CN107904180A - 一株用于果蔬采后病害防治的核果梅奇酵母及其制备与使用方法 - Google Patents
一株用于果蔬采后病害防治的核果梅奇酵母及其制备与使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107904180A CN107904180A CN201711373887.9A CN201711373887A CN107904180A CN 107904180 A CN107904180 A CN 107904180A CN 201711373887 A CN201711373887 A CN 201711373887A CN 107904180 A CN107904180 A CN 107904180A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- strange yeast
- drupe plum
- fruit
- yeast
- drupe
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 title claims abstract description 116
- 235000021038 drupes Nutrition 0.000 title claims abstract description 110
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 43
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 38
- 235000012055 fruits and vegetables Nutrition 0.000 title claims abstract description 17
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 6
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims abstract description 82
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 62
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 41
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 35
- 201000002909 Aspergillosis Diseases 0.000 claims abstract description 28
- 208000036641 Aspergillus infections Diseases 0.000 claims abstract description 28
- 235000016623 Fragaria vesca Nutrition 0.000 claims abstract description 22
- 235000011363 Fragaria x ananassa Nutrition 0.000 claims abstract description 22
- 235000011430 Malus pumila Nutrition 0.000 claims abstract description 22
- 235000015103 Malus silvestris Nutrition 0.000 claims abstract description 22
- 241000220324 Pyrus Species 0.000 claims abstract description 21
- 240000003040 Solanum lycopersicum var. cerasiforme Species 0.000 claims abstract description 19
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 claims abstract description 18
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 claims abstract description 18
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 claims abstract description 18
- 235000003953 Solanum lycopersicum var cerasiforme Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 235000014443 Pyrus communis Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims abstract description 15
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 206010064458 Penicilliosis Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 11
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 claims abstract description 9
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 9
- 206010027146 Melanoderma Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 241000775788 Metschnikowia fructicola Species 0.000 claims abstract description 7
