JP2526029B2 - 抗菌活性を有する酵母 - Google Patents
抗菌活性を有する酵母Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、抗菌活性を有する酵母
に関する。酵母は、食品およびワインなどのアルコール
飲料の製造に用いられており、本発明は、食品およびア
ルコール飲料などの製造分野に利用できる。また、医
薬、農薬などの分野での利用可能性も有する。
に関する。酵母は、食品およびワインなどのアルコール
飲料の製造に用いられており、本発明は、食品およびア
ルコール飲料などの製造分野に利用できる。また、医
薬、農薬などの分野での利用可能性も有する。
【０００２】
【従来の技術】抗菌活性を有する酵母に関しては、ナフ
サキノン系抗生物質を生産するオーレオバシディウム(A
ureobasidium) 属類縁の新菌種酵母〔ジャーナル・オブ
・アンチバイオティクス(J.Antibiotics) 37 ,No.4, 32
5(1984)〕、クリベロマイセス(Kluyveromyces) 属およ
びクロエケラ(Kloeckera) 属に属する酵母〔アプライド
・エンバイランメンタル・マイクロバイオロジー(App.
Environ.Microbiol.) 50,No.5, 1330(1985) 〕およびサ
ッカロマイセス属に属する酵母〔エー・エス・ビー・シ
ー・ジャーナル(ASBC Journal)42 ,No.4, 164(1984)〕
などが知られている。
サキノン系抗生物質を生産するオーレオバシディウム(A
ureobasidium) 属類縁の新菌種酵母〔ジャーナル・オブ
・アンチバイオティクス(J.Antibiotics) 37 ,No.4, 32
5(1984)〕、クリベロマイセス(Kluyveromyces) 属およ
びクロエケラ(Kloeckera) 属に属する酵母〔アプライド
・エンバイランメンタル・マイクロバイオロジー(App.
Environ.Microbiol.) 50,No.5, 1330(1985) 〕およびサ
ッカロマイセス属に属する酵母〔エー・エス・ビー・シ
ー・ジャーナル(ASBC Journal)42 ,No.4, 164(1984)〕
などが知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】一般に、酒類、アルコ
ールの製造には、酵母による発酵の工程が必須である。
この発酵工程においては、しばしば野生酵母ならびに乳
酸菌、酢酸菌などの野生細菌による汚染が問題となる。
このうち、野生酵母による汚染の問題を解決するため
に、既に、優良キラーワイン酵母が実用化されている
〔ジャーナル・オブ・ファーメンテーション・テクノロ
ジー（J.Ferm.Technol.)63 ,No.5,421 (1985)、ヴァイ
ン・ヴィセンシャフト (WeinWissenschaft)No.4, 258(1
985)、インターナショナル・コングレス・オブ・ヴァイ
ン・アンド・ワイン(International Congress of vine
and wine) (OIV総会) 要旨集, p.23 (1985) 〕。しか
し、キラー酵母によって生産、分泌されるキラー物質
は、酵母には有効であるが、細菌に対して抗菌活性を示
さないため、細菌による汚染の問題は、既知のキラー酵
母によって解決することができない。従って、酵母、細
菌の両者に対して抗菌活性を有する醸造用酵母の育種
は、酒類、アルコールの製造上大変重要である。
ールの製造には、酵母による発酵の工程が必須である。
この発酵工程においては、しばしば野生酵母ならびに乳
酸菌、酢酸菌などの野生細菌による汚染が問題となる。
このうち、野生酵母による汚染の問題を解決するため
に、既に、優良キラーワイン酵母が実用化されている
〔ジャーナル・オブ・ファーメンテーション・テクノロ
ジー（J.Ferm.Technol.)63 ,No.5,421 (1985)、ヴァイ
ン・ヴィセンシャフト (WeinWissenschaft)No.4, 258(1
985)、インターナショナル・コングレス・オブ・ヴァイ
ン・アンド・ワイン(International Congress of vine
and wine) (OIV総会) 要旨集, p.23 (1985) 〕。しか
し、キラー酵母によって生産、分泌されるキラー物質
