CN110433230A - 霞多丽种子产品的治疗用途 - Google Patents
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Abstract
本公开内容涉及霞多丽种子产品的健康益处。
Description
本申请是申请日为2013年4月29日的题为“霞多丽种子产品的治疗用途”的中国专利申请号201380026061.9的分案申请。
1.背景技术
1.1代谢病症
肥胖症众所周知是许多非常常见疾病如动脉粥样硬化症、高血压、2 型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM))、血脂异常症、冠心病和骨关节炎以及各种恶性肿瘤发展的危险因素。它通过减少运动性和降低生活质量也引起相当多的问题。肥胖症和由此还有这些疾病的发病率在整个工业化世界正在增加。
术语肥胖症是指脂肪组织过多。在此上下文中肥胖症最好认为是赋予健康风险的任何程度的过多脂肪。正常和肥胖个体之间的分界线可能仅仅是近似的,但是由肥胖症赋予的健康风险可能是肥胖增加的延续。
即使轻度肥胖症也会增加过早死亡和病症如糖尿病、血脂异常症、高血压、动脉粥样硬化症、胆囊疾病和某些类型的癌症的风险。在西方工业化世界,肥胖症的患病率在过去的几十年内显著增加。由于肥胖症的高发病率及其健康后果,其预防和治疗应该是一个应高度优先考虑的公共健康问题。
当能量摄入超过支出时,多余热量主要贮存在脂肪组织中,并且如果这种净正平衡延长,则会导致肥胖症,即,有两个体重平衡的组成部分,而对任何一边(摄取或支出)的异常都可能导致肥胖症。这个过程可以通过增加能量消耗(例如运动)或减少能量摄入(例如,节食)进行抵消。除了运动,饮食和食品限制,这对广大的受试者是不可行的,目前还没有有效且可接受的降低体重的令人信服的治疗。
增加能量消耗的一种可能方式是增加代谢率(metabolic rate)。因此,通过增加代谢率而起作用的药物可能适用于治疗肥胖症,而且也适用于治疗其它疾病如动脉粥样硬化症、高血压、糖尿病尤其是2型糖尿病(NIDDM (非胰岛素依赖型糖尿病))、血脂异常症、冠心病、胆囊疾病、骨关节炎和不同类型的癌症如子宫内膜癌、乳癌、前列腺癌和结肠癌和过早死亡的风险。
因而,识别出能够增加能量消耗的试剂将会是合乎需要的。优选这种试剂会是天然试剂而避免与药物化合物相关的副作用。
1.2.肠道生物群落
婴儿的肠道在出生前是无菌的。出生后,肠道内迅速被环境细菌建群定居直至建立密集的肠道生物群落。阴道分娩的婴儿从其母亲阴道和粪便菌群获得肠道菌群集群细菌。与此相反,通过剖腹产的婴儿出生期间不会暴露于其母亲的阴道和粪便菌群,而由此繁衍的肠道生物群落在组成上不同于阴道分娩婴儿的肠道生物菌群。这些肠道生物群落组成的差异在出生之后即要保持数月。同样地,在母乳喂养和那些配方制品(配方奶,formula)喂养的婴儿之间已经观察到肠道生物群落组成的差异。
成年人肠道有大约1013(10,000,000,000,000)种不同的定居者 (Backhead,F.,etal.(2004)PNAS Volume 101;no 44pp.15718-15723),而横贯许多人类文化背景建立了三种恒定的微生物分型(Arumugam,M.et al.(2011)Nature Vol.473pp.174-180)。肠道生物群落受到饮食中植物基多酚的影响,并且据信,所述微生物会将其转化为人类宿主可生物利用的 (Rastmanesh,R.(2011),Chemico-Biol.Interact.Vol.189pp.1-8;Moco, S.,F.J.Martin,and S.Rezzi.(2012)J.Proteome Res.Volume 11,pp. 4781-4790)。充当一种器官,所述肠道生物群落也负责转化和生产关键的维生素如胆钙化甾醇(维生素D25)、生物素(维生素H)、核黄素(维生素B2)、泛酸盐(pantothenate)(维生素B5)、抗坏血酸(维生素C)、硫胺素(维生素B1)和叶酸(维生素B9);特别是已经发现的三种微生物分型(拟杆菌(Bacteroides)、瘤胃球菌(Ruminococcus)和普雷沃氏菌 (Prevotella))中的两种(拟杆菌和普雷沃氏菌)。一些多酚类物质被 Norman Hollenberg博士,哈佛医学院医学教授以其自身的权利描述为维生素。然而,现代饮食,尤其是西方饮食,包含大量的加工食品,可能会促进肠道生物群落组成,其不能转化或生产足量或最佳量的这些关键的维生素。
因而,识别出能够“填补”传统加工食品消费引起的“营养空白”和调节人类肠道生物群落而实现健康改善的试剂是合乎需要的。优选这种试剂是天然试剂而避免与药物化合物相关的副作用。
2.发明内容
本发明公开内容涉及霞多丽(莎当妮、雪当利,Chardonnay)种子产品的健康益处。
在某些方面中,本发明公开内容涉及一种通过给予有效提高哺乳动物中脂质代谢的量的霞多丽种子产品以提高哺乳动物中脂质代谢的方法。
在某些方面中,本发明公开内容涉及一种通过给予有效提高哺乳动物中代谢率(metabolic rate)的量的霞多丽种子产品以提高哺乳动物代谢率的方法。
本发明公开内容还涉及一种通过向哺乳动物给予有效治疗或预防哺乳动物中肥胖症的量的霞多丽种子产品以治疗或预防哺乳动物中肥胖症、心血管病、血脂异常症、异常脂蛋白血症或糖代谢障碍症的方法。
本发明公开内容进一步涉及一种通过向哺乳动物给予有效治疗或预防所述哺乳动物中心血管病的量的霞多丽种子产品以治疗或预防哺乳动物中心血管病的方法。在某些方面中,心血管病是动脉硬化症、动脉粥样硬化症、中风、缺血、内皮功能障碍症、外周血管疾病、冠心病、心肌梗塞、脑梗塞或再狭窄。
本发明公开内容进一步涉及一种通过向哺乳动物给予有效治疗或预防所述哺乳动物中血脂异常症的量的霞多丽种子产品以治疗或预防哺乳动物中血脂异常症的方法。在某些方面中,所述血脂异常症是高血脂症或低血水平的高密脂蛋白(HDL)胆固醇。在某些方面中,所述高血脂症是家族性高胆固醇血症、家族性混合高血脂症、降低或缺乏性脂蛋白脂酶水平或活性、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、高血水平酮体、高血水平 Lp(a)胆固醇、高血水平低密脂蛋白(LDL)胆固醇、高血水平极低密度脂蛋白(VLDL)胆固醇、或高血水平非酯化脂肪酸。
本发明公开内容进一步涉及一种通过给予有效治疗或预防所述异常脂蛋白血症的量的霞多丽种子产品治疗或预防哺乳动物中异常脂蛋白血症的方法。在某些方面中,所述异常脂蛋白血症是高血水平LDL、高血水平载脂蛋白B(apo B)、高血水平Lp(a)、高血水平apo(a)、高血水平VLDL、低血水平HDL、降低或缺乏性脂蛋白脂酶水平或活性、低α脂蛋白血症、与糖尿病相关的脂蛋白异常、与肥胖症相关的脂蛋白异常、与阿尔兹海默症相关的脂蛋白异常、或家族性混合高血脂症。
本发明公开内容进一步涉及一种通过向哺乳动物给予有效治疗或预防哺乳动物中糖代谢障碍症的量的霞多丽种子产品以治疗或预防哺乳动物中糖代谢障碍症的方法。在某些方面中,所述糖代谢障碍症是受损的葡萄糖耐受性、胰岛素耐受性(胰岛素抵抗)、胰岛素耐受性相关乳癌、结肠癌或前列腺癌、糖尿病、胰腺炎、高血压、多囊卵巢症、高水平血胰岛素、或高水平血糖。在某些方面中,所述糖尿病是非胰岛素依赖型糖尿病 (NIDDM)、胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)、妊娠期糖尿病(GDM)、或青春晚期糖尿病(MODY,maturity onsetdiabetes of the young)。