- 241000122123 Penicillium italicum Species 0.000 claims abstract description 7
- 241000207199 Citrus Species 0.000 claims abstract description 5
- 235000021017 pears Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 claims abstract 4
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 claims abstract 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract 2
- 241000220225 Malus Species 0.000 claims description 19
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 11
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 9
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 9
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 9
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 9
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 9
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 9
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 9
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 2
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 claims 1
- 208000020282 anthrax disease Diseases 0.000 claims 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 5
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 abstract description 3
- 238000007654 immersion Methods 0.000 abstract description 2
- 244000141359 Malus pumila Species 0.000 abstract 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 25
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 241000220223 Fragaria Species 0.000 description 16
- 241000219095 Vitis Species 0.000 description 14
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 13
- WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N hypochlorite Chemical compound Cl[O-] WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 240000000560 Citrus x paradisi Species 0.000 description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 241000132184 Aspergillus brunneus Species 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 230000036541 health Effects 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 6
- 230000001408 fungistatic effect Effects 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 241000123650 Botrytis cinerea Species 0.000 description 4
- 241000004818 Botrytis porri Species 0.000 description 4
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 3
- 241000228215 Aspergillus aculeatus Species 0.000 description 3
- 208000003351 Melanosis Diseases 0.000 description 3
- 241000190142 Neofusicoccum ribis Species 0.000 description 3
