CN1103812C - 人β－2整联蛋白α亚基 - Google Patents

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Abstract

公开了编码被称为αd的新的人β2整联蛋白α亚基多肽的DNA，以及通过重组技术生产该DNA的方法和材料。还公开了融合蛋白，其包括αd蛋白胞外片段，αdI结构域片段或全长αd多肽和人免疫球蛋白稳定区。还公开了αd特异性结合分子可用于调制αd的生物学功能。还公开了来自其他物种的显示了与人αd编码序列具有同源性的DNA。

Description

人β-2整联蛋白α亚基
本申请系未决的，于1994年12月21日提交的美国申请系列号08/362,652的部分继续，08/362,652是1994年8月5日提交的，于1995年11月28日作为美国专利5,470,953授权的美国申请系列号08/286,889的部分继续，而08/286,889是1993年12月23日提交的，于1995年8月1日作为美国专利5,437,958的美国申请系列号08/173,497的部分继续。
                       发明领域
本发明涉及编码新的人β2整联蛋白α亚基的多核苷酸的克隆和表达，这种新的人β2整联蛋白α亚基被称为αd，在结构上与已知人β2整联蛋白α亚基CD11a、CD11b和CD11c相关。本发明亦涉及从其他物种中分离的，显示出与人αd编码序列同源性的多核苷酸。
                      发明背景
整联蛋白是一组膜联蛋白，它们主动参与细胞粘着。整联蛋白是包含一个与β亚基非共价相联的一个α亚基的跨膜异二聚体。迄今，至少鉴定了14种α亚基和8种β亚基〔参见Springer综述，自然346：425-434(1990)〕。一般地，将能与多于一个α亚基相联的β亚基和共享一个共同的β亚基的异二聚体分类为整联蛋白类群中的亚家族。
一组被限于在白细胞中表达的人整联蛋白的特征是共同的β2亚基。这种细胞特异性表达的结果是，这些整联蛋白一般被称为白细胞整联蛋白，Leu-CAM或白细胞整联蛋白(leucointegrin)。因为该共同的β亚基，这一类群的另一种名称是β2整联蛋白。先前，已将β2亚基(CD18)与三种不同的α亚基，CD11a，CD11b和CD11c之一种相结合分离出来。编码人CD18的cDNA的分离之描述见Kishimoto等人，细胞48：681690(1987)。在正式的WHO命名法中，异二聚体蛋白被称为CD11a/CD18，CD11b/CD18和CD11c/CD18；在普通命名法中，它们分别被称为LFA-1，Mac-1或Mol和p150，95或LeuM5〔Cobbold等，白细胞分型III，McMichael(编)牛津出版社，p.788(1987)〕。已证实人β2整联蛋白α亚基CD11a，CD11b和CD11c在还原条件下，在电泳时分别以大约180kD，155kD和150kD的表观分子量迁移，已经克隆了编码这些亚基的DNA〔CD11a，Larson，et al.，细胞生物学杂志，108：703-712(1989)；CD11b Corbi et al.，生化杂志263：12403-12411(1988)和CD11c，Corbi，等EMBO J.6：4023-4028(1987)〕。由分子量近似一致性所确定的、假定的人β2整联蛋白同系物，在包括猴和其它灵长类〔Letvin等，血液，Blood 61：408-410(1983)〕，小鼠〔Sanchez-Madrid，et al.，实验医药杂志154：1517(1981)〕，和狗〔Moore，et al.，组织抗原36：211-220(1990)〕的其他物种中，被各不相同地鉴定。
来自其它物种的假定同系物的绝对分子量显示出明显的变动〔见，例如，Danilenko等，组织抗原40：13-31(1992)〕，而且在缺乏序列资料的条件下，人整联蛋白亚基和那些在其他物种中鉴定的分子之间的确定的相关性是不可能的。而且，亦观察到不同物种之间，蛋白质家族的成员的数目是变动的。例如，考虑到在兔中比在人类中分离到更多的IgA同种型〔Burnett.等，EMBO J.8：4041-4047(1989)和Shneiderman等，美国国家科学院院报(USA)86：7561-7565(1989)〕同样的，在人类中，先前至少有金属硫蛋白的六种变体被鉴定〔Karin和Richards，自然299：797-802(1982)和Varshney.等，分子细胞生物学6：26-37(1986)〕，而在小鼠中，仅有两种此类变体是明显的〔Searle.等，分子细胞生物学4：1221-1230(1984)〕因而，一个物种中的某一蛋白质家族的多个成员的存在并不必然地意味着在其他物种中存在着相应的家族成员。
就具体的β2整联蛋白而言，在狗中，观察到推测的人CD18的狗β2相似物能够与多至四个的潜在的不同的α亚基形成二聚体〔Danilenko等，见上〕。用狗脾细胞免疫小鼠而产生抗体造成了这样的单克隆抗体，它能够免疫沉淀试验性设计的，基于基本相近而不相同的分子量的人CD18，CD11a，CD11b和CD11c的狗同系物的蛋白质。另一个抗狗脾细胞抗体Call.8H2识别并免疫沉淀第四种α样狗亚基，且能与β2亚基相结合，但具有一独特的分子量并限于在分化的组织巨噬细胞亚群中表达。
用鼠树状细胞免疫仓鼠产生抗体造成了两种抗-整联蛋白抗体〔Metlay等，实验医学杂志171：1753-1771(1990)〕。一种抗体是2E6，免疫沉淀一种主要的异二聚体，该异二聚体具有近似分子量为在分子量范围为150-160kD的小带之外的180kD和90kD的亚基。第二种抗体是N418，沉淀另一种明显的异二聚体。该异二聚体具有近似分子量为150kD和90kD的亚基。基于细胞粘附阻断实验，假设抗体2E6识别人CD18的鼠相似物。而N418抗原的分子量则提示识别人CD11c/CD18的鼠同系物，进一步的分析表明鼠抗原展示了与从人CD11c/CD18所观察的一致的组织分布形式。
由狗Call.8H2抗体和鼠N418抗体识别的抗原能够代表先前确定的狗和鼠α亚基的变体种类(例如，一种糖基化或剪接变体)。另一种选择是，这些抗原可能代表独特的狗或鼠α亚基，在没有关于一级结构的具体信息情况下，这些选择方案是不能区别的。
在人类中，CD11a/CD18在所有白细胞上表达。CD11b/CD18和CD11c/CD18基本上限于在单核细胞，粒细胞，巨噬细胞和天然杀伤(NK)细胞上表达，但CD11c/CD18亦在一些B细胞类型上被检测到。一般地，CD11a/CD18主要位于淋巴细胞上，CD11b/CD18则主要位于粒细胞上，而CD11c/CD18主要位于巨噬细胞上〔综述见Arnaout，血液75：1037-1050(1990)〕。然而，α链的表达随着各自的细胞类型的激活和分化状态而变化〔综述参见，Larson和Springer，Immunol.Rev114：181-217(1990)〕
使用能够阻断β2整联蛋白相关细胞粘着的单克隆抗体证明了β2整联蛋白参予了人类免疫和炎症应答。例如：CD11a/CD18，CD11b/CD18和CD11c/CD18主动参予了天然杀伤(NK)细胞与淋巴瘤和腺癌细胞的结合〔Patarrogo，et al.，免疫学综述114：67-108(1990)〕，粒细胞积聚〔Nourshargh et al.，免疫学杂志，142：3193-3198(1989)〕，依赖于粒细胞的胞质渗漏〔Arfors，等，血液69：338-340(1987)〕，经刺激的白细胞的趋化性应答〔Arfors等，见上〕以及白细胞粘着到血管内皮细胞〔Price.等，免疫学杂志139：4174-4177(1987)和Smith等，临床研究杂志J.Clin.Invest.83：2008-2017(1989)〕。β2整联蛋白在免疫和炎症应答中的基础作用在被称为白细胞粘着缺陷(LAD)的临床综合征中明显起来，该综合征的临床征状包括复发的和经常危及生命的细菌感染。LAD由β2亚基的异源性突变引起〔Kishimoto，等，细胞50：193-202(1987)〕，且疾病状态的严重程度与β2亚基表达缺乏的程度成比例。完整的整联蛋白异二聚体的形成被β2突变破坏〔Kishimoto等，见上〕。
令人感兴趣的是，至少一种特异于CD18的抗体显示出抑制人类免疫缺陷病毒病毒I型(HIV-1)合胞体病毒在体外的形成，尽管这一抑制的准确机制还不清楚〔Hildreth和Orentas，科学244：1075-1078(1989)〕。这一意见与CD11a/CD18的主要反受体ICAM-1的发现相一致，ICAM-1也是鼻病毒血清型的主要类群的一个表面受体〔Greve等，细胞56：839(1989)〕。
β2整联蛋白结合活性在人免疫和炎症应答中的重要性加强了建立对于这一类表面蛋白的更完整的了解的必要性。鉴定这一亚群的尚且未知成员及其反受体，及产生单克隆抗体或其他可改变β2整联蛋白的生物学活性的可溶性因子将提供用于治疗调停β2整联蛋白相关的免疫和炎性应答的实际手段。
                      发明简述
一方面，本发明提供新的纯化和分离的编码新的人β2整联蛋白α亚基，αd及其变异体(如缺失、添加或替换类似物)的多核苷酸(如DNA和RNA转录本，其有义链和反义链)其中所述变异体具有与αd固有的结合和/或免疫性。优选的本发明的DNA分子包括cDNA，基因组DNA和完全的或部分化学合成的DNA分子。本优选的多核苷酸是SEQ IDNO：1给出的DNA，它编码SEQ ID NO：2的多肽。还提供了重组质粒和病毒DNA构建物(表达构建物)，它包括αd编码序列，其中αd编码序列可操作地连接到一个或多个同源或异源转录调节元件上。
本发明还提供了分离的和纯化的、展示了与编码人αd的多核苷酸同源性的小鼠和大鼠多核苷酸。优选的小鼠多核苷酸在SEQ ID NO：52中给出；优选的大鼠多核苷酸在SEQ ID NO：54中给出。
本发明的另一方面是提供了用本发明的DNA序列转化或转染的原核或真核细胞，其表达αd多肽或其变异体。本发明的宿主细胞在大规模生产αd多肽中特别有用，其中αd多肽可从宿主细胞本身或从宿主细胞生长的培养基中分离。在其细胞外膜表面表达αd多肽的宿主细胞亦可在αd-特异性抗体的生产中用作免疫原。优选地，用αd转染的宿主细胞可以被共转染以表达整联蛋白β2亚基，致使异二聚体的表面表达成为可能。
本发明还提供了纯化的和分离的αd多肽，及其片段或变异体。优选的αd多肽是如SEQ ID NO：2中所示的。本发明的新的αd产物以及αd变异体产物，可以作为天然来源的分离物得到，但是，优选地由涉及本发明的宿主细胞的重组过程产生。αd多肽的完全糖基化，部分糖基化，和完全脱糖基化形式可以通过改变选择用于重组子生产的宿主细胞和/或分离后加工而产生。本发明的变异体αd多肽可包括水溶性的或水不溶性的αd多肽，其包括其中一个或多个氨基酸被缺失或取代的类似物：(1)并不丧失，而且优选提高一种或一种以上αd特异性生物学活性或免疫学特性，或(2)特异性失去一种具体配体/受体结合功能或信号功能。还提供融合多肽，其中αd氨基酸序列与来自其他多肽的氨基酸序列连续地表达。与野生型αd相比，这样的融合多肽具有修饰的生物学的，生物化学的和免疫学的特性。考虑包含便于形成多体的附加氨基酸(例如，赖氨酸或半胱氨酸)残基的类似物多肽。
本发明还包括与αd特异性结合的多肽和其它非肽分子。优选的结合分子包括抗体(如单克隆和多克隆抗体)，反受体(如，天然地发生的或合成的分子)和其它配体，包括那些当αd单克隆抗体和/或特异性反受体出现时，竞争性结合αd的配体。结合分子可用于αd多肽的纯化和鉴定表达αd的细胞型。结合分子还可用于αd的体内结合和/或信号传导活性的调制(即，抑制，阻断或刺激)。
还提供了αd结合分子的试验，包括固定化配体结合试验，溶液结合试验，闪烁接近(scintillation proximity)，双-杂交筛选实验，等。
用于鉴定抗体或其他调制αd活性的化合物的体外实验可以涉及，例如，固定化αd或αd与之结合的天然配体，可检测地标记非固定化的结合伙伴，将结合伙伴共同温育并确定测试化合物在标记结合的量的影响，其中，在测试化合物存在的情况下标记结合与测试化合物不存在的情况下标量结合量相比减少表明测试试剂是αd结合的抑制剂。
用于鉴定调制αd与其配体之间相互作用的化合物的另一种实验类型涉及将αd或其片段固定化于包被了(或浸透了)荧光剂的固体支持物上，将配体用能够激发荧光剂的化合物标记，在推定的调制物化合物存在或不存在的情形之下，将固定化αd与标记的配体相接触，检测荧光剂发射的光，将那些与调制化合物不存在的情形之下的光发射相比，影响了荧光剂的光发射的化合物鉴定为调制化合物。或者是在实验中，将αd配体固定化，而将αd标记。
本发明考虑到的用于鉴定调制αd和配体之间相互作用的化合物的另一方法涉及用包含处于启动子控制之下的报道基因的DNA构建物转化或转导合适的宿主细胞，其中该启动子受具有DNA结合域和激活域的转录因子调节，在宿主细胞内表达第一杂种DNA序列，该序列编码αd的全部或部分和转录因子的DNA结合域或者激活域的第一融合体，在宿主细胞内表达编码配体的全部或部分和未参入第一融合的转录因子的DNA结合域或者激活域的第二融合体的第二杂种DNA序列，通过在推定的调制物存在或不存在的情形之下测量宿主细胞内报道基因产物的产生，而检测在具体宿主细胞内配体与αd的结合，借此评价一种推定的调制化合物对于αd和配体之间的相互作用的影响，将那些与调制化合物不存在的情形之下相比改变了报道基因产物的产生的化合物鉴定为调制化合物。目前本实验中优选使用的是lexA启动子，lexA DNA结合域，GAL4反式激活域，lac Z报道基因，和酵母宿主细胞。
上述实验的一种改进的版本可用于分离编码结合αd的蛋白质的多核苷酸，方法是用包含处于启动子控制之下的报道基因的DNA构建物转化或转染合适的宿主细胞，其中启动子被具有DNA结合域和激活域的转录因子调节，也可用于在宿主细胞内表达编码αd的全部或部分和转染因子的DNA结合域或者激活域的第一融合体的第一杂种DNA序列，用于在宿主细胞内表达编码假定的αd结合蛋白的部分或全部和未参入第一融合体的转录因子的DNA结合域或激活域的第二融合体的第二杂种DNA序列的文库，用于通过检测宿主细胞内报道基因产物的产生而检测αd结合蛋白与αd在具体宿主细胞内的结合，和用于从具体宿主细胞内分离编码αd结合蛋白的第二杂种DNA序列。
本发明还包括产生αd特异性抗体的杂交瘤细胞系。产生分泌单克隆抗体的杂交瘤的技术是本领域公知的。杂交瘤细胞系可以在用纯化的αd或αd变异体，或在细胞外膜表面表达αd或其变体的细胞免疫动物后产生。免疫原细胞的类型包括体内表达αd的细胞，或者是正常情况下在体内一般不表达αd的转染的原核或真核细胞系。目前优选的本发明的抗体由被称为169A，169B，170D，170F，170E，170X，170H，188A，188B，188C，188E，188F，188G，188I，188J，188K，188L，188M，188N，188P，188R，188T，195A，195C，195D，195E，195H，197A-1，197A-2，197A-3，197A-4，199A，199H，和199M的杂交瘤细胞系所分泌。
通过公开αd的DNA和氨基酸序列而贡献的信息的价值是显著的。在实施例的一个系列中，公开的αd cDNA序列使分离包括基因组序列的转录控制元件的人αd基因组DNA序列成为可能。还包括αd等位变异体和异源物种(如大鼠或小鼠)DNA的鉴定。人αd基因组DNA和异源物种DNA的分离可以通过标准DNA/DNA杂交技术，在合适的严格条件下，使用全长或部分αd cDNA序列作探针以筛选合适的文库来完成。或者是，采用基于已知cDNA序列设计的寡核苷酸引物的聚合酶链式反应(PCR)可用于扩增和鉴定基因组αd DNA序列。编码αd多肽，包括其片段和其他变异体的合成DNA可用传统合成方法产生。
本发明的DNA序列信息亦使通过同源重组或“剔除”(“knockout”)策略〔见，如Kappechi，科学244：1288-1292(1989)〕以产生不能表达功能性αd多肽或者是表达变异体αd多肽的啮齿类动物成为可能。这样的啮齿类动物可用作研究体内αd和αd调制物的活性。
本发明的DNA和氨基酸序列亦使分析主动参预反受体结合的αd表位，以及可能调节而不是主动参预结合的表位成为可能。本发明还包括可能参预跨膜信号传导的表位的鉴定。
本发明的DNA还可用于表达αd多肽的细胞型的探测。使用αd DNA以探测αd RNA的标准DNA/RNA杂交技术可用于确定细胞内αd转录的组成型水平，以及应答内部或外部因子的转录水平的改变。反过来，修饰αd转录和/或翻译的因子的鉴定可以用来评价潜在的治疗或预防价值。本发明的DNA亦使αd DNA对细胞RNA进行原位杂交，以在复杂的细胞类群和组织中确定αd特异性信息的细胞定位成为可能。
本发明的DNA还可用于鉴定那些显示与人αd序列同源性的非人多核苷酸序列。拥有非人αd DNA序列允许了人系统的动物模型(包括，例如，转基因模型)的建立。
作为本发明的另一方面，αd特异性单克隆或多克隆抗体可用于免疫组织化学分析，以在组织中将αd定位于亚细胞区室或个别细胞。这类免疫组织化学分析当与原位杂交联合使用以定位αd mRNA和αd基因的多肽产物时特别有用。
表达αd的细胞型的鉴定在治疗及预防剂的开发方面可具有一些有意义的延伸。预期涉及αd的本发明的产物可被用于其中巨噬细胞是疾病过程的必要因素的疾病的治疗。本技术已描述了巨噬细胞活性相关的许多疾病的动物模型。例如，Jntila等人在J.Leukocyte Biol54：30-39(1993)报道了小鼠中，巨噬细胞募集到急性和慢性炎症位点。在大鼠中，Adams等人〔移植53：1115-1119(1992)和移植56：794-799(1993)〕描述了异位腹部心脏同种异体移植术后移植动脉硬化的模型。Rosenfeld等人〔动脉硬化7：9-23(1987)和动脉硬化7：24-34(1987)〕描述了饲食添加胆甾醇的食料的兔中诱导的动脉粥样硬化。Hanenberg等人〔糖尿病32：126-134(1989)〕报道了BB大鼠中依赖于胰岛素的糖尿病的自发发生。Yamada等〔胃肠学104：759-771(1993)〕描述了注射链球菌肽聚糖-多糖聚合物后的大鼠中诱导的炎性肠疾病，慢性肉芽肿性结肠炎。Cromartie等〔J.Exp.Med.146：1585-1602(1977)〕和Schwab等〔感染与免疫59：4436-4442(1991)〕报道了注射链球菌细胞壁蛋白质于大鼠中。导致了关节炎疾病，其特征是外周关节炎症随后关节损伤。最后，Hintinga等人〔Eur.J.Immunol.23：709-715(1993)描述Lewis大鼠中作为多发性硬化模型的实验变应性脑脊髓炎。在这些模型中的每一个，αd抗体其他αd结合蛋白，或αd可溶性形式被假设通过失活巨噬细胞活性而用于减弱疾病状态。
本发明提供了用于治疗这些或其他疾病状态的药物组合物。药物组合物被设计用于抑制αd和其配体之间相互作用以及包括αd的多种可溶和膜联形式(包括完整的αd多肽，或其主动参予αd结合的片段)，αd结合蛋白的可溶和膜联形式(包括抗体，配体，等)，αd结合活性的胞内或胞外调制物，和/或αd和/或αd-配体多肽表达的调制物，包括转录，翻译，翻译后加工和/或细胞内转运的调制子。
本发明还包括用于治疗牵涉到αd结合，或表达αd的细胞的局部积聚的疾病状态的方法，其中患有所述疾病的病人被提供足以调制αd结合水平或足以调制表达αd的细胞类型的积聚量的本发明的药物组合物。本发明的治疗方法可用于例如，但不限于以下疾病，I型糖尿病，动脉粥样硬化，多发性硬化，哮喘，牛皮癣，肺炎，急性呼吸紊乱综合征和类风湿关节炎。
                     附图简述
在考虑下列做为附图参照的描述时，本发明的多种其他方面和优点将是显而易见的：
图1A至图1D包括人氨基酸序列CD11b(SEQ ID NO：3)，CD11c(SEQ ID NO：4)和αd(SEQ ID NO：2)的排列。
                      发明详述
本发明通过下列涉及从人脾cDNA文库中分离编码αd的cDNA克隆的实施例得到说明。更具体的，实施例1说明了应用抗犬αTM1抗体试图探测同源人蛋白质。实施例2详述了犬αTM1的纯化和多肽N-末端测序以设计用于犬αTM1基因PCR扩增的寡核苷酸探针。实施例3述及犬αTM1的大规模纯化，用于内部测序以设计另外的PCR引物。实施例4描述了PCR及内部序列引物的应用以扩增犬αTM1基因的片段。实施例5描述了人αd编码cDNA序列的克隆。实施例6描述了人组织和细胞的关于αdmRNA表达的Northern印迹杂交分析。实施例7详述了人αd表达质粒的构建和用生成的质粒转染COS细胞。实施例8描述了转染的COS细胞中的αd表达的ELISA分析。实施例9描述了用人αd表达质粒转染的COS细胞的FACS分析。实施例10描述了在共转染COS细胞内CD18与αd相联的免疫沉淀。实施例11涉及αd表达构建物在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定转染。实施例12述及依赖于CD18的，αd与细胞间粘着分子ICAM-R，一种ICAM-R突变体蛋白质，和补体因子iC3b的结合。实施例13描述了闪烁接近筛选实验，用以鉴定αd配体/抗配体结合相互作用的抑制剂或增强子(即：调制物)。实施例14描述了编码αd可溶形式的表达质粒的构建，和该表达产物的结合分析。实施例15涉及αd特异性多克隆血清和单克隆抗体的产生。实施例16描述了使用抗αd多克隆血清分析αd组织分布，αd在外周血白细胞中的表达，和在炎性和非炎性滑膜中αd表达。实施例17描述了显示与人αd基因序列具有同源性的大鼠cDNA序列分离。实施例18涉及大鼠αd表达质粒、包括I结构域/IgG融合蛋白的大鼠αd结构域表达载体的构建，以及针对全长的和I结构域融合蛋白的单克隆抗体的产生。实施例19述及显示了与人αd基因序列有同源性的鼠cDNA序列的分离。实施例20描述了用于证实序列分析的另外小鼠αd cDNA克隆的分离。实施例2 1涉及多种小鼠组织的原位杂交分析，以确定推定的人αd的小鼠同系物的组织和细胞特异性表达。实施例22描述了推定的编码人αd的小鼠同系物的表达构建物的产生。实施例23述及“剔除”小鼠的设计，其中编码人αd的推定的小鼠同系物的基因被打破。实施例24描述了显示对于人αd编码序列有同源性的兔cDNA克隆的分离。实施例25描述了人类疾病的动物模型，其中αd的调制被分析其治疗能力。实施例26描述了在疾病状态动物模型中，αd的表达。
                         实施例1探测狗αTM1的人同系物的尝试
狗αTM1特异性单克隆抗体Call.8H2〔Moore et al.，见上〕被检测其与人外周血白细胞的交叉反应性，试图鉴定狗αTM1的人同系物。在0.1％叠氮钠存在的情况下，将细胞制备物(一般是1×106细胞)与未稀释的杂交瘤上清液或纯化的小鼠IgG-阴性对照抗体(10μg/m1)冰浴。通过随后与6μg/ml FITC-偶联马抗-小鼠IgG(载体实验室，Burlingame，CA)温孵而检测单克隆结合。经染色的细胞用2％ w/v的溶于磷酸盐缓冲液(PBS)的多聚甲醛固定，并且用Facstar Plus荧光激活细胞分类仪(Becton Dickinson.Mountain View，CA)。一般地，使用对数扩增法就荧光强度对10,000细胞进行分析。
结果表明Call.8H2不同人外周血白细胞表达的表面蛋白质交叉反应，而对照细胞，赘生性狗外周血淋巴细胞基本上都是αTM1阳性。
因为狗α亚基特异性的单克隆抗体Call.8H2不与人同系物交叉反应，狗αTM1 DNA的分离被认为是分离假如存在的人基因对应物的必备前提。
                           实施例2用于N末端序列分析的狗αTM1的亲和纯化
亲和纯化狗αTM1以确定用于寡核苷酸探针/引物设计的N-末端氨基酸序列。简言之，抗-αTM1单克隆抗体Call.8H2被偶联到Affigel 10层析树脂(BioRad，Hercules，CA)，并通过特异性抗体-蛋白相互作用分离蛋白质。按照BioRad提供的方案，以大约每毫升树脂5mg抗体的浓度将抗体偶联到树脂上。结合反应之后，移去过量抗体。用三倍体积的0.1M乙醇胺封闭树脂。然后用30倍体积的磷酸缓冲液(PBS)洗涤。
一只25克的狗脾在250ml含0.32M蔗糖的25mM Tris-HCl，pH8.0溶液，并加有蛋白酶抑制剂的缓冲液中匀浆。于1000g离心15分钟将核和细胞碎片沉淀。于100,000g离心30分钟将膜从上清液中沉淀下来。膜沉淀重悬于200ml溶胞缓冲液(50mM NaCl，50mM硼酸，pH8.0，加有2％ NP-40)中并冰浴1小时。不可溶物质于100,000g离心60分钟沉淀下来。10毫升澄清的溶胞物被转移到盛有上述的0.5mlCall.8H2结合的Affrgel 10树脂的15ml聚丙烯管中。将管于4℃旋转温孵过夜，随后用50柱体积D-PBS洗涤。然后将树脂转移到微量离心管中，于1ml Laemmli(非还原性)样品缓冲液中煮沸10分钟。该缓冲液含有0.1M Tris-HCl，pH6.8，2％ SDS，20％甘油和0.002％溴酚蓝。离心沉淀树脂并弃去；上清液用1/15体积β-巯基乙醇(Sigma，St，Louis，MO)在7％聚丙烯酰胺凝胶上电泳。如下将分离的蛋白质转移到Immobilon PVDF膜(Millipore，Bdeford，MA)上。
将凝胶在去离子的，Millipore-过滤水中洗涤一次，在含10％甲醇的10mM 3-〔环己胺〕-1-丙磺酸(CAPS)中平衡15-45分钟。Immobilon膜用甲醇润湿，在过滤水中润洗，在CAPS转移缓冲液中平衡15-30分钟。最初的转移使用Biorad转移仪于70伏进行3小时。转移之后移取Immobilon膜，在过滤的0.1％ R250考马斯中染色10分钟。膜在50％甲醇/10％乙酸中脱色三次，每次脱色10分钟。脱色之后，在滤过水中洗涤并空气干燥。
检测到大约是150kD，95kD，50kD和30kD的谱带。设想50kD和30kD带由抗体污染造成。试图对150kD和95kD带进行N-末端测序，但是95kD蛋白被封闭因而妨碍了测序。150kD的蛋白带被从膜上切下。用Applied Biosystems(Foster City，CA)Model 473A蛋白质测序仪，按厂家说明直接测序。得出的氨基酸序列在SEQ ID NO：5中用单字母氨基酸命名给出。
    FNLDVEEPMVFQ                        (SEQ ID NO：5)
鉴定的序列包括整联蛋白家族的α亚基的特征性FNLD序列(Tamura，等，J.Cell.Biol，111：1593-1604(1990))。引物设计及扩增犬αTM1序列的尝试
由N-末端序列信息，设计了三种用于杂交的寡核苷酸探针：基于哺乳动物密码子的使用，它们分别是：a)“Tommer”，一种完全简并的寡核苷酸；b)“Patmer”，一种部分简并的寡核苷酸；和c)“Guessmer”，一种非简并性核苷酸。这些探针分别在SEQ ID NO6、7和8中给出。在本文中，这些和所有其他核苷酸序列的核酸符号按照37C.F.R.§1.882。
5′-TTYAAYYTGGAYGTNGARGARCCNATGGTNTTYCA-3′
                                         (SEQ ID NO：6)
5′-TTCAACCTGGACGTGGAGGAGCCCATGGTGTTCCAA-3′
                                         (SEQ ID NO：7)
5′-TTCAACCTGGACGTNGAASANCCCATGGTCTTCCAA-3′
                                         (SEQ ID NO：8)
基于测序资料，使用这些寡核苷酸在几种对克隆到λZAP(Stratagene，La Jolla，CA)犬脾/外周血巨噬细胞cDNA文库低严格度杂交中没有检测到相关克隆。
随后基于推导的N-末端序列设计了四种其它寡核苷酸引物，称为5′Deg，5′Spec，3′Deg和3′Spec(如SEQ ID NO：9、10、11和12分别给出的，其中Deg指简并性，Spec指非简并性)，试图由噬菌体文库DNA经PCR扩增犬αTM1序列，其中DNA从上述的Stratagene文库的平板裂解物中纯化。5′-TTYAAYYTNGAYGTNGARGARCC-3′          (SEQ ID NO：9)5′-TTYAAYYTGGACGTNGAAGA-3′             (SEQ ID NO：10)5′-TGRAANACCATNGGYTC-3′                (SEQ ID NO：11)5′-TTGGAAGACCATNGGYTC-3′               (SEQ ID NO：12)
αTM1寡核苷酸引物与T3或T7载体引物配对，其分别在SEQ IDNO：13和14中给出，它们与λZPA中发现的Bluescript噬菌体质粒嵌合体的多聚接头区的侧翼序列杂交。
5′-ATTAACCCTCACTAAAG-3′               (SEQ ID NO：13)
5′-AATACGACTCACTATAG-3′               (SEQ ID NO：14)
PCR扩增在含镁盐的Taq缓冲液(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)中完成，其中含150ng文库DNA，1μg每种引物，200μM dNTP和2.5单位Taq聚合酶(Boehringer Mannheim)，产物经1％琼脂糖凝胶电泳分离，凝胶用Tris-乙酸盐-EDTA(TAE)缓冲液配制，含有0.25μg/ml溴化乙锭。于10×SSPE洇渍(Wick)过夜，而将DNA转移到Hybond(Amersham，Arlington Heights，IL)，转移之后，固定化的DNA用含0.6m NaCl的0.5M NaOH变性，用配制于1.5m NaCl的1.0M Tris-HCl pH8.0中和，然后，再用Stratalinker(Stratagene)交联仪UV交联之前，用2×SSPE洗涤两遍。膜于预杂交缓冲液(5×SSPE，4×Denhardts，0.8％ SDS，30％甲酰胺)中于50℃振荡温孵2小时。
用Boehringer Mannheim激酶缓冲液，其具有100-300 μCi γP32-dATP和1-3单位多核苷酸激酶将寡核苷酸探针5′Deg，5′Spec，3′Deg，3′Spec(分别是SEQ ID NO：9、10、11和12)于37℃标记1-3hr。用10mM Tris-HCl，pH8.0，1mM EDTA(TE)缓冲液经Sephaden G-25精细(Pharmacia，Piscataway，NJ)层析移去未参入的标志。流出物直接加至预杂交溶液。膜于42℃，振荡与探针杂交16小时，并重复洗涤，经最终1×SSPE/0.1％ SDS于50℃严格洗涤15分钟。然后将印渍于-80℃曝光kodak X-Omat AR胶片1-4小时。
寡核苷酸5′Deg，5′Spec，3′Deg和3′Spec仅能和它们被用作引物的反应的PCR产物杂交，而不能和期待它们未被用作引物的反应的PCR产物杂交。因而，得出结论，没有PCR产物是αTM1特异性的，因为没有产物和所有的合适的探针杂交。
                              实施例3用于内部测序的大规模亲和纯化犬αTM1
为提供其他用于引物设计的氨基酸序列，纯化犬αTM1以用于内部测序。来自于成年犬的两个部分脾的三个冷冻脾切块(大约每块50g)和冷冻细胞被用于产生用于内部测序的蛋白质。50g脾用Waring搅切机在200-300ml硼酸缓冲液中匀浆。匀浆物用1体积含有4％ NP40的缓冲液稀释。将混合物温和搅拌至少一小时。匀成的溶胞物通过2,000g离心20分钟以清除大的碎片，然后用Corning(Corning，NY)prefilter或Corning 0.8微米滤器过滤。经Corning 0.4微米滤器系统过滤，将溶胞物进一步澄清。
脾溶胞物和抗体结合的Affigel 10树脂(如实施例2中描述的)以150∶1的体积比合并，其体积是100ml于4℃振荡温孵过夜。于1000g离心5分钟后，移取溶胞物，如上与更多的抗体结合Affigel 10树脂合并，并温孵过夜。合并吸附的树脂部分并用50体积D-PBS/0.1％吐温20洗涤并将树脂转移到50ml Biorad柱上。用3-5倍体积的0.1M甘氨酸(pH2.5)将吸附的蛋白质从树脂上洗脱下来。收集大约900ml的级分并用100μl 1M Tris缓冲液，pH8.0中和。从每一级分中取15μl等份体积在等体积的含有1/15体积的1M二硫苏糖醇(DTT)的2×Laemmli样品缓冲液中煮沸，这些样品在8％ Novex(San Diego，CA)聚丙烯酰胺凝胶上电泳，通过考马斯染色，或按制造商提供的方案使用Daiichi试剂盒(Enprotech，Natick，MA)银染而可被肉眼观察。合并含有最大量的蛋白质的级分，真空浓缩。存留的溶液用还原的Laemmli样品缓冲液稀释到50％，在1.5mm 7％聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，缓冲液是tris-甘氨酸/SDS缓冲液。采用Hoefer转移仪按实施例2中描述的方法将蛋白质从凝胶上转移到Immobilon膜上。
从10PVDF膜上切下对应于犬αTM1的蛋白带，得到大约47μg总蛋白。将带在4ml 50％甲醇中脱色5分钟，空气干燥并切成1×2mm小片。将膜碎片于4℃浸没于2ml 95％丙酮中30分钟，偶尔剧烈振动(vortex)，然后空气干燥。
在蛋白水解酶切膜所结合的蛋白质之前，3mg溴化氰(CNBr)(Pierce，Rockford，IL)溶于1.25ml 70％甲酸中。该溶液加到盛有PVDF膜碎片的试管中，将该管避光室温保存24小时。将上清液(S1)转移到另一试管中，将膜碎片用0.25ml 70％甲酸洗涤。移取上清液(S2)，加至原来的上清液中(S1)将2ml Milli Q水加到合并的上清液(S1和S2)，将溶液冻干。N2气下干燥PVDF膜，用1.25ml的60％乙腈，0.1％四氟乙酸于42℃再次萃取17小时。移取上清液(S3)，将膜碎片再次用1.0ml 80％乙腈，0.08％TFA于42℃再次萃取1小时，该上清液(S4)与原有上清液(S1、S2和S3)合并并真空干燥。
干燥的CNBr片段溶于63μl 8M脲，0.4M NH4HCO3中。该片段在5μl 45mM二硫苏硫醇(DTT)中还原，然后于50℃保温15分钟。溶液冷却至室温，通过加入5μl 100mM碘乙酰胺(Sigma，St.Louis，MO)而将片段烷基化。室温保温15分钟后，将样品用187μl Milli Q水稀释，使其脲的终浓度为2.0M。以酶∶蛋白质为1∶2.5(w∶w)的比率加入胰蛋白酶(Worthington，Freehold，NJ)，蛋白质于37℃消化24小时。加入30μl TFA而终止消化。
在Waters 625LC系统(Millipore，Milford，MA)上使用0.05％ TFA和HPLC水(buffer A)平衡的2.1×250mm，5微米Vydac C-18柱(Vydac，Hesperia，CA)上高效液相层析(HPLC)分离蛋白质片段。肽用配制于0.04％ TFA中的80％的乙腈(buffer B)的增长的浓度洗脱，其中65-95分钟bufer B的梯度是38-75％，在95-105分钟，bufferB的梯度是75-98％。肽在0.2ml/分的流出速度下分级分离，在210nm检测。
分级分离之后，通过在Applied Biosystems Model 437A蛋白质测序进行自动Edman降解而分析肽的氨基酸序列，采用制造商的标准循环，和Model 610A Data Analysis软件，1.2.1版本。所有的测序试剂由Applide Biosystem供给。8个内部片段中的7个的氨基酸序列在下面给出，其中“X”表示氨基酸的身份尚未被确定。
VFQEXGAGFGQ                              (SEQ ID NO：15)
LYDXVAATGLXQPI                           (SEQ ID NO：16)
PLEYXDVIPQAE                             (SEQ ID NO：17)
FQEGFSXVLX                               (SEQ ID NO：18)
TSPTFIXMSQENVD                           (SEQ ID NO：19)
LVVGAPLEVVAVXQTGR                        (SEQ ID NO：20)
LDXKPXDTA                                (SEQ ID NO：21)引物设计
获得一个内部氨基酸序列(在SEQ ID NO：22中给出)被用于设计一个完全简并性寡核苷引物，被称为p4(R)，在SEQ ID NO：23中给出。
FGEQFSE                                  (SEQ ID NO：22)
5′-RAANCCYTCYTGRAAACTYTC-3′            (SEQ ID NO：23)
                            实施例4犬αTM1片段的PCR克隆
从双链犬脾cDNA中PCR扩增犬αTM1基因5′部分。
A.双链犬脾cDNA的产生
来自于年青狗脾的1g冷冻材料在干冰上于液氮中研磨，在20mlRNA-Stat 60缓冲液(Tel-Test B.Inc.Friendswood，TX)中匀浆。加入4ml氯仿，于12,000g离心15分钟而提取溶液。加入10ml乙醇，将RNA从水相层中沉淀出来。在Dynal Oligo dT Dynabeads(Dynal，Oslo，Norway)上选择poly A+RNA。合并五份100μg总RNA，同等体积2×结合缓冲液(20mM Tris·HCl pH7.5，1.0M LiCl，1mMEDTA，0.1％ SDS)稀释。RNA与Oligo dT Dynabeads(全部样品用1.0ml或5mg小珠)温孵5分钟。按照制造商的方案，在用2mMEDTA，pH7.5洗脱poly A+mRNA之前，用含有10mM Tris·HCl，pH7.5，0.15M LiCl，1mM  EDTA和0.1％ SDS的缓冲液洗涤小珠。按照制造商的方案，采用洗脱的poly A+mRNA和Boehringer MannheimcDNA合成试剂盒合成双链cDNA。
B分离部分犬αTM1，cDNA
在标准PCR反应中采用寡核苷酸引物5′Deg(SEQ ID NO：9)和p4(R)(SEQ ID NO：23)，该反应中采用150ng双链cDNA，500ng每种引物。200μM dNTPs，和1.5单位制备于含镁的Taq buffer(Boehringer Mannheim)中的Taq聚合酶(Boehringer Mannheim)。用同一引物将生成的产物(1μl的起始反应物)进行第二轮PCR，以提高产物的产量。于65℃，在含有10mM Tris·HCl，pH8，1mMEDTA，1.5M NaCl的缓冲液中，将该带从1％琼脂糖凝胶洗脱到Schleicher和Shuell(Keene，NH)NA 45滤纸上，沉淀，采用TA克隆试剂盒(Invitrogen)和制造商提供方案连接到pCRtmII载体(Invitrogen，San Diego，CA)上。连接混合物通过电穿孔转化到XL-1 Blue细菌(Stratagene)中。确定一个克隆，2.7含有对应于在引物设计中未使用的、αTM1肽序列的序列。
在Applied Biosystems 373A DNA测序仪(Foster City CA)上进行测序，采用Dge deoxy终止子循环测序试剂盒其中荧光标记dNTP在不对称PCR反应中如下述而参入〔McCabe，“不对称PCR产生单链DNA”，见PCR方案：方法和应用指南，Innis等，(编)pp.76-83，学术出版社：纽约(1990)〕。样品于96℃保温4分钟。经下述步骤顺序的25个循环：96℃ 15秒钟；50℃ 1秒钟；60℃ 4分钟。测序资料自动地记载于计算机的样品文档中，其包括层析谱和文本文档。克隆2.7的完整的插入序列在SEQ ID NO：24中给出。
从Stratagene文库分离(如实施例2描述)全长犬αTM1 cDNA的努力未成功。在低严格度条件下，使用30％甲酰胺，和克隆2.7作探针，杂交筛选大约1×106噬斑，但未得到阳性克隆。使用衍生于克隆2.7的特异寡核苷酸或若干来自于其它肽片段的氨基酸序列，与基于保守的α亚基氨基酸基序GFFKR(Tamura等，见上文)的简并性寡核苷酸配对的简并性引物，扩增克隆2.7中出现的序列的下游相关序列的努力亦尚未成功。
                              实施例5推定的犬αTM1的人同系物的克隆
为试图分离与犬αTM1同源的人序列，将来自于克隆2.7的大约1kb的犬αTM1片段用作探针。使用NT2(如SEQ ID NO：25)和p4(R)(SEQ ID NO：23)引物，在实施例2描述的条件下，经PCR产生探针。
5′-GTNTTYCARGARGAYGG-3′                  (SEQ ID NO：25)
采用Qiagen(Chatsworth，GA)Quick Spin试剂盒和制造商提供的方案纯化PCR产物。使用Boehringer Mannheim随机引物标记盒和制造商提供的方案用200μCi α32PdCTP标记纯化的DNA(200ng)。未参入的同位素用Sephadex 25(细)重力层析而除去。使用前，探针用0.2N NaOH变性，用0.4M Tirs·HCl，pH8.0中和。
制备克隆在pCDNA/Amp(Invitrogen，San  Diego，CA)中的人脾cDNA文库的Hybond滤膜(Amersham)上的菌落拓片(colony lift)。开始，将滤膜如实施例2中描述变性和中和，随后，在含有30％甲酰胺的预杂交溶液(8ml/滤膜)中温孵，于50℃，温和振荡2小时，如上标记的探针加入到该溶液中，于42℃与滤膜共同温孵14小时。滤膜于2×SSC/0.1％ SDS，37℃洗两次，于2×SSC/0.1％ SDS，50℃，洗两次。最终严格性洗涤是1×SSC/0.1％ SDS，65℃洗两次(1×SSC是150mM NaCl，15mM柠檬酸钠，pH7.0)。滤膜借助于增感屏曝光于柯达X-Omat AR软片6小时。在一式两份的拓片上给出的菌落在含有镁的LB培养基/羧苄青霉素平板上划线，于37℃温孵过夜。得到的划线菌落用Hybond滤膜拓片，将这些滤膜如上处理。使用来自克隆2.7的1kb探针，如上述方法标记，在50％甲酰胺杂交溶液在更严格的条件下于50℃杂交3小时。探测的滤膜在最终严格度为0.1×SSC/0.1％SDS于65℃洗涤，借助于增感屏，于-80℃曝光于柯达X-OmatAR软片2.5小时。确定阳性克隆并在LBM/羧苄青霉素培养基上培养过夜。使用Promega Wizard微型制备试剂盒，按制造商的方案从培养物制备DNA，生成的DNA被测序。
首轮筛选获得18个阳性克隆，而在更为严格的杂交条件进行的第二轮筛选，产生了一个阳性克隆，被称为19A2。人αd克隆19A2的DNA和推定的氨基酸序列分别在SEQ ID NO：1和2中给出。人αd cDNA和预测的多肽的表征
克隆19A2拥有成熟蛋白质的完整编码区域，加上5′上游信号序列的48个碱基(16个氨基酸残基)，和未在多聚腺苷酸序列终止的3′非翻译序列。成熟的蛋白质的核心分子量预计为大约125kD。预计胞外域拥有SEQ ID NO：2的大约17至1108位氨基酸残基。胞外域与同源于人CD11c跨膜区域(SEQ ID NO：2的1109和1128位残基)的大约20个氨基酸区域邻接。胞质域包含大约30个氨基酸(大约是SEQ ID NO：2的1129至1161位残基)。该蛋白质还包含与CD11a、CD11b和CD11c〔Larson和Springer，见上〕，αE〔Shaw等，生物化学杂志269：6016-6025(1994)〕和在VLA-1和VLA-2〔Tamura，等见上〕共有的I(插入序列)域同源的大约202个氨基酸。在其他整联蛋白的I结构域被表明参与了ICAM结合〔Landis等，J.Cell.Biol.120：1519-1527(1993)；Diamond，et al.J.Cell.Biol.120：1031-1043(1993)〕，提示αd可能结合表面分子的ICAM家族的成员。该区域未被证明存在于任何其他整联蛋白亚基中。
αd的推定的氨基酸序列显示了与CD11a的大约36％的一致性，与CD11b的大约60％的一致性，与CD11c的大约66％的一致性。图1中表明了CD11b(SEQ ID NO：3)，CD11c(SEQ ID NO：4)和αd(SEQ ID NO：2)的氨基酸序列的排列。
同物种内β2整联蛋白的α亚基的胞质域一般是互不相同的，而个体的α亚基却显示了跨越物种界限的高度同源性。与这些观察相一致，除了表明在所有α整联蛋白中保守的膜接近GFFKR氨基酸序列外，αd的胞质区域明显不同于CD11a、CD11b和CD11c〔Rojiani等，生物化学30：9859-9866(1991)〕。因为整联蛋白的胞质尾端区域参与了“膜内侧外翻”信号和亲合力调节〔Landies等，见上〕，很可能αd与不同于那些与CD11a、CD11b和CD11c相互作用的分子的细胞溶质分子相互作用，结果是，αd参与了不同于牵涉其它β2整联蛋白的信号通路。
αd的胞外域含有与I结构域邻接的保守DGSGS氨基酸序列：在CD11b中，DGSGS序列是配体相互作用所需要的金属结合区〔Michishita等，细胞72：857-867(1993)〕。CD11b和CD11c的三个另外的推定的阳离子结合位点在克隆19A2(SEQ ID NO：1)的465-474，518-527和592-600位氨基酸的αd序列中保守。αdI-结构域与CD11a、CD11b和CD11c中的相应序列分别有36％、62％、57％的一致性，在该区域的相对低的序列同源性提示αd可能与一套细胞外的蛋白质相互作用，这一套细胞外蛋白质不同于与其它已知β2整联蛋白相互作用的蛋白质。另外，αd对于已知β2整联蛋白配体如ICAM-1，ICAM-2和/或ICAM-R的亲和力可能不同于已知对于其他β2整联蛋白/ICAM相互作用的亲和力。用于序列鉴定的其它人αd cDNA克隆的分离
为了证实编码人αd的DNA序列，通过从克隆在pcDNA/Amp中的人脾寡聚dt-引物的cDNA文库(Invitrogen)  (实施例5描述)杂交而分离，并经琼脂糖凝胶电泳而按尺寸选择长度大于3kb的其它人cDNA。用于杂交的探针如下所述从αd的5′区衍生。除下述杂交外，杂交条件同上述用于分离起始的人αd克隆的条件是同一的：滤膜在2×SSC/0.1％SDS中，于室温中洗两次，于2×SSC/0.1％SDS于42℃中洗一次。滤膜曝光Kodak X-Omat AR软片过夜。
在下列条件下使用引物CD11c 5′For(SEQ ID NO：94)和CD11c 5′Rev(SEQ ID NO：95)经PCR从19A2克隆产生5′αd杂交探针。样品于94℃保持4分钟，并于Perkin Elmer 9600热循环仪中经30个循环的温度步骤序列i)94℃，15秒；ii)5℃，30秒；和iii)72℃，1分钟。CD11c 5′For：(5′)CTGGTCTGGAGGTGCCTTCCTG(3′)(SEQ ID NO：94)CD11c 5′Rev：(5′)CCTGAGCAGGAGCACCTGGCC(3′)(SEQ ID NO：95)
按制造商的说明，使用BioRad(Hercules  CA)Prep-A-Gene试剂盒纯化扩增产物生成的5′αd探针大约是720碱基长；对应于SEQID NO：1的1121位核苷酸到1839位核苷酸的区域。按照制造商的方案使用Boehringer Mannheim(Indianapolis，Indiana)随机引物标准试剂盒，用32P-dCTP标记纯化DNA(大约50ng)。按照制造商的方案，使用Centrisep Spin Columns(Princeton Separations，AdelPhia，NJ)移去未参入的同位素。标记的探针被加入到在含有45％甲酰胺的预杂交溶液的滤膜并让其在50℃，温孵过夜，温孵之后，滤膜如上洗涤。
