡发病且至少有一处流汁，就将其统计为腐烂果实)。每个处理50果实，每个处理重复3次，整个实验重复2次。计算方法同实施例3，结果表明，本发明方法中蓝莓果实在20℃下贮藏20天，腐烂率仅为20.0％，对照组腐烂率已经达到88％，结果见下表1，蓝莓果实的品质和风味保持较好。并测定了经过处理后前7天的氧化物歧化酶(PAL)和过氧化物酶(POD)等抗氧化酶的活性。PAL结果如图5(a)所示，随着时间的增加，PAL活性呈现先上升后下降的趋势，而PAL活性高低控制着植物体内多种次生酚类化合物，其活性往往被逆境条件激发，如寒冷、伤害、病虫感染等都会使PAL的活性提高，增强苯丙烷类代谢，因此PAL在植物的次生代谢和抗病代谢中起重要作用。而经过T-2菌株处理的蓝莓果实的PAL活性明显高于对照组蓝莓的活性，说明其可以保护蓝莓果实免受伤害，增加其抗病能力。POD结果如图5(b)所示，随着时间的增加，POD活性呈现先上升后下降再上升的趋势，而POD是植物体内普遍存在且活性较高的一种酶，反映植物体内的代谢及抗逆性的变化。POD能清除活性氧自由基，减少对细胞膜的伤害，对蓝莓果实具有一定的保护作用。蓝莓果实经过T-2菌株处理后，POD活性始终高于对照组，说明该菌株可以诱导POD保护酶活性的升高。已有文献证明，葡萄有孢汉逊酵母处理草莓可以提高其POD和PAL酶活性，从而延缓草莓或是的衰老，抵御灰霉病的侵染(罗凯.拮抗酵母结合化学物质提高草莓果实采后贮藏性能的研究[D]南京：南京农业大学，2012)。因蓝莓和草莓同属浆果类水果，可以推断出该酵母可以对蓝莓等浆果类水果具有延缓果实衰老的作用。
表1 20℃条件下贮藏20天后采后蓝莓果实的腐烂率
| 处理组 | 腐烂果(个) | 腐烂率(％) |
| T-2 | 10 | 20 |
| CK | 44 | 88 |
实施例五
美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌株代谢物常温条件下对采后蓝莓自然腐烂的抑制效果。
具体试验方法如下：新鲜蓝莓购买后，经美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌液浓度1×108cfu/ml浸泡30～60s后，自然条件下晾干，将处理过的蓝莓放在干燥器底部，干燥器中间隔板上放未经过任何处理的新鲜蓝莓50个(定义为T-2组)；以蓝莓浸泡无菌水，自然条件下晾干放在干燥器底部，干燥器中间隔板上放未经过任何处理的新鲜蓝莓50个，为对照组处(定义为CK组)理，每处理重复3次，然后用真空硅脂密封干燥器口，以保持相对湿度90％～95％。将干燥器放置在常温条件下，观察并记录其腐烂率(凡发病且至少有一处流汁，就将其统计为腐烂果实)。整个实验重复2次。计算方法同实施例3。从图6(a)和6(b)可以看出，本发明方法中蓝莓果实从第5天开始，上层未经过预处理(CK组)的蓝莓果实开始大量腐烂，但是，经美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2菌液处理组的隔板上层蓝莓果实腐烂率显著低于CK组(对照组)的腐烂率。直至第8天，T-2菌液处理组的腐烂率仍显著低于CK组的腐烂率，仅为20％，而对照组腐烂率高达60％。说明该美极梅奇酵母(Metschnikowia sp.)T-2定殖在蓝莓果实上后，它分泌的挥发性物质能在一定程度上延缓蓝莓果实的自然腐烂。
要解决拮抗酵母作为水果生防菌剂在实际应用中存在的问题,就要提高拮抗菌的稳定性和生防效力,扩大拮抗酵母菌的应用范围。最新的研究结果显示,提高其生防效力的方法有以下几种：1)将拮抗菌与低剂量的化学杀菌剂混合使用防治病害,可提高拮抗菌的抑菌能力；2)使用生物工程技术改造拮抗酵母菌从而提高其生防效果,但是利用转基因技术改造的菌株需要应用到实际生产中,必须经过后续的安全验证；3)将拮抗酵母研制成生防制剂,可以延长酵母菌的使用期限、提高酵母菌的生防效果。目前微生物制剂是研究的热点,因为生防制剂有许多优点:首先,其活性高、用量少,为一般化学农药用量的10％～20％；其次,生防制剂不会使病菌产生抗药性,并且分解快速,对人体和环境没有危害；最后,生防制剂所需的生产原料大多为农副产品,来源广、易生产,有比较好的经济效益。
以上对本发明做了示例性的描述，应该说明的是，在不脱离本发明的核心的情况下，任何简单的变形、修改或者其他本领域技术人员能够不花费创造性劳动的等同替换均落入本发明的保护范围。
本发明所述的美极梅奇酵母菌(Metschnikowia sp.)T-2的ITS/LR3R rDNA基因组由874个碱基(bp)组成，其序列如下：
SEQUENCE LISTING
<110> 天津农学院
<120> 一种美极梅奇酵母及其应用
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 874
<212> DNA
<213> Metschnikowia sp.