本发明公开内容进一步涉及一种通过向哺乳动物给予有效治疗或预防哺乳动物中代谢综合症的量的霞多丽种子产品以治疗或预防哺乳动物中代谢综合症的方法。
在某些方面中,给予的量有效调节一种或多种参与脂肪、胆固醇和/ 或胆汁代谢的基因的表达。在具体实施方式中,所述量有效提高肝组织中 ACOX1的表达、提高肝组织中CYP51的表达、提高肝组织中CYP7al的表达、降低肝组织中SCD1的表达、和/或降低肝组织中ABCG5的表达,例如至少10%、至少20%、至少50%、或至少100%。
本发明公开内容进一步涉及一种通过向哺乳动物给予有效提高所述哺乳动物肠道中的梭菌(Clostridium)细菌量的量的霞多丽种子产品以提高哺乳动物肠道中梭菌细菌量的方法。
本发明公开内容进一步涉及一种通过向哺乳动物给予有效提高所述哺乳动物肠道中的肠杆菌(Enterobacteriaceae)细菌量的量的霞多丽种子产品以降低哺乳动物肠道中肠杆菌细菌量的方法。
本发明公开内容进一步涉及一种通过向所述哺乳动物给予有效提高所述哺乳动物肠道中的脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)群(group)细菌量的量的霞多丽种子产品以提高哺乳动物肠道中脆弱拟杆菌群细菌量的方法。
本发明公开内容进一步涉及一种通过向哺乳动物给予有效治疗或预防乳酸性酸中毒的量的霞多丽种子产品以治疗或预防哺乳动物中乳酸性酸中毒的方法。
在这些方法的某些实施方式中,向所述哺乳动物给予并非是霞多丽种子产品的第二葡萄种子或葡萄皮产品。在某些方面中,霞多丽种子产品和第二葡萄种子或葡萄皮产品的组合提供的疗效或健康益处超过单独给予霞多丽种子产品的效果。
在某些方面中,所述霞多丽种子产品由具有至少600mg表儿茶素 /100g种子的表儿茶素含量或至少700mg表儿茶素/100g种子的表儿茶素含量的种子制备。在具体实施方式中,所述表儿茶素含量范围为 600-800mg/100g种子或650-800mg/100g种子。
在某些实施方式中,所述霞多丽种子产品引入食品或饮料产品。
在某些实施方式中,所述霞多丽种子产品是霞多丽种子粉。在某些实施方式中,所述霞多丽种子产品是霞多丽种子提取物。在某些实施方式中,所述霞多丽种子产品来自生长于温克勒(Winkler)地区气候I、II、III或 IV型中的葡萄。
在某些实施方式中,所述哺乳动物是家养宠物,例如,猫或狗。在这些方法的其它实施方式中,所述哺乳动物是人类。在其它实施方式中,所述人类是婴儿。
本发明公开内容进一步涉及一种包含霞多丽种子产品的婴儿配方制品(infantformula)和使用所述婴儿配方制品促进婴儿肠道微生物群落发展的方法。在某些方面中,所述婴儿配方制品当给予婴儿时通过调节肠道细菌的水平而促进肠道微生物群发展(development)。在某些实施方式中,所述婴儿通过剖腹产分娩。在某些实施方式中,所述婴儿是配方制品喂养。
3.附图说明
图1:霞多丽(Chr)、解百衲(赤霞珠)(Cab)和西拉(Syrah)(Syr) 种子(Sd)和皮(Sk)的蛋白、脂肪、灰分、碳水化合物和总膳食纤维含量。
图2:实施例1中仓鼠的膳食组成。
图3:实施例1中动物以周计的种子喂食体重。
图4:实施例1中动物以周计的皮喂食体重。
图5:实施例1的所述动物的每周食物摄取。
图6:实施例1的所述动物的总食物摄取。
图7:实施例1的所述动物的总热量摄取。
图8:实施例1的所述动物在四周结束时的血浆脂蛋白胆固醇水平。
图9:实施例1的所述动物在四周结束时的血糖水平。
图10:实施例1的所述动物在四周结束时的器官重量。
图11:不同葡萄品种的种子和皮中表儿茶素水平。
图12:实施例2包含3wt%、7wt%和10wt%霞多丽种子粉的喂食饮食的动物的体重、体重增益和总食物摄取。
图13:实施例2喂食霞多丽种子乙醇提取物(40EtChrSdEx)、霞多丽种子甲醇提取物(MeChrSdEx)、霞多丽种子乙醇提取残余物 (40EtChrSdRes)、霞多丽种子甲醇提取物残余物(MeChrSdRes)、按照饮食重量的10%、7%和3%(分别为10%ChrSd、7%ChrSd和3%ChrSd) 的霞多丽种子粉、10%饮食重量的白雷司令(White Riesling)种子粉 (10%WRSd)和10%饮食重量的长相思(Sauvignon Blanc)种子粉 (10%SBSd)的动物在四周结束时的VLDL、LDL和HDL胆固醇水平。
图14:实施例2喂食霞多丽种子乙醇提取物(40EtChrSdEx)、霞多丽种子甲醇提取物(MeChrSdEx)、霞多丽种子乙醇提取物残余物 (40EtChrSdRes)、霞多丽种子甲醇提取物残余物(MeChrSdRes)、10%, 7%和3%饮食重量(分别为10%ChrSd,7%ChrSd和3%ChrSd)的霞多丽种子粉、10%饮食重量的白雷司令(White Riesling)种子粉(10%WRSd) 和10%饮食重量的长相思(Sauvignon Blanc)种子粉(10%SBSd)的动物在四周结束时的LDL/HDL胆固醇比率。
图15:实施例2喂食霞多丽种子乙醇提取物(40EtChrSdEx)、霞多丽种子甲醇提取物(MeChrSdEx)、霞多丽种子乙醇提取物残余物 (40EtChrSdRes)、霞多丽种子甲醇提取物残余物(MeChrSdRes)、10%、7%和3%饮食重量(分别为10%ChrSd,7%ChrSd和3%ChrSd)的霞多丽种子粉、10%饮食重量的白雷司令(White Riesling)种子粉(10%WRSd) 和10%饮食重量的长相思(Sauvignon Blanc)种子粉(10%SBSd)的动物在四周结束时的肝、附睾脂肪(EA)和腹膜后脂肪(RA)重量。
图16:实施例3的相对脂肪基因表达。
图17:实施例3的相对肝基因表达。
图18:实施例4喂食补充霞多丽种子粉(CharSdFl)、葡萄种子提取物(VC1和VC7)、MegaBP葡萄种子提取物(BP1、 BP7),葡萄种子提取物(L1、L7)、儿茶素(Cat)和表儿茶素(EpiCat)的饮食的动物在四周结束时的总血浆脂蛋白胆固醇水平。
图19:实施例4喂食补充霞多丽种子粉(CharSdFl)、葡萄种子提取物(VC1和VC7)、MegaBP葡萄种子提取物(BP1、 BP7),葡萄种子提取物(L1、L7)、儿茶素(Cat)和表儿茶素(EpiCat)的饮食的动物在四周结束时的VLDL、LDL和HDL胆固醇水平。
图20:实施例5喂食对照饮食,补充解百衲种子粉(RGF+HF)的高脂肪饮食,补充霞多丽种子粉(WGF+HF)的高脂肪饮食和高脂肪对照饮食(HF)的动物的总粪便细菌水平。
图21:实施例5喂食对照饮食,补充解百衲种子粉(RGF+HF)的高脂肪饮食,补充霞多丽种子粉(WGF+HF)的高脂肪饮食和高脂肪对照饮食(HF)的动物的肠球菌属(Enterococcus spp.)水平。
图22:实施例5喂食对照饮食,补充解百衲种子粉(RGF+HF)的高脂肪饮食,补充霞多丽种子粉(WGF+HF)的高脂肪饮食和高脂肪对照饮食(HF)的动物的双歧杆菌属(Bifidobacterium spp.)水平。
图23:实施例5喂食对照饮食,补充解百衲种子粉(RGF+HF)的高脂肪饮食,补充霞多丽种子粉(WGF+HF)的高脂肪饮食和高脂肪对照饮食(HF)的动物的乳酸杆菌属(Lactobacillus spp.)水平。
图24:实施例5喂食对照饮食,补充解百衲种子粉(RGF+HF)的高脂肪饮食,补充霞多丽种子粉(WGF+HF)的高脂肪饮食和高脂肪对照饮食(HF)的动物的梭菌IV群细菌水平。