- 241000235342 Saccharomycetes Species 0.000 description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000307700 Fragaria vesca Species 0.000 description 2
- 241001123674 Metschnikowia Species 0.000 description 2
- 241001123663 Penicillium expansum Species 0.000 description 2
- 235000010094 aprium Nutrition 0.000 description 2
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 241000266349 Alternaria tenuissima Species 0.000 description 1
- 241001639769 Colletotrichum fructicola Species 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000232939 Fusarium redolens Species 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 235000021022 fresh fruits Nutrition 0.000 description 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 1
- 229940084434 fungoid Drugs 0.000 description 1
- 208000018875 hypoxemia Diseases 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000002020 sage Nutrition 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
- A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
- A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
- A23B7/153—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10 in the form of liquids or solids
- A23B7/154—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
- A23B7/155—Microorganisms; Enzymes; Antibiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
本发明公开了一株用于果蔬采后病害防治的抑菌谱广、效果稳定的核果梅奇酵母Metschnikowia fructicola菌株BY33及其使用方法与用途。该菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏菌株编号为CGMCC No.14908。该核果梅奇酵母的使用方法:将菌株活化,用YPD发酵培养,离心,菌体用无菌水配成1×108细胞/mL的菌悬液;将苹果、梨、葡萄、草莓、柑橘或圣女果等果蔬放入菌悬液中,浸泡30秒后取出,风干;放入保鲜盒中,常温贮藏。该核果梅奇酵母菌株可同时控制苹果青霉病、灰霉病和黑斑病,梨果实青霉病和灰霉病,葡萄灰霉病、曲霉病、镰孢霉病和炭疽病,草莓灰霉病和曲霉病,柑橘青霉病,以及圣女果灰霉病和曲霉病,减少采后病害造成的损失,具有很好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及果蔬采后病害生物防治领域,尤其涉及一株用于果蔬采后病害生物防治的核果梅奇酵母(Metschnikowia fructicola),该菌株对苹果、梨、葡萄、草莓、柑桔、圣女果的主要采后病害均具有显著的防治效果。
背景技术
虽然新鲜果蔬品质劣变受诸多因素的影响,但病害是最主要的原因。其中,真菌性病害引起的腐烂变质是果实采后损失中最严重的因素。虽然可以通过农业防治、物理防治、化学防治和生物防治等很多途径进行防治果蔬采后病害,但目前的主要措施是化学防治(Eckert&Ogawa,1985,1988)。然而,长期使用化学农药不但导致病原菌产生耐药性而降低杀菌效果(Prusky at al.,1985;as et al.,1991;Holmes&Eckert,1999),而且频繁地使用高浓度的化学药剂也增加了果实上的农药残留量,严重威胁人们的健康,并造成环境污染(Gullion&Kuijipers,1994)。因此,开发安全、高效、无毒、低抗性的果实采后病害控制新技术成为当前世界各国的研究重点(Falik et al.,1995;Tian et al.,2001;Kulakiotuet al.,2004),其中利用生物拮抗菌防治是目前被证明安全有效的新方法(Wilson&Wisniewski,1989;Janisiewicz&Koersten,2002)。
迄今为止,国内外已经筛选出了许多对水果采后病原真菌具有明显抑菌效果的细菌、酵母菌和小型丝状真菌,其中利用拮抗酵母菌防治果实采后病害是当前已被证明的安全、高效的新技术,这主要由于大多数病原菌通过伤口入侵果实,而酵母菌主要通过与病原菌进行营养和空间竞争来防治病害,而且拮抗酵母菌能够适应低温、低氧、高二氧化碳等果实采后贮藏条件(王友升,2012)。
然而,虽然目前国内外报道的拮抗酵母菌有近百种,但大多数拮抗酵母菌的生防效果仅在少数果实上得到验证。而由于同一酵母菌的不同菌株之间的生防效果有很大差异(Filonowet al.,1996),因此,大多数拮抗酵母菌的缺乏抑菌谱广、效果稳定的菌株。
发明内容
