CN110398586A - 果糖胺测定试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种果糖胺测定试剂盒，其试剂盒的配方为：R1三羟甲基氨基甲烷100mmol/L、碳酸钠50mmol/L、曲拉通100(TX‑100)5g/L、叠氮钠1g/、PH 10.8并且通过长期实验观察，使用INT底物，试剂稳定性好，放置18个月无析出现象。

Description

果糖胺测定试剂盒
技术领域
本发明属于属于临床检测技术领域，具体涉及一种果糖胺测定试剂盒。
背景技术
果糖胺测定试剂盒用于体外定量测定人体血清中果糖胺的含量；果糖胺(FRUCT)的测定反映糖化血清蛋白水平，可了解患者过去1－2周内平均血糖的水平；并不受临时血糖浓度波动的影响，为临床糖尿病人较长时间血糖控制水平的研究指标。
血清葡萄糖与血清蛋白分子末端的氨基发生非酶促糖化反应，形成高分子的酮胺结构（果糖胺）在碱性环境中还原硝基四氮唑蓝生成染料。以糖化血清蛋白为标准参照物进行比色测定。
目前NBT法测定血清果糖胺存在抗干扰差，试剂稳定性差底物NBT长期放置析出的问题，故需要对该方法进行改进，研发一种稳定且抗干扰强的果糖胺测定试剂盒是目前急需的。
三检验原理
血清中的果糖胺，在碱性条件下与硝基四氮唑兰反应生成紫红色化合物，其颜色的深浅与血清果糖胺含量成正比，与同样处理的校准品比较后可求得血清中果糖胺的含量。
发明内容
针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种稳定且抗干扰强的果糖胺测定试剂盒。
本发明的技术方案是：
一种果糖胺测定试剂盒，其试剂盒的配方为：
R1 三羟甲基氨基甲烷 100mmol/L
碳酸钠 50mmol/L
曲拉通100（TX-100） 5g/L
叠氮钠 1g/L
PH 10.8
R2 甘氨酸 5mmol/L
乙二醇 100ml/L
碘硝基氯化四氮唑蓝（INT） 1mmol/L
叠氮钠 1g/L
PH 6.0。
本发明为液体双试剂，R1为强碱性缓冲液，与样本混合后在37度孵育5分钟，能有效破坏样本中的抗坏血酸，胆红素，尿酸等还原性物质，能有效消除血清中还原性物质的非特异性干扰。
目前市场上果糖胺测定试剂使用的底物为氯化硝基四氮唑蓝（NBT），该底物水溶性差，长期放置会析出，影响试剂稳定性。本发明发现，在甘氨酸缓冲液中，加入乙二醇增溶，底物碘硝基氯化四氮唑蓝（INT）的溶解性明显强于氯化硝基四氮唑蓝（NBT），能有效提高试剂线性范围。并且通过长期实验观察，使用INT底物，试剂稳定性好，放置18个月无析出现象。
附图说明
图1 是本发明的试剂盒与进口试剂测临床样本结果对比图；
图2是本发明的试剂盒与进口试剂测临床样本测定示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对于本发明作进一步的说明：
配方
R1 三羟甲基氨基甲烷 100mmol/L
碳酸钠 50mmol/L
曲拉通100（TX-100） 5g/L
叠氮钠 1g/L
PH 10.8
R2 甘氨酸 5mmol/L
乙二醇 100ml/L
碘硝基氯化四氮唑蓝（INT） 1mmol/L
叠氮钠 1g/L
PH 6.0
检验方法
1、基本参数
1）反应类型：两点终点法 2）温度：37℃
3）主波长：546nm 4）次波长：660nm
5）样本量：20μl 6) 试剂1（R1）量：300μl
7）试剂2（R2）量：100μl 8) 反应方向：升反应
2、测定
样本：20μl
参见图2
3、校准
校准方法：本产品采用两点校准。
4、计算
以校准品的吸光度变化值△A（A校准-A空白）为纵坐标，其相应的浓度C校准为横坐标绘制校准曲线。根据样本的△A（A测定-A空白）在校准曲线上找出对应的样本浓度。
本发明为液体双试剂，R1为强碱性缓冲液，与样本混合后在37度孵育5分钟，能有效破坏样本中的抗坏血酸，胆红素，尿酸等还原性物质，能有效消除血清中还原性物质的非特异性干扰。
目前市场上果糖胺测定试剂使用的底物为氯化硝基四氮唑蓝（NBT），该底物水溶性差，长期放置会析出，影响试剂稳定性。本发明发现，在甘氨酸缓冲液中，加入乙二醇增溶，底物碘硝基氯化四氮唑蓝（INT）的溶解性明显强于氯化硝基四氮唑蓝（NBT），能有效提高试剂线性范围。并且通过长期实验观察，使用INT底物，试剂稳定性好，放置18个月无析出现象。
试剂性能指标
1、参考区间：1.15—2.25mmol/L，此数据参考《全国临床检验操作规程》，并对200个健康个体进行实验验证。
2、试剂空白：试剂空白吸光度A≤0.12。
3、分析灵敏度：浓度为2.10mmol/L的样本，吸光度差值（ΔA）≥0.025。
4、线性范围：在[0.20，8.00]mmol/L范围内，理论浓度与实测浓度的线性相关系数（r）≥0.99.
5、精密度：重复性CV%≤5.0%；批间差≤6.0%。
6、准确度：比对试验，相关系数r2≥0.95，相对偏差不超过±15%。
干扰实验结果 单位：mmol/L
从实验结果可以看出还原性物质对血清果糖胺测定有明显正干扰，而本发明试剂盒几乎不受影响。
试剂长期稳定性实验结果
与进口试剂进行临床样本的方法学比对，结果如下：
从实验数据（图1）可以看出，该试剂盒与进口试剂测临床样本结果基本一致。
四、小结
本发明提供的液体双试剂抗干扰能力强，稳定性好，符合预期要求。
其中，上述试剂1（R1）的缓冲液可以是三羟甲基氨基甲烷，2-氨基-2-甲基-1-丙醇，3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸等中的任意一种，优选三羟甲基氨基甲烷缓冲液。
试剂1（R1）的表面活性剂为非离子表面活性剂，可以是吐温-20，吐温-80，EmulgenA90，曲拉通100，聚氧乙烯醚月桂醇等中的一种或多种的组合。
试剂1（R1）的稳定剂为乙二胺乙二胺四乙酸二钠。
试剂1（R1）的防腐剂为叠氮钠。
试剂2（R2）的缓冲液可以是甘氨酸，双甘肽，柠檬酸，硼酸等中的任意一种，优选甘氨酸缓冲液。
试剂2（R2）的增溶剂，可以是甘油，二甲亚砜，二甲基甲酰胺，聚氧乙烯烷基醚等中的一种或多种的组合。
试剂2（R2）的底物为碘硝基氯化四氮唑蓝（INT）。
试剂2（R2）的防腐剂为叠氮钠。
在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims (1)

1.一种果糖胺测定试剂盒，其特征在于，其试剂盒的配方为：
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