は、酵母には有効であるが、細菌に対して抗菌活性を示
さないため、細菌による汚染の問題は、既知のキラー酵
母によって解決することができない。従って、酵母、細
菌の両者に対して抗菌活性を有する醸造用酵母の育種
は、酒類、アルコールの製造上大変重要である。
【０００４】
【題解を解決するための手段】本発明者は、細菌に対し
て抗菌活性を有する酵母の検索を行った結果、抗菌活性
を有する酵母として、ブドウ果皮より３株を取得し、本
発明を完成した。
て抗菌活性を有する酵母の検索を行った結果、抗菌活性
を有する酵母として、ブドウ果皮より３株を取得し、本
発明を完成した。
【０００５】以下、本発明を詳細に説明する。本発明
は、細菌に対して抗菌活性を有するキャンディダ・ピン
トロペシー(Candida pintolopesii)、キャンディダ・フ
ェニカ(Candida fennica) およびキャンディダ・スピー
シーズ(Candida sp.）A-31-2(FERM BP-1441 号) を提供
する。
は、細菌に対して抗菌活性を有するキャンディダ・ピン
トロペシー(Candida pintolopesii)、キャンディダ・フ
ェニカ(Candida fennica) およびキャンディダ・スピー
シーズ(Candida sp.）A-31-2(FERM BP-1441 号) を提供
する。
【０００６】本発明の酵母菌株は、具体的にはそれぞ
れ、キャンディダ・スピーシーズA-31-2、キャンディダ
・ピントロペシーB-48-2、キャンディダ・フェニカN-6-
1 があげられ、次のような菌学的性質を示す。
れ、キャンディダ・スピーシーズA-31-2、キャンディダ
・ピントロペシーB-48-2、キャンディダ・フェニカN-6-
1 があげられ、次のような菌学的性質を示す。
【０００７】Ｉ. キャンディダ・スピーシーズ A-31-2 本菌株は、山梨県においてブドウの果皮より分離された
もので、その菌学的性質は次の通りである。麦芽エキス
寒天培地上において、25℃で培養したとき、集落は光沢
のあるクリーム白色を呈し、カロチノイド色素の生成は
認められない。光学顕微鏡観察においては、亜球形ある
いは楕円形で、長さ 2.5〜4.5 μm 、幅1〜3 μm の栄
養細胞が認められる。栄養細胞は多極出芽によって増殖
する。真性菌糸ならびに偽菌糸は認められない。好気
性。テレオモルフは観察されない。本菌株は、硝酸塩、
イノシトールを資化できない。
もので、その菌学的性質は次の通りである。麦芽エキス
寒天培地上において、25℃で培養したとき、集落は光沢
のあるクリーム白色を呈し、カロチノイド色素の生成は
認められない。光学顕微鏡観察においては、亜球形ある
いは楕円形で、長さ 2.5〜4.5 μm 、幅1〜3 μm の栄
養細胞が認められる。栄養細胞は多極出芽によって増殖
する。真性菌糸ならびに偽菌糸は認められない。好気
性。テレオモルフは観察されない。本菌株は、硝酸塩、
イノシトールを資化できない。
【０００８】本菌株を、「ザ・イースツ・ア・タキソノ
ミック・スタディー 第３版」によって検索した結果、
上記の菌学的性質からキャンディダ(Candida) 属に属す
ると結論される。本菌株をキャンディダ・スピーシーズ
(Candida sp. )A-31-2(以下A-31-2という) と命名し、
微工研に、昭和62年８月７日付でFERM BP-1441号として
寄託した。
ミック・スタディー 第３版」によって検索した結果、
上記の菌学的性質からキャンディダ(Candida) 属に属す
ると結論される。本菌株をキャンディダ・スピーシーズ
(Candida sp. )A-31-2(以下A-31-2という) と命名し、
微工研に、昭和62年８月７日付でFERM BP-1441号として
寄託した。
【０００９】II. キャンディダ・ピントロペシーB-48-2 本菌株は、山梨県白根町においてブドウの果皮より分離
されたもので、その菌学的性質は次の通りである。麦芽
エキス寒天培地上において、25℃で培養したとき、集落
はクリーム色を呈する。光学顕微鏡観察においては、亜
球形あるいは卵形の栄養細胞のみ認められ、真性菌糸な
らびに偽菌糸は認められない。栄養細胞は多極出芽によ
って増殖する。好気性。テレオモルフは観察されず、カ
ロチノイド系色素の生成は認められない。本菌株は、デ