针对上述技术难题,本发明的目的在于提供一株用于果蔬采后病害生物防治的抑菌谱广、效果稳定的核果梅奇酵母Metschnikowia fructicola及其制备和使用方法。该种用于果蔬采后病害生物防治的核果梅奇酵母Metschnikowia fructicola BY33,在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏菌株编号为CGMCC No.14908。
该核果梅奇酵母菌株进行果蔬采后病害防治和贮藏保鲜的方法,按照以下步骤进行:将核果梅奇酵母活化,用YPD液体培养基发酵培养,离心得到菌体,将菌体用无菌水配制成浓度为1×108细胞/mL的菌悬液;将苹果、梨、葡萄、草莓、柑橘和圣女果等果蔬放入菌悬液中,浸泡30秒后取出,风干;放入保鲜盒中,密封后,放入常温贮藏。
该核果梅奇酵母BY33的制备方法为,将菌株从-80℃冰箱取出,用YPDA培养基活化,挑取单菌落至YPD液体培养基里,于26℃、200r/min条件下培养24h,4000rpm离心5min收集菌体,用无菌水洗3遍。所述YPDA培养基是:酵母浸粉10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,琼脂18g,去离子水1000ml,自然pH,121℃灭菌30min。
所述的核果梅奇酵母菌株可同时控制苹果青霉病、灰霉病和黑斑病,梨果实青霉病和灰霉病,葡萄灰霉病、曲霉病、镰孢霉病和炭疽病,草莓灰霉病和曲霉病,柑橘青霉病,以及圣女果灰霉病和曲霉病。
本发明所提供的菌株是从自然发酵的酿酒葡萄醪液中筛选分离到的对苹果、梨、葡萄、草莓、柑橘、圣女果采后病害具有显著防治效果的核果梅奇酵母BY33,可广泛用于果蔬采后病害的防治,减少采后病害造成的损失,具有很好的应用前景。
本发明的优点:(1)本发明所提供的核果梅奇酵母BY33为本实验室从葡萄酒发酵醪液中筛选得到,其对人体无害,安全性高。(2)本发明所使用的核果梅奇酵母BY33抑菌谱广,可以同时控制苹果青霉病、灰霉病和黑斑病,梨果实青霉病和灰霉病,葡萄灰霉病、曲霉病、镰孢霉病和炭疽病,草莓灰霉病和曲霉病,柑橘青霉病,以及圣女果灰霉病和曲霉病。(3)本发明所提供的核果梅奇酵母BY33在YPD培养基中生长良好,易于培养,性状稳定,且单独使用一定浓度该菌悬液就能有效防治多种果蔬采后病害,使用成本低,市场前景广阔。(4)本发明所提供的核果梅奇酵母BY33可以代替化学杀菌剂防治水果采后病害,避免使用化学杀菌剂对人的危害,且不污染环境,社会和生态效益显著。
通过以下实施实例更加详细的说明本发明。以下实施实例仅是说明性的,本发明并不受这些实施实例的限制。
附图说明
图1为本发明核果梅奇酵母Metschnikowia fructicola BY33的26S rDNA D1/D2区核酸序列进化关系图。
图2为核果梅奇酵母BY33对苹果青霉病、灰霉病和黑斑病的抑制效果。注:Control:无菌水,即对照组;M.f:1×108细胞/mL的核果梅奇酵母BY33菌悬液。不同字母代表差异显著(P<0.05)。
图3为核果梅奇酵母BY33对核果梅奇酵母对梨果实青霉病和灰霉病的抑制效果。注:Control:无菌水,即对照组;M.f:1×108细胞/mL的核果梅奇酵母BY33菌悬液。不同字母代表差异显著(P<0.05)。
图4为核果梅奇酵母BY33对葡萄灰霉病、曲霉病、镰孢霉病和炭疽病抑制效果。注:Control:无菌水,即对照组;M.f:1×108细胞/mL的核果梅奇酵母BY33菌悬液。不同字母代表差异显著(P<0.05)。
图5为核果梅奇酵母BY33对草莓灰霉病和曲霉病的抑制效果。注:Control:无菌水,即对照组;M.f:1×108细胞/mL的核果梅奇酵母菌悬液。不同字母代表差异显著(P<0.05)。
图6为核果梅奇酵母BY33对柑橘青霉病的抑制效果。注:Control:无菌水,即对照组;M.f:1×108细胞/mL的核果梅奇酵母菌悬液。不同字母代表差异显著(P<0.05)。
图7为核果梅奇酵母BY33对圣女果灰霉病和曲霉病的抑制效果。注:Control:无菌水,即对照组;M.f:1×108细胞/mL的核果梅奇酵母菌悬液。不同字母代表差异显著(P<0.05)。
具体实施方式
实施例1:核果梅奇酵母Metschnikowia fructicola菌株BY33的生物学特性
1.形态学特征
(1)YPDA培养基(酵母浸粉1%,蛋白胨2%,葡萄糖2%,琼脂1.8%,121℃灭菌20min)上26℃培养48h,菌落呈圆形、白色,菌落边缘光滑圆润。细胞形态呈椭球型。
(2)在YPDA液体培养基中培养24h后,不形成醭,菌液浑浊,有沉淀,镜检酵母细胞呈椭圆形,芽殖。
2.分子生物学鉴定
以通用正向引物NL-1(5’-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3’)和反向引物NL-4(5’-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3’)进行PCR扩增酵母26S rDNA D1/D2区核酸序列,将PCR产物的测序结果输入网站www.NCBI.nlm.nih.gov进行BLAST,从GenBank数据库中下载同源序列,通过MEGA6软件构建进化树如图1,确定筛选到的菌株为核果梅奇酵母(Metschnikowiafructicola)。
本发明的核果梅奇酵母BY33已保藏于中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国科学院微生物研究所的中国微生物菌株保藏委员会普通微生物中心,保藏时间为2017年11月15日,保藏编号为CGMCC No.14908,建议的分类命名为核果梅奇酵母Metschnikowiafructicola。
实施实例2核果梅奇酵母BY33对苹果青霉病、灰霉病和黑斑病的抑制效果
1.实验方案
