CN111996144B - 一种桃的防腐保鲜微生物制剂及其制备方法与应用 - Google Patents
一种桃的防腐保鲜微生物制剂及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111996144B CN111996144B CN202010882231.5A CN202010882231A CN111996144B CN 111996144 B CN111996144 B CN 111996144B CN 202010882231 A CN202010882231 A CN 202010882231A CN 111996144 B CN111996144 B CN 111996144B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus
- peach
- treatment
- antagonistic
- microbial preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 title claims abstract description 92
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 230000007797 corrosion Effects 0.000 title description 2
- 238000005260 corrosion Methods 0.000 title description 2
- 240000006413 Prunus persica var. persica Species 0.000 title 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims abstract description 99
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 claims abstract description 85
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims abstract description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 claims description 17
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 17
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 11
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 abstract description 30
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 abstract description 11
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 abstract description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 abstract description 8
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 abstract description 7
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 abstract description 6
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000036541 health Effects 0.000 abstract description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003260 anti-sepsis Effects 0.000 abstract 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 95
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 93
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 82
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 54
- 241000235546 Rhizopus stolonifer Species 0.000 description 40
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 22
- 102000012286 Chitinases Human genes 0.000 description 19
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 description 19
- 108700023158 Phenylalanine ammonia-lyases Proteins 0.000 description 18
- 108090000128 Lipoxygenases Proteins 0.000 description 17
- 102000003820 Lipoxygenases Human genes 0.000 description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 16
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 14
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 14
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 12
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 7
- 240000005809 Prunus persica Species 0.000 description 7
- 235000010298 natamycin Nutrition 0.000 description 7
- 239000004311 natamycin Substances 0.000 description 7