ィアゾニウム・ブルーB (DBB) 試験は陰性で、硝酸塩を
資化できない。イノシトール、エリスリトール、マルト
ース、マンニトール、ガラクトース、トレハロース、セ
ロビオース、キシロースの各種糖類を資化できない。グ
ルコースの発酵能を有するが、サッカロースの発酵能を
欠く。生育温度範囲は10〜37℃。ビタミン要求性を示
し、ビタミン非含有培地では生育できない。
されたもので、その菌学的性質は次の通りである。麦芽
エキス寒天培地上において、25℃で培養したとき、集落
はクリーム色を呈する。光学顕微鏡観察においては、亜
球形あるいは卵形の栄養細胞のみ認められ、真性菌糸な
らびに偽菌糸は認められない。栄養細胞は多極出芽によ
って増殖する。好気性。テレオモルフは観察されず、カ
ロチノイド系色素の生成は認められない。本菌株は、デ
ィアゾニウム・ブルーB (DBB) 試験は陰性で、硝酸塩を
資化できない。イノシトール、エリスリトール、マルト
ース、マンニトール、ガラクトース、トレハロース、セ
ロビオース、キシロースの各種糖類を資化できない。グ
ルコースの発酵能を有するが、サッカロースの発酵能を
欠く。生育温度範囲は10〜37℃。ビタミン要求性を示
し、ビタミン非含有培地では生育できない。
【００１０】本菌株を、「ザ・イースツ・ア・タキソノ
ミック・スタディー 第３版」に従って検索したとこ
ろ、上記の菌学的性質からキャンディダ・ピントロペシ
ー（Candida pintolopesii var. pintolopesii) と同定
し、キャンディダ・ピントロペシーB-48-2 (以下B-48-2
という) と命名して、微工研に昭和62年８月７日付でFE
RM BP-1440号として寄託した。
ミック・スタディー 第３版」に従って検索したとこ
ろ、上記の菌学的性質からキャンディダ・ピントロペシ
ー（Candida pintolopesii var. pintolopesii) と同定
し、キャンディダ・ピントロペシーB-48-2 (以下B-48-2
という) と命名して、微工研に昭和62年８月７日付でFE
RM BP-1440号として寄託した。
【００１１】III.キャンディダ・フェニカN-6-1 本菌株は、山梨県においてブドウの果実より分離された
もので、その菌学的性質は次の通りである。麦芽エキス
寒天培地上において、25℃で培養したとき、集落は白色
を呈する。光学顕微鏡観察においては、真性菌糸がよく
発育し、まれに偽菌糸も観察される。栄養細胞は、真性
菌糸あるいは偽菌糸より、出芽型に形成される。同時
に、栄養細胞は多極出芽型の増殖様式を示す。栄養細胞
は球形、卵形あるいは楕円形を呈する。好気性。テレオ
モルフは観察されず、カロチノイド系色素の生成は見ら
れない。本菌株は、DBB 試験は陰性を示し、硝酸塩を資
化できない。また、イノシトール、L-ラムノース、ラク
トース、ガラクチトールの各種糖類は資化できないが、
エリスリトール、ラフィノースは資化できる。
もので、その菌学的性質は次の通りである。麦芽エキス
寒天培地上において、25℃で培養したとき、集落は白色
を呈する。光学顕微鏡観察においては、真性菌糸がよく
発育し、まれに偽菌糸も観察される。栄養細胞は、真性
菌糸あるいは偽菌糸より、出芽型に形成される。同時
に、栄養細胞は多極出芽型の増殖様式を示す。栄養細胞
は球形、卵形あるいは楕円形を呈する。好気性。テレオ
モルフは観察されず、カロチノイド系色素の生成は見ら
れない。本菌株は、DBB 試験は陰性を示し、硝酸塩を資
化できない。また、イノシトール、L-ラムノース、ラク
トース、ガラクチトールの各種糖類は資化できないが、
エリスリトール、ラフィノースは資化できる。
【００１２】本菌株を、「ザ・イースツ・ア・タキソノ
ミック・スタディー 第３版」に従って検索した結果、
上記の菌学的性質から、キャンディダ・フェニカ（Cand
idafennica ) と同定し、キャンディダ・フェニカN-6-1
( 以下N-6-1 という) と命名して、微工研に昭和62年
８月７日付でFERM BP-1442号として寄託した。
ミック・スタディー 第３版」に従って検索した結果、
上記の菌学的性質から、キャンディダ・フェニカ（Cand
idafennica ) と同定し、キャンディダ・フェニカN-6-1
( 以下N-6-1 という) と命名して、微工研に昭和62年
８月７日付でFERM BP-1442号として寄託した。
