CN114600950A - 一种葡萄有孢汉逊酵母保鲜剂的制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种葡萄有孢汉逊酵母保鲜剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将葡萄有孢汉逊酵母加入液体培养基中，培养2‑3天，然后依次离心、除去上清液、洗涤，再加入水配制得到酵母菌悬浮液；S2：将魔芋葡甘聚糖加入甘油，然后依次搅拌、加热溶胀、超声，制得魔芋葡甘聚糖溶液；S3：将所述酵母菌悬浮液和所述魔芋葡甘聚糖混合均匀，制得葡萄有孢汉酵母保鲜剂。由本发明方法制得的葡萄有孢汉逊酵母保鲜剂可以有效的粘附在水果表皮，易于喷洒施用，可以有效的抑制链格孢霉、灰霉、枝孢霉、青霉、拟盘多毛孢霉等致病菌。

Description

一种葡萄有孢汉逊酵母保鲜剂的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及微生物防治领域，具体是一种葡萄有孢汉逊酵母保鲜剂的制备方法及其应用。
背景技术
植物真菌病害给农业生产带来了巨大的损失，而果实采后真菌病害是一类重要的病害，造成了果实的大量减产，严重影响了果实的食用价值和市场价值，导致了果农的经济收入降低。在发达国家，果实采后病害引起的损失量占果实总量的15％以上，在发展中国家由于缺少必要的防控技术和设备，果实采后病害引起的损失量占总量的30％甚至更高上。果实采后病害的发生已给现代农业生产尤其是高端果蔬产品生产与加工造成了严重影响。而目前，国内大多的研究多集中于果实的田间及园间防治，而对于果实采后病害的防治工作做的相对较少。
水果果实一般皮薄、多汁、不耐贮，成熟于高温多雨的夏季，采后的水果易失水发皱，出现长霉等问题。病菌及其病害：主要有链格孢霉(Alternaria)、灰霉(Botrytiscinerea)、枝孢霉(Cladosporium)、青霉(Penicillium)、拟盘多毛孢霉(Pseudochaetium)等。研究表明从蓝莓果实上分离得到一株葡萄有孢汉逊酵母(H.uvarum)，体外抑菌实验结果表明，该酵母能够显著抑制青霉菌、灰霉菌、毛壳菌、黑曲霉、互隔交链孢霉和镰刀菌等蓝莓病原菌的菌丝生长，抑制率分别为89.34％、87.81％、77.12％.76.45％、71.08％和59.88％，可用于蓝莓真菌病害的生物防治。可将葡萄有孢汉逊酵母(H.uvarum)菌悬液直接喷洒在蓝莓表面对蓝莓真菌病害进行防治。
然而葡萄有孢汉逊酵母菌悬浮液在果实表面的粘附力差，不利于喷洒施用，直接将悬浮液喷洒在蓝莓表面不能保证酵母菌有效的残留，因此我们亟需一种粘附力好的葡萄有孢汉逊酵母保鲜剂。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种葡萄有孢汉逊酵母保鲜剂，以至少达到
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种葡萄有孢汉逊酵母保鲜剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将葡萄有孢汉逊酵母加入液体培养基中，培养2-3天，然后依次离心、除去上清液、洗涤，再加入水配制得到酵母菌悬浮液；
S2：将魔芋葡甘聚糖加入甘油，然后依次搅拌、加热溶胀、超声，制得魔芋葡甘聚糖溶液；
S3：将所述酵母菌悬浮液和所述魔芋葡甘聚糖混合均匀，制得葡萄有孢汉酵母保鲜剂。
进一步的，步骤S1中，所述葡萄有孢汉逊酵母的保藏编号为：CICC32337。
进一步的，步骤S1中，所述酵母菌悬浮液的浓度为1×107-1×108CFU/mL。
进一步的，步骤S1中，用于所述洗涤的溶剂为PBS缓冲液或生理盐水。
进一步的，步骤S2中，所述魔芋葡甘聚糖与甘油的重量比为9-11：1。
进一步的，步骤S3中，所述的酵母菌悬浮液和所述魔芋葡甘聚糖中葡萄有孢汉逊酵母菌：魔芋葡甘聚糖：水的比例为1×107CFU：0.005g：1mL。。
进一步的，所述葡萄有孢汉酵母保鲜剂用于抑制蓝莓病原菌的生长。
所述蓝莓病原菌包括链格孢霉、灰霉、枝孢霉、青霉、拟盘多毛孢霉。
本发明的有益效果是：
1、本发明的葡萄有孢汉逊酵母保鲜剂可以有效的粘附在水果表皮，易于喷洒施用，可以有效的抑制链格孢霉、灰霉、枝孢霉、青霉、拟盘多毛孢霉等致病菌。
2、本发明的葡萄有孢汉逊酵母保鲜剂制备方法简单，原料绿色无污染，生产成本低，有广阔的应用前景。
具体实施方式
下面进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。
实施例1
制备一种葡萄有孢汉逊酵母菌保鲜剂，包括以下步骤：
1.将活化后的葡萄有孢汉逊酵母菌在PDB培养基中进行培养2天，制备酵母菌悬液。
2.将所述酵母菌菌悬液进行离心，倒掉上清液，用PBS缓冲液清洗2-3遍；
3.用无菌水将其配置成1×108CFU/mL浓度的菌悬液，备用。
4.另取0.2wt％的魔芋葡甘聚糖加入1wt％的甘油，搅拌，加热溶胀，超声，备用。
5.将菌悬液与魔芋葡甘聚糖溶液充分混合。
将导致蓝莓腐烂变质的致病菌进行分离鉴定，提取到链格孢霉、灰霉、枝孢霉、青霉、拟盘多毛孢霉等致病菌，将其配置成1×106spore/mL的病原菌孢子悬浮液，备用；通过滤纸片法，先取100μl病原菌孢子悬浮液涂布在PDA平板上，再将浸泡在葡萄有孢汉逊酵母保鲜制剂中的滤纸片置于平板中心，培养两天观察抑菌效果，结果如表1所示(注：滤纸片直径15mm)。
表1
Figure BDA0003489813020000021
Figure BDA0003489813020000031
实施例2
取3份病害程度相同的蓝莓，将蓝莓浸入0.5％次氯酸钠溶液中30s，流水冲洗，风干；4小时后加入等量的葡萄有孢汉逊酵母保鲜制剂。空气干燥后，将样品置于在塑料盒(40×20×8cm)，用聚乙烯袋包装以保持高湿度，和保持在黑暗中于25℃，以接种青霉后直接喷洒葡萄有孢汉逊酵母悬浮液为对照组，以不做任何处理的蓝莓为空白组。于25℃、相对湿度90-95％的条件下储存5天后测定腐烂率、失重比、硬度、pH和TSS值。
表2
腐烂率 失重 硬度 pH TSS
处理(酵母+KGM) 8.20％ 16.71％ 5.12 3.04 10.86
对照(KGM) 12.45％ 19.43％ 4.67 3.58 11.32
空白 14.26％ 23.14％ 3.89 3.97 12.50
实施例3
制备三种葡萄有孢汉逊酵母菌保鲜剂，制备方法同实施例1，区别在于，其中两种将魔芋葡聚糖替换为相同浓度的黄原胶和瓜尔豆胶。对其粘度、液滴大小进行测定，并取3份病害程度相同的蓝莓，通过喷洒的方式施用葡萄有孢汉逊酵母菌，25℃，相对湿度90％-95％，下保藏20天,测定蓝莓的腐烂率，实验结果见表3。
粘度 液滴大小 腐烂率
魔芋葡甘聚糖 36.4±0.14 2.77±0.75 12.45％
黄原胶 27.3±0.56 6.21±0.90 16.32％
瓜尔豆胶 14.4±0.24 6.68±0.18 20.58％
可见，魔芋葡甘聚糖相比于黄原胶、瓜尔豆胶等具有增稠作用的天然材料具有更好的防腐效果。一方面是因为由魔芋葡甘聚糖制成的保鲜剂粘度最大，；另一方面是魔芋葡甘聚糖可以在蓝莓表面形成一层具有气封效果的膜，使得保鲜剂的抑菌效果进一步提高。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。