- NCXMLFZGDNKEPB-FFPOYIOWSA-N natamycin Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C[C@@H](C)OC(=O)/C=C/[C@H]2O[C@@H]2C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 NCXMLFZGDNKEPB-FFPOYIOWSA-N 0.000 description 7
- 229960003255 natamycin Drugs 0.000 description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 6
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 244000007021 Prunus avium Species 0.000 description 4
- 235000010401 Prunus avium Nutrition 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 3
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 3
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 2
- 235000004789 Rosa xanthina Nutrition 0.000 description 2
- 241000220222 Rosaceae Species 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 description 2
- 238000005536 corrosion prevention Methods 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- OSVXSBDYLRYLIG-UHFFFAOYSA-N dioxidochlorine(.) Chemical compound O=Cl=O OSVXSBDYLRYLIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N guaiacol Chemical compound COC1=CC=CC=C1O LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- -1 oxygen free radical Chemical class 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- ODLMAHJVESYWTB-UHFFFAOYSA-N propylbenzene Chemical compound CCCC1=CC=CC=C1 ODLMAHJVESYWTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 2
- PXMNMQRDXWABCY-UHFFFAOYSA-N 1-(4-chlorophenyl)-4,4-dimethyl-3-(1H-1,2,4-triazol-1-ylmethyl)pentan-3-ol Chemical compound C1=NC=NN1CC(O)(C(C)(C)C)CCC1=CC=C(Cl)C=C1 PXMNMQRDXWABCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HZJKXKUJVSEEFU-UHFFFAOYSA-N 2-(4-chlorophenyl)-2-(1H-1,2,4-triazol-1-ylmethyl)hexanenitrile Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1C(CCCC)(C#N)CN1C=NC=N1 HZJKXKUJVSEEFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFNOUKDBUJZYDE-UHFFFAOYSA-N 2-(4-chlorophenyl)-3-cyclopropyl-1-(1H-1,2,4-triazol-1-yl)butan-2-ol Chemical compound C1=NC=NN1CC(O)(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C(C)C1CC1 UFNOUKDBUJZYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RQDJADAKIFFEKQ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-chlorophenyl)-2-phenyl-2-(1,2,4-triazol-1-ylmethyl)butanenitrile Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1CCC(C=1C=CC=CC=1)(C#N)CN1N=CN=C1 RQDJADAKIFFEKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000153158 Ammi visnaga Species 0.000 description 1
- 235000010585 Ammi visnaga Nutrition 0.000 description 1
- 235000011446 Amygdalus persica Nutrition 0.000 description 1
- 239000005730 Azoxystrobin Substances 0.000 description 1
- 239000004155 Chlorine dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000005757 Cyproconazole Substances 0.000 description 1
- 239000005775 Fenbuconazole Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 1
- 239000005867 Iprodione Substances 0.000 description 1
- 239000005811 Myclobutanil Substances 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 235000011432 Prunus Nutrition 0.000 description 1
- 241000220299 Prunus Species 0.000 description 1
- 240000002381 Prunus davidiana Species 0.000 description 1