<400> 1
agtcattacg cagcatccta agattgcagg cctcgggatg gtgagggaga aaggaccggg 60
gttatattcc tcgaaaggta catcccccgg tggttttgct ccccgccgcc ccgatgctgg 120
cccagttaag tgtctgcttg caagcccttc cctttcaaca atttcacgta ctttttcact 180
ctcttttcaa agtgcttttc atctttccat cactgtactt gttcgctatc ggtctctcgc 240
cggtatttag ctttagatgg atttaaccac ccacttagag ctgcattccc aaacaactcg 300
actcttggag acctgggatg aaggcgttga gggggttcac ggggctgtca ccctctgtgg 360
cgccactttc cagtggactt aacccctgcc ggccggaccc aagtctcttc aaattacaat 420
tcccggggga tttcaaattt gagcttttgc cgcttcactc gccgttactg aggcaatccc 480
tgttggtttc ttttcctccg cttattgata tgcttaagtt cagcgggtag tcttacgagg 540
gtgaggaaga aggatggggc taaaacttat tctagcgccg ttgatattag gccgaagcag 600
gaccaaaccg gaggtttgag agtaaatatc gctcacccac gcatgccctg gggaataccc 660
cggggcgcaa tgtgcgttca aagattcaat gattcacgtc tgcaagtcat attacgtatc 720
gcaattcgct gcgttcttca tcgatgcgag aaccaagaga tccgttgttg aaagtttttt 780
taaaaaatta ttgaaggtta agatttagag ggtttttctt aaaaggggga tacaatattc 840
ttatgatcct ccgcagcccc cccccccgag aggg 874
Claims (10)
1.一种美极梅奇酵母Metschnikowia sp.T-2，其特征在于，其保藏编号为：CGMCCNo.18253。
2.一种根据权利要求1所述的美极梅奇酵母在果品杀菌保鲜中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：美极梅奇酵母在抑制杀灭灰霉病菌Botrytis cinerea和/或链格孢菌Alternaria tenuissima当中的应用。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于：将所述美极梅奇酵母进行发酵，获得发酵液，将所述发酵液用于果品杀菌保鲜。
5.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于：将所述美极梅奇酵母进行发酵，获得其代谢产物，将所述代谢产物用于果品杀菌保鲜。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述代谢产物为液体代谢产物或气体代谢产物。
7.一种用于果品杀菌保鲜的杀菌剂，其特征在于：将如权利要求1所述的美极梅奇酵母进行发酵，获得其代谢产物，所述杀菌剂由所述代谢产物制得。
8.一种果品杀菌保鲜方法，其特征在于，将待杀菌保鲜的果品在含有如权利要求1所述的美极梅奇酵母的菌液中浸泡，晾干后在温度4～30℃贮藏；
所述菌液中细胞浓度为：106cfu/ml～109cfu/ml。
9.一种果品杀菌保鲜方法，其特征在于，将待杀菌保鲜的果品在含有如权利要求1所述的美极梅奇酵母的气体代谢物环境下，温度4～30℃贮藏。
10.一种根据权利要求1所述美极梅奇酵母菌和/或权利要求1所述美极梅奇酵母菌的代谢产物在蓝莓保鲜杀菌当中的应用。
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