图25:实施例5喂食对照饮食,补充解百衲种子粉(RGF+HF)的高脂肪饮食,补充霞多丽种子粉(WGF+HF)的高脂肪饮食和高脂肪对照饮食(HF)的动物的脆弱拟杆菌群(group)细菌水平。
图26:实施例5喂食对照饮食,补充解百衲种子粉(RGF+HF)的高脂肪饮食,补充霞多丽种子粉(WGF+HF)的高脂肪饮食和高脂肪对照饮食(HF)的动物的肠杆菌水平。
4.具体实施方式
4.1.霞多丽种子产品
本发明涉及霞多丽种子产品和使用霞多丽种子产品治疗或预防肥胖症和其它病症的方法。优选所述霞多丽种子产品由生长于温克勒(Winkler) 地区气候I-IV型的葡萄生产(Jones et al,2010,Am.J.Enol.Vitic.61 (3):313-326)。在一些实施方式中,所述霞多丽种子产品由生长于北加利福利亚沿海山谷,例如,纳帕(Napa)山谷和/或索诺玛(Sonoma)山谷的葡萄生产。在另一实施方式中,所述霞多丽种子产品由生长于其它更热的内陆山谷的葡萄园,例如,温克勒(Winkler)地区气候IV-V型的葡萄生产。在优选的实施方式中,所述霞多丽种子产品来自生长于沿海地区中的葡萄。
在一个实施方式中,所述霞多丽种子产品含有霞多丽种子的脱脂部分,如霞多丽果渣粗粉(粗磨粉,meal)、霞多丽果渣粉(精粉,flour)、霞多丽种子粗粉,或最优选,霞多丽种子粉(精粉、精磨粉,flour)。在一些实施方式中,所述霞多丽种子产品包含通过有机溶剂不可提取的,例如,通过乙醇和/或甲醇不可提取的脱脂霞多丽种子的内容物(内含物)。在某些方面中,所述霞多丽种子产品由表儿茶素含量至少600mg表儿茶素/100g种子或表儿茶素含量至少700mg表儿茶素/100g种子的种子制备。在具体实施方式中,所述表儿茶素含量范围为600-800mg/100g种子或650-800mg/100g种子。
正如本文所用,“霞多丽种子粗粉”是经研磨的整个种子而“霞多丽种子粉(霞多丽种子精粉)”是在提取油后的研磨种子。霞多丽种子粉可以使用本领域内已知从种子提取油产生脱脂种子粉的“冷压”、“热压”或溶剂提取方法而获得的。粗粉或粉可以通过使用适合干燥食品产品的常规干燥技术进行干燥直至(获得)所需水分含量。
所述干燥的粗粉或粉进一步在环境温度条件下研磨而形成具有自由流动粒子的霞多丽种子粉末。在一个实施方式中,所述自由流动粒子可以为不超过841μm(20目)的尺寸到不超过37μm(400目)的尺寸。在某些实施方式中,所述尺寸不超过20目、40目、60目、80目、100目、200 目、300目、或400目。
在一种示例性方法中,霞多丽种子粉通过分离和干燥霞多丽葡萄种子,例如,由霞多丽葡萄压榨成葡萄果汁(例如,制成葡萄酒)之后产生的果渣而制成。所述葡萄种子能够“冷榨”而将其脱脂(生产作为副产品的霞多丽种子油)。葡萄种子粉由排油后的压榨饼进行研磨。在一个实施方式,在葡萄榨汁后所述种子从葡萄皮中分离出来,经过清洗,机械脱脂,精细研磨并筛分而产生100目(150μm)的可流动粉末。
霞多丽种子粉也能够从Apres Vin(Yakima,华盛顿),Botanical OilInnovations(Spooner,威斯康星州)或Fruitsmart,Inc.(Grandview,华盛顿)商购。所述FruitSmart霞多丽种子粉是85目可流动的粉末,但可以进一步研磨和筛分而产生具有较小颗粒尺寸的粉。
在一个实施方式中,皮、茎和叶(果渣的其余部分)在压榨之前从种子中去除。除去皮、茎和叶容许进行最佳的榨油。
“霞多丽种子提取物”采用合适的溶剂,如乙醇或甲醇,通过溶剂提取霞多丽种子而制成。例如,“40EtChrSdEx”是用40%的乙醇溶液作为提取溶剂制成的霞多丽种子提取物。所述提取方法,除了含有所述溶剂可溶性组分的提取物之外,还会产生不溶性固体的残余物。
4.2.有效量
在本发明所述方法的一个实施方式中,霞多丽种子粉作为日饮食的百分比消耗的量以质量计为至少3%、至少5%、或至少8%。优选5%-10%,更优选7%,而在一些实施方式中10%以质量计的日饮食是霞多丽种子粉。
在本发明所述方法的一个实施方式中,霞多丽种子粉作为日饮食的百分比消耗的量为至少3%,至少5%,或至少8%的总消耗的热量(卡路里)。优选5%-10%,更优选7%,而在一些实施方式中10%的所述日热量来自霞多丽种子粉。
在另一实施方式中,日消耗的霞多丽种子粉的量为至少10g,至少 15g,至少20g,至少25g,至少30g,至少35g,至少40g,或至少45g。优选,每日消耗50g霞多丽种子粉。
在另一实施方式中,每日消耗的霞多丽种子粉的量为至少1汤匙,至少2汤匙,至少3汤匙,至少4汤匙,或至少5汤匙。
在另一实施方式中,日消耗的霞多丽种子粉的量基于霞多丽种子粉重量:体重为至少0.2g/kg,至少0.5g/kg,或至少0.7g/kg。优选每天消耗至少1g霞多丽种子粉/kg体重。
在某些方面中,给予霞多丽种子粉的量有效调节一种或多种参与脂肪,胆固醇,和/或胆汁代谢的基因的表达。在具体实施方式中,所述量有效提高肝组织中ACOX1的表达,提高肝组织中CYP51的表达,提高肝组织中CYP7al的表达,降低肝组织中SCD1的表达,和/或降低肝组织中 ABCG5的表达,例如,至少10%,至少20%,至少50%,或至少100%。
在本发明的方法中霞多丽种子粉能够用霞多丽果渣粗粉、果渣粉、皮粉、种子提取物或种子粗粉代替。霞多丽果渣粗粉、果渣粉、皮粉、种子提取物或种子粗粉每日需要消耗而达到给定量霞多丽种子粉相同益处的量能够由本领域内那些技术人员容易地确定。例如,预期受试者将需要消耗大约三倍霞多丽皮粉才能达到给定量的霞多丽种子粉的相同益处。
在某些实施方式中,所述霞多丽种子产品,例如,霞多丽种子粉,服用至少一周两次,至少一周三次,或隔天一次。优选所述霞多丽种子产品引入所述日饮食中。
所述霞多丽种子产品,例如,霞多丽种子粉服用的时间量足以治疗和 /或预防顺从于如本文所述的霞多丽种子产品的治疗和/或预防的病症。所述霞多丽种子产品能够服用至少一周、至少2周、至少3周、至少一个月、至少2个月、至少3个月、至少6个月、至少一年,或无限期(indefinitely) 服用。
在这些方法的某些实施方式中,向所述哺乳动物给予不是霞多丽种子产品的第二葡萄种子或葡萄皮产品。在某些方面中,霞多丽种子产品和第二葡萄种子或葡萄皮产品的组合提供的疗效或健康益处超过了单独给予霞多丽种子产品的效果。
在其它实施方式中,霞多丽种子产品的量和第二葡萄种子或葡萄皮产品的量经选择而使之所获得的效果至少与通过单独给予给定量的霞多丽种子产品所达到的效果相同。
4.3.霞多丽种子组合物
所述霞多丽种子产品能够包含于各种食品产品,如营养饮料(例如,营养奶昔(nutritional shakes)),烘焙食品(例如,小饼干,布朗尼,蛋糕,面包,饼干,薄脆饼干),布丁,糖果(如,蜜饯),点心食品(例如,松饼),冰淇淋,冰冻甜点和新奇品(novelties),或非烘焙挤出食品产品如棒,包括健康或能量棒。所述霞多丽种子产品也能够作为营养补充剂,或以片剂形式或作为适合用作营养食品添加剂的粉末提供。
在一个实施方式中,所述霞多丽种子产品能够与其它干食品材料共混而用于制备富含霞多丽种子产品的食品产品。干食品材料包括,例如,干的含淀粉材料,干的含蛋白材料或其组合。合适的含淀粉材料可以衍生自,例如,水稻,玉米,大豆,向日葵,油菜(芸苔,canola),小麦,燕麦,黑麦,马铃薯,或其任何组合。合适的干的含蛋白材料可源自例如,肉,奶,鱼或其任意组合。对于烘焙应用,所述霞多丽种子产品适合使用的用量范围为3%~5%的干食品材料(例如,白色或全麦粉)。所述干食品还可以可选地包含另外的成分如维生素,矿物质强化剂,盐,着色剂,调味剂,增味剂或甜味剂。