在一式两份的拓片上有十三个菌落给出了信号。从主平板(masterplate)上检出阳性克隆，在LBM和羧苄青霉素(100μg/ml)中稀释，以不同的稀释度在Hybond(Amersham)膜上涂平板。一式两份的滤膜用来自首轮杂交试验的同一溶液杂交，杂交后，滤膜在终严格性为2×SSC/0.1％ SDS，于42℃洗涤，曝光软片。
最初确定的13个阳性克隆里的10个在第二轮筛选中被肯定。这10个克隆中，2个(称为A7.Q和A8.Q)被测序，并且被确定编码人αd。发现克隆A7.Q大约是2.5kb长，包括一个5′引导序列，部分编码序列，还有另外的5′非翻译序列的60个碱基。确定不完整的编码区由位于对应于SEQ ID NO：1的2152位核苷酸的非正常剪切内含子区域引起。确定A8.Q大约是4kb长，跨越完整的编码区，而且包含位于对应于SEQID NO：1的碱基的内含子序列。与最初分离的αd克隆(SEQ ID NO：1)相比，在A7.Q和A8.Q克隆中都观察到一个不同之处是，确定在1495碱基发生了三碱基CAG密码子的插入。A7.Q和A8.Q克隆的序列分别在SEQ ID NO：96和97中给出，一种由克隆A7.Q和A8.Q推断的复合人序列，及其相应的氨基酸序列分别在SEQ ID NO：98和99中给出。
                    实施例6组织中人αd表达的Northern分析
为了确定αd的相对表达水平和组织特异性使用来自克隆19A2的片段作探针进行Northern分析。大约10μg约来自几种人组织或培养的细胞系的每一种的总RNA被上样于含有1μg溴化乙酸的甲醛琼脂糖凝胶。于100V电泳4小时后，RNA通过在10×SSC洇渍(wicking)过夜而转移到硝酸纤维素膜上(Schleicher & Schuell)。膜于80℃真空烘烤1.5hr。含有溶于3-(N-吗啉代)丙烷磺酸(MOPS)缓冲液的50％丙酰胺的预杂交溶液用于在42℃封闭膜3小时。按生产商的说明，采用Bochriager Mannheim Randomd Prime试剂盒标记克隆19A2的片段，包括αP32dCTP和αP32dTTP。未参入的标记在TE缓冲液中在Sephadex  G25柱上弃去。用1.5×106计数/ml预杂交缓冲液探测膜。印迹连续在下列条件下洗涤：2×SSC/0.1％ SDS于室温，2×SSC/0.1％SDS于42℃，2×SSC/0.1％SDS于50℃，1×SSC/0.1％于50℃，0.5×SSC/0.1％SDS于50℃和0.1×SSC/0.1％SDS于50℃。然后印迹曝光胶片19小时。
使用来自于克隆19A2的Bst×I片段(对应于SEQ ID NO：1的2011至3388位核苷酸)进行杂交，展示了在肝、胎盘、胸腺和扁桃腺总RNA中有微弱的信号。在肾、脑和心样品甲未检测到信号。在肾泳道中出现的RNA的量是最小的，当用溴化乙锭染色时。
当使用克隆19A2的第二个片段(跨越SEQ ID NO：1的500至2100位碱基的区域)，对于人的poly A+RNA(Clontech)进行多组织Northern(MTN)检测到两个不同大小的RNA转录本。在脾和骨骼肌中观察到6.5kb的带，而肺和外周血白细胞检测到4.5kb。观察到大小的变化可以由组织特异性多腺苷酸化，探针与其他整联蛋白家族成员的交叉反应性，或与另种方式剪接的mRNA的杂交引起。
使用来自克隆19A2的第三种片段，其跨越SEQ ID NO：1的2000至3100位核苷酸进行Northern分析，给出了与使用其他克隆19A2片段相一致的结果。
来自于三种髓系细胞系的RNA亦用对应于SEQ ID NO：1的500至2100，和2000至3100位核苷酸的片段进行探测。预先用PMA刺激的THP-1细胞系给出同样大小范围(大约5.0kb)的弥散的信号，比组织信号稍强。来自于未刺激的和DMSO刺激的HL-60细胞的RNA与αd探针以与组织样品相同的强度与αd探针杂交，然而，PMA看来增强信号强度。因为PMA和DMSO分别驱使HL-60细胞向单核细胞巨噬细胞和粒系细胞途径分化，这种结果提示αd表达在单核/巨噬细胞类型中是提高的。U937细胞表达αd信息，这一信号并不随PMA的刺激而升高，在Molt，Doudi，H9，JY或Jurkat细胞中检测不到带。
                         实施例7人αd构建物的瞬时表达A.表达构建物的产生
人克隆19A2缺乏甲硫氨酸起始密码子和可能缺乏5′信号序列的一部分。因而，为了产生含有19A2序列的人表达质粒，采用了两种不同的策略。在第一种策略中，构建了两个质粒，其中从编码CD11b或CD11c的基因衍生的信号肽序列被剪接到19A2中，以产生嵌合αd序列。在第二种策略中，构建了第3种质粒，其中在克隆19A2的0位置加了一个腺苷酸碱基以编码起始甲硫氨酸。
这三个质粒含有不同的编码αd序列的5′部分的区域或嵌合αd序列。αd区域是用特异的3′引物BamRev(在SEQ ID NO：26中给出)，和三个5′引物之一PCR扩增(见实施例2中的条件)。这三个5′引物包含以下序列(1)在其1-6位是使之可被酶切的相同的非特异性碱基，7-12位的EcoR I位点和在其13-18位的共有Kozak序列；(2)CD11d(primer ER1B)或CD11c(引物ER1C)信号序列的一部分，或一个腺苷酸(引物ER1D)；和(3)附加的15-17位碱基，其特异性地重叠了来自克隆19A2的5′序列使引物退火成为可能。引物ER1B、ER1C或ER1D分别在SEQ ID NO：27、28或29中给出，其中起始甲硫氨酸密码子是下划线的。EcoR I位点是双重下划线的。5′-CCACTGTCAGGATGCCCGTG-3′                    (SEQ ID NO：26)
Figure C9719040600241
                                            (SEQ ID NO：27)
Figure C9719040600242
                                            (SEQ ID NO：28)
                                             (SEQ ID NO：29)生成的PCR产物用EcoR I和BamH I酶切。
所有三种质粒含有包括αd克隆的3′末端的共同的第二αd区域(将被插入先前段落所述的5′区域的邻接下游)。第二αd区域，它从克隆19A2的625位核苷酸延伸至位于载体3′多聚接头区域的Xba I位点，通过用BamH I和Xba I酶切克隆19A2而分离。
使用Boehringer Mannheim连接酶缓冲液和T4连接酶(1单位/反应)进行连接反应，该反应中，3′αd BamH I/Xba I片段连接到三个5′αd EcoR I/BamH I片段之一上。于14℃温孵4小时后，合适量的用EcoRI和Xba I酶切的载体pcDNA.3(Invitrogen)，以及附加的一单位连接酶被加入到每一份反应中。反应混合物的1/10被转化到感受态XL-Blue细胞。如实施例5培养生成的菌落并分离DNA。EcoR I酶切鉴定了三个限制性位点阳性克隆并因此鉴定了其工程化信号序列。这些克隆被称为pATM.B1(CD11b/αd，来自引物ER1B)，pATM.C10(CD11c/αd，来自引物ER1C)和pATM.D12(腺苷酸/αd，来自ER1D)。在每一克隆中的合适的信号序列的出现被核酸测序证实。B.转染COS细胞
以上讨论的αd质粒的表达通过用个别的质粒和CD18表达载体pRCCD18共转染COS细胞而完成。做为阳性对照，亦用质粒pRC CD18和CD11a表达质粒，pDC.CD11a共转染COS细胞。
在转染前16小时，将细胞在培养基中(DMEM/10％ FBS/penstrep)传代到10cm Corning组织培养皿中，其铺满度是50％。在所有步骤中，用不含胰蛋白酶的Versene缓冲液(0.5mM NaEDTA溶于PBS)从平皿上移下细胞。转染前，用不含血清的DMEM洗涤平板一次，在每一平板上，15微克的每一种质粒被加至5ml转染缓冲液中(含有20μg/ml DETE-Dextran和0.5mM Chloroquine)。于37℃温孵1.5小时后，细胞用5ml DMEM/10％ DMSO休克1分钟。然后用10ml/平板培养基代替DMSO溶液。
生成的转染子用ELISA，FACS和免疫沉淀如实施例8、9和10中所述而分析。
                         实施例8COS转染子的ELISA分析
为了确定COS细胞是否被CD18表达质粒pRC CD18和与CD18相关的在细胞表面表达αd的αd质粒共转染，使用制备抗CD18的第一抗体(如，从ATCC HB203中纯化的TS 1/18)进行ELISA。作为阳性对照，亦对用CD18表达质粒和CD11a表达质粒，pDC CD11A共转染的细胞进行ELISA。在对照中，第一抗体包括CD18抗体和抗-CD11a抗体(如从ATCC HB202中纯化的TS 1/22)。
为进行ELISA，来自于每一平板的细胞用Versene缓冲液洗下，转移到一块96孔平底Corning组织培养平板上。在测试前细胞在培养基中温孵2天。平板用150μl/孔D-PBS/0.5％ teleost皮肤明胶(Sigma)溶液洗两遍。该缓冲液用于除显色过程之外的所有步骤中。在室温进行所有的洗涤和温孵步骤。样品孔用明胶封闭1小时。第一抗体在明胶溶液中稀释到10μg/ml，在每一样品孔中加入50μl。就每一第一抗体而言，设置了一式三份的样品孔。温孵1小时后，用3×150μl明胶溶液/样品孔进行洗涤。1∶3500稀释度的第二抗体(羊抗鼠Ig/HRD-Fc特异性〔Jackson，West Grove，PA〕)以50μl/样品孔加入，将平板温孵1小时。洗涤三次之后，平板在加入50μl/样品孔15％硫酸之前，用100μl/样品孔邻苯二胺(OPD)(Sigma)溶液(1mg/ml OPD溶于柠檬酸缓冲液)显色20分钟。
用抗-CD18特异性抗体以ELISA方法对转染子进行分析，表明在只用编码CD18质粒转染的细胞中没有明显高于本底的表达。用CD18特异性抗体或用CD11a特异性试剂分析时，用含有CD11a和CD18的质粒共转染的细胞显示了高于本底的表达的升高。对于用编码CD18的质粒和αd表达构建物(pATM.C10或pATM.D12)之一共转染的细胞进行进一步分析表明CD18在细胞表面表达被αd的同时表达拯救。在用pATM.C10或pATM.D12转染的COS细胞中可探测的CD18表达的升高与在共转染CD11a/CD18阳性对照细胞中所观察到的CD18表达的升高是类似的。
                        实施例9COS转染子的FACS分析
为进行FACS分析，在转染之后的那天用新鲜培养基饲养平皿里的细胞，并其在测试前温孵2天，用3ml Versene将转染子以平板上洗下用5ml FACS缓冲液(DMEM/2％ FBS/0.2％叠氮钠)洗一遍。并将其稀释成悬浮于0.1ml FACS缓冲液中，500,000细胞/样品。向每份样品中，加入10微升1mg/ml FITC结合的CD18，CD11a，或CD11b特异性抗体(Becton Dickinson)或800μg/ml CFSE-结合鼠23F2G(抗-CD18)(ATCC HB11081)。样品冰浴45分钟，用5ml洗涤FACS洗涤3遍，重悬于0.2ml FACS缓冲液。在Becton Dickinson FACscan上分析样品。用Lysys II软件(Becton Dickinson)分析数据。
CD18序列转染COS细胞仅仅不被CD18、CD11a和CD11b染色。当与CD11a/CD18共转染时，大约15％细胞被CD11a或CD18抗体染色。所有用CD18和任何αd构建物转染的所有细胞不能造成可检测的CD11a和CD11b抗体染色。pATM.B1、pATM.C10和pATM.D12群CD18染色阳性分别为4％、13％和8％、CD11a/CD18群中阳性群的荧光比本底高4倍。相比而言，αd构建物和CD18构建物的共转染产生的阳性克隆显示出高于本底4-7倍增长的荧光强度。
                    实施例10来自共转染COS细胞的人αd/CD18复合物的生物素标记的免疫沉淀
试图对于用CD18和实施例7中分别描述的αd表达载体中的每一种共转染的细胞进行免疫沉淀，以确定αd是否可作为整联蛋白特性的2β异二聚体复合物的一部分分离出来。
用Versene缓冲液将转染细胞(1-3×108细胞/组)从平皿上移下。用50ml D-PBS/组洗3遍。于室温将每一样品用2mg Sulpho-NHS生物素(Pierce，Rockford，IL)标记15分钟。通过以50ml冷D-PBS/样品洗涤三遍而猝停反应。洗涤的细胞重悬于1ml溶胞缓冲液(1％ NP40，50mM Tris-HCl，pH8.0，0.2M NaCl，2mM Ca++、2mM Mg++，和蛋白酶抑制剂)冰浴15分钟。不可溶物质于10,000离心5分钟沉淀，将上清转移到新管中。为了去除非特异性地与小鼠免疫球蛋白反应的物质，必需预先进行预澄清(pre-clearance)步骤。25μg小鼠免疫球蛋白(Cappel，West Chester，PA)与上清液于4℃温孵。2.5hr之后，100μl(25μg)结合到Sepharose上的兔抗-小鼠1g(Protein A Sepharose 4B和兔抗小鼠IgG制备，均购自Zymed，SanFrancisco，CA)被加入到每一样品中，在4℃持续振荡温孵16小时。经离心从上清液中移取琼脂糖珠。预澄清后，上清液用20μg抗-CD18抗体(TS1.18)于4℃处理2小时。通过与上述的100μl兔抗小鼠/蛋白质A-sepharose制备物/样品共同温孵而从上清分离抗体/抗原复合物。用10mM HIPES，0.2M NaCl和1％ Triton-X100将珠洗涤4次。沉淀洗涤过的小珠并在含有2％β-巯基乙醇的20μl  Laemuli样品缓冲液煮沸10分钟。沉淀样品并在8％预制的Novex聚丙烯酰胺凝胶(Novex)于100V，电泳30分钟。在TBS-T缓冲液中，将蛋白质向硝酸纤维素膜(Schleicher & Schuell)于200mAmp，转移1小时膜用TBS-T中的3％BSA封阻2hr。膜用1∶6000稀释度的链霉亲和素辣根过氧化物酶(POD)(Boehringer Mannheim)处理1小时，然后在TBS-T中洗涤3次。按照制造商的说明，用Amersham EnhancedChemiluminescence试剂盒显色印渍。将膜曝光于Hyperfilm MP(Amersham)0.5至2分钟。
来自于用PCR.CD18和pATM.B1，pATM.C10或pATM.D12转染的细胞的CD18复合物免疫沉淀揭示：异二聚体的种类的表面表达由大约100kD的β链和大约150kD的α链组成，其中前者与CD18的预计尺寸相一致，后者对映于αd。
                        实施例11中国仓鼠卵巢细胞中人αd的稳定转染
为了确定αd是否作为与CD18相连的异二聚体在细胞表面表达，编码每一条链的cDNA以瞬时和稳定方式转染缺乏αd和CD18的细胞系。
为进行这些实验，如实施例7所述，αd cDNA用附加的引导序列和kozak共有序列增大，并亚克隆到表达载体pcDNA3中。最终构建物被称为pAPM.D12，与编码人CD18的修饰的商购载体pDC1.CD18共转染二氢叶酸缺陷中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。质粒pDC1.CD18编码DHFR-标志，转染子可用合适的核苷酸缺乏培养基选择。导致pDC1.CD18的修饰见如下说明。
质粒pRC/CMV(Invitrogen)是一哺乳动物表达载体，其带有一个巨细胞病毒启动子和氨苄青霉素抗性标记基因。DHFR基因来自于质粒pSC 1190-DHFR，被插入SV40复制起点的PRC/CMV 5′另外，来自于质粒pHF2G-DHF的5′区的多聚接头被连接到pRC/CMV/DHFR构建物的DHFR基因的3′。然后将CD18编码序列克隆到生成的质粒中，位于5′侧翼多聚接头区和牛生长激素poly A编码区之间。
采用单克隆抗体TS1/18对于CD18的表面表达进行流式细胞仪分析。检测到的在αd和CD18之间异源二聚体的形成与实施例10所述的用COS细胞中瞬时表达的免疫沉淀相一致。
                         实施例12人αd以依赖于CD18的融合方式，结合到ICAM-R上
考虑到一些报道证明了白细胞整联蛋白和介导细胞-细胞接触的细胞间粘附分子(ICAMs)之间的相互作用〔Hynes，细胞69：11-25(1992)〕，用两种方法分析了表达的αd/CD18 CHO细胞与ICAM-1，ICAM-R或VCAM-1的结合能力。
在一式两份的测试中，可溶性ICAM-1，ICAM-R或VCAM-1 IgG融合蛋白被固定化在塑料上，并确定αd/CD18 CHO转染细胞结合固定化配体的能力。转染细胞用calcein内部标记，用结合缓冲液洗涤(加入1％BSA的RPMI)在单独的缓冲液(加入或不加入10ng/mlPMA)或加入10μg/ml的抗CD18单克隆抗体的缓冲液中温孵。转染细胞加入到预先用可溶性ICAM-1/IgG1，ICAM-R/IgG1或VCAM-1/IgG1融合蛋白，或牛血清白蛋白(BSA)(作为阴性对照)包被的96-孔Immulon 4微滴度板。在1993年8月5日提交的共同未决的和共同拥有美国专利申请系列号08/102,852中描述和完全公开了这些粘附分子的可溶性形式的设计。在加入标记的细胞之前，用1％ BSA(溶于PBS)封闭样品孔。将板没入含有0.1％ BSA的PBS中20分钟以洗涤平板后，用Cytofluor 2300(Milliproe，Milford，MA)测量残留在每一样品孔中的总荧光。
在用固定化ICAM进行的实验中，αd/CD18共转染子持续地显示了与ICAM-R/IgG1样品孔的结合比与BSA包被样品孔的结合增高了3-5倍。这种结合的特异性和CD18依赖性被抗CD-18抗体TS1/18的抑制效应所证实。用CD11a/CD18转染的细胞与ICAM/IgG样品孔的结合与在BSA包被样品孔中所观察到的结合是类似的。仅在PMA预处理之后，CD11a/CD18转染细胞与ICAM/IgG1样品孔的结合增长了2-3倍。用PMA处理αd/CD18转染子不影响其与ICAM-1/IgG1或ICAM-R/IgG1样品孔的结合。未观察到αd/CD18转染子与VCAM-1/IgG样品孔的可检测的结合。
通过流式细胞计量术确定αd/CD18转染细胞与可溶性ICAM-1/IgG1，ICAM-R/IgG1或VCAM-1/IgG1融合蛋白的结合。大约1×106 αd/CD18-转染CHO细胞(生长于旋动三角瓶中以获得更高表达)/测量体积被悬浮于加或不加10μg/ml抗-CD18抗体的100μl结合缓冲液中(RPMI和1％ BSA)。室温温孵20分钟之后，细胞用结合缓冲液洗涤并加入ICAM-1/IgG1或ICAM-R/IgG1融合蛋白，蛋白终浓度为5μg/ml。结合在37℃下进行30分钟，在此之后细胞洗涤3遍并重悬于100μl含有稀释度为1∶100的FITC-结合绵羊抗人IgG1的结合缓冲液中。温孵30分钟后，样品洗涤3遍并重悬于200μl结合缓冲液中，用于Becton Dickinson FACScan分析。
大约40-50％的αd/CD18转染子表明与ICAM-R/IgG1结合，但αd/CD18转染子不与ICAM-1/IgG1或VCAM-1/IgG1蛋白质结合。用PMA预处理转染细胞不影响αd/CD18与ICAM-1/IgG1，ICAM-R/IgG1或VCAM-1/IgG1的结合，这与固定化粘附实验相一致。用抗CD18抗体TS1/18处理αd/CD18转染子之后，ICAM-R的结合降低到本底水平。
从这两个结合试验收集的数据表明：αd/CD18与ICAM-R结合且与ICAM-1和VCAM-1相比是优先的。αd/CD18与ICAM-R的高于ICAM-1的优先结合与用CD11a/CD18和CD11/CD18所观察的结果相反。这样αd/CD18结合的调制被期望选择性影响ICAM-R起重要作用的正常和病理性免疫功能。而且，测试了多种ICAM-R胞外区的免疫特异性抗体的抑制ICAM-R与αd/CD18转染子结合的能力类似的实验的结果表明：αd/CD18和CD11a/CD18与ICAM-R的不同结构域相互作用。
CD11a/CD18与溶液中的ICAM-1/IgG1或ICAM-R/IgG1结合的失败提示在CD11a/CD18和ICAM-1或ICAM-R之间结合的亲和力太低，不能在溶液中结合，然而，检测到αd/CD18与ICAM-R/IgG1的结合提示了异常高的结合亲和力。
上述的FACA粘着试验被用于测试ICAM-R突变体E37A/Ig与表达αd/CD18的CHO细胞的结合。已经显示了E37A/Ig消除了与LFA-1/Ig嵌合体的结合〔Sadhu等，细胞粘着和通讯2：429-440(1994)〕。突变体蛋白以可溶形式从稳定转染的CHO细胞系表达，并如Sadhu等人描述方法(见上文)在Prosep A柱上纯化。
在重复试验中未检测到E37A/Ig与αd/CD18转染子的结合。被FITC标记的抗人抗体检测的E37A/Ig嵌合体的平均荧光强度(MFI)与检测抗体本身的MFI一致，表明在该实验中使用E37A/Ig突变体蛋白未显示出高于本底的可检测信号。同样的，在如实施例14所述的ELISA中，E37A/Ig突变体未显示出与αd/CD18结合。αd与iC3b的结合
补体组分C3可被蛋白水解酶切成iC3b复合物，其引发补体激活的旁路途径并最终导致靶的细胞介导的破坏。CD11b和CD11c都参与.了iC3b的结合和随后iC3b-包被颗粒的吞噬作用。最近鉴定了一个CD11bI结构域的肽片段作为iC3b相互作用位点〔Ueda等，美国国立科学院院报91：10680-10684(1994)〕。在CD11b，CD11c和αd中iC3b结合区高度保守，提示了αd/iC3b结合作用。
在玫瑰花结试验中，使用转染子或天然表达αd细胞系(如，PMA刺激HL60细胞)和iC3b-包被的绵羊红细胞(sRBC)进行αd与iC3b的结合实验。〔Dana等，J.Clin.Invest，73：153-159(1984)〕。αd/CD18CHO转染子，VLA4-CHO转染子(阴性对照)和PMA刺激的HL60细胞的形成玫瑰花结的能力在抗-CD18单克隆抗体(如TS1/18.1)存在或不存在的情况下比较。
                        实施例13通过闪烁接近实验进行筛选
本发明的αd配体和它们的结合伙伴(αd配体/抗配体对)之间的结合的特异性抑制剂用多种方法确定，例如在美国专利No.4,271,139，Hart和Greenwald分子免疫学12：265-267(1979)和Hart及Greenwald，JNac.Med.20：1062-1065(1979)泛泛描述的闪烁接近技术，每一文献均在此引入作为参考。
简言之，αd配体/抗-配体对的每一成员被直接或间接地结合到固体支持物上。间接俘获涉及间接结合到支持物上的、识别可溶的整联蛋白β链蛋白的C-末端特异表位的单克隆抗体。这一表位可能是血凝素蛋白或分枝杆菌IIFE9表位〔Anderson等，免疫学杂志141：607-613(1988)〕。荧光剂亦结合到支持物上。或者是，如在此引入作为参考的美国专利No.4,568,649中描述的将荧光剂整合到固体支持物上。αd配体/抗配体对的非支持物结合的成员用放射活性化合物结合。其发射放射性以激发荧光剂。当配体与放射性标记的抗配体结合时，将标记与支持物结合的荧光剂(fluorescer)足够靠近以激发荧光剂造成光发射。未结合时，标记一般与固体支持物相距太远，不能激发荧光剂，光发射太弱。测量发射的光，并与配体和抗-配体之间的结合相联。向样品中加入结合抑制剂则会通过将放射活性标记保持在固体支持物邻近处，不被俘获而降低荧光发射。因此结合抑制剂可由它们对于样品荧光发射的影响而被鉴定。用同样的方法可鉴定潜在的αd的抗配体。
通过下述方法可将可溶性重组体αd/CD18亮氨酸拉链构建物(见实施例14)用于闪烁接近实验以筛选CAM结合的调制剂。将重组整联蛋白固定化在事先包被有非封闭的抗α亚基或抗β亚基抗体的包埋了闪烁剂的板上。化学文库化合物和一种特异的生物素化CAM/Ig嵌合体同时加入板中。通过标记的链霉抗生物素蛋白探测CAM/Ig。在本实验中，按照制造商的方案用NHS-Sulfo-biotin LC(长链，Pierce)将ICAM-1/Ig和ICAM-3/Ig生物素化。标记的蛋白质仍与CAM特异性抗体反应，并当用链霉抗生物素辣根过氧化物酶探测且随后用OPD显色时，ELISA检测可显示出其与固定化LFA-1反应。
或者是，重组亮氨酸拉链蛋白质被纯化，或部分纯化，且直接包被到闪烁剂包埋的板上。同时加入未标记的CAM/Ig嵌合体和化学文库化合物，用125I标记的抗人Ig探测结合的CAM/Ig。
另一种选择方案是，纯化的CAM/Ig蛋白质固定化在闪烁剂板上化学文库化合物和来自于表达重组体亮氨酸拉链整联蛋白的细胞的浓缩上清液加至板上。用标记的，未封闭α或β亚基抗体检测重组体整联蛋白的结合。
                          实施例14可溶性人αd表达构建物
全长的，可溶性人αd/CD18异二聚体蛋白的表达为免疫和结合试验提供了容易地纯化的材料。产生可溶性蛋白质的优点是它可以从上清液而不是从细胞溶胞物(如全长膜结合αd/CD18那样)纯化；因而提高了收率降低了杂质。
可溶性αd表达质粒如下构建。克隆到质粒pATM.D12中的、对应于SEQ ID NO：1残基0-3161位碱基的区域的核苷酸片段通过Hind III和Aat II酶切而分离。与Hind III/Aat II片段重叠的且在其3′末端含有另外的Mlu I限制性位点的，对应于SEQ ID NO：1的3130至3390位碱基的PCR片段，采用分别在SEQ ID NO：30和31中给出的引物sHAD.5和sHAD.3从pATM.D12中扩增。5′-TTGCTGACTGCCTGCAGTTC-3′                     (SEQ ID NO：30)5′-GTTCTGACGCGTAATGGCATTGTAGACCTCGTCTTC-3′
                                               (SEQ ID NO：31)
用Aat II和Mlu I酶切PCR扩增产物且连接到Hind III/Aat II片段上。生成的产物连接到Hind III/Mlu I消化物质粒pDC1.S上。
构建物在稳定转染的CHO细胞中与可溶性CD18共表达，并通过放射自显影可视化来自35S-甲硫氨酸标记细胞的免疫沉淀CD18复合物而检测表达。构建物还与CD18在293细胞中共表达，〔Berman等，J.CellBiochem，52：183-195(1993)〕。可溶性全长αd构建物
本发明还考虑了任选的αd表达构建物。为便利完整剂的αd/CD18异二聚体的表达和纯化，构建包括在纯化过程中，稳定异二聚体的“亮氨酸拉链”融合序列的可溶性αd和CD18表达质粒〔Chang等，美国国立科学院院报，91：11408-11412(1994)〕。简言之，采用Chang等人描述的寡核苷酸通过引物退化产生编码拉链的酸性和碱性氨基酸链的DNA。DNA序列被进一步修饰，以在DNA的5′和3′末端分别包括另外的Mlu I和Xba I限制性位点，以便利亚克隆到先前描述的αd或CD18表达构建物中。另外，代表血凝素或聚组氨酸序列亦被加入，而且一个终止密码子亦被插入Xba I之后。血凝素或聚组氨酸序列被参入以便利表达蛋白质的亲和纯化。编码拉链的碱性链的序列被参入表达CD18的质粒载体，酸性链被插入到α链构建物。在宿主细胞内表达修饰的αd和CD18蛋白质时，设想拉链结构的酸性和碱性链之间的相互作用将稳定异二聚体，且允许如上述的亲和纯化而分离完整的αd/CD18分子。
构建用于表达具有酸性和碱性亮氨酸拉链序列的可溶性αd和CD18的质粒，并通过实施例7描述的DEAE/Dextran方法转染COS细胞。生成的蛋白质被称为αd/CD18 LZ。血凝素和聚组氨酸标志被参入αd/CDLZ。转染细胞在减低血清的条件(2％)下生长14天。每5天从转染细胞收集上清并如实施例8所述通过ELISA分析其蛋白产生。简言之，αd/CD18 LZ异二聚体被固定到包被了抗-αd单克隆抗体169B(见实施例15)的板上。αd/CD18 LZ复合物通过加入生物素化的抗-CD18单克隆抗体，TS1/18.1(见实施例8)，然后加入链霉抗生物素蛋白辣根过氧化物酶(HRP)结合物和邻苯二胺(OPD)而探测。在上清液中可清晰地探测到蛋白质。采用可溶全长αd表达产物进行结合实验
使用上述可溶性全长αd/CD18 LZ异二聚体进行的功能性结合实验通过将异二聚体固定化在包被了单克隆抗体169B或未封闭的抗-CD18单克隆抗体(见实施例15)的板而进行。用鱼皮明胶封闭样品孔以防止以起始浓度为10μg/ml加入CAM/Ig嵌合体(见实施例12)之前非特异性结合。用羊-抗-人Ig HRP结合物(Jackson Labs)和随后用OPD显色来检测嵌合物与αd/CD18的结合。
VCAM-1/Ig被观察到以高于俘获的CD11a/CD183-5倍结合于俘获的αd/CD18 LZ。ICAM-1/Ig和ICAM-2/Ig以分别高于本底15-10倍结合于可溶性CD11a/CD18异二聚体，但不结合αd/CD18，在VCAM-1特异性抗体130K和130P用于组合物而出现时，VCAM-1结合降低了大约50％。
使用固定于96-孔板ICAM/Ig蛋白质，然后加入细胞上清液中的重组体可溶性整联蛋白而进行结合实验。用未标记的未封闭α或β亚基特异性鼠抗体然后与HRP-结合羊抗小鼠抗体温孵和用OPD显色而检测可溶性整联蛋白的结合。
结果表明未封闭抗体检测到的αd/CD18 LZ与ICAM-R/Ig的结合高于在不含有抗体的对照样品孔中检测到的结合的10倍，用固定化ICAM-1/Ig未检测到可溶性αd/CD18结合，然而，在αd/CD18和固定化CD11b/CD18和CD11a/CD18之间分别检测到高于本底结合15和5倍的结合。
因为先前的研究证明Cd11b和CD11c结合脂多糖(LPS)〔Wright，Curr.Opin.Immunol.3：83-90(1991)；Ingalls和Golenbock，J.ExpMed.181：1473-1479(1995)〕，亦用流式细胞计量术和基于板的实验(plate-based assay)测量了LPS与αd/CD18的结合。结果表明20μg/ml的从S.Minnesota和S.typhosa分离的、用FITC标记的脂多糖(均购自Sigma)能与αd/CD18转染的CHO细胞微弱地结合。未观察到与未转染的对照CHO细胞结合。在ELISA实验中，0.5-3.0μg的生物素化LPS〔Luk等，Alan Biochem.232：217-224(1995)〕与固定化αd/CD18 LZ结合，具有的信号比单独的俘获抗体和封闭剂给出的信号高4倍。LPS与CD11a/CD18的表观结合通过从每一实验值减去与抗-CD11a抗体TS2/4的本底结合而折算。
为了鉴定αd/CD18的其它配体，重组体αd/CD18 LI蛋白质被用于两个滴定研究中。不同细胞类型与固定化蛋白质的结合被用于确定何种细胞在细胞表面表达αd配体。然后用抗体抑制确定观察到的细胞结合是否由与已知的表面粘附分子之间的相互作用引起。假如未有引起抑制，与来自结合αd的细胞的溶胞物的蛋白质结合的αd/CD18 LI共沉淀，用于试图鉴定配体。可溶性人αd I结构域表达构建物
先前报道CD11a的I结构域可以作为独立的结构单元表达，该单元保持了配体结合能力和抗体识别能力〔Randi和Hogg，J.Biol.Chem.269：12395-12398(1994)，Zhou等，J.Biol.Chem.269：17075-17079(1994)，Michishita等，细胞72：857-867(1993)〕。为产生包含αdI结构域，和人IgG4的可溶性融合蛋白质，通过PCR扩增αdI结构域，该PCR采用的引物被设计加了BamHI和Xho I限制性位点侧翼以便利亚克隆。这些引物在SEQ ID NO：32和33中给出，限制性位点被下划线。
5′-ACGTATGCA GGATCCCATCAAGAGATGGACATCGCT-3′
                                      (SEQ ID NO：32)
5′-ACTGCATGT CTCGAGGCTGAAGCCTTCTTGGGACATC-3′
                                      (SEQ ID NO：33)紧邻SEQ ID NO：32的BamH I位点3′的C核苷酸对应于SEQ IDNO：1的435位核苷酸，位于SEQ ID NO：33的Xho I位点3′的G核苷酸互补于SEQ ID NO：1的1067位核苷酸。扩增的I结构域用合适的酶消化，纯化的片段连接到哺乳动物表达载体pDCs上和原核表达载体pGEX-47-3(Pharmacia)上，并测序I结构域片段。然后，融合蛋白在转染或转化了合适的表达构建物的COS，CHO或E.coli细胞中表达。
假设αd与ICAM-R有亲和力，αd I结构域的表达可能具有足够的亲和力，以充当αd参与的细胞粘着的有用的抑制剂。人αd I结构域/IgG4融合蛋白的分析
在还原或非还原条件下通过SDS-PAGE拆分蛋白质，并通过银染或考马斯染色而可视。然后将蛋白质转移到Immobilon PVDF膜上，用抗人IgG单克隆抗体或抗牛Ig单克隆抗体进行Western印迹分析。
探测的蛋白质被确定为在非还原条件下以大约120kD迁移，还原条件下，以大约45kD迁移。在非还原胶上大约40-50kD处检测到小的条带，它与抗人抗体反应，但不与抗牛抗体反应。经Western印迹确定，200kD的小条带是牛Ig。使用I结构域表达产物进行结合实验
以ELISA方式检测I结构域特异性识别ICAM-R/IgG嵌合蛋白的能力。将αd I结构域IgG4融合蛋白(Iαd/IgG4)在TBS中的系列稀释液与固定化在Immulon IV RIA/EIA板上的ICAM-1/IgG，ICAM-R/IgG，VCAM-1/IgG或不相关的IgG1骨髓瘤蛋白温孵。CD11a I结构域/IgG嵌合蛋白和人IgG4/κ骨髓瘤蛋白被用作阴性对照。用生物素化的抗-IgG4单克隆抗体HP 6023，然后加入链霉抗生物素蛋白-过氧化物结合物和用底物邻苯二胺显色而探测结合的IgG4。
在重复的实验中，未检测到CD11a/IgG4蛋白或/IgG4骨髓瘤蛋白与任何固定化蛋白质的结合。Iαd/IgG4蛋白不与鱼皮明胶或牛血清白蛋白封闭剂，人IgG1或ICAM-1/IgG结合。使用1-5μg/ml浓度的Iαd/IgG4蛋白，在ICAM-R/IgG蛋白包被的样品孔中检测到高于本底2至3倍的结合信号。在VCAM-1/IgG蛋白包被样品孔的信号高于本底7-10倍。在先前的试验中，αd/CD18转染的CHO细胞不结合VCAM-1/IgG蛋白，提示了VCAM-1结合可能是分离的I结构域氨基酸序列的特征。其它αd I结构域构建物
以与前述构建物相同的方式产生了其它的αd I结构域构构建物，但是参入了更多的围绕αd I结构域的氨基酸。具体的构建物包括：i)在现有的构建物之前，有来自外显子5(SEQ ID NO：2的127-353位氨基酸)的序列，ii)在I结构域之后有EF手重复片段(EF-handrepeat)(SEQ ID NO：2的17-603位氨基酸，和iii)在跨膜区域(SEQ ID NO：2的17-1029位氨基酸)截短的α链，以及用于纯化和检测目的的IgG4尾。这些构建物被连接到哺乳动物表达载体pDCS1或原核表达载体pGEX-4T-3(pharmacia)上，并测序I结构域融合蛋白在转染或转化了合适的表达构建物的COS，CHO或大肠杆菌中表达。蛋白质在ProSep A柱(bioprocessing Limited，Durham，England)纯化，检测其与抗-IgG4单克隆抗体HP 6023的反应性，并用考马斯染色使之在聚丙烯酰胺凝胶上可视化。
为了构建完整αd多肽的表达质粒，上文描述的pATM.D12被以下列方式修饰以表达αd-IgG4融合蛋白。采用分别参入了5′Aat II限制性位点(SEQ ID NO：89)和3′Xba I限制性位点(SEQ ID NO：90)的引物，经PCR从载体pDCS1分离IgG4编码DNA。
5′-CGCTGTGACGTCAGAGTTGAGTCCAAATATGG-3′  (SEQ ID NO：89)
5′-GGTGACACTATAGAATAGGGC-3′             (SEQ ID NO：90)用Aat II和Xba I酶切质粒pATM.D12，将适当酶切和纯化的IgG4 PCR产物连接到线性载体中。
                          实施例15人αd特异性抗体的产生A.单克隆抗体的产生
实施例7的瞬时转染细胞用Dulbecco’s磷酸盐缓冲液(D-PBS)中洗涤三遍，以5×106细胞/鼠的数量和50μg胞壁二肽PBS溶液(Sigma)/鼠一起注射Balb/c小鼠。以2周间隔以同一方式注射小鼠两次以上。如实施例9所述用FACS分析来筛选来自小鼠的前血(pre-bleed)和免疫血清，来自于小鼠的对αd/CD18转染细胞有高度反应性的脾被融合。分别筛选缺乏对CD11a/CD18转染的COS细胞的反应性，和对用αd表达质粒和CD18共转染细胞的具有反应性的杂交瘤培养物上清液。
这种方法不生成单克隆抗体。
2.作为生产单克隆抗体的一种选择性方式，可溶性αd I结构域/IgG4融合蛋白从稳定转染的CHO细胞的上清液中亲和纯化，并按上述方法免疫Balb/c小鼠。建立杂交瘤。来自这些杂交瘤的上清液经ELISA，就其针对αd I结构域融合蛋白的反应性进行筛选。然后就其对于在CHO转染子上表达的全长αd/CD18复合物的反应性分析阳性培养物。
小鼠1908接受了三次起始的αd/CD18转染CHO细胞的免疫接种，和随后两次用αd/CD18异二聚体进行的加强免疫。两次最终的免疫接种包括50μg αd I结构域/IgG4融合蛋白/小鼠。该融合共产生270个产生IgG的样品孔。经ELISA测定，来自于45个样品孔的上清液呈现出高于人IgG4至少7倍的与Iαd/IgG4融合蛋白的结合。经FACS分析确定，没有上清液与αd/CD18转染的CHO细胞反应。
为确定在其它环境中，上清液是否识别整联蛋白α亚基蛋白质，将新鲜的冷冻脾切片用来自45个样品孔中的24个的上清液染色。3个上清液被确定为阳性：1个染色在红髓质中的大细胞，另外两个染色分散在红髓质和小柱的细胞。
这些上清液被进一步就能免疫沉淀来自αd/CD18转染CHO细胞或PMA刺激HL60细胞的生物素化CD18复合物的能力进行分析。具有识别在去垢剂溶胞物中(不会在其构象上强迫作为异二聚体表达蛋白)的蛋白质的上清液的融合样品孔被选择用于进一步亚克隆。识别去垢剂中的蛋白质的单克隆抗体在免疫沉淀来自转染子，组织，和细胞等的异二聚体复合物中可能更有用。
3.正如单克隆抗体产生的其它方案，在预先清除了CD11a/CD18(使用单克隆抗体TS2/4)和CD11b/CD18(使用单克隆抗体Mo-1)之后，CD18复合物从人脾溶胞物中和抗CD18单克隆抗体23F2G一起免疫沉淀。5只10至12周龄的Balb/c小鼠在0天皮下注射大约在完全弗氏佐剂中的30μg生成的蛋白质而免疫接种，然后在28天和43天用30μg不完全弗氏佐剂中的免疫原/小鼠而加强免疫两次在最终一次加强免疫后10天抽取血清，使用1∶500稀释度的每一血清测验反应性，以在Western印迹中探测1μg/泳道的免疫原。来自于三只小鼠的血清探测大约95和150kD的条带，在用1∶50稀释度的免疫前血清处理的泳道中未见信号。150kD的条带被推测为代表处于活体内糖基化状态的αd。另外，所有免疫后血清从糖基化αd/CD18 CHO细胞的溶胞物免疫沉淀蛋白，该蛋白在SDS-PAGE中以适于表示异二聚体的分子量迁移。从这些结果中，选择小鼠#2212，进一步在64天用30μg PBS中的免疫原腹内注射而免疫。4天后处死该小鼠，无菌移取脾脏。
通过浸没在补充了2mM L谷氨酸，1mM丙酮酸，100单位/ml青霉素，和100μg/ml链霉素的无血清RPMI(Gibco，Canada)中，将脾在两片玻璃显微载玻片的冷冻末端之间研磨而形成单细胞悬浮液。细胞悬液通过一个无菌70目Nitex细胞渗滤器(Becton Dickinson，Parsippany，New Jersey)，滤液于200g离心5分钟洗两遍。生成的沉淀重悬于20ml无血清RPMI。以同样方式制备来自于三只天然的Balb/c小鼠的胸腺细胞。
在融合之前，于对数期保藏在补充了10％ Fetalclone血清(FBS)(Hyclone Laboratories，Inc.，Logan，Utah)的RPMI中，在融合前保藏了3天的NS-1骨髓瘤细胞，于200g离心5分钟而沉淀，如前述段落所述洗涤两次，并计数。大约2×108脾细胞与4×107 NS-1细胞合并，生成的混合物于2000g沉淀。弃去上清。敲击离心管，使细胞沉淀脱离原有的位置，在1分钟的过程中，振摇加入2ml于75mM-Hepes(pH8.0，37℃)(Boehringer Mannheim)中的50％PEG 1500。在随后的7分钟内加入另外14ml不含血清的RPMI，然后随即加入14mlRPMI。生成的混合物于200g离心10分钟并弃去上清。沉淀重悬于含有15％ FBS，100mM次黄嘌呤钠，0.4mM氨基蝶呤，16mM胸苷(HAT)(Gibco)，25单位/ml IL-6(Boehringer Mannheim)和1.5×106胸腺细胞/ml的200ml RPMI，以200μl/样品分装到96孔平底组织培养板(Corning United Kingdom)。在融合后2，4和6天用18G针头(Becton Dickinson)从每个孔中吸取100μl，然后加入除了含有10单位/ml IL-6和缺乏胸腺细胞外，与上述相同的培养基，加入量为100μl/孔，以饲养细胞。
在融合后7-10天，通过抗体俘获ELISA筛选来自每一样品孔的上清液，检测小鼠IgG的出现。用50μl/样品孔以1∶5000稀释于50mM碳酸盐缓冲液，pH9.6的羊抗小鼠IgA，IgG或IgM(Oragon Teknikd)于4℃包被Immulon 4板(Dynatech，Cambridge，Massachusetts)。用含有0.5％ Tween 20(PBST)的PBS洗涤板三次，向每个样品孔加入50μl培养物上清液。37℃温孵30分钟后，如上用PBST洗涤样品孔。向每个样品孔中加入50μl以1∶5500稀释于PBST中的辣根过氧化物酶结合的羊抗小鼠IgG(fc)(Jackson Immuno Research，West Grove.Pennsylvania)。板如上温孵，用4×PBST洗4遍，并加入100μl底物，底组由1mg/ml邻苯二胺(Sigma)和0.1μl/ml溶于100mM柠檬酸盐，pH4.5中的30％ H2O2。5分钟后，加入50μl 15％ H2SO4中止颜色反应。用平板计数仪(Dynatech)测量每孔的490nm处的吸光率。
杂交瘤细胞被进一步如下表征。通过流式细胞计量术分析了来自产生IgG的培养物的上清液对于αd/CD18转化CHO细胞的反应性，但检测不到其对于JY细胞(一种LFA-1阳性B细胞，但在以前的in-house染色实验中，观察到其是其他β2整联蛋白阳性的)的反应性。简言之，5×105 αd/CD18转化的CHO或αd/CD18-JY细胞悬浮于含有2％ FBS和10mM NaN3(FACS缓冲液)的50μl RPMI中。各个细胞悬液加入96孔圆底板(Corning)的孔中的50μl IgG阳性杂交瘤培养物上清中。冰浴30分钟之后，细胞通过在医用离心机中洗两遍而沉淀。弃去每一样品孔中的上清，将沉淀重悬于200-300μl FACS缓冲液。最后一次洗涤用50μl 1∶100稀释度的配制于FACS缓冲液中的羊抗鼠IgG(H+L)-FIFC结合物的F(ab′)2片段。如上述步骤温孵后，细胞用补充了10mM(Sigma，S+Louis Missouri)NaN3的Dulbecco’s PBS(D-PBS)洗涤两遍，然后重悬于含有1％多聚甲醛的D-PBS中。然后将样品转移到聚苯丙烯管中，用于用Becton Dickinson FACsan分析仪进行的流式细胞计量术分析(FACS)。
该融合产生了用两种标准评判均确实是阳性的四株培养物。大约4天之后，在扩大的上清液中重复第二轮筛选，四株培养物中的三株仍是阳性。这三个样品孔，被称为169A，169B，169D，通过在RPMI，15％ FBS，100mM次黄嘌呤钠盐，16mM胸腺嘧啶，和10单位IL-6/ml，中双倍稀释，被连续克隆2至3次。4天之后克隆平板的样品孔被可视地记录下来，而且记录最低密度的集落的数目。7-10天之后，每一克隆的选择的样品孔用FACS分析。在培养物中的两个。169A和169B中发现活性。在最终克隆中，含有单个集落的阳性样品孔在含11％ FBS的RPMI中扩大。按照制造商的说明，使用IsoStrip试剂盒(Boehringer Mannheim)对来自169A和169B的克隆化上清液的抗体进行同种型分析，发现是IgG1同种型。
来自于CHO转染子和PMA刺激的HL60细胞的αd/CD18复合物的免疫沉淀可用作关于特异性的第三轮筛选。经SDS-PAGE鉴定，杂交瘤169A和169B从CHO细胞中沉淀合适的条带，从HL-60细胞中沉淀150-160kD的单个α链类型。杂交瘤细胞于1995年5月31日保藏在美国典型培养物保藏中心，12301 Parklawn Drive，Rockville，Maryland20852，其保藏号分别是HB 11907和HB 11906。
为了更完整地表征169A和169B的结合特性，测试了每一抗体抑制其他或抗-CD18抗体TS1/18.1与可溶性αd/CD18的结合的能力。用分布在96-孔板的每一份未标记抗体固定化可溶性全长αd/CD18，并用生物素化抗体探测被相同或不同未标记抗体结合的蛋白。使用羊抗鼠Ig/HRP结合物随后加入OPD底物而探测结合。结果表明抗体169A能够封阻生物素化169A和TS1/18.1的结合，而抗体169B仅封闭其自身的结合。
4.另一只小鼠(#2214)被用与小鼠#2212的同一方法免疫接种，被选择用于在70天用30μg于PBS中的来自脾溶胞物的纯化αd经融合前加强免疫(pre-fasion boost)而进一步免疫。4天之后处死小鼠，无菌取出脾脏。
阳性细胞的融合和克隆如上述条件下完成。该融合产生了5个抗-αd单克隆杂交瘤，被称为170D，170E，170F，170X和170H，按制造商的说明，使用IsoStrip试剂盒(Boehringer Mannheim)，将其同种型分析为IgG1。
5.还有另一只鼠#2211，被与小鼠#2212和小鼠#2214相同的起始方法免疫之后，被选择且在88天用30μg免疫原和在203天用30μg免疫原进行融合前加强免疫。4天之后处死小鼠，取脾如上述步骤进行融合。如上述段落所详述的由抗体俘获ELISA和由流式细胞计量术筛选杂交瘤上清液。
鉴定了15个阳性杂交瘤，分别称为188A，188B，188C，188E，188F 188G，188I，188J，188K，188L，188M，188N，188P，188R和188T，在ELISA实验中进行同种型分析。简言之，用1∶5000稀释于50mM碳酸盐缓冲液，pH9.6的50μl羊抗小鼠IgA、G、M(Organon Teknika)/样品孔于4℃包被Immulon 4板(Dynatech，Cambridge，Massachusetts)。板于37℃用1％ BSA的PBS溶液封闭30分钟，用PBS/0.05％ Tween 20(PBST)洗涤3遍，加入50μl培养物上清液(以1∶10稀释于PBST)。如上温孵和洗涤后，加入以1∶1000稀释于PBST中的辣根过氧化物酶标记的兔抗小鼠IgG1、G2a和G3(Zymed，San Francisco，California)，和1％正常羊血清。如上温孵板子。用PBST洗涤4次之后，加入100μl溶于100mM柠檬酸，pH4.5的由1mg/ml邻苯二胺(Sigma)和0.1μl/ml 30％ H2O2组成的底物中。加入50μl 15％ H2SO4在5分钟中止颜色反应。在板读数仪(Dynateeh)读出A490，所有的15种抗体均被确定为IgG1。