将核果梅奇酵母BY33从-80℃冰箱取出,用YPDA培养基(酵母浸粉10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,琼脂18g,去离子水1000ml,自然pH,121℃灭菌30min)活化,挑取单菌落至YPD液体培养基里,于26℃、200r/min条件下培养24h,4000rpm离心5min,弃上清,收集的菌体用无菌水反复清洗3次,血球计数板计数配成配制成浓度为1×108细胞/mL的核果梅奇酵母BY33菌悬液。
将青霉病菌(Penicillium expansum)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)或链格孢菌(Alternaria tenuissima)在PDA培养基平板上激活,26℃下培养7~14d,刮取适量孢子,用无菌水配制成浓度为5×104细胞/mL的青霉病菌、灰霉病菌或链格孢菌孢子悬浮液。
将健康无损的苹果果实用2%次氯酸钠消毒5min,用去离子水冲洗,晾干,用无菌打孔器在果实赤道处打5个孔,表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液:(1)1×108细胞/mL的核果梅奇酵母BY33菌悬液;(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL青霉病菌、灰霉病菌或链格孢子悬浮液。晾干后,将果实放入塑料箱,保持相对湿度95%,置于室温(25℃)4天后记录果实发病率,以此评价核果梅奇酵母BY33的抑菌效果。发病率的计算公式为:发病率(%)=发病的果实/果实总数×100%。
2.试验结果
按照上述步骤试验,统计苹果的发病率结果如下:
(1)核果梅奇酵母BY33对苹果青霉病的抑制效果
如图2所示,对照组苹果青霉病发病率为100%,经过核果梅奇酵母BY33处理的苹果青霉病发病率为0,因此核果梅奇酵母BY33能够有效控制苹果青霉病病害。
(2)核果梅奇酵母BY33对苹果灰霉病的抑制效果
如图2所示,对照组苹果灰霉病的发病率为100%,经过核果梅奇酵母BY33处理的苹果灰霉病发病率为0,因此毕赤酵BY33能够有效控制苹果灰霉病病害。
(3)核果梅奇酵母BY33对苹果黑斑病的抑制效果
如图2所示,对照组苹果黑斑病发病率为100%,经过核果梅奇酵母BY33处理的苹果黑斑病发病率为66%,因此核果梅奇酵母BY33能够有效控制苹果黑斑病病害。
实施实例3核果梅奇酵母BY33对梨果实青霉病和灰霉病的抑制效果
1.实验方案
将核果梅奇酵母BY33从-80℃冰箱取出,用YPDA培养基(酵母浸粉10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,琼脂18g,去离子水1000ml,自然pH,121℃灭菌30min)活化,挑取单菌落至YPD液体培养基里,于26℃、200r/min条件下培养24h,4000rpm离心5min,弃上清,收集的菌体用无菌水反复清洗3次,血球计数板计数配成配制成浓度为1×108细胞/mL的核果梅奇酵母BY33菌悬液。
将青霉病菌(Penicillium expansum)或灰霉病菌(Botrytis cinerea)在PDA培养基平板上激活,26℃下培养7~14d,刮取适量孢子,用无菌水配制成浓度为5×104细胞/mL的青霉病菌或灰霉病菌孢子悬浮液。将健康无损的梨果实用2%次氯酸钠消毒5min,用去离子水冲洗,晾干,用无菌打孔器在果实赤道处打5个孔,表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液:(1)1×108细胞/mL的核果梅奇酵母BY33菌悬液;(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL青霉病菌或灰霉病菌孢子悬浮液。晾干后,将果实放入塑料箱,保持相对湿度95%,置于室温(25℃)4天后记录果实发病率,以此评价核果梅奇酵母BY33的抑菌效果。发病率的计算公式为:发病率(%)=发病的果实/果实总数×100%。
2.试验结果
按照上述步骤试验,统计梨果实的发病率结果如下:
(1)核果梅奇酵母BY33对梨果实青霉病的抑制效果
如图3所示,对照组梨果实青霉病发病率为100%,经过核果梅奇酵母BY33处理的果实青霉病发病率为6%,因此核果梅奇酵母BY33能够有效控制梨果实青霉病病害。
(2)核果梅奇酵母BY33对梨果实灰霉病的抑制效果
如图3所示,对照组梨果实灰霉病的发病率为100%,经过核果梅奇酵母BY33处理的梨果实灰霉病发病率为13%,因此核果梅奇酵母BY33能够有效控制梨果实灰霉病病害。
实施实例4核果梅奇酵母BY33对葡萄采后病害的抑制效果
1.实验方案
将核果梅奇酵母BY33从-80℃冰箱取出,用YPDA培养基(酵母浸粉10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,琼脂18g,去离子水1000ml,自然pH,121℃灭菌30min)活化,挑取单菌落至YPD液体培养基里,于26℃、200r/min条件下培养24h,4000rpm离心5min,弃上清,收集的菌体用无菌水反复清洗3次,血球计数板计数配成配制成浓度为1×108细胞/mL的核果梅奇酵母BY33菌悬液。
将灰霉菌(Botrytis porri)、刺孢曲霉(Aspergillus aculeatus)、芬芳镰孢菌(Fusarium redolens)或果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)在PDA培养基平板上激活,26℃下培养7~14d,刮取适量孢子,用无菌水配制成浓度为5×104细胞/mL的灰霉菌、刺孢曲霉、芬芳镰孢菌或果生炭疽菌孢子悬浮液。将健康无损的梨果实用2%次氯酸钠消毒5min,用去离子水冲洗,晾干,用无菌打孔器在果实赤道处打1个孔,表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液:(1)1×108细胞/mL的核果梅奇酵母BY33菌悬液;(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL灰霉菌、刺孢曲霉、芬芳镰孢菌或果生炭疽菌孢子悬浮液。晾干后,将果实放入塑料箱,保持相对湿度95%,置于室温(25℃)4天后记录果实发病率,以此评价核果梅奇酵母BY33的抑菌效果。发病率的计算公式为:发病率(%)=发病的果实/果实总数×100%。