霞多丽种子产品可引入到饮料,加工肉制品,冷冻甜品,糖果产品,乳品型产品,酱组合物和谷物产品中。饮料产品包括,例如,冰沙 (smoothies),婴儿配方制品,果汁饮料,酸奶饮料,咖啡饮料,啤酒,干饮料混合物,茶融合饮料(tea fusion beverages),运动饮料,酱油(soy liquor),汽水,软冰(slushes)和冷冻饮料混合物。肉类产品包括,例如,研磨鸡肉产品,加水火腿产品,大红肠,热狗,法兰克(franks),鸡肉饼,鸡块(chicken nugget),牛肉饼,鱼肉饼,鱼糜,咸肉,午餐肉,三明治馅料,熟肉制品(deli meat),肉干类食品,肉丸,肉干(jerky),牛肉条 (fajitas),培根片(bacon bits),注射肉和德式香肠。糖果产品包括,例如,巧克力,慕斯,巧克力涂层,酸奶涂层,可可粉,糖霜(frosting),奶糖,能量棒和块状糖(candy bar)。冷冻甜品类产品包括,例如,冰淇淋,麦芽糖(malt),奶昔(shakes),冰棍,冰糕和冷冻布丁产品。乳品型产品包括,例如,酸奶,奶酪,冰淇淋,喷射奶油(whippedtopping),咖啡稀奶油,奶油奶酪,酸奶,白干酪(cottage cheese),黄油,蛋黄酱(mayonnaise),牛奶基调味酱,乳基沙拉酱和干酪凝乳。谷物产品包括,例如,面包,松饼,百吉饼,面条,饼干,煎饼,华夫饼,甜饼干,粗粒麦粉,炸马铃薯条,玉米饼,蛋糕,薄脆饼干,早餐谷物(包括即食的和烹熟谷物),椒盐脆饼干,干面包混合物,梅尔巴吐司,棒形面包,油炸面包,馅料,能量棒,甜甜圈,蛋糕,爆米花,玉米卷,油炸裹层,面糊,裹粉,酥皮,巧克力糕饼,馅饼,膨化豆饼,可丽饼,牛角面包,粉和玉米粥。酱料组合物包括沙拉酱,坚果黄油涂抹酱(例如,花生黄油涂抹酱),卤汁,酱汁,萨尔萨斯,果酱,奶酪酱,蛋黄酱,调味酱,豆腐乳,蘸酱,水果糖浆和槭糖浆(maple syrup)。酱组合物还可以包括辅助维持组合物均一性的悬浮助剂(悬浮剂)。合适的悬浮助剂的实例包括多糖,如淀粉,纤维素(例如,微晶纤维素)和角叉菜胶,以及聚糖醛酸,如果胶。明胶是另一种悬浮助剂实例,它也可用于饮料组合物。根据本发明使用预混物制备的额外补充食品产品的实例包括豆腐,配制大豆精,粉状蛋白补充剂,果汁可混合蛋白补充剂,发泡剂,混浊剂(clouding agent),婴儿食品,素食球,肉类似物,蛋产品(例如,炒鸡蛋),汤,杂脍(chowder),肉汤,奶替代品,豆奶产品,辣椒,香料混合物,糖洒,豆豉(soy whiz),沙拉浇料,可食用膜,可食用棒,口香糖,培根片,蔬菜卷,比萨饼皮阻隔层(pizza crust barriers),大豆馅饼,无气合成豆腐,豆制品帮手(soyhelper),大豆棉花糖果(soy cotton candy),水果丁,比萨卷,土豆泥,纺大豆蛋白纤维,豆卷,挤出小吃(extruded snack),调味品,乳液,油炸食物(fries),明胶甜点产品,维生素补充剂,营养棒,干饼,面包或松饼混合物和可微波瞬干混合物(microwavable instant drymixes)。
在一个具体方面中,所述霞多丽种子产品可以作为能量棒(适合生理活动消耗)或代餐棒。所述能量棒或代餐棒还能够含有一种或更多的维生素,矿物质,食品补充剂,植物制品(botanical),或植物或草本提取物或本领域内已知的或能量棒或代餐棒中所用的成分,如果汁或提取物,草药 (herb)或草本香料(herb flavor),天然或人工香料,维生素,矿物质,含有抗氧化剂的提取物,辅酶Q,ω-3脂肪酸,瓜拉纳,咖啡因,可可碱,麦芽糖糊精和蛋白。在一些实施方式中,所述能量棒或代餐棒能够具有分别为40/30/30的碳水化合物/蛋白/脂肪的总可用能量水平。
所述能量和代餐棒能够进一步补充用于运动能力的提高,精神能量或认知重点强化,和/或营养益处。示例性补充剂包括,但不限于长春西汀,长春胺银杏叶精华(VincamineGinkgo Biloba),L-精氨酸,乙酰左旋肉碱,野甘菊(黑叶母菊),DMAE(二甲氨基乙醇),DMAE酒石酸氢盐,乙酸对氯苯酚酯,维生素B复合剂,人参,5HTP(5-羟色氨酸),L-茶氨酸,雄烯二酮,L-谷氨酰胺,L-酪氨酸,L-甘氨酸;L-赖氨酸;乳清蛋白;DHEA (去氢表雄酮)。
在另一个方面中,所述霞多丽种子产品可以提供于或添加到液体或粉末婴儿配方制品中。所述婴儿配方制品能够含有蛋白源,脂肪源,和/或碳水化合物源。所述蛋白源能够是,例如,干的或液体牛奶,乳清和/或酪蛋白,或大豆蛋白。所述脂肪源能够是,例如,乳品脂肪和/或一种或多种植物油。所述碳水化合物源能够是,例如,乳糖,葡萄糖或蔗糖。所述婴儿配方制品能够另外含有一种或多种维生素,和/或一种或多种矿物质。在一个实施方式中,所述霞多丽种子产品可以添加到市售的液体或粉末婴儿配方制品中。
所述霞多丽种子组合物也能够含有一个量的不是霞多丽种子产品的第二葡萄种子或葡萄皮产品。在一些实施方式中,一个量的所述霞多丽种子产品在所述霞多丽种子组合物中用一个量的第二葡萄种子和葡萄皮产品替代。需要添加到所述霞多丽种子组合物中以获得与给定量的霞多丽种子产品相同益处的第二葡萄种子或葡萄皮产品的量能够很容易地由本领域的技术人员确定。
4.4.霞多丽种子粉组合物的治疗用途
根据本发明,本发明的组合物,包含霞多丽种子粉组合物,向受试者,优选向人类受试者给予,在所述受试者中脂质代谢增加是有用的或是所希望的。所述受试者可能需要治疗或预防心血管病,血脂异常症,葡萄糖代谢障碍,阿尔茨海默氏病,X综合征,PPAR有关的障碍症,败血症,血栓性功能障碍症(thrombotic disorder),肥胖症,胰腺炎,高血压,肾病,癌症,炎症,或阳痿。
在本发明的另一个方面中,本发明的组合物,包含霞多丽种子粉组合物,向受试者,优选向人类受试者给予,在所述受试者中所述肠道生物群落的调节是有用的或是期望的。在一个实施方式中,所述受试者可能需要治疗或预防,例如,乳酸性酸中毒,结肠炎,或结肠直肠癌。在一个实施方式中,所述受试者是遗传性易患结肠癌的。
在一个实施方式中,“治疗”是指改善一种疾病或病症,或其至少一种可辨别的症状。在另一实施方式中,“治疗”是指改善至少一种并不一定由主体可辨别的可测量生理参数。在又一个实施方式,“治疗”是指抑制疾病或病症的进展,无论是在身体上,例如,可辨别症状的稳定,在生理上,例如,生理参数的稳定,或两者兼而有之。在还有的一个实施方式中,“治疗”是指延缓疾病或病症的发作。
在某些实施方式中,本发明的组合物给予受试者,优选人类,作为对这些疾病的预防性措施。正如本文所用,“预防”或“防止”是指降低获得给定疾病或病症的风险。在一个优选的方面中,本发明组合物作为预防措施给予受试者,优选是对心血管病,血脂异常症,异常脂蛋白血症,葡萄糖代谢障碍症,阿尔茨海默氏病,X综合征,PPAR有关的功能障碍症,败血症,血栓性功能障碍症,肥胖症,胰腺炎,高血压,肾病,癌症,炎症,或阳痿具有遗传易感性的人类。这种遗传倾向的实例包括但不限于载脂蛋白E的E4等位基因,其会增加阿尔茨海默病的可能性;脂蛋白脂酶基因编码区域或启动子中功能缺失或无效突变(例如,在导致替代D9N和 N291S的编码区内的突变;回顾会增加心血管病,血脂异常症和异常脂蛋白血症风险的脂蛋白脂酶基因中的基因突变,参见Hayden and Ma,1992, Mol.Cell Biochem.113:171-176);和家族性混合高血脂症和家族性高胆固醇血症。