【００１３】ここで得られたN-6-1 株は細菌、酵母に、
A-31-2株は細菌、酵母、カビに対して抗菌活性を示す。
また、B-48-2株はメチレンブルー存在下でのみバチルス
・ズブティリス(Bacillus subtilis) に抗菌活性を示
す。これらの酵母菌株、特にA-31-2は、例えば、細胞融
合、遺伝子操作などによる、醸造用酵母への上記の抗菌
活性の導入の際の材料として用いることができる。ま
た、これらの生産する抗菌性物質または酵母菌体そのも
のを農薬、動物薬、医薬、食品保存料などとして利用で
きる。
A-31-2株は細菌、酵母、カビに対して抗菌活性を示す。
また、B-48-2株はメチレンブルー存在下でのみバチルス
・ズブティリス(Bacillus subtilis) に抗菌活性を示
す。これらの酵母菌株、特にA-31-2は、例えば、細胞融
合、遺伝子操作などによる、醸造用酵母への上記の抗菌
活性の導入の際の材料として用いることができる。ま
た、これらの生産する抗菌性物質または酵母菌体そのも
のを農薬、動物薬、医薬、食品保存料などとして利用で
きる。
【００１４】本発明の抗菌活性を有する酵母の培養は、
通常の酵母の培養方法に従って行うことができる。たと
えば炭素源としては、グルコース、フラクトース、シュ
ークロース、グリセリン、マルトース、ガラクトース、
ソルビトールなどのうち各酵母菌株が資化可能なものを
用いる。窒素源としては、NH4Cl 、(NH4)2SO4 、カザミ
ノ酸、酵母エキス、ペプトン、肉エキス、マルトエキ
ス、バクトトリプトン、コーンスティプリカー、ソイビ
ーンミール、ファーマメディアなどが、その他の栄養源
としては、K2HPO4、KH2PO4、NaCl、MgSO4 、ビタミン
B1、MgCl2 、ビオチンなどが使用できる。また、ブドウ
などの果実より得た果汁またはこれを濃縮したものを培
地として用いることもできる。培養はpH 2〜8 、温度10
〜35℃ (好適にはpH 5.0〜6.5 、温度20〜30℃) で24〜
90時間行われる。いずれの菌株においても静置培養した
場合、抗菌活性は微弱または不検出なので、静置培養よ
りも通気培養が望ましい。
通常の酵母の培養方法に従って行うことができる。たと
えば炭素源としては、グルコース、フラクトース、シュ
ークロース、グリセリン、マルトース、ガラクトース、
ソルビトールなどのうち各酵母菌株が資化可能なものを
用いる。窒素源としては、NH4Cl 、(NH4)2SO4 、カザミ
ノ酸、酵母エキス、ペプトン、肉エキス、マルトエキ
ス、バクトトリプトン、コーンスティプリカー、ソイビ
ーンミール、ファーマメディアなどが、その他の栄養源
としては、K2HPO4、KH2PO4、NaCl、MgSO4 、ビタミン
B1、MgCl2 、ビオチンなどが使用できる。また、ブドウ
などの果実より得た果汁またはこれを濃縮したものを培
地として用いることもできる。培養はpH 2〜8 、温度10
〜35℃ (好適にはpH 5.0〜6.5 、温度20〜30℃) で24〜
90時間行われる。いずれの菌株においても静置培養した
場合、抗菌活性は微弱または不検出なので、静置培養よ
りも通気培養が望ましい。
【００１５】また、いずれの菌株においても、スラント
など固体培地上で保存すると、抗菌活性が低下するの
で、グリセリン中で低温保存 (最終グリセリン濃度10〜
40% で-30〜-80 ℃) することが望ましい。
など固体培地上で保存すると、抗菌活性が低下するの
で、グリセリン中で低温保存 (最終グリセリン濃度10〜
40% で-30〜-80 ℃) することが望ましい。
【００１６】以下に本発明の実施例を示す。
【００１７】
実施例１ 畑より摘みとった果粒２個分のブドウ果皮をペニシリン
G 100 単位／ml、ストレプトマイシン100 μg ／ml含有
のYPD 培地 (グルコース2%、ペプトン2%、酵母エキス1
%、pH 6.0) ３mlに加えて、よく振り混ぜた後、25℃で
７日間静置培養した。その後、培養液をYPD 寒天培地
(YPD 培地に寒天2%を添加したもの、pH6.0)上に、シャ
ーレ１個当り酵母細胞数 100〜150 細胞になるように希
釈して塗布し、25℃でインキュベートした。５日後生じ
たコロニーをグルコースを1%含有するニュートリエント
ブロス寒天培地 (極東粉末ブイヨン2%、寒天2%、pH 6.
0; 以下NB寒天培地という) に105 細胞／mlになるよう
にバチルス・ズブティリスIAM1070 を接種したプレート
上にレプリカし、25℃で 2〜4 日間培養した。抗菌活性
を示すコロニー (コロニー周辺に、バチルス・ズブティ
リスの生育阻止円が認められたもの。栄養の取り合いに
よるバチルス・ズブティリスの生育不良のケースを除外
するために、阻止円が明瞭なもののみを選出した) を分
離し、単細胞分離を行った後、以下の３つの方法で抗菌
活性を検定した。
G 100 単位／ml、ストレプトマイシン100 μg ／ml含有
のYPD 培地 (グルコース2%、ペプトン2%、酵母エキス1
%、pH 6.0) ３mlに加えて、よく振り混ぜた後、25℃で
７日間静置培養した。その後、培養液をYPD 寒天培地
(YPD 培地に寒天2%を添加したもの、pH6.0)上に、シャ
ーレ１個当り酵母細胞数 100〜150 細胞になるように希
釈して塗布し、25℃でインキュベートした。５日後生じ
たコロニーをグルコースを1%含有するニュートリエント
ブロス寒天培地 (極東粉末ブイヨン2%、寒天2%、pH 6.
0; 以下NB寒天培地という) に105 細胞／mlになるよう
にバチルス・ズブティリスIAM1070 を接種したプレート
上にレプリカし、25℃で 2〜4 日間培養した。抗菌活性
を示すコロニー (コロニー周辺に、バチルス・ズブティ
リスの生育阻止円が認められたもの。栄養の取り合いに
よるバチルス・ズブティリスの生育不良のケースを除外
するために、阻止円が明瞭なもののみを選出した) を分
離し、単細胞分離を行った後、以下の３つの方法で抗菌
活性を検定した。
【００１８】以下の３つの方法で、単細胞分離を行った
種々酵母の抗菌活性を検定し、抗菌活性を示す酵母とし
てA-31-2、B-48-2およびN-6-1 を選択した。 (1)方法I YPD 寒天培地上で25℃で３日間培養した酵母菌株を、１
白金耳ずつ、第１表に示した被検菌１０5 細胞／mlを含
む寒天培地上に塗布し、30℃で２日間、被検菌にロイコ
ノストック・オエノスを用いた場合は25℃で 3〜4 日間
それぞれ培養した。ここでいう被検菌105 細胞／mlを含
む寒天培地とは、乳酸菌以外の細菌は１％グルコースお
よび50mMクエン酸−リン酸緩衝液を含有するNB寒天培
地、乳酸菌はBL寒天培地(pH 7.2 、ただしロイコノスト
ック・オエノスについては塩酸でpH4.8に調整する。栄
研製) 、カビはマルトエキス寒天培地 (マルトエキス2
%、ペプトン0.1%、グルコース2%、寒天2%; pH5.0)、酵
母は100mM クエン酸−リン酸緩衝液含有YPD 寒天培地
(pH6.0)にそれぞれ１０5 細胞／mlになるように被検菌
を接種したものである。
種々酵母の抗菌活性を検定し、抗菌活性を示す酵母とし
てA-31-2、B-48-2およびN-6-1 を選択した。 (1)方法I YPD 寒天培地上で25℃で３日間培養した酵母菌株を、１
白金耳ずつ、第１表に示した被検菌１０5 細胞／mlを含
む寒天培地上に塗布し、30℃で２日間、被検菌にロイコ
ノストック・オエノスを用いた場合は25℃で 3〜4 日間
それぞれ培養した。ここでいう被検菌105 細胞／mlを含
む寒天培地とは、乳酸菌以外の細菌は１％グルコースお
よび50mMクエン酸−リン酸緩衝液を含有するNB寒天培
地、乳酸菌はBL寒天培地(pH 7.2 、ただしロイコノスト
ック・オエノスについては塩酸でpH4.8に調整する。栄
研製) 、カビはマルトエキス寒天培地 (マルトエキス2
%、ペプトン0.1%、グルコース2%、寒天2%; pH5.0)、酵
母は100mM クエン酸−リン酸緩衝液含有YPD 寒天培地
(pH6.0)にそれぞれ１０5 細胞／mlになるように被検菌
を接種したものである。
【００１９】培養後、塗りつけた酵母菌株の周辺に生ず
る、被検菌の増殖阻止領域を観察した。抗菌活性は、被
検菌の増殖阻止の程度によって次のように表示した。 +++ : 活性非常に強い、++ : 活性強い、＋：活性中程
度、±：微弱な活性あり、−：活性なし 結果を第１表に示す。
る、被検菌の増殖阻止領域を観察した。抗菌活性は、被
検菌の増殖阻止の程度によって次のように表示した。 +++ : 活性非常に強い、++ : 活性強い、＋：活性中程
度、±：微弱な活性あり、−：活性なし 結果を第１表に示す。
【００２０】(2)方法II（ウェル・テスト−１） YPD 培地中で28℃、２日間振とう培養した各酵母菌株
を、各々５mlのYPD 培地を含むL 型試験管に、１×１０
6 細胞／mlの菌濃度になるよう接種し、28℃で振とう培
養を行った。培養はB-48-2およびN-6-1 は36時間、A-31
-2は60時間行った。培養後、各培養液を0.45μのセルロ
ースアセテート製メンブレインフィルターでろ過し、凍
結乾燥により約５倍に濃縮した後、各濃縮液を、方法I
と同様な、被検菌１０5 細胞／mlを接種した寒天平板上
にあけた穴（直径１０mm）の中に、200 μl ずつ各々注
入し、30℃で培養した。２日後、穴の周囲に生じた、被
検菌の増殖阻止円の直径を測定して、抗菌活性の強さと
した（活性のないものは−として表示した）。結果を第
１表に示す。
を、各々５mlのYPD 培地を含むL 型試験管に、１×１０
6 細胞／mlの菌濃度になるよう接種し、28℃で振とう培
養を行った。培養はB-48-2およびN-6-1 は36時間、A-31
-2は60時間行った。培養後、各培養液を0.45μのセルロ
ースアセテート製メンブレインフィルターでろ過し、凍
結乾燥により約５倍に濃縮した後、各濃縮液を、方法I
と同様な、被検菌１０5 細胞／mlを接種した寒天平板上
にあけた穴（直径１０mm）の中に、200 μl ずつ各々注
入し、30℃で培養した。２日後、穴の周囲に生じた、被
検菌の増殖阻止円の直径を測定して、抗菌活性の強さと
した（活性のないものは−として表示した）。結果を第
１表に示す。
【００２１】(3)方法III（ウェル・テスト−２） 被検菌を接種した寒天培地中にメチレンブルーを含有
（酵母、カビ用のプレートでは0.003%、細菌用のプレー
トでは、0.0015%)する以外は方法IIと同様にして抗菌活
性を測定した。ただし、この方法では、穴の周囲に生じ
た、死菌体に取り込まれたメチレンブルーによる円の直
径を測定して抗菌活性の強さとした( 活性のないものは
−として表示した）。方法I、II、と共に方法IIIにより
抗菌活性を検定した結果を第１表に示す。
（酵母、カビ用のプレートでは0.003%、細菌用のプレー
トでは、0.0015%)する以外は方法IIと同様にして抗菌活
性を測定した。ただし、この方法では、穴の周囲に生じ
た、死菌体に取り込まれたメチレンブルーによる円の直
径を測定して抗菌活性の強さとした( 活性のないものは
−として表示した）。方法I、II、と共に方法IIIにより
抗菌活性を検定した結果を第１表に示す。
【００２２】
【表１】
【００２３】A-31-2株は細菌、酵母、カビに対して抗菌
活性を示す。N-6-1 株は細菌、酵母に対して抗菌活性を
示し、B-48-2株は、メチレンブルー存在下でのみバチル
ス・ズブティリスに抗菌活性を示す。
活性を示す。N-6-1 株は細菌、酵母に対して抗菌活性を
示し、B-48-2株は、メチレンブルー存在下でのみバチル
ス・ズブティリスに抗菌活性を示す。
【００２４】実施例２ YPD 培地中で28℃、２日間振とう培養した各酵母菌株
を、各々５mlのYPD 培地を含むＬ型試験管２本ずつに、
１×１０6 細胞／mlの菌濃度になるように接種し、28℃
で、一方は振とう培養し、一方は通気培養した。培養開
始後24、36、48、60時間目に、各々のL 型試験管から、
それぞれ0.5 mlの培養液を採取し、0.45μのセルロース
アセテート製メンブレインフィルターでろ過し、各ろ液
を、１０5細胞／mlのバチルス・ズブティリスIAM1070
を接種したNB寒天培地(1% グルコースと50mMクエン酸−
リン酸緩衝液含有、pH6.0)およびキャンディダ・グラブ
ラータ IFO 0622 を接種したYPD 寒天培地(100mM クエ
ン酸−リン酸緩衝液含有、pH6.0)上にあけた穴の中に、
200 μl ずつ各々注入し、30℃で培養した。抗菌活性の
判定は、A-31-2およびN-6-1 については実施例１の方法
IIに従って、B-48-2については方法IIIに従ってそれぞ
れ行った。結果を第２表に示す。
を、各々５mlのYPD 培地を含むＬ型試験管２本ずつに、
１×１０6 細胞／mlの菌濃度になるように接種し、28℃
で、一方は振とう培養し、一方は通気培養した。培養開
始後24、36、48、60時間目に、各々のL 型試験管から、
それぞれ0.5 mlの培養液を採取し、0.45μのセルロース
アセテート製メンブレインフィルターでろ過し、各ろ液
を、１０5細胞／mlのバチルス・ズブティリスIAM1070
を接種したNB寒天培地(1% グルコースと50mMクエン酸−
リン酸緩衝液含有、pH6.0)およびキャンディダ・グラブ
ラータ IFO 0622 を接種したYPD 寒天培地(100mM クエ
ン酸−リン酸緩衝液含有、pH6.0)上にあけた穴の中に、
200 μl ずつ各々注入し、30℃で培養した。抗菌活性の
判定は、A-31-2およびN-6-1 については実施例１の方法
IIに従って、B-48-2については方法IIIに従ってそれぞ
れ行った。結果を第２表に示す。
【００２５】
【表２】
【００２６】いずれの酵母菌株においても振とう培養の
方が抗菌活性が高い。A-31-2株では抗細菌活性は、60時
間目まで上昇し続けた。また、抗酵母活性は36時間目以
降一定に推移した。各株は36時間目に活性のピークを有
していた。
方が抗菌活性が高い。A-31-2株では抗細菌活性は、60時
間目まで上昇し続けた。また、抗酵母活性は36時間目以
降一定に推移した。各株は36時間目に活性のピークを有
していた。
【００２７】実施例３ 各酵母菌株の示す抗菌活性が、培養液中に存在する有機
酸や高級アルコールなどによるものではないことを確認
するために、実施例２と同様に各酵母菌株を培養し、各
酵母菌株の抗菌活性最高時の培養液、つまり、A-31-2は
60時間目、B-48-2およびN-6-1 は36時間目に採取した培
養液の有機酸、高級アルコールなどの分析およびバチル
ス・ズブティリスIAM1070 およびキャンディダ・グラブ
ラータIFO 0622に対する抗菌活性の検定を行った。対照
として、各アルコール類、有機酸類を、各々培養液の分
析値と等量ずつ、YPD 培地に添加したサンプルについて
も同様に抗菌活性の検定を行った。
酸や高級アルコールなどによるものではないことを確認
するために、実施例２と同様に各酵母菌株を培養し、各
酵母菌株の抗菌活性最高時の培養液、つまり、A-31-2は
60時間目、B-48-2およびN-6-1 は36時間目に採取した培
養液の有機酸、高級アルコールなどの分析およびバチル
ス・ズブティリスIAM1070 およびキャンディダ・グラブ
ラータIFO 0622に対する抗菌活性の検定を行った。対照
として、各アルコール類、有機酸類を、各々培養液の分
析値と等量ずつ、YPD 培地に添加したサンプルについて
も同様に抗菌活性の検定を行った。
【００２８】抗菌活性の検定法は、B-48-2については方
法IIIにより、その他の菌株については方法IIによって
行った。また酢酸、エタノール、β−フェネチルアルコ
ールについては方法IIとIIIによって検定した。有機酸
分析は液体クロマトグラフィー法（カラム：Shodex C-8
11、検出器: 可視、UV検出器 UVIDEC100-VI、検出法:B
TB発色法) 、エタノールの分析はガスクロマトグラフィ
ー法〔カラム:20% APS-201/FlusionT (60〜80mesh) 、
検出器:FID検出器〕、高級アルコールの分析はガスクロ
マトグラフィー法〔カラム:PEG HT 5%-Uniport HP 60/8
0 、検出器 :FID 検出器(220℃) 、カラム温度：65〜19
0 ℃(5℃/minの昇温系) 、Injector温度:220℃〕によっ
て行った。
法IIIにより、その他の菌株については方法IIによって
行った。また酢酸、エタノール、β−フェネチルアルコ
ールについては方法IIとIIIによって検定した。有機酸
分析は液体クロマトグラフィー法（カラム：Shodex C-8
11、検出器: 可視、UV検出器 UVIDEC100-VI、検出法:B
TB発色法) 、エタノールの分析はガスクロマトグラフィ
ー法〔カラム:20% APS-201/FlusionT (60〜80mesh) 、
検出器:FID検出器〕、高級アルコールの分析はガスクロ
マトグラフィー法〔カラム:PEG HT 5%-Uniport HP 60/8
0 、検出器 :FID 検出器(220℃) 、カラム温度：65〜19
0 ℃(5℃/minの昇温系) 、Injector温度:220℃〕によっ
て行った。
【００２９】培養液の分析結果を第３表に、抗菌活性の
検定結果を第４表にそれぞれ示す。
検定結果を第４表にそれぞれ示す。
【００３０】
【表３】
【００３１】
【表４】
【００３２】
【表５】
【００３３】エタノールは2.0 %(V/V)の濃度、酢酸は10
00mg／ｌ、β- フェネチルアルコールは300mg／ｌの濃
度でもバチルス・ズブティリスIAM 1070およびキャンデ
ィダ・グラブラータ IFO 0622 に抗菌活性を示さなかっ
た。また、その他のアルコール類、有機酸類について
も、これら５株の示す抗菌活性への寄与は全く認められ
なかった。これらのことから、これら酵母菌株の示す抗
菌活性は、酢酸をはじめとする有機酸、高級アルコー
ル、エタノールなどによるものではないことが明らかで
ある。
00mg／ｌ、β- フェネチルアルコールは300mg／ｌの濃
度でもバチルス・ズブティリスIAM 1070およびキャンデ
ィダ・グラブラータ IFO 0622 に抗菌活性を示さなかっ
た。また、その他のアルコール類、有機酸類について
も、これら５株の示す抗菌活性への寄与は全く認められ
なかった。これらのことから、これら酵母菌株の示す抗
菌活性は、酢酸をはじめとする有機酸、高級アルコー
ル、エタノールなどによるものではないことが明らかで
ある。
【００３４】
【発明の効果】本発明の酵母菌株を利用すれば、野生細
菌、野生酵母などの汚染を防ぐことができ、酒類、アル
コールの製造上大きな利点となる。また、本発明は、酵
母菌体そのものの農薬、動物薬への利用、生産される抗
菌性物質の農薬、動物薬、医薬、食品添加物などへの利
用の可能性を提供する。
菌、野生酵母などの汚染を防ぐことができ、酒類、アル
コールの製造上大きな利点となる。また、本発明は、酵
母菌体そのものの農薬、動物薬への利用、生産される抗
菌性物質の農薬、動物薬、医薬、食品添加物などへの利
用の可能性を提供する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 秋山 裕一 東京都国立市西２−22−26ファイン国立 302号 審査官 佐伯 裕子
Claims (1)
- 【請求項１】 細菌に対して抗菌活性を有するキャンデ
ィダ・ピントロペシー(Candida pintolopesii)、キャン
ディダ・フェニカ(Candida fennica) およびキャンディ
ダ・スピーシーズ(Candida sp.) A-31-2 微工研条寄第
1441号から選ばれる酵母。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6322125A JP2526029B2 (ja) | 1994-12-26 | 1994-12-26 | 抗菌活性を有する酵母 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6322125A JP2526029B2 (ja) | 1994-12-26 | 1994-12-26 | 抗菌活性を有する酵母 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62274426A Division JPH0761258B2 (ja) | 1987-10-29 | 1987-10-29 | 抗菌活性を有する酵母 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08103266A JPH08103266A (ja) | 1996-04-23 |
| JP2526029B2 true JP2526029B2 (ja) | 1996-08-21 |
Family
ID=18140212
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6322125A Expired - Lifetime JP2526029B2 (ja) | 1994-12-26 | 1994-12-26 | 抗菌活性を有する酵母 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2526029B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110527639A (zh) * | 2019-09-12 | 2019-12-03 | 天津农学院 | 一种美极梅奇酵母及其应用 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115851460A (zh) * | 2022-08-10 | 2023-03-28 | 丁辰 | 一种具有激活哺乳动物干细胞分化功能的菌株、组合物及其应用 |
-
1994
- 1994-12-26 JP JP6322125A patent/JP2526029B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110527639A (zh) * | 2019-09-12 | 2019-12-03 | 天津农学院 | 一种美极梅奇酵母及其应用 |
| CN110527639B (zh) * | 2019-09-12 | 2021-05-04 | 天津农学院 | 一种美极梅奇酵母及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08103266A (ja) | 1996-04-23 |
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
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