剩余的来自小鼠#2211的脾细胞冷冻在冷冻管中，且贮于液氮中。冷冻管置于37℃水浴中快速融化，将其圆周移动直到内容物刚巧融合。将细胞转移到15毫升离心管中，其中一次加入温热的含有11％ FBS的RPMI 1ml，间隔3至5分钟后，加入另外5ml温热RPMI，停留5分钟后，将离心管在200g离心5分钟吸去上清。细胞重悬于RPMI中，如上步骤进行融合。如上通过抗体俘获和流式细胞术筛选杂交瘤上清液。融合产生了5个克隆，被命名为195A，195C，195D，195E和195H。用如上述ELISA方法将克隆进行同种型分析，单克隆抗体195A，195C，195D和195E被确定为IgG1，195H被确定为IgG2a。
6.为了鉴定能够抑制功能性αd结合的抗体，可溶性αd/CD18LZ(见实施例14)被用于免疫接种。从瞬时转染COS细胞的上清液在亲和性层析树脂上分离蛋白质，树脂结合的αd被用作免疫原。如上所述免疫一只选择的小鼠，在初始免疫之后两周，给一次最终免疫加强。用这种技术进行的免疫避免了经常与细胞的去垢剂溶胞相关联的可能的蛋白质构象的转变。另外的小鼠亦用树脂结合的重组蛋白进行免疫，但初始免疫不采用从细胞溶胞物纯化的蛋白。
使用非封闭抗体的Fab片段，对于如上制备的由免疫接种引起的杂交瘤通过ELISA就其来自于细胞上清液的固定化重组蛋白质进行筛选。或者是，用αd cDNA转染之前流式细胞计量术被用于分析对JY细胞的反应性。
7.另一种选择方案是，单克隆抗体如下产生。来自于稳定转染CHO细胞的去垢剂溶胞物的亲和纯化αd/CD18异二聚体蛋白质和50μg/ml胞壁二肽被如上所述免疫Balb/c小鼠。通过在CHO转染子免疫沉淀生物素化复合物而鉴定针对αd/CD18的血清反应性之前，小鼠被免疫接种三次。根据标准方法从阳性动物建立杂交瘤，之后使用αd/CD18转染子进行流式细胞计量术而选择杂交瘤培养物。CD11a/CD18转染子被用作仅对CD18有的反应性的对照。
8.作为单克隆抗体产生的另一选择，Balb/c小鼠经受免疫接种/免疫抑制方案，该方案被设计用于降低对于用于免疫接种的转染子的CHO细胞决定簇的反应性。该方案涉及用未转染的CHO细胞进行免疫接种，随后用环膦酰胺处理杀死CHO-反应性B细胞母细胞，经三轮免疫接种和环膦酰胺处理后，小鼠按上述步骤用αd/CD18 CHO转染细胞进行免疫。
9.另一种选择是，来自于PMA刺激HL-60细胞的去垢剂溶胞物的CD18复合物通过如上述步骤预清除而富集。其它β2整联蛋白在同一柱上清除。同生成的复合物进行免疫接种，如上文所述方案进行杂交瘤产生和筛选。B.多克隆血清产生
纯化的αd I结构域/IgG4嵌合体(实施例14)被用于在兔中产生多克隆血清。最初，配制于完全弗氏佐剂中的αd I结构域/IgG4抗原被从100μg/兔注射，然后用配制于不完全弗氏佐剂的等量蛋白质进行三次免疫加强。在第三和第四次注射之后分析血样。兔免疫球蛋白(Ig)从血清中在蛋白质A-琼脂糖柱上纯化，且在人IgG/Affigel 10柱上预清除抗人IgG反应性。通过ELISA检测到的与I结构域嵌合体，但不与人IgG具备反应性，证实了完全的预清除。
预清除的多克隆血清用于免疫沉淀来自于预先用αd和CD18表达载体转染的表面生物素化CHO细胞去垢剂溶胞物的蛋白质。通过先前在实施例10中描述方法进行免疫沉淀。预清除的血清识别与抗CD18单克隆抗体TS1.18沉淀的蛋白的分子量相同的蛋白质复合物。另外，在来自αd/CD18转染CHO细胞的CD18复合物的Western印迹实验中，血清识别合适大小的单一条带。来自人脾的亲和纯化整联蛋白CD11a/CD18，CD11b/CD18，和VLA4不被兔多克隆血清识别。在溶液中，血清不能与αd转染CHO细胞反应，正如流式细胞计量术所确定的。因而得出结论：多克隆兔血清仅能识别变性αd I结构域/IgG4蛋白质。
为尝试产生多克隆抗αd/CD18抗血清，用αd转染CHO细胞(D6CHO，αd/CD18)和佐剂肽免疫小鼠3次，用纯化αd/CD18异二聚体免疫1次。最后的加强免疫仅包含αd/CD18异二聚体。通过在4℃加入大约108LFA-1-转染CHO细胞2小时来预清除大约100μl免疫血清。在正常人脾上，将生成的血清于1/5000，1/10000，1/20000和1/40000稀释度分析其αd反应性。多克隆抗体于1/20000具有反应性，而在1/40000稀释度时，染色很浅。
                         实施例16αd分布的分析
使用如实施例15所述产生的多克隆抗血清确定αd/CD18的组织分布。
纯化的兔多克隆抗体以120ng/ml至60μg/ml的浓度范围用于冷冻人脾切片的免疫化学分析。6微米厚的切片铺覆于Superfrost，Plus Slides(VWR)上于-70℃冻存。使用前，切片从-70℃取出，置于55℃5分钟，然后切片于冷丙酮中固定2分钟，然后风干。切片于室温下在含有1％ BSA，30％正常人血清和5％正常兔血清的溶液中封闭30分钟，在室温下，第一抗体施用于每一切片1小时。未结合抗体通过在TBS溶液中洗涤3次而移去，每次洗涤5分钟。然后，在同样的TBS缓冲液中的兔抗小鼠IgG联结抗体被施用于每一切片。小鼠碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)抗体于室温下温孵30分钟，被用于检测第二抗体。然后将玻片在TBS缓冲液中洗3次。加入Fast Blue底物(Vector Labs)，通过没入水中而终止颜色显示。在用Aqua Mount(Baxter)计数之前，将玻片在Muclear Fast Red(Sigma)中复染然后用水润洗。用这种试剂在脾红髓质中检测到了染色，但用不相关兔多克隆Ig制备物或来自同一动物的未纯化免疫前血清则无此结果。
一旦确定小鼠血清具有特异性αd反应性，该血清用于染色多种淋巴和非淋巴组织。识别CD18，CD11a，CD11c的单克隆抗体在同一实验中用作对照。用αd多克隆血清，和CD11a，CD11b，CD11c和CD18的单克隆抗体揭示了以下结果。用αd多克隆血清所观察到的图样(pattern)不同于用CD11a，CD11b，CD11c或CD18标记的图样。用一些位于白髓质的边缘区的细胞进行的标记有清晰的图样，并且边缘区的外周细胞有清晰的标记。用其他抗体未观测到该图样。散布于红髓质中的单个细胞亦被标记，它们与用CD11a和CD18所标记的是亦可能不是同一类群或亚群。
用CD11c标记确实展示了在边缘区一些细胞的染色，但与αd多克隆血清相比，抗体在白髓质周围不显示清晰的环状图样，在红髓质进行标记时亦不给出与αd多克隆血清相同的图样。
因而，与使用抗其他β2整联蛋白(CD11a，CD11b，CD11c和CD18)的抗体时所见图样相比，用αd多克隆抗血清所见标记图样是独特的。提示αd在人体中的体内分布不同于其他β2整联蛋白。用单克隆抗体表征人αd表达
杂交瘤169A和169B分泌的抗体被用于分析人αd表达，其中在冷冻切片中借助于免疫化学，在细胞系和外周血白细胞中借助于流式细胞计量术。在这两套试验中所用杂交瘤上清液未被稀释。组织染色
所有染色均如上述步骤进行，只有肝切片的染色按以下方式。丙酮固定之后，切片在室温下，于1％ H2O2和1％叠氮钠的PBS溶液中淬灭15分钟。第一抗体染色之后，加入直接结合到过氧化物酶的兔抗小鼠抗体，于室温下保持30分钟。玻片在TBS缓冲液中洗3次。直接结合到过氧化物酶的猪抗兔抗体在室温下温孵30分钟以检测第二抗体。玻片在TBS缓冲液中洗3次，加入AEC底物(Vector Labs)以进行颜色反应。在脱水和计数前，用Hematoxylin Gill’s No.2(Sigma)复染玻片，然后在水中润洗。
在脾切片中，多数表达位于脾红髓质的经形态学鉴定为粒细胞和巨噬细胞的细胞上。大量粒细胞被染色，而仅有一部分巨噬细胞给出信号。在白髓质中的小量叶状树状细胞亦被αd抗体轻微染色。在红和白髓质中均检测到CD11a和CD18染色。在脾白髓质和白髓质周围的边缘区，被推测为巨噬细胞的大细胞中，CD11c染色更明显。亦注意到在红髓质中，弥散的染色。看来CD11b在红髓质中的分布与αd重叠但不相同，但不在白髓质中分布。
比较了整联蛋白在正常和(类风湿)关节炎滑膜组织中的表达。注意到在正常组织中用所有抗-整联蛋白抗体(包括与CD11a，CD11b，CD11c，CD18和αd特异性免疫反应的抗体)得到最低量的染色，而在栖息细胞(推断为巨噬细胞)中有广泛分布。在炎性滑膜中，所有整联蛋白的表达更多地位于簇集在淋巴管周围的细胞。虽然αd和CD11b表达模式是相似的，CD11c看来不同样强烈地表达，且局限于白细胞的亚群中。
在狗的肝巨噬细胞或Kuppfer细胞中观察到了CD11b的表达，但未观察到αd的表达。正常人肝切片的染色(如先前描述的对于狗肝切片的染色，见上文)证实了这样染色图样在人体中的保守性。另外，探测到低水平的CD11c。在肝炎病人切片中，所有的白细胞整联蛋白染色高于在正常肝中观察到的，而在这些样品中的巨噬细胞和粒细胞检测到了αd表达。
用抗αd抗体观察到了正常人结肠切片的最小量的染色，观察到了微弱的平滑肌染色和白细胞染色。在Crohn氏病患者的切片中检测到高水平的白细胞整联蛋白。
正常肺显示了有限数量的微弱的αd阳性细胞，这些细胞经形态鉴定为巨噬细胞和嗜中性粒细胞。在肺气肿患者的肺组织中，观察到嗜中性粒细胞和巨噬细胞上的αd染色，其中巨噬细胞含有血铁黄素，这是含有铁离子的色素，表明这些细胞吞噬了红细胞。
检查正常脑和多发性硬化患者的空斑损伤切片的整联蛋白表达。在正常脑组织中，αd染色弱于CD11a，CD11b和CD11c染色，且局限于形态分类为微胶质细胞和CD68染色的细胞。CD11b阳性细胞位于血管周围且遍布组织。CD11c+细胞看来位于血管内，而αd +细胞围绕血管在MS组织切片中，在微胶质细胞和非巨噬细胞白细胞亚群上发现αd表达；αd +细胞位于空斑损伤内，且遍布皮质，αd信号的强度与CD11c相同，但低于CD11b。
用抗白细胞整联蛋白和抗-CAM抗体分析PDA Y(青年动脉粥样硬化病理生物学决定簇，LSU医药中心)组织样品的胸主动脉和腹主动脉切片。检查到的损伤与主动脉脂肪层一致，该脂肪层由大的泡沫组织(多数是具有消化的脂肪的巨噬细胞)的内膜下聚集体和小的白细胞的浸润物组成。用αd和其他β2整联蛋白α链(CD11a，CD11b和CD11c)特异性抗体进行单标记研究，再加上巨噬细胞标记(CD68)揭示多数载脂巨噬细胞表达中等水平的αd和CD18，而分别以微弱或微弱至中等水平表达CD11a和CD11c。CD11b被微弱表达，且此时仅被巨噬细胞亚群表达。
进行双标记研究以确定αd和ICAM-R在主动脉切片中的相对位置。因为在这些切片中，泡沫细胞被巨噬细胞特异性标志抗体Ham 56染色，而不被平滑肌肌动蛋白抗体染色，因而确定泡沫细胞不衍生于内膜下平滑肌细胞。表达αd的CD68阳性巨噬细胞被小ICAM-R阳性白细胞环绕且穿插。看来有有限数量的CD68阴性小白细胞，但被αd和ICAM-R抗体染色。
看来αd在正常组织中分布在栖息的白细胞上，其分布方式与CD11b和CD11c的分布方式重叠但不相同，CD11b和CD11c是两种其他的白细胞整联蛋白α链，先前被表征具有限制性的白细胞分布。细胞形态学表明：αd染色被大量地局限在巨噬细胞和粒细胞上，且有有限的淋巴细胞染色。一般看来，组织炎症升高在特定组织中观察到的白细胞的数目和种类，伴随增加的白细胞整联蛋白包括αd的染色。因为白细胞整联蛋白在病理组织中的细胞和空间分布不同，可以推论在具体环境中，每一家族成员，包括αd具有性质不同的作用和配体。
令人感兴趣地，与CD11a，CD11b，CD11c相比，αd表达在早期动脉粥样硬化损伤中看来更为显著，提示αd可能在这些损伤中起中心作用。αd和ICAM-R阳性细胞的apposed分布被提示在αd和ICAM-R之间相互作用的事实支持，提示αd可能参与这些损伤的早期的白细胞募集或激活。细胞系和外周血白细胞染色
抗体169A和169B通过FACS染色前髓单核细胞系HL60。在这些细胞中αd表面表达被PMA刺激负面影响，但不受DMSO影响，其中PMA刺激被报道诱导沿巨噬细胞途径分化，而DMSO诱导粒细胞分化〔Collins，等，血液，70：1233-1244(1987)〕。使用PMA刺激的169A和169B的FACS分布形式(profile)与那些用抗-CD11b和抗CD11c单克隆抗体观察到的分布形式正相反。另外外周血白细胞的淋巴细胞和单核细胞gate的细胞亚群是FACS弱阳性的。外周血单核细胞亚群用169A和169B微弱染色，而B淋巴细胞无αd表面表达。T淋巴细胞的CD8+亚群是αd +。另外，抗体169A和169B不能探测B细胞系的JY，Ramos，嗜碱性细胞系KU812，和T细胞系Jurkat SKW和Molt 16上的抗原。
考虑到HL60细胞的结果，通过聚蔗糖/hypalque梯度离心然后裂解红细胞而从外周血中分离粒细胞。通过在乙酸中进行核形态学观察发现所有制备物＞90％ PMN。用50ng/ml  PMA或10-8M甲基肽刺激分离的类群30分钟以释放潜在的细胞内整联蛋白贮存。未刺激的类群展示了高出IgG1对照的低的但是明显的169A和169B抗原表达，当受到刺激时观察到可测的升高。在PMN中，αd和CD11c表面表达水平与在HL60细胞中观察结果相比更具有相似性。抗体169B被随后用于从生物素化PMN的去垢剂溶胞物中沉淀异二聚体分子，其亚基的大小分别是大约150和95kD，对于αd和CD18是合适的。
αd在PMN上的出现不能由已知关于犬αd表达的信息预测。犬嗜中性粒细胞不同于其人对应物，它表达T助细胞标志CD4和整联蛋白VLA-4，因而在狗中可能具有不同于人中的配体和功能。PBL亚群染色
进行本研究以确定该β2整联蛋白在人外周血白细胞中的分布。另外，比较了αd相对于其它β2整联蛋白的细胞表面密度。最后，评价了αd表达在纯化的人嗜曙红细胞中的急性调节。
人外周血白细胞通过密度梯度离心分离成单核细胞级分(含有单核细胞，淋巴细胞和嗜碱性细胞)和粒细胞级分(嗜中性粒细胞和嗜曙红细胞)〔Warner等，J.Immunol Meth， 105：107-110(1987)〕。就一些实验而言，使用CD16免疫磁性选择纯化嗜曙红细胞，纯度大于95％〔Hansel等，J.Immunol Meth  122：97-103(1989)〕。如上所述从人皮肤酶促分散皮肤肥大细胞并富集〔Lawrence等，JImmunol， 139：3062-3069(1987)〕。
用特异于CD11a(MHM24)，CD11b(H5A4)，CD11c(BU-15D)或αd(169A)的单克隆抗体的合适的稀释液标记细胞。还采用了对照鼠IgG1。洗涤细胞然后与藻红蛋白结合羊抗小鼠IgG温孵。在一些实验中，细胞与过量的特异于一种特定细胞的鼠IgG和FITC-标记鼠单克隆抗体或羊多克隆抗体温孵(如，对于T细胞是CD3，CD4或CD8)；就NK细胞是CD16+淋巴细胞，就嗜碱性细胞是抗IgE〔Bochner等，J.Immunol Meth， 125：265-271(1989)〕。然后用流式细胞计量术(Coulter EPICS Profile)检查样品，用合适的闸门(gating)以鉴定细胞亚群。
为了用其中αd表达的急性上调已被研究的人嗜曙红细胞进行研究，用佛波酯(10ng/ml)，RANTES(100ng/ml)〔Shall，细胞因子3：165-183(1991)〕，或IL-5(10ng/ml)在如上用多种单克隆抗体标记之前，于37℃刺激细胞15分钟。
结果表明αd出现在所有外周血嗜曙红细胞，嗜碱性细胞，嗜中性粒细胞，单核细胞和NK细胞。CD8+淋巴细胞的小的亚群(大约30％)被发现表达αd。皮肤肥大细胞和CD4+淋巴细胞不表达αd。一般地，CD11a和CD11b以较高密度出现在白细胞上，而αd与CD11c相似，以较低水平表达。在白细胞单核细胞和CD8+细胞具有最高密度的αd，而嗜曙红细胞具有最低水平的αd表达。在嗜中性，嗜碱性细胞，和NK细胞中的表达是中等水平。
用CC化学因子(chemokine)RANTES刺激外周嗜曙红细胞不引起任何β2整联蛋白的表达的改变。然而，用佛波酯处理引起CD11b和αd表达的2至3倍的升高，但不影响CD11a或CD11c的表达。IL-5处理引起了CD11b表达的选择性上调而不影响其它整联蛋白亚基的水平。
综合而言，这些结果指明在外周血白细胞中，αd一般以可比于CD11c的水平表达。发现最高水平在单核细胞和CD8+淋巴细胞亚群上。人皮肤肥大细胞不表达αd。纯化的嗜曙红细胞看来具有一个预先形成的CD11b和αd的胞质内贮库。然而，IL-5相对于PMA显示出的有差别的上调提示：这些贮库是彼此分开的。
如上所述，将闸门和表面标志结合使用，用流式细胞计量术确定外周血白细胞(PBL)亚群的染色图样，试图更精确地限定169A/B阴性淋巴细胞群。PBL如上所述在Ficoll上分离，且用169A，169B以及抗CD14(单核/巨噬细胞标志)，CD20(B细胞)，CD56(NK细胞)，T细胞受体α/β(T细胞)，CD16(嗜中性粒细胞，NK细胞)，和α4(嗜中性粒细胞的阴性标记)的单克隆抗体。闸门由大小和标记分布决定。
结果表明在CD14+单核细胞闸门的细胞展示了低水平的169A和169B染色。在早期实验中，在淋巴细胞闸门观察到的双重方式的表达方式，通过升高向前的散射而解决。混合的TCR+/CD20+细胞群似乎具有低的，但是均一水平的160A/B表达，但是被定位于轻微较高侧旁散射(细胞复杂性)的细胞群，其大约50％为CD56染色阳性，看来具有明确的169A/B阴性群。阴性群亦不被TCR，CD20，CD14或CD16抗体识别。αd的滑膜分布
为了确定αd，其它β2整联蛋白和它们在炎性和非炎性滑膜中的对应物的细胞分布，对于不同β2整联蛋白和免疫球蛋白超基因家族的单克隆抗体被用于免疫组织学研究。在正常的，骨关节炎和类风湿滑膜组织样品中确定蛋白质表达。
结果表明滑膜衬细胞层表达了高水平的VCAM-1，CD11b/CD18和αd/CD18。在这些细胞中，CD11c/CD18表达是受限制的，一般检测不到CD11a/CD18。在风湿性关节炎滑膜中，在滑膜细胞层中β2整联蛋白的表达与增生的程度成比例增加。表达CD11c的细胞比例明显升高，接近表达CD11b和αd的细胞比例，但CD11a表达没有升高。
在组织的sablining区域，CD3/CD11a/ICAM-R+淋巴细胞的聚集物和弥散的浸润物散布在CD68/CD11b/αd +巨噬细胞之间。大量的聚集物证实了强烈的αd染色，特别是在T细胞丰富区。
伴随最低的CAM-R的表达迹象，滑膜内皮可变地表达ICAM-1和ICAM-2。
综合起来，这些结果表明：滑膜巨噬细胞和巨噬细胞样滑膜细胞组成型地高水平表达β2整联蛋白CD11b和αd。在滑膜中，这一细胞亚群在lining和sublining区域部有扩展，伴随明显的CD11c表达升高。类风湿滑膜T淋巴细胞的特异细胞群，除表达CD11a和ICAM-R之外，还高水平表达αd，上文还表述αd分子被外周血淋巴细胞低水平表达。
                            实施例17大鼠cDNA克隆的分离
考虑到在犬和人中均存在αd亚基，试图在其他物种包括大鼠(该实施例)和小鼠(实施例17，见上)中法律同源基因。
从大鼠脾λgt 10文库(Clontech)中获得了与人αd基因具有同源性的大鼠cDNA部分序列。该文库以2×104 pfu/板在150mm LBM/琼脂板上平板接种。将文库插在Hyboxd膜上(Amersham)，按标准方案所述(Sambrook等：分子克隆：实验室手册，p 2.110)，变性3分钟，中和3分钟，用缓冲液洗5分钟。立即将膜放入Stratalinker(Stratagene)使用自动交联设备交联DNA。膜在低和高严格度条件下，分别在30％和50％甲酰胺中预杂交和杂交，膜最初用对应于克隆19A2(SEQ IDNO：1)的500至2100碱基的，由人αd cDNA产生的32P标记探针筛选。探针按制造商的说明用Boehringer Mannheim随机引物试剂盒标记。滤膜于55℃用2×SSC洗2遍。
两个被命名为684.3和705.1的克隆，被鉴定为人αd，人CD11b，和人CD11c同源序列。两个克隆均排列在人αd基因的3′区域，克隆684.3从碱基1871开始延伸至碱基3012，而克隆705.1从碱基1551开始延伸至残基3367。
为了分离更复杂的包含5′区域的大鼠序列，采用与首轮筛选相同的方法，但采用从克隆A1160(见实施例17，见下)产生的小鼠探针再次筛选同一文库。从第二轮筛选中选择出单个的分离的噬斑，作为单克隆保存在LBM/琼脂平板上。测序引物434FL和434FR(分别是SEQ IDNO：34和35)被用于标准PCR方案以产生用于测序的DNA。5′-TATAGACTGCTGGGTAGTCCCCAC-3′           (SEQ ID NO：34)5′-TGAAGATTGGGGGTAAATAACAGA-3′           (SEQ ID NO：35)
按制造商方案使用Quick Spin Column(Qiagen)纯化该PCR的DNA。
两个克隆被命名为741.4和741.11，被鉴定为覆盖克隆684.3和705.1。在SEQ ID NO：36中给出了与人αd基因具有同源性的复合大鼠基因，在SEQ ID NO：37中给出了预测的氨基酸序列。克隆大鼠αd的5′末端
按制造商的方案，采用Clonetech大鼠脾RACE克隆试剂盒获得了大鼠αd基因的5′cDNA片段。使用的基因特异寡核苷酸被称为741.11#2R和741.2#1R(分别是SEQ ID NO：59和58)。
5′-CCAAAGCTGGCTGCATCCTCTC-3′             (SEQ ID NO：59)
5′-GGCCTTGCAGCTGGACAATG-3′               (SEQ ID NO：58)寡聚741.11 # 2R以相反的取向包含SEQ ID NO：36的131-152位碱基，741.2 # 1R亦以相反取向包含SEQ ID NO：36的696-715位残基。使用最3′的寡聚物741.2 # 1R进行首轮PCR。然后使用寡聚物741.11 # 2R和首轮反应产生的DNA进行第二轮PCR。在1％琼脂糖凝胶上探测到了大约300个碱基的带。
按制造商的说明，第二轮PCR产物连接到质粒pCRTAII(Invitrogen)。挑取白色(阳性)菌落并加到盛有100μl LBM的圆底96孔组织培养板的单个样品孔中，其中，LBM含有1ml 50mg/ml的羧苄青霉素贮液和1μl M13 K07噬菌体培养物。混合物于37℃温孵30分钟至1小时。在最初的温孵期之后，加入100μl LBM(含有1μl50mg/ml羧苄青霉素和1∶250稀释度的10mg/ml卡那霉素贮液)，于37℃，继续温孵过夜。
使用无菌96孔金属转移吸头，将来自96孔板的上清液转移到4张Amersham Hybond尼龙滤膜上。用标准方法将滤膜变性，中和，和交联，滤膜于50℃在2ml预杂交缓冲液(5×SSPE；5×Denhardts；1％SDS；50μg/ml变性鲑精DNA)中振荡预杂交数小时。
寡聚探针741.11 # 1和741.11 # 1R(分别是SEQ ID NO：56和57)分别在正向和反向包含碱基对86-105(SEQ ID NO：36)如下标记。
5′-CCTGTCATGGGTCTAACCTG-3′             (SEQ ID NO：56)
5′-AGGTTAGACCCATGACAGG-3′              (SEQ ID NO：57)大约65ng溶于12ml dH2O的寡DNA加热至65℃，2分钟。3μl的10mCi/mlγ-32P-ATP与4μl 5×激酶缓冲液(Gibco)和1μl T4DNA激酶(Gibco)一起加入管中，混合物于37℃，温孵30分。温孵后，16μl的每一种标记的寡核苷酸探针被加至预杂交缓冲液和滤膜中，于42℃继续杂交过夜。滤膜于室温在5×SSPE，0.1％ SDS洗涤3遍，每次洗涤5分钟、放射自显影6小时。扩增阳性克隆并按制造商说明用Magic Mini Prep kit(Promega)纯化DNA。选择克隆2F7用于测序，在重叠区，显示了与克隆741.1 100％的同源性。在SEQ ID NO：54中给出了完整的大鼠αd核酸序列，在SEQ ID NO：55中给出了氨基酸序列。大鼠cDNA和氨基酸序列的表征
先前未报道大鼠β2整联蛋白中α亚基的核酸或氨基酸序列。然而与报道的人β2整联蛋白α亚基相比，其序列比较提示分离的大鼠克隆及其氨基酸序列与αd核苷酸和氨基酸序列最密切相关。
在核酸水平，分离的大鼠cDNA克隆显示了与人αd cDNA相比80％同一性，与人CD11b相比68％同一性，与人CD11c相比70％同一性，与鼠CD11b相比65％的同一性。没有发现与人CD11a和小鼠CD11a相比明显的同一性。
在氨基酸水平，由分离的cDNA编码的大鼠多肽与人αd多肽相比具有70％同一性，与人CD11a相比有28％同一性，与人CD11b相比有58％同一性，与人CD11c相比有61％同一性；与小鼠CD11a相比有28％同一性；与小鼠CD11b相比有55％同一性。
                           实施例18啮齿类αd特异抗体的产生和表征A.抗大鼠αd I结构域/人IgG4融合蛋白抗体
考虑到人β2整联蛋白I结构域被证明参与配体结合这一事实，推测大鼠αd蛋白亦是此种情况。因而大鼠αd I结构域的免疫特异性单克隆抗体可用于人疾病状态的大鼠模型，其中αd结合参与了该种疾病。
寡聚“大鼠α-D15”(SEQ ID NO：87)和“大鼠α-ID3(SEQID NO：88)从大鼠αd序列产生，分别对应于SEQ ID NO：54的碱基对469-493和碱基对1101-1125(以相反取向)。该寡聚物用于标准PCR反应以产生含有跨越SEQ ID NO：54的碱基对459-1125的I结构域的大鼠αd DNA片段。按制造商的说明，将PCR产物连接到载体pCRTAII(Invitrogen)中。选择并扩增阳性克隆。按制造商的说明使用Qiagen(Chatwoth，GA)Midi Prep试剂盒纯化DNA，以标准限制性酶切方案用Xho I和Bgl II酶切DNA，将一个600碱基对的带凝胶纯化，随后连接到pDCS1/HuIgG4表达载体中。选择并扩增阳性克隆，用Quiagen Maxi Prep Kit纯化DNA。
COS细胞以半数汇合的量接种100mm培养皿于37℃在7％ CO2生长过夜。细胞用5ml DMEM润洗一次。向5ml DMEM，50μg DEAE-Dextran，2ml Chloroquine中，加入上述15μg大鼠αd I结构域/HuIgG4 DNA。混合物加到COS细胞中，于37℃温孵3小时。弃去培养基加入含10％ DMSO的5ml CMF-PBS、恰好1分钟。细胞用DMEM温和洗涤一次。加入含10％ FBS的10ml DMEM，于37℃，7％ CO2中持续温孵过夜。次日，用新鲜培养基代替培养基持续温孵另外3天。收集培养基，将新鲜培养基加入平板。3天之后，再次收集培养基弃去平板。重复以上步骤，直到收集到2升上清液。
如上收集的上清液上样于Prosep-A柱(Bioprocessing Limited)如下纯化蛋白质。
最初以15倍柱体积的Wash Buffer洗柱，其中含有35mM Tris和150mM NaCl，pH7.5。上清液以大约低于约每小时60倍柱体积的缓慢速度上样。上柱之后，用15倍柱体积的Wash buffer，15倍柱体积的0.55M二乙醇胺pH8.5，15倍柱体积的50mM柠檬酸，pH5.0洗柱。用50mM柠檬酸，pH3.0洗脱蛋白质。用1.0M Tris，pH8.0中和蛋白质，并在无菌PBS中透析。
如实施例14中所述分析大鼠αd结构域蛋白。探测到的蛋白质以从人I结构域蛋白所观察到的同样方式迁移。B.大鼠αd I结构域/HuIgG4融合蛋白的单克隆抗体的产生
用预先乳化到等体积弗氏完全佐剂(FCA)(Sigma)中的50μg纯化大鼠αd I结构域/HuIgG4融合蛋白单独免疫小鼠。在每只小鼠的背侧和肋侧的4个位点注射大约200μl抗原/佐剂制备物。两周之后，注射预先乳化在等体积弗氏不完全佐剂(FIA)中的100μl大鼠αd I结构域/HuIgG4抗原而加强免疫。再过两周之后，小鼠用在200μl PBS中的50μg抗原进行静脉注射而加强免疫。
为评价免疫接种小鼠中的血清滴度，在第三次免疫接种之后10天对动物进行retro-orbital取血。让血凝结，离心分离血清，血清用于生物素化(BIP)大鼠脾细胞免疫沉淀。来自每只小鼠的血清免疫沉淀预期是大鼠αd和大鼠CD18的蛋白带。一只小鼠被选择用于融合，并如上文中第三次加强免疫所述步骤进行第四次加强免疫。
如下描述，通过抗体俘获而筛选杂交瘤上清液。于4℃用50μl以1∶5000稀释于50mM碳酸盐缓冲液，pH9.6中的羊抗小鼠IgA、IgG或IgM Corganon Takrikan/孔包被Immulon 4平板用3x含0.05％吐温20的PBS(PBST)洗板，并加入50μl培养上清液37℃温孵30分钟，并如上述洗涤之后，加入50μl以1∶3500稀释在PBST中的辣根过氧化物酶结合的羊抗小鼠IgG9(Fc)(Jackson Immuno Research，WestGrove，Pennsylvania)。加入含有溶于100mM柠檬酸盐，pH4.5中的1mg/ml邻苯二胺(Sigma)和0.1μl/ml  30％ H2O2的100底物。5分钟后加入50μl 15％ H2SO4中止颜色反应。在Dynatech板读数仪上读出490nm的吸光率。
还用固定化大鼠αd I结构域/HuIgG4融合蛋白采用ELISA分析来自含有抗体的样品孔的上清液。用HuIgG4抗体包被的平板进行的ELISA被用作针对IgG融合伙伴的反应性的对照。使用如下描述的技术，选择阳性样品孔用于用BIP对大鼠脾细胞溶胞物进一步筛选。C.抗大鼠αd I结构域/HuIg4融合蛋白的多克隆血清的产生
在用100μg纯化大鼠αd I结构域/HuIg4融合蛋白(在完全弗氏佐剂中)免疫接种之前，将两只兔预先采血。每三周以配制于不完全弗氏佐剂的同样剂量重复注射。注射三次之后，测试兔血样，将收集的兔血清用于大鼠脾细胞溶胞物的标准免疫沉淀。已经确信，来自于两只兔的血清都与大鼠αd免疫反应。用100μg IFA中的抗原再次加强免疫兔，收集的血清通过免疫沉淀分析其与大鼠αd的增加的免疫反应性。将大鼠进行最后一次加强免疫，10天之后，采血并收集血清。大鼠αd组织学
产生用于抗大鼠αd“I”结构域的大鼠多克隆血清被用于用实施例16所述标准技术免疫组织化学染色大鼠组织切片。在冷冻的和石蜡包埋的大鼠脾切片上探测到的染色图样与用抗人αd抗体染色所观察的结果基本相同，染色的单个细胞遍布于红髓质。染色图样不同于用抗大鼠CD11a，CD11b和CD18的单克隆抗体所观察到的。另外，在胸腺中，在皮质各处的单个细胞上，可见阳性染色图样。用兔免疫前血清染色时，这些组织无一给出信号。D.抗体特异性分析
通过吸入CO2而处死大鼠，用标准外科手术方法取脾。用3cc注射针管轻推脾通过筛网收集悬于20ml RPMI的脾细胞。细胞收集到50ml尖底管中，在合适的缓冲液中洗涤。
细胞在冷D-PBS中洗三次，并以108至109细胞的密度悬浮于40mlPBS中。向细胞悬液加入4mg NHS-Biotin(Pierce)，并使反应在室温下准确进行15分钟。沉淀细胞并在冷D-PBS中洗3遍。
细胞以108细胞/ml的密度重悬于冷溶胞缓冲液(1％ NP40；50mMTris-HCl，pH8.0；50mM NaCl；2mM CaCl2；2mM MgCl2：在加入细胞之前加入的pepstain leupeptine，和aprotmin 1∶100稀释液；在加入细胞之前加入的0.0001g PMSF晶体)。溶胞物剧烈振摇大约30秒，于室温下温孵5分钟，再冰浴15分钟。溶胞物于10,000×g离心10分钟以沉淀不溶物质。将上清收集于一新管中贮于4℃至-20℃之间。
通过与200μl蛋白质A琼脂糖砂浆(slurry)(Zymed)于4℃温孵过夜而预澄清1ml细胞溶胞物。预澄清的溶胞物从50μl/管分装于Enppendarf管中，以用于每一待测的抗体。25μl多克隆血清或100至500μl单克隆抗体上清液加入预澄清的溶胞物中，形成的混合物于4℃振荡保温2小时。然后加入100μl结合在蛋白质A琼脂糖珠上的兔抗小鼠IgG(Jackson)PBS砂浆于室温持续振荡温孵30分钟。温和离心以沉淀小珠，用冷Wash Buffer(10mM HEPES；0.2M NaCl；1％Triton X-100)洗三遍。吸走上清液，加入含有10％β-巯基乙醇的20μl 2×SDS样品缓冲液。样品在水浴中煮沸2分钟，将样品上样于5％ SDS PAGE胶。分离之后，蛋白质必在稳定电流之下，过夜转移到硝酸纤维素膜上。硝酸纤维素膜用TBS-T中的3％ BSA于室温下封闭1小时，去除封闭缓冲液。加入在0.1％ BSA TBS-T中的1∶6000稀释度的链霉抗生物素蛋白-HRP结合物(Jackson)，于室温持续保温30分钟，滤膜用TBS-1洗涤3遍，每次15分钟，按制造商提供的方案用Amersham’s  ECL试剂盒放射自显影。E.抗全长大鼠αd蛋白质的单克隆抗体的产生大鼠αd蛋白质的纯化
从大鼠脾细胞中纯化大鼠αd以制备免疫原用于产生抗大鼠αd单克隆抗体。收集来自大约50只12-20周龄的雌性Lewis大鼠，迫使其通过细筛网而从组织中制备单细胞悬液。通过在含有150mM NH4Cl，10mM KHCO3，0.1mM EDTA，pH7.4的缓冲液中裂解而除去红细胞，存留的白细胞用磷酸盐缓冲液(PBS)洗2次。离心沉淀脾细胞，在含有50mM Tris，150mM NaCl，2mM CaCl2，2mM MgCl2，10mM PMSF，leupeptin，胃蛋白酶抑制剂和Triton X-100的缓冲液中裂解。脾细胞的溶胞在冰上进行30分钟，每5×108脾细胞加入1ml溶胞缓冲液。不可溶物质离心除去。
如下通过免疫沉淀从脾细胞溶胞物中除去CD11a，CD11b和CD11c。750μl体积的蛋白质A-琼脂糖砂浆与2mg兔抗小鼠免疫球蛋白于4℃温孵30分钟。用溶胞缓冲液将兔抗小鼠-蛋白质A-琼脂糖洗涤3遍，悬浮于1.5ml溶胞缓冲液的终体积中。大约200μg每一种大鼠β2整联蛋白特异性单克隆抗体，515F(特异于大鼠CD11a)，OX-42(特异于大鼠CD11b)和100g(特异于大鼠CD11a)各自加入到50ml大鼠脾溶胞物中。于4℃温孵30分钟后，向脾溶胞物加入500ml兔抗小鼠蛋白质A-琼脂糖，并于4℃ end-over-end振荡30分钟而混合溶胞物于2500×g离心10分钟以沉淀与兔抗小鼠-蛋白质A-琼脂糖结合CD11a，CD11b和CD11c，上清液转移到清洁的50ml离心管中。用抗体515F，OX-42和100g重复免疫沉淀两次以保证完全除去CD11a，CD11b和CD11c。
使用亲和纯化分离存留于溶胞物中的β2整联蛋白。向溶胞物加入250μl结合在CNBr-琼脂糖上的抗大鼠CD18单克隆抗体20C5B砂浆，并于4℃ end-over-end振荡30分钟。于2500×g离心10分钟沉淀抗体/抗原复合物，在贮存于4℃前，用溶胞缓冲液洗涤沉淀3次。Armenian仓鼠免疫接种
6至8周龄的Armenian仓鼠用大约50μg乳化于完全弗氏佐剂的重组蛋白质起始免疫，其中重组蛋白质由融合到人IgG4重链的大鼠αd I结构域组成。初次免疫接种之后，在14、33，95天用乳化在不完全弗氏佐剂的大鼠αd I结构域/HuIgG4继发免疫接种。两个不同的被称为197和199的融合随后进行。
在融合197前4天(306天)，将一只仓鼠给药由脾细胞纯化的大鼠αd蛋白质和用大鼠αd转染的CHO细胞的组合物。在用纯化的大鼠αd蛋白质和αd转染CHO细胞融合之前3天(307天)，给予融合加强免疫。大鼠αd转染CHO细胞如下制备。
编码全长大鼠αd蛋白质的基因片段被插入到pDCl载体并与人CD18-pRC构建物一起通过电穿孔转染CHO细胞。转染细胞在次黄嘌呤的出现下生长以选择用pRC构建物成功转染的细胞，在g418出现下生长以选择用pDC1构建物成功转染的细胞。三周之后，用大鼠αd特异性兔多克隆抗血清染色细胞，并用FACS分类。选择小百分比的表达表面αd最高水平的细胞(大约总数的3％)并且进一步扩增。重复数次FACS选择，以提供具有高水平αd表面表达的细胞群。
使用大鼠αd特异性多克隆血清和人CD18特异性单克隆抗体TS1.18.1通过流式细胞计量术表征αd转染细胞。结合表明转染的CHO细胞表达了高水平的大鼠αd和人CD18。
最后，用免疫沉淀评价了细胞中αd和CD18的表达。发现大鼠αd特异性兔多克隆血清免疫沉淀两种分子量不同的蛋白质：高分子量蛋白是170kD，低分子量蛋白是95kD。这些发现同在转染CHO细胞表面上大鼠αd/人CD18异二聚体复合物的表达相一致。
在融合的当天，取脾脏，并且通过浸没在补充了2mM L谷氨酸，1mM丙酮酸100单位/ml青霉素，和100μg/ml链霉素的无血清RPMI(Gibco，Canada)中，将组织在两片玻璃显微载玻片的冷冻末端之间研磨而形成单细胞悬浮液，细胞悬液通过一个无菌70目Nitex细胞渗滤器(Becton Dickinson Parsippany New Jersey)，滤液于200g离心5分钟洗两遍。生成的沉淀重悬于20ml无血清RPMI。以同样方式制备来自于三只初次进行实验的Balb/c小鼠的胸腺细胞，于对数期保藏在补充了10％Fetalclone血清(FBS)(Hyclone Laboratories，Inc.，Logan，Utah)的RPMI中，在融合前保藏了3天的NS-1骨髓病细胞，于200g离心5分钟而沉淀，如前述洗涤两次。大约1.15×108脾细胞与5.8×107 NS-1细胞合并，沉淀。并通过抽吸弃去上清。敲击离心管，使细胞沉淀脱离原有的位置，在1分钟的过程中，振摇加入2ml于75mM Hepes(pH8.0，37℃)(Boehringer Mannheim)中的50％ PEG 1500，在随后的7分钟内加入另外14ml不含血清的RPMI，然后随即加入14mlRPMI。生成的混合物于200g离心10分钟并弃去上清。沉淀重悬于含有15％ FBS，100mM次黄嘌呤钠，0.4mM氨基蝶呤，16mM胸苷(HAT)(Gibco)，25单位/ml IL-6(Boehringer Mannheim)和1.5×106胸腺细胞/ml的200ml RPMI，以200μl/孔分装到10只96孔平底组织培养板(Corning United Kingdom)。在融合后4，5，6和7天用18G针头(Becton Dickinson)从每个孔中吸取100μl，然后加入除了含有10单位/ml IL-6和缺乏胸腺细胞外，与上述相同的培养基，加入量为100μl/孔，以饲养细胞。
在第10天，用流式细胞计量术就其对于大鼠αd/人CD18转染CHO细胞的反应性筛选来自融合样品孔的上清液。大约5×105大鼠αd转染CHO细胞悬浮于50μl含有2.0％ FBS和0.05％叠氮钠的RPMI中，并加到盛在96孔圆底板的大约100μl杂交瘤培养物上清液中。染色的阳性对照包括兔抗αd多克隆血清和TS1/18(抗人CD18)。细胞冰浴30分钟，在FACS缓冲液(RPMI，2.0FBS，0.05％叠氮钠)中洗3次，并与以1∶200最终稀释度稀释于FACS缓冲液中的FITC结合的羊抗仓鼠抗体(Jackson Immuno Research Labs)冰浴30分钟。细胞用FACS缓冲液洗3次并重悬于200ml FACS缓冲液。用Becton DickinsonFACsan分析仪分析样品，为保证阳性克隆样品孔是大鼠αd特异性的，该筛选用非转染CHO细胞重复。克隆符合与大鼠αd CH转染子但不与未转染CHO细胞反应的标准的样品孔。
首轮筛选之后，来自于阳性样品孔的细胞通过在RPMI，15％ FBS100mM次黄嘌呤钠盐，16mM胸腺嘧啶，和10单位IL-6/ml中最初双倍稀释，然后有限稀释而克隆。在有限稀释步骤中，显示出生长的样品孔的百分比被确定，使用泊松分布分析预测克隆性(clonality)。10-12天之后，用FACS分析显示生长的样品孔。最终克隆之后，阳性样品孔在含有11％ FBS的RPMI中扩增。克隆产生了确定是这些指标阳性的培养物，从此扩增了四个独立的亚克隆，命名为197A-1，197A-2，197A-3和197A-4。
融合199之前，第二只仓鼠在307天用2.3×106大鼠αd转染CHO细胞加强免疫。在融合之前4天(334天)和融合之前3天(335天)给予两次最终免疫接种。334天的加强免疫由腹膜内注射2×106大鼠αd转染CHO细胞和200μl纯化的结合到Sepharose(上面已叙述)上的大鼠αd组成。335天加强免疫由腹膜内给药5×106大鼠αd转染CHO细胞组成。融合199的融合和筛选步骤与融合197相同。鉴定并克隆了三株杂交瘤，称为199A，199H，199M，其上清液与大鼠αd有反应性。杂交瘤199M于1996年3月1日保藏于美国典型培养物保藏中心12301Parklawn Drive，Rockville，Maryland 20852，保藏号为HB-12058。大鼠αd单克隆抗体的表征
为表征抗大鼠αd抗体，如实施例18第4部分制备生物素标记脾溶胞物。在用于免疫沉淀前预澄清溶胞物。最初，将50μg/ml正常鼠免疫球蛋白加入溶胞物，于4℃形成的溶液用end-over-end振荡30分钟。加入用兔抗小鼠免疫球蛋白包被的75μ1蛋白质A-琼脂糖砂浆，继续end-over-end振荡30分钟。在台式离心机上，将兔抗小鼠包被的蛋白质A小珠于15,000rpm，于4℃离心5分钟而沉淀，收集上清液，弃去沉淀物。
就每种克隆的杂交瘤而言，大约300μl上清液被置于Eppendorf小离心管中，向其加入30μl 10％ Triton X-100，30μl 100X胃蛋白酶抑制剂，leupeptin和aprotinih贮液，100μg PMSF晶体，和50μl预澄清的生物素化大鼠脾溶胞物。样品温和振荡于4℃，置于end-over-end rotator上3分钟。通过向50μl大鼠脾溶胞物加入10mg/ml兔抗大鼠αd特异性多克隆抗体而制备对照样品。
温孵30分钟之后，向每一样品加入75μl在PBS中的蛋白质A-琼脂糖小珠砂浆，于4℃ end-over-end振荡30分钟。于4℃，在台式离心机上离心5分钟以沉淀蛋白质A偶联小珠并收集上清液。沉淀小珠顺次以1ml去垢剂系列洗涤：缓冲液1含有10mM Tris， 400mMNaCl，1.0％ Triton X-100，pH8.0；缓冲液2含有10mM Tris，400mM NaCl，0.5％ Triton X-100，pH8.0；缓冲液3含有10mMTris，400mM NaCl，1.0％ Triton X-100，pH 8.0 0.1％脱氧胆酸，缓冲液4含有10mM Tris，400mM NaCl，0.5M LiCl2，pH8.0用洗涤缓冲液1进行最终洗涤。每次洗涤之间温和振荡珠子，用台式离心机沉淀。用转移吸管移去上清，末次洗涤之后，所有留存的缓冲液用Hamilton注射器从小珠上移去。向每一份沉淀加入50μl SDS样品缓冲液，其中含有溴酚蓝和派洛宁Y染料和终浓度是10％的β巯基乙醇。混合物剧烈振荡1-2分钟，于室温下保温5-10分钟。样品于4℃，在台式离心机于15,000rpm离心5分钟，收集释放出的蛋白质，转移到新管中。每一样品等份于水浴中煮沸4分钟，然后上样于7.5％ SDS-PAGE胶。PAGE分离之后，将蛋白质于200mAmp转移到硝酸纤维素膜上，滤膜在3.0％ BSA/TBS-T溶液中于4℃封闭过夜。向每一滤膜加入含有链霉抗生物素蛋白-OPD的1∶6000稀释液的0.1％ BSA-TBS-T溶液，继续于室温温孵1小时。滤膜在TBS0-T中洗涤5次，每次10分钟。按制造商说明用Amersham’s  ECL试剂盒显色。
发现克隆199M免疫沉淀异二聚体蛋白。较大蛋白亚基的分子量大约是170-175kD，与被兔抗大鼠αd多克隆对照免疫沉淀的蛋白的大小一致。第二个蛋白质亦被沉淀，其分子量大约是95kD与CD18的分子量一致。
                          实施例19小鼠cDNA克隆的分离
试图分离小鼠αd同系物
使用两种PCR产生探针进行种间杂交：来自人克隆19A2(SEQ IDNO：1)的对应于522至2047碱基的1.5kb片段，和对应于人克隆19A2(SEQ ID NO：1)的1900至2900碱基的1.0kb大鼠片段。使用分别在SEQ ID NO：38和39给出的称为ATM-2和9-10.1的引物对。经PCR反应产生人探针，使用分别在SEQ ID NO：34和35中给出的引物对434L和434R产生鼠探针。样品于94℃保温4分钟，经30个循环的温度步骤序列：94℃，1分钟；50℃ 2分钟；72℃，4分钟。
5′-GTCCAAGCTGTCATGGGCCAG-3′                  (SEQ ID NO：38)
5′-GTCCAGCAGACTGAAGAGCACGG-3′                (SEQ ID NO：39)按制造商的说明，使用Qiagen Qaick SPin试剂盒纯化PCR产物，按制造商的说明，使用Boehrinager Mannheim随机引物试剂盒用200μCi〔32P〕-dCTP标记大约180ng DNA。按制造商说明，用Centri-sepSpin Column(Princeton Separations，Adelphia，NJ)去除未参入的同位素。在使用前，探针用0.2N NaOH变性，用0.4M Tris-HCl，pH8.0中和。
一个克隆在λZAP II(Stratagene)的小鼠胸腺寡聚dT-引物cDNA文库以每15cm平板30,000噬斑平板接种。在含有30％甲酰胺的预杂交溶液(8ml/拓片)中，在硝酸纤维素滤膜(Schleicher和Schuell，Keene，NH)上的噬斑拓片于50℃振荡1小时。标记的人和大鼠探针被加至预杂交溶液中，继续于50℃温孵过夜。滤膜在室温下于2×SSC/0.1％ SDS中洗2次，37℃于2×SSC/0.1％ SDS洗一次。42℃于2×SSC/0.1％ SDS洗一次。借助于增感屏、于-80℃滤膜曝光Kodak X-OmatAR软片27小时。
在一式两份拓片上给出阳性信号的4个噬斑在含有镁盐(LBM)/羧苄青霉素(100mg/ml)的LB培养基上重新划线。用Hybond滤膜(Amersham)拓取噬斑，如首轮筛选进行探测，借助于增感屏，于-80℃曝光Kodak X-Omat AR软片24小时。
给出阳性信号的12个噬斑转移到含有10mM Tris-HCl和1mMMgCl2的低Mg++噬菌体稀释液中。使用T3和T7引物(SEQ ID NO：13和14)和下列反应条件进行PCR扩增而确定插入大小。样品于94℃温孵4分钟，并经温度步骤序列的30个循环：94℃，15秒，50℃，30秒，72℃，1分钟。
6个样品产生了不同的条带，其大小从300碱基到1kb不等。通过与助噬菌体共感染而释放噬菌体质粒嵌合体，重新环化产生Bluescript SK(Stratagene)。生成的菌落在LBM/羧苄青霉素(100mg/ml)上培养过夜。按制造商的说明，用Promaga Wizard小量制备试剂盒(Madison，WI)分离DNA。纯化DNA的EcoR I限制性分析证实了用PCR探测的分子量。插入DNA用分别在SEQ ID NO：40和41中给出的M13和M13反向1引物测序。
5′-TGTAAAACGACGGCCAGT-3′                 (SEQ ID NO：40)
5′-GGAAACAGCTATGACCATG-3′                (SEQ ID NO：41)
如实施例4所述进行测序。
6个克隆中，只有2个被称为10.3.1和10.5-2的提供了序列信息，是相同的600bp片段。该600bp序列与人αd的相应区有68％的一致性，与人CD11a有40％一致性，与人CD11c有58％的一致性，与小鼠CD11b有54％一致性。该600bp片段被用于分离一个更完整的编码推测的小鼠αd同系物的cDNA。
克隆在λZap II(Stratagene)上的小鼠脾细胞cDNA文库(寡聚dT-和随机引物)以2.5×104噬菌体/15cm LBM平板进行平板接种。噬斑拓印在Hybond尼龙转移膜上(Amersham)，用0.5M NaOH/1.5MNaCl变性，用0.5M Tris Base/1.5M NaCl/11.6 HCl中和，在2×SSC中洗涤。经紫外辐射将DNA交联于滤膜上。
采用如上描述预先标记的10.3-1和10.5-2探针筛选大约500,000个噬斑。探针加入预杂交液中，于50℃温孵过夜。滤膜于室温下在2×SSC/0.1％ SDS中洗两遍，于37℃在2×SSC/0.1％ SDS中洗一遍，于42℃在2×SSC/0.1％ SDS中洗一遍。借助于增感屏，滤膜于-80℃曝光Kodek X-Omat AR软片24小时。在一式两份的拓片上给出阳性信号的14个噬斑经受第二轮筛选，第二轮筛选除下述的另外的最终高严格度洗涤之外，其他与第一轮筛选一致：于50℃，在2×SSC/0.1％ SDS，于50℃，在0.5×SSC/0.1％ SDS，和于55℃，在0.2×SSC/0.1％ SDS中洗涤。借助于增感屏，滤膜于-80℃曝光Kodak X-Omat AR软片13小时。
18个阳性噬斑转移到低Mg++噬菌体稀释度，通过如上所述PCR扩增确定插入片段的大小。7个样品给出了单一条带。其大小在600bp至4kb之间变动。纯化DNA的EcoR I酶切分析证实了PCR观察的大小，用引物M13和M13反向.1(分别是SEQ ID NO：40和41)测序DNA。
克隆B3000含有4kb的插入片段，其对应于人αd 19A2的5′末端的200残基下游区，且包括3′非翻译区的553个碱基。克隆B3800显示了与人αd对应区的77％的一致性，与人CD11a对应区的44％的一致性，与人CD11c对应区的59％的一致性，与小鼠CD11b对应区的51％的一致性。第二个克隆A1160是1.2kb的插入片段，其排列在人αd编码区的5′末端，大约起始蛋氨酸下游的12个核苷酸处。克隆A1160显示了与αd对应区的75％的一致性，与人CD11a对应区的46％的一致性，与人CD11c对应区的62％的一致性，与小鼠CD11b对应区的66％的一致性。
克隆A1160是一更靠近人克隆19A2的5′末端的片段，长度为1160个碱基，与克隆B3800共享开始于碱基205延续至碱基1134的重叠区。克隆A1160具有一个110碱基插入(A1160的704-814片段)，其不出现在克隆B3800的重叠区。该插入发生在可能的外显子一内含子边界〔Fleming等，J.Immunol，150：480-490(1993)〕在随后的克隆A1160和B3800连接之前去除。推测的小鼠αd克隆的5′cDNA末端的快速扩增
采用RACE PCR〔Frohman：“RACE：快速扩增cDNA未端”在PCR方案：方法及应用指南Innis等人(编)pp 28-38，学术出版社：纽约(1990)〕以获得推测小鼠αd克隆的丢失5′序列，包括5′非翻译序列和起始蛋氨酸。按制造商的方案，使用小鼠脾RACE-Ready试剂盒(Clontech，Palo Alto，CA)。设计了两个反义的，基因特异的引物，A1160 RACE1-初始和A1160 RACE2-嵌套(SEQ ID NO：42和43)以进行初始和嵌套PCR。
5′AGTTAC GGATCCGGCACCATGAC-
          -CTTCGGCACTGTGATCCTCCTGTGTG-3′(SEQ ID NO：47)
5′-GCTGGACGATGGCATCCAC-3′              (SEQ ID NO：48)
引物SEQ ID NO：42和43分别对应于5′末端的开始于302和247碱基区域。采用5′锚着引物(SEQ ID NO：44)和试剂盒中供给的小鼠脾cDNA如上述步骤进行PCR反应。
5′GTAGAGTTAC GGATCCGGCACCAT-3′          (SEQ ID NO：49)PCR产物电泳显示了大小大约是280bp的条带，按制造商的方案使用TA克隆试剂盒(Invitrogen)将该条带亚克隆。培养生成的10个菌落，分离并测序DNA。该方法鉴定了另外的5′序列的60个碱基，其对应于SEQID NO：45的1至60位碱基。
小鼠cDNA和预测氨基酸序列的表征
在SEQ ID NO：45中给出了编码推测的人αd同系物的小鼠cDNA的复合序列。虽然人与小鼠克隆的外结构域之间同源性很高，胞质结构域之间的同源性只有30％，观察到的这个变化可能表明人和小鼠蛋白质之间C末端功能的不同。或者是，胞质域的变化由剪接的变化引起，或者表明一个另外的β2整联蛋白基因的存在。
在氨基酸水平上，小鼠cDNA预测一个蛋白质(SEQ ID NO：46)与小鼠CD11a有28％一致性；与小鼠CD11b有53％一致性，与人CD11a有28％一致性，与人CD11b有55％一致性，与人CD11c有59％一致性，与人αd有70％一致性。人αd的胞质域和推测小鼠同系物的氨基酸序列的比较指明，区域只有同样长度，但具有不同的一级结构。这些区域的相似序列长度提示是种间变异而不是剪接变体形式。当与实施例10中(上文)预测的大鼠多肽相比时，小鼠和大鼠胞质域显示出大于60％的同源性。
                      实施例20用于序列鉴定的小鼠αd cDNA克隆的分离
为了鉴定实施例19中所述的小鼠αd的核酸和氨基酸序列，分离了另外的小鼠序列用于确证。
使用了克隆在λZAP II中的小鼠脾随机引物文库和寡聚dT-引物cDNA文库(Strategene)，通过用2个同源αd探针(3′和5′)杂交而分离小鼠cDNA。文库以5×105噬菌体/15cm LBM平板进行平板接种噬斑拓印于Hybond尼龙膜(Amersham)，将膜变性(0.5M NaOH/1.5MNaCl)，中和(0.5M Tris Base/1.5M NaCl/11.6M HCl)和洗涤(2×SSC盐溶液)。DNA经紫外辐射交联。
使用如下描述的引物在下述条件下进行的PCR反应中产生探针。样品于94℃保持4分钟，然后经温度步骤顺序的30个循环(94℃，15秒；50℃，30秒；72℃，1分钟，在Perkin-Elmer 9600热循环仪中)。
3′探针大约900碱基长，跨越核苷酸2752至3651(在SEQ ID NO：1)  (5′-3′)区域，用分别显示于SEQ ID NO：69和74的引物11.b-1/2FOR11和11.b-1/2REV2产生。该探针用于第一套拓片。
5′探针大约800碱基长，跨越核苷酸149至946(在SEQ ID NO：1)(5′- 3′)区域，用分别显示于SEQ ID NO：50和85的引物11.b-1/2FOR1和11.a-1/1REV1产生。该探针用于第二套拓片。
在第三套拓片中，上述的两个探针共同用于同一平板。
使用上述两个探针大约筛选了500,000个噬斑，探针用与实施例17之所述同样的方法标记。标记的探针加入含有45％甲酰胺的预杂交溶液中，于50℃温孵过夜。滤膜于室温(22℃)在2×SSC/0.1％ SDS中洗2次。于50℃在2×SSC/0.1％ SDS中最终洗涤。借助于增感屏，于-80℃在Kodak X-Omat AR软片上放射自显影19小时。
在至少一式两份的拓片上给出阳性信号的13个噬斑经受第二轮筛选，如首轮筛选而进行，除了3′和5′探针均用于杂交，且引入另外的最终洗涤：采用2×SSC/0.1％ SDS于65℃进行。如上所述进行放射自显影2.5小时。
给出阳性信号的13个噬斑(称为MS2P1至MS2P13)被转移到低Mg++噬菌体稀释液。采用T3和T7引物用PCR扩增(Pekin-Elmer9600热循环仪)确定插入片段的大小，在上述的同样条件下，该片段被退火到在ZAP II(先前已描述其序列中的Bluescript噬菌体质粒嵌合体上。条带大小在500至4kb之间变动。分离并制备噬菌体质粒嵌合体，用M13和M13反向.1引物(分别是SEQ ID NO：40和41)测序。测序了13个克隆中的5个；MS2P-3，MS2P-6，MS2P-9，MS2P-这2，MS2P-13，它们共同呈递了一个区域，大约从5′末端的200位碱基开始，到3′末端大约越过第一个终止密码子300个碱基结束。
首先使用M13和M13反向.1引物(SEQ ID NO：40和41)如实施例14所述进行自动测序，以测序每一克隆的末端以及确定其相对于构建物#17(SEQ ID NO：45)的位置。然后就具体区域，每一克隆使用合适的引物(见下表)完全测序。将序列编辑，排列并与先前分离的小鼠αd序列(构建物#17，SEQ ID NO：45)相比较。11.b-1/2FOR1  5′-GCAGCCAGCTTCGGACAGAC-3′     (SEQ ID NO：50)11.a-1/1FOR2  5′-CCGCCTGCCACTGGCGTGTGC-3      (SEQ ID NO：60)11.a-1/1FOR3  5′-CCCAGATGAAGGACTTCGTCAA-3′   (SEQ ID NO：61)11.b-1/2FOR4  5′-GCTGGGATCATTCGCTATGC-3′     (SEQ ID NO：62)11.b-1/2FOR5  5′-CAATGGATGGACCAGTTCTGG-3′    (SEQ ID NO：63)11.b-1/2FOR6  5′-CAGATCGGCTCCTACTTTGG-3′     (SEQ ID NO：64)11.b-1/2FOR7  5′-CATGGAGCCTCGAGACAGG-3′      (SEQ ID NO：65)11.b-1/2FOR8  5′-CCACTGTCCTCGAAGCTGGAG-3′    (SEQ ID NO：66)11.b-1/2FOR9  5′-CTTCGTCCTGTGCTGGCTGTGGGCTC-3
                                           (SEQ ID NO：67)11.b-1/2FOR10 5′-CGCCTGGCATGTGAGGCTGAG-3′    (SEQ ID NO：68)11.b-1/2FOR11 5′-CCGTGATCAGTAGGCAGGAAG-3′    (SEQ ID NO：69)11.b-1/2FOR12 5  -GTCACAGAGGGAACCTCC-3′       (SEQ ID NO：70)11.b-1/2FOR13 5′-GCTCCTGAGTGAGGCTGAAATCA-3′  (SEQ ID NO：71)11.b-1/2FOR14 5′-GAGATGCTGGATCTACCATCTGC-3′  (SEQ ID NO：72)11.b-1/2FOR15 5′-CTGAGCTGGGAGATTTTTATGG-3′   (SEQ ID NO：73)11.b-1/2REV2  5′-GTGGATCAGCACTGAAATCTG-3′    (SEQ ID NO：74)11.b-1/2REV3  5′-CGTTTGAAGAAGCCAAGCTTG-3′    (SEQ ID NO：75)11.b-1/2REV4  5′-CACAGCGGAGGTGCAGGCAG-3′     (SEQ ID NO：76)11.b-1/2REV5  5′-CTCACTGCTTGCGCTGGC-3′       (SEQ ID NO：77)11.b-1/2REV6  5′-CGGTAAGATAGCTCTGCTGG-3′     (SEQ ID NO：78)11.b-1/2REV7  5′-GAGCCCACAGCCAGCACAGG-3′     (SEQ ID NO：79)11.b-1/2REV8  5′-GATCCAACGCCAGATCATACC-3′    (SEO ID NO：80)11.b-1/2REV9  5′-CACGGCCAGGTCCACCAGGC-3′     (SEQ ID NO：81)11.b-1/2REV10 5′-CACGTCCCCTAGCACTGTCAG-3′    (SEQ ID NO：82)11.b-1/2REV11 5′-CCATGTCCACAGAACAGAGAG-3′    (SEQ ID NO：51)11.b-1/2REV12 5′-TTGACGAAGTCCTTCATCTGGG-3′   (SEQ ID NO：83)11.b-1/2REV13 5′-GAACTGCAAGCTGGAGCCCAG-3′    (SEQ ID NO：84)11.a-1/1REV1  5′-CTGGATGCTGCGAAGTGCTAC-3′    (SEQ ID NO：85)11.a-1/1REV2  5′-GCCTTGGAGCTGGACGATGGC-3′    (SEQ ID NO：86)
新序列的排列表明在构建物#17中开始于2308位核苷酸的18个碱基的缺失，该缺失不引起阅读框的移动。发现该缺失发生于包括该区的50％大鼠克隆中，但在大鼠或人αd克隆中未检测到。该18个碱基的缺失被12个碱基的回文序列所表征：AAGCAGGAGCTCCTGTGT(SEQID NO：91)在核酸序列中的这种倒转重复是自身互补的，可能形成一个突出的环，在反转录时引起酶切。包括附加的18个碱基的小鼠αd序列在SEQ ID NO：52中给出，推导的氨基酸序列在SEQ ID NO：53中给出。
                         实施例21小鼠原位杂交
确定小鼠αd的组织分布，以提供与实施例6描述的人αd的组织分布的比较。
从DNA模板制备单链200bp mRNA探针，对应于鼠cDNA的胞质尾端区域的3460至3707位核苷酸，通过例外RNA转录参入35S-UTP(Amersham)。
完整小鼠胚(在受精后11-18天获取)和各种小鼠组织，包括脾、肾、肝、小肠和胸腺，均用放射性标记单链mRNA探针进行原位杂交。
组织切6μm厚的切片，附着到Vectabond(Vector Laboratories，Inc.，Burlingame，CA)包被的玻片上，贮于-70℃。用前，玻片于-70℃中取出，置于50℃ 5分钟。切片于4℃在4％聚甲醛中固定20分钟于4℃于每一浓度用增加的乙醇梯度(70-95-100％)脱水，1分钟，于室温下空气干燥。切片于70℃在70％甲酰胺/2×SSC中变性2分钟，在2×SSC中润洗2遍，用上述乙醇梯度脱水，空气干燥30分钟。杂交在一含有35S-标记探针(剂量为6×105cpm/切片)，和焦碳酸二乙酯(DEPC)处理水的，其中终浓度是50％甲酰胺，0.3M NaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5，10％葡聚糖硫酸盐，1×Denhardt氏溶液，100mM二硫苏糖醇(DTT)和5mM EDTA的溶液中于55℃进行过夜(12-16hr)。杂交后，切片于室温下在4×SSC/10mM·DTT中洗涤1小时，于60℃在50％甲酰胺/2×SSC/10mM DTT中洗涤40分钟。于室温在2×SSC中洗涤30分钟。于室温在0.1×SSC中洗涤30分钟。切片脱水，空气干燥2小时，用Kodak NTB2照相乳膜包覆，空气干燥2小时，显影(完全黑暗中于4℃贮存后)，用苏木精/曙红复染。
脾组织主要在红髓质显示出强烈的信号。该图样与在脾中，组织巨噬细胞分布图样相一致，但不排除其他细胞类型。
                        实施例22小鼠表达构建物的产生
为构建包括展现了与人αd同源性的小鼠cDNA序列的表达质粒，连接来自于克隆A1160和B3800的插入片段。然而在连接之前，包括一个起始蛋氨酸的5′引导序列被加到克隆A1160上。设计了一个被称为“5′PCR引导”(SEQ ID NO：47)的引物，它含有(1)在1-6位的相同的非特异性碱基，以用于酶切；(2)7-12位的BamH I位点(SEQ ID NO：47中下划线的)以便利亚克隆到表达载体上；(3)从13-18位的共有Kozak序列，(4)包括起始蛋氨酸密码子(SEQ IDNO：47中大写的)的信号序列，和(5)特异性重叠了克隆A1160 5′序列的另外3′个碱基，以允许退火。第二个引物被称为“3′末端片段”(SEQ ID NO：48)，与“5′PCT引物”共同使用以从克隆A1160中扩增插入片段。
5′-GGACATGTICACTGCCTCTAGG-3′             (SEQ ID NO：42)
5′-GGCGGACAGTCAGACGACTGTCCTG-3′          (SEQ ID NO：43)
生成的PCR产物不能被BamH I酶切，提示在限制性位点之前没有足够数目的碱基，妨碍了酶的识别。增加5′引物(SEQ ID NO：47)上BamH I位点之前“尾”序列的长度，在第一轮PCR的扩增产物上重复PCR。设计了一个5′引物，被称为mAd.5′.2(SEQ ID NO：49)，在1-4位有附加的非特异性碱基，还有附加的20个碱基，其特异性重叠了先前用作“5′PCR引导序列”引物序列。
5′-CTGGTTCGGCCCACCTCTGAAGGTTCCAGAATCGATAG-3′
                                              (SEQ ID NO：44)
引物“mAD.5′.2”和“3′末端片段”共同用于PCR，来自于首次扩增的产物作模板。按制造商的说明，生成的第二轮PCR产物亚克隆到质粒pCRtmII(Invitrogene)中，并转化到感受态One shet细胞中(Invitrogene)。使用BamH I和EcoR I进行限制性酶分析以鉴定含有PCR产物的一个克隆，并测序。证实了序列之后，用BamH I和EcoR I酶切插入片段，并经凝胶纯化。
通过EcoR I和Not I酶切而分离来自克隆B3800的插入片段，并凝胶纯化。加入到包含扩增的A1160 BamH I/EcoR I片段的连接反应中。连接在14℃进行14个小时。用BamH I和Not I消化载体pcDNA.3(Invitrogene)，加入到加有连接酶的连接反应中，反应再进行12小时。一份反应混合物转化到感受态E.coli细胞中，培养生成的菌落，用引物11.b-1/2FOR1和11.b-1/2REV11(分别是SEQ ID NO：50和51)进行PCR，鉴定了一个阳性克隆。这些引物在A1160和B3800之间架起了桥梁，因而扩增产物的探测表明，这两个片段已连接起来。用SEQ IDNO：50和51中给出的引物证实了阳性克隆的序列，它是从起始蛋氨酸后100至1405位碱基扩增的。
                           实施例23剔除小鼠的构建
为更准确地分析由推定的小鼠αd cDNA编码的蛋白质的免疫学功能，设计了一个“剔除”小鼠，其中编码推测的αd同系物的基因组DNA序列被同源重组破裂。由破裂的基因编码的蛋白质的意义被编码蛋白质的缺如(absence)评价。邓等人，Mol.Cell.Biol.13：2134-2140(1993)描述了“剔除”小鼠的产生。
这一小鼠的设计开始于含有通过同源重组事件而“剔除”序列的质粒的构建。一个小鼠cDNA的750碱基对片段(对应于SEQ ID NO：45的1985至2733位)被用于从λFIX II基因组文库中鉴定编码推定的小鼠αd同系物的小鼠基因组序列。首轮筛选生成了14个阳性噬斑，其中7个被第二轮筛选所证实。从噬斑中的两个获得的液体溶胞物给出最强烈的信号，用传统方法分离λDNA。限制性图谱和Southern分析证实了一个克隆的真实性，被称为14-1，用Not I酶切而分离插入DNA。该片段被克隆到Bluescript SKII+中。
为鉴定一个大约9-14kb-一个被报道为具有同源重组事件的最大可能性的长度的限制性片段，用750bp cDNA探针进行Southern杂交。杂交前，构建克隆14-1的限制性图谱。一个12kb的片段被鉴定为可能的候选者，并且被亚克隆到pBluescript SKII+的一个位点上，在此位点上，小鼠DNA的侧翼是胸腺嘧啶激酶编码盒。用I结构域探针(对应于SEQ ID NO：5的454-1064位核苷酸)进一步分析该克隆表明：该克隆不含有I结构域编码序列。
使用同一I结构域探针，再次筛选λFIXII基因组文库。最初，探测到6个阳性克隆，其中之一在第二轮筛选中仍保持阳性。从该克隆中分离的DNA在Southern分析中与I结构域探针强烈反应。然而使用最初的750bp探针检测不到反应性，表明该克隆包括位于SEQ ID NO：45的1985至2773位核苷酸的5′的区域。
或者是，缺乏对750bp探针的杂交可能提示，该克隆是整联蛋白家族的另一成员。为了确定该解释是否可信，将13kb插入片段亚克隆到pBluescript SKII+。使用对应于在SEQ ID NO：52中的αd I结构域核酸序列441-461，591-612，717-739和反向898-918的引物测序纯化DNA。仅在使用第一个4441-4461引物时获得序列信息，且只有I结构域的最5′的外显子被充分扩增。I结构域的其余部分未被扩增。因而生成的克隆含有小鼠αd基因的外显子6，和连接到该外显子3′和5′末端的内含的序列。该克隆中不出现外显子7。测序之后，构建了含有新霉素抗性和胸腺激酶基因的构建物。
新霉素抗性(neor)一种打破小鼠基因组DNA蛋白质编码序列的方式插入到生成的质粒之中。因而生成的质粒含有一个位于小鼠基因组DNA序列之中的neor基因，而这一切又位于胸腺嘧啶激酶编码区之内如此方式的质粒构建物是同源重组胜于随机重组的需要〔Chisaka，等，自然355：516-520(1992)〕。
                          实施例24兔αd的克隆-兔cDNA文库的构建和筛选
在大鼠和小鼠中人αd同系物的鉴定导致了兔同系物之存在的研究，该同系物将有用于下面讨论的人疾病状态的兔模型。
按制造商的说明和试剂盒里供给的试剂，使用Invitrogen FastTrach试剂盒(San Diego，CA)从完整的兔脾制备poly A+RNA。从1.65g组织中，分离了73μg poly A+RNA。使用购自Stratagene(LaJolla，CA)的试剂盒将兔脾RNA用于构建ZAP表达cDNA文库。生成的cDNA定向地克隆到pBk-CMV噬菌体质粒嵌合体载体的λ臂的EcoR I和Xho I位点上。Gigapack II Gold(Stratagene)用于将λ臂包装到噬菌体颗粒中。生成文库的滴度大约在8×105颗粒，平均插入片段大小为1.2kb。
通过对汇合的噬斑生长物平板接种将文库扩增一次，且收集细胞溶胞物。扩增的文库以大约30,000噬斑形成单位(pfu)/150mm生长E.coli的平板进行平板接种，生成的混合物于37℃温孵12-16小时使噬斑形成，噬菌体DNA转移到Hybond N+尼龙膜(Amersham，ArlingtonHeights，Illinois)。该膜用两种随机引物标记小鼠αd  PCR DNA探针杂交。第一个探针由跨越SEQ ID NO：52的149-946位核苷酸的PCR产物产生。第二个探针由跨越SEQ ID NO：52的2752-3651位核苷酸的PCR产物产生。探针用随机引物标记(BoehringerMannheim随机引物DNA标记试剂盒)，将反应混合物过-Sephadex G-50柱以除去未参入核苷酸。杂交液由5×SSPE，5×Denhardtis，1％ SDS，40％甲酰胺组成，标记探针是1×106dpm/ml。杂交在42℃进行16-18小时。滤膜在2×SSPE/0.1％ SDS中于室温充分洗涤，曝光X-光软片，使任何杂交噬斑可视化。
鉴定了两个与人αd具有明显序列同源性的克隆。克隆#2大约800bp长，定位在人αd的5′末端。克隆#2包括起始蛋氨酸和完整的引导序列克隆#7大约1.5kb长且包括起始蛋氨酸。克隆#7的5′末端重叠了克隆#2的5′末端，而其3′序列终止于I结构域序列之外的点上。通过引物漫步(walking)方法将克隆#7完全测序。克隆#7的核苷酸和氨基酸序列在SEQ ID NO：100和101中给出。
如从克隆#2和#7鉴定的兔αd的预测N末端氨基酸序列表明了一种蛋白质：其与人αd有73％的一致性，与小鼠αd有65％的一致性，与小鼠CD11b，人CD11b和人CD11c有58％的一致性。克隆2的核酸序列在SEQ ID NO：92中给出；预测的氨基酸序列在SEQ ID NO：93中给出。
试图使用标记的兔克隆#7和重新筛选该片段从其中衍生的cDNA文库而分离全长兔αd cDNA。鉴定了25个克隆，其中一个被命名为克隆49的是最大的。使用嵌套缺失技术完全测序克隆49。克隆49的核苷酸和氨基酸序列分别在SEQ ID NO：102和103中给出。因为克隆#7和#49不重叠，寡核苷酸被设计用作引物，用于以兔脾cDNA的第一条链进行的PCR，以分离丢失的序列。
表1描述了这两种部分克隆的推测的氨基酸序列和其他白细胞整联蛋白氨基酸序列的关系
                         表1
β2整联蛋白家族成员在氨基酸水平上的一致性百分比
                   人αd            兔#7            免#49
人αd              100               74              80
小鼠αd            70                67              74
大鼠αd            70                66              73
小鼠CD11a          随机*             28              28
小鼠CD11b           55                59              53
人CD11a             36                28              28
人CD11b             60                58              55
人CD11c             66                59              62
          *如果＜25％一致性，仅是一种随机排列，且无意义。
兔αd克隆的分离使蛋白质在转染子表面或以可溶的全长或截短形式进行表达成为可能。该蛋白被用作免疫原用于生产单克隆抗体，用于人疾病状态的兔模型。
                         实施例25用于确定αd治疗实用性的动物模型
狗的免疫组织学资料和大鼠和小鼠的原位杂交确定：在脾中，αd主要由出现在红髓质中和淋巴结中的巨噬细胞表达，αd发现于髓索和窦中。其表达的方式与报道的两种鼠抗原的表达方式十分地相似，其中该抗原被单克隆抗体F4/80和SK39所限定。而这些鼠抗原的生物化学特征已证实它们不同于αd。十分可能地，αd同鼠Z4/80和SK39抗原一样限定同样的巨噬细胞亚群。
在小鼠中，SK39-阳性巨噬细胞被鉴定位于脾红髓质中，它们可能参预外来物质从循环中以及淋巴结髓质中清除，〔Jutila等，J.LeukocyteBiol 54：30-39(1993)〕。已报道SK39阳性巨噬细胞出现在急性和慢性炎症位点。而且募集到巯基乙酸盐炎性腹股沟的单核细胞亦表达SK39抗原。总之，这些发现表明：如果SK39+细胞亦是αd +，那么这些细胞将负责外来物质在脾中的清除，和参预炎症，在这些过程中，巨噬细胞起重要作用。
αd功能尚不清楚，而其它更好表征的β2整联蛋白已被表明参预多种粘着事件，其便利细胞迁移，提高细胞吞噬，促进细胞-细胞相互作用，以及所有导致炎性过程上调事件。因而，十分可信地，干扰正常的αd功能可能干扰炎症，在炎症中巨噬细胞起重要作用。这一抗炎作用可能由以下因素引起：i)阻止巨噬细胞向炎症位点募集，ii)阻止在炎症位点巨噬细胞的激活或iii)干扰巨噬细胞效应物功能，其通过特异性自身免疫应答或作为旁观者细胞损伤的结果而损伤正常宿主细胞。
有证据证实巨噬细胞在疾病过程中起重要作用的疾病状态包括多发性硬化，关节炎，移植性动脉粥样硬化，一些类型的糖尿病以及肠疾病。以下讨论的动物模型显示出再现这些人类疾病的许多方面。αd功能的抑制剂在这些模型中被测试，以确定是否潜在着治疗相应人类疾病的能力。A.移植性动脉粥样硬化
目前心脏移植术是某些濒危(end-state)心脏疾病的可接受的治疗手段。当环孢菌素A的使用将一年存活率提高到80％时，进行性移植性动脉粥样硬化作为心脏移植存活第一年之后的主要死因出现了。最近研究表明：在心脏移植之后3年，明显的移植性动脉粥样硬化的发生几率是36-44％〔Adams等，移植53：1115-1119(1992)；Adams等，移植56：794-799(1993)〕。
移植性动脉粥样硬化一般地由影响整个冠血管壁的弥散的、阻塞的，内壁的损伤组成，经常伴有脂质沉积。当移植性动脉粥样硬化的病因仍不明了时，假设与供体和受体间组织相容性差异相关，是一种天然的免疫。组织学上，内壁增厚区域主要由巨噬细胞组成，虽然偶而可见T细胞。因而，表达αd的巨噬细胞可能在移植性动脉粥样硬化的诱导和发生中起重要作用。在这种情形之下，单克隆抗体或αd功能的小分子抑制剂(如，可溶性ICAM-R)可以预防性地给药接受了心脏移植并有发生移植性动脉粥样硬化的风险的个体。
虽然在心脏移植中动脉粥样硬化呈现出对于生命最大威胁，移植性动脉粥样硬化亦发现于其他实体器官移植，包括肾和肝。αd阻断剂(blocking agent)的治疗用途可以在其他器官移植中，防止移植性动脉粥样硬化并减弱由移植失败引起的并发症。
大鼠中，一种移植性动脉硬化的模型是跨越微弱组织相容性障碍的异位心脏同种移植。当Lewis心脏同种移植物被移植到MHC I型和II型相容性F-344受体时，80％的同种移植鼠存活3周，25％的移植鼠无限地存活。在这种低级的移植排斥中，在供体心脏中形成动脉硬化损伤。在120天龄的同种移植者中的动脉损伤一般具有弥散的纤维内壁增厚，在外观上有别于发现于排斥性人心脏同种移植者的移植性动脉硬化。
用微弱组织相容性抗原失配的心脏移植大鼠，例如将Lewis移植给F-344。大鼠αd特异性单克隆抗体或αd的小分子抑制物间歇性给药移植受体。预期治疗在非排斥供体心脏中减低移植性动脉硬化。用αd单克隆抗体或小分子抑制剂治疗大鼠可能不局限于预防性治疗。阻断αd功能亦被期望减弱巨噬细胞介导的炎症并允许在移植中动脉损伤的复原。B.饲食胆固醇的兔的动脉粥样硬化
饲食含有胆固醇添加剂的致动脉粥样硬化(atherogenic)食料大约12-16周的大鼠发生了内壁损伤，该损伤覆盖了升主动脉的大部分腔表面〔Rosenfeld等，动脉硬化7：9-23(1987)；Rosenfeld等动脉硬化7：24-34(1987)〕在这些兔中所见的动脉粥样硬化损伤和人类中的很相似。损伤含有大量T细胞，其中多数表达CD45RO，这是一个与记忆T细胞相关的标志。大约半数的浸润T细胞亦表达MHC II类抗原。有一些表达IL-2受体，提示许多细胞是处于激活状态。
在胆固醇饲食兔中发现，但在啮齿类模型中明显不发生的动脉粥样硬化的特点是泡沫细胞-丰富的损伤的积累。泡沫细胞巨噬细胞据信由特异受体吸收氧化低密度脂蛋白引起。氧化LDL颗粒被发现对某些细胞类型包括内皮细胞和平滑肌细胞有毒性。巨噬细胞吸收潜在毒性的，氧化的LDL颗粒作为一种刺激物驱使巨噬细胞激活，造成了与动脉粥样硬化相关的炎症。
一旦产生了抗兔αd的单克隆抗体，便可治疗胆固醇饲食的兔。治疗包括预防性给药αd单克隆抗体或小分子抑制剂，以证明αd +巨噬细胞参预了疾病过程。另外的研究证实αd单克隆抗体或小分子抑制剂能够修复在饲食致动脉粥样硬化食料的兔中发现的血管损伤。C.依赖于胰岛素的糖尿病
BB大鼠于70-150天龄自发地发生依赖于胰岛素的糖尿病。采用免疫组织化学，可以探知MHC II+，ED1+巨噬细胞在疾病早期浸润胰岛。多数巨噬细胞看来从事细胞碎片或正常细胞的细胞吞噬。当疾病发展时，发现大量巨噬细胞浸润胰岛，虽然明显数量的T细胞，和晚期B细胞，亦募集于该部位〔Hanenherg等，糖尿病32：126-134(1989)〕。
BB大鼠糖尿病的发生看来依赖于早期巨噬细胞的浸润和随后T细胞的募集。用对巨噬细胞有毒的硅胶粒治疗BB大鼠能有效地阻止在胰岛的早期巨噬细胞浸润。早期巨噬细胞浸润不出现的情况下，不发生随后的自身攻击性淋巴细胞群造成的组织损伤。施用阻断该疾病T细胞相关期的单克隆抗体OX19(大鼠CD5特异性)和OX-8(大鼠CD8特异性)亦有效抑制糖尿病发生。
在该模型病理学中巨噬细胞的中心作用，使得测试αd功能抑制剂颇具吸引力。用αd单克隆抗体或小分子抑制剂治疗从遗传学上易患依赖于胰岛素的糖尿病的大鼠，并评价疾病的发展。阻止或延缓临床开始都是αd在巨噬细胞损伤胰岛细胞中起中心作用的证据。D.炎性肠疾病(Crohn’s病，溃疡性结肠炎)
在炎性肠疾病研究中所用动物模型通常由直肠给药毒性刺激物(如乙酸或三硝基苯磺酸/乙醇)。这些化学剂诱导引起的结肠炎症是化学或代谢损伤，缺乏与人IBD相关的慢性和自发性复发炎症。最近描述了一种，使用浆膜下注射来自A群或D链球菌的纯化肽聚糖-多糖(PG-PS)多聚物的模型，看来与人IBD更为生理相关。〔Yamada等，胃肠学104：759-771(1993)〕。
在此模型中PG-PS注射到远侧结肠浆膜层下。引起的炎性反应是两期的，注射之后，有起始3天的急性症状，三至四周之后，随之而来的是自发的慢性期。后期反应是天然肉芽肿，且导致结肠增厚、粘连、结肠结节和粘膜损伤。除粘膜损伤之外，PG-PS结肠炎经常引起关节炎性贫血和肉芽肿肝炎。该疾病的肠以外的症状使得该模型就研究Crohn’s结肠炎而言很有吸引力，因为明显数量的活性Crohn’s病患者患有关节病和肝胆炎症。
肉芽肿损伤是慢性炎症的结果，慢性炎症导致单核细胞/巨噬细胞系的募集和随后的活化。Crohn’s病中肉芽肿损伤的出现和上述动物模型使得αd单克隆抗体或其他αd功能抑制剂成为富有吸引力的临床靶点。期望αd功能抑制剂阻断与IBD相关损伤的形成，甚至修复在此疾病中所见的组织损伤。E.关节炎
关节炎看来是多因子疾病过程，涉及包括嗜中性粒细胞，T淋巴细胞和吞噬的巨噬细胞的多种炎性细胞类型。虽然存在各种关节炎模型，链球菌细胞壁蛋白聚糖制备物产生的疾病最近似人疾病。
在大鼠中，链球菌细胞壁诱导外周关节炎症。特征在于，伴有缓解的疾病进行的症状重复出现，在数月后最终导致关节损伤。〔Cromartie，等，J.Exp.Med.146：1585-1602(1977)；Swab等，Infection andImmunity 59：4436-4442(1991)〕。在疾病的慢性期，单核巨噬细胞和巨噬细胞据信在破坏滑膜中起重要作用。此外，抑制巨噬细胞募集到滑膜中的化学剂有效地减轻关节炎的炎症和病理特性。
巨噬细胞在导致关节炎的滑膜损伤的中心作用预言了αd单克隆抗体或αd功能抑制剂在治疗这些疾病中可能具有治疗潜能。正如在前述其它模型中，预防性给药αd单克隆抗体或小分子抑制剂被期望能阻断或减弱关节炎症和防止滑膜破坏。干扰αd功能的试剂可能通过阻止多余巨噬细胞向关节的募集或阻断巨噬细胞激活而减轻正在发生的炎症。净效应应是恢复关节的继续的损伤，且便利组织修复。F.多发性硬化
虽然多发性硬化病因不明，通常认为该疾病由CD4+T细胞介导，CD4+T细胞识别中枢神经系统中的自身抗原且引发炎性级联事件。造成的免疫反应导致了多余的炎性细胞，包括引起该疾病的激活的巨噬细胞的募集。实验性自身免疫脑脊髓炎是一种再现MS某些方面的动物模型。最近，与出现在炎性巨噬细胞的CD11b/CD18反应的单克隆抗体显示了阻断临床和组织学疾病。该结果提示αd的单克隆抗体或小分子抑制物似乎有效地阻断EAE中的炎性反应。这样的化学剂在治疗MS中亦有重要的治疗用途。G.免疫复合物小泡炎
巨噬细胞位于小泡管、气道、结缔组织和肺的胸膜表面，代表针对吸入环境因子的肺的第一道防线。在应答化学剂包括细菌衍生的LPS，IFN-γ和免疫复合物的刺激时，小泡巨噬细胞释放多种强炎性介质，包括高反应性氧自由基和氮中间体。虽然超氧化物阴离子，过氧化氢和氧化-氮(NO.)在根除病原体和溶胞肿瘤靶物中起重要作用，这些化学剂对正常组织有损伤作用。
在免疫复合物小泡炎，大鼠模型中，表明从小泡巨噬细胞中释放的NO.介导大量肺损伤〔Mulligan等，美国国立科学院院报88：638-6342(1991)〕。NO.亦作为介质参预了由其它他免疫复合物介导的损伤，包括皮肤脉管炎，〔Mulligan等，见上〕并可能在例如肾小球性肾炎的疾病中起重要作用。
NO.介导组织损伤不限于涉及免疫复合物的炎症。例如，由化学剂如PMA、LPS或IFN-γ刺激的微胶原细胞产生了能够杀死少突神经胶质细胞水平的NO.〔Merrill等，Immunol，151：2132(1993)〕。亦发生胰岛细胞对NO.敏感，且该介质释放的巨噬细胞卷入了导致糖尿病的组织损伤〔Kroncke等BBRC 175：752-758(1991)〕。最近总结性地证明了NO.释放在内毒性休克中起重要作用〔MacMicking等，细胞81：641-650(1995)〕。当给药脂多糖时(LPS)，正常的野生型小鼠经历严重的，进行性动脉压下降，这可导致死亡。然而可诱导一氧化一氮缺陷型大鼠，在应答LPS时，经历了轻微得多的动脉压下降。在治疗中均存活下来。
体外测试表明αd的阻断有效地阻断巨噬细胞激活的某种方面(或表达αd的白细胞，一般说来)，包括NO.释放。现已发现在抗αd多克隆抗血清(在兔中，针对大鼠αd I结构域多肽而产生)存在的条件下，用IFN-γ刺激小泡巨噬细胞，产生的NO.的亚硝酸盐/硝酸盐断裂产物明显低于用对照抗血清处理的巨噬细胞。这一发现表明，抗αd，特别是抗I-结构域的单克隆抗体可能是强抗炎剂，在MS、糖尿病、肺炎和内毒性休克中有潜在的用途。而且与影响多种白细胞类型的CD18形成对照，αd的有限的分布使其在阻止巨噬细胞(或表达αd的白细胞，一般说来)激活中，较之CD18，是更具吸引力的靶点。
大鼠IgG免疫复合物诱导的小泡炎在理解急性肺损伤中是更广泛应用的实验模型。这种损伤是由通过气管导管插入术将抗牛血清白蛋白(BSA)抗体灌注到肺，然后静脉注射BSA而引起。在肺的微脉管系统中免疫复合物的形成导致补体激活，并将嗜中性粒细胞募集到肺中。可以推测，随着白细胞从血液中外渗在肺中形成免疫复合物，然后白细胞移动穿越肺表皮。然后，从参予疾病发展的激活的内皮细胞，嗜中性粒细胞和巨噬细胞释向放介质，包括自由基，TNF-α和氧化-氮(NO.)。这些疾病的病理特点包括增加的血管通透性，这导致水肿，以及出现在小泡空间的大量红细胞和PMNs的出现。
在免疫复合物诱导小泡炎大鼠模型中测验αd I结构域特异性多克隆抗血清。通过气管导管术施用抗αd多克隆血清，同时将抗-BSA导入肺。随后通过静脉给药BSA以及痕量125I标记BSA(大约800,000cpm)引发肺损伤，定量测试由肺损伤引起的水肿。肺损伤进行4小时，采用肺通透性值来评价该损伤，定义为肺中125I-标记BSA与1.0ml血中出现的标记的量相比的比率。一般地，阳性对照的肺通透性值的比率在0.6和0.8之间，而阴性对照(未接受BSA的大鼠)的通透性指示值(indexvalue)在0.1-0.2之间。
最初的研究表明用抗αd多克隆抗血清降低肺通透性值多于50％，表示肺损伤的极大的减轻，组织学上，用抗-CD18治疗亦降低通透性值60％。这些发现表明在急性肺损伤过程中，αd可能是最重要的β2整联蛋白，然而不能准确地确定抗血清的作用是否抑制了白细胞从血液中外渗，或者穿过肺表皮而移动。
αd轻伤肺损伤的另一证据是，评价了支气管灌洗液中TNF-α水平。发现用抗αd抗血清进行的治疗大约降低TNF-α水平的4倍。长期以来TNF-α被视为急性肺炎的主要介导物，而且造成炎性细胞向炎症位点的募集，细胞激活和组织损伤。可以推测，在免疫复合物性小泡炎形成的过程中，抗αd抗血清阻止了停留的小泡巨噬细胞的激活，因而减轻了TNF-α和NO.的释放，降低了随之而来的由这些化学剂引起的损伤和嗜中性粒细胞的募集。
                        实施例26αd在临床前模型的表达
为了评价在不同疾病状态下αd的不同表达，用如上所述方法(见实施例18)制备的抗αd多克隆血清染色来自动物疾病模型的组织切片。正常和患病大鼠组织制成6μm厚的切片，于室温下，在Superfrost Plus(VWR Scientific)载玻片上干燥过夜。干燥后切片贮存于-70℃直至使用。使用前，玻片从-70℃取出，置于50℃大约5分钟。切片在冷丙酮(4℃)(Stephens Scientific)于室温固定10分钟，并于室温干燥。每一玻片用150μl在1×TBS中的含30％正常大鼠血清(HarlanBioproducts)，5％正常羊血清(Vector Laboratories)和1％牛血清白蛋白(BSA)(Sigma化学公司)溶液中于室温封闭30分钟，在此之后将溶液小心地从切片上吸去。蛋白质浓度为34μg/ml的兔多克隆血清，和蛋白质浓度为38.5μg/ml的同一只兔的免疫前血清，稀释在封闭液里，于37℃，将其100μl分别加入每一组织切片30分钟。血清溶液从切片上吸去，在1×TBS中洗涤三次，每次5分钟移去未结合的抗体。在最后一次洗涤后吸去过量的TBS。按制造商的说明，从Elite RabbitIgG Vectastain ABC试剂盒(Vector)制备生物素化羊抗兔抗体，100μl如此生成的溶液加到每一切片上，于37℃保温5分钟。玻片在1×TBS中洗两遍，每次5分钟，此后100μl以1∶100稀释于5％正常大鼠血清和1％ BSA的链霉抗生物素蛋白-金结合物(GoldmarkBiologicals)于室温下加至每一切片上1小时。玻片在TBS中洗三次，每次5分钟，100μl在TBS缓冲液中的1％戊二醛在室温下，加至切片5分钟。玻片再次在TBS中洗三次，每次5分钟，在灭菌无离子水中洗五次。每次3分钟。从每一玻片上吸去过量液体。将两滴溶液分别是银增强和引发溶液(Goldmark Biologicals)加至每一切片上。反应在室温下进行20-30分钟，此后切片在无菌无离子水中彻底冲洗，室温下空气干燥过夜，用Cytoseal 60(VWR)计数。作为对照，在同一实验中，用同样方法将组织切片用识别CD11a，CD11b，CD11c和CD18的单克隆抗体标记。
用αd多克隆血清和CD11a，CD11b，CD11c和CD18的单克隆抗体标记，揭示了αd的染色图样不同于其他α亚基的染色图样。
在正常肺组织中，在支气管的呼吸上皮(但不是小泡空间的上皮)，和在airspace内的看来是小泡巨噬细胞的个别细胞上检测到αd表达。用多克隆血清观察到的信号明显高于用免疫前血清对照观察到的本底信号。在肺肉芽肿组织中，施用多糖24和96小时之后，用αd染色整个小泡区域的呼吸上皮获得一个不同的信号，而且在整个气道中看来是小泡巨噬细胞上探测到一个强烈的信号。在来自被推测是从疾病中复原的动物肺组织(给药多糖16天后处死)，用αd抗体来观察到信号。在这些组织的每一个中，用免疫前血清观察到非常低的本底。
使用来自抗原诱导哮喘模型的肺组织，在支气管和小泡空间的呼吸上皮用αd抗体探测到非常强烈的信号。信号明显高于免疫前血清对照的本底信号水平。Met Ile Thr Arg His Glu Gly Ser Thr Arg Phe Phe Asn Phe Ser Thr
        260                 265                 270Ser Ala Glu Lys Ser Ser Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn
    275                 280                 285Asn Leu Ser Leu Arg Asp Val Ala Val Ser Val Asp Phe Trp Ala Pro
290                 295                 300Val Gln Leu Asn Gly Ala Ala Val Trp Asp Val Ala Val Glu Ala Pro305                 310                 315                  320Ala Gln Ser Leu Pro Cys Ala Arg Glu Arg Glu Pro Pro Arg Thr Ser
            325                 330                 335Asp Leu Ser Arg Val Pro Gly Ser Pro Val Leu Asp Cys Ser Val Ala
        340                 345                 350His Cys Leu Arg Phe Arg Cys His Ile Pro Ser Phe Ser Ala Lys Glu
    355                 360                 365Glu Leu His Phe Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Ala Trp Val Ser
370                 375                 380Gln Met Leu Gln Lys Lys Val Ser Val Val Ser Val Ala Glu Ile Thr385                 390                 395                 400Phe Asn Arg Ala Val Tyr Ser Gln Val Pro Gly Glu Glu Pro Phe Met
            405                 410                 415Arg Ala Gln Val Glu Thr Val Leu Glu Glu Tyr Glu Glu His Asp Pro
        420                 425                 430Val Pro Leu Val Val Gly Ser Cys Val Gly Gly Leu Leu Leu Leu Ala
    435                 440                 445Leu Ile Ser Ala Thr Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg Arg Tyr
450                 455                 460Lys Glu Met Leu Gly Glu Lys Pro Gly Asp Ala Ala Thr Phe Pro Gly465                 470                 475                 480Glu Asp Ala Ser Cys Gly Ala Ser Asp Leu Pro Leu Ser Gln
            485                 490
                         序列表(1)一般信息：
(i)申请人：  Gallatin，W.Michael
             Van der Vieren，Monica
(ii)发明名称：人β-2整联蛋白α亚基
(iii)序列数：103
(iv)通讯地址：
    (A)地址：Marshall，O’Toole，Gerstein，Murray & Borum
    (B)街道：233 South Wacker Drive，6300 Sear Tower
    (C)城市：Chicago
    (D)州：Illinois
    (E)国家：United  States
    (F)邮编：60606-6402
(v)计算机可读形式：
    (A)媒体类型：Floppy盘
    (B)计算机：IBM PC兼容机
    (C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS
    (D)软件：PatentIn Release #1.0，Version #1.25
(vi)目前申请资料：
    (A)申请号：
    (B)提交日：
    (C)分类：
(vii)先有申请资料：
    (A)申请号：US 08/173,497
    (B)提交日：1993.12.23
(vii)先有申请资料：
    (A)申请号：US 08/286,889
    (B)提交日：1994.8.5(vii)先有申请资料：
    (A)申请号：US 08/362,652
    (B)提交日：1994.12.21
(viii)律师/代理人资料：
    (A)姓名：Williams Jr.，Joseph A.