在所述实施方式的另一种优选模式中,本发明的组合物作为预防措施给予具有对心血管病,血脂异常症,异常脂蛋白血症,葡萄糖代谢紊乱,阿尔茨海默氏病,X综合征,PPAR有关的功能障碍症,败血症,血栓性功能障碍症,肥胖症,胰腺炎,高血压,肾病,癌症,炎症或阳痿的非遗传易感性的受试者。这种非遗传易感性的实例包括但不限于:心脏搭桥手术和经皮腔内冠状动脉成形术(percutaneous transluminal coronary angioplasty),这往往会导致再狭窄,动脉粥样硬化症的加速形式;女性中的糖尿病,这往往会导致多囊卵巢症;和心血管病,这往往会导致阳痿。
在某些实施方式中,所述哺乳动物消耗高脂肪饮食。在一个实施方式中,高脂肪饮食是其中至少30%,35%或40%的总日热量获自脂肪的饮食。
在某些实施方式中,非霞多丽种子粉的第二葡萄种子或葡萄皮产品向所述哺乳动物给予而提供超过单独给予霞多丽种子粉效果的效果。
4.4.1.血脂异常症
本发明提供了用于治疗或预防血脂异常症的方法,包括向受试者给予治疗有效量的霞多丽种子粉组合物。
本文所用的术语“血脂异常症”是指导致或表现异常水平的循环脂质的障碍症。血液中脂质水平过高到一定程度,本发明的组合物给予受试者而恢复正常水平。脂质的正常水平报告于本领域技术人员已知的医学论著中。例如,LDL,HDL,游离甘油三酯和其它与脂质代谢相关的参数的推荐血液水平都能够在美国心脏协会的网站和国家心脏、肺和血液研究所的国家胆固醇教育计划的网站找到。在目前,HDL胆固醇在血液中的推荐水平高于35mg/dL;LDL胆固醇在血液中的推荐水平低于130mg/dL;血液中推荐的LDL:HDL胆固醇比率低于5:1,理想地3.5:1;而游离甘油三酯在血液中的推荐水平小于200mg/dL。
本发明的霞多丽种子粉组合物适用于治疗或预防的血脂异常症包括但不限于高血脂症和低血水平高密脂蛋白(HDL)胆固醇。在某些实施方式中,通过本发明的化合物预防或治疗的高血脂症是家族性高胆固醇血症;家族性混合高血脂症;降低或缺乏性脂蛋白脂酶水平或活性,包括由脂蛋白脂酶突变所致的降低或缺乏;高甘油三酯血症;高胆固醇血症;高血水平酮体(例如β-OH丁酸);高血水平Lp(a)胆固醇;高血水平低密脂蛋白(LDL)胆固醇;高血水平极低密度脂蛋白(VLDL)胆固醇和高血水平非酯化脂肪酸。
本发明进一步提供了改变受试者中脂质代谢,例如,降低受试者血液中LDL,降低所述受试者血液中游离甘油三酯,增加受试者血液中 HDL/LDL比率,以及抑制皂化的和/或非皂化脂肪酸合成的方法,所述方法包括向所述受试者给予有效改变脂质代谢的量的霞多丽种子粉组合物。
4.4.2.心血管病
本发明提供了用于治疗或预防心血管病的方法,包括向受试者给予治疗有效量的霞多丽种子粉组合物。本文所用的术语“心血管病”是指心脏和循环系统的疾病。这些疾病往往与异常脂蛋白血症和/或血脂异常症有关。本发明组合物适用于预防或治疗的心血管病包括但不限于动脉硬化症;动脉粥样硬化症;中风;缺血;内皮功能障碍症,特别是那些影响血管弹性的功能障碍;外周血管疾病;冠心病;心肌梗塞;脑梗塞和再狭窄。
4.4.3.异常脂蛋白血症
本发明提供了用于治疗或预防异常脂蛋白血症的方法,包括向受试者给予治疗有效量的霞多丽种子粉组合物。
本文所用的术语“异常脂蛋白血症”是指导致或表现为异常水平的血循环脂蛋白的障碍症。血液中脂蛋白水平过高至一定程度,本发明的组合物给予受试者而恢复正常水平。相反,血液中脂蛋白水平过低至一定程度,本发明的组合物给予受试者而恢复正常水平。脂蛋白的正常水平报告于本领域内技术人员已知的医学论著中。
本发明组合物适用于预防或治疗的异常脂蛋白血症包括但不限于高血水平LDL;高血水平载脂蛋白B(apo B);高血水平Lp(a);高血水平 apo(a);高血水平VLDL;低血水平HDL;降低或缺乏性脂蛋白脂酶水平或活性,包括由脂蛋白脂酶突变所致的降低或缺乏;低α脂蛋白血症;与糖尿病相关的脂蛋白异常;与肥胖症相关的脂蛋白异常;与阿尔兹海默症相关的脂蛋白异常;和家族性混合高血脂症。
本发明还提供了降低受试者血液中apo C-II水平;降低受试者血液 apo C-III水平;提升HDL相关蛋白的水平,包括但不限于受试者血液的 apo A-I,apo A-I1,apo A-IV和apo E;提高受试者血液的apo E的水平和促进从受试者血液中清除甘油三酯的方法,所述方法包括向所述受试者给予分别有效产生所述降低,提高或促进的霞多丽种子粉组合物。
4.4.4.糖代谢障碍症
本发明提供了治疗或预防糖代谢障碍症的方法,包括向受试者给予治疗有效量的霞多丽种子粉组合物。本文所用的术语“糖代谢障碍症”是指导致或表现为异常葡萄糖贮存和/或利用的病症。葡萄糖代谢标志(即,血胰岛素,血糖)过高到一定程度,本发明的组合物给予受试者而恢复正常水平。相反,葡萄糖代谢的标志过低至一定程度,本发明的组合物给予受试者而恢复正常水平。葡萄糖代谢的正常标志报道于本领域技术人员已知的医学论著中。
本发明组合物适用于预防或治疗的糖代谢障碍症包括但不限于受损的葡萄糖耐受性;胰岛素耐受性;胰岛素耐受性相关的乳癌,结肠癌或前列腺癌;糖尿病,包括但不限于非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM),胰岛素依赖型糖尿病(IDDM),妊娠期糖尿病(GDM)和青春晚期糖尿病(MODY);胰腺炎;高血压;多囊卵巢症;和高水平血胰岛素和/或高血糖。
本发明进一步提供了改变受试者中糖代谢,例如,提高受试者的胰岛素敏感性和/或氧耗的方法,所述方法包括向所述受试者给予有效改变糖代谢的量的霞多丽种子粉组合物。
4.4.5.肠道细菌的调节
根据所述细菌群落占优势的物种将人肠道生物群落分成三类微生物分型。这些微生物分型是拟杆菌,瘤胃球菌和普雷沃氏菌。所述拟杆菌微生物分型据发现能够制备几种维生素,包括C和H,而同时所述普雷沃氏菌微生物分型据发现能够制备叶酸和维生素B1。
本发明提供了调节肠道细菌水平的方法,包括向受试者给予有效调节肠道细菌水平的量的霞多丽种子粉组合物。正如本文所用,“调节肠道细菌水平”是指(i)肠道细菌水平总量降低,和/或(ii)总肠道细菌亚群(subset) 的细菌水平增加或降低。总肠道细菌亚群能够是单个物种,属,科,目,纲,门,或以上不只一种的组合。
例如,调节通过剖腹产出生的婴儿中肠道菌群水平,可能是合乎需要的,因为所述肠道的细菌定植在剖腹产的婴儿中相比于阴道分娩的婴儿会延迟。肠道菌群的差异可能在出生后持续长达6个月之久(Grolund,M.et al,Journal of PediatricGastroentero10gy&Nutrition,(1999),vol.28(1): 19-25)。例如,通过剖腹产的婴儿相比于阴道分娩出生的婴儿在六月龄时会定植显著较少的脆弱拟杆菌群的细菌。出生后七天,剖腹产的婴儿相比于阴道分娩出生的婴儿会具有作为总肠道细菌百分数的更高水平的肠杆菌细菌柠檬酸杆菌和大肠杆菌(Pandey,P.et al.,J.Biosci.(2012)vol.37 (6):989-998)。霞多丽种子粉组合物能够用于提高脆弱拟杆菌群细菌和梭菌的水平,并例如降低剖腹产婴儿中肠杆菌科细菌的水平而促进肠道生物群落的形成,其更紧密类似于阴道分娩出生婴儿的肠道微生物群落。
霞多丽种子粉组合物还能够用于通过降低产乳酸细菌如乳酸杆菌在肠道中的量而治疗或预防乳酸性酸中毒。霞多丽种子粉组合物也能够用于通过提高梭菌在肠道中的水平而促进结肠的健康。梭菌细菌产生丁酸酯,这是结肠粘膜中优选的能量源。丁酸酯防护结肠炎和结肠直肠癌,而对于结肠上皮细胞的正常发育是重要的。Shen,J.et al.,Appliedand Environmental Microbiology,vol.72:5232-5238(2006)。