- 235000015533 Prunus davidiana Nutrition 0.000 description 1
- 241000589615 Pseudomonas syringae Species 0.000 description 1
- 241000221696 Sclerotinia sclerotiorum Species 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005839 Tebuconazole Substances 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 208000000260 Warts Diseases 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- WFDXOXNFNRHQEC-GHRIWEEISA-N azoxystrobin Chemical compound CO\C=C(\C(=O)OC)C1=CC=CC=C1OC1=CC(OC=2C(=CC=CC=2)C#N)=NC=N1 WFDXOXNFNRHQEC-GHRIWEEISA-N 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N benomyl Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)NCCCC)C(NC(=O)OC)=NC2=C1 RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N benzoxaprofen Natural products N=1C2=CC(C(C(O)=O)C)=CC=C2OC=1C1=CC=C(Cl)C=C1 MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000019398 chlorine dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000007621 cluster analysis Methods 0.000 description 1
- 244000096108 cunha Species 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000004665 defense response Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 235000012055 fruits and vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 229960001867 guaiacol Drugs 0.000 description 1
- 238000007542 hardness measurement Methods 0.000 description 1
- ONUFESLQCSAYKA-UHFFFAOYSA-N iprodione Chemical compound O=C1N(C(=O)NC(C)C)CC(=O)N1C1=CC(Cl)=CC(Cl)=C1 ONUFESLQCSAYKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 235000019645 odor Nutrition 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 238000005502 peroxidation Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 201000010153 skin papilloma Diseases 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 238000000352 supercritical drying Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G13/00—Protecting plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G7/00—Botany in general
- A01G7/06—Treatment of growing trees or plants, e.g. for preventing decay of wood, for tingeing flowers or wood, for prolonging the life of plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
- A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
- A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
- A23B7/153—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10 in the form of liquids or solids
- A23B7/154—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
- A23B7/155—Microorganisms; Enzymes; Antibiotics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/90—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in food processing or handling, e.g. food conservation
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Forests & Forestry (AREA)
- Ecology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
本发明涉及一种桃的防腐保鲜微生物制剂及其制备方法与应用。本发明中的微生物制剂包含贝莱斯芽孢杆菌TA‑3‑BV，所述贝莱斯芽孢杆菌TA‑3‑BV保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号：CGMCC NO.20398。将贝莱斯芽孢杆菌TA‑3‑BV应用在桃果实体表时，除了对病原菌具有抑制作用外，还能诱导桃果实的抗病性和抗氧化性，触发桃果实的基础免疫。将贝莱斯芽孢杆菌TA‑3‑BV喷施于桃果实表面，可以显著降低桃果实的腐烂率，并且贝莱斯芽孢杆菌TA‑3‑BV对桃果实的品质不产生负面影响，为桃采后防腐保鲜提供了一种低成本、安全健康、环境友好型的新方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种桃的防腐保鲜微生物制剂及其制备方法与应用，属于植物病害防治技术领域。