    (B)注册号：38,659
    (C)查询/案号：27866/32684
(ix)电讯资料：
    (A)电话：312-474-6300
    (B)电传：312-474-0448
    (C)电报：25-3856(2)SEQ ID NO：1信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：3726个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：cDNA
(ix)特征：
    (A)名称/键：CDS
    (B)位置：3..3485
(xi)SEQ ID NO：1序列描述：TG ACC TTC GGC ACT GTG CTT CTT CTG AGT GTC CTG GCT TCT TAT CAT            47
  Thr Phe Gly Thr Val Leu Leu Leu Ser Val Leu Ala Ser Tyr His
    1               5                  10                  15GGA TTC AAC CTG GAT GTG GAG GAG CCT ACG ATC TTC CAG GAG GAT GCA           95Gly Phe Asn Leu Asp Val Glu Glu Pro Thr Ile Phe Gln Glu Asp Ala
                20                  25                  30GGC GGC TTT GGG CAG AGC GTG GTG CAG TTC GGT GGA TCT CGA CTC GTG          143Gly Gly Phe Gly Gln Ser Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val
            35                  40                  45GTG GGA GCA CCC CTG GAG GTG GTG GCG GCC AAC CAG ACG GGA CGG CTG          191Val Gly Ala Pro Leu Glu Val Val Ala Ala Asn Gln Thr Gly Arg Leu
        50                  55                  60TAT GAC TGC GCA GCT GCC ACC GGC ATG TGC CAG CCC ATC CCG CTG CAC          239Tyr Asp Cys Ala Ala Ala Thr Gly Met Cys Gln Pro Ile Pro Leu His
    65                  70                  75ATC CGC CCT GAG GCC GTG AAC ATG TCC TTG GGC CTG ACC CTG GCA GCC          287Ile Arg Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Thr Leu Ala Ala
80                  85                  90                  95TCC ACC AAC GGC TCC CGG CTC CTG GCC TGT GGC CCG ACC CTG CAC AGA          335Ser Thr Asn Gly Ser Arg Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Leu His Arg
               100                 105                 110GTC TGT GGG GAG AAC TCA TAC TCA AAG GGT TCC TGC CTC CTG CTG GGC         383Val Cys Gly Glu Asn Ser Tyr Ser Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly
        115                 120                 125TCG CGC TGG GAG ATC ATC CAG ACA GTC CCC GAC GCC ACG CCA GAG TGT         431Ser Arg Trp Glu Ile Ile Gln Thr Val Pro Asp Ala Thr Pro Glu Cys
    130                 135                 140CCA CAT CAA GAG ATG GAC ATC GTC TTC CTG ATT GAC GGC TCT GGA AGC         479Pro His Gln Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser
145                 150                 155ATT GAC CAA AAT GAC TTT AAC CAG ATG AAG GGC TTT GTC CAA GCT GTC         527Ile Asp Gln Asn Asp Phe Asn Gln Met Lys Gly Phe Val Gln Ala Val160                 165                 170                 175ATG GGC CAG TTT GAG GGC ACT GAC ACC CTG TTT GCA CTG ATG CAG TAC         575Met Gly Gln Phe Glu Gly Thr Asp Thr Leu Phe Ala Leu Met Gln Tyr
            180                 185                 190TCA AAC CTC CTG AAG ATC CAC TTC ACC TTC ACC CAA TTC CGG ACC AGC         623Ser Asn Leu Leu Lys Ile His Phe Thr Phe Thr Gln Phe Arg Thr Ser
        195                 200                 205CCG AGC CAG CAG AGC CTG GTG GAT CCC ATC GTC CAA CTG AAA GGC CTG         671Pro Ser Gln Gln Ser Leu Val Asp Pro Ile Val Gln Leu Lys Gly Leu
    210                 215                 220ACG TTC ACG GCC ACG GGC ATC CTG ACA GTG GTG ACA CAG CTA TTT CAT         719Thr Phe Thr Ala Thr Gly Ile Leu Thr Val Val Thr Gln Leu Phe His
225                 230                 235CAT AAG AAT GGG GCC CGA AAA AGT GCC AAG AAG ATC CTC ATT GTC ATC         767His Lys Asn Gly Ala Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile Val Ile240                 245                 250                 255ACA GAT GGG CAG AAG TAC AAA GAC CCC CTG GAA TAC AGT GAT GTC ATC         815Thr Asp Gly Gln Lys Tyr Lys Asp Pro Leu Glu Tyr Ser Asp Val Ile
            260                 265                 270CCC CAG GCA GAG AAG GCT GGC ATC ATC CGC TAC GCT ATC GGG GTG GGA         863Pro Gln Ala Glu Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly
        275                 280                 285CAC GCT TTC CAG GGA CCC ACT GCC AGG CAG GAG CTG AAT ACC ATC AGC         911His Ala Phe Gln Gly Pro Thr Ala Arg Gln Glu Leu Asn Thr Ile Ser
    290                 295                 300TCA GCG CCT CCG CAG GAC CAC GTG TTC AAG GTG GAC AAC TTT GCA GCC         959Ser Ala Pro Pro Gln Asp His Val Phe Lys Val Asp Asn Phe Ala Ala
305                 310                 315CTT GGC AGC ATC CAG AAG CAG CTG CAG GAG AAG ATC TAT GCA GTT GAG        1007Leu Gly Ser Ile Gln Lys Gln Leu Gln Glu Lys Ile Tyr Ala Val Glu320                 325                 330                 335GGA ACC CAG TCC AGG GCA AGC AGC TCC TTC CAG CAC GAG ATG TCC CAA        1055Gly Thr Gln Ser Arg Ala Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln
            340                 345                 350GAA GGC TTC AGC ACA GCC CTC ACA ATG GAT GGC CTC TTC CTG GGG GCT        1103Glu Gly Phe Ser Thr Ala Leu Thr Met Asp Gly Leu Phe Leu Gly Ala
        355                 360                 365GTG GGG AGC TTT AGC TGG TCT GGA GGT GCC TTC CTG TAT CCC CCA AAT        1151Val Gly Ser Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro Asn
    370                 375                 380ATG AGC CCC ACC TTC ATC AAC ATG TCT CAG GAG AAT GTG GAC ATG AGG        1199Met Ser Pro Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Val Asp Met Arg
385                 390                 395GAC TCT TAC CTG GGT TAC TCC ACC GAG CTA GCC CTG TGG AAG GGG GTA        1247Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Glu Leu Ala Leu Trp Lys Gly Val400                 405                 410                 415CAG AAC CTG GTC CTG GGG GCC CCC CGC TAC CAG CAT ACC GGG AAG GCT        1295Gln Asn Leu Val Leu Gly Ala Pro Arg Tyr Gln His Thr Gly Lys Ala
            420                 425                 430GTC ATC TTC ACC CAG GTG TCC AGG CAA TGG AGG AAG AAG GCC GAA GTC        1343Val Ile Phe Thr Gln Val Ser Arg Gln Trp Arg Lys Lys Ala Glu Val
        435                 440                 445ACA GGG ACG CAG ATC GGC TCC TAC TTC GGG GCC TCC CTC TGC TCC GTG        1391Thr Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val
    450                 455                 460GAT GTG GAC AGC GAT GGC AGC ACC GAC CTG ATC CTC ATT GGG GCC CCC        1439Asp Val Asp Ser Asp Gly Ser Thr Asp Leu Ile Leu Ile Gly Ala Pro
465                 470                 475CAT TAC TAT GAG CAG ACC CGA GGG GGC CAG GTG TCC GTG TGT CCC TTG        1487His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys Pro Leu480                 485                 490                 495CCT AGG GGG CAG AGG GTG CAG TGG CAG TGT GAC GCT GTT CTC CGT GGT        1535Pro Arg Gly Gln Arg Val Gln Trp Gln Cys Asp Ala Val Leu Arg Gly
            500                 505                 510GAG CAG GGC CAC CCC TGG GGC CGC TTT GGG GCA GCC CTG ACA GTG TTG        1583Glu Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu
        515                 520                 525GGG GAT GTG AAT GAG GAC AAG CTG ATA GAC GTG GCC ATT GGG GCC CCG        1631Gly Asp Val Asn Glu Asp Lys Leu Ile Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro
    530                 535                 540GGA GAG CAG GAG AAC CGG GGT GCT GTC TAC CTG TTT CAC GGA GCC TCA        1679Gly Glu Gln Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Leu Phe His Gly Ala Ser
545                 550                 555GAA TCC GGC ATC AGC CCC TCC CAC AGC CAG CGG ATT GCC AGC TCC CAG        1727Glu Ser Gly Ile Ser Pro Sar His Ser Gln Arg Ile Ala Ser Ser Gln560                 565                 570                 575CTC TCC CCC AGG CTG CAG TAT TTT GGG CAG GCG CTG AGT GGG GGT CAG        1775Leu Ser Pro Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ala Leu Ser Gly Gly Gln
            580                 585                 590GAC CTC ACC CAG GAT GGA CTG ATG GAC CTG GCC GTG GGG GCC CGG GGC        1823Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Met Asp Leu Ala Val Gly Ala Arg Gly
        595                 600                 605CAG GTG CTC CTG CTC AGG AGT CTG CCG GTG CTG AAA GTG GGG GTG GCC        1871Gln Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Val Leu Lys Val Gly Val Ala
    610                 615                 620ATG AGA TTC AGC CCT GTG GAG GTG GCC AAG GCT GTG TAC CGG TGC TGG        1919Met Arg Phe Ser Pro Val Glu Val Ala Lys Ala Val Tyr Arg Cys Trp
625                 630                 635GAA GAG AAG CCC AGT GCC CTG GAA GCT GGG GAC GCC ACC GTC TGT CTC        1967Glu Glu Lys Pro Ser Ala Leu Glu Ala Gly Asp Ala Thr Val Cys Leu640                 645                 650                 655ACC ATC CAG AAA AGC TCA CTG GAC CAG CTA GGT GAC ATC CAA AGC TCT        2015Thr Ile Gln Lys Ser Ser Leu Asp Gln Leu Gly Asp Ile Gln Ser Ser
            660                 665                 670GTC AGG TTT GAT CTG GCA CTG GAC CCA GGT CGT CTG ACT TCT CGT GCC        2063Val Arg Phe Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Thr Ser Arg Ala
        675                 680                 685ATT TTC AAT GAA ACC AAG AAC CCC ACT TTG ACT CGA AGA AAA ACC CTG        2111Ile Phe Asn Glu Thr Lys Asn Pro Thr Leu Thr Arg Arg Lys Thr Leu
    690                 695                 700GGA CTG GGG ATT CAC TGT GAA ACC CTG AAG CTG CTT TTG CCA GAT TGT        2159Gly Leu Gly Ile His Cys Glu Thr Leu Lys Leu Leu Leu Pro Asp Cys
705                 710                 715GTG GAG GAT GTG GTG AGC CCC ATC ATT CTG CAC CTC AAC TTC TCA CTG        2207Val Glu Asp Val Val Ser Pro Ile Ile Leu His Leu Asn Phe Ser Leu720                 725                 730                 735GTG AGA GAG CCC ATC CCC TCC CCC CAG AAC CTG CGT CCT GTG CTG GCC        2255Val Arg Glu Pro Ile Pro Ser Pro Gln Asn Leu Arg Pro Val Leu Ala
            740                 745                 750GTG GGC TCA CAA GAC CTC TTC ACT GCT TCT CTC CCC TTC GAG AAG AAC        2303Val Gly Ser Gln Asp Leu Phe Thr Ala Ser Leu Pro Phe Glu Lys Asn
        755                 760                 765TGT GGG CAA GAT GGC CTC TGT GAA GGG GAC CTG GGT GTC ACC CTC AGC        2351Cys Gly Gln Asp Gly Leu Cys Glu Gly Asp Leu Gly Val Thr Leu Ser
    770                 775                 780TTC TCA GGC CTG CAG ACC CTG ACC GTG GGG AGC TCC CTG GAG CTC AAC        2399Phe Ser Gly Leu Gln Thr Leu Thr Val Gly Ser Ser Leu Glu Leu Asn
785                 790                 795GTG ATT GTG ACT GTG TGG AAC GCA GGT GAG GAT TCC TAC GGA ACC GTG        2447Val Ile Val Thr Val Trp Asn Ala Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Val800                 805                 810                 815GTC AGC CTC TAC TAT CCA GCA GGG CTG TCG CAC CGA CGG GTG TCA GGA        2495Val Ser Leu Tyr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser His Arg Arg Val Ser Gly
            820                 825                 830GCC CAG AAG CAG CCC CAT CAG AGT GCC CTG CGC CTG GCATGT GAG ACA         2543Ala Gln Lys Gln Pro His Gln Ser Ala Leu Arg Leu Ala Cys Glu Thr
        835                 840                 845GTG CCC ACT GAG GAT GAG GGC CTA AGA AGC AGC CGC TGC AGT GTC AAC        2591Val Pro Thr Glu Asp Glu Gly Leu Arg Ser Ser Arg Cys Ser Val Asn
    850                 855                 860CAC CCC ATC TTC CAT GAG GGC TCT AAC GGC ACC TTC ATA GTC ACA TTC        2639His Pro Ile Phe His Glu Gly Ser Asn Gly Thr Phe Ile Val Thr Phe
865                 870                 875GAT GTC TCC TAC AAG GCC ACC CTG GGA GAC AGG ATG CTT ATG AGG GCC        2687Asp Val Ser Tyr Lys Ala Thr Leu Gly Asp Arg Met Leu Met Arg Ala880                 885                 890                 895AGT GCA AGC AGT GAG AAC AAT AAG GCT TCA AGC AGC AAG GCC ACC TTC        2735Ser Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Ala Ser Ser Ser Lys Ala Thr Phe
            900                 905                 910CAG CTG GAG CTC CCG GTG AAG TAT GCA GTC TAC ACC ATG ATC AGC AGG        2783Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Thr Met Ile Ser Arg
        915                 920                 925CAG GAA GAA TCC ACC AAG TAC TTC AAC TTT GCA ACC TCC GAT GAG AAG        2831Gln Glu Glu Ser Thr Lys Tyr Phe Asn Phe Ala Thr Ser Asp Glu Lys
    930                 935                 940AAA ATG AAA GAG GCT GAG CAT CGA TAC CGT GTG AAT AAC CTC AGC CAG        2879Lys Met Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Gln
945                 950                 955CGA GAT CTG GCC ATC AGC ATT AAC TTC TGG GTT CCT GTC CTG CTG AAC        2927Arg Asp Leu Ala Ile Ser Ile Asn Phe Trp Val Pro Val Leu Leu Asn960                 965                 970                 975GGG GTG GCT GTG TGG GAT GTG GTC ATG GAG GCC CCA TCT CAG AGT CTC        2975Gly Val Ala Val Trp Asp Val Val Met Glu Ala Pro Ser Gln Ser Leu
            980                 985                 990CCC TGT GTT TCA GAG AGA AAA CCT CCC CAG CAT TCT GAC TTC CTG ACC        3023Pro Cys Val Ser Glu Arg Lys Pro Pro Gln His Ser Asp Phe Leu Thr
        995                 1000                1005CAG ATT TCA AGA AGT CCC ATG CTG GAC TGC TCC ATT GCT GAC TGC CTG        3071Gln Ile Ser Arg Ser Pro Met Leu Asp Cys Ser Ile Ala Asp Cys Leu
    1010                1015                1020CAG TTC CGC TGT GAC GTC CCC TCC TTC AGC GTC CAG GAG GAG CTG GAT        3119Gln Phe Arg Cys Asp Val Pro Ser Phe Ser Val Gln Glu Glu Leu Asp
1025                1030                1035TTC ACC CTG AAG GGC AAT CTC AGT TTC GGC TGG GTC CGC GAG ACA TTG        3167Phe Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Val Arg Glu Thr Leu1040                1045                1050                1055CAG AAG AAG GTG TTG GTC GTG AGT GTG GCT GAA ATT ACG TTC GAC ACA        3215Gln Lys Lys Val Leu Val Val Ser Val Ala Glu Ile Thr Phe Asp Thr
            1060                1065                1070TCC GTG TAC TCC CAG CTT CCA GGA CAG GAG GCA TTT ATG AGA GCT CAG        3263Ser Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe Met Arg Ala Gln
        1075                1080                1085ATG GAG ATG GTG CTA GAA GAA GAC GAG GTC TAC AAT GCC ATT CCC ATC        3311Met Glu Met Val Leu Glu Glu Asp Glu Val Tyr Asn Ala Ile Pro Ile
    1090                1095                1100ATC ATG GGC AGC TCT GTG GGG GCT CTG CTA CTG CTG GCG CTC ATC ACA        3359Ile Met Gly Ser Ser Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr
1105                1110                1115GCC ACA CTG TAC AAG CTT GGC TTC TTC AAA CGC CAC TAC AAG GAA ATG        3407Ala Thr Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg His Tyr Lys Glu Met1120                1125                1130                1135CTG GAG GAC AAG CCT GAA GAC ACT GCC ACA TTC AGT GGG GAC GAT TTC        3455Leu Glu Asp Lys Pro Glu Asp Thr Ala Thr Phe Ser Gly Asp Asp Phe
            1140                1145                1150AGC TGT GTG GCC CCA AAT GTG CCT TTG TCC TAATAATCCA CTTTCCTGTT          3505Ser Cys Val Ala Pro Asn Val Pro Leu Ser
        1155                1160TATCTCTACC ACTGTGGGCT GGACTTGCTT GCAACCATAA ATCAACTTAC ATGGAAACAA    3566CTTCTGCATA GATCTGCACT GGCCTAAGCA ACCTACCAGG TGCTAAGCAC CTTCTCGGAG    3625AGATAGAGAT TGTAATGTTT TTACATATCT GTCCATCTTT TTCAGCAATG ACCCACTTTT    3685TACAGAAGCA GGCATGGTGC CAGCATAAAT TTTCATATGC T                        3726(2)SEQ ID NO：2信息：(i)序列特征：
(A)长度：1161个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：蛋白质(xi)SEQ ID NO：2序列描述：
Thr Phe Gly Thr Val Leu Leu Leu Ser Val Leu Ala Ser Tyr His Gly
  1               5                  10                  15
Phe Asn Leu Asp Val Glu Glu Pro Thr Ile Phe Gln Glu Asp Ala Gly
             20                  25                  30
Gly Phe Gly Gln Ser Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val Val
         35                  40                  45
Gly Ala Pro Leu Glu Val Val Ala Ala Asn Gln Thr Gly Arg Leu Tyr
     50                  55                  60
Asp Cys Ala Ala Ala Thr Gly Met Cys Gln Pro Ile Pro Leu His Ile
 65                  70                  75                  80
Arg Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Thr Leu Ala Ala Ser
                 85                  90                  95
Thr Asn Gly Ser Arg Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Leu His Arg Val
            100                 105                 110
Cys Gly Glu Asn Ser Tyr Ser Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly Ser
        115                 120                 125
Arg Trp Glu Ile Ile Gln Thr Val Pro Asp Ala Thr Pro Glu Cys Pro
    130                 135                 140
His Gln Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser Ile
145                 150                 155                 160
Asp Gln Asn Asp Phe Asn Gln Met Lys Gly Phe Val Gln Ala Val Met
                165                 170                 175
Gly Gln Phe Glu Gly Thr Asp Thr Leu Phe Ala Leu Met Gln Tyr Ser
            180                 185                 190
Asn Leu Leu Lys Ile His Phe Thr Phe Thr Gln Phe Arg Thr Ser Pro
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Ser Gln Gln ser Leu Val Asp Pro Ile Val Gln Leu Lys Gly Leu Thr
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1010                1015                1020Phe Arg Cys Asp Val Pro Ser Phe Ser Val Gln Glu Glu Leu Asp Phe1025                1030                1035                1040Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Val Arg Glu Thr Leu Gln
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1090                1095                1100Met Gly Ser Ser Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Ala1105                1110                1115                1120Thr Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg His Tyr Lys Glu Met Leu
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    1155                1160(2)SEQ  ID  NO：3信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：1153个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：蛋白质(xi)SEQ ID NO：3序列描述：Met Ala Leu Arg Val Leu Leu Leu Thr Ala Leu Thr Leu Cys His Gly1               5                   10                  15Phe Asn Leu Asp Thr Glu Asn Ala Met Thr Phe Gln Glu Asn Ala Arg
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  130                 135                 140Pro Gln Glu Asp Ser Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser145                 150                 155                 160Ile Ile Pro His Asp Phe Arg Arg Met Lys Glu Phe Val Ser Thr Val
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  290                 295                 300Ser Lys Pro Pro Arg Asp His Val Phe Gln Val Asn Asn Phe Glu Ala305                 310                 315                 320Leu Lys Thr Ile Gln Asn Gln Leu Arg Glu Lys Ile Phe Ala Ile Glu
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    355                 360                 365Val Gly Ser Tyr Asp Trp Ala Gly Gly Val Phe Leu Tyr Thr Ser Lys
370                 375                 380Glu Lys Ser Thr Phe Ile Asn Met Thr Arg Val Asp Ser Asp Met Asn385                 390                 395                 400Asp Ala Tyr Leu Gly Tyr Ala Ala Ala Ile Ile Leu Arg Asn Arg Val
            405                 410                 415Gln Ser Leu Val Leu Gly Ala Pro Arg Tyr Gln His Ile Gly Leu Val
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450                 455                 460Asp Val Asp Ser Asn Gly Ser Thr Asp Leu Val Leu Ile Gly Ala Pro465                 470                 475                 480His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys Pro Leu
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        500                 505                 510Glu Gln Gly Gln Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu
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530                 535                 540Gly Glu Glu Asp Asn Arg Gly Ala Val Tyr Leu Phe His Gly Thr Ser545                 550                 555                 560Gly Ser Gly Ile Ser Pro Ser His Ser Gln Arg Ile Ala Gly Ser Lys
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    595                 600                 605His Val Leu Leu Leu Arg Ser Gln Pro Val Leu Arg Val Lys Ala Ile
610                 615                 620Met Glu Phe Asn Pro Arg Glu Val Ala Arg Asn Val Phe Glu Cys Asn625                 630                 635                 640Asp Gln Val Val Lys Gly Lys Glu Ala Gly Glu Val Arg Val Cys Leu
            645                 650                 655His Val Gln Lys Ser Thr Arg Asp Arg Leu Arg Glu Gly Gln Ile Gln
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690                 695                 700Val Leu Gly Leu Thr Gln Thr Cys Glu Thr Leu Lys Leu Gln Leu Pro705                 710                 715                 720Asn Cys Ile Glu Asp Pro Val Ser Pro Ile Val Leu Arg Leu Asn Phe
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    755                 760                 765Lys Asn Cys Gly Asn Asp Asn Ile Cys Gln Asp Asp Leu Ser Ile Thr
770                 775                 780Phe Ser Phe Met Ser Leu Asp Cys Leu Val Val Gly Gly Pro Arg Glu785                 790                 795                 800Phe Asn Val Thr Val Thr Val Arg Asn Asp Gly Glu Asp Ser Tyr Arg
            805                 810                 815Thr Gln Val Thr Phe Phe Phe Pro Leu Asp Leu Ser Tyr Arg Lys Val
        820                 825                 830Ser Thr Leu Gln Asn Gln Arg Ser Gln Arg Ser Trp Arg Leu Ala Cys
    835                 840                 845Glu Ser Ala Ser Ser Thr Glu Val Ser Gly Ala Leu Lys Ser Thr Ser
850                 855                 860Cys Ser Ile Asn His Pro Ile Phe Pro Glu Asn Ser Glu Val Thr Phe865                 870                 875                 880Asn Ile Thr Phe Asp Val Asp Ser Lys Ala Ser Leu Gly Asn Lys Leu
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        900                 905                 910Lys Thr Glu Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Met
    915                 920                 925Val Val Thr Ser His Gly Val Ser Thr Lys Tyr Leu Asn Phe Thr Ala
930                 935                 940
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   Leu Gly Gln Arg Ser Leu Pro Ile Ser Leu Val Phe Leu Val Pro Val
                   965                 970                 975
   Arg Leu Asn Gln Thr Val Ile Trp Asp Arg Pro Gln Val Thr Phe Ser
               980                 985                 990
   Glu Asn Leu Ser Ser Thr Cys His Thr Lys Glu Arg Leu Pro Ser His
           995                 1000                1005
   Ser Asp Phe Leu Ala Glu Leu Arg Lys Ala Pro Val Val Asn Cys Ser
       1010                1015                1020
   Ile Ala Val Cys Gln Arg Ile Gln Cys Asp Ile Pro Phe Phe Gly Ile
   1025                1030                1035                1040
   Gln Glu Glu Phe Asn Ala Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Asp Trp
                   1045                1050                1055
   Tyr Ile Lys Thr Ser His Asn His Leu Leu Ile Val Ser Thr Ala Glu
               1060                1065                1070
   Ile Leu Phe Asn Asp Ser Val Phe Thr Leu Leu Pro Gly Gln Gly Ala
           1075                1080                1085
   Phe Val Arg Ser Gln Thr Glu Thr Lys Val Glu Pro Phe Glu Val Pro
       1090                1095                1100
   Asn Pro Leu Pro Leu Ile Val Gly Ser Ser Val Gly Gly Leu Leu Leu
   1105                1110                1115                1120
   Leu Ala Leu Ile Thr Ala Ala Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg
                   1125                1130                1135
   Gln Tyr Lys Asp Met Met Ser Glu Gly Gly Pro Pro Gly Ala Glu Pro
               1140                1145                1150
   Gln(2)SEQ ID NO：4信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：1163个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)SEQ ID NO：4序列描述：
   Met Thr Arg Thr Arg Ala Ala Leu Leu Leu Phe Thr Ala Leu Ala Thr
   1               5                   10                  15
   Ser Leu Gly Phe Asn Leu Asp Thr Glu Glu Leu Thr Ala Phe Arg Val
               20                  25                  30
   Asp Ser Ala Gly Phe Gly Asp Ser Val Val Gln Tyr Ala Asn Ser Trp
           35                  40                  45Val Val Val Gly Ala Pro Gln Lys Ile Ile Ala Ala Asn Gln Ile Gly
50                  55                  60Gly Leu Tyr Gln Cys Gly Tyr Ser Thr Gly Ala Cys Glu Pro Ile Gly65                  70                  75                  80Leu Gln Val Pro Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu
            85                  90                  95Ala Ser Thr Thr Ser Pro Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Val
        100                 105                 110His His Glu Cys Gly Arg Asn Met Tyr Leu Thr Gly Leu Cys Phe Leu
    115                 120                 125Leu Gly Pro Thr Gln Leu Thr Gln Arg Leu Pro Val Ser Arg Gln Glu
130                 135                 140Cys Pro Arg Gln Glu Gln Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly145                 150                 155                 160Ser Ile Ser Ser Arg Asn Phe Ala Thr Met Met Asn Phe Val Arg Ala
            155                 170                 175Val Ile Ser Gln Phe Gln Arg Pro Ser Thr Gln Phe Ser Leu Met Gln
        180                 185                 190Phe Ser Asn Lys Phe Gln Thr His Phe Thr Phe Glu Glu Phe Arg Arg
    195                 200                 205Thr Ser Asn Pro Leu Ser Leu Leu Ala Ser Val His Gln Leu Gln Gly
210                 215                 220Phe Thr Tyr Thr Ala Thr Ala Ile Gln Asn Val Val His Arg Leu Phe225                 230                 235                 240His Ala Ser Tyr Gly Ala Arg Arg Asp Ala Ile Lys Ile Leu Ile Val
            245                 250                 255Ile Thr Asp Gly Lys Lys Glu Gly Asp Ser Leu Asp Tyr Lys Asp Val
        260                 265                 270Ile Pro Met Ala Asp Ala Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val
    275                 280                 285Gly Leu Ala Phe Gln Asn Arg Asn Ser Trp Lys Glu Leu Asn Asp Ile
290                 295                 300Ala Ser Lys Pro Ser Gln Glu His Ile Phe Lys Val Glu Asp Phe Asp305                 310                 315                 320Ala Leu Lys Asp Ile Gln Asn Gln Leu Lys Glu Lys Ile Phe Ala Ile
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        340                 345                 350Gln Glu Gly Phe Ser Ala Val Phe Thr Pro Asp Gly Pro Val Leu Gly
    355                 360                 365Ala Val Gly Ser Phe Thr Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro
370                 375                 380Asn Met Ser Pro Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Val Asp Met385                 390                 395                 400Arg Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Glu Leu Ala Leu Trp Lys Gly
            405                 410                 415Val Gln Ser Leu Val Leu Gly Ala Pro Arg Tyr Gln His Ile Gly Lys
        420                 425                 430Ala Val Ile Phe Ile Gln Val Ser Arg Gln Trp Arg Met Lys Ala Glu
    435                 440                 445Val Ile Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser
450                 455                 460Val Asp Val Asp Thr Asp Gly Ser Thr Asp Leu Val Leu Ile Gly Ala465                 470                 475                 480Pro His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys Pro
            485                 490                 495Leu Pro Arg Gly Trp Arg Arg Trp Trp Cys Asp Ala Val Leu Tyr Gly
        500                 505                 510Glu Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu
    515                 520                 525Gly Asp Val Asn Gly Asp Lys Leu Thr Asp Val Val Ile Gly Ala Pro
530                 535                 540Gly Glu Glu Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Leu Phe His Gly Val Leu545                 550                 555                 560Gly Pro Ser Ile Ser Pro Ser His Ser Gln Arg Ile Ala Gly Ser Gln
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        580                 585                 590Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp Leu Ala Val Gly Ala Arg Gly
    595                 600                 605Gln Val Leu Leu Leu Arg Thr Arg Pro Val Leu Trp Val Gly Val Ser
610                 615                 620Met Gln Phe Ile Pro Ala Glu Ile Pro Arg Ser Ala Phe Glu Cys Arg625                 630                 635                 640Glu Gln Val Val Ser Glu Gln Thr Leu Val Gln Ser Asn Ile Cys Leu
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    675                 680                 685Arg Ala Ile Phe Gln Glu Thr Lys Asn Arg Ser Leu Ser Arg Val Arg
690                 695                 700Val Leu Gly Leu Lys Ala His Cys Glu Asn Phe Asn Leu Leu Leu Pro705                 710                 715                 720Ser Cys Val Glu Asp Ser Val Ile Pro Ile Ile Leu Arg Leu Asn Phe
            725                 730                 735Thr Leu Val Gly Lys Pro Leu Leu Ala Phe Arg Asn Leu Arg Pro Met
        740                 745                 750Leu Ala Ala Leu Ala Gln Arg Tyr Phe Thr Ala Ser Leu Pro Phe Glu
    755                 760                 765Lys Asn Cys Gly Ala Asp His Ile Cys Gln Asp Asn Leu Gly Ile Ser
770                 775                 780Phe Ser Phe Pro Gly Leu Lys Ser Leu Leu Val Gly Ser Asn Leu Glu785                 790                 795                 800Leu Asn Ala Glu Val Met Val Trp Asn Asp Gly Glu Asp Ser Tyr Gly
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        820                 825                 830Ala Glu Gly Gln Lys Gln Gly Gln Leu Arg Ser Leu His Leu Thr Cys
    835                 840                 845Cys Ser Ala Pro Val Gly Ser Gln Gly Thr Trp Ser Thr Ser Cys Arg
850                 855                 860Ile Asn His Leu Ile Phe Arg Gly Gly Ala Gln Ile Thr Phe Leu Ala865                 870                 875                 880Thr Phe Asp Val Ser Pro Lys Ala Val Gly Leu Asp Arg Leu Leu Leu
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        900                 905                 910Ile Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Ile Val Val
    915                 920                 925Ser Ser His Glu Gln Phe Thr Lys Tyr Leu Asn Phe Ser Glu Ser Glu
930                 935                 940Glu Lys Glu Ser His Val Ala Met His Arg Tyr Gln Val Asn Asn Leu945                 950                 955                 960Gly Gln Arg Asp Leu Pro Val Ser Ile Asn Phe Trp Val Pro Val Glu
            965                 970                 975Leu Asn Gln Glu Ala Val Trp Met Asp Val Glu Val Ser His Pro Gln
        980                 985                 990Asn Pro Ser Leu Arg Cys Ser Ser Glu Lys Ile Ala Pro Pro Ala Ser
    995                 1000                1005   Asp Phe Leu Ala His Ile Gln Lys Asn Pro Val Leu Asp Cys Ser Ile
   1010                1015                1020Ala Gly Cys Leu Arg Phe Arg Cys Asp Val Pro Ser Phe Ser Val Gln1025                1030                1035                1040Glu Glu Leu Asp Phe Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Val
               1045                1050                1055Arg Gln Ile Leu Gln Lys Lys Val Ser Val Val Ser Val Ala Glu Ile
           1060                1065                1070Ile Phe Asp Thr Ser Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe
       1075                1080                1085Met Arg Ala Gln Thr Ile Thr Val Leu Glu Lys Tyr Lys Val His Asn
   1090                1095                1100Pro Ile Pro Leu Ile Val Gly Ser Ser Ile Gly Gly Leu Leu Leu Leu1105                lll0                1115                1120Ala Leu Ile Thr Ala Val Leu Tyr Lys Val Gly Phe Phe Lys Arg Gln
               1125                1130                1135Tyr Lys Glu Met Met Glu Glu Ala Asn Gly Gln Ile Ala Pro Glu Asn
           1140                1145                1150Gly Thr Gln Thr Pro Ser Pro Pro Ser Glu Lys
       1155                1160(2)SEQ ID NO：5信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：12个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)SEQ ID NO：5序列描述：Phe Asn Leu Asp Val Glu Glu Pro Met Val Phe Gln1             5                     10(2)SEQ ID NO：6信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：35个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：6序列描述：
TTYAAYYTGG AYGTNGARGA RCCNATGGTN TTYCA     35(2)SEQ ID NO：7信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：36个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：7序列描述：
TTCAACCTGG ACGTGGAGGA GCCCATGGTG TTCCAA    36(2)SEQ ID NO：8信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：36个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：8序列描述：
TTCAACCTGG ACGTNGAASA NCCCATGGTC TTCCAA    36(2)SEQ ID NO：9信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：23个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：9序列描述：
TTYAAYYTNG AYGTNGARGA RCC                  23(2)SEQ ID NO：10信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：20个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：10序列描述：
TTYAAYYTGG ACGTNGAAGA                                 20(2)SEQ ID NO：11信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：17个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：11序列描述：
TGRAANACCA TNGGYTC                                    17(2)SEQ ID NO：12信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：18个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：12序列描述：
TTGGAAGACC ATNGGYTC                                   18(2)SEQ ID NO：13信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：17个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：13序列描述：
ATTAACCCTC ACTAAAG                                    17(2)SEQ ID NO：14信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：17个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：14序列描述：
AATACGACTC ACTATAG                                    17(2)SEQ ID NO：15信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：11个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：肽
(xi)SEQ ID NO：15序列描述：
Val Phe Gln Glu Xaa Gly Ala Gly Phe Gly Gln
1               5                  10(2)SEQ ID NO：16信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：14个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：肽
(xi)SEQ ID NO：16序列描述：
Leu Tyr Asp Xaa Val Ala Ala Thr Gly Leu Xaa Gln Pro Ile
1              5                     10(2)SEQ ID NO：17信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：12个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：肽
(xi)SEQ ID NO：17序列描述：
Pro Leu Glu Tyr Xaa Asp Val Ile Pro Gln Ala Glu
1               5                   10(2)SEQ ID NO：18信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：10个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：肽
(xi)SEQ ID NO：18序列描述：
Phe Gln Glu Gly Phe Ser Xaa Val Leu Xaa
1               5                   10(2)SEQ ID NO：19信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：14个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：肽
(xi)SEQ ID NO：19序列描述：
Thr Ser Pro Thr Phe Ile Xaa Met Ser Gln Glu Asn Val Asp
1               5                   10(2)SEQ ID NO：20信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：17个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：肽
(xi)SEQ ID NO：20序列描述：
Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Glu Val Val Ala Val Xaa Gln Thr Gly Arg
1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO：21信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：9个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：肽
(xi)SEQ ID NO：21序列描述：
Leu Asp Xaa Lys Pro Xaa Asp Thr Ala
1               5(2)SEQ ID NO：22信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：7个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：肽
(xi)SEQ ID NO：22序列描述：
Phr GlV Glu Gln Phe Ser Glu
1               5(2)SEQ ID NO：23信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：21个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：肽
(xi)SEQ ID NO：23序列描述：
RAANCCYTCY TGRAAACTYTC                                21(2)SEQ ID NO：24信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：1006个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：cDNA
(xi)SEQ ID NO：24序列描述：TTCAACCTGG ACGTGGAGGA GCCCATGGTG TTCAAGAGGA TGGAGCTGGC TTTGGACAGA      60GCGTGGCCCA GCTTGGCGGA TCTAGACTCG TGGTGGGAGC CCCCCTGGAG GTGGTGGCGG     120TCAACCAAAC AGGAAGGTTG TATGACTGTG TGGCTGCCAC TGGCCTTGTC AACCCATACC     180CCTGCACACA CCCCCAGATG CTGTGAACAT GTCCCTGGGT CTGTCCCTGT CAGCCGCCGC     240CAGTCGCCCC TGGCTGCTGG CCTGTGGCCC AACCATGCAC AGAGCCTGTG GGGAGAATAT     300GTATGCAGAA GGCTTTTGCC TCCTGTTGGA CTCCCATCTG CAGACCATTT GGACAGTACC     360TGCTGCCCTA CCAGAGTGTC CAAGTCAAGA GATGGACATT GTCTTCCTGA TTGATGGTTC     420TGGCAGTATG AGCAAAGTGA CTTTAAACAA ATGAAGGATT TGTGAGAGCT GTGATGGGAC     480AGTTTGAGGG CACCCAAACC CTGTTCTCAC TGATACAGTA TCCCACCTCC CTGAAGATCC     540ACTTCACCTT CACGCAATTC CAGAGCAGCT GGAACCCTCT GAGCCTGGTG GATCCCATTG     600TCCAACTGGA CGGCCTGACA TATACAGCCA CGGGCATCCG GAAAGTGGTG GAGGAACTGT     660TTCATAGTAA GAATGGGGCC CGTAAAAGTG CCAAGAAGAT CCTCATTGTC ATCACAGATG     720GCAAAAATAC AAAGACCCCC TGGAGTACGA GGACGTATCC CCAGGCAGAG AGAGCGGATC     780ATCCGCTATG CCATTGGGGT GGGAGATGCT TTCTGGAAAC CCAGTGCCAA GCAGGAGCTG     840GACAACATTG GCTCAGAGCC GGCTCAGGAC CATGTGTTCA GGGTGGACAA CTTTGCAGCA     900CTCAGCAGCA TCCAGGAGCA GCTGCAGGAG AAGATCTTTG CACTCGAAGG AACCCAGTCG     960ACGACAAGTA GCTCTTTCCA ACATGAGATG TTCCAAGAAG GGTTCA                   1006(2)SEQ ID NO：25信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：17个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：25序列描述：
GTNTTYCARG ARGAYGG                                    17(2)SEQ ID NO：26信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：20个碱基
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    (C)链型：单链
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CCACTGTCAG GATGCCCGTG                                 20(2)SEQ ID NO：27信息：
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    (A)长度：42个碱基
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(ii)分子类型：DNA
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(i)序列特征：
    (A)长度：42个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
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(i)序列特征：
    (A)长度：36个碱基
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    (C)链型：单链
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    (A)长度：20个碱基
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    (D)拓扑结构：线性
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TTGCTGACTG CCTGCAGTTC                                 20(2)SEQ ID NO：31信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：36个碱基
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    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
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GTTCTGACGC GTAATGGCAT TGTAGACCTC GTCTTC               36(2)SEQ ID NO：32信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：36个碱基
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    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
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ACGTATGCAG GATCCCATCA AGAGATGGAC ATCGCT               36(2)SEQ ID NO：33信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：37个碱基
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    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
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(i)序列特征：
    (A)长度：24个碱基
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(ii)分子类型：DNA
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(i)序列特征：
    (A)长度：24个碱基
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    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：35序列描述：TGAAGATTGG GGGTAAATAA CAGA                              24(2)SEQ ID NO：36信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：3528个碱基
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    (A)名称/键：CDS
    (B)位置：3..3456
(xi)SEQ ID NO：36序列描述：GGC TGG GCC CTG GCT TCC TGT CAT GGG TCT AAC CTG GAT GTG GAG GAA          48Gly Trp Ala Leu Ala Ser Cys His Gly Ser Asn Leu Asp Val Glu Glu
1             5                  10                  15CCC ATC GTG TTC AGA GAG GAT GCA GCC AGC TTT GGA CAG ACT GTG GTG          96Pro Ile Val Phe Arg Glu Asp Ala Ala Ser Phe Gly Gln Thr Val Val
         20                  25                  30CAG TTT GGT GGA TCT CGA CTC GTG GTG GGA GCC CCT CTG GAG GCG GTG         144Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Glu Ala Val
     35                  40                  45GCA GTC AAC CAA ACA GGA CGG TTG TAT GAC TGT GCA CCT GCC ACT GGC         192Ala Val Asn Gln Thr Gly Arg Leu Tyr Asp Cys Ala Pro Ala Thr Gly
 50                  55                  60ATG TGC CAG CCC ATC GTA CTG CGC AGT CCC CTA GAG GCA GTG AAC ATG         240Met Cys Gln Pro Ile Val Leu Arg Ser Pro Leu Glu Ala Val Asn Met65                  70                  75                  80TCC CTG GGC CTG TCT CTG GTG ACT GCC ACC AAT AAC GCC CAG TTG CTG         288Ser Leu Gly Leu Ser Leu Val Thr Ala Thr Asn Asn Ala Gln Leu Leu
             85                  90                  95GCT TGT GGT CCA ACT GCA CAG AGA GCT TGT GTG AAG AAC ATG TAT GCG         336Ala Cys Gly Pro Thr Ala Gln Arg Ala Cys Val Lys Asn Met Tyr Ala
        100                 105                 110AAA GGT TCC TGC CTC CTT CTC GGC TCC AGC TTG CAG TTC ATC CAG GCA         384Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly Ser Ser Leu Gln Phe Ile Gln Ala
    115                 120                 125GTC CCT GCC TCC ATG CCA GAG TGT CCA AGA CAA GAG ATG GAC ATT GCT         432Val Pro Ala Ser Met Pro Glu Cys Pro Arg Gln Glu Met Asp Ile Ala
130                 135                 140TTC CTG ATT GAT GGT TCT GGC AGC ATT AAC CAA AGG GAC TTT GCC CAG        480Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser Ile Asn Gln Arg Asp Phe Ala Gln145                 150                 155                 160ATG AAG GAC TTT GTC AAA GCT TTG ATG GGA GAG TTT GCG AGC ACC AGC        528Met Lys Asp Phe Val Lys Ala Leu Met Gly Glu Phe Ala Ser Thr Ser
            165                 170                 175ACC TTG TTC TCC CTG ATG CAA TAC TCG AAC ATC CTG AAG ACC CAT TTT        576Thr Leu Phe Ser Leu Met Gln Tyr Ser Asn Ile Leu Lys Thr His Phe
        180                 185                 190ACC TTC ACT GAA TTC AAG AAC ATC CTG GAC CCT CAG AGC CTG GTG GAT        624Thr Phe Thr Glu Phe Lys Asn Ile Leu Asp Pro Gln Ser Leu Val Asp
    195                 200                 205CCC ATT GTC CAG CTG CAA GGC CTG ACC TAC ACA GCC ACA GGC ATC CGG        672Pro Ile Val Gln Leu Gln Gly Leu Thr Tyr Thr Ala Thr Gly Ile Arg
210                 215                 220ACA GTG ATG GAA GAG CTA TTT CAT AGC AAG AAT GGG TCC CGT AAA AGT        720Thr Val Met Glu Glu Leu Phe His Ser Lys Asn Gly Ser Arg Lys Ser225                 230                 235                 240GCC AAG AAG ATC CTC CTT GTC ATC ACA GAT GGG CAG AAA TAC AGA GAC        768Ala Lys Lys Ile Leu Leu Val Ile Thr Asp Gly Gln Lys Tyr Arg Asp
            245                 250                 255CCC CTG GAG TAT AGT GAT GTC ATT CCC GCC GCA GAC AAA GCT GGC ATC        816Pro Leu Glu Tyr Ser Asp Val Ile Pro Ala Ala Asp Lys Ala Gly Ile
        260                 265                 270ATT CGT TAT GCT ATT GGG GTG GGA GAT GCC TTC CAG GAG CCC ACT GCC        864Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly Asp Ala Phe Gln Glu Pro Thr Ala
    275                 280                 285CTG AAG GAG CTG AAC ACC ATT GGC TCA GCT CCC CCA CAG GAC CAC GTG        912Leu Lys Glu Leu Asn Thr Ile Gly Ser Ala Pro Pro Gln Asp His Val
290                 295                 300TTC AAG GTA GGC AAC TTT GCA GCA CTT CGC AGC ATC CAG AGG CAA CTT        960Phe Lys Val Gly Asn Phe Ala Ala Leu Arg Ser Ile Gln Arg Gln Leu305                 310                 315                 320CAG GAG AAA ATC TTC GCC ATT GAG GGA ACT CAA TCA AGG TCA AGT AGT       1008Gln Glu Lys Ile Phe Ala Ile Glu Gly Thr Gln Ser Arg Ser Ser Ser
            325                 330                 335TCC TTT CAG CAC GAG ATG TCA CAA GAA GGT TTC AGT TCA GCT CTC ACA       1056Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln Glu Gly Phe Ser Ser Ala Leu Thr
        340                 345                 350TCG GAT GGA CCC GTT CTG GGG GCC GYG GGA AGC TTC AGC TGG TCC GGA       1104Ser Asp Gly Pro Val Leu Gly Ala Xaa Gly Ser Phe Ser Trp Ser Gly
    355                 360                 365GGT GCC TTC TTA TAT CCC CCA AAT ACG AGA CCC ACC TTT ATC AAC ATG       1152Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro Asn Thr Arg Pro Thr Phe Ile Asn Met
370                 375                 380TCT CAG GAG AAT GTG GAC ATG AGA GAC TCC TAC CTG GGT TAC TCC ACC       1200Ser Gln Glu Asn Val Asp Met Arg Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr385                 390                 395                 400GCA GTG GCC TTT TGG AAG GGG GTT CAC AGC CTG ATC CTG GGG GCC CCG       1248Ala Val Ala Phe Trp Lys Gly Val His Ser Leu Ile Leu Gly Ala Pro
            405                 410                 415CGT CAC CAG CAC ACG GGG AAG GTT GTC ATC TTT ACC CAG GAA GCC AGG       1296Arg His Gln His Thr Gly Lys Val Val Ile Phe Thr Gln Glu Ala Arg
        420                 425                 430CAT TGG AGG CCC AAG TCT GAA GTC AGA GGG ACA CAG ATC GGC TCC TAC       1344His Trp Arg Pro Lys Ser Glu Val Arg Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr
    435                 440                 445TTC GGG GCC TCT CTC TGT TCT GTG GAC GTG GAT AGA GAT GGC AGC ACY       1392Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val Asp Val Asp Arg Asp Gly Ser Xaa
450                 455                 460GAC CTG GTC CTG ATC GGA GCC CCC CAT TAC TAT GAG CAG ACC CGA GGG       1440Asp Leu Val Leu Ile Gly Ala Pro His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly465                 470                 475                 480GGG CAG GTC TCA GTG TKC CCC GTG CCC GGT GTG AGG GGC AGG TGG CAG       1488Gly Gln Val Ser Val Xaa Pro Val Pro Gly Val Arg Gly Arg Trp Gln
            485                 490                 495TGT GAG GCC ACC CTC CAC GGG GAG CAG GRC CAT CCT TGG GGC CGC TTT       1536Cys Glu Ala Thr Leu His Gly Glu Gln Xaa His Pro Trp Gly Arg Phe
        500                 505                 510GGG GTG GCT CTG ACA GTG CTG GGG GAC GTA AAC GGG GAC AAT CTG GCA       1584Gly Val Ala Leu Thr Val Leu Gly Asp Val Asn Gly Asp Asn Leu Ala
    515                 520                 525GAC GTG GCT ATT GGT GCC CCT GGA GAG GAG GAG AGC AGA GGT GCT GTC       1632Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro Gly Glu Glu Glu Ser Arg Gly Ala Val
530                 535                 540TAC ATA TTT CAT GGA GCC TCG AGA CTG GAG ATC ATG CCC TCA CCC AGC       1680Tyr Ile Phe His Gly Ala Ser Arg Leu Glu Ile Met Pro Ser Pro Ser545                 550                 555                 560CAG CGG GTC ACT GGC TCC CAG CTC TCC CTG AGA CTG CAG TAT TTT GGG       1728Gln Arg Val Thr Gly Ser Gln Leu Ser Leu Arg Leu Gln Tyr Phe Gly
            565                 570                 575CAG TCA TTG AGT GGG GGT CAG GAC CTT ACA CAG GAT GGC CTG GTG GAC       1776Gln Ser Leu Ser Gly Gly Gln Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp
        580                 585                 590CTG GCC GTG GGA GCC CAG GGG CAC GTA CTG CTG CTC AGG AGT CTG CCT       1824Leu Ala Val Gly Ala Gln Gly His Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro
    595                 600                 605CTG CTG AAA GTG GAG CTC TCC ATA AGA TTC GCC CCC ATG GAG GTG GCA       1872Leu Leu Lys Val Glu Leu Ser Ile Arg Phe Ala Pro Met Glu Val Ala
610                 615                 620AAG GCT GTG TAC CAG TGC TGG GAA AGG ACT CCC ACT GTC CTC GAA GCT        1920Lys Ala Val Tyr Gln Cys Trp Glu Arg Thr Pro Thr Val Leu Glu Ala625                 630                 635                 640GGA GAG GCC ACT GTC TGT CTC ACT GTC CAC AAA GGC TCA CCT GAC CTG        1968Gly Glu Ala Thr Val Cys Leu Thr Val His Lys Gly Ser Pro Asp Leu
            645                 650             655TTA GGT AAT GTC CAA GGC TCT GTC AGG TAT GAT CTG GCG TTA GAT CCG        2016Leu Gly Asn Val Gln Gly Ser Val Arg Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro
        660                 665             670GGC CGC CTG ATT TCT CGT GCC ATT TTT GAT GAG ACT AAG AAC TGC ACT        2064Gly Arg Leu Ile Ser Arg Ala Ile Phe Asp Glu Thr Lys Asn Cys Thr
    675                 680                 685TTG ACG GGA AGG AAG ACT CTG GGG CTT GGT GAT CAC TGC GAA ACA GTG        2112Leu Thr Gly Arg Lys Thr Leu Gly Leu Gly Asp His Cys Glu Thr Val
690                 695                 700AAG CTG CTT TTG CCG GAC TGT GTG GAA GAT GCA GTG AGC CCT ATC ATC        2160Lys Leu Leu Leu Pro Asp Cys Val Glu Asp Ala Val Ser Pro Ile Ile705                 710                 715                 720CTG CGC CTC AAC TTT TCC CTG GTG AGA GAC TCT GCT TCA CCC AGG AAC        2208Leu Arg Leu Asn Phe Ser Leu Val Arg Asp Ser Ala Ser Pro Arg Asn
            725                 730                 735CTG CAT CCT GTG CTG GCT GTG GGC TCA CAA GAC CAC ATA ACT GCT TCT        2256Leu His Pro Val Leu Ala Val Gly Ser Gln Asp His Ile Thr Ala Ser
        740                 745                 750CTG CCG TTT GAG AAG AAC TGT AAG CAA GAA CTC CTG TGT GAG GGG GAC        2304Leu Pro Phe Glu Lys Asn Cys Lys Gln Glu Leu Leu Cys Glu Gly Asp
    755                 760                 765CTG GGC ATC AGC TTT AAC TTC TCA GGC CTG CAG GTC TTG GTG GTG GGA        2352Leu Gly Ile Ser Phe Asn Phe Ser Gly Leu Gln Val Leu Val Val Gly
770                 775                 780GGC TCC CCA GAG CTC ACT GTG ACA GTC ACT GTG TGG AAT GAG GGT GAG        2400Gly Ser Pro Glu Leu Thr Val Thr Val Thr Val Trp Asn Glu Gly Glu785                 790                 795                 800GAC AGC TAT GGA ACT TTA GTC AAG TTC TAC TAC CCA GCA GGG CTA TCT        2448Asp Ser Tyr Gly Thr Leu Val Lys Phe Tlr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser
        805                     810                 815TAC CGA CGG GTA ACA GGG ACT CAG CAA CCT CAT CAG TAC CCA CTA CGC        2496Tyr Arg Arg Val Thr Gly Thr Gln Gln Pro His Gln Tyr Pro Leu Arg
    820                     825                 830TTG GCC TGT GAG GCT GAG CCC GCT GCC CAG GAG GAC CTG AGG AGC AGC        2544Leu Ala Cys Glu Ala Glu Pro Ala Ala Gln Glu Asp Leu Arg Ser Ser
835                     840                 845AGC TGT AGC ATT AAT CAC CCC ATC TTC CGA GAA GGT GCA AAG ACC ACC        2592Ser Cys Ser Ile Asn His Pro Ile Phe Arg Glu Gly Ala Lys Thr Thr850                     855                 860TTC ATG ATC ACA TTC GAT GTC TCC TAC AAG GCC TTC CTA GGA GAC AGG        2640Phe Met Ile Thr Phe Asp Val Ser Tyr Lys Ala Phe Leu Gly Asp Arg865                 870                 875                 880TTG CTT CTG AGG GCC AAA GCC AGC AGT GAG AAT AAT AAG CCT GAT ACC        2688Leu Leu Leu Arg Ala Lys Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Pro Asp Thr
            885                 890                 895AAC AAG ACT GCC TTC CAG CTG GAG CTC CCA GTG AAG TAC ACC GTC TAT        2736Asn Lys Thr Ala Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Thr Val Tyr
        900                 905                 910ACC CTG ATC AGT AGG CAA GAA GAT TCC ACC AAC CAT GTC AAC TTT TCA        2784Thr Leu Ile Ser Arg Gln Glu Asp Ser Thr Asn His Val Asn Phe Ser
    915                 920                 925TCT TCC CAC GGG GGG AGA AGG CAA GAA GCC GCA CAT CGC TAT CGT GTG        2832Ser Ser His Gly Gly Arg Arg Gln Glu Ala Ala His Arg Tyr Arg Val
930                 935                 940AAT AAC CTG AGT CCA CTG AAG CTG GCC GTC AGA GTT AAC TTC TGG GTC        2880Asn Asn Leu Ser Pro Leu Lys Leu Ala Val Arg Val Asn Phe Trp Val945                 950                 955                 960CCT GTC CTT CTG AAC GGT GTG GCT GTG TGG GAC GTG ACT CTG AGC AGC        2928Pro Val Leu Leu Asn Gly Val Ala Val Trp Asp Val Thr Leu Ser Ser
            965                 970                 975CCA GCA CAG GGT GTC TCC TGC GTG TCC CAG ATG AAA CCT CCT CAG AAT        2976Pro Ala Gln Gly Val Ser Cys Val Ser Gln Met Lys Pro Pro Gln Asn
        980                 985                 990CCC GAC TTT CTG ACC CAG ATT CAG AGA CGT TCT GTG CTG GAC TGC TCC        3024Pro Asp Phe Leu Thr Gln Ile Gln Arg Arg Ser Val Leu Asp Cys Ser
    995                 1000                1005ATT GCT GAC TGC CTG CAC TCC CGC TGT GAC ATC CCC TCC TTG GAC ATC        3072Ile Ala Asp Cys Leu His Ser Arg Cys Asp Ile Pro Ser Leu Asp Ile
1010                1015                1020CAG GAT GAA CTT GAC TTC ATT CTG AGG GGC AAC CTC AGC TTC GGC TGG        3120Gln Asp Glu Leu Asp Phe Ile Leu Arg Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp1025                1030                1035                1040GTC AGT CAG ACA TTG CAG GAA AAG GTG TTG CTT GTG AGT GAG GCT GAA        3168Val Ser Gln Thr Leu Gln Glu Lys Val Leu Leu Val Ser Glu Ala Glu
            1045                1050                1055ATC ACT TTC GAC ACA TCT GTG TAC TCC CAG CTG CCA GGA CAG GAG GCA        3216Ile Thr Phe Asp Thr Ser Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala
        1060                1065                1070TTT CTG AGA GCC CAG GTG GAG ACA ACG TTA GAA GAA TAC GTG GTC TAT        3264Phe Leu Arg Ala Gln Val Glu Thr Thr Leu Glu Glu Tyr Val Val Tyr
    1075                1080                1085GAG CCC ATC TTC CTC GTG GCG GGC AGC TCG GTG GGA GGT CTG CTG TTA        3312Glu Pro Ile Phe Leu Val Ala Gly Ser Ser Val Gly Gly Leu Leu Leu
1090                1095                1100CTG GCT CTC ATC ACA GTG GTA CTG TAC AAG CTT GGC TYC TYC AAA CGT          3360Leu Ala Leu Ile Thr Val Val Leu Tyr Lys Leu Gly Xaa Xaa Lys Arg1105                1110                1115                1120CAG TAC AAA GAA ATG CTG GAC GGC AAG GCT GCA GAT CCT GTC ACA GCC          3408Gln Tyr Lys Glu Met Leu Asp Gly Lys Ala Ala Asp Pro Val Thr Ala
            1125                1130                1135GGC CAG GCA GAT TTC GGC TGT GAG ACT CCT CCA TAT CTC GTG AGC TAGGAATCCA   3463Gly Gln Ala Asp Phe Gly Cys Glu Thr Pro Pro Tyr Leu Val Ser
        1140                1145                1150CTCTCCTGCC TATCTCTGNA ATGAAGATTG GTCCTGCCTA TGAGTCTACT GGCATGGGAA        3523CGAGT                                                                    3528(2)SEQ ID NO：37资料：
(i)序列特征：
    (A)长度：1151个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)SEQ ID NO：37序列描述：
Gly Trp Ala Leu Ala Ser Cys His Gly Ser Asn Leu Asp Val Glu Glu
  1               5                  10                  15
Pro Ile Val Phe Arg Glu Asp Ala Ala Ser Phe Gly Gln Thr Val Val
             20                  25                  30
Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Glu Ala Val
         35                  40                  45
Ala Val Asn Gln Thr Gly Arg Leu Tyr Asp Cys Ala Pro Ala Thr Gly
     50                  55                  60
Met Cys Gln Pro Ile Val Leu Arg Ser Pro Leu Glu Ala Val Asn Met
 65                  70                  75                  80
Ser Leu Gly Leu Ser Leu Val Thr Ala Thr Asn Asn Ala Gln Leu Leu
                 85                  90                  95
Ala Cys Gly Pro Thr Ala Gln Arg Ala Cys Val Lys Asn Met Tyr Ala
            100                 105                 110
Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly Ser Ser Leu Gln Phe Ile Gln Ala
        115                 120                 125
Val Pro Ala Ser Met Pro Glu Cys Pro Arg Gln Glu Met Asp Ile Ala
    130                 135                 140
Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser Ile Asn Gln Arg Asp Phe Ala Gln
145                 150                 155                 160
Met Lys Asp Phe Val Lys Ala Leu Met Gly Glu Phe Ala Ser Thr Ser
                165                 170                 175Thr Leu Phe Ser Leu Met Gln Tyr Ser Asn Ile Leu Lys Thr His Phe
        180                 185                 190Thr Phe Thr Glu Phe Lys Asn Ile Leu Asp Pro Gln Ser Leu Val Asp
    195                 200                 205Pro Ile Val Gln Leu Gln Gly Leu Thr Tyr Thr Ala Thr Gly Ile Arg
210                 215                 220Thr Val Met Glu Glu Leu Phe His Ser Lys Asn Gly Ser Arg Lys Ser225                 230                 235                 240Ala Lys Lys Ile Leu Leu Val Ile Thr Asp Gly Gln Lys Tyr Arg Asp
            245                 250                 255Pro Leu Glu Tyr Ser Asp Val Ile Pro Ala Ala Asp Lys Ala Gly Ile
        260                 265                 270Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly Asp Ala Phe Gln Glu Pro Thr Ala
    275                 280                 285Leu Lys Glu Leu Asn Thr Ile Gly Ser Ala Pro Pro Gln Asp His Val
290                 295                 300Phe Lys Val Gly Asn Phe Ala Ala Leu Arg Ser Ile Gln Arg Gln Leu305                 310                 315                 320Gln Glu Lys Ile Phe Ala Ile Glu Gly Thr Gln Ser Arg Ser Ser Ser
            325                 330                 335Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln Glu Gly Phe Ser Ser Ala Leu Thr
        340                 345                 350Ser Asp Gly Pro Val Leu Gly Ala Xaa Gly Ser Phe Ser Trp Ser Gly
    355                 360                 365Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro Asn Thr Arg Pro Thr Phe Ile Asn Met
370                 375                 380Ser Gln Glu Asn Val Asp Met Arg Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr385                 390                 395                 400Ala Val Ala Phe Trp Lys Gly Val His Ser Leu Ile Leu Gly Ala Pro
            405                 410                 415Arg His Gln His Thr Gly Lys Val Val Ile Phe Thr Gln Glu Ala Arg
        420                 425                 430His Trp Arg Pro Lys Ser Glu Val Arg Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr
    435                 440                 445Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val Asp Val Asp Arg Asp Gly Ser Xaa
450                 455                 460Asp Leu Val Leu Ile Gly Ala Pro His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly465                 470                 475                 480Gly Gln Val Ser Val Xaa Pro Val Pro Gly Val Arg Gly Arg Trp Gln
            485                 490                 495Cys Glu Ala Thr Leu His Gly Glu Gln Xaa His Pro Trp Gly Arg Phe
        500                 505                 510Gly Val Ala Leu Thr Val Leu Gly Asp Val Asn Gly Asp Asn Leu Ala
    515                 520                 525Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro Gly Glu Glu Glu Ser Arg Gly Ala Val
530                 535                 540Tyr Ile Phe His Gly Ala Ser Arg Leu Glu Ile Met Pro Ser Pro Ser545                 550                 555                 560Gln Arg Val Thr Gly Ser Gln Leu Ser Leu Arg Leu Gln Tyr Phe Gly
            565                 570                 575Gln Ser Leu Ser Gly Gly Gln Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp
        580                 585                 590Leu Ala Val Gly Ala Gln Gly His Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro
    595                 600                 605Leu Leu Lys Val Glu Leu Ser Ile Arg Phe Ala Pro Met Glu Val Ala
610                 615                 620Lys Ala Val Tyr Gln Cys Trp Glu Arg Thr Pro Thr Val Leu Glu Ala625                 630                635                  640Gly Glu Ala Thr Val Cys Leu Thr Val His Lys Gly Ser Pro Asp Leu
            645                 650                 655Leu Gly Asn Val Gln Gly Ser Val Arg Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro
        660                 665                 670Gly Arg Leu Ile Ser Arg Ala Ile Phe Asp Glu Thr Lys Asn Cys Thr
    675                 680                 685Leu Thr Gly Arg Lys Thr Leu Gly Leu Gly Asp His Cys Glu Thr Val
690                 695                 700Lys Leu Leu Leu Pro Asp Cys Val Glu Asp Ala Val Ser Pro Ile Ile705                 710                 715                 720Leu Arg Leu Asn Phe Ser Leu Val Arg Asp Ser Ala Ser Pro Arg Asn
            725                 730                 735Leu His Pro Val Leu Ala Val Gly Ser Gln Asp His Ile Thr Ala Ser
        740                 745                 750Leu Pro Phe Glu Lys Asn Cys Lys Gln Glu Leu Leu Cys Glu Gly Asp
    755                 760                 765Leu Gly Ile Ser Phe Asn Phe Ser Gly Leu Gln Val Leu Val Val Gly
770                 775                 780Gly Ser Pro Glu Leu Thr Val Thr Val Thr Val Trp Asn Glu Gly Glu785                 790                 795                 800Asp Ser Tyr Gly Thr Leu Val Lys Phe Tyr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser
            805                 810                 815Tyr Arg Arg Val Thr Gly Thr Gln Gln Pro His Gln Tyr Pro Leu Arg
        820                 825                 830Leu Ala Cys Glu Ala Glu Pro Ala Ala Gln Glu Asp Leu Arg Ser Ser
    835                 840                 845Ser Cys Ser Ile Asn His Pro Ile Phe Arg Glu Gly Ala Lys Thr Thr
850                 855                 860Phe Met Ile Thr Phe Asp Val Ser Tyr Lys Ala Phe Leu Gly Asp Arg865                 870                 875                 880Leu Leu Leu Arg Ala Lys Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Pro Asp Thr
            885                 890                 895Asn Lys Thr Ala Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Thr Val Tyr
        900                 905                 910Thr Leu Ile Ser Arg Gln Glu Asp Ser Thr Asn His Val Asn Phe Ser
    915                 920                 925Ser Ser His Gly Gly Arg Arg Gln Glu Ala Ala His Arg Tyr Arg Val
930                 935                 940Asn Asn Leu Ser Pro Leu Lys Leu Ala Val Arg Val Asn Phe Trp Val945                 950                 955                 960Pro Val Leu Leu Asn Gly Val Ala Val Trp Asp Val Thr Leu Ser Ser
            965                 970                 975Pro Ala Gln Gly Val Ser Cys Val Ser Gln Met Lys Pro Pro Gln Asn
        980                 985                 990Pro Asp Phe Leu Thr Gln Ile Gln Arg Arg Ser Val Leu Asp Cys Ser
    995                 1000                1005Ile Ala Asp Cys Leu His Ser Arg Cys Asp Ile Pro Ser Leu Asp Ile
1010                1015                1020Gln Asp Glu Leu Asp Phe Ile Leu Arg Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp1025                1030                1035                1040Val Ser Gln Thr Leu Gln Glu Lys Val Leu Leu Val Ser Glu Ala Glu
            1045                1050                1055Ile Thr Phe Asp Thr Ser Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala
        1060                1065                1070Phe Leu Arg Ala Gln Val Glu Thr Thr Leu Glu Glu Tyr Val Val Tyr
    1075            1080                    1085Glu Pro Ile Phe Leu Val Ala Gly Ser Ser Val Gly Gly Leu Leu Leu
1090            1095                    1100Leu Ala Leu Ile Thr Val Val Leu Tyr Lys Leu Gly Xaa Xaa Lys Arg1105            1110                    1115                1120Gln Tyr Lys Glu Met Leu Asp Gly Lys Ala Ala Asp Pro Val Thr Ala
        1125                    1130                1135Gly Gln Ala Asp Phe Gly Cys Glu Thr Pro Pro Tyr Leu Val Ser
    1140                    1145                1150(2)SEQ ID NO：38信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：21个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：38序列描述：GTCCAAGCTG TCATGGGCCA G                                 21(2)SEQ ID NO：39信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：23个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：39序列描述：GTCCAGCAGA CTGAAGAGCA CGG                               23(2)SEQ ID NO：40信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：18个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：40序列描述：TGTAAAACGA CGGCCAGT                                     18(2)SEQ ID NO：41信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：19个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：41序列描述：GGAAACAGCT ATGACCATG                                    19(2)SEQ ID NO：42信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：22个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：42序列描述：GGACATGTTC ACTGCCTCTA GG                                22(2)SEQ ID NO：43信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：25个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：43序列描述：GGCGGACAGT CAGACGACTG TCCTG                             25(2)SEQ ID NO：44信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：38个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：44序列描述：CTGGTTCGGC CCACCTCTGA AGGTTCCAGA ATCGATAG               38(2)SEQ ID NO：45信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：3519个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：cDNA
(ix)特征：
    (A)名称/键：CDS
    (B)位置：52..3519
(xi)SEQ ID NO：45序列描述：GCTTTCTGAA GGTTCCAGAA TCGATAGTGA ATTCGTGGGC ACTGCTCAGA T ATG GTC         57
                                                       Met Val
                                                         1CGT GGA GTT GTG ATC CTC CTG TGT GGC TGG GCC CTG GCT TCC TGT CAT         105Arg Gly Val Val Ile Leu Leu Cys Gly Trp Ala Leu Ala Ser Cys His
        5                  10                  15GGG TCT AAC CTG GAT GTG GAG AAG CCC GTC GTG TTC AAA GAG GAT GCA         153Gly Ser Asn Leu Asp Val Glu Lys Pro Val Val Phe Lys Glu Asp Ala
   20                  25                  30GCC AGC TTC GGA CAG ACT GTG GTG CAG TTT GGT GGA TCT CGA CTC GTG         201Ala Ser Phe Gly Gln Thr Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val35                  40                  45                  50GTG GGA GCC CCT CTG GAG GCG GTG GCA GTC AAC CAA ACA GGA CAG TCG         249Val Gly Ala Pro Leu Glu Ala Val Ala Val Asn Gln Thr Gly Gln Ser
               55                  60                  65TCT GAC TGT CCG CCT GCC ACT GGC GTG TGC CAG CCC ATC TTA CTG CAC         297Ser Asp Cys Pro Pro Ala Thr Gly Val Cys Gln Pro Ile Leu Leu His
           70                  75                  80ATT CCC CTA GAG GCA GTG AAC ATG TCC CTG GGC CTG TCT CTG GTG GCT         345Ile Pro Leu Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu Val Ala
       85                  90                  95GAC ACC AAT AAC TCC CAG TTG CTG GCT TGT GGT CCA ACT GCA CAG AGA         393Asp Thr Asn Asn Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Ala Gln Arg
  100                 105                 110GCT TGT GCA AAG AAC ATG TAT GCA AAA GGT TCC TGC CTC CTT CTG GGC         441Ala Cys Ala Lys Asn Met Tyr Ala Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly115                 120                 125                 130TCC AGC TTG CAG TTC ATC CAG GCA ATC CCT GCT ACC ATG CCA GAG TGT         489Ser Ser Leu Gln Phe Ile Gln Ala Ile Pro Ala Thr Met Pro Glu Cys
              135                 140                 145CCA GGA CAA GAG ATG GAC ATT GCT TTC CTG ATT GAT GGC TCC GGC AGC         537Pro Gly Gln Glu Met Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser
          150                 155                 160ATT GAT CAA AGT GAC TTT ACC CAG ATG AAG GAC TTC GTC AAA GCT TTG         585Ile Asp Gln Ser Asp Phe Thr Gln Met Lys Asp Phe Val Lys Ala Leu
    165                 170                 175ATG GGC CAG TTG GCG AGC ACC AGC ACC TCG TTC TCC CTG ATG CAA TAC         633Met G1y Gln Leu Ala Ser Thr Ser Thr Ser Phe Ser Leu Met Gln Tyr
180                 185                 190TCA AAC ATC CTG AAG ACT CAT TTT ACC TTC ACG GAA TTC AAG AGC AGC         681Ser Asn Ile Leu Lys Thr His Phe Thr Phe Thr Glu Phe Lys Ser Ser195                 200                 205                 210CTG AGC CCT CAG AGC CTG GTG GAT GCC ATC GTC CAG CTC CAA GGC CTG         729Leu Ser Pro Gln Ser Leu Val Asp Ala Ile Val Gln Leu Gln Gly Leu
            215                 220                 225ACG TAC ACA GCC TCG GGC ATC CAG AAA GTG GTG AAA GAG CTA TTT CAT         777Thr Tyr Thr Ala Ser Gly Ile Gln Lys Val Val Lys Glu Leu Phe His
        230                 235                 240AGC AAG AAT GGG GCC CGA AAA AGT GCC AAG AAG ATA CTA ATT GTC ATC         825Ser Lys Asn Gly Ala Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile Val Ile
    245                 250                 255ACA GAT GGG CAG AAA TTC AGA GAC CCC CTG GAG TAT AGA CAT GTC ATC         873Thr Asp Gly Gln Lys Phe Arg Asp Pro Leu Glu Tyr Arg His Val Ile
260                 265                 270CCT GAA GCA GAG AAA GCT GGG ATC ATT CGC TAT GCT ATA GGG GTG GGA         921Pro Glu Ala Glu Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly275                 280                 285                 290GAT GCC TTC CGG GAA CCC ACT GCC CTA CAG GAG CTG AAC ACC ATT GGC         969Asp Ala Phe Arg Glu Pro Thr Ala Leu Gln Glu Leu Asn Thr Ile Gly
            295                 300                 305TCA GCT CCC TCG CAG GAC CAC GTG TTC AAG GTG GGC AAT TTT GTA GCA        1017Ser Ala Pro Ser Gln Asp His Val Phe Lys Val Gly Asn Phe Val Ala
        310                 315                 320CTT CGC AGC ATC CAG CGG CAA ATT CAG GAG AAA ATC TTT GCC ATT GAA        1065Leu Arg Ser Ile Gln Arg Gln Ile Gln Glu Lys Ile Phe Ala Ile Glu
    325                 330                 335GGA ACC GAA TCA AGG TCA AGT AGT TCC TTT CAG CAC GAG ATG TCA CAA        1113Gly Thr Glu Ser Arg Ser Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln
340                 345                 350GAA GGT TTC AGC TCA GCT CTC TCA ATG GAT GGA CCA GTT CTG GGG GCT        1161Glu Gly Phe Ser Ser Ala Leu Ser Met Asp Gly Pro Val Leu Gly Ala355                 360                 365                 370GTG GGA GGC TTC AGC TGG TCT GGA GGT GCC TTC TTG TAC CCC TCA AAT        1209Val Gly Gly Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Ser Asn
            375                 380                 385ATG AGA TCC ACC TTC ATC AAC ATG TCT CAG GAG AAC GAG GAT ATG AGG        1257Met Arg Ser Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Glu Asp Met Arg
        390                 395                 400GAC GCT TAC CTG GGT TAC TCC ACC GCA CTG GCC TTT TGG AAG GGG GTC        1305Asp Ala Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Ala Leu Ala Phe Trp Lys Gly Val
    405                 410                 415CAC AGC CTG ATC CTG GGG GCC CCT CGC CAC CAG CAC ACG GGG AAG GTT        1353His Ser Leu Ile Leu Gly Ala Pro Arg His Gln His Thr Gly Lys Val
420                 425                 430GTC ATC TTT ACC CAG GAA TCC AGG CAC TGG AGG CCC AAG TCT GAA GTC      1401Val Ile Phe Thr Gln Glu Ser Arg His Trp Arg Pro Lys Ser Glu Val435                 440                 445                 450AGA GGG ACA CAG ATC GGC TCC TAC TTT GGG GCA TCT CTC TGT TCT GTG      1449Arg Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val
            455                460                  465GAC ATG GAT AGA GAT GGC AGC ACT GAC CTG GTC CTG ATT GGA GTC CCC      1497Asp Met Asp Arg Asp Gly Ser Thr Asp Leu Val Leu Ile Gly Val Pro
        470                 475                 480CAT TAC TAT GAG CAC ACC CGA GGG GGG CAG GTG TCG GTG TGC CCC ATG      1545His Tyr Tyr Glu His Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys Pro Met
    485                 490                 495CCT GGT GTG AGG AGC AGG TGG CAT TGT GGG ACC ACC CTC CAT GGG GAG      1593Pro Gly Val Arg Ser Arg Trp His Cys Gly Thr Thr Leu His Gly Glu
500                 505                 510CAG GGC CAT CCT TGG GGC CGC TTT GGG GCG GCT CTG ACA GTG CTA GGG      1641Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu Gly515                 520                 525                 530GAC GTG AAT GGG GAC AGT CTG GCG GAT GTG GCT ATT GGT GCA CCC GGA      1689Asp Val Asn Gly Asp Ser Leu Ala Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro Gly
            535                 540                 545GAG GAG GAG AAC AGA GGT GCT GTC TAC ATA TTT CAT GGA GCC TCG AGA      1737Glu Glu Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Ile Phe His Gly Ala Ser Arg
        550                 555                 560CAG GAC ATC GCT CCC TCG CCT AGC CAG CGG GTC ACT GGC TCC CAG CTC      1785Gln Asp Ile Ala Pro Ser Pro Ser Gln Arg Val Thr Gly Ser Gln Leu
    565                 570                 575TTC CTG AGG CTC CAA TAT TTT GGG CAG TCA TTA AGT GGG GGT CAG GAC      1833Phe Leu Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ser Leu Ser Gly Gly Gln Asp
580                 585                 590CTT ACA CAG GAT GGC CTG GTG GAC CTG GCC GTG GGA GCC CAG GGG CAC      1881Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp Leu Ala Val Gly Ala Gln Gly His595                 600                 605                 610GTG CTG CTG CTT AGG AGT CTG CCT TTG CTG AAA GTG GGG ATC TCC ATT      1929Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Leu Leu Lys Val Gly Ile Ser Ile
            615                 620                 625AGA TTT GCC CCC TCA GAG GTG GCA AAG ACT GTG TAC CAG TGC TGG GGA      1977Arg Phe Ala Pro Ser Glu Val Ala Lys Thr Val Tyr Gln Cys Trp Gly
        630                 635                 640AGG ACT CCC ACT GTC CTC GAA GCT GGA GAG GCC ACC GTC TGT CTC ACT       2025Arg Thr Pro Thr Val Leu Glu Ala Gly Glu Ala Thr Val Cys Leu Thr
    645                 650                 655GTC CGC AAA GGT TCA CCT GAC CTG TTA GGT GAT GTC CAA AGC TCT GTC       2073Val Arg Lys Gly Ser Pro Asp Leu Leu Gly Asp Val Gln Ser Ser Val
660                 665                 670AGG TAT GAT CTG GCG TTG GAT CCG GGC CGT CTG ATT TCT CGT GCC ATT       2121Arg Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Ile Ser Arg Ala Ile675                 680                 685                 690TTT GAT GAG ACG AAG AAC TGC ACT TTG ACC CGA AGG AAG ACT CTG GGG        2169Phe Asp Glu Thr Lys Asn Cys Thr Leu Thr Arg Arg Lys Thr Leu Gly
            695                 700                 705CTT GGT GAT CAC TGC GAA ACA ATG AAG CTG CTT TTG CCA GAC TGT GTG        2217Leu Gly Asp His Cys Glu Thr Met Lys Leu Leu Leu Pro Asp Cys Val
        710                 715                 720GAG GAT GCA GTG ACC CCT ATC ATC CTG CGC CTT AAC TTA TCC CTG GCA        2265Glu Asp Ala Val Thr Pro Ile Ile Leu Arg Leu Asn Leu Ser Leu Ala
    725                 730                 735GGG GAC TCT GCT CCA TCC AGG AAC CTT CGT CCT GTG CTG GCT GTG GGC        2313Gly Asp Ser Ala Pro Ser Arg Asn Leu Arg Pro Val Leu Ala Val Gly
740                 745                 750TCA CAA GAC CAT GTA ACA GCT TCT TTC CCG TTT GAG AAG AAC TGT GAG        2361Ser Gln Asp His Val Thr Ala Ser Phe Pro Phe Glu Lys Asn Cys Glu755                 760                 765                 770GGG AAC CTG GGC GTC AGC TTC AAC TTC TCA GGC CTG CAG GTC TTG GAG        2409Gly Asn Leu Gly Val Ser Phe Asn Phe Ser Gly Leu Gln Val Leu Glu
            775                 780                 785GTA GGA AGC TCC CCA GAG CTC ACT GTG ACA GTA ACA GTT TGG AAT GAG        2457Val Gly Ser Ser Pro Glu Leu Thr Val Thr Val Thr Val Trp Asn Glu
        790                 795                 800GGT GAG GAC AGC TAT GGA ACC TTA ATC AAG TTC TAC TAC CCA GCA GAG        2505Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Leu Ile Lys Phe Tyr Tyr Pro Ala Glu
    805                 810                 815CTA TCT TAC CGA CGG GTG ACA AGA GCC CAG CAA CCT CAT CCG TAC CCA        2553Leu Ser Tyr Arg Arg Val Thr Arg Ala Gln Gln Pro His Pro Tyr Pro
820                 825                 830CTA CGC CTG GCA TGT GAG GCT GAG CCC ACG GGC CAG GAG AGC CTG AGG        2601Leu Arg Leu Ala Cys Glu Ala Glu Pro Thr Gly Gln Glu Ser Leu Arg835                 840                 845                 850AGC AGC AGC TGT AGC ATC AAT CAC CCC ATC TTC CGA GAA GGT GCC AAG        2649Ser Ser Ser Cys Ser Ile Asn His Pro Ile Phe Arg Glu Gly Ala Lys
            855                 860                 865GCC ACC TTC ATG ATC ACA TTT GAT GTC TCC TAC AAG GCC TTC CTG GGA        2697Ala Thr Phe Met Ile Thr Phe Asp Val Ser Tyr Lys Ala Phe Leu Gly
        870                 875                 880GAC AGG TTG CTT CTG AGG GCC AGC GCA AGC AGT GAG AAT AAT AAG CCT        2745Asp Arg Leu Leu Leu Arg Ala Ser Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Pro
    885                 890                 895GAA ACC AGC AAG ACT GCC TTC CAG CTG GAG CTT CCG GTG AAG TAC ACG        2793Glu Thr Ser Lys Thr Ala Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Thr
900                 905                 910GTC TAT ACC GTG ATC AGT AGG CAG GAA GAT TCT ACC AAG CAT TTC AAC        2841Val Tyr Thr Val Ile Ser Arg Gln Glu Asp Ser Thr Lys His Phe Asn915                 920                 925                 930TTC TCA TCT TCC CAC GGG GAG AGA CAG AAA GAG GCC GAA CAT CGA TAT       2889Phe Ser Ser Ser His Gly Glu Arg Gln Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr
            935                 940                 945CGT GTG AAT AAC CTG AGT CCA TTG ACG CTG GCC ATC AGC GTT AAC TTC       2937Arg Val Asn Asn Leu Ser Pro Leu Thr Leu Ala Ile Ser Val Asn Phe
        950                 955                 960TGG GTC CCC ATC CTT CTG AAT GGT GTG GCC GTG TGG GAT GTG ACT CTG       2985Trp Val Pro Ile Leu Leu Asn Gly Val Ala Val Trp Asp Val Thr Leu
    965                 970                 975AGG AGC CCA GCA CAG GGT GTC TCC TGT GTG TCA CAG AGG GAA CCT CCT       3033Arg Ser Pro Ala Gln Gly Val Ser Cys Val Ser Gln Arg Glu Pro Pro
980                 985                 990CAA CAT TCC GAC CTT CTG ACC CAG ATC CAA GGA CGC TCT GTG CTG GAC       3081Gln His Ser Asp Leu Leu Thr Gln Ile Gln Gly Arg Ser Val Leu Asp995                 1000                1005                1010TGC GCC ATC GCC GAC TGC CTG CAC CTC CGC TGT GAC ATC CCC TCC TTG       3129Cys Ala Ile Ala Asp Cys Leu His Leu Arg Cys Asp Ile Pro Ser Leu
            1015                1020                1025GGC ACC CTG GAT GAG CTT GAC TTC ATT CTG AAG GGC AAC CTC AGC TTC       3177Gly Thr Leu Asp Glu Leu Asp Phe Ile Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe
        1030                1035                1040GGC TGG ATC AGT CAG ACA TTG CAG AAA AAG GTG TTG CTC CTG AGT GAG       3225Gly Trp Ile Ser Gln Thr Leu Gln Lys Lys Val Leu Leu Leu Ser Glu
    1045                1050                1055GCT GAA ATC ACA TTC AAC ACA TCT GTG TAT TCC CAG CTG CCG GGA CAG       3273Ala Glu Ile Thr Phe Asn Thr Ser Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln
1060                1065                1070GAG GCA TTT CTG AGA GCC CAG GTG TCA ACG ATG CTA GAA GAA TAC GTG       3321Glu Ala Phe Leu Arg Ala Gln Val Ser Thr Met Leu Glu Glu Tyr Val1075                1080                1085                1090GTC TAT GAG CCC GTC TTC CTC ATG GTG TTC AGC TCA GTG GGA GGT CTG       3369Val Tyr Glu Pro Val Phe Leu Met Val Phe Ser Ser Val Gly Gly Leu
            1095                1100                1105CTG TTA CTG GCT CTC ATC ACT GTG GCG CTG TAC AAG CTT GGC TTC TTC       3417Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Val Ala Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe
        1110                1115                1120AAA CGT CAG TAT AAA GAG ATG CTG GAT CTA CCA TCT GCA GAT CCT GAC       3465Lys Arg Gln Tyr Lys Glu Met Leu Asp Leu Pro Ser Ala Asp Pro Asp
    1125                1130                1135CCA GCC GGC CAG GCA GAT TCC AAC CAT GAG ACT CCT CCA CAT CTC ACG       3513Pro Ala Gly Gln Ala Asp Ser Asn His Glu Thr Pro Pro His Leu Thr
1140                1145                1150TCC TAG                                                               3519Ser1155(2)SEQ ID NO：46资料：
(i)序列特征：
    (A)长度：1155个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)SEQ ID NO：46序列描述：
Met Val Arg Gly Val Val Ile Leu Leu Cys Gly Trp Ala Leu Ala Ser
  1               5                  10                  15
Cys His Gly Ser Asn Leu Asp Val Glu Lys Pro Val Val Phe Lys Glu
             20                  25                  30
Asp Ala Ala Ser Phe Gly Gln Thr Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg
         35                  40                  45
Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Glu Ala Val Ala Val Asn Gln Thr Gly
     50                  55                  60
Gln Ser Ser Asp Cys Pro Pro Ala Thr Gly Val Cys Gln Pro Ile Leu
 65                  70                  75                  80
Leu His Ile Pro Leu Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu
                 85                  90                  95
Val Ala Asp Thr Asn Asn Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Ala
            100                 105                 110
Gln Arg Ala Cys Ala Lys Asn Met Tyr Ala Lys Gly Ser Cys Leu Leu
        115                 120                 125
Leu Gly Ser Ser Leu Gln Phe Ile Gln Ala Ile Pro Ala Thr Met Pro
    130                 135                 140
Glu Cys Pro Gly Gln Glu Met Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ser Ile Asp Gln Ser Asp Phe Thr Gln Met Lys Asp Phe Val Lys
                165                 170                 175
Ala Leu Met Gly Gln Leu Ala Ser Thr Ser Thr Ser Phe Ser Leu Met
            180                 185                 190
Gln Tyr Ser Asn Ile Leu Lys Thr His Phe Thr Phe Thr Glu Phe Lys
        195                 200                 205
Ser Ser Leu Ser Pro Gln Ser Leu Val Asp Ala Ile Val Gln Leu Gln
    210                 215                 220
Gly Leu Thr Tyr Thr Ala Ser Gly Ile Gln Lys Val Val Lys Glu Leu
225                 230                 235                 240
Phe His Ser Lys Asn Gly Ala Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile
                245                 250                 255Val Ile Thr Asp Gly Gln Lys Phe Arg Asp Pro Leu Glu Tyr Arg His
        260                 265                 270Val Ile Pro Glu Ala Glu Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly
    275                 280                 285Val Gly Asp Ala Phe Arg Glu Pro Thr Ala Leu Gln Glu Leu Asn Thr
290                 295                 300Ile Gly Ser Ala Pro Ser Gln Asp His Val Phe Lys Val Gly Asn Phe305                 310                 315                 320Val Ala Leu Arg Ser Ile Gln Arg Gln Ile Gln Glu Lys Ile Phe Ala
            325                 330                 335Ile Glu Gly Thr Glu Ser Arg Ser Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met
        340                 345                 350Ser Gln Glu Gly Phe Ser Ser Ala Leu Ser Met Asp Gly Pro Val Leu
    355                 360                 365Gly Ala Val Gly Gly Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro
370                 375                 380Ser Asn Met Arg Ser Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Glu Asp385                 390                 395                 400Met Arg Asp Ala Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Ala Leu Ala Phe Trp Lys
            405                 410                 415Gly Val His Ser Leu Ile Leu Gly Ala Pro Arg His Gln His Thr Gly
        420                 425                 430Lys Val Val Ile Phe Thr Gln Glu Ser Arg His Trp Arg Pro Lys Ser
    435                 440                 445Glu Val Arg Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys
450                 455                 460Ser Val Asp Met Asp Arg Asp Gly Ser Thr Asp Leu Val Leu Ile Gly465                 470                 475                 480Val Pro His Tyr Tyr Glu His Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys
            485                 490                 495Pro Met Pro Gly Val Arg Ser Arg Trp His Cys Gly Thr Thr Leu His
        500                 505                 510Gly Glu Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val
    515                 520                 525Leu Gly Asp Val Asn Gly Asp Ser Leu Ala Asp Val Ala Ile Gly Ala
530                 535                 540Pro Gly Glu Glu Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Ile Phe His Gly Ala545                 550                 555                 560Ser Arg Gln Asp Ile Ala Pro Ser Pro Ser Gln Arg Val Thr Gly Ser
            565                 570                 575Gln Leu Phe Leu Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ser Leu Ser Gly Gly
        580                 585                 590Gln Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp Leu Ala Val Gly Ala Gln
    595                 600                 605Gly His Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Leu Leu Lys Val Gly Ile
610                 615                 620Ser Ile Arg Phe Ala Pro Ser Glu Val Ala Lys Thr Val Tyr Gln Cys625                 630                 635                 640Trp Gly Arg Thr Pro Thr Val Leu Glu Ala Gly Glu Ala Thr Val Cys
            645                 650                 655Leu Thr Val Arg Lys Gly Ser Pro Asp Leu Leu Gly Asp Val Gln Ser
        660                 665                 670Ser Val Arg Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Ile Ser Arg
    675                 680                 685Ala Ile Phe Asp Glu Thr Lys Asn Cys Thr Leu Thr Arg Arg Lys Thr
690                 695                 700Leu Gly Leu Gly Asp His Cys Glu Thr Met Lys Leu Leu Leu Pro Asp705                 710                 715                 720Cys Val Glu Asp Ala Val Thr Pro Ile Ile Leu Arg Leu Asn Leu Ser
            725                 730                 735Leu Ala Gly Asp Ser Ala Pro Ser Arg Asn Leu Arg Pro Val Leu Ala
        740                 745                 750Val Gly Ser Gln Asp His Val Thr Ala Ser Phe Pro Phe Glu Lys Asn
    755                 760                 765Cys Glu Gly Asn Leu Gly Val Ser Phe Asn Phe Ser Gly Leu Gln Val
770                 775                 780Leu Glu Val Gly Ser Ser Pro Glu Leu Thr Val Thr Val Thr Val Trp785                 790                 795                 800Asn Glu Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Leu Ile Lys Phe Tyr Tyr Pro
            805                 810                 815Ala Glu Leu Ser Tyr Arg Arg Val Thr Arg Ala Gln Gln Pro His Pro
        820                 825                 830Tyr Pro Leu Arg Leu Ala Cys Glu Ala Glu Pro Thr Gly Gln Glu Ser
    835                 840                 845Leu Arg Ser Ser Ser Cys Ser Ile Asn His Pro Ile Phe Arg Glu Gly
850                 855                 860Ala Lys Ala Thr Phe Met Ile Thr Phe Asp Val Ser Tyr Lys Ala Phe865                 870                 875                 880Leu Gly Asp Arg Leu Leu Leu Arg Ala Ser Ala Ser Ser Glu Asn Asn
            885                 890                 895Lys Pro Glu Thr Ser Lys Thr Ala Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys
        900                 905                 910Tyr Thr Val Tyr Thr Val Ile Ser Arg Gln Glu Asp Ser Thr Lys His
    915                 920                 925Phe Asn Phe Ser Ser Ser His Gly Glu Arg Gln Lys Glu Ala Glu His
930                 935                 940Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Pro Leu Thr Leu Ala Ile Ser Val945                 950                 955                 960   Asn Phe Trp Val Pro Ile Leu Leu Asn Gly Val Ala Val Trp Asp Val
               965                 970                 975Thr Leu Arg Ser Pro Ala Gln Gly Val Ser Cys Val Ser Gln Arg Glu
           980                 985                 990Pro Pro Gln His Ser Asp Leu Leu Thr Gln Ile Gln Gly Arg Ser Val
       995                 1000                1005Leu Asp Cys Ala Ile Ala Asp Cys Leu His Leu Arg Cys Asp Ile Pro
   1010                1015                1020Ser Leu Gly Thr Leu Asp Glu Leu Asp Phe Ile Leu Lys G1y Asn Leu1025               1030                 1035                1040Ser Phe Gly Trp Ile Ser Gln Thr Leu Gln Lys Lys Val Leu Leu Leu
               1045                1050                1055Ser Glu Ala Glu Ile Thr Phe Asn Thr Ser Val Tyr Ser Gln Leu Pro
           1060                1065                1070Gly Gln Glu Ala Phe Leu Arg Ala Gln Val Ser Thr Met Leu Glu Glu
       1075                1080                1085Tyr Val Val Tyr Glu Pro Val Phe Leu Met Val Phe Ser Ser Val Gly
   1090                1095                1100Gly Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Val Ala Leu Tyr Lys Leu Gly1105                1110                1115                1120Phe Phe Lys Arg Gln Tyr Lys Glu Met Leu Asp Leu Pro Ser Ala Asp
               1125                1130                1135Pro Asp Pro Ala Gly Gln Ala Asp Ser Asn His Glu Thr Pro Pro His
           1140                1145                1150Leu Thr Ser
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    (A)长度：20个碱基
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1               5                  10                  15TGT CAT GGG TCT AAC CTG GAT GTG GAG AAG CCC GTC GTG TTC AAA GAG           96Cys His Gly Ser Asn Leu Asp Val Glu Lys Pro Val Val Phe Lys Glu
           20                  25                  30GAT GCA GCC AGC TTC GGA CAG ACT GTG GTG CAG TTT GGT GGA TCT CGA          144Asp Ala Ala Ser Phe Gly Gln Thr Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg
       35                  40                  45CTC GTG GTG GGA GCC CCT CTG GAG GCG GTG GCA GTC AAC CAA ACA GGA          192Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Glu Ala Val Ala Val Asn Gln Thr Gly
   50                  55                  60CAG TCG TCT GAC TGT CCG CCT GCC ACT GGC GTG TGC CAG CCC ATC TTA          240Gln Ser Ser Asp Cys Pro Pro Ala Thr Gly Val Cys Gln Pro Ile Leu65                  70                  75                  80CTG CAC ATT CCC CTA GAG GCA GTG AAC ATG TCC CTG GGC CTG TCT CTG          288Leu His Ile Pro Leu Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu
               85                  90                  95GTG GCT GAC ACC AAT AAC TCC CAG TTG CTG GCT TGT GGT CCA ACT GCA          336Val Ala Asp Thr Asn Asn Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Ala
          100                 105                 110CAG AGA GCT TGT GCA AAG AAC ATG TAT GCA AAA GGT TCC TGC CTC CTT          384Gln Arg Ala Cys Ala Lys Asn Met Tyr A la Lys Gly Ser Cys Leu Leu
      115                 120                  125CTG GGC TCC AGC TTG CAG TTC ATC CAG GCA ATC CCT GCT ACC ATG CCA          432Leu Gly Ser Ser Leu Gln Phe Ile Gln Ala Ile Pro Ala Thr Met Pro
  130                 135                 140GAG TGT CCA GGA CAA GAG ATG GAC ATT GCT TTC CTG ATT GAT GGC TCC         480Glu Cys Pro Gly Gln Glu Met Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser145                 150                 155                 160GGC AGC ATT GAT CAA AGT GAC TTT ACC CAG ATG AAG GAC TTC GTC AAA         528Gly Ser Ile Asp Gln Ser Asp Phe Thr Gln Met Lys Asp Phe Val Lys
            165                 170                 175GCT TTG ATG GGC CAG TTG GCG AGC ACC AGC ACC TCG TTC TCC CTG ATG         576Ala Leu Met Gly Gln Leu Ala Ser Thr Ser Thr Ser Phe Ser Leu Met
        180                 185                 190CAA TAC TCA AAC ATC CTG AAG ACT CAT TTT ACC TTC ACG GAA TTC AAG         624Gln Tyr Ser Asn Ile Leu Lys Thr His Phe Thr Phe Thr Glu Phe Lys
    195                 200                 205AGC AGC CTG AGC CCT CAG AGC CTG GTG GAT GCC ATC GTC CAG CTC CAA         672Ser Ser Leu Ser Pro Gln Ser Leu Val Asp Ala Ile Val Gln Leu Gln
210                 215                 220GGC CTG ACG TAC ACA GCC TCG GGC ATC CAG AAA GTG GTG AAA GAG CTA         720Gly Leu Thr Tyr Thr Ala Ser Gly Ile Gln Lys Val Val Lys Glu Leu225                 230                 235                 240TTT CAT AGC AAG AAT GGG GCC CGA AAA AGT GCC AAG AAG ATA CTA ATT         768Phe His Ser Lys Asn Gly Ala Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile
            245                 250                 255GTC ATC ACA GAT GGG CAG AAA TTC AGA GAC CCC CTG GAG TAT AGA CAT         816Val Ile Thr Asp Gly Gln Lys Phe Arg Asp Pro Leu Glu Tyr Arg His
        260                 265                 270GTC ATC CCT GAA GCA GAG AAA GCT GGG ATC ATT CGC TAT GCT ATA GGG         864Val Ile Pro Glu Ala Glu Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly
    275                 280                 285GTG GGA GAT GCC TTC CGG GAA CCC ACT GCC CTA CAG GAG CTG AAC ACC         912Val Gly Asp Ala Phe Arg Glu Pro Thr Ala Leu Gln Glu Leu Asn Thr
290                 295                 300ATT GGC TCA GCT CCC TCG CAG GAC CAC GTG TTC AAG GTG GGC AAT TTT         960Ile Gly Ser Ala Pro Ser Gln Asp His Val Phe Lys Val Gly Asn Phe305                 310                 315                 320GTA GCA CTT CGC AGC ATC CAG CGG CAA ATT CAG GAG AAA ATC TTT GCC        1008Val Ala Leu Arg Ser Ile Gln Arg Gln Ile Gln Glu Lys Ile Phe Ala
            325                 330                 335ATT GAA GGA ACC GAA TCA AGG TCA AGT AGT TCC TTT CAG CAC GAG ATG        1056Ile Glu Gly Thr Glu Ser Arg Ser Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met
        340                 345                 350TCA CAA GAA GGT TTC AGC TCA GCT CTC TCA ATG GAT GGA CCA GTT CTG        1104Ser Gln Glu Gly Phe Ser Ser Ala Leu Ser Met Asp Gly Pro Val Leu
    355                 360                 365GGG GCT GTG GGA GGC TTC AGC TGG TCT GGA GGT GCC TTC TTG TAC CCC        1152Gly Ala Val Gly Gly Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro
370                 375                 380TCA AAT ATG AGA TCC ACC TTC ATC AAC ATG TCT CAG GAG AAC GAG GAT        1200Ser Asn Met Arg Ser Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Glu Asp385                 390                 395                 400ATG AGG GAC GCT TAC CTG GGT TAC TCC ACC GCA CTG GCC TTT TGG AAG         1248Met Arg Asp Ala Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Ala Leu Ala Phe Trp Lys
            405                 410                 415GGG GTC CAC AGC CTG ATC CTG GGG GCC CCT CGC CAC CAG CAC ACG GGG         1296Gly Val His Ser Leu Ile Leu Gly Ala Pro Arg His Gln His Thr Gly
        420                 425                 430AAG GTT GTC ATC TTT ACC CAG GAA TCC AGG CAC TGG AGG CCC AAG TCT         1344Lys Val Val Ile Phe Thr Gln Glu Ser Arg His Trp Arg Pro Lys Ser
    435                 440                 445GAA GTC AGA GGG ACA CAG ATC GGC TCC TAC TTT GGG GCA TCT CTC TGT         1392Glu Val Arg Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys
450                 455                 460TCT GTG GAC ATG GAT AGA GAT GGC AGC ACT GAC CTG GTC CTG ATT GGA         1440Ser Val Asp Met Asp Arg Asp Gly Ser Thr Asp Leu Val Leu Ile Gly465                 470                 475                 480GTC CCC CAT TAC TAT GAG CAC ACC CGA GGG GGG CAG GTG TCG GTG TGC         1488Val Pro His Tyr Tyr Glu His Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys
            485                 490                 495CCC ATG CCT GGT GTG AGG AGC AGG TGG CAT TGT GGG ACC ACC CTC CAT         1536Pro Met Pro Gly Val Arg Ser Arg Trp His Cys Gly Thr Thr Leu His
        500                 505                 510GGG GAG CAG GGC CAT CCT TGG GGC CGC TTT GGG GCG GCT CTG ACA GTG         1584Gly Glu Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val
    515                 520                 525CTA GGG GAC GTG AAT GGG GAC AGT CTG GCG GAT GTG GCT ATT GGT GCA         1632Leu Gly Asp Val Asn Gly Asp Ser Leu Ala Asp Val Ala Ile Gly Ala
530                 535                 540CCC GGA GAG GAG GAG AAC AGA GGT GCT GTC TAC ATA TTT CAT GGA GCC         1680Pro Gly Glu Glu Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Ile Phe His Gly Ala545                 550                 555                 560TCG AGA CAG GAC ATC GCT CCC TCG CCT AGC CAG CGG GTC ACT GGC TCC         1728Ser Arg Gln Asp Ile Ala Pro Ser Pro Ser Gln Arg Val Thr Gly Ser
            565                 570                 575CAG CTC TTC CTG AGG CTC CAA TAT TTT GGG CAG TCA TTA AGT GGG GGT         1776Gln Leu Phe Leu Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ser Leu Ser Gly Gly
        580                 585                 590CAG GAC CTT ACA CAG GAT GGC CTG GTG GAC CTG GCC GTG GGA GCC CAG         1824Gln Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp Leu Ala Val Gly Ala Gln
    595                 600                 605GGG CAC GTG CTG CTG CTT AGG AGT CTG CCT TTG CTG AAA GTG GGG ATC         1872Gly His Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Leu Leu Lys Val Gly Ile
610                 615                 620TCC ATT AGA TTT GCC CCC TCA GAG GTG GCA AAG ACT GTG TAC CAG TGC         1920Ser Ile Arg Phe Ala Pro Ser Glu Val Ala Lys Thr Val Tyr Gln Cys625                 630                 635             640TGG GGA AGG ACT CCC ACT GTC CTC GAA GCT GGA GAG GCC ACC GTC TGT         1968Trp Gly Arg Thr Pro Thr Val Leu Glu Ala Gly Glu Ala Thr Val Cys
            645                 650             655CTC ACT GTC CGC AAA GGT TCA CCT GAC CTG TTA GGT GAT GTC CAA AGC        2016Leu Thr Val Arg Lys Gly Ser Pro Asp Leu Leu Gly Asp Val Gln Ser
        660                 665                 670TCT GTC AGG TAT GAT CTG GCG TTG GAT CCG GGC CGT CTG ATT TCT CGT        2064Ser Val Arg Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Ile Ser Arg
    675                 680                 685GCC ATT TTT GAT GAG ACG AAG AAC TGC ACT TTG ACC CGA AGG AAG ACT        2112Ala Ile Phe Asp Glu Thr Lys Asn Cys Thr Leu Thr Arg Arg Lys Thr
690                 695                 700CTG GGG CTT GGT GAT CAC TGC GAA ACA ATG AAG CTG CTT TTG CCA GAC        2160Leu Gly Leu Gly Asp His Cys Glu Thr Met Lys Leu Leu Leu Pro Asp705                 710                 715                 720TGT GTG GAG GAT GCA GTG ACC CCT ATC ATC CTG CGC CTT AAC TTA TCC        2208Cys Val Glu Asp Ala Val Thr Pro Ile Ile Leu Arg Leu Asn Leu Ser
            725                 730                 735CTG GCA GGG GAC TCT GCT CCA TCC AGG AAC CTT CGT CCT GTG CTG GCT        2256Leu Ala Gly Asp Ser Ala Pro Ser Arg Asn Leu Arg Pro Val Leu Ala
        740                 745                 750GTG GGC TCA CAA GAC CAT GTA ACA GCT TCT TTC CCG TTT GAG AAG AAC        2304Val Gly Ser Gln Asp His Val Thr Ala Ser Phe Pro Phe Glu Lys Asn
    755                 760                 765TGT AAG CAG GAG CTC CTG TGT GAG GGG AAC CTG GGC GTC AGC TTC AAC        2352Cys Lys Gln Glu Leu Leu Cys Glu Gly Asn Leu Gly Val Ser Phe Asn
770                 775                 780TTC TCA GGC CTG CAG GTC TTG GAG GTA GGA AGC TCC CCA GAG CTC ACT        2400Phe Ser Gly Leu Gln Val Leu Glu Val Gly Ser Ser Pro Glu Leu Thr785                 790                 795                 800GTG ACA GTA ACA GTT TGG AAT GAG GGT GAG GAC AGC TAT GGA ACC TTA        2448Val Thr Val Thr Val Trp Asn Glu Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Leu
            805                 810                 815ATC AAG TTC TAC TAC CCA GCA GAG CTA TCT TAC CGA CGG GTG ACA AGA        2496Ile Lys Phe Tyr Tyr Pro Ala Glu Leu Ser Tyr Arg Arg Val Thr Arg
        820                 825                 830GCC CAG CAA CCT CAT CCG TAC CCA CTA CGC CTG GCA TGT GAG GCT GAG        2544Ala Gln Gln Pro His Pro Tyr Pro Leu Arg Leu Ala Cys Glu Ala Glu
    835                 840                 845CCC ACG GGC CAG GAG AGC CTG AGG AGC AGC AGC TGT AGC ATC AAT CAC        2592Pro Thr Gly Gln Glu Ser Leu Arg Ser Ser Ser Cys Ser Ile Asn His
850                 855                 860CCC ATC TTC CGA GAA GGT GCC AAG GCC ACC TTC ATG ATC ACA TTT GAT        2640Pro Ile Phe Arg Glu Gly Ala Lys Ala Thr Phe Met Ile Thr Phe Asp865                 870                 875                 880GTC TCC TAC AAG GCC TTC CTG GGA GAC AGG TTG CTT CTG AGG GCC AGC        2688Val Ser Tyr Lys Ala Phe Leu Gly Asp Arg Leu Leu Leu Arg Ala Ser
            885                 890                 895GCA AGC AGT GAG AAT AAT AAG CCT GAA ACC AGC AAG ACT GCC TTC CAG        2736Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Pro Glu Thr Ser Lys Thr Ala Phe Gln