2.试验结果
按照上述步骤试验,统计葡萄果实的发病率结果如下:
(1)核果梅奇酵母BY33对葡萄果实灰霉病的抑制效果
如图4所示,对照组葡萄果实灰霉病发病率为100%,经过核果梅奇酵母BY33处理的葡萄果实灰霉病发病率为0,因此核果梅奇酵母BY33能够有效控制葡萄果实灰霉病病害。
(2)核果梅奇酵母BY33对葡萄果实曲霉病的抑制效果
如图4所示,对照组葡萄果实曲霉病的发病率为100%,经过核果梅奇酵母BY33处理的葡萄果实曲霉病发病率为0,因此核果梅奇酵母BY33能够有效控制由造成的葡萄果实曲霉病病害。
(3)核果梅奇酵母BY33对葡萄果实镰孢霉病的抑制效果
如图4所示,对照组葡萄镰孢霉病的发病率为100%,经过核果梅奇酵母BY33处理的葡萄镰孢霉病发病率为47%,因此核果梅奇酵母BY33能够有效控制葡萄镰孢霉病病害。
(4)核果梅奇酵母BY33对葡萄炭疽病的抑制效果
如图4所示,对照组葡萄炭疽病的发病率为100%,经过核果梅奇酵母BY33处理的葡萄炭疽病发病率为73%,因此核果梅奇酵母BY33能够有效控制葡萄炭疽病病害。
实施实例5核果梅奇酵母BY33对草莓果实灰霉病和曲霉病的抑制效果
1.实验方案
将核果梅奇酵母BY33从-80℃冰箱取出,用YPDA培养基(酵母浸粉10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,琼脂18g,去离子水1000ml,自然pH,121℃灭菌30min)活化,挑取单菌落至YPD液体培养基里,于26℃、200r/min条件下培养24h,4000rpm离心5min,弃上清,收集的菌体用无菌水反复清洗3次,血球计数板计数配成配制成浓度为1×108细胞/mL的核果梅奇酵母BY33菌悬液。
将灰霉病菌(Botrytis porri)或刺孢曲霉(Aspergillus aculeatus)在PDA培养基平板上激活,26℃下培养7~14d,刮取适量孢子,用无菌水配制成浓度为5×104细胞/mL的灰霉病菌或刺孢曲霉孢子悬浮液。将健康无损的草莓果实用2%次氯酸钠消毒5min,用去离子水冲洗,晾干,用无菌打孔器在果实赤道处打1个孔,表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液:(1)1×108细胞/mL的核果梅奇酵母BY33菌悬液;(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL灰霉病菌或刺孢曲霉孢子悬浮液。晾干后,将果实放入塑料箱,保持相对湿度95%,置于室温(25℃)4天后记录果实发病率,以此评价核果梅奇酵母BY33的抑菌效果。发病率的计算公式为:发病率(%)=发病的果实/果实总数×100%。
2.试验结果
按照上述步骤试验,统计草莓果实的发病率结果如下:
(1)核果梅奇酵母BY33对草莓果实灰霉病的抑制效果
如图5所示,对照组草莓果实灰霉病发病率为80%,经过核果梅奇酵母BY33处理的草莓果实灰霉病发病率为62%,因此核果梅奇酵母能够有效控制草莓果实灰霉病病害。
(2)核果梅奇酵母BY33对草莓果实曲霉病的抑制效果
如图5所示,对照组草莓果实曲霉病的发病率为60%,经过核果梅奇酵母BY33处理的草莓果实曲霉病发病率为27%,因此核果梅奇酵母能够有效控制草莓果实曲霉病病害。
实施实例6核果梅奇酵母BY33对柑橘青霉病的抑制效果
1.实验方案
将核果梅奇酵母BY33从-80℃冰箱取出,用YPDA培养基(酵母浸粉10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,琼脂18g,去离子水1000ml,自然pH,121℃灭菌30min)活化,挑取单菌落至YPD液体培养基里,于26℃、200r/min条件下培养24h,4000rpm离心5min,弃上清,收集的菌体用无菌水反复清洗3次,血球计数板计数配成配制成浓度为1×108细胞/mL的核果梅奇酵母BY33菌悬液。
将青霉病菌(Penicillium italicum)在PDA培养基平板上激活,26℃下培养7~14d,刮取适量孢子,用无菌水配制成浓度为5×104细胞/mL的青霉病菌(孢子悬浮液。
将健康无损的草莓果实用2%次氯酸钠消毒5min,用去离子水冲洗,晾干,用无菌打孔器在果实赤道处打1个孔,表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液:(1)1×108细胞/mL的核果梅奇酵母BY33菌悬液;(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL青霉病菌孢子悬浮液。晾干后,将果实放入塑料箱,保持相对湿度95%,置于室温(25℃)4天后记录果实发病率,以此评价核果梅奇酵母BY33的抑菌效果。发病率的计算公式为:发病率(%)=发病的果实/果实总数×100%。
2.试验结果
按照上述步骤试验,统计柑橘果实的发病率结果如图6所示,对照组柑橘果实青霉病发病率为73%,经过核果梅奇酵母BY33处理的柑橘果实青霉病发病率为25%,因此核果梅奇酵母BY33能够有效控制柑橘果实青霉病病害。
实施实例7核果梅奇酵母BY33对圣女果灰霉病和曲霉病的抑制效果
1.实验方案
将核果梅奇酵母BY33从-80℃冰箱取出,用YPDA培养基(酵母浸粉10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,琼脂18g,去离子水1000ml,自然pH,121℃灭菌30min)活化,挑取单菌落至YPD液体培养基里,于26℃、200r/min条件下培养24h,4000rpm离心5min,弃上清,收集的菌体用无菌水反复清洗3次,血球计数板计数配成配制成浓度为1×108细胞/mL的核果梅奇酵母BY33菌悬液。