背景技术
桃(Prunus persica L.)属蔷薇科(Rosaceae)桃亚属(Amygdalus)果树，原产于中国，中国也是品种最多的国家，占全世界2/3以上。据统计，2015年底，我国桃栽植面积已达66.7万hm2，其中，山东是种植面积最大的省份之一，种植面积逐年上升。桃果实通常在采后直接销售，无需长期冷藏。经济上的重要损失是采后对水果的处理不当，导致真菌病原体侵染引起腐烂。
匍枝根霉引起的软腐病是桃果实最重要的采后病害之一。该病主要发生于成熟的果实，在适宜的温度和湿度下，出现症状后1天果实表面附着大量菌丝，2-3天后被感染的水果就会变软和水烂，释放出带有发酵或酸性的气味；病原体会产生带有黑色孢子和孢子囊的长菌丝茎，引起桃果实腐烂变质，严重限制桃果实农业经济发展。Northover等用嘧菌酯、环酰菌胺、腈苯唑、腈菌唑、苯菌灵和硫处理桃果实，能减少匍枝根霉引起的腐烂(Northover J,Zhou T.Control of rhizopus rot of peaches with postharvesttreatments of tebuconazole,fludioxonil,and Pseudomonas syringae[J].CanadianJournal of Plant Pathology,2002,24(2):144-153.)。Carvalho等研究发现异菌脲可控制褐腐病菌和匍枝根霉的发生；氯硝胺对根霉防治有较好的效果；高难度的丁香精油和二氧化氯处理可降低软腐病的发病率，降低其发病严重程度(Carvalho V L,Cunha R L,Chalfun N N J,et al.Alternativas de controle pós-colheita da
-parda eda 
-mole em frutos de pessegueiro[J].Revista Brasileira deFruticultura,2009,31(1):78-83.)。
但是过量使用杀菌剂不仅会产生病原菌菌株抗药性，而且也会对人体健康产生不利影响，生物防治作为一种无毒、绿色、安全、无抗药性的保鲜方法，已经成为国内外研究热点。但是目前对于桃的生物防治菌株及菌剂的研究报道较少。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种桃的防腐保鲜微生物制剂及其制备方法与应用。本发明中的微生物制剂可以有效抑制病原菌匍枝根霉的生长，同时有效抑制桃果实软腐病的发病，诱导桃果实抗病性和抗氧化性相关的酶活力，触发植物的基础免疫，促进桃的防腐保鲜。
本发明的技术方案如下：
一种桃的防腐保鲜微生物制剂，所述微生物制剂包含贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)TA-3-BV。
根据本发明优选的，所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)TA-3-BV于2020年7月17日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：CGMCC NO.20398。(以下简称贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Q-84或者Q-84)
根据本发明优选的，所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Q-84的16SrDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
根据本发明优选的，所述微生物制剂中贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Q-84的有效活菌数在1.0×108CFU/mL以上。
根据本发明优选的，所述微生物制剂为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Q-84菌悬液，所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Q-84菌悬液的有效活菌数在1.0×108CFU/mL以上。
上述桃的防腐保鲜微生物制剂的制备方法，包括如下步骤：
将贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Q-84接种到LB固体培养基中，37℃活化培养24h，活化后接种于NB液体培养基中，以37℃，150～200r/min条件下震荡培养96h，离心弃上清，加无菌水调整细胞浓度为1.0×108CFU/mL以上，得桃的防腐保鲜微生物制剂。
上述微生物制剂在桃防腐保鲜中的应用。
根据本发明优选的，所述应用是将上述微生物制剂喷施于采摘后的桃果实表面，或者喷施于生长中的桃果实表面。
有益效果：
本发明提供了一种桃的防腐保鲜微生物制剂，所述微生物制剂中含有拮抗菌贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Q-84。将贝莱斯芽孢杆菌Q-84应用在桃果实体表时，除了对病原菌具有抑制作用外，还能诱导桃果实的抗病性和抗氧化性，提高抗病性酶(PAL、CHI)的活性，提高其抗病性，提高抗氧化酶POD的活性，同时降低LOX的活性，提高其抗氧化性，延缓果实采后衰老，提高果实抗逆性，触发桃果实的基础免疫。将拮抗菌Q-84喷施于桃果实表面，可以显著降低桃果实的腐烂率，并且拮抗菌Q-84对桃果实的品质不产生负面影响，为桃采后防腐保鲜提供了一种低成本、安全健康、环境友好型的新方法。
附图说明
图1为拮抗菌Q-84的菌落形态照片；
图2为拮抗菌Q-84发酵液对病原菌菌丝微观形态的影响，图中，A：对照组菌丝(150倍)；B：对照组孢子囊(550倍)；C：对照组孢子囊壁(1000K倍)；D：处理组菌丝(150K倍)；E：处理组孢子囊(120K倍)；F：处理组孢子囊壁(1500K倍)；
图3为拮抗菌Q-84的16S rDNA基因序列构建的系统发育树；
图4为拮抗菌Q-84对采后桃果实软腐病抑制效果；图中，左图为腐败率柱状图，右图为菌斑直径柱状图；同一时间不同小写字母表示不同处理组间差异显著(p<0.05)；
图5为拮抗菌Q-84对采后桃果实的病情指数曲线图；
图6为拮抗菌Q-84处理对桃果实过氧化物酶(POD)活性的影响；图中同一处理时间不同小写字母表示不同处理组间差异显著(p<0.05)；
图7为拮抗菌Q-84处理对桃果实脂氧合酶(LOX)活性的影响；图中同一处理时间不同小写字母表示不同处理组间差异显著(p<0.05)；
图8为拮抗菌Q-84处理对桃果实苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的影响；图中同一处理时间不同小写字母表示不同处理组间差异显著(p<0.05)；