        900                 905                 910CTG GAG CTT CCG GTG AAG TAC ACG GTC TAT ACC GTG ATC AGT AGG CAG        2784Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Thr Val Tyr Thr Val Ile Ser Arg Gln
    915                 920                 925GAA GAT TCT ACC AAG CAT TTC AAC TTC TCA TCT TCC CAC GGG GAG AGA        2832Glu Asp Ser Thr Lys His Phe Asn Phe Ser Ser Ser His Gly Glu Arg
930                 935                 940CAG AAA GAG GCC GAA CAT CGA TAT CGT GTG AAT AAC CTG AGT CCA TTG        2880Gln Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Pro Leu945                 950                 955                 960ACG CTG GCC ATC AGC GTT AAC TTC TGG GTC CCC ATC CTT CTG AAT GGT        2928Thr Leu Ala Ile Ser Val Asn Phe Trp Val Pro Ile Leu Leu Asn Gly
            965                 970                 975GTG GCC GTG TGG GAT GTG ACT CTG AGG AGC CCA GCA CAG GGT GTC TCC        2976Val Ala Val Trp Asp Val Thr Leu Arg Ser Pro Ala Gln Gly Val Ser
        980                 985                 990TGT GTG TCA CAG AGG GAA CCT CCT CAA CAT TCC GAC CTT CTG ACC CAG        3024Cys Val Ser Gln Arg Glu Pro Pro Gln His Ser Asp Leu Leu Thr Gln
    995                 1000                1005ATC CAA GGA CGC TCT GTG CTG GAC TGC GCC ATC GCC GAC TGC CTG CAC        3072Ile Gln Gly Arg Ser Val Leu Asp Cys Ala Ile Ala Asp Cys Leu His
1010                1015                1020CTC CGC TGT GAC ATC CCC TCC TTG GGC ACC CTG GAT GAG CTT GAC TTC        3120Leu Arg Cys Asp Ile Pro Ser Leu Gly Thr Leu Asp Glu Leu Asp Phe1025                1030                1035                1040ATT CTG AAG GGC AAC CTC AGC TTC GGC TGG ATC AGT CAG ACA TTG CAG        3168Ile Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Ile Ser Gln Thr Leu Gln
            1045                1050                1055AAA AAG GTG TTG CTC CTG AGT GAG GCT GAA ATC ACA TTC AAC ACA TCT        3216Lys Lys Val Leu Leu Leu Ser Glu Ala Glu Ile Thr Phe Asn Thr Ser
        1060                1065                1070GTG TAT TCC CAG CTG CCG GGA CAG GAG GCA TTT CTG AGA GCC CAG GTG        3264Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe Leu Arg Ala Gln Val
    1075                1080                1085TCA ACG ATG CTA GAA GAA TAC GTG GTC TAT GAG CCC GTC TTC CTC ATG        3312Ser Thr Met Leu Glu Glu Tyr Val Val Tyr Glu Pro Val Phe Leu Met
1090                1095                1100GTG TTC AGC TCA GTG GGA GGT CTG CTG TTA CTG GCT CTC ATC ACT GTG        3360Val Phe Ser Ser Val Gly Gly Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Val1105                1110                1115                1120GCG CTG TAC AAG CTT GGC TTC TTC AAA CGT CAG TAT AAA GAG ATG CTG        3408Ala Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg Gln Tyr Lys Glu Met Leu
            1125                1130                1135GAT CTA CCA TCT GCA GAT CCT GAC CCA GCC GGC CAG GCA GAT TCC AAC        3456Asp Leu Pro Ser Ala Asp Pro Asp Pro Ala Gly Gln Ala Asp Ser Asn
        1140                1145                1150CAT GAG ACT CCT CCACAT CTC ACG TCC TAGGAATCTA CTTTCCTGTA               3503His Glu Thr Pro Pro His Leu Thr Ser
    1155                1160TATCTCCACA ATTACGAGAT TGGTTTTGCT TTTGCCTATG AATCTACTGG CATGGGAACA  3563AGTTCTCTTC AGCTCTGGGC TAGCCTGGGA AACTTCCCAG AAATGATGCC CTACCTCCTG  3623AGCTGGGAGA TTTTTATGGT TTGCCCATGT GTCAGATTTC AGTGCTGATC CACTTTTTTT  3683GCAAGAGCAG GAATGGGGTC AGCATAAATT TACATATGGA TAAGAACTAA CACAAGACTG  3743AGTAATATGC TCAATATTCA ATGTATTGCT TGTATAAATT TTTAAAAAAT AAAATGAAAN  3803(2)SEQ ID NO：53信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：1161个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)SEQ ID NO：53序列描述：
Met Val Arg Gly Val Val Ile Leu Leu Cys Gly Trp Ala Leu Ala Ser
  1               5                  10                  15
Cys His Gly Ser Asn Leu Asp Val Glu Lys Pro Val Val Phe Lys Glu
             20                  25                  30
Asp Ala Ala Ser Phe Gly Gln Thr Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg
         35                  40                  45
Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Glu Ala Val Ala Val Asn Gln Thr Gly
     50                  55                  60
Gln Ser Ser Asp Cys Pro Pro Ala Thr Gly Val Cys Gln Pro Ile Leu
 65                  70                  75                  80
Leu His Ile Pro Leu Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu
                 85                  90                  95
Val Ala Asp Thr Asn Asn Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Ala
            100                 105                 110
Gln Arg Ala Cys Ala Lys Asn Met Tyr Ala Lys Gly Ser Cys Leu Leu
        115                 120                 125
Leu Gly Ser Ser Leu Gln Phe Ile Gln Ala Ile Pro Ala Thr Met Pro
    130                 135                 140
Glu Cys Pro Gly Gln Glu Met Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ser Ile Asp Gln Ser Asp Phe Thr Gln Met Lys Asp Phe Val Lys
                165                 170                 175
Ala Leu Met Gly Gln Leu Ala Ser Thr Ser Thr Ser Phe Ser Leu Met
            180                 185                 190
Gln Tyr Ser Asn Ile Leu Lys Thr His Phe Thr Phe Thr Glu Phe Lys
        195                 200                 205
Ser Ser Leu Ser Pro Gln Ser Leu Val Asp Ala Ile Val Gln Leu Gln
    210                 215                 220
Gly Leu Thr Tyr Thr Ala Sar Gly Ile Gln Lys Val Val Lys Glu Leu
225                 230                 235                 240Phe His Ser Lys Asn Gly Ala Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile
            245                 250                 255Val Ile Thr Asp Gly Gln Lys Phe Arg Asp Pro Leu Glu Tyr Arg His
        260                 265                 270Val Ile Pro Glu Ala Glu Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly
    275                 280                 285Val Gly Asp Ala Phe Arg Glu Pro Thr Ala Leu Gln Glu Leu Asn Thr
290                 295                 300Ile Gly Ser Ala Pro Ser Gln Asp His Val Phe Lys Val Gly Asn Phe305                 310                 315                 320Val Ala Leu Arg Ser Ile Gln Arg Gln Ile Gln Glu Lys Ile Phe Ala
            325                 330                 335Ile Glu Gly Thr Glu Ser Arg Ser Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met
        340                 345                 350Ser Gln Glu Gly Phe Ser Ser Ala Leu Ser Met Asp Gly Pro Val Leu
    355                 360                 365Gly Ala Val Gly Gly Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro
370                 375                 380Ser Asn Met Arg Ser Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Glu Asp385                 390                 395                 400Met Arg Asp Ala Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Ala Leu Ala Phe Trp Lys
            405                 410                 415Gly Val His Ser Leu Ile Leu Gly Ala Pro Arg His Gln His Thr Gly
        420                 425                 430Lys Val Val Ile Phe Thr Gln Glu Ser Arg His Trp Arg Pro Lys Ser
    435                 440                 445Glu Val Arg Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys
450                 455                 460Ser Val Asp Met Asp Arg Asp Gly Ser Thr Asp Leu Val Leu Ile Gly465                 470                 475                 480Val Pro His Tyr Tyr Glu His Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys
            485                 490                 495Pro Met Pro Gly Val Arg Ser Arg Trp His Cys Gly Thr Thr Leu His
        500                 505                 510Gly Glu Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val
    515                 520                 525Leu Gly Asp Val Asn Gly Asp Ser Leu Ala Asp Val Ala Ile Gly Ala
530                 535                 540Pro Gly Glu Glu Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Ile Phe His Gly Ala545                 550                 555                 560Ser Arg Gln Asp Ile Ala Pro Ser Pro Ser Gln Arg Val Thr Gly Ser
            565                 570                 575Gln Leu Phe Leu Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ser Leu Ser Gly Gly
        580                 585                 590Gln Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp Leu Ala Val Gly Ala Gln
    595                 600                 605Gly His Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Leu Leu Lys Val Gly Ile
610                 615                 620Ser Ile Arg Phe Ala Pro Ser Glu Val Ala Lys Thr Val Tyr Gln Cys625                 630                 635                 640Trp Gly Arg Thr Pro Thr Val Leu Glu Ala Gly Glu Ala Thr Val Cys
            645                 650                 655Leu Thr Val Arg Lys Gly Ser Pro Asp Leu Leu Gly Asp Val Gln Ser
        660                 665                 670Ser Val Arg Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Ile Ser Arg
    675                 680                 685Ala Ile Phe Asp Glu Thr Lys Asn Cys Thr Leu Thr Arg Arg Lys Thr
690                 695                 700Leu Gly Leu Gly Asp His Cys Glu Thr Met Lys Leu Leu Leu Pro Asp705                 710                 715                 720Cys Val Glu Asp Ala Val Thr Pro Ile Iie Leu Arg Leu Asn Leu Ser
            725                 730                 735Leu Ala Gly Asp Ser Ala Pro Ser Arg Asn Leu Arg Pro Val Leu Ala
        740                 745                 750Val Gly Ser Gln Asp His Val Thr Ala Ser Phe Pro Phe Glu Lys Asn
    755                 760                 765Cys Lys Gln Glu Leu Leu Cys Glu Gly Asn Leu Gly Val Ser Phe Asn
770                 775                 780Phe Ser Gly Leu Gln Val Leu Glu Val Gly Ser Ser Pro Glu Leu Thr785                 790                 795                 800Val Thr Val Thr Val Trp Asn Glu Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Leu
            805                 810                 815Ile Lys Phe Tyr Tyr Pro Ala Glu Leu Ser Tyr Arg Arg Val Thr Arg
        820                 825                 830Ala Gln Gln Pro His Pro Tyr Pro Leu Arg Leu Ala Cys Glu Ala Glu
    835                 840                 845Pro Thr Gly Gln Glu Ser Leu Arg Ser ser Ser Cys Ser Ile Asn His
850                 855                 860Pro Ile Phe Arg Glu Gly Ala Lys Ala Thr Phe Met Ile Thr Phe Asp865                 870                 875                 880
Val Ser Tyr Lys Ala Phe Leu Gly Asp Arg Leu Leu Leu Arg Ala Ser
                885                 890                 895
Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Pro Glu Thr Ser Lys Thr Ala Phe Gln
            900                 905                 910
Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Thr Val Tyr Thr Val Ile Ser Arg Gln
        915                 920                 925
Glu Asp Ser Thr Lys His Phe Asn Phe Ser Ser Ser His Gly Glu Arg
    930                 935                 940
Gln Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Pro Leu
945                 950                 955                 960
Thr Leu Ala Ile Ser Val Asn Phe Trp Val Pro Ile Leu Leu Asn Gly
                965                 970                 975
Val Ala Val Trp Asp Val Thr Leu Arg Ser Pro Ala Gln Gly Val Ser
            980                 985                 990
Cys Val Ser Gln Arg Glu Pro Pro Gln His Ser Asp Leu Leu Thr Gln
        995                 1000                1005
Ile Gln Gly Arg Ser Val Leu Asp Cys Ala Ile Ala Asp Cys Leu His
    1010                1015                1020
Leu Arg Cys Asp Ile Pro Ser Leu Gly Thr Leu Asp Glu Leu Asp Phe
1025                1030                1035                1040
Ile Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Ile Ser Gln Thr Leu Gln
                1045                1050                1055
Lys Lys Val Leu Leu Leu Ser Glu Ala Glu Ile Thr Phe Asn Thr Ser
            1060                1065                1070
Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe Leu Arg Ala Gln Val
        1075                1080                1085
Ser Thr Met Leu Glu Glu Tyr Val Val Tyr Glu Pro Val Phe Leu Met
    1090                1095                1100
Val Phe Ser Ser Val Gly Gly Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Val
1105                1110                1115                1120
Ala Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg Gln Tyr Lys Glu Met Leu
                1125                1130                1135
Asp Leu Pro Ser Ala Asp Pro Asp Pro Ala Gly Gln Ala Asp Ser Asn
            1140                1145                1150
His Glu Thr Pro Pro His Leu Thr Ser
        1155                1160(2)SEQ ID NO：54信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：3597个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：cDNA
(ix)特征：
    (A)名称/键：CDS
    (B)位置：40..3525
(xi)SEQ ID NO：54序列描述：AGCTTTACAG CTCTCTACTT CTCAGTGCAC TGCTCAGTG ATG GCC GGT GGA GTT           54
                                       Met Ala Gly Gly Val
                                         1              5GTG ATC CTC CTG TGT GGC TGG GTC CTG GCT TCC TGT CAT GGG TCT AAC         102Val Ile Leu Leu Cys Gly Trp Val Leu Ala Ser Cys His Gly Ser Asn
             10                  15                  20CTG GAT GTG GAG GAA CCC ATC GTG TTC AGA GAG GAT GCA GCC AGC TTT         150Leu Asp Val Glu Glu Pro Ile Val Phe Arg Glu Asp Ala Ala Ser Phe
         25                  30                  35GGA CAG ACT GTG GTG CAG TTT GGT GGA TCT CGA CTC GTG GTG GGA GCC         198Gly Gln Thr Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val Val Gly Ala
     40                  45                  50CCT CTG GAG GCG GTG GCA GTC AAC CAA ACA GGA CGG TTG TAT GAC TGT         246Pro Leu Glu Ala Val Ala Val Asn Gln Thr Gly Arg Leu Tyr Asp Cys
 55                  60                  65GCA CCT GCC ACT GGC ATG TGC CAG CCC ATC GTA CTG CGC AGT CCC CTA         294Ala Pro Ala Thr Gly Met Cys Gln Pro Ile Val Leu Arg Ser Pro Leu70                 75                   80                  85GAG GCA GTG AAC ATG TCC CTG GGC CTG TCT CTG GTG ACT GCC ACC AAT         342Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu Val Thr Ala Thr Asn
             90                  95                 100AAC GCC CAG TTG CTG GCT TGT GGT CCA ACT GCA CAG AGA GCT TGT GTG         390Asn Ala Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Ala Gln Arg Ala Cys Val
        105                 110                 115AAG AAC ATG TAT GCG AAA GGT TCC TGC CTC CTT CTC GGC TCC AGC TTG         438Lys Asn Met Tyr Ala Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly Ser Ser Leu
    120                 125                 130CAG TTC ATC CAG GCA GTC CCT GCC TCC ATG CCA GAG TGT CCA AGA CAA         486Gln Phe Ile Gln Ala Val Pro Ala Ser Met Pro Glu Cys Pro Arg Gln
135                 140                 145GAG ATG GAC ATT GCT TTC CTG ATT GAT GGT TCT GGC AGC ATT AAC CAA         534Glu Met Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser Ile Asn Gln150                 155                 160                 165AGG GAC TTT GCC CAG ATG AAG GAC TTT GTC AAA GCT TTG ATG GGA GAG         582Arg Asp Phe Ala Gln Met Lys Asp Phe Val Lys Ala Leu Met Gly Glu
            170                 175                 180TTT GCG AGC ACC AGC ACC TTG TTC TCC CTG ATG CAA TAC TCG AAC ATC         630Phe Ala Ser Thr Ser Thr Leu Phe Ser Leu Met Gln Tyr Ser Asn Ile
        185                 190                 195CTG AAG ACC CAT TTT ACC TTC ACT GAA TTC AAG AAC ATC CTG GAC CCT         678Leu Lys Thr His Phe Thr Phe Thr Glu Phe Lys Asn Ile Leu Asp Pro
    200                 205                 210CAG AGC CTG GTG GAT CCC ATT GTC CAG CTG CAA GGC CTG ACC TAC ACA         726Gln Ser Leu Val Asp Pro Ile Val Gln Leu Gln Gly Leu Thr Tyr Thr
215             220                     225GCC ACA GGC ATC CGG ACA GTG ATG GAA GAG CTA TTT CAT AGC AAG AAT         774Ala Thr Gly Ile Arg Thr Val Met Glu Glu Leu Phe His Ser Lys Asn230             235                     240                 245GGG TCC CGT AAA AGT GCC AAG AAG ATC CTC CTT GTC ATC ACA GAT GGG         822Gly Ser Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Leu Val Ile Thr Asp Gly
        250                     255                 260CAG AAA TAC AGA GAC CCC CTG GAG TAT AGT GAT GTC ATT CCC GCC GCA         870Gln Lys Tyr Arg Asp Pro Leu Glu Tyr Ser Asp Val Ile Pro Ala Ala
    265                     270                 275GAC AAA GCT GGC ATC ATT CGT TAT GCT ATT GGG GTG GGA GAT GCC TTC         918Asp Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly Asp Ala Phe
280                     285                 290CAG GAG CCC ACT GCC CTG AAG GAG CTG AAC ACC ATT GGC TCA GCT CCC         966Gln Glu Pro Thr Ala Leu Lys Glu Leu Asn Thr Ile Gly Ser Ala Pro295                     300                 305CCA CAG GAC CAC GTG TTC AAG GTA GGC AAC TTT GCA GCA CTT CGC AGC        1014Pro Gln Asp His Val Phe Lys Val Gly Asn Phe Ala Ala Leu Arg Ser310                 315                 320                 325ATC CAG AGG CAA CTT CAG GAG AAA ATC TTC GCC ATT GAG GGA ACT CAA        1062Ile Gln Arg Gln Leu Gln Glu Lys Ile Phe Ala Ile Glu Gly Thr Gln
            330                 335                 340TCA AGG TCA AGT AGT TCC TTT CAG CAC GAG ATG TCA CAA GAA GGT TTC        1110Ser Arg Ser Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln Glu Gly Phe
        345                 350                 355AGT TCA GCT CTC ACA TCG GAT GGA CCC GTT CTG GGG GCC GTG GGA AGC        1158Ser Ser Ala Leu Thr Ser Asp Gly Pro Val Leu Gly Ala Val Gly Ser
    360                 365                 370TTC AGC TGG TCC GGA GGT GCC TTC TTA TAT CCC CCA AAT ACG AGA CCC        1206Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro Asn Thr Arg Pro
375                 380                 385ACC TTT ATC AAC ATG TCT CAG GAG AAT GTG GAC ATG AGA GAC TCC TAC        1254Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Val Asp Met Arg Asp Ser Tyr390                 395                 400                 405CTG GGT TAC TCC ACC GCA GTG GCC TTT TGG AAG GGG GTT CAC AGC CTG        1302Leu Gly Tyr Ser Thr Ala Val Ala Phe Trp Lys Gly Val His Ser Leu
            410                 415                 420ATC CTG GGG GCC CCG CGT CAC CAG CAC ACG GGG AAG GTT GTC ATC TTT        1350Ile Leu Gly Ala Pro Arg His Gln His Thr Gly Lys Val Val Ile Phe
        425                 430                 435ACC CAG GAA GCC AGG CAT TGG AGG CCC AAG TCT GAA GTC AGA GGG ACA        1398Thr Gln Glu Ala Arg His Trp Arg Pro Lys Ser Glu Val Arg Gly Thr
    440                 445                 450CAG ATC GGC TCC TAC TTC GGG GCC TCT CTC TGT TCT GTG GAC GTG GAT        1446Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val Asp Val Asp
455                 460                 465AGA GAT GGC AGC ACY GAC CTG GTC CTG ATC GGA GCC CCC CAT TAC TAT        1494Arg Asp Gly Ser Xaa Asp Leu Val Leu Ile Gly Ala Pro His Tyr Tyr470                 475                 430                 485GAG CAG ACC CGA GGG GGG CAG GTC TCA GTG TTC CCC GTG CCC GGT GTG        1542Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Phe Pro Val Pro Gly Val
            490                 495                 500AGG GGC AGG TGG CAG TGT GAG GCC ACC CTC CAC GGG GAG CAG GGC CAT        1590Arg Gly Arg Trp Gln Cys Glu Ala Thr Leu His Gly Glu Gln Gly His
        505                 510                 515CCT TGG GGC CGC TTT GGG GTG GCT CTG ACA GTG CTG GGG GAC GTA AAC        1638Pro Trp Gly Arg Phe Gly Val Ala Leu Thr Val Leu Gly Asp Val Asn
    520                 525                 530GGG GAC AAT CTG GCA GAC GTG GCT ATT GGT GCC CCT GGA GAG GAG GAG        1686Gly Asp Asn Leu Ala Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro Gly Glu Glu Glu
535                 540                 545AGC AGA GGT GCT GTC TAC ATA TTT CAT GGA GCC TCG AGA CTG GAG ATC        1734Ser Arg Gly Ala Val Tyr Ile Phe His Gly Ala Ser Arg Leu Glu Ile550                 555                 560                 565ATG CCC TCA CCC AGC CAG CGG GTC ACT GGC TCC CAG CTC TCC CTG AGA        1782Met Pro Ser Pro Ser Gln Arg Val Thr Gly Ser Gln Leu Ser Leu Arg
            570                 575                 580CTG CAG TAT TTT GGG CAG TCA TTG AGT GGG GGT CAG GAC CTT ACA CAG        1830Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ser Leu Ser Gly Gly Gln Asp Leu Thr Gln
        585                 590                 595GAT GGC CTG GTG GAC CTG GCC GTG GGA GCC CAG GGG CAC GTA CTG CTG        1878Asp Gly Leu Val Asp Leu Ala Val Gly Ala Gln Gly His Val Leu Leu
    600                 605                 610CTC AGG AGT CTG CCT CTG CTG AAA GTG GAG CTC TCC ATA AGA TTC GCC        1926Leu Arg Ser Leu Pro Leu Leu Lys Val Glu Leu Ser Ile Arg Phe Ala
615                 620                 625CCC ATG GAG GTG GCA AAG GCT GTG TAC CAG TGC TGG GAA AGG ACT CCC        1974Pro Met Glu Val Ala Lys Ala Val Tyr Gln Cys Trp Glu Arg Thr Pro630                 635                 640                 645ACT GTC CTC GAA GCT GGA GAG GCC ACT GTC TGT CTC ACT GTC CAC AAA        2022Thr Val Leu Glu Ala Gly Glu Ala Thr Val Cys Leu Thr Val His Lys
            650                 655                 660GGC TCA CCT GAC CTG TTA GGT AAT GTC CAA GGC TCT GTC AGG TAT GAT        2070Gly Ser Pro Asp Leu Leu Gly Asn Val Gln Gly Ser Val Arg Tyr Asp
        665                 670                 675CTG GCG TTA GAT CCG GGC CGC CTG ATT TCT CGT GCC ATT TTT GAT GAG         2118Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Ile Ser Arg Ala Ile Phe Asp Glu
    680                 685                 690ACT AAG AAC TGC ACT TTG ACG GGA AGG AAG ACT CTG GGG CTT GGT GAT         2166Thr Lys Asn Cys Thr Leu Thr Gly Arg Lys Thr Leu Gly Leu Gly Asp
695                 700                 705CAC TGC GAA ACA GTG AAG CTG CTT TTG CCG GAC TGT GTG GAA GAT GCA         2214His Cys Glu Thr Val Lys Leu Leu Leu Pro Asp Cys Val Glu Asp Ala710                 715                 720                 725GTG AGC CCT ATC ATC CTG CGC CTC AAC TTT TCC CTG GTG AGA GAC TCT         2262Val Ser Pro Ile Ile Leu Arg Leu Asn Phe Ser Leu Val Arg Asp Ser
            730                 735                 740GCT TCA CCC AGG AAC CTG CAT CCT GTG CTG GCT GTG GGC TCA CAA GAC         2310Ala Ser Pro Arg Asn Leu His Pro Val Leu Ala Val Gly Ser Gln Asp
        745                 750                 755CAC ATA ACT GCT TCT CTG CCG TTT GAG AAG AAC TGT AAG CAA GAA CTC         2358His Ile Thr Ala Ser Leu Pro Phe Glu Lys Asn Cys Lys Gln Glu Leu
    760                 765                 770CTG TGT GAG GGG GAC CTG GGC ATC AGC TTT AAC TTC TCA GGC CTG CAG         2406Leu Cys Glu Gly Asp Leu Gly Ile Ser Phe Asn Phe Ser Gly Leu Gln
775                 780                 785GTC TTG GTG GTG GGA GGC TCC CCA GAG CTC ACT GTG ACA GTC ACT GTG         2454Val Leu Val Val Gly Gly Ser Pro Glu Leu Thr Val Thr Val Thr Val790                 795                 800                 805TGG AAT GAG GGT GAG GAC AGC TAT GGA ACT TTA GTC AAG TTC TAC TAC         2502Trp Asn Glu Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Leu Val Lys Phe Tyr Tyr
            810                 815                 820CCA GCA GGG CTA TCT TAC CGA CGG GTA ACA GGG ACT CAG CAA CCT CAT         2550Pro Ala Gly Leu Ser Tyr Arg Arg Val Thr Gly Thr Gln Gln Pro His
        825                 830                 835CAG TAC CCA CTA CGC TTG GCC TGT GAG GCT GAG CCC GCT GCC CAG GAG         2598Gln Tyr Pro Leu Arg Leu Ala Cys Glu Ala Glu Pro Ala Ala Gln Glu
    840                 845                 850GAC CTG AGG AGC AGC AGC TGT AGC ATT AAT CAC CCC ATC TTC CGA GAA         2646Asp Leu Arg Ser Ser Ser Cys Ser Ile Asn His Pro Ile Phe Arg Glu
855                 860                 865GGT GCA AAG ACC ACC TTC ATG ATC ACA TTC GAT GTC TCC TAC AAG GCC         2694Gly Ala Lys Thr Thr Phe Met Ile Thr Phe Asp Val Ser Tyr Lys Ala870                 875                 880                 885TTC CTA GGA GAC AGG TTG CTT CTG AGG GCC AAA GCC AGC AGT GAG AAT         2742Phe Leu Gly Asp Arg Leu Leu Leu Arg Ala Lys Ala Ser Ser Glu Asn
            890                 895                 900AAT AAG CCT GAT ACC AAC AAG ACT GCC TTC CAG CTG GAG CTC CCA GTG         2790Asn Lys Pro Asp Thr Asn Lys Thr Ala Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val
        905                 910                 915AAG TAC ACC GTC TAT ACC CTG ATC AGT AGG CAA GAA GAT TCC ACC AAC        2838Lys Tyr Thr Val Tyr Thr Leu Ile Ser Arg Gln Glu Asp Ser Thr Asn
    920                 925                 930CAT GTC AAC TTT TCA TCT TCC CAC GGG GGG AGA AGG CAA GAA GCC GCA        2886His Val Asn Phe Ser Ser Ser His Gly Gly Arg Arg Gln Glu Ala Ala
935                 940                 945CAT CGC TAT CGT GTG AAT AAC CTG AGT CCA CTG AAG CTG GCC GTC AGA        2934His Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Pro Leu Lys Leu Ala Val Arg950                 955                 960                 965GTT AAC TTC TGG GTC CCT GTC CTT CTG AAC GGT GTG GCT GTG TGG GAC        2982Val Asn Phe Trp Val Pro Val Leu Leu Asn Gly Val Ala Val Trp Asp
            970                 975                 980GTG ACT CTG AGC AGC CCA GCA CAG GGT GTC TCC TGC GTG TCC CAG ATG        3030Val Thr Leu Ser Ser Pro Ala Gln Gly Val Ser Cys Val Ser Gln Met
        985                 990                 995AAA CCT CCT CAG AAT CCC GAC TTT CTG ACC CAG ATT CAG AGA CGT TCT        3078Lys Pro Pro Gln Asn Pro Asp Phe Leu Thr Gln Ile Gln Arg Arg Ser
    1000                1005                1010GTG CTG GAC TGC TCC ATT GCT GAC TGC CTG CAC TTC CGC TGT GAC ATC        3126Val Leu Asp Cys Ser Ile Ala Asp Cys Leu His Phe Arg Cys Asp Ile
1015                1020                1025CCC TCC TTG GAC ATC CAG GAT GAA CTT GAC TTC ATT CTG AGG GGC AAC        3174Pro Ser Leu Asp Ile Gln Asp Glu Leu Asp Phe Ile Leu Arg Gly Asn1030                1035                1040                1045CTC AGC TTC GGC TGG GTC AGT CAG ACA TTG CAG GAA AAG GTG TTG CTT        3222Leu Ser Phe Gly Trp Val Ser Gln Thr Leu Gln Glu Lys Val Leu Leu
            1050                1055                1060GTG AGT GAG GCT GAA ATC ACT TTC GAC ACA TCT GTG TAC TCC CAG CTG        3270Val Ser Glu Ala Glu Ile Thr Phe Asp Thr Ser Val Tyr Ser Gln Leu
        1065                1070                1075CCA GGA CAG GAG GCA TTT CTG AGA GCC CAG GTG GAG ACA ACG TTA GAA        3318Pro Gly Gln Glu Ala Phe Leu Arg Ala Gln Val Glu Thr Thr Leu Glu
    1080                1085                1090GAA TAC GTG GTC TAT GAG CCC ATC TTC CTC GTG GCG GGC AGC TCG GTG        3366Glu Tyr Val Val Tyr Glu Pro Ile Phe Leu Val Ala Gly Ser Ser Val
1095                1100                1105GGA GGT CTG CTG TTA CTG GCT CTC ATC ACA GTG GTA CTG TAC AAG CTT        3414Gly Gly Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Val Val Leu Tyr Lys Leu1110                1115                1120                1125GGC TTC TYC AAA CGT CAG TAC AAA GAA ATG CTG GAC GGC AAG GCT GCA        3462Gly Phe Xaa Lys Arg Gln Tyr Lys Glu Met Leu Asp Gly Lys Ala Ala
            1130                1135                1140GAT CCT GTC ACA GCC GGC CAG GCA GAT TTC GGC TGT GAG ACT CCT CCA        3510Asp Pro Val Thr Ala Gly Gln Ala Asp Phe Gly Cys Glu Thr Pro Pro
        1145                1150                1155  TAT CTC GTG AGC TAGGAATCCA CTCTCCTGCC TATCTCTGCA ATGAAGATTG            3562Tyr Leu Val Ser
      1160GTCCTGCCTA TGAGTCTACT GGCATGGGAA CGAGT                                 3597(2)SEQ ID NO：55信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：1161个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)SEQ ID NO：55序列描述：
Met Ala Gly Gly Val Val Ile Leu Leu Cys Gly Trp Val Leu Ala Ser
  1               5                  10                  15
Cys His Gly Ser Asn Leu Asp Val Glu Glu Pro Ile Val Phe Arg Glu
             20                  25                  30
Asp Ala Ala Ser Phe Gly Gln Thr Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg
         35                  40                  45
Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Glu Ala Val Ala Val Asn Gln Thr Gly
     50                  55                  60
Arg Leu Tyr Asp Cys Ala Pro Ala Thr Gly Met Cys Gln Pro Ile Val
 65                  70                  75                  80
Leu Arg Ser Pro Leu Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu
                 85                  90                  95
Val Thr Ala Thr Asn Asn Ala Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Ala
            100                 105                 110
Gln Arg Ala Cys Val Lys Asn Met Tyr Ala Lys Gly Ser Cys Leu Leu
        115                 120                 125
Leu Gly Ser Ser Leu Gln Phe Ile Gln Ala Val Pro Ala Ser Met Pro
    130                 135                 140
Glu Cys Pro Arg Gln Glu Met Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ser Ile Asn Gln Arg Asp Phe Ala Gln Met Lys Asp Phe Val Lys
                165                 170                 175
Ala Leu Met Gly Glu Phe Ala Ser Thr Ser Thr Leu Phe Ser Leu Met
            180                 185                 190
Gln Tyr Ser Asn Ile Leu Lys Thr His Phe Thr Phe Thr Glu Phe Lys
        195                 200                 205
Asn Ile Leu Asp Pro Gln Ser Leu Val Asp Pro Ile Val Gln Leu Gln
    210                 215                 220Gly Leu Thr Tyr Thr Ala Thr Gly Ile Arg Thr Val Met Glu Glu Leu225                 230                 235                 240Phe His Ser Lys Asn Gly Ser Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Leu
            245                 250                 255Val Ile Thr Asp Gly Gln Lys Tyr Arg Asp Pro Leu Glu Tyr Ser Asp
        260                 265                 270Val Ile Pro Ala Ala Asp Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly
    275                 280                 285Val Gly Asp Ala Phe Gln Glu Pro Thr Ala Leu Lys Glu Leu Asn Thr
290                 295                 300Ile Gly Ser Ala Pro Pro Gln Asp His Val Phe Lys Val Gly Asn Phe305                 310                 315                 320Ala Ala Leu Arg Ser Ile Gln Arg Gln Leu Gln Glu Lys Ile Phe Ala
            325                 330                 335Ile Glu Gly Thr Gln Ser Arg Ser Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met
        340                 345                 350Ser Gln Glu Gly Phe Ser Ser Ala Leu Thr Ser Asp Gly Pro Val Leu
    355                 360                 365Gly Ala Val Gly Ser Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro
370                 375                 380Pro Asn Thr Arg Pro Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Val Asp385                 390                 395                 400Met Arg Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Ala Val Ala Phe Trp Lys
            405                 410                 415Gly Val His Ser Leu Ile Leu Gly Ala Pro Arg His Gln His Thr Gly
        420                 425                 430Lys Val Val Ile Phe Thr Gln Glu Ala Arg His Trp Arg Pro Lys Ser
    435                 440                 445Glu Val Arg Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys
450                 455                 460Ser Val Asp Val Asp Arg Asp Gly Ser Xaa Asp Leu Val Leu Ile Gly465                 470                 475                 480Ala Pro His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Phe
            485                 490                 495Pro Val Pro Gly Val Arg Gly Arg Trp Gln Cys Glu Ala Thr Leu His
        500                 505                 510Gly Glu Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Val Ala Leu Thr Val
    515                 520                 525Leu Gly Asp Val Asn Gly Asp Asn Leu Ala Asp Val Ala Ile Gly Ala
530                 535                 540Pro Gly Glu Glu Glu Ser Arg Gly Ala Val Tyr Ile Phe His Gly Ala545                 550                 555                 560Ser Arg Leu Glu Ile Met Pro Ser Pro Ser Gln Arg Val Thr Gly Ser
            565                 570                 575Gln Leu Ser Leu Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ser Leu Ser Gly Gly
        580                 585                 590Gln Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp Leu Ala Val Gly Ala Gln
    595                 600                 605Gly His Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Leu Leu Lys Val Glu Leu
610                 615                 620Ser Ile Arg Phe Ala Pro Met Glu Val Ala Lys Ala Val Tyr Gln Cys625                 630                 635                 640Trp Glu Arg Thr Pro Thr Val Leu Glu Ala Gly Glu Ala Thr Val Cys
            645                 650                 655Leu Thr Val His Lys Gly Ser Pro Asp Leu Leu Gly Asn Val Gln Gly
        660                 665                 670Ser Val Arg Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Ile Ser Arg
    675                 680                 685Ala Ile Phe Asp Glu Thr Lys Asn Cys Thr Leu Thr Gly Arg Lys Thr
690                 695                 700Leu Gly Leu Gly Asp His Cys Glu Thr Val Lys Leu Leu Leu Pro Asp705                 710                 715                 720Cys Val Glu Asp Ala Val Ser Pro Ile Ile Leu Arg Leu Asn Phe Ser
            725                 730                 735Leu Val Arg Asp Ser Ala Ser Pro Arg Asn Leu His Pro Val Leu Ala
        740                 745                 750Val Gly Ser Gln Asp His Ile Thr Ala Ser Leu Pro Phe Glu Lys Asn
    755                 760                 765Cys Lys Gln Glu Leu Leu Cys Glu Gly Asp Leu Gly Ile Ser Phe Asn
770                 775                 780Phe Ser Gly Leu Gln Val Leu Val Val Gly Gly Ser Pro Glu Leu Thr785                 790                 795                 800Val Thr Val Thr Val Trp Asn Glu Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Leu
            805                 810                 815Val Lys Phe Tyr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser Tyr Arg Arg Val Thr Gly
        820                 825                 830Thr Gln Gln Pro His Gln Tyr Pro Leu Arg Leu Ala Cys Glu A la Glu
    835                 840                 845Pro Ala Ala Gln Glu Asp Leu Arg Ser Ser Ser Cys Ser Ile Asn His
850                 855                 860Pro Ile Phe Arg Glu Gly Ala Lys Thr Thr Phe Met Ile Thr Phe Asp865                 870                 875                 880Val Ser Tyr Lys Ala Phe Leu Gly Asp Arg Leu Leu Leu Arg Ala Lys
            885                 890                 895Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Pro Asp Thr Asn Lys Thr Ala Phe Gln
        900                 905                 910Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Thr Val Tyr Thr Leu Ile Ser Arg Gln
    915                 920                 925Glu Asp Ser Thr Asn His Val Asn Phe Ser Ser Ser His Gly Gly Arg
930                 935                 940Arg Gln Glu Ala Ala His Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Pro Leu945                 950                 955                 960Lys Leu Ala Val Arg Val Asn Phe Trp Val Pro Val Leu Leu Asn Gly
            965                 970                 975Val Ala Val Trp Asp Val Thr Leu Ser Ser Pro Ala Gln Gly Val Ser
        980                 985                 990Cys Val Ser Gln Met Lys Pro Pro Gln Asn Pro Asp Phe Leu Thr Gln
    995                 1000                1005Ile Gln Arg Arg Ser Val Leu Asp Cys Ser Ile Ala Asp Cys Leu His
1010                1015                1020Phe Arg Cys Asp Ile Pro Ser Leu Asp Ile Gln Asp Glu Leu Asp Phe1025                1030                1035                1040Ile Leu Arg Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Val Ser Gln Thr Leu Gln
            1045                1050                1055Glu Lys Val Leu Leu Val SerGlu Ala Glu Ile Thr Phe Asp Thr Ser
        1060               1065                1070Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe Leu Arg Ala Gln Val
    1075                1080                1085Glu Thr Thr Leu Glu Glu Tyr Val Val Tyr Glu Pro Ile Phe Leu Val
1090                1095                1100Ala Gly Ser Ser Val Gly Gly Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Val1105                1110                1115                1120Val Leu Tyr Lys Leu Gly Xaa Xaa Lys Arg Gln Tyr Lys Glu Met Leu
            1125                1130                1135Asp Gly Lys Ala Ala Asp Pro Val Thr Xaa Gly Gln Ala Asp Phe Gly
        1140                1145                1150Cys Glu Thr Pro Pro Tyr Leu Val Ser
    1155                1160(2)SEQ ID NO：56信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：20个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
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(i)序列特征：
    (A)长度：19个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：57序列描述：AGGTTAGACC CATGACAGG                                    19(2)SEQ ID NO：58信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：20个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：58序列描述：
GGCCTTGCAG CTGGACAATG                                 20(2)SEQ ID NO：59信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：22个碱基
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    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
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(i)序列特征：
    (A)长度：21个碱基
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    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
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(i)序列特征：
    (A)长度：22个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：61序列描述：CCCAGATGAA GGACTTCGTC AA                                22(2)SEQ ID NO：62信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：20个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
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(i)序列特征：
    (A)长度：21个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
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(i)序列特征：
    (A)长度：20个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
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(i)序列特征：
    (A)长度：19个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
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(i)序列特征：
    (A)长度：21个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
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(i)序列特征：
    (A)长度：26个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
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(ii)分子类型：DNA
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(i)序列特征：
    (A)长度：21个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
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(i)序列特征：
    (A)长度：21个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：69序列描述：CCGTGATCAG TAGGCAGGAA G                                 21(2)SEQ ID NO：70信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：18个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型： DNA
(xi)SEQ ID NO：70序列描述：GTCACAGAGG GAACCTCC                                     18(2)SEQ ID NO：71信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：23个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：71序列描述：GCTCCTGAGT GAGGCTGAAA TCA                               23(2)SEQ ID NO：72信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：23个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：72序列描述：GAGATGCTGG ATCTACCATC TGC                               23(2)SEQ ID NO：73信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：22个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：73序列描述：CTGAGCTGGG AGATTTTTAT GG                                22(2)SEQ ID NO：74信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：21个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：74序列描述：GTGGATCAGC ACTGAAATCT G                                 21(2)SEQ ID NO：75信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：21个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：75序列描述：CGTTTGAAGA AGCCAAGCTT G                                 21(2)SEQ ID NO：76信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：20个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：76序列描述：CACAGCGGAG GTGCAGGCAG                                   20(2)SEQ ID NO：77信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：18个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：77序列描述：CTCACTGCTT  GCGCTGGC                                    18(2)SEQ ID NO：78信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：20个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：78序列描述：CGGTAAGATA GCTCTGCTGG                                   2O(2)SEQ ID NO：79信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：20个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：79序列描述：GAGCCCACAG CCAGCACAGG                                   20(2)SEQ ID NO：80信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：21个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：80序列描述：GATCCAACGC CAGATCATAC C                                 21(2)SEQ ID NO：81信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：20个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：81序列描述：CACGGCCAGG TCCACCAGGC                                   20(2)SEQ ID NO：82信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：21个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：82序列描述：CACGTCCCCT AGCACTGTCA G                                 21(2)SEQ ID NO：83信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：22个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：83序列描述：TTGACGAAGT CCTTCATCTG GG                                22(2)SEQ ID NO：84信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：21个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：84序列描述：GAACTGCAAG CTGGAGCCCA G                                 21(2)SEQ ID NO：85信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：21个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：85序列描述：CTGGATGCTG CGAAGTGCTA C                                 21(2)SEQ ID NO：86信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：21个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：cDNA
(xi)SEQ ID NO：86序列描述：GCCTTGGAGC TGGACGATGG C                                 21(2)SEQ ID NO：87信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：33个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：87序列描述：GTAAGATCTC CAGAGTGTCC AAGACAAGAG ATG                    33(2)SEQ ID NO：88信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：33个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：88序列描述：CTTCTCGAGT GTGAGAGCTG AACTGAAACC TTC                    33(2)SEQ ID NO：89信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：32个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：89序列描述：CGCTGTGACG TCAGAGTTGA GTCCAAATAT GG                     32(2)SEQ ID NO：90信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：21个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：90序列描述：GGTGACACTA TAGAATAGGG C                                 21(2)SEQ ID NO：91信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：18个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：91序列描述：AAGCAGGAGC TCCTGTGT                                     18(2)SEQ ID NO：92信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：852个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：cDNA
(ix)特征：
    (A)名称/键：CDS
    (B)位置：61..852
(xi)SEQ ID NO：92序列描述：TGATCTCCCT CCAGGCCACT GTTCCCTCTC CACTTCCCCT CACCGCTGCA CTGCTCAGAG        60ATG GCC CTT GGG GCT GTG GTC CTC CTT GGG GTC CTG GCT TCT TAC CAC         108Met Ala Leu Gly Ala Val Val Leu Leu Gly Val Leu Ala Ser Tyr His
1               5                  10                  15GGA TTC AAC TTG GAC GTG ATG AGC GGT GAT CTT CCA GGA AGA CGC AGC         156Gly Phe Asn Leu Asp Val Met Ser Gly Asp Leu Pro Gly Arg Arg Ser
           20                  25                  30GGG CTT CGG GCA GAG CGT GAT GCA GTT TGG GGA TCT CGA CTC GTG GTG         204Gly Leu Arg Ala Glu Arg Asp Ala Val Trp Gly Ser Arg Leu Val Val
       35                  40                  45GGA GCC CCC CTG GCG GTG GTG TCG GCC AAC CAC ACA GGA CGG CTG TAC         252Gly Ala Pro Leu Ala Val Val Ser Ala Asn His Thr Gly Arg Leu Tyr
   50                  55                  60GAG TGT GCG CCT GCC TCC GGC ACC TGC ACG CCC ATT TTC CCA TTC ATG         300Glu Cys Ala Pro Ala Ser Gly Thr Cys Thr Pro Ile Phe Pro Phe Met65                  70                  75                  80  CCC CCC GAA GCC GTG AAC ATG TCC CTG GGC CTG TCC CTG GCA GCC TCC         348Pro Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu Ala Ala Ser
               85                  90                  95CCC AAC CAT TCC CAG CTG CTG GCT TGT GGC CCG ACC GTG CAT AGA GCC         396Pro Asn His Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Val His Arg Ala
          100                 105                 110TGC GGG GAG GAC GTG TAC GCC CAG GGT TTC TGT GTG CTG CTG GAT GCC         444Cys Gly Glu Asp Val Tyr Ala Gln Gly Phe Cys Val Leu Leu Asp Ala
      115                 120                 125CAC GCA CAG CCC ATC GGG ACT GTG CCA GCT GCC CTG CCC GAG TGC CCA         492His Ala Gln Pro Ile Gly Thr Val Pro Ala Ala Leu Pro Glu Cys Pro
  130                 135                 140GAT CAA GAG ATG GAC ATT GTC TTC CTG ATT GAC GGC TCT GGC AGC ATT         540Asp Gln Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser Ile145                 150                 155                 160AGC TCA AAT GAC TTC CGC AAG ATG AAG GAC TTT GTC AGA GCT GTG ATG         588Ser Ser Asn Asp Phe Arg Lys Met Lys Asp Phe Val Arg Ala Val Met
              165                 170                 175GAC CAG TTC AAG GAC ACC AAC ACC CAG TTC TCG CTG ATG CAG TAC TCC         636Asp Gln Phe Lys Asp Thr Asn Thr Gln Phe Ser Leu Met Gln Tyr Ser
          180                 185                 190AAT GTG CTG GTG ACA CAT TTC ACC TTC AGC AGC TTC CGG AAC AGC TCC         684Asn Val Leu Val Thr His Phe Thr Phe Ser Ser Phe Arg Asn Ser Ser
      195                 200                 205AAT CCT CAG GGC CTA GTG GAG CCC ATT GTG CAG CTG ACA GGC CTC ACG         732Asn Pro Gln Gly Leu Val Glu Pro Ile Val Gln Leu Thr Gly Leu Thr
  210                 215                 220TTC ACG GCC ACA GGG ATC CTG AAA GTG GTG ACA GAG CTG TTT CAA ACC         780Phe Thr Ala Thr Gly Ile Leu Lys Val Val Thr Glu Leu Phe Gln Thr225                 230                 235                 240AAG AAC GGG GCC CGC GAA AGT GCC AAG AAG ATC CTC ATC GTC ATC ACA         828Lys Asn Gly Ala Arg Glu Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile Val Ile Thr
              245                 250                 255GAT GGG CAG AAG TAC AAA GCG GCA                                         852Asp Gly Gln Lys Tyr Lys Ala Ala
          260(2)SEQ ID NO：93信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：264个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)SEQ ID NO：93序列描述：   Met Ala Leu Gly Ala Val Val Leu Leu Gly Val Leu Ala Ser Tyr His
 1               5                  10                  15Gly Phe Asn Leu Asp Val Met Ser Gly Asp Leu Pro Gly Arg Arg Ser
            20                  25                  30Gly Leu Arg Ala Glu Arg Asp Ala Val Trp Gly Ser Arg Leu Val Val
        35                  40                  45Gly Ala Pro Leu Ala Val Val Ser Ala Asn His Thr Gly Arg Leu Tyr
    50                  55                  60Glu Cys Ala Pro Ala Ser Gly Thr Cys Thr Pro Ile Phe Pro Phe Met
65                  70                  75                  80Pro Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu Ala Ala Ser
                85                  90                  95Pro Asn His Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Val His Arg Ala
           100                 105                 110Cys Gly Glu Asp Val Tyr Ala Gln Gly Phe Cys Val Leu Leu Asp Ala
       115                 120                 125His Ala Gln Pro Ile Gly Thr Val Pro Ala Ala Leu Pro Glu Cys Pro
   130                 135                 140Asp Gln Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser Ile145                 150                 155                 160Ser Ser Asn Asp Phe Arg Lys Met Lys Asp Phe Val Arg Ala Val Met
               165                 170                 175Asp Gln Phe Lys Asp Thr Asn Thr Gln Phe Ser Leu Met Gln Tyr Ser
           180                 185                 190Asn Val Leu Val Thr His Phe Thr Phe Ser Ser Phe Arg Asn Ser Ser
       195                 200                 205Asn Pro Gln Gly Leu Val Glu Pro Ile Val Gln Leu Thr Gly Leu Thr
   210                 215                 220Phe Thr Ala Thr Gly Ile Leu Lys Val Val Thr Glu Leu Phe Gln Thr225                 230                 235                 240Lys Asn Gly Ala Arg Glu Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile Val Ile Thr
               245                 250                 255Asp Gly Gln Lys Tyr Lys Ala Ala
           260(2)SEQ  ID  NO：94信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：22个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：cDNA
(xi)SEQ ID NO：94序列描述：CTGGTCTGGA GGTGCCTTCC TG                                22(2)SEQ ID NO：95信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：21个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：cDNA