霞多丽种子粉组合物也能够用于降低肠道中双歧杆菌属的水平。然而,如果降低双歧杆菌属的水平是不希望的,而给予霞多丽种子粉的另一治疗益处是所期望之时,则含一种或多种双歧杆菌菌种的益生菌补充剂可以给予所述受试者而提高所述受试者肠道中双歧杆菌菌种的水平。可以给予益生菌补充剂中的双歧杆菌菌种的实例包括双歧杆菌属双歧杆菌 (Bifidobacterium bifidum),短双歧杆菌(Bifidobacterium breve),以及长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)。所述益生菌补充剂能够包括其它细菌菌种,例如,一种或多种嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus),植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum),唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarious),干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei),副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei),鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)和嗜热链球菌 (Streptococcus thermophilus)。
在一个实施方式中,所述受试者被确定为具有属于拟杆菌,瘤胃球菌,或普雷沃氏菌的微生物分型。在一个实施方式中,所述受试者具有拟杆菌微生物分型。在一个实施方式中,所述受试者具有瘤胃球菌微生物分型。在一个实施方式中,所述受试者具有普雷沃氏菌微生物分型。
4.5.霞多丽种子提取物组合物的治疗用途
根据本发明,本发明的组合物,包含霞多丽种子提取物组合物,给予受试者,优选人类受试者,对于第4.4节中所述的每一治疗用途。霞多丽种子提取物具有所述霞多丽种子粉类似的生物效果(数据未示出)。为了实现堪比使用一定量的霞多丽种子粉获得的益处,所给予的霞多丽种子提取物的用量应该是提供所述霞多丽种子粉量的2-5倍儿茶素水平的量。为获得与给定量的霞多丽种子粉相同益处所需要日消耗的霞多丽种子提取物的具体量,能够很容易地由本领域技术人员确定。
5.实施例1:霞多丽、长相思(SAUVIGNON BLANC)和白雷司令(WHITE RIESLING)产 品健康益处的比较
5.1.材料&方法
5.1.1.仓鼠和饮食
雄性金色叙利亚仓鼠(~80g,LVG品系,Charles River)进行驯化,并在实验饮食开始之前随意给予水和5001啮齿动物饮食(LabDiet,PMI International;蛋白,239g/kg;脂肪,50g/kg;非含氮物质487g/kg;粗纤维,51g/kg;灰分,70g/kg;能量,17MJ/kg;和用于维持健康的足够量矿物质和维生素)长达1个星期。仓鼠称重并随机分为2组,每组15只仓鼠,并随机饲喂含10wt%(按重量计)的霞多丽,解百衲或西拉葡萄种子粉或葡萄皮粉或对照(饮食)的高脂肪食物达4个星期。生产所述粉的葡萄生长于北加州沿海山谷。所述粉的组合物如图1所示。饮食构成为18%蛋白能量,43%碳水化合物能量,39%脂肪能量(其中补充有0.1%胆固醇)(图2)GenOil,是指一种来自未指定的葡萄品种的市售葡萄种子油。体重每周记录而食品的摄入每周监测两次。该研究由动物护理和使用委员会(Animal Care and UseCommittee)(Western Regional Research Center, USDA,Albany,CA)批准。
5.1.2.血浆和组织采集
仓鼠禁食12小时,用异氟烷(菲尼克斯药典(Phoenix Pharmaceutical)) 麻醉。用预先用EDTA钾溶液(15%wt:v)冲洗的注射器通过心脏穿刺收集血液并在4℃下以2000×g离心30分钟后分离血浆。收集肝,称重,并立即冷冻于液氮中用于分析。
5.1.3.血浆生物标记分析
血浆脂蛋白中的胆固醇如先前所述通过尺寸排阻色谱法进行测定(German etal,1996.Nutr Res.1996;16:1239-49)。血浆甘油三酯,总胆固醇,游离胆固醇和葡萄糖通过使用具有分析试剂盒的罗氏诊断/日立914 临床分析仪(Roche Diagnostics/Hitachi914Clinical Analyzer)(Roche Diagnostics and Wako Chemicals)的酶比色分析法进行测定。禁食仓鼠的脂联素(B-bridge International)和胰岛素(Mercodia)的血浆浓度使用如前所述的小鼠脂联素和超灵敏大鼠胰岛素免疫测定试剂盒进行测定(Hung et al,2009,J.Diabetes 1:194-206)。禁食仓鼠中的血糖浓度使用OneTouch Ultrameter(LifeScan)在尾静脉样品中测定。
5.1.4.肝脂质分析
冻干的磨碎肝样品使用加速溶剂提取剂(Dionex)在100℃;13.8MPa 下用75/25己烷/2-丙醇提取。所述样品提取物在罗氏诊断/日立914临床分析仪(Roche Diagnostics)上分析而使用上述的试剂盒测定肝甘油三酯,总胆固醇和游离胆固醇。
5.1.5.粪便胆汁酸和固醇分析
在所述仓鼠宰杀之前立即连续3天收集粪便,并冻干,磨碎和储存于-20℃下。胆汁酸和固醇通过HPLC如前所述进行测定(Hong et al,2007,. J Agric Food Chem.55:9750-7)。
5.1.6.统计分析
所有数据均表示为平均值±SE。对照和不同饮食组之间的差异通过双尾学生t检验(2-tailed Student's t test)进行确定。当各组的方差不等时,差异显著性采用韦氏检验(Welch's test)进行确定。计算出皮尔逊相关系数而研究血浆总胆固醇,血浆脂联素浓度,肝胆固醇和甘油三酯浓度与肝基因表达的关系(JMP7统计程序,SAS软件研究所(SASInstitute))。显著性定义为P<0.05。
5.2.结果
相比于喂食其它饮食的动物,饲喂霞多丽种子粉的动物体重显著降低 (图3-4)。喂食霞多丽种子粉饮食的动物在4个星期后就有约97g的平均体重。饲喂对照饮食的动物4个星期后具有约110g的平均体重。
虽然所述霞多丽种子粉治疗动物体重低于对照动物,但所述霞多丽种子粉治疗动物吃得多(图5),无论是依据体积(图6),还是热量(图7)。
喂食所述霞多丽种子粉饮食的动物表现出VLDL(66%)和LDL (50%)胆固醇的最大降低(图8)。血糖表现出略有降低(图9)。
霞多丽种子粉降低肝重量和附睾脂肪组织(EA)重量分别为30%和 20%(图10)。
这些数据表明,霞多丽种子粉在所测试的葡萄产品中明显突出。霞多丽皮粉表现出类似的趋势,但益处没有霞多丽种子粉那样大。
6.实施例2:霞多丽、长相思(SAUVIGNON BLANC)和白雷司令(WHITE RIESLING)产 品的健康益处的比较
6.1.材料&方法
6.1.1.仓鼠和饮食