图9为拮抗菌Q-84处理对桃果实几丁质酶(CHI)活性的影响；图中同一处理时间不同小写字母表示不同处理组间差异显著(p<0.05)；
图10为拮抗菌Q-84菌悬液喷施处理对桃果实软腐病的影响；图中同一处理时间不同小写字母表示不同处理组间差异显著(p<0.05)；
图11为拮抗菌Q-84处理对桃果实硬度的影响；
图12为拮抗菌Q-84处理对桃果实色泽的影响；
图13为拮抗菌Q-84处理对桃果实可溶性固形物的影响；
图14为拮抗菌Q-84处理对桃果实可滴定酸的影响。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明的技术方案作进一步说明，但是本发明的保护范围并不仅限于此。实施例中涉及的试剂及药品，若无特殊说明，均为普通市售产品；实施例中的涉及的实验操作，若无特殊说明，均为本领域常规操作。
实施例中涉及的微生物：
贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)TA-3-BV，于2020年7月17日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：CGMCC NO.20398。(以下简称贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Q-84或者Q-84)
匍枝根霉是引起桃果实采后软腐病的重要病原菌，可从微生物中心或者菌种销售公司购得现有菌种。
实施例中涉及的培养基：
PDA培养基：马铃薯去皮200g，葡糖糖20g，琼脂20g，补足水1000mL，115℃灭菌30min。不添加琼脂即为PDB培养基。
LB液体培养基：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠10g，1000mL去离子水煮沸，调pH7.0，121℃灭菌20min。添加20g琼脂即为LB固体培养基。
NB液体培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，1000mL去离子煮沸，调pH 7.2，121℃灭菌20min。添加20g琼脂即为NA固体培养基。
实施例中涉及的甜樱桃是从山东省果树研究所天平湖基地(泰安)采集的“美早”甜樱桃。
实施例中涉及的桃采摘于山东淄博沂源，挑选出无病虫害、机械伤，大小相近，成熟度一致的果实。
实施例1、拮抗菌的分离、筛选与鉴定
1.1拮抗菌的分离筛选
取30颗健康“美早”甜樱桃整果研磨，称取1g果肉加入9mL无菌生理盐水中，混匀配成原液，静置20min。采用梯度稀释法，将稀释成10-3、10-4、10-5的浓度稀释液，分别取100μL涂布于LB固体培养基中，每个梯度设3个平行，37℃恒温培养24h。将生长出的菌落接种至另一LB固体培养基上进行三区划线，37℃恒温培养，直至长出单菌落。将单菌落挑取至LB斜面，待菌落长出后置于4℃保藏。
采用滤纸片法，在培养病原菌匍枝根霉7-10d的PDA平板上取6mm菌饼，将其接种于另一PDA平板中央，将6mm无菌滤纸片置于距病原菌2.5cm处，吸取6μL上述分离纯化后的细菌发酵液打在滤纸片上，每个PDA平板3个平行，以仅接种病原菌匍枝根霉的PDA平板作为对照，重复3次，28℃恒温培养5-7d，测量菌落直径，计算抑制率。
从健康甜樱桃果实上获得形态有差异的细菌17株。从17株菌株中筛选得到3株对匍枝根霉具有一定生防作用的细菌。如表1所示，Q-84菌株对软腐病病原菌匍枝根霉的抑制效果最为明显，病原菌菌落直径最小，直径为1.98±0.17cm，抑制率达69.82±1.43％。在P<0.05的情况下，处理组Q-84与Q-2、Q-8呈显著性差异，处理组Q-2和Q-8差异不显著。通过观察，Q-84生防菌菌落呈淡黄色、形状不规则，不透明(图1)。
表1拮抗菌对软腐病原菌匍枝根霉生长的抑制作用
注：同列不同小写字母表示不同处理组间差异显著(p<0.05)。
在上述实验中，用无菌牙签挑取Q-84抑菌圈周围的菌丝，为处理组；正常生长培养的病原菌菌丝为对照组。取处理组和对照组菌丝，用2.5％戊二醛溶液4℃固定24h，依次放入不同浓度(45％、55％、65％、75％、85％、95％、100％)的乙醇各脱水20min，采用临界点干燥法进行样品干燥，喷金处理。在扫描电镜(JCM-7000)下观察并进行拍照。结果如图2所示，从扫描电镜图可以看出，对照组和处理组菌丝微观结构上有较大的差异。由图A和D可知，对照组(A)菌丝较长，孢子囊柄直立，不分枝；处理组(D)孢子囊柄断裂；由图B和E可知，对照组(B)孢子囊健康饱满，呈近球形，有疣状突起；处理组(E)孢子囊呈畸形并伴有表面凹陷、褶皱、粗糙、不平整现象；由图C和F可知，对照组(C)表面有黑色点状物质，表面不光滑；处理组(F)有裂痕产生。说明Q-84能够破坏病原菌的菌丝结构，从而杀死病原菌。
1.2拮抗菌的鉴定
将分离纯化的拮抗菌Q-84置于LB固体培养基，37℃恒温培养24h，进行菌落形态观察。拮抗菌的生理生化特征鉴定具体方法参照《常见细菌系统鉴定手册》和《伯杰细菌鉴定手册》，发现其与贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)生理生化指标相同。
采用细菌基因组提取试剂盒法提取Q-84菌株DNA，利用细菌通用引物27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492r(5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)进行细菌的16S rDNA的PCR扩增，用1％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，并对其进行测序，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。序列在GenBank上进行序列Blast比对，选择具有代表性的菌株序列，利用MEGA7.0软件进行聚类分析构建系统发育树。
结果显示，菌株Q-84与贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)聚类(图3)，同源性为89％，结合形态鉴定和生理生化鉴定结果，最终鉴定Q-84菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。
上述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Q-84，于2020年7月17日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：CGMCC NO.20398。
实施例2、拮抗菌接种对桃果实软腐病的发病影响
将贝莱斯芽孢杆菌Q-84接种于NB液体培养基在37℃、180r/min发酵培养96h，6000g离心10min，弃去上清液，加无菌水调整细胞浓度为108CFU/mL，摇匀，得贝莱斯芽孢杆菌Q-84菌悬液。