(xi)SEQ ID NO：95序列描述：CCTGAGCAGG AGCACCTGGC C                                                         21(2)SEQ ID NO：96信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：2499个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：96序列描述：ATGACCTTCG GCACTGTGCT TCTTCTGAGT GTCCTGGCTT CTTATCATGG ATTCAACCTG      60GATGTGGAGG AGCCTACGAT CTTCCAGGAG GATGCAGGCG GCTTTGGGCA GAGCGTGGTG     120CAGTTCGGTG GATCTCGACT CGTGGTGGGA GCACCCCTGG AGGTGGTGGC GGCCAACCAG     180ACGGGACGGC TGTATGACTG CGCAGCTGCC ACCGGCATGT GCCAGCCCAT CCCGCTGCAC     240ATCCGCCCTG AGGCCGTGAA CATGTCCTTG GGCCTGACCC TGGCAGCCTC CACCAACGGC     300TCCCGGCTCC TGGCCTGTGG CCCGACCCTG CACAGAGTCT GTGGGGAGAA CTCATACTCA     360AAGGGTTCCT GCCTCCTGCT GGGCTCGCGC TGGGAGATCA TCCAGACAGT CCCCGACGCC     420ACGCCAGAGT GTCCACATCA AGAGATGGAC ATCGTCTTCC TGATTGACGG CTCTGGAAGC     480ATTGACCAAA ATGACTTTAA CCAGATGAAG GGCTTTGTCC AAGCTGTCAT GGGCCAGTTT     540GAGGGCACTG ACACCCTGTT TGCACTGATG CAGTACTCAA ACCTCCTGAA GATCCACTTC     600ACCTTCACCC AATTCCGGAC CAGCCCGAGC CAGCAGAGCC TGGTGGATCC CATCGTCCAA     660CTGAAAGGCC TGACGTTCAC GGCCACGGGC ATCCTGACAG TGGTGACACA GCTATTTCAT     720CATAAGAATG GGGCCCGAAA AAGTGCCAAG AAGATCCTCA TTGTCATCAC AGATGGGCAG     780  AAGTACAAAG ACCCCCTGGA ATACAGTGAT GTCATCCCCC AGGCAGAGAA GGCTGGCATC     840ATCCGCTACG CTATCGGGGT GGGACACGCT TTCCAGGGAC CCACTGCCAG GCAGGAGCTG     900AATACCATCA GCTCAGCGCC TCCGCAGGAC CACGTGTTCA AGGTGGACAA CTTTGCAGCC     960CTTGGCAGCA TCCAGAAGCA GCTGCAGGAG AAGATCTATG CAGTTGAGGG AACCCAGTCC    1020AGGGCAAGCA GCTCCTTCCA GCACGAGATG TCCCAAGAAG GCTTCAGCAC AGCCCTCACA    1080ATGGATGGCC TCTTCCTGGG GGCTGTGGGG AGCTTTAGCT GGTCTGGAGG TGCCTTCCTG    1140TATCCCCCAA ATATGAGCCC CACCTTCATC AACATGTCTC AGGAGAATGT GGACATGAGG    1200GACTCTTACC TGGGTTACTC CACCGAGCTA GCCCTGTGGA AGGGGGTACA GAACCTGGTC    1260CTGGGGGCCC CCCGCTACCA GCATACCGGG AAGGCTGTCA TCTTCACCCA GGTGTCCAGG    1320CAATGGAGGA AGAAGGCCGA AGTCACAGGG ACGCAGATCG GCTCCTACTT CGGGGCCTCC    1380CTCTGCTCCG TGGATGTGGA CAGCGATGGC AGCACCGACC TGATCCTCAT TGGGGCCCCC    1440CATTACTATG AGCAGACCCG AGGGGGCCAG GTGTCCGTGT GTCCCTTGCC TAGGGGGAGG    1500GTGCAGTGGC AGTGTGACGC TGTTCTCCGT GGTGAGCAGG GCCACCCCTG GGGCCGCTTT    1560GGGGCAGCCC TGACAGTGTT GGGGGATGTG AATGAGGACA AGCTGATAGA CGTGGCCATT    1620GGGGCCCCGG GAGAGCAGGA GAACCGGGGT GCTGTCTACC TGTTTCACGG AGCCTCAGAA    1680TCCGGCATCA GCCCCTCCCA CAGCCAGCGG ATTGCCAGCT CCCAGCTCTC CCCCAGGCTG    1740CAGTATTTTG GGCAGGCGCT GAGTGGGGGT CAGGACCTCA CCCAGGATGG ACTGATGGAC    1800CTGGCCGTGG GGGCCCGGGG CCAGGTGCTC CTGCTCAGGA GTCTGCCGGT GCTGAAAGTG    1860GGGGTGGCCA TGAGATTCAG CCCTGTGGAG GTGGCCAAGG CTGTGTACCG GTGCTGGGAA    1920GAGAAGCCCA GTGCCCTGGA AGCTGGGGAC GCCACCGTCT GTCTCACCAT CCAGAAAAGC    1980TCACTGGACC AGCTAGGTGA CATCCAAAGC TCTGTCAGGT TTGATCTGGC ACTGGACCCA    2040GGTCGTCTGA CTTCTCGTGC CATTTTCAAT GAAACCAAGA ACCCCACTTT GACTCGAAGA    2100AAAACCCTGG GACTGGGGAT TCACTGTGAA ACCCTGAAGC TGCTTTTGCC AGTGAGGACT    2160TTGGGTTCTG GGAAGGGGGA GAGAGGAGGA GCCCAAGGCT GGCCTGGAGC ACCCCCGTTC    2220TCTGCTGAGC GAGGTGGGAA GGGTTAGGAT GTTGGGGCTG GAGAGAGGGA CATTAGGGCA    2280GGAGAACCTG GCTCCACGGC TTGGAGGGAG CACTGTCAGG GCAGTGGGGA GTGGATGCAG    2340TGGAGGAGGA CTTGTGGTGG AGCGTAGAGA GGACAGCAGG TTCTTGAAAG CCTGTTCTCT    2400CTCAGGATTG TGTGGAGGAT GTGGTGAGCC CCATCATTCT GCACCTCAAC TTCTCACTGG    2460TGAGAGAGCC CATCCCCTCC CCCCAGAACC TGCGTCCTG                           2499(2)SEQ ID NO：97信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：3956个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：DNA
(xi)SEQ ID NO：97序列描述：TTTAACTGCA CCAACTTTAA AATACGCTAT TGGAGCTGGA ATTACCGCGG CTGCTGGCAC              60CAGACTTGCC CTCCAATGGA TCCTCGTTAA AGGATTTAAA GTGGACTCAT TCCAATTACA             120GGGCCTCGAA AGAGTCCTGT ATTGTTATTT TTCGTCACTA CCTCCCCGGG TCGGGAGTGG             180GTAATTTGCG CGCCTGCTGC CTTCCTTGGA TGTGGTAGCC GTTTCTCAGG CTCCCTCTCC             240GGAATCGAAC CCTGATTCCC CGTCACCCGT GGTCACCATG GTAGGCACGT GCAGTTCGGT             300GGATCTCGAC TCGTGGTGGG AGCACCCCTG GAGGTGGTGG CGGCCAACCA GACGGGACGG             360CTGTATGACT GCGCAGCTGC CACCGGCATG TGCCAGCCCA TCCCGCTGCA CATCCGCCCT             420GAGGCCGTGA ACATGTCCTT GGGCCTGACC CTGGCAGCCT CCACCAACGG CTCCCGGCTC             480CTGGCCTGTG GCCCGACCCT GCACAGAGTC TGTGGGGAGA ACTCATACTC AAAGGGTTCC             540TGCCTCCTGC TGGGCTCGCG CTGGGAGATC ATCCAGACAG TCCCCGACGC CACGCCAGAG             600TGTCCACATC AAGAGATGGA CATCGTCTTC CTGATTGACG GCTCTGGAAG CATTGACCAA             660AATGACTTTA ACCAGATGAA GGGCTTTGTC CAAGCTGTCA TGGGCCAGTT TGAGGGCACT             720GACACCCTGT TTGCACTGAT GCAGTACTCA AACCTCCTGA AGATCCACTT CACCTTCACC             780CAATTCCGGA CCAGCCCGAG CCAGCAGAGC CTGGTGGATC CCATCGTCCA ACTGAAAGGC             840CTGACGTTCA CGGCCACGGG CATCCTGACA GTGGTGACAC AGCTATTTCA TCATAAGAAT             900GGGGCCCGAA AAAGTGCCAA GAAGATCCTC ATTGTCATCA CAGATGGGCA GAAGTACAAA             960GACCCCCTGG AATACAGTGA TGTCATCCCC CAGGCAGAGA AGGCTGGCAT CATCCGCTAC            1020GCTATCGGGG TGGGACACGC TTTCCAGGGA CCCACTGCCA GGCAGGAGCT GAATACCATC            1080AGCTCAGCGC CTCCGCAGGA CCACGTGTTC AAGGTGGACA ACTTTGCAGC CCTTGGCAGC            1140ATCCAGAAGC AGCTGCAGGA GAAGATCTAT GCAGTTGAGG GAACCCAGTC CAGGGCAAGC            1200AGCTCCTTCC AGCACGAGAT GTCCCAAGAA GGCTTCAGCA CAGCCCTCAC AATGGATGGC            1260CTCTTCCTGG GGGCTGTGGG GAGCTTTAGC TGGTCTGGAG GTGCCTTCCT GTATCCCCCA            1320AATATGAGCC CCACCTTCAT CAACATGTCT CAGGAGAATG TGGACATGAG GGACTCTTAC            1380CTGGGTTACT CCACCGAGCT AGCCCTGTGG AAGGGGGTAC AGAACCTGGT CCTGGGGGCC            1440CCCCGCTACC AGCATACCGG GAAGGCTGTC ATCTTCACCC AGGTGTCCAG GCAATGGAGG            1500AAGAAGGCCG AAGTCACAGG GACGCAGATC GGCTCCTACT TCGGGGCCTC CCTCTGCTCC            1560GTGGATGTGG ACAGCGATGG CAGCACCGAC CTGATCCTCA TTGGGGCCCC CCATTACTAT            1620GAGCAGACCC GAGGGGGCCA GGTGTCCGTG TGTCCCTTGC CTAGGGGGAG GGTGCAGTGG            1680CAGTGTGACG CTGTTCTCCG TGGTGAGCAG GGCCACCCCT GGGGCCGCTT TGGGGCAGCC            1740CTGACAGTGT TGGGGGATGT GAATGAGGAC AAGCTGATAG ACGTGGCCAT TGGGGCCCCG            1800GGAGAGCAGG AGAACCGGGG TGCTGTCTAC CTGTTTCACG GAGCCTCAGA ATCCGGCATC            1860AGCCCCTCCC ACAGCCAGCG GATTGCCAGC TCCCAGCTCT CCCCCAGGCT GCAGTATTTT            1920GGGCAGGCGC TGAGTGGGGG TCAGGACCTC ACCCAGGATG GACTGATGGA CCTGGCCGTG            1980GGGGCCCGGG GCCAGGTGCT CCTGCTCAGG AGTCTGCCGG TGCTGAAAGT GGGGGTGGCC            2040ATGAGATTCA GCCCTGTGGA GGTGGCCAAG GCTGTGTACC GGTGCTGGGA AGAGAAGCCC            2100AGTGCCCTGG AAGCTGGGGA CGCCACCGTC TGTCTCACCA TCCAGAAAAG CTCACTGGAC            2160CAGCTAGGTG ACATCCAAAG CTCTGTCAGG TTTGATCTGG CACTGGACCC AGGTCGTCTG            2220ACTTCTCGTG CCATTTTCAA TGAAACCAAG AACCCCACTT TGACTCGAAG AAAAACCCTG            2280GGACTGGGGA TTCACTGTGA AACCCTGAAG CTGCTTTTGC CAGATTGTGT GGAGGATGTG            2340GTGAGCCCCA TCATTCTGCA CCTCAACTTC TCACTGGTGA GAGAGCCCAT CCCCTCCCCC            2400CAGAACCTGC GTCCTGTGCT GGCCGTGGGC TCACAAGACC TCTTCACTGC TTCTCTCCCC            2460TTCGAGAAGA ACTGTGGGCA AGATGGCCTC TGTGAAGGGG ACCTGGGTGT CACCCTCAGC            2520TTCTCAGGCC TGCAGACCCT GACCGTGGGG AGCTCCCTGG AGCTCAACGT GATTGTGACT            2580GTGTGGAACG CAGGTGAGGA TTCCTACGGA ACCGTGGTCA GCCTCTACTA TCCAGCAGGG            2640CTGTCGCACC GACGGGTGTC AGGAGCCCAG AAGCAGCCCC ATCAGAGTGC CCTGCGCCTG            2700GCATGTGAGA CAGTGCCCAC TGAGGATGAG GGCCTAAGAA GCAGCCGCTG CAGTGTCAAC            2760CACCCCATCT TCCATGAGGG CTCTAACGGC ACCTTCATAG TCACATTCGA TGTCTCCTAC            2820AAGGCCACCC TGGGAGACAG GATGCTTATG AGGGCCAGTG CAAGCAGTGA GAACAATAAG            2880GCTTCAAGCA GCAAGGCCAC CTTCCAGCTG GAGCTCCCGG TGAAGTATGC AGTCTACACC            2940ATGATCAGCA GGCAGGAAGA ATCCACCAAG TACTTCAACT TTGCAACCTC CGATGAGAAG            3000AAAATGAAAG AGGCTGAGCA TCGATACCGT GTGAATAACC TCAGCCAGCG AGATCTGGCC            3060ATCAGCATTA ACTTCTGGGT TCCTGTCCTG CTGAACGGGG TGGCTGTGTG GGATGTGGTC            3120ATGGAGGCCC CATCTCAGAG TCTCCCCTGT GTTTCAGAGA GAAAACCTCC CCAGCATTCT            3180GACTTCCTGA CCCAGATTTC AAGAAGTCCC ATGCTGGACT GCTCCATTGC TGACTGCCTG            3240CAGTTCCGCT GTGACGTCCC CTCCTTCAGC GTCCAGGAGG AGCTGGATTT CACCCTGAAG            3300GGCAATCTCA GTTTCGGCTG GGTCCGCGAG ACATTGCAGA AGAAGGTGTT GGTCGTGAGT            3360GTGGCTGAAA TTACGTTCGA CACATCCGTG TACTCCCAGC TTCCAGGACA GGAGGCATTT            3420ATGAGAGCTC AGATGGAGAT GGTGCTAGAA GAAGACGAGG TCTACAATGC CATTCCCATC            3480ATCATGGGCA GCTCTGTGGG GGCTCTGCTA CTGCTGGCGC TCATCACAGC CACACTGTAC            3540AAGCTTGGCT TCTTCAAACG CCACTACAAG GAAATGCTGG AGGACAAGCC TGAAGACACT            3600GCCACATTCA GTGGGGACGA TTTCAGCTGT GTGGCCCCAA ATGTGCCTTT GTCCTAATAA            3660TCCACTTTCC TGTTTATCTC TACCACTGTG GGCTGGACTT GCTTGCAACC ATAAATCAAC            3720TTACATGGAA ACAACTTCTG CATAGATCTG CACTGGCCTA AGCAACCTAC CAGGTGCTAA            3780GCACCTTCTC GGAGAGATAG AGATTGTCAA TGTTTTTACA TATCTGTCCA TCTTTTTCAG            3840CAATGACCCA CTTTTTACAG AAGCAGGCAT GGTGCCAGCA TAAATTTTCA TATGCTTAAG            3900AATTGTCACA TGAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA CTTTAG                3956(2)SEQ ID NO：98信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：3785个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：cDNA
(ix)特征：
    (A)名称/键：CDS
    (B)位置：1..3486
(xi)SEQ ID NO：98序列描述：ATG ACC TTC GGC ACT GTG CTT CTT CTG AGT GTC CTG GCT TCT TAT CAT          48Met Thr Phe Gly Thr Val Leu Leu Leu Ser Val Leu Ala Ser Tyr His
1               5                  10                  15GGA TTC AAC CTG GAT GTG GAG GAG CCT ACG ATC TTC CAG GAG GAT GCA          96Gly Phe Asn Leu Asp Val Glu Glu Pro Thr Ile Phe Gln Glu Asp Ala
           20                  25                  30GGC GGC TTT GGG CAG AGC GTG GTG CAG TTC GGT GGA TCT CGA CTC GTG         144Gly Gly Phe Gly Gln Ser Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val
       35                  40                  45GTG GGA GCA CCC CTG GAG GTG GTG GCG GCC AAC CAG ACG GGA CGG CTG         192Val Gly Ala Pro Leu Glu Val Val Ala Ala Asn Gln Thr Gly Arg Leu
   50                  55                  60TAT GAC TGC GCA GCT GCC ACC GGC ATG TGC CAG CCC ATC CCG CTG CAC         240Tyr Asp Cys Ala Ala Ala Thr Gly Met Cys Gln Pro Ile Pro Leu His65                  70                  75                  80ATC CGC CCT GAG GCC GTG AAC ATG TCC TTG GGC CTG ACC CTG GCA GCC         288Ile Arg Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Thr Leu Ala Ala
               85                  90                  95TCC ACC AAC GGC TCC CGG CTC CTG GCC TGT GGC CCG ACC CTG CAC AGA         336Ser Thr Asn Gly Ser Arg Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Leu His Arg
          100                 105                 110GTC TGT GGG GAG AAC TCA TAC TCA AAG GGT TCC TGC CTC CTG CTG GGC         384Val Cys Gly Glu Asn Ser Tyr Ser Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly
      115                 120                 125TCG CGC TGG GAG ATC ATC CAG ACA GTC CCC GAC GCC ACG CCA GAG TGT         432Ser Arg Trp Glu Ile Ile Gln Thr Val Pro Asp Ala Thr Pro Glu Cys
  130                 135                 140CCA CAT CAA GAG ATG GAC ATC GTC TTC CTG ATT GAC GGC TCT GGA AGC         480Pro His Gln Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser145                 150                 155                 160ATT GAC CAA AAT GAC TTT AAC CAG ATG AAG GGC TTT GTC CAA GCT GTC         528Ile Asp Gln Asn Asp Phe Asn Gln Met Lys Gly Phe Val Gln Ala Val
              165                 170                 175ATG GGC CAG TTT GAG GGC ACT GAC ACC CTG TTT GCA CTG ATG CAG TAC         576Met Gly Gln Phe Glu Gly Thr Asp Thr Leu Phe Ala Leu Met Gln Tyr
          180                 185                 190TCA AAC CTC CTG AAG ATC CAC TTC ACC TTC ACC CAA TTC CGG ACC AGC         624Ser Asn Leu Leu Lys Ile His Phe Thr Phe Thr Gln Phe Arg Thr Ser
    195                 200                 205CCG AGC CAG CAG AGC CTG GTG GAT CCC ATC GTC CAA CTG AAA GGC CTG         672Pro Ser Gln Gln Ser Leu Val Asp Pro Ile Val Gln Leu Lys Gly Leu
210                 215                 220ACG TTC ACG GCC ACG GGC ATC CTG ACA GTG GTG ACA CAG CTA TTT CAT         720Thr Phe Thr Ala Thr Gly Ile Leu Thr Val Val Thr Gln Leu Phe His225                 230                 235                 240CAT AAG AAT GGG GCC CGA AAA AGT GCC AAG AAG ATC CTC ATT GTC ATC         768His Lys Asn Gly Ala Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile Val Ile
            245                 250                 255ACA GAT GGG CAG AAG TAC AAA GAC CCC CTG GAA TAC AGT GAT GTC ATC         816Thr Asp Gly Gln Lys Tyr Lys Asp Pro Leu Glu Tyr Ser Asp Val Ile
            260             265                 270CCC CAG GCA GAG AAG GCT GGC ATC ATC CGC TAC GCT ATC GGG GTG GGA         864Pro Gln Ala Glu Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly
        275             280                 285CAC GCT TTC CAG GGA CCC ACT GCC AGG CAG GAG CTG AAT ACC ATC AGC         912His Ala Phe Gln Gly Pro Thr Ala Arg Gln Glu Leu Asn Thr Ile Ser
    290             295                 300TCA GCG CCT CCG CAG GAC CAC GTG TTC AAG GTG GAC AAC TTT GCA GCC         960Ser Ala Pro Pro Gln Asp His Val Phe Lys Val Asp Asn Phe Ala Ala305                 310                 315                 320CTT GGC AGC ATC CAG AAG CAG CTG CAG GAG AAG ATC TAT GCA GTT GAG        1008Leu Gly Ser Ile Gln Lys Gln Leu Gln Glu Lys Ile Tyr Ala Val Glu
            325                 330                 335GGA ACC CAG TCC AGG GCA AGC AGC TCC TTC CAG CAC GAG ATG TCC CAA        1056Gly Thr Gln Ser Arg Ala Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln
        340                 345                 350GAA GGC TTC AGC ACA GCC CTC ACA ATG GAT GGC CTC TTC CTG GGG GCT        1104Glu Gly Phe Ser Thr Ala Leu Thr Met Asp Gly Leu Phe Leu Gly Ala
    355                 360                 365GTG GGG AGC TTT AGC TGG TCT GGA GGT GCC TTC CTG TAT CCC CCA AAT        1152Val Gly Ser Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro Asn
370                 375                 380ATG AGC CCC ACC TTC ATC AAC ATG TCT CAG GAG AAT GTG GAC ATG AGG        1200Met Ser Pro Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Val Asp Met Arg385                 390                 395                 400GAC TCT TAC CTG GGT TAC TCC ACC GAG CTA GCC CTG TGG AAG GGG GTA        1248Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Glu Leu Ala Leu Trp Lys Gly Val
            405                 410                 415CAG AAC CTG GTC CTG GGG GCC CCC CGC TAC CAG CAT ACC GGG AAG GCT        1296Gln Asn Leu Val Leu Gly Ala Pro Arg Tyr Gln His Thr Gly Lys Ala
        420                 425                 430GTC ATC TTC ACC CAG GTG TCC AGG CAA TGG AGG AAG AAG GCC GAA GTC        1344Val Ile Phe Thr Gln Val Ser Arg Gln Trp Arg Lys Lys Ala Glu Val
    435                 440                 445ACA GGG ACG CAG ATC GGC TCC TAC TTC GGG GCC TCC CTC TGC TCC GTG        1392Thr Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val
450                 455                 460GAT GTG GAC AGC GAT GGC AGC ACC GAC CTG ATC CTC ATT GGG GCC CCC        1440Asp Val Asp Ser Asp Gly Ser Thr Asp Leu Ile Leu Ile Gly Ala Pro465                 470                 475                 480CAT TAC TAT GAG CAG ACC CGA GGG GGC CAG GTG TCC GTG TGT CCC TTG        1488His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys Pro Leu
            485                 490                 495CCT AGG GGG AGG GTG CAG TGG CAG TGT GAC GCT GTT CTC CGT GGT GAG        1536Pro Arg Gly Arg Val Gln Trp Gln Cys Asp Ala Val Leu Arg Gly Glu
        500                 505                 510CAG GGC CAC CCC TGG GGC CGC TTT GGG GCA GCC CTG ACA GTG TTG GGG        1584Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu Gly
    515                 520                 525GAT GTG AAT GAG GAC AAG CTG ATA GAC GTG GCC ATT GGG GCC CCG GGA        1632Asp Val Asn Glu Asp Lys Leu Ile Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro Gly
530                 535                 540GAG CAG GAG AAC CGG GGT GCT GTC TAC CTG TTT CAC GGA GCC TCA GAA        1680Glu Gln Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Leu Phe His Gly Ala Ser Glu545                 550                 555                 560TCC GGC ATC AGC CCC TCC CAC AGC CAG CGG ATT GCC AGC TCC CAG CTC        1728Ser Gly Ile Ser Pro Ser His Ser Gln Arg Ile Ala Ser Ser Gln Leu
            565                 570                 575TCC CCC AGG CTG CAG TAT TTT GGG CAG GCG CTG AGT GGG GGT CAG GAC        1776Ser Pro Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ala Leu Ser Gly Gly Gln Asp
        580                 585                 590CTC ACC CAG GAT GGA CTG ATG GAC CTG GCC GTG GGG GCC CGG GGC CAG        1824Leu Thr Gln Asp Gly Leu Met Asp Leu Ala Val Gly Ala Arg Gly Gln
    595                 600                 605GTG CTC CTG CTC AGG AGT CTG CCG GTG CTG AAA GTG GGG GTG GCC ATG        1872Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Val Leu Lys Val Gly Val Ala Met
610                 615                 620AGA TTC AGC CCT GTG GAG GTG GCC AAG GCT GTG TAC CGG TGC TGG GAA        1920Arg Phe Ser Pro Val Glu Val Ala Lys Ala Val Tyr Arg Cys Trp Glu625                 630                 635                 640GAG AAG CCC AGT GCC CTG GAA GCT GGG GAC GCC ACC GTC TGT CTC ACC        1968Glu Lys Pro Ser Ala Leu Glu Ala Gly Asp Ala Thr Val Cys Leu Thr
            645                 650                 655ATC CAG AAA AGC TCA CTG GAC CAG CTA GGT GAC ATC CAA AGC TCT GTC        2016Ile Gln Lys Ser Ser Leu Asp Gln Leu Gly Asp Ile Gln Ser Ser Val
        660                 665                 670AGG TTT GAT CTG GCA CTG GAC CCA GGT CGT CTG ACT TCT CGT GCC ATT        2064Arg Phe Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Thr Ser Arg Ala Ile
    675                 680                 685TTC AAT GAA ACC AAG AAC CCC ACT TTG ACT CGA AGA AAA ACC CTG GGA        2112Phe Asn Glu Thr Lys Asn Pro Thr Leu Thr Arg Arg Lys Thr Leu Gly
690                 695                 700CTG GGG ATT CAC TGT GAA ACC CTG AAG CTG CTT TTG CCA GAT TGT GTG        2160Leu Gly Ile His Cys Glu Thr Leu Lys Leu Leu Leu Pro Asp Cys Val705                 710                 715                 720GAG GAT GTG GTG AGC CCC ATC ATT CTG CAC CTC AAC TTC TCA CTG GTG        2208Glu Asp Val Val Ser Pro Ile Ile Leu His Leu Asn Phe Ser Leu Val
            725                 730                 735AGA GAG CCC ATC CCC TCC CCC CAG AAC CTG CGT CCT GTG CTG GCC GTG        2256Arg Glu Pro Ile Pro Ser Pro Gln Asn Leu Arg Pro Val Leu Ala Val
        740                 745                 750GGC TCA CAA GAC CTC TTC ACT GCT TCT CTC CCC TTC GAG AAG AAC TGT        2304Gly Ser Gln Asp Leu Phe Thr Ala Ser Leu Pro Phe Glu Lys Asn Cys
    755                 760                 765GGG CAA GAT GGC CTC TGT GAA GGG GAC CTG GGT GTC ACC CTC AGC TTC        2352Gly Gln Asp Gly Leu Cys Glu Gly Asp Leu Gly Val Thr Leu Ser Phe
770                 775                 780TCA GGC CTG CAG ACC CTG ACC GTG GGG AGC TCC CTG GAG CTC AAC GTG        2400Ser Gly Leu Gln Thr Leu Thr Val Gly Ser Ser Leu Glu Leu Asn Val785                 790                 795                 800ATT GTG ACT GTG TGG AAC GCA GGT GAG GAT TCC TAC GGA ACC GTG GTC        2448Ile Val Thr Val Trp Asn Ala Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Val Val
            805                 810                 815AGC CTC TAC TAT CCA GCA GGG CTG TCG CAC CGA CGG GTG TCA GGA GCC        2496Ser Leu Tyr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser His Arg Arg Val Ser Gly Ala
        820                 825                 830CAG AAG CAG CCC CAT CAG AGT GCC CTG CGC CTG GCA TGT GAG ACA GTG        2544Gln Lys Gln Pro His Gln Ser Ala Leu Arg Leu Ala Cys Glu Thr Val
    835                 840                 845CCC ACT GAG GAT GAG GGC CTA AGA AGC AGC CGC TGC AGT GTC AAC CAC        2592Pro Thr Glu Asp Glu Gly Leu Arg Ser Ser Arg Cys Ser Val Asn His
850                 855                 860CCC ATC TTC CAT GAG GGC TCT AAC GGC ACC TTC ATA GTC ACA TTC GAT        2640Pro Ile Phe His Glu Gly Ser Asn Gly Thr Phe Ile Val Thr Phe Asp865                 870                 875                 880GTC TCC TAC AAG GCC ACC CTG GGA GAC AGG ATG CTT ATG AGG GCC AGT        2688Val Ser Tyr Lys Ala Thr Leu Gly Asp Arg Met Leu Met Arg Ala Ser
            885                 890                 895GCA AGC AGT GAG AAC AAT AAG GCT TCA AGC AGC AAG GCC ACC TTC CAG        2736Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Ala Ser Ser Ser Lys Ala Thr Phe Gln
        900                 905                 910CTG GAG CTC CCG GTG AAG TAT GCA GTC TAC ACC ATG ATC AGC AGG CAG        2784Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Thr Met Ile Ser Arg Gln
    915                 920                 925GAA GAA TCC ACC AAG TAC TTC AAC TTT GCA ACC TCC GAT GAG AAG AAA        2832Glu Glu Ser Thr Lys Tyr Phe Asn Phe Ala Thr Ser Asp Glu Lys Lys
930                 935                 940ATG AAA GAG GCT GAG CAT CGA TAC CGT GTG AAT AAC CTC AGC CAG CGA        2880Met Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Gln Arg945                 950                 955                 960GAT CTG GCC ATC AGC ATT AAC TTC TGG GTT CCT GTC CTG CTG AAC GGG        2928Asp Leu Ala Ile Ser Ile Asn Phe Trp Val Pro Val Leu Leu Asn Gly
            965                 970                 975GTG GCT GTG TGG GAT GTG GTC ATG GAG GCC CCA TCT CAG AGT CTC CCC        2976Val Ala Val Trp Asp Val Val Met Glu Ala Pro Ser Gln Ser Leu Pro
        980                 985                 990TGT GTT TCA GAG AGA AAA CCT CCC CAG CAT TCT GAC TTC CTG ACC CAG        3024Cys Val Ser Glu Arg Lys Pro Pro Gln His Ser Asp Phe Leu Thr Gln
    995                 1000                1005ATT TCA AGA AGT CCC ATG CTG GAC TGC TCC ATT GCT GAC TGC CTG CAG        3072Ile Ser Arg Ser Pro Met Leu Asp Cys Ser Ile Ala Asp Cys Leu Gln
1010                1015                1020TTC CGC TGT GAC GTC CCC TCC TTC AGC GTC CAG GAG GAG CTG GAT TTC        3120Phe Arg Cys Asp Val Pro Ser Phe Ser Val Gln Glu Glu Leu Asp Phe1025                1030                1035                1040ACC CTG AAG GGC AAT CTC AGT TTC GGC TGG GTC CGC GAG ACA TTG CAG        3168Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Val Arg Glu Thr Leu Gln
            1045                1050                1055AAG AAG GTG TTG GTC GTG AGT GTG GCT GAA ATT ACG TTC GAC ACA TCC        3216Lys Lys Val Leu Val Val Ser Val Ala Glu Ile Thr Phe Asp Thr Ser
        1060                1065                1070GTG TAC TCC CAG CTT CCA GGA CAG GAG GCA TTT ATG AGA GCT CAG ATG        3264Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe Met Arg Ala Gln Met
    1075                1080                1085GAG ATG GTG CTA GAA GAA GAC GAG GTC TAC AAT GCC ATT CCC ATC ATC        3312Glu Met Val Leu Glu Glu Asp Glu Val Tyr Asn Ala Ile Pro Ile Ile
1090                1095                1100ATG GGC AGC TCT GTG GGG GCT CTG CTA CTG CTG GCG CTC ATC ACA GCC        3360Met Gly Ser Ser Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Ala1105                1110                1115                1120ACA CTG TAC AAG CTT GGC TTC TTC AAA CGC CAC TAC AAG GAA ATG CTG        3408Thr Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg His Tyr Lys Glu Met Leu
            1125                1130                1135GAG GAC AAG CCT GAA GAC ACT GCC ACA TTC AGT GGG GAC GAT TTC AGC        3456Glu Asp Lys Pro Glu Asp Thr Ala Thr Phe Ser Gly Asp Asp Phe Ser
        1140                1145                1150
TGT GTG GCC CCA AAT GTG CCT TTG TCC TAATAATCCA CTTTCCTGTT            3503
Cys Val Ala Pro Asn Val Pro Leu Ser
        1155                1160
TATCTCTACC ACTGTGGGCT GGACTTGCTT GCAACCATAA ATCAACTTAC ATGGAAACAA    3563
CTTCTGCATA GATCTGCACT GGCCTAAGCA ACCTACCAGG TGCTAAGCAC CTTCTCGGAG    3623
AGATAGAGAT TGTCAATGTT TTTACATATC TGTCCATCTT TTTCAGCAAT GACCCACTTT    3683
TTACAGAAGC AGGCATGGTG CCAGCATAAA TTTTCATATG CTTAAGAATT GTCACATGAA    3743
AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAACTTT AG                       3785(2)SEQ ID NO：99信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：1161个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)SEQ ID NO：99序列描述：
Met Thr Phe Gly Thr Val Leu Leu Leu Ser Val Leu Ala Ser Tyr His
  1               5                  10                  15
Gly Phe Asn Leu Asp Val Glu Glu Pro Thr Ile Phe Gln Glu Asp Ala
             20                  25                  30
Gly Gly Phe Gly Gln Ser Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val
         35                  40                  45
Val Gly Ala Pro Leu Glu Val Val Ala Ala Asn Gln Thr Gly Arg Leu
     50                  55                  60
Tyr Asp Cys Ala Ala Ala Thr Gly Met Cys Gln Pro Ile Pro Leu His
 65                  70                  75                  80
Ile Arg Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Thr Leu Ala Ala
                 85                  90                  95
Ser Thr Asn Gly Ser Arg Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Leu His Arg
            100                 105                 110
Val Cys Gly Glu Asn Ser Tyr Ser Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly
        115                 120                 125
Ser Arg Trp Glu Ile Ile Gln Thr Val Pro Asp Ala Thr Pro Glu Cys
    130                 135                 140
Pro His Gln Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser
145                 150                 155                 160
Ile Asp Gln Asn Asp Phe Asn Gln Met Lys Gly Phe Val Gln Ala Val
                165                 170                 175
Met Gly Gln Phe Glu Gly Thr Asp Thr Leu Phe Ala Leu Met Gln Tyr
            180                 185                 190Ser Asn Leu Leu Lys Ile His Phe Thr Phe Thr Gln Phe Arg Thr Ser
    195                 200                 205Pro Ser Gln Gln Ser Leu Val Asp Pro Ile Val Gln Leu Lys Gly Leu
210                 215                 220Thr Phe Thr Ala Thr Gly Ile Leu Thr Val Val Thr Gln Leu Phe His225                 230                 235                 240His Lys Asn Gly Ala Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile Val Ile
            245                 250                 255Thr Asp Gly Gln Lys Tyr Lys Asp Pro Leu Glu Tyr Ser Asp Val Ile
        260                 265                 270Pro Gln Ala Glu Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly
    275                 280                 285His Ala Phe Gln Gly Pro Thr Ala Arg Gln Glu Leu Asn Thr Ile Ser
290                 295                 300Ser Ala Pro Pro Gln Asp His Val Phe Lys Val Asp Asn Phe Ala Ala305                 310                 315                 320Leu Gly Ser Ile Gln Lys Gln Leu Gln Glu Lys Ile Tyr Ala Val Glu
            325                 330                 335Gly Thr Gln Ser Arg Ala Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln
        340                 345                 350Glu Gly Phe Ser Thr Ala Leu Thr Met Asp Gly Leu Phe Leu Gly Ala
    355                 360                 365Val Gly Ser Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro Asn
370                 375                 380Met Ser Pro Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Val Asp Met Arg385                 390                 395                 400Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Glu Leu Ala Leu Trp Lys Gly Val
            405                 410                 415Gln Asn Leu Val Leu Gly Ala Pro Arg Tyr Gln His Thr Gly Lys Ala
        420                 425                 430Val Ile Phe Thr Gln Val Ser Arg Gln Trp Arg Lys Lys Ala Glu Val
    435                 440                 445Thr Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val
450                 455                 460Asp Val Asp Ser Asp Gly Ser Thr Asp Leu Ile Leu Ile Gly Ala Pro465                 470                 475                 480His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys Pro Leu
            485                 490                 495Pro Arg Gly Arg Val Gln Trp Gln Cys Asp Ala Val Leu Arg Gly Glu
        500                 505                 510Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu Gly
    515                 520                 525Asp Val Asn Glu Asp Lys Leu Ile Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro Gly
530                 535                 540Glu Gln Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Leu Phe His Gly Ala Ser Glu545                 550                 555                 560Ser Gly Ile Ser Pro Ser His Ser Gln Arg Ile Ala Ser Ser Gln Leu
            565                 570                 575Ser Pro Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ala Leu Ser Gly Gly Gln Asp
        580                 585                 590Leu Thr Gln Asp Gly Leu Met Asp Leu Ala Val Gly Ala Arg Gly Gln
    595                 600                 605Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Val Leu Lys Val Gly Val Ala Met
610                 615                 620Arg Phe Ser Pro Val Glu Val Ala Lys Ala Val Tyr Arg Cys Trp Glu625                 630                 635                 640Glu Lys Pro Ser Ala Leu Glu Ala Gly Asp Ala Thr Val Cys Leu Thr
            645                 650                 655Ile Gln Lys Ser Ser Leu Asp Gln Leu Gly Asp Ile Gln Ser Ser Val
        660                 665                 670Arg Phe Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Thr Ser Arg Ala Ile
    675                 680                 685Phe Asn Glu Thr Lys Asn Pro Thr Leu Thr Arg Arg Lys Thr Leu Gly
690                 695                 700Leu Gly Ile His Cys Glu Thr Leu Lys Leu Leu Leu Pro Asp Cys Val705                 710                 715                 720Glu Asp Val Val Ser Pro Ile Ile Leu His Leu Asn Phe Ser Leu Val
            725                 730                 735Arg Glu Pro Ile Pro Ser Pro Gln Asn Leu Arg Pro Val Leu Ala Val
        740                 745                 750Gly Ser Gln Asp Leu Phe Thr Ala Ser Leu Pro Phe Glu Lys Asn Cys
    755                 760                 765Gly Gln Asp Gly Leu Cys Glu Gly Asp Leu Gly Val Thr Leu Ser Phe
770                 775                 780Ser Gly Leu Gln Thr Leu Thr Val Gly Ser Ser Leu Glu Leu Asn Val785                 790                 795                 800Ile Val Thr Val Trp Asn Ala Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Val Val
            805                 810                 815Ser Leu Tyr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser His Arg Arg Val Ser Gly Ala
        820                 825                 830Gln Lys Gln Pro His Gln Ser Ala Leu Arg Leu Ala Cys Glu Thr Val
    835                 840                 845Pro Thr Glu Asp Glu Gly Leu Arg Ser Ser Arg Cys Ser Val Asn His
850                 855                 860Pro Ile Phe His Glu Gly Ser Asn Gly Thr Phe Ile Val Thr Phe Asp865                 870                 875                 880Val Ser Tyr Lys Ala Thr Leu Gly Asp Arg Met Leu Met Arg Ala Ser
            885                 890                 895Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Ala Ser Ser Ser Lys Ala Thr Phe Gln
        900                 905                 910Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Thr Met Ile Ser Arg Gln
    915                 920                 925Glu Glu Ser Thr Lys Tyr Phe Asn Phe Ala Thr Ser Asp Glu Lys Lys
930                 935                 940Met Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Gln Arg945                 950                 955                 960Asp Leu Ala Ile Ser Ile Asn Phe Trp Val Pro Val Leu Leu Asn Gly
            965                 970                 975Val Ala Val Trp Asp Val Val Met Glu Ala Pro Ser Gln Ser Leu Pro
        980                 985                 990Cys Val Ser Glu Arg Lys Pro Pro Gln His Ser Asp Phe Leu Thr Gln
    995                 1000                1005Ile Ser Arg Ser Pro Met Leu Asp Cys Ser Ile Ala Asp Cys Leu Gln
1010                1015                1020Phe Arg Cys Asp Val Pro Ser Phe Ser Val Gln Glu Glu Leu Asp Phe1025                1030                1035                1040Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Val Arg Glu Thr Leu Gln
            1045                1050                1055Lys Lys Val Leu Val Val Ser Val Ala Glu Ile Thr Phe Asp Thr Ser
        1060                1065                1070Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe Met Arg Ala Gln Met
    1075                1080                1085Glu Met Val Leu Glu Glu Asp Glu Val Tyr Asn Ala Ile Pro Ile Ile
1090                1095                1100Met Gly Ser Ser Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Ala1105                1110                1115                1120Thr Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg His Tyr Lys Glu Met Leu
            1125                1130                1135Glu Asp Lys Pro Glu Asp Thr Ala Thr Phe Ser Gly Asp Asp Phe Ser
        1140                1145                1150
  Cys Val Ala Pro Asn Val Pro Leu Ser
          1155                1160(2)SEQ ID NO：100信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：1318个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：cDNA
(ix)特征：
    (A)名称/键：CDS
    (B)位置：17..1255
(xi)SEQ ID NO：100序列描述：AATTCGGCAC GAGCTT GGG GCT GTG GTC CTC CTT GGG GTC CTG GCT TCT             49
                Gly Ala Val Val Leu Leu Gly Val Leu Ala Ser
                  1               5                  10TAC CAC GGA TTC AAC TTG GAC GTG GAT GAG CCG GTG ATC TTC CAG GAA           97Tyr His Gly Phe Asn Leu Asp Val Asp Glu Pro Val Ile Phe Gln Glu
               15              20                  25GAC GCA GCG GGC TTC GGG CAG AGC GTG ATG CAG TTT GGA GGA TCT CGA          145Asp Ala Ala Gly Phe Gly Gln Ser Val Met Gln Phe Gly Gly Ser Arg
           30              35                  40CTC GTG GTG GGA GCC CCC CTG GCG GTG GTG TCG GCC AAC CAC ACA GGA          193Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Ala Val Val Ser Ala Asn His Thr Gly
       45              50                  55CGG CTG TAC GAG TGT GCG CCT GCC TCC GGC ACC TGC ACG CCC ATT TTC          241Arg Leu Tyr Glu Cys Ala Pro Ala Ser Gly Thr Cys Thr Pro Ile Phe
   60              65                  70                  75CCA TTC ATG CCC CCC GAA GCC GTG AAC ATG TCC CTG GGC CTG TCC CTG          289Pro Phe Met Pro Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu
               80                  85                  90GCA GCC TCC CCC AAC CAT TCC CAG CTG CTG GCT TGT GGC CCG ACC GTG          337Ala Ala Ser Pro Asn His Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Val
           95                 100                  105CAT AGA GCC TGC GGG GAG GAC GTG TAC GCC CAG GGT TTC TGT GTG CTG          385His Arg Ala Cys Gly Glu Asp Val Tyr Ala Gln Gly Phe Cys Val Leu
      110                 115                 120CTG GAT GCC CAC GCA CAG CCC ATC GGG ACT GTG CCA GCT GCC CTG CCC          433Leu Asp Ala His Ala Gln Pro Ile Gly Thr Val Pro Ala Ala Leu Pro
  125                 130                 135GAG TGC CCA GAT CAA GAG ATG GAC ATT GTC TTC CTG ATT GAC GGC TCT          481Glu Cys Pro Asp Gln Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser140                 145                 150                 155GGC AGC ATT AGC TCA AAT GAC TTC CGC AAG ATG AAG GAC TTT GTC AGA          529Gly Ser Ile Ser Ser Asn Asp Phe Arg Lys Met Lys Asp Phe Val Arg
            160                 165                 170GCT GTG ATG GAC CAG TTC AAG GAC ACC AAC ACC CAG TTC TCG CTG ATG          577Ala Val Met Asp Gln Phe Lys Asp Thr Asn Thr Gln Phe Ser Leu Met
        175                 180                 185CAG TAC TCC AAT GTG CTG GTG ACA CAT TTC ACC TTC AGC AGC TTC CGG          625Gln Tyr Ser Asn Val Leu Val Thr His Phe Thr Phe Ser Ser Phe Arg
    190                 195                 200AAC AGC TCC AAT CCT CAG GGC CTA GTG GAG CCC ATT GTG CAG CTG ACA          673Asn Ser Ser Asn Pro Gln Gly Leu Val Glu Pro Ile Val Gln Leu Thr
205                 210                 215GGC CTC ACG TTC ACG GCC ACA GGG ATC CTG AAA GTG GTG ACA GAG CTG          721Gly Leu Thr Phe Thr Ala Thr Gly Ile Leu Lys Val Val Thr Glu Leu220                 225                 230                 235TTT CAA ACC AAG AAC GGG GCC CGC GAA AGT GCC AAG AAG ATC CTC ATC          769Phe Gln Thr Lys Asn Gly Ala Arg Glu Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile
            240                 245                 250GTC ATC ACA GAT GGG CAG AAG TAC AAA GAC CCC CTG CAC TAC AGT GCT          817Val Ile Thr Asp Gly Gln Lys Tyr Lys Asp Pro Leu His Tyr Ser Ala
        255                 260                 265GTC ATC CCA CAG GCA GAG CAG GCG GGC ATC ATC CGC TAC GCC ATC GGG          865Val Ile Pro Gln Ala Glu Gln Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly
    270                 275                 280GTG GGG GAC GCG TTC CAG AAA CCC ACA GCC AGG CAG GAG CTG GAC ACC          913Val Gly Asp Ala Phe Gln Lys Pro Thr Ala Arg Gln Glu Leu Asp Thr
285                 290                 295ATC GCC TCC GAG CCG CCC GAC GCC CAC GTG TTC CAG GTG GAC AAT TTC          961Ile Ala Ser Glu Pro Pro Asp Ala His Val Phe Gln Val Asp Asn Phe300                 305                 310                 315TCA GCA CTC AGC AGC ATC CAA AAG CAG CTG TAT GAC AGG ATC TTT GCC         1009Ser Ala Leu Ser Ser Ile Gln Lys Gln Leu Tyr Asp Arg Ile Phe Ala
            320                 325                 330GTC GAG GGA ACC CTG TCA TCG GCA AGC ACC TCC TTC CAG CAT GAG ATG         1057Val Glu Gly Thr Leu Ser Ser Ala Ser Thr Ser Phe Gln His Glu Met
        335                 340                 345TCC CAA GAG GGC TTC AGC TCA CTT CTC ACC ACG GAA GGA CCG GTG CTG         1105Ser Gln Glu Gly Phe Ser Ser Leu Leu Thr Thr Glu Gly Pro Val Leu
    350                 355                 360GGG GCT GTG GGC AGC TTC GAT TGG TCC GGG GGT GCT TTC CTG TAC CCC         1153Gly Ala Val Gly Ser Phe Asp Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro
365                 370                 375CCC GGC GGG AGC CCC ACC TTC ATC AAC ATG TCT CAG CAG AAC GTG GAC         1201Pro Gly Gly Ser Pro Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Gln Asn Val Asp380                 385                 390                 395  ATG AGG GAC TCC TAC CTG GGT GAG GAA GGG GTG GGG GTG GGG ACA GGT        1249Met Arg Asp Ser Tyr Leu Gly Glu Glu Gly Val Gly Val Gly Thr Gly
              400                 405                 410GGG AGC TGAGGCTTGG GGTGGGGTGG GGCTGGGCTG GGAGGGGAGG GAAGAGGAGG         1305Gly SerGGAGAGGCAA AGA                                                         1318(2)SEQ ID NO：101信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：413个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)SEQ ID NO：101序列描述：
Gly Ala Val Val Leu Leu Gly Val Leu Ala Ser Tyr His Gly Phe Asn
  1               5                  10                  15
Leu Asp Val Asp Glu Pro Val Ile Phe Gln Glu Asp Ala Ala Gly Phe
             20                  25                  30
Gly Gln Ser Val Met Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val Val Gly Ala
         35                  40                  45
Pro Leu Ala Val Val Ser Ala Asn His Thr Gly Arg Leu Tyr Glu Cys
     50                  55                  60
Ala Pro Ala Ser Gly Thr Cys Thr Pro Ile Phe Pro Phe Met Pro Pro
 65                  70                 75                   80
Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu Ala Ala Ser Pro Asn
                 85                  90                  95
His Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Val His Arg Ala Cys Gly
            100                 105                 110
Glu Asp Val Tyr Ala Gln Gly Phe Cys Val Leu Leu Asp Ala His Ala
        115                 120                 125
Gln Pro Ile Gly Thr Val Pro Ala Ala Leu Pro Glu Cys Pro Asp Gln
    130                 135                 140
Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser Ile Ser Ser
145                 150                 155                 160
Asn Asp Phe Arg Lys Met Lys Asp Phe Val Arg Ala Val Met Asp Gln
                165                 170                 175
Phe Lys Asp Thr Asn Thr Gln Phe Ser Leu Met Gln Tyr Ser Asn Val
            180                 185                 190
Leu Val Thr His Phe Thr Phe Ser Ser Phe Arg Asn Ser Ser Asn Pro
        195                 200                 205
Gln Gly Leu Val Glu Pro Ile Val Gln Leu Thr Gly Leu Thr Phe Thr
    210                 215                 220
Ala Thr Gly Ile Leu Lys Val Val Thr Glu Leu Phe Gln Thr Lys Asn
225                 230                 235                 240
Gly Ala Arg Glu Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile Val Ile Thr Asp Gly
                245                 250                 255
Gln Lys Tyr Lys Asp Pro Leu His Tyr Ser Ala Val Ile Pro Gln Ala
            260                 265                 270
Glu Gln Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly Asp Ala Phe
        275                 280                 285
Gln Lys Pro Thr Ala Arg Gln Glu Leu Asp Thr Ile Ala Ser Glu Pro
    290                 295                 300
Pro Asp Ala His Val Phe Gln Val Asp Asn Phe Ser Ala Leu Ser Ser
305                 310                 315                 320
Ile Gln Lys Gln Leu Tyr Asp Arg Ile Phe Ala Val Glu Gly Thr Leu
                325                 330                 335
Ser Ser Ala Ser Thr Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln Glu Gly Phe
            340                 345                 350
Ser Ser Leu Leu Thr Thr Glu Gly Pro Val Leu Gly Ala Val Gly Ser
        355                 360                 365
Phe Asp Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro Gly Gly Ser Pro
    370                 375                 380
Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Gln Asn Val Asp Met Arg Asp Ser Tyr
385                 390                 395                 400
Leu Gly Glu Glu Gly Val Gly Val Gly Thr Gly Gly Ser
                405                 410(2)SEQ ID NO：102信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：1484个碱基
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：cDNA
(ix)特征：
    (A)名称/键：CDS
    (B)位置：1..1482
(xi)SEQ ID NO：102序列描述：GAT GTC CAG AGC TCC ATC AGC TAT GAT CTG GCA CTG GAC CCA GGC CGC          48Asp Val Gln Ser Ser Ile Ser Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arq1               5                  10                  15CTG GTC TCT CGG GCC ATT TTT CAA GAG ACC CAG AAC CAG ACT TTA ACT          96Leu Val Ser Arg Ala Ile Phe Gln Glu Thr Gln Asn Gln Thr Leu Thr
         20                  25                  30CGA AGG AAG ACC CTG GGG CTG GGG CGT CAC TGT GAA ACC ATG AGG CTA         144Arg Arg Lys Thr Leu Gly Leu Gly Arg His Cys Glu Thr Met Arg Leu
     35                  40                  45CTT TTG CCA GAC TGC GTA GAG GAC GTG GTG AAC CCC ATC GTC CTG CAC         192Leu Leu Pro Asp Cys Val Glu Asp Val Val Asn Pro Ile Val Leu His
 50                  55                  60CTC AAC TTC TCC CTG GAG GGA CAG CCA ATC CTC TCA TCC CAG AAT CTG         240Leu Asn Phe Ser Leu Glu Gly Gln Pro Ile Leu Ser Ser Gln Asn Leu65                  70                  75                  80CGC CCT GTG CTG GCC ACG GGC TCG CAG GAC CAC TTC ATT GCC TCC CTC         288Arg Pro Val Leu Ala Thr Gly Ser Gln Asp His Phe Ile Ala Ser Leu
             85                  90                  95CCC TTT GAG AAG AAC TGC GGA CAA GAT CGC CTG TGT GAG GGG GAC CTG         336Pro Phe Glu Lys Asn Cys Gly Gln Asp Arg Leu Cys Glu Gly Asp Leu
        100                 105                 110AGC ATC AGC TTC AAC TTC TCG GGC TTG AAT ACC CTG CTG GTG GGG CTC         384Ser Ile Ser Phe Asn Phe Ser Gly Leu Asn Thr Leu Leu Val Gly Leu
    115                 120                 125TCC CTG GAG CTC ACA GTG ACA GTG ACC GTG CGG AAT GAG GGC GAG GAC         432Ser Leu Glu Leu Thr Val Thr Val Thr Val Arg Asn Glu Gly Glu Asp
130                 135                 140TCC TAT GGG ACC GCC ATC ACC CTC TAC TAC CCA GCA GGG CTA TCC TAC         480Ser Tyr Gly Thr Ala Ile Thr Leu Tyr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser Tyr145                 150                 155                 160AGG CGG GTG TCG GGC CAG ACA CAA CCC TGG CAG CGC CCC CTG CAC CTC         528Arg Arg Val Ser Gly Gln Thr Gln Pro Trp Gln Arg Pro Leu His Leu
            165                 170                 175GCA TGT GAG GCT GTA CCT ACC GAG AGC GAG GGC TTG AGG AGT ACC AGC         576Ala Cys Glu Ala Val Pro Thr Glu Ser Glu Gly Leu Arg Ser Thr Ser
       180                  185                 190TGC AGC GTC AAC CAC CCC ATC TTC CAA GGG GGT GCT CAG GGC ACT TTC         624Cys Ser Val Asn His Pro Ile Phe Gln Gly Gly Ala Gln Gly Thr Phe
    195                 200                 205GTA GTC AAG TTC GAT GTC TCC TCC AAG GCC AGC CTG GGT GAC AGG TTG         672Val Val Lys Phe Asp Val Ser Ser Lys Ala Ser Leu Gly Asp Arg Leu
210                 215                 220CTC ATG GGG GCC AGT GCC AGC AGT GAG AAT AAT AAG CCT GCG AGC AAC         720Leu Met Gly Ala Ser Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Pro Ala Ser Asn225                 230                 235                 240AAG ACC TCC TTT GAG CTG GAA CTG CCA GTG AAA TAC GCT GTC TAC ATG         768Lys Thr Ser Phe Glu Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Met
            245                 250                 255ATG ATC ACA AGG CAC GAA GGC TCC ACC AGG TTC TTC AAC TTT TCC ACT         816Met Ile Thr Arg Mis Glu Gly Ser Thr Arg Phe Phe Asn Phe Ser Thr
        260                 265                 270TCC GCT GAG AAG AGC AGC AAA GAG GCC GAG CAC CGC TAT CGG GTG AAC         864Ser Ala Glu Lys Ser Ser Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn
    275                 280                 285AAC CTG AGT CTG CGA GAT GTG GCC GTC AGC GTG GAC TTC TGG GCC CCC         912Asn Leu Ser Leu Arg Asp Val Ala Val Ser Val Asp Phe Trp Ala Pro
290                 295                 300GTG CAG CTG AAC GGA GCA GCT GTG TGG GAC GTG GCG GTG GAG GCC CCT         960Val Gln Leu Asn Gly Ala Ala Val Trp Asp Val Ala Val Glu Ala Pro305                 310                 315                 320GCC CAG AGC CTG CCC TGT GCG CGG GAG AGG GAA CCT CCG AGG ACC TCT        1008Ala Gln Ser Leu Pro Cys Ala Arg Glu Arg Glu Pro Pro Arg Thr Ser
            325                 330                 335GAC CTG AGC CGG GTC CCG GGG AGT CCC GTG CTG GAC TGC AGC GTT GCG        1056Asp Leu Ser Arg Val Pro Gly Ser Pro Val Leu Asp Cys Ser Val Ala
        340                 345                 350CAC TGC CTG AGG TTC CGC TGC CAC ATC CCC TCC TTC AGC GCC AAG GAG        1104His Cys Leu Arg Phe Arg Cys His Ile Pro Ser Phe Ser Ala Lys Glu
    355                 360                 365GAG CTC CAC TTC ACC CTG AAG GGC AAC CTC AGC TTC GCC TGG GTC AGC        1152Glu Leu His Phe Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Ala Trp Val Ser
370                 375                 380CAG ATG CTG CAA AAG AAG GTG TCG GTG GTG AGT GTG GCC GAG ATC ACC        1200Gln Met Leu Gln Lys Lys Val Ser Val Val Ser Val Ala Glu Ile Thr385                 390                 395                 400TTC AAC AGG GCC GTG TAC TCC CAA GTT CCG GGC GAG GAG CCC TTT ATG        1248Phe Asn Arg Ala Val Tyr Ser Gln Val Pro Gly Glu Glu Pro Phe Met
            405                 410                 415AGA GCC CAG GTG GAG ACG GTG CTG GAG GAG TAT GAG GAG CAC GAC CCC        1296Arg Ala Gln Val Glu Thr Val Leu Glu Glu Tyr Glu Glu His Asp Pro
        420                 425                 430GTC CCC CTG GTG GTG GGC AGC TGT GTG GGC GGC CTG CTG CTG CTG GCT        1344Val Pro Leu Val Val Gly Ser Cys Val Gly Gly Leu Leu Leu Leu Ala
    435                 440                 445CTC ATC TCA GCC ACC CTG TAC AAG CTT GGC TTC TTC AAG CGC CGG TAC        1392Leu Ile Ser Ala Thr Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg Arg Tyr
450                 455                 460AAG GAG ATG CTG GGC GAG AAA CCG GGA GAC GCG GCC ACC TTC CCC GGG        1440Lys Glu Met Leu Gly Glu Lys Pro Gly Asp Ala Ala Thr Phe Pro Gly465                 470                 475                 480GAG GAC GCC AGC TGC GGG GCT TCA GAT TTG CCT TTG TCC CAG                1482Glu Asp Ala Ser Cys Gly Ala Ser Asp Leu Pro Leu Ser Gln
        485                     490TG                                                                     1484(2)SEQ ID NO：103信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：494个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)SEQ ID NO：103序列描述：
Asp Val Gln Ser Ser Ile Ser Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Leu Val Ser Arg Ala Ile Phe Gln Glu Thr Gln Asn Gln Thr Leu Thr
             20                  25                  30
Arg Arg Lys Thr Leu Gly Leu Gly Arg His Cys Glu Thr Met Arg Leu
         35                  40                  45
Leu Leu Pro Asp Cys Val Glu Asp Val Val Asn Pro Ile Val Leu His
     50                  55                  60
Leu Asn Phe Ser Leu Glu Gly Gln Pro Ile Leu Ser Ser Gln Asn Leu
 65                  70                  75                  80
Arg Pro Val Leu Ala Thr Gly Ser Gln Asp His Phe Ile Ala Ser Leu
                 85                  90                  95
Pro Phe Glu Lys Asn Cys Gly Gln Asp Arg Leu Cys Glu Gly Asp Leu
            100                 105                 110
Ser Ile Ser Phe Asn Phe Ser Gly Leu Asn Thr Leu Leu Val Gly Leu
        115                 120                 125
Ser Leu Glu Leu Thr Val Thr Val Thr Val Arg Asn Glu Gly Glu Asp
    130                 135                 140
Ser Tyr Gly Thr Ala Ile Thr Leu Tyr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser Tyr
145                 150                 155                 160
Arg Arg Val Ser Gly Gln Thr Gln Pro Trp Gln Arg Pro Leu His Leu
                165                 170                 175
Ala Cys Glu Ala Val Pro Thr Glu Ser Glu Gly Leu Arg Ser Thr Ser
            180                 185                 190
Cys Ser Val Asn His Pro Ile Phe Gln Gly Gly Ala Gln Gly Thr Phe
        195                 200                 205
Val Val Lys Phe Asp Val Ser Ser Lys Ala Ser Leu Gly Asp Arg Leu
     210                215                 220
Leu Met Gly Ala Ser Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Pro Ala Ser Asn
225                 230                 235                 240
Lys Thr Ser Phe Glu