将灰霉病菌(Botrytis porri)或刺孢曲霉(Aspergillus aculeatus)在PDA培养基平板上激活,26℃下培养7~14d,刮取适量孢子,用无菌水配制成浓度为5×104细胞/mL的灰霉病菌或刺孢曲霉孢子悬浮液。将健康无损的圣女果用2%次氯酸钠消毒5min,用去离子水冲洗,晾干,用无菌打孔器在果实赤道处打1个孔,表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液:(1)1×108细胞/mL的核果梅奇酵母BY33菌悬液;(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL灰霉病菌(Botrytis porri)或刺孢曲霉(Aspergillusaculeatus)孢子悬浮液。晾干后,将果实放入塑料箱,保持相对湿度95%,置于室温(25℃)4天后记录果实发病率,以此评价核果梅奇酵母菌株BY33的抑菌效果。发病率的计算公式为:发病率(%)=发病的果实/果实总数×100%。
2.试验结果
按照上述步骤试验,统计圣女果发病率结果如下:
(1)核果梅奇酵母BY33对圣女果灰霉病的抑制效果
如图7所示,对照组圣女果灰霉病发病率为100%,经过核果梅奇酵母BY33处理的圣女果灰霉病发病率为60%,因此核果梅奇酵母BY33能够有效控制由灰霉病菌造成的圣女果灰霉病病害。
(2)核果梅奇酵母BY33对圣女果曲霉病的抑制效果
如图7中所示,对照组圣女果曲霉病的发病率为90%,经过核果梅奇酵母BY33处理的圣女果曲霉病发病率为20%,因此核果梅奇酵母BY33能够有效控制圣女果曲霉病病害。
Claims (6)
1.一种用于果蔬采后病害生物防治的核果梅奇酵母Metschnikowia fructicola菌株BY33,在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏菌株编号为CGMCCNo.14908。
2.权利要求1所述的核果梅奇酵母BY33进行果蔬采后病害防治和贮藏保鲜的方法,其特征在于按照以下步骤进行:将毕赤酵母活化,用YPD液体培养基发酵培养,离心得到菌体,将菌体用无菌水配制成浓度为1×108细胞/mL的菌悬液;将果蔬放入菌悬液中,浸泡30秒后取出,风干;放入保鲜盒中,密封后,放入常温贮藏。
3.根据权利要求2所述的果蔬采后病害防治和贮藏保鲜的方法,其特征在于,其中所述果蔬为苹果、梨、葡萄、草莓、柑橘和圣女果。
4.根据权利要求1所述的核果梅奇酵母BY33的制备方法,其特征在于,将菌株从-80℃冰箱取出,用YPDA培养基活化,挑取单菌落至YPD液体培养基里,于26℃、200r/min条件下培养24h,4000rpm离心5min收集菌体,用无菌水洗3遍。
5.根据权利要求4所述的核果梅奇酵母BY33的制备方法,其特征在于所述YPDA培养基是:酵母浸粉10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,琼脂18g,去离子水1000ml,自然pH,121℃灭菌30min。
6.一种如权利要求1所述的核果梅奇酵母BY33的用途,其特征在于:它用于同时控制苹果青霉病、灰霉病和黑斑病,梨果实青霉病和灰霉病,葡萄灰霉病、曲霉病、镰孢霉病和炭疽病,草莓灰霉病和曲霉病,柑橘青霉病,以及圣女果灰霉病和曲霉病。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711373887.9A CN107904180A (zh) | 2017-12-15 | 2017-12-15 | 一株用于果蔬采后病害防治的核果梅奇酵母及其制备与使用方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711373887.9A CN107904180A (zh) | 2017-12-15 | 2017-12-15 | 一株用于果蔬采后病害防治的核果梅奇酵母及其制备与使用方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107904180A true CN107904180A (zh) | 2018-04-13 |
Family
ID=61870230
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201711373887.9A Pending CN107904180A (zh) | 2017-12-15 | 2017-12-15 | 一株用于果蔬采后病害防治的核果梅奇酵母及其制备与使用方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107904180A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110527639A (zh) * | 2019-09-12 | 2019-12-03 | 天津农学院 | 一种美极梅奇酵母及其应用 |
CN112586559A (zh) * | 2020-12-15 | 2021-04-02 | 西南大学 | 精氨酸在制备提高桔梅奇酵母普切明酸生成能力及其生防效力的保鲜剂中的应用 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002072777A2 (en) * | 2001-03-14 | 2002-09-19 | State Of Israel-Ministry Of Agriculture Agricultural Research Organization | A novel antagonistic yeast useful in controlling spoilage of agricultural produce, methods of use thereof and compositions containing same |
CN101946805A (zh) * | 2010-09-28 | 2011-01-19 | 薛梦林 | 一种生物防治菌剂 |