将匍枝根霉于PDA培养基上28℃活化48h，用灭菌接种环在无菌环境下将菌丝和孢子刮下，无菌水冲洗，四层灭好菌的纱布过滤菌丝，血球计数法计数，调整到104CFU/mL孢子悬浮液待用。
挑选采摘后成熟度一致，大小均匀，无机械损伤的桃果实，次氯酸钠消毒晾干后，在桃果实赤道部位刺3mm×3mm伤口，接种20μL 108CFU/mL贝莱斯芽孢杆菌Q-84菌悬液，4h后接种10μL 104CFU/mL匍枝根霉孢子悬浮液，以无菌水和纳他霉素作为对照。各处理组放置于95％相对湿度的塑料筐中，28℃下每12h观察发病情况，并测量病斑直径、病情指数，病情指数标准按照表2进行分级，并按照以下公式进行计算。每个处理20个果实，重复3次，整个实验重复2次。
表2病情指数分级标准
在接种病原菌12h、24h、36h、48h、60h时，果实发病率、病斑直径的结果如图4所示，病情指数如图5所示。结果表明，用拮抗菌Q-84处理后对采后桃的软腐病具有不错的防治效果。在第24h，病原菌处理组的已经开始发病，第48h，病原菌处理组已经全部腐烂，而拮抗菌Q-84处理组的第48h开始发病，在第60h，发病率仅为23.7％。从病斑直径看，拮抗菌Q-84处理组的病斑直径显著低于无菌水对照组和纳他霉素处理组。从病情指数看，48h时病原菌处理组病情指数严重达到76.79％，拮抗菌Q-84处理组和纳他霉素处理组病情指数分别为5.3％、6.7％；在60h时，病原菌处理组病情指数严重达到90.91％，拮抗菌Q-84处理组和纳他霉素处理组为8.1％和14.6％。
实施例3、拮抗菌对桃果实抗性相关酶活的影响
挑选采摘后成熟度一致，大小均匀，无机械损伤的桃果实，次氯酸钠消毒晾干后，在桃果实赤道部位刺3mm×3mm伤口，接种20μL 108CFU/mL贝莱斯芽孢杆菌Q-84菌悬液，4h后接种10μL 104CFU/mL匍枝根霉孢子悬浮液，以无菌水和纳他霉素作为对照。各处理组放置于95％相对湿度的塑料筐中，常温下贮存，每组处理30个桃果实，于不同时间间隔(0、24、48、72、96h)取样测定相关酶活性，每次测定的样品取自10个桃果实(病斑与完好组织的交接部位)，整个实验重组两次。
过氧化物酶(POD)：采用愈创木酚法测定，参考文献Yang X,Jiang X.Antifungalactivity and mechanism of tea polyphenols against Rhizopus stolonifer[J].Biotechnology letters,2015,37(7):1463-1472。
脂氧合酶(LOX)：测定方法参照文献曹建康，姜微波，赵玉梅.果蔬釆后生理生化实验指导[M].北京:中国轻工业出版社，2007。
苯丙氨酸解氨酶(PAL)：测定方法参照文献Arrebola E,Sivakumar D,BacigalupoR,et al.Combined application of antagonist Bacillus amyloliquefaciens andessential oils for the control of peach postharvest diseases[J].Cropprotection,2010,29(4):369-377。
几丁质酶(CHI)：测定方法参照文献Gu R,Zhu S,Zhou J,et al.Inhibition onbrown rot disease and induction of defence response in harvested peach fruitby nitric oxide solution[J].European journal of plant pathology,2014,139(2):369-378。
3.1拮抗菌处理对采后桃果实过氧化物酶(POD)活性的影响
POD是植物酶促防御系统的关键酶之一，可以催化H2O2分解为水，消除氧自由基，解除H2O2对果实的毒害，从而延缓果实采后衰老，提高抗逆性。拮抗菌Q-84处理对采后桃果实过氧化物酶(POD)活性的影响如图6所示，从图6可以看出，贮藏期间各处理组POD酶活性均呈现先升高后降低的趋势，而对照组POD活性则变化平缓；在第36h时，只接种匍枝根霉组、接种拮抗菌Q-84+匍枝根霉组和只接种拮抗菌Q-84组的POD酶活性都达到峰值，分别为344U、412U、438U；而此时对照组酶活性仅为306U，其中只接种拮抗菌Q-84组的POD酶活性最高，是对照组的1.43倍；接种拮抗菌Q-84+匍枝根霉组的POD酶活性虽然低于只接种拮抗菌Q-84组，但显著高于只接种病原菌组。在第36h后，POD酶活性呈下降趋势，但只接种拮抗菌Q-84处理组POD酶活性始终保持较高水平。在第60h，只接种拮抗菌Q-84处理组POD酶活性仍能达到1.09倍，并且接种拮抗菌Q-84+匍枝根霉组POD酶活性高于只接种病原菌匍枝根霉组，差异显著。结果表明接种拮抗菌Q-84能显著提高POD活性，提高其抗病抗氧化能力。
3.2拮抗菌处理对采后桃果实脂氧合酶(LOX)活性的影响
LOX是催化细胞膜脂肪酸氧化反应的酶，其代谢途径的产物主要参与膜脂过氧化作用，在果实成熟过程中起重要作用，增加细胞膜透性，加剧细胞膜降解，同时生成的自由基、脂质氢过氧化物等具有毒害作用物质。拮抗菌Q-84处理对采后桃果实脂氧合酶(LOX)活性的影响如图7所示，由图7所知，接种病原菌组和接种拮抗菌Q-84+匍枝根霉组LOX酶活性均呈现先升高后降低的趋势，只接种拮抗菌Q-84组和对照组变化则较为平缓。只接种病原菌匍枝根霉处理组在第12到24小时酶活性迅速增加，于36h达到峰值，LOX酶活性为52.12U，是对照组的1.27倍；接种拮抗菌Q-84+匍枝根霉组酶活性为46.7U，与对照组差异显著。在36h后各处理组LOX酶活性有所降低，但病原菌匍枝根霉处理组一直保持较高活性；在第60h，病原菌匍枝根霉组LOX酶活性仍能达到对照组的1.21倍。并且从图中可以明显看出，拮抗菌Q-84+匍枝根霉组的酶活性显著低于病原菌匍枝根霉组，试验结果表明，接种拮抗菌Q-84处理可以抑制由匍枝根霉引起桃果实的LOX活性，减轻自由基对细胞膜的破坏程度，保持细胞完整性。
3.3拮抗菌处理对采后桃果实苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的影响
PAL是苯丙烷途径的关键酶，植物的抗病力越强，PAL活力越高。拮抗菌Q-84处理对采后桃果实苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的影响如图8所示，从图8可以看出，各处理组均呈现先升高后降低的趋势，对照组变化平缓。在第0-36h，各处理组PAL酶活性迅速上升，均于36h达到高峰，其中病原菌匍枝根霉处理组PAL酶活力为20.46U，是对照组的1.16倍；拮抗菌Q-84+匍枝根霉处理组PAL酶活力为25.14U，是对照组的1.43倍；拮抗菌Q-84处理组PAL酶活力为22.4U，是对照组的1.27倍。整个处理期间，病原菌匍枝根霉处理组酶活性都处于相对较低的水平，显著低于拮抗病Q-84+匍枝根霉处理组以及只接种拮抗菌Q-84处理组。接种Q-84和匍枝根霉以及只接种匍枝根霉均能诱导PAL活性，试验说明Q-84处理能够进一步提高桃果实中的PAL活性，增强果实对病原菌的抵抗能力，并且病原菌匍枝根霉可以促进拮抗菌Q-84的诱导作用。