Claims (7)

1.一种葡萄有孢汉逊酵母保鲜剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将葡萄有孢汉逊酵母加入液体培养基中，培养2-3天，然后依次离心、除去上清液、洗涤，再加入水配制得到酵母菌悬浮液；
S2：将魔芋葡甘聚糖加入甘油，然后依次搅拌、加热溶胀、超声，制得魔芋葡甘聚糖溶液；
S3：将所述酵母菌悬浮液和所述魔芋葡甘聚糖混合均匀，制得葡萄有孢汉酵母保鲜剂。
2.根据权利要求1所述的保鲜剂，其特征在于：步骤S1中，所述葡萄有孢汉逊酵母的保藏编号为：CICC32337。
3.根据权利要求1所述的保鲜剂，其特征在于：步骤S1中，所述酵母菌悬浮液的浓度为1×107-1×108CFU/mL。
4.根据权利要求1所述的保鲜剂，其特征在于：步骤S1中，用于所述洗涤的溶剂为PBS缓冲液或生理盐水。
5.根据权利要求1所述的保鲜剂，其特征在于：步骤S2中，所述魔芋葡甘聚糖与甘油的重量比为9-11：1。
6.根据权利要求1所述的保鲜剂，其特征在于：步骤S3中，所述的酵母菌悬浮液和所述魔芋葡甘聚糖中葡萄有孢汉逊酵母菌：魔芋葡甘聚糖：水的比例为1×107CFU：0.005g：1mL。
7.由权利要求1-6任一所述的保鲜剂的应用，其特征在于：所述葡萄有孢汉酵母保鲜剂用于抑制蓝莓病原菌的生长；
所述蓝莓病原菌包括链格孢霉、灰霉、枝孢霉、青霉、拟盘多毛孢霉。
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