CN107668075A - 一种可防治根肿病的包衣生物菌剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种可防治根肿病的包衣生物菌剂，由以下重量份原料组成：绿色木霉菌粉0.5‑4份，土豆4‑8份，葡萄糖0.5‑1.5份，木屑10‑20份，阿拉伯明胶4‑8份，氯化钙2‑5份，茉莉酸1‑3份。本发明使用木屑对绿色木霉菌孢子进行吸附固定，之后使用载有茉莉酸的阿拉伯明胶对绿色木霉菌孢子进行包衣处理，增加颗粒微生物菌剂的抗压强度，产品不易破碎，有利于产品的使用，可以实现高效防治作物根肿病的效果，防治时间大为延长，同时可有效促进作物种子的萌发、幼苗生长，能提高幼苗的抗冷性。

Description

一种可防治根肿病的包衣生物菌剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物农药技术领域，具体涉及一种可防治根肿病的包衣生物菌剂及其制备方法。
背景技术
根肿病是由芸苔根肿菌(Plasuwdiophora brassicae)引起的一种真菌病害，芸苔根肿菌休眠孢子在无感病寄主植物的土壤中存活可达20年之久，土壤一旦污染，将不再适宜十字花科植物的栽培。
根肿病主要危害植物根部，形成形状及大小不一的肿瘤，后期肿根易被杂菌侵入造成腐烂。植物受害后，根部首先肿大,进而出现龟裂、腐烂并导致全株萎焉死亡。根肿病会导致十字花科作物产量和品质严重下降，且土壤将长期带菌而导致部分蔬菜和油菜基地被迫改种其他作物。在我国，根肿病常年危害面积约320～400万hm 2，占十字花科作物种植面积的1/3以上，大流行年份发生与危害面积可达900万hm 2，平均产量损失达20％～30％，严重田块直接产量损失达60％以上。每年导致油菜经济损失约10亿元、蔬菜经济损失约200亿，极大地制约了油料和蔬菜产业的持续稳定发展及农民增收。但对于根肿病的防治，尚缺乏高效、低毒、低残留的化学药剂；在农业防治方面，研究不够全面系统，存在不少弊端。
绿色木霉是木霉菌的一种，在自然界分布广泛，常腐生于木材、种子及植物残体上。绿色木霉能产生多种具有生物活性的酶系，所产纤维素酶活性最高的菌株之一，所产生的纤维素酶对作物有降解作用，效果非常好，绿色木霉又是一种资源丰富的拮抗微生物，在植物病理生物防治中具有重要的作用。具有保护和治疗双重功效，可有效防治土传性病害。
宋琼在其硕士论文《土壤根肿病菌FQ-PCR定量检测、根肿病发生与土壤特性的关系及综合防控技术研究》一文中，运用了施石灰、绿色木霉·哈茨木霉WP和芽孢杆菌三种措施田间防治红菜苔根肿病,结果显示绿色木霉·哈茨木霉WP可作为生物种衣剂的防线，提早抵御病原菌的入侵，可用于田间防治根肿病,紫甘2号、夏宝甘蓝、盛杂优和湘杂优4个抗病品种对根肿病表现免疫,可在病区种植,减少根肿病对作物的危害。
茉莉酸(Salicylic acid，SA)是广泛存在于高等植物体内的内源生长调节物质。茉莉酸(3-氧-2-2′-顺-戊烯基-环戊烷-1-乙酸，jasmonic acid，简称JA)及其甲酯(简称JA_Me)是一类脂肪酸的衍生物。研究结果表明，JA对植物有许多相似生理作用，调节植物生长、萌发、提高抗性等生理作用。
现有技术未有采用绿色木酶菌和茉莉酸组合用于防止根肿病农药，且具有防治时间大为延长，同时可有效促进作物种子的萌发、幼苗生长，能提高幼苗的抗冷性
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种可防治根肿病的包衣生物菌剂及其制备方法，可以对作物根肿病进行防治。
本发明技术方案如下：
一种可防治根肿病的包衣生物菌剂，其特征在于，由以下重量份原料组成：绿色木霉菌粉0.5-4份，土豆4-8份，葡萄糖0.5-1.5份，木屑10-20份，阿拉伯明胶4-8份，氯化钙2-5份，茉莉酸1-3份。
进一步限定：绿色木霉菌粉1-2份，土豆6-8份，葡萄糖0.5-1.5份，木屑14-18份，阿拉伯明胶5-7份，氯化钙3-5份，茉莉酸1-2份。
优选的，绿色木霉菌粉1.5份，土豆6份，葡萄糖1份，木屑16份，阿拉伯明胶8份，氯化钙4份，茉莉酸2份。
所述包衣生物菌剂的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)将土豆去皮，加入蒸馏水置于密闭容器内，加热排除空气后维持100-120℃、1-3小时，并用四层纱布过滤煮沸的土豆，冷却后再加入葡萄糖、补足水量，混匀，转入100℃蒸汽灭菌0.5-1小时，制得液体培养基；
(2)绿色木霉菌菌液的制备：
将绿色木霉菌菌种活化，无菌接入上述液体培养基，转速160-200r/min、25-40℃摇床培养10-15日，至菌液粘稠、颜色改变并可见菌丝大量生长，得绿色木霉菌菌液；
(3)载体绿色木霉菌孢子粉的制备：
将上述绿色木霉菌菌液与木屑按照配方比例混合搅拌2-4小时，在3500-4500rmp/min离心5-8分钟，并在30-40℃温度下进行烘干，得载体绿色木霉菌孢子粉；
(4)载药阿拉伯明胶包衣生物菌剂的制备：
①、将氯化钙、茉莉酸置于酒精中，超声分散使其溶解，配制得2-4％氯化钙-茉莉酸酒精溶液，备用；
②、称取阿拉伯明胶加入蒸馏水中，在50-70℃条件下于三口烧瓶中搅拌45-65分钟，直至全部溶解，配制成浓度为3-8％的阿拉伯明胶溶液，待温度降至30-40℃时，加入步骤(3)载体绿色木霉菌孢子粉，超声30-50分钟，待温度降至常温时，将该混合溶液滴加至上述氯化钙-茉莉酸酒精溶液中，迅速交联形成颗粒，过滤，干燥，得到载药阿拉伯明胶包衣生物菌剂。
其中，所述绿色木霉菌菌液中绿色木霉菌的浓度为≥110cfu/ml，优选为110-120cfu/ml。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)本发明对绿色木霉菌进行发酵培养，使用木屑作为载体，对发酵菌液中绿色木霉菌孢子进行吸附固定，可提高后期包衣效果，使用具有较好粘结性的阿拉伯明胶对绿色木霉菌孢子进行包衣处理，增加颗粒微生物菌剂的抗压强度，在产品运输和施用过程中不易破碎，有利于产品的使用，可以实现高效防治作物根肿病的效果，同时防治时间大为延长。
(2)本发明中在阿拉伯明胶微球中包裹茉莉酸，在使用时可有效促进作物种子的萌发、幼苗生长，显著提高种子的发芽势，另外在低温胁迫下茉莉酸的添加有助于作物幼苗抵御一定的低温冷害，能提高幼苗的抗冷性，有利于种子在低温胁迫下较快速出苗和保持出苗整齐一致。
具体实施方式
实施例1
一种可防治根肿病的包衣生物菌剂，由下列重量份(公斤)的原料制成：绿色木霉菌粉0.5、土豆4、葡萄糖0.5、木屑10、阿拉伯明胶4、氯化钙2、茉莉酸1。
实施例2
一种可防治根肿病的包衣生物菌剂，由下列重量份(公斤)的原料制成：绿色木霉菌粉4、土豆8、葡萄糖1.5、木屑20、阿拉伯明胶8、氯化钙5、茉莉酸3。
实施例3
一种可防治根肿病的包衣生物菌剂，由下列重量份(公斤)的原料制成：绿色木霉菌粉1.5、土豆6、葡萄糖1、木屑16、阿拉伯明胶8、氯化钙4、茉莉酸2。
实施例4
一种可防治根肿病的包衣生物菌剂，由下列重量份(公斤)的原料制成：绿色木霉菌粉1、土豆6、葡萄糖0.5、木屑14、阿拉伯明胶5、氯化钙3、茉莉酸1。
实施例5
一种可防治根肿病的包衣生物菌剂，由下列重量份(公斤)的原料制成：绿色木霉菌粉2、土豆4、葡萄糖8、木屑18、阿拉伯明胶7、氯化钙5、茉莉酸2。
以上五个实施例的包衣生物菌剂的制备步骤如下：
(1)将土豆去皮，加入蒸馏水置于密闭容器内，加热排除空气后维持100-120℃、1-3小时，并用四层纱布过滤煮沸的土豆，冷却后再加入葡萄糖、补足水量，混匀，转入100℃蒸汽灭菌0.5-1小时，制得液体培养基；
(2)绿色木霉菌菌液的制备：
将绿色木霉菌菌种活化，无菌接入上述液体培养基，转速160-200r/min、25-40℃摇床培养10-15日，至菌液粘稠、颜色改变并可见菌丝大量生长，得绿色木霉菌菌液；
(3)载体绿色木霉菌孢子粉的制备：
将上述绿色木霉菌菌液与木屑按照配方比例混合搅拌2-4小时，在3500-4500rmp/min离心5-8分钟，并在30-40℃温度下进行烘干，得载体绿色木霉菌孢子粉；
(4)载药阿拉伯明胶包衣生物菌剂的制备：
①、将氯化钙、茉莉酸置于酒精中，超声分散使其溶解，配制得2-4％氯化钙-茉莉酸酒精溶液，备用；
②、称取阿拉伯明胶加入蒸馏水中，在50-70℃条件下于三口烧瓶中搅拌45-65分钟，直至全部溶解，配制成浓度为3-8％的阿拉伯明胶溶液，待温度降至30-40℃时，加入步骤(3)载体绿色木霉菌孢子粉，超声30-50分钟，待温度降至常温时，将该混合溶液滴加至上述氯化钙-茉莉酸酒精溶液中，迅速交联形成颗粒，过滤，干燥，得到载药阿拉伯明胶包衣生物菌剂。
其中，所述绿色木霉菌菌液中绿色木霉菌的浓度为≥110cfu/ml，优选为110-120cfu/ml。
以上所述的实施仅仅是对本发明的实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (5)

1.一种可防治根肿病的包衣生物菌剂，其特征在于，由以下重量比原料组成：绿色木霉菌粉0.5-4份，土豆4-8份，葡萄糖0.5-1.5份，木屑10-20份，阿拉伯明胶4-8份，氯化钙2-5份，茉莉酸1-3份。
2.根据权利要求1所述的包衣生物菌剂，其特征在于，由以下重量份原料组成：绿色木霉菌粉1-2份，土豆6-8份，葡萄糖0.5-1.5份，木屑14-18份，阿拉伯明胶5-7份，氯化钙3-5份，茉莉酸1-2份。
3.根据权利要求1所述的包衣生物菌剂，其特征在于，由以下重量份原料组成：绿色木霉菌粉1.5份，土豆6份，葡萄糖1份，木屑16份，阿拉伯明胶8份，氯化钙4份，茉莉酸2份。
4.根据1～3任意一项权利要求书所述的包衣生物菌剂的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)将土豆去皮，加入蒸馏水置于密闭容器内，加热排除空气后维持100-120℃、1-3小时，并用四层纱布过滤煮沸的土豆，冷却后再加入葡萄糖、补足水量，混匀，转入100℃蒸汽灭菌0.5-1小时，制得液体培养基；
(2)绿色木霉菌菌液的制备：
将绿色木霉菌菌种活化，无菌接入上述液体培养基，转速160-200r/min、25-40℃摇床培养10-15日，至菌液粘稠、颜色改变并可见菌丝大量生长，得绿色木霉菌菌液；
(3)载体绿色木霉菌孢子粉的制备：
将上述绿色木霉菌菌液与木屑按照配方比例混合搅拌2-4小时，在3500-4500rmp/min离心5-8分钟，并在30-40℃温度下进行烘干，得载体绿色木霉菌孢子粉；
(4)载药阿拉伯明胶包衣生物菌剂的制备：
①、将氯化钙、茉莉酸置于酒精中，超声分散使其溶解，配制得2-4％氯化钙-茉莉酸酒精溶液，备用；
②、称取阿拉伯明胶加入蒸馏水中，在50-70℃条件下于三口烧瓶中搅拌45-65分钟，直至全部溶解，配制成浓度为3-8％的阿拉伯明胶溶液，待温度降至30-40℃时，加入步骤(3)载体绿色木霉菌孢子粉，超声30-50分钟，待温度降至常温时，将该混合溶液滴加至上述氯化钙-茉莉酸酒精溶液中，迅速交联形成颗粒，过滤，干燥，得到载药阿拉伯明胶包衣生物菌剂。
5.根据权利要求书4所述的包衣生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述绿色木霉菌菌液中绿色木霉菌的浓度为≥110cfu/ml，优选为110-120cfu/ml。
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