CN102480965A (zh) * | 2009-06-24 | 2012-05-30 | 拜耳作物科学公司 | 杀真菌活性酵母和杀真菌剂的组合物 |
CN103642705A (zh) * | 2013-12-02 | 2014-03-19 | 北京市农林科学院 | 一株抑制真菌的梅奇酵母菌及其应用 |
CN105385611A (zh) * | 2015-08-20 | 2016-03-09 | 北京市农林科学院 | 一种梅奇酵母菌及其应用 |
-
2017
- 2017-12-15 CN CN201711373887.9A patent/CN107904180A/zh active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002072777A2 (en) * | 2001-03-14 | 2002-09-19 | State Of Israel-Ministry Of Agriculture Agricultural Research Organization | A novel antagonistic yeast useful in controlling spoilage of agricultural produce, methods of use thereof and compositions containing same |
CN102480965A (zh) * | 2009-06-24 | 2012-05-30 | 拜耳作物科学公司 | 杀真菌活性酵母和杀真菌剂的组合物 |
CN101946805A (zh) * | 2010-09-28 | 2011-01-19 | 薛梦林 | 一种生物防治菌剂 |
CN103642705A (zh) * | 2013-12-02 | 2014-03-19 | 北京市农林科学院 | 一株抑制真菌的梅奇酵母菌及其应用 |
CN105385611A (zh) * | 2015-08-20 | 2016-03-09 | 北京市农林科学院 | 一种梅奇酵母菌及其应用 |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110527639A (zh) * | 2019-09-12 | 2019-12-03 | 天津农学院 | 一种美极梅奇酵母及其应用 |
CN110527639B (zh) * | 2019-09-12 | 2021-05-04 | 天津农学院 | 一种美极梅奇酵母及其应用 |
CN112586559A (zh) * | 2020-12-15 | 2021-04-02 | 西南大学 | 精氨酸在制备提高桔梅奇酵母普切明酸生成能力及其生防效力的保鲜剂中的应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN107868759B (zh) | 一株葡萄酒有孢汉生酵母在水果采后病害防治的应用 | |
CN105505834B (zh) | 一株防治梨轮纹病和软腐病的暹罗芽孢杆菌及其应用 | |
CN107881121B (zh) | 一株控制水果采后病害的酿酒酵母by23及其制备与使用方法 | |
CN100496260C (zh) | 一种水果蔬菜的生物保鲜剂及其制备方法 | |
CN107904181B (zh) | 一株用于果蔬采后病害防治的酿酒酵母by21及其制备与使用方法 | |
CN107881122B (zh) | 一株用于水果采后病害防治的葡萄酒酿酒酵母及其应用 | |
CN108611287B (zh) | 一株控制桃果采后病害的膜醭毕赤酵母 | |
CN105176831B (zh) | 一种草酸青霉菌及其应用 | |
CN102827790A (zh) | 一种枯草芽孢杆菌菌株a97、菌剂及制备方法和应用 | |
CN108118004B (zh) | 一株喜仙人掌毕赤酵母在水果采后病害防治中的应用 | |
CN104988082A (zh) | 一株汉逊德巴利酵母菌株及其应用 | |
CN104946548A (zh) | 一株酿酒酵母菌株及其应用 | |
CN105861340B (zh) | 一株控制柑橘和葡萄采后病害的盔形毕赤酵母 | |
CN107904180A (zh) | 一株用于果蔬采后病害防治的核果梅奇酵母及其制备与使用方法 | |
CN110527639B (zh) | 一种美极梅奇酵母及其应用 | |
CN107828697A (zh) | 一种多粘类芽孢杆菌af01及其应用 | |
CN107937290A (zh) | 一株用于果蔬采后病害防治的拜耳接合酵母及其制备与使用方法 | |
CN107988088A (zh) | 一株拮抗酵母菌Pichia deserticola及其制备与使用方法 | |
CN107937289A (zh) | 一株拮抗酵母菌Pichia galeiformis及其制备与使用方法 | |
CN107937287B (zh) | 一株假丝酵母在水果采后病害防治的应用 | |
CN109169881A (zh) | 抗坏血酸诱导卡利比克毕赤酵母防治水果采后病害的方法 | |
CN110184194A (zh) | 一株生防菌Simplicillium lamellicola JC-1及其应用 | |
CN107937288A (zh) | 一株拮抗酵母菌Candida railenensis及其制备与使用方法 | |
Safitri et al. | Mode of action of the endophytic yeast Rhodotorula mucilaginosa in controlling basal stem rot caused by Phytopthora capsici | |
CN112481141A (zh) | 一株汉逊德巴利酵母菌株及其在制备水果保鲜剂中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180413 |