2.3.4拮抗菌处理对采后桃果实几丁质酶(CHI)活性的影响
拮抗菌处理对采后桃果实几丁质酶(CHI)活性的影响如图9所示，由图9所知，对照组CHI酶活性在整个处理期间都处于较低水平，处理组CHI酶活性呈先上升后下降的趋势，且显著高于对照组(P<0.05)。在0小时到12小时，各处理组酶活性快速升高，都在第36h达到峰值，其中病原菌匍枝根霉处理组CHI酶活力为23.03U，是对照组的1.11倍；拮抗菌Q-84+匍枝根霉处理组CHI酶活力为28.50U，是对照组的1.37倍；拮抗菌Q-84处理组CHI酶活力为24.93U，是对照组的1.20倍。36h后，拮抗菌Q-84+匍枝根霉处理组和只接种拮抗菌Q-84处理组CHI酶活性有所降低，但都保持较高活性。在第60h，拮抗菌Q-84+匍枝根霉处理组和只接种拮抗菌Q-84处理组的CHI酶活力分别为22.84U、22.34U，分别是对照组的1.29倍、1.26倍。整个处理期间，CHI酶活力接种拮抗菌Q-84+匍枝根霉处理组>只接种拮抗菌Q-84处理组>只接种匍枝根霉处理组>CK组。试验表明拮抗菌Q-84处理能诱导桃果实CHI酶活性，提高果实抗病性。
综上可知，本发明中的贝莱斯芽孢杆菌Q-84应用在桃果实体表时，除了对病原菌具有抑制作用外，还能诱导桃果实的抗病性和抗氧化性，提高抗病性酶(PAL、CHI)的活性，提高其抗病性，提高抗氧化酶POD的活性，同时降低LOX的活性，提高其抗氧化性，延缓果实采后衰老，提高果实抗逆性。
实施例4、拮抗菌对采摘后桃果实自然腐败和贮藏品质的影响
挑选采摘后成熟度一致，大小均匀，无机械损伤的桃果实，次氯酸钠消毒晾干后，采用浓度为108CFU/mL贝莱斯芽孢杆菌Q-84菌悬液喷施于桃果实表面，对照组用无菌水、纳他霉素处理，4h后再喷洒104CFU/mL的匍枝根霉孢子悬浮液，各处理组放置于95％相对湿度的塑料筐中，28℃下每3d统计发病情况并测定果实品质指标。每个处理20个果实，重复3次，整个实验重复2次。
果实品质指标测定方法如下：
果实硬度测定：果实缝合线左右对称部位削去果皮，用果实硬度计测定果肉硬度。果实色泽测定：在果实缝合线两侧取对称的2个点，用色差计测定。可溶性固形物：将果肉匀浆取汁，然后用WYT手持糖度计测定，每一个样品重复测定3次，取平均值。可滴定酸：采用酸碱中和滴定法测定。
拮抗菌Q-84处理桃果实后的发病情况如图10所示，从图10可以看出，拮抗菌Q-84喷施处理较对照组可以显著抑制桃果实软腐病的发生，对照组在处理8d后，发病率为83.2％，而拮抗菌Q-84喷施处理组发病率仅24.3％，纳他霉素处理发病率为27.3％，没有显著差异。
拮抗菌Q-84处理对采后桃果实硬度的影响如图11所示，从图11可以看出，桃果实在贮藏8d后，对照组的硬度从10.3N下降到3.95N，而拮抗菌Q-84处理组的硬度从10.3N下降到4.26N，差异不明显，实验说明，拮抗菌Q-84处理对于桃果实硬度的影响较小。
拮抗菌Q-84处理对采后桃果实色泽的影响如图12所示，从图12可以看出，拮抗菌Q-84处理对于桃果实的色泽没有显著影响，处理组和对照组的L值均呈现先升后降的趋势。在第8d，对照组L值63.9，拮抗菌Q-84处理组L值64.86；a值均呈上升趋势，第8d，对照组a值14.29，拮抗菌Q-84处理组a值13.87，在不同处理时间差异都不显著。
拮抗菌Q-84处理对采后桃果实营养品质的影响如图13、14所示，由图可知，拮抗菌Q-84处理对桃果实可溶性固形物和可滴定酸不会产生不良影响，随着贮藏时间的延长，可溶性固形物和可滴定酸均呈现下降趋势，拮抗菌Q-84处理后，并没有显著抑制营养物质的下降。
综上，经过拮抗菌Q-84处理的桃果实，腐烂率明显降低；并且拮抗菌Q-84处理对桃果实的品质不产生负面影响，说明拮抗菌Q-84具有一定的安全性。
Claims (4)
1.一种微生物制剂在桃防腐保鲜中的应用，所述微生物制剂包含贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)TA-3-BV，所述微生物制剂中贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)TA-3-BV的有效活菌数在1.0×108CFU/mL以上；所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)TA-3-BV，于2020年7月17日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：CGMCC NO .20398。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述微生物制剂为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)TA-3-BV菌悬液，所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)TA-3-BV菌悬液的有效活菌数在1.0×108CFU/mL以上。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述微生物制剂按照如下方法制备得到：
将贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)TA-3-BV接种到LB固体培养基中，37℃活化培养24h，活化后接种于NB液体培养基中，以37℃，150～200r/min条件下震荡培养96h，离心弃上清，加无菌水调整细胞浓度为1.0×108CFU/mL以上，得桃的防腐保鲜微生物制剂。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用是将权利要求1所述的微生物制剂喷施于采摘后的桃果实表面，或者喷施于生长中的桃果实表面。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010882231.5A CN111996144B (zh) | 2020-08-28 | 2020-08-28 | 一种桃的防腐保鲜微生物制剂及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010882231.5A CN111996144B (zh) | 2020-08-28 | 2020-08-28 | 一种桃的防腐保鲜微生物制剂及其制备方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111996144A CN111996144A (zh) | 2020-11-27 |
| CN111996144B true CN111996144B (zh) | 2023-05-09 |
Family
ID=73471266
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010882231.5A Active CN111996144B (zh) | 2020-08-28 | 2020-08-28 | 一种桃的防腐保鲜微生物制剂及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111996144B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112410273A (zh) * | 2020-12-20 | 2021-02-26 | 扬州大学 | 一种地衣芽孢杆菌w10菌悬液在诱导油桃果实抗褐腐病中的应用 |
| CN114375989B (zh) * | 2021-12-29 | 2024-03-26 | 淮阴工学院 | 杰米拉类芽孢杆菌w51在草莓和桃采后病害防治中的应用及应用方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109022315A (zh) * | 2018-08-13 | 2018-12-18 | 东北农业大学 | 一株广谱抗病的生防芽胞杆菌及其应用 |
| CN110699275A (zh) * | 2019-09-03 | 2020-01-17 | 山西省农业科学院农产品贮藏保鲜研究所 | 一株拮抗果蔬采后灰霉病原菌的细菌菌株及其应用 |
-
2020
- 2020-08-28 CN CN202010882231.5A patent/CN111996144B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109022315A (zh) * | 2018-08-13 | 2018-12-18 | 东北农业大学 | 一株广谱抗病的生防芽胞杆菌及其应用 |
| CN110699275A (zh) * | 2019-09-03 | 2020-01-17 | 山西省农业科学院农产品贮藏保鲜研究所 | 一株拮抗果蔬采后灰霉病原菌的细菌菌株及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Bacillomycin D inhibits growth of Rhizopus stolonifer and induces defense-related mechanism in cherry tomato;Fuxing Lin et al.;《Applied Microbiology and Biotechnology》;20191231;第103卷;摘要部分 * |
| Bacterial iturins mediate biocontrol activity of Bacillus sp. against postharvest pear fruit‐rotting fungi;Liqin Wu et al.;《Journal of Phytopathology》;20191231;摘要部分 * |
| 不同芽孢杆菌处理对杏采后保鲜效果及诱导抗性的影响;郑香香等;《保鲜与加工》;20190310(第02期);第54-61页 * |
| 拮抗匍枝根霉的生防菌R1B的筛选鉴定和抑菌活性分析;武利勤等;《生物技术通报》;20181220(第04期);第35-41页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111996144A (zh) | 2020-11-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111925966B (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌及其培养方法与应用 | |
| CN107937284B (zh) | 一株季也蒙毕赤酵母及其应用 | |
| CN111961629B (zh) | 一种樱桃防腐保鲜微生物制剂及其制备方法与应用 | |
| Zhang et al. | Biological control of postharvest blue mold of oranges by Cryptococcus laurentii (Kufferath) Skinner | |
| CN109868225B (zh) | 棘孢木霉n-8-2及其应用 | |
| CN111996144B (zh) | 一种桃的防腐保鲜微生物制剂及其制备方法与应用 | |
| CN112143658B (zh) | 一种球孢白僵菌菌株mq-08及其应用和微生物制剂 | |
| CN106867929A (zh) | 一种胡萝卜软腐欧文氏菌、其分泌的植物免疫激活蛋白及应用 | |
| CN111286477B (zh) | 一株丁香假单胞菌及其在防治苹果轮纹病中的应用 | |
| CN106119134B (zh) | 黄色蠕形霉y28及其在防治果树腐烂病中的应用 | |
| CN109294961B (zh) | 一株防治荔枝霜疫病的生防菌株pnc25及其应用 | |
| CN108522647B (zh) | 植物乳杆菌mg-1在葡萄采后保鲜中的应用 | |
| CN103789222A (zh) | 防治苹果果实轮纹病的生防菌娄彻氏链霉菌a-1及其生防制剂 | |
| CN111280183A (zh) | 一种苹果炭疽叶枯病生防菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN110527639A (zh) | 一种美极梅奇酵母及其应用 | |
| CN111996127B (zh) | 一株携带病毒的核盘菌低毒菌株及其在生物防治中的应用 | |
| CN111363695B (zh) | 一种苹果树腐烂病生防菌剂及其制备方法和应用 | |
| Abdalla et al. | Inhibitory effect and morphological changes by organic acids to bacterial strains causing sugar beet soft root rot in vitro | |
| CN114517172A (zh) | 一株马胃葡萄球菌及其在防治果蔬灰霉病上的应用 | |
| CN107937285B (zh) | 防治苹果果实轮纹病的生防菌季也蒙毕赤酵母y-1及其生防制剂 | |
| CN103952338B (zh) | 成团泛菌菌株xm2及其菌悬液的制备方法和对梨黑斑病的防治方法 | |
| CN109380502B (zh) | 一种黑莓果实抑菌保鲜剂及黑莓果实保鲜方法 | |
| CN111394262B (zh) | 一种杂草生防菌及其应用 | |
| CN114015589B (zh) | 一种含有弯曲芽孢杆菌ta-12的生防微生物菌剂及其应用 | |
| CN116121123B (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在葡萄灰霉病和葡萄保鲜中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |