CN107164248B - 酵母菌dd12-7菌株及其应用 - Google Patents

酵母菌dd12-7菌株及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107164248B
CN107164248B CN201710422931.4A CN201710422931A CN107164248B CN 107164248 B CN107164248 B CN 107164248B CN 201710422931 A CN201710422931 A CN 201710422931A CN 107164248 B CN107164248 B CN 107164248B
Authority
CN
China
Prior art keywords
yeast
candida albicans
strain
culture medium
killer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201710422931.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107164248A (zh
Inventor
于刚
王麟
谭春明
杨少玲
杨贤庆
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
South China Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy Fishery Sciences
Original Assignee
South China Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy Fishery Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by South China Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy Fishery Sciences filed Critical South China Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy Fishery Sciences
Publication of CN107164248A publication Critical patent/CN107164248A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107164248B publication Critical patent/CN107164248B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
    • C07K14/39—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from yeasts

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种酵母菌，为拟威尔酵母(Williopsis sp.)DD12‑7菌株，其保藏号为CGMCC No.9833，具有分泌抗白色假丝酵母的嗜杀因子能力。本发明还公开了所述酵母菌的应用。本发明所述酵母菌株DD12‑7具有营养要求简单，发酵周期短的特点，应用该菌株生产抗白色假丝酵母的嗜杀因子具有很高的成本优势和良好的应用前景。

Description

酵母菌DD12-7菌株及其应用
技术领域
本发明涉及酵母菌DD12-7菌株及其应用。
背景技术
1963年，Bevan和Makower首次在保存的酿酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）中发现酵母菌株间存在着相互杀死的现象，进而发现一种具有嗜杀活性的酵母菌，它分泌的外毒素能抑制或杀死野生酵母菌。嗜杀酵母分泌的嗜杀毒素称为嗜杀因子，能够杀死敏感酵母菌株，但对嗜杀酵母本身却没有嗜杀作用，也就是说具有免疫性。从已纯化和表征的嗜杀毒素来看，嗜杀酵母所产的嗜杀毒素多为蛋白质或糖蛋白，在生物学特性上不耐热、对蛋白酶敏感。嗜杀酵母分泌的嗜杀因子可作为抑制某些病原酵母及类酵母的抗真菌药制剂。
白色假丝酵母又称白色念珠菌（Candida albicans），是一种真菌，通常存在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病，当机体免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调，则本菌大量繁殖并改变生长形式（芽生菌丝相）侵入细胞引起疾病。
发明内容
本发明的目的之一是提供酵母菌DD12-7菌株。
本发明目的之二涉及上述酵母菌株的应用。具体地，涉及应用该酵母菌株生产抗白色假丝酵母（Candida albicans）的嗜杀因子的方法。
本发明提供酵母菌株，为拟威尔酵母(Williopsissp.)DD12-7，其保藏号为CGMCCNo.9833，具有分泌抗白色假丝酵母的嗜杀因子能力。该酵母菌来源于海洋，分离纯化自辽宁丹东鸭绿江入海口沉积物。
应用上述酵母菌株生产抗白色假丝酵母（Candida albicans）的嗜杀因子的方法，在培养基中培养Williopsissp.DD12-7使细菌分泌抗白色假丝酵母嗜杀因子，以在细菌和培养基中聚集了抗白色假丝酵母嗜杀因子后，从培养基和细菌内回收并提纯。
所述培养基为YPD培养基，其中包含葡萄糖1.5~3%、蛋白胨1.5~3%和酵母粉0.5~2%。所述培养为振荡培养，在20~30℃和pH 4.5~5.0下进行，转速100~150rpm，发酵时间60~80h。
本发明的优点是：从海洋环境中分离出产嗜杀因子的Williopsissp.DD12-7菌株，其所产嗜杀因子能够杀灭致病菌白色假丝酵母。该菌株DD12-7具有营养要求简单，发酵周期短的特点，因此用该菌株生产抗白色假丝酵母的嗜杀因子具有很高的成本优势和良好的应用前景。
本发明所述酵母菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCC No.9833，保藏日期为：2014年10月19日，分类命名为：拟威尔酵母Williopsissp.。
附图说明
图1 嗜杀酵母初筛结果。
图2 嗜杀因子粗提液复筛结果。
图3 纯化嗜杀因子对敏感菌的作用。
具体实施方式
以下结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，其中以下采用的原料或者试剂，如无特殊指明均为市售。
实施例1
YPD培养基：1L培养基中含有：葡萄糖2%，蛋白胨2%，酵母粉1%，NaCl 2%和甘油15%，培养基用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液配制，调节pH值至4.5。
检测培养基：1.0%（w/v）酵母粉， 2.0%（w/v）葡萄糖，2.0%（w/v）蛋白胨，2.5%-3.5%（w/v）琼脂，1.5 mg/100mL 美蓝，用0.05 M 的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液控制pH 4.5，缓冲液用蒸馏水配制。
1. 采集样品：采集辽宁丹东鸭绿江入海口处表层海水，加入液体YPD培养基中震荡培养3天。将0.1ml该液体培养基涂布于固体YPD平板，培养3天后挑取单菌落进行初筛。
2. 初筛：以白色假丝酵母（Candida albicans）作为敏感菌，将细胞含量为107~108cells/mL的敏感菌用灭菌的棉签沾取涂布于平板中，将1中挑取的酵母菌单菌落点到检测培养基的平板上，培养3天后挑选出周围有透明圈的菌株。初筛结果见图1。
3. 复筛：通过比较嗜杀活力进行复筛，得到具有高产嗜杀因子的一株酵母菌株。将初筛中具有抗白色假丝酵母的菌株进一步在YPD平板中纯化，后挑取单菌落于装有50ml产嗜杀因子培养基的250ml三角瓶，在28℃，140 rpm培养3天，发酵液经 5000 × g离心5min得上清，在涂有敏感菌的检测培养基上放上牛津杯，取250ul的发酵清夜加到牛津杯当中，28℃培养3天。筛出具有高嗜杀活性的酵母菌株，如图2所示，牛津杯周围有非常明显的透明圈，表明发酵液中的嗜杀因子对检测培养基平板上的白色假丝酵母具有很强的杀灭作用。
4. 菌株通过形态观察和生理生化鉴定
白色奶油样菌落，细胞出芽生殖，有简单的假菌丝。生理生化特性如下：
发酵实验：
葡萄糖 麦芽糖 半乳糖 蔗糖 乳糖 棉子糖 蜜二糖
+ - + + - + +
同化实验：
葡萄糖 麦芽糖 半乳糖 蔗糖 乳糖 棉子糖 蜜二糖 可溶性淀粉
+ + + + + + + +
海藻糖 纤维二糖 D-果胶糖 木糖 L-果胶糖
- + - - +
通过比较嗜杀活力进行复筛，得到具有高产嗜杀因子的一株酵母菌株。该菌株通过形态观察和生理生化鉴定为Williopsissp.。菌株编号：DD12-7。生产嗜杀因子的液体培养基为YPD培养基，其组成为：1L培养基中含有：葡萄糖2%，蛋白胨2%，酵母粉1%，NaCl 2%和甘油15%，培养基用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液配制，调节pH值至4.5。
实施例2嗜杀因子的生产
在培养基中培养Williopsissp.DD12-7使细菌分泌抗白色假丝酵母嗜杀因子，以在细菌和培养基中聚集了抗白色假丝酵母嗜杀因子后，将培养基离心收集上清液，即为嗜杀因子粗提液。
培养基为产嗜杀因子培养基，其中包含葡萄糖2%、蛋白胨2%，酵母粉1%，NaCl 2%和甘油15%，培养基用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液配制，pH调为4.5。培养为振荡培养，在28℃和pH 4.5下进行，转速140rpm，发酵时间72h。
提纯工艺：取发酵液经10 kDa的超滤膜浓缩，然后过DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱进行阴离子交换，所得收集液经Sephadex G50 TM 凝胶过滤，纯的嗜杀因子。采用实施例1中第3步骤的方法，即在涂有敏感菌的检测培养基上放上牛津杯，取250ul的纯化的嗜杀因子加到牛津杯当中，28℃培养3天，如图3所示，纯化的嗜杀因子对白色假丝酵母具有很强的杀灭作用，牛津杯周围的透明圈非常明显。
以上实施实例对本发明不同的实施过程进行了详细的阐述，但是本发明的实施方式并不仅限于此。所述技术领域的普通技术人员依据本发明中公开的内容，均可实现本发明的目的。

Claims (3)