雄性金色叙利亚仓鼠(~80g,LVG品系,Charles River)进行驯化,并在实验饮食开始之前随机给予水和5001啮齿动物饮食(LabDiet,PMI International;蛋白,239g/kg;脂肪,50g/kg;非含氮物质,487g/kg;粗纤维,51g/kg;灰分,70g/kg;能量,17MJ/kg;和用于维持健康的足够量矿物质和维生素)长达一个星期。仓鼠称重并随机分为10组,每组10 只仓鼠,并随机饲喂含霞多丽种子乙醇提取物,霞多丽种子甲醇提取物,霞多丽种子乙醇提取残余物,霞多丽种子甲醇提取残余物,10%(按重量计)霞多丽种子粉,10%(按重量计)长相思(Sauvignon Blanc)种子粉, 10%(按重量计)白雷司令(White Riesling)种子粉,7%(按重量计) 霞多丽种子粉,3%(按重量计)霞多丽种子粉的高脂肪饮食,或对照饮食长达4个星期。生产所述粉的葡萄生长于北加州沿海山谷。乙醇提取物和提取残余物通过“茶提取方法”制备,包括下列步骤:(1)将溶剂(1625mL 40%蒸馏水中的乙醇)加入到325g霞多丽种子粉中并在80℃振动2h; (2)步骤(1)的混合物随后通过Whatman 1滤纸进行过滤;(3)随后在旋转蒸发器上从步骤(2)的滤液中去除乙醇;(4)步骤(3)的溶液和步骤(2)的滤饼分别进行冷冻和冻干而产生霞多丽种子乙醇提取物和霞多丽种子乙醇提取残余物。类似的方法用于生产霞多丽种子甲醇提取物和霞多丽种子甲醇提取残余物。
饮食构成为18%作为蛋白的能量,43%作为碳水化合物的能量,39%作为脂肪的能量(其中补充有0.1%胆固醇)。每周记录体重而食品摄入每周监测两次。该研究由动物护理和使用委员会(Animal Care and Use Committee)(Western Regional ResearchCenter,USDA,Albany,CA)批准。
6.1.2.血浆和组织采集
仓鼠禁食12小时,用异氟烷(Phoenix Pharmaceutical)麻醉。采用预先用EDTA钾溶液(15%wt:v)冲洗的注射器通过心脏穿刺收集血液并在4℃下以2000×g离心30分钟后分离血浆。收集肝,称重,并立即冷冻于液氮中用于分析。
6.1.3.血浆生物标记分析
血浆脂蛋白中的胆固醇如先前所述通过尺寸排阻色谱法进行测定 (German etal,1996.Nutr Res.1996;16:1239-49)。血浆甘油三酯,总胆固醇,游离胆固醇和葡萄糖通过使用具有分析试剂盒的罗氏诊断/日立914 临床分析仪(Roche Diagnostics/Hitachi914Clinical Analyzer)(Roche Diagnostics and Wako Chemicals)的酶比色分析法进行测定。禁食仓鼠的脂联素(B-bridge International)和胰岛素(Mercodia)的血浆浓度使用如前所述的鼠脂联素和超灵敏鼠胰岛素免疫测定试剂盒进行测定(Hung et al,2009,J.Diabetes 1:194-206)。禁食仓鼠中的血糖浓度使用OneTouch Ultrameter(LifeScan)在尾静脉样品中测定。
6.1.4.肝脂质分析
冻干的磨碎肝样品使用加速溶剂提取剂(Dionex)在100℃;13.8MPa 下用75/25己烷/2-丙醇提取。所述样品提取物在罗氏诊断/日立914临床分析仪(Roche Diagnostics)上分析而使用上述的试剂盒测定肝甘油三酯,总胆固醇和游离胆固醇。
6.1.5.粪便胆汁酸和固醇分析
在所述仓鼠宰杀之前立即连续3天收集粪便,并冻干,磨碎和储存于 -20℃下。胆汁酸和固醇通过HPLC如前所述进行测定(Hong et al,2007,. J Agric Food Chem.55:9750-7)。
6.1.6.统计分析
所有数据均表示为平均值±SE。对照和不同饮食组之间的差异通过双尾学生t检验(2-tailed Student's t test)进行确定。当各组的方差不等时,差异显著性采用韦氏检验(Welch's test)进行确定。计算出皮尔逊相关系数而研究血浆总胆固醇,血浆脂联素浓度,肝胆固醇和甘油三酯浓度与肝基因的表达的关系(JMP7统计程序,SAS软件研究所(SASInstitute))。显著性定义为P<0.05。
6.2.结果
占所述饮食10wt%的霞多丽种子粉表现出实施例1的可再现结果。饲喂具有占饮食10wt%的霞多丽种子粉的饮食的动物体重相比于对照动物对于35%脂肪饮食具有最低体重增益。
霞多丽种子粉表现出剂量-响应。动物喂食10%,7%或3%霞多丽种子粉作为其饮食的一部分长达4个星期。观察到响应逐渐增加,这指示为体重的差异;动物吃得越多,其增加的重量越少(图12)。
霞多丽种子提取物表现出对体重有一定的影响,但没有直接加入霞多丽种子粉那样显著。
霞多丽种子提取物和霞多丽种子提取物残余物对胆固醇水平(图13) 和LDL/HDL之比(图14)表现出一定的效果,但并不如直接加入霞多丽种子粉那样显著。类似地,所述霞多丽种子提取物显示出对器官重量具有一定作用(图15),但并不如直接加入霞多丽种子粉那样显著。
其它白色种子粉;例如长相思(Sauvignon Blanc)或白雷司令(White Riesling)相比于所述对照饮食对体重表现出很少甚至没有差异。霞多丽与其它四种品种(变种)逐个比较,并明显出色。
7.实施例3:霞多丽种子粉对相对脂肪和肝基因表达的影响
7.1.材料&方法
7.1.1.仓鼠和饮食
雄性金色叙利亚仓鼠(~80g,LVG品系,Charles River)进行驯化,并在实验饮食开始之前随机给予水和5001啮齿动物饮食(LabDiet,PMI International;蛋白,239g/kg;脂肪,50g/kg;非含氮物质,487g/kg;粗纤维,51g/kg;灰分,70g/kg;能量,17MJ/kg;和用于维持健康的足够量矿物质和维生素)长达一个星期。仓鼠称重并随机分为2组,并随机饲喂含10%(以重量计)霞多丽种子粉或对照饮食长达4个星期。生产所述粉的葡萄生长于北加州沿海山谷。饮食构成为18%作为蛋白的能量,43%作为碳水化合物的能量,39%作为脂肪的能量(其中补充有0.1%胆固醇)。每周记录体重而食品摄入每周监测两次。该研究由动物护理和使用委员会 (Animal Care and Use Committee)(Western Regional ResearchCenter, USDA,Albany,CA)批准。
7.1.2.mRNA分析
定量PCR(qPCR)用于测定来自喂食所述霞多丽种子粉补充饮食或对照饮食的仓鼠的脂肪和肝样品中所述炎症,胆固醇,胆汁酸和脂肪酸途径的所选基因的mRNA表达。
7.1.3.统计分析
所有数据都表示为平均值±SD。所示平均值是喂食所述霞多丽种子粉补充饮食的仓鼠的脂肪或肝组织中mRNA水平相对于喂食对照饮食的仓鼠的脂肪或肝组织中mRNA水平的相对值。
7.2.结果
比较喂食所述霞多丽种子粉补充饮食的仓鼠的脂肪组织中的基因表达相对于喂食对照饮食的仓鼠的脂肪组织中的基因表达的相对基因表达水平如图16所示。比较喂食所述霞多丽种子粉补充饮食的仓鼠的肝组织中的基因表达相对于喂食对照饮食的仓鼠的肝组织中的基因表达的相对基因表达水平如图17所示。
肝ACOX1,CYP51和CYP7al基因的表达在喂食所述霞多丽种子粉补充饮食的仓鼠中显著升高,而同时肝ABCG5和SCD1基因表达在喂食所述霞多丽种子粉补充饮食的仓鼠中却显著下降。
ACOX1参与脂肪氧化的调节,CYP51参与胆固醇生物合成的调节, CYP7al参与胆汁酸合成的调节,SCD1参与脂肪合成,ABCG5参与了胆固醇向肠内返回运输。因此,所述结果表明,补充霞多丽种子粉的饮食可以降低胆固醇和/或胆汁的再吸收,导致所述肝中的水平降低。所述结果进一步表明,补充霞多丽种子粉的饮食可以通过肝基因对脂肪氧化上调(ACOX1)和/或通过脂肪合成的下调(SCD1)而降低体重增益。
8.实施例4:霞多丽种子粉和霞多丽葡萄种子提取物对比于市售葡萄种子提取物 的健康益处的比较
8.1.材料&方法
8.1.1.仓鼠和饮食
雄性金色叙利亚仓鼠(~80g,LVG品系,Charles River)进行驯化,并在实验饮食开始之前随机给予水和5001啮齿动物饮食(LabDiet,PMI International;蛋白,239g/kg;脂肪,50g/kg;非含氮物质,487g/kg;粗纤维,51g/kg;灰分,70g/kg;能量,17MJ/kg;和用于维持健康的足够量矿物质和维生素)长达一个星期。所有葡萄种子提取物都通过HPLC方法进行表征而其喂食用量经过调节而提供7%(w/w)霞多丽种子粉相同的儿茶素量。仓鼠称重并随机分成10组,每组8只仓鼠,并随机喂食包含7%(以重量计)霞多丽种子粉(1组),葡萄种子提取物(2 组),MegaBP葡萄种子提取物(2组),葡萄种子提取物(2组),儿茶素(约0.000785g/g饮食)(1组),表儿茶素(约0.00104g/g 饮食)(1组),或对照饮食(1组)长达4个星期。儿茶素水平用于将每种葡萄种子提取物标准化成霞多丽种子粉的量。表儿茶素和儿茶素都包含在食物饮食中作为这些化合物的对照,它们在其他研究中表明负责血压和脂质调节。生产所述霞多丽种子粉的葡萄生长于北加州海岸山谷中。饮食包含18%作为蛋白的能量,43%作为碳水化合物的能量,39%作为脂肪的能量(其补充有0.1%胆固醇)。每周记录体重而食品摄入每周监测两次。该研究由动物护理和使用委员会(Animal Care and Use Committee) (Western RegionalResearch Center,USDA,Albany,CA)批准。
8.1.2.血浆和组织采集
仓鼠禁食12小时,用异氟烷(Phoenix Pharmaceutical)麻醉。采用预先用EDTA钾溶液(15%wt:v)冲洗的注射器通过心脏穿刺收集血液并在4℃下以2000×g离心30分钟后分离血浆。收集肝,称重,并立即冷冻于液氮中用于分析。
8.1.3.血浆生物标记分析
血浆脂蛋白中的胆固醇如先前所述通过尺寸排阻色谱法进行测定 (German etal,1996.Nutr Res.1996;16:1239-49)。血浆甘油三酯,总胆固醇,游离胆固醇和葡萄糖通过使用具有分析试剂盒的罗氏诊断/日立914 临床分析仪(Roche Diagnostics/Hitachi914Clinical Analyzer)(Roche Diagnostics and Wako Chemicals)的酶比色分析法进行测定。禁食仓鼠的脂联素(B-bridge International)和胰岛素(Mercodia)的血浆浓度使用如前所述的鼠脂联素和超灵敏鼠胰岛素免疫测定试剂盒进行测定(Hung et al,2009,J.Diabetes 1:194-206)。禁食仓鼠中的血糖浓度使用OneTouch Ultrameter(LifeScan)在尾静脉样品中测定。
8.1.4.肝脂质分析
冻干的磨碎肝样品使用加速溶剂提取剂(Dionex)在100℃;13.8MPa 下用75/25己烷/2-丙醇提取。所述样品提取物在罗氏诊断/日立914临床分析仪(Roche Diagnostics)上分析而使用上述的试剂盒测定肝甘油三酯,总胆固醇和游离胆固醇。
8.1.5.粪便胆汁酸和固醇分析
在所述仓鼠宰杀之前立即连续3天收集粪便,并冻干,磨碎和储存于 -20℃下。胆汁酸和固醇通过HPLC如前所述进行测定(Hong et al,2007,. J Agric Food Chem.55:9750-7)。
8.1.6.统计分析
所有数据均表示为平均值±SE。对照和不同饮食组之间的差异通过双尾学生t检验(2-tailed Student's t test)进行确定。当各组的方差不等时,差异显著性采用韦氏检验(Welch's test)进行确定。计算出皮尔逊相关系数而研究血浆总胆固醇,血浆脂联素浓度,肝胆固醇和甘油三酯浓度与肝基因表达的关系(JMP7统计程序,SAS软件研究所(SASInstitute))。显著性定义为P<0.05。
8.2.结果
饲喂霞多丽种子粉的动物的总胆固醇和LDL胆固醇血浆水平比喂食补充市售葡萄种子提取物的饮食的动物显著降低(图18-19),但是喂食补充葡萄种子提取物(L7)的饮食的动物组中的一个是例外。这些数据表明,霞多丽种子粉优于所有,但用于降低总胆固醇和LDL胆固醇测试的商业葡萄种子提取物之一除外。
9.实施例5:霞多丽种子粉对粪便微生物水平的影响
9.1.材料&方法
9.1.1.粪便样品
在第0天(对照)和在第20天(霞多丽种子粉补充的饮食,解百衲种子粉补充的饮食和高脂肪对照饮食)收集实施例1的所述动物的粪便。这些粪便进行干燥和冷冻。
9.1.2.RNA提取和定量
将冷冻粪便样品加入到10倍体积的-ICE(Applied Biosystems,Foster City,CA,USA)中长达至少24h。总RNA使用粪便总RNA纯化试剂盒(Stool Total RNAPurification Kit)(Norgen Biotek Corp.,加拿大)按照厂商方案进行制备。
所述分离的RNA的数量和纯度通过分光光度法(A260/A280比率) 进行验证。对于每一样品使用250ng总RNA和PrimeScriptTMRT试剂盒 (PrimeScriptTM RT reagent kit)(Takara Bio Inc.,Shiga,Japan)根据厂商方案制备cDNA。
使用AB 7500实时PCR系统(Applied Biosystems,Foster City,CA, USA)实施实时PCR对肠细菌16S rRNA基因表达进行定量。使用SYBR Premix Ex Taq(Takara Bio Inc.,Shiga,日本)实施双份扩增。使用表1 所示引物的扩增采用以下温度曲线进行实施:一个循环在95℃下进行30 秒,以下进行40个循环:变性在95℃下进行5~10s,在最佳温度下退火(annealating)5~15s并在72℃下延伸20s。
表1
9.2.结果
喂食含霞多丽或解百衲种子粉的高脂肪饮食的仓鼠的粪便样品的定量实时PCR结果表明,所述肠道微生物通过消耗所述粉得到调节。在喂食四种饮食的仓鼠的粪便物中测得的总细菌水平如图20所示。细菌亚群的测量水平如图21-26所示。
喂食补充霞多丽种子粉的高脂饮食的仓鼠粪便样品相比于喂食所述高脂肪对照饮食的仓鼠粪便样品表现出双歧杆菌属,乳酸杆菌属和肠杆菌属的水平显著降低,而肠球菌属,梭菌属IV群(cluster)的细菌和脆弱拟杆菌属的水平显著增加。
喂食补充解百衲种子粉的高脂饮食的仓鼠粪便样品相比于喂食所述高脂肪对照饮食的仓鼠粪便样品表现出肠杆菌水平显著降低,而肠球菌属和脆弱拟杆菌群水平显著增加。
10.具体实施方式和文献引入
本申请中引用的所有出版物,专利,专利申请和其它文献都出于所有目的以其全文结合于本文中作为参考,其程度如同每一单个出版物,专利,专利申请和其它文献各自指出出于所有目的结合于本文中作为参考。
尽管已经举例说明和描述了各种具体实施方式,但应该理解的是,各种变化都能够做出而不脱离本发明的精神和范围。
Claims (1)
1.一种提高哺乳动物中脂质代谢的方法,包括向所述哺乳动物给予有效提高脂质代谢的量的霞多丽种子产品。
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