1.一株酵母菌，为拟威尔酵母(Williopsis sp.)DD12-7菌株，其保藏号为CGMCCNo.9833，具有分泌抗白色假丝酵母的嗜杀因子能力。
2.一种如权利要求1所述的酵母菌在生产抗白色假丝酵母的嗜杀因子中的应用。
3.一种应用如权利要求1所述的酵母菌发酵生产抗白色假丝酵母的嗜杀因子的方法，其特征在于，在培养基中培养拟威尔酵母DD12-7使酵母菌分泌抗白色假丝酵母嗜杀因子，在酵母菌和培养基中聚集了抗白色假丝酵母嗜杀因子后，从培养基和酵母菌内回收并提纯；
所述培养基为产嗜杀因子培养基，其中包含葡萄糖2%、蛋白胨2%、酵母粉1%、NaCl 2%和甘油15%；所述培养为振荡培养，在28℃和pH 4.5~5.0下进行，转速100~150rpm，发酵时间60~80h。
CN201710422931.4A 2017-03-16 2017-06-07 酵母菌dd12-7菌株及其应用 Expired - Fee Related CN107164248B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2017101573517 2017-03-16
CN201710157351 2017-03-16

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107164248A CN107164248A (zh) 2017-09-15
CN107164248B true CN107164248B (zh) 2020-11-10

Family

ID=59825767

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710422931.4A Expired - Fee Related CN107164248B (zh) 2017-03-16 2017-06-07 酵母菌dd12-7菌株及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107164248B (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1361825A (zh) * 1999-07-05 2002-07-31 阿温提斯研究技术两合公司 新的抗真菌剂和杀真菌剂及其制备方法和应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1361825A (zh) * 1999-07-05 2002-07-31 阿温提斯研究技术两合公司 新的抗真菌剂和杀真菌剂及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Purification, characterization and gene cloning of the killer toxin produced by the marine-derived yeast Williopsis saturnus WC91-2;Xing-Xing Wang等;《Microbiological Research》;20121012;第167卷(第9期);558-563 *
Wicaltin, a new protein toxin secreted by the yeast Williopsis californica and its broad-spectrum antimycotic potential;Theisen, S.等;《JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY》;20000831;第10卷(第4期);547-550 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN107164248A (zh) 2017-09-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11242502B2 (en) Low urea-producing and flavor-producing Wickerhamomyces anomalus strain and use thereof in food production
US11459593B2 (en) Dendrobium officinale endophytic fungus strain and extracellular polysaccharide produced thereby, and extraction method and application of extracellular polysaccharide
LU501210B1 (en) Streptomyces antibioticus, preparation of metabolite thereof, and use thereof in antibacterial aspect
CN107955794B (zh) 蛹虫草菌种的优质保藏方法
US10053744B2 (en) Yeast strain with high yield of glutathione
CN114134055A (zh) 一株高产苯乙醇的异常威克汉姆酵母及其应用
CN114231458B (zh) 一种提高瓜果类糖酸比的复合微生物菌剂及其制备方法和应用
CN102559513B (zh) 一种高产白囊耙齿菌诱变菌株及培育方法
CN108277186B (zh) 一种作为农药表面活性剂的地衣芽孢杆菌及其应用
CN108315265B (zh) 一种杂色曲霉Av-2菌株及其应用
CN107828697B (zh) 一种多粘类芽孢杆菌生防菌株af01及其应用
Hassan et al. Optimization of antibacterial compounds production by Aspergillus fumigatus isolated from Sudanese indigenous soil
CN108102944B (zh) 一种放线菌及其应用
CN110331104B (zh) 一种植物乳杆菌cv10d1及其应用
CN109679881B (zh) 一种菠萝泛菌及其菌剂和应用
CN107164248B (zh) 酵母菌dd12-7菌株及其应用
CN114032187B (zh) 西藏酸奶来源的马克斯克鲁维酵母菌株及其应用
CN114854631A (zh) 一株海绵来源的生防链霉菌ITBB-ZK-a5及其应用
KR101100716B1 (ko) 항균활성 물질을 생산하는 신규의 스트렙토마이세스 속 ｂｃｎｕ 1001 균주 및 이를 이용한 항균 조성물
CN113502282A (zh) 一株青霉固态发酵产果胶酶制剂的方法
JP5244415B2 (ja) 抗真菌性物質
CN115851496B (zh) 一株耐低温生防芽孢杆菌及其水产致病菌拮抗应用
TWI774104B (zh) 培養多孔菌菌絲球的培養液及其方法
CN108795775A (zh) 一株中国弯颈霉及其在生产虫草菌丝中的应用
CN114561297B (zh) 一种黄曲霉菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20201110

Termination date: 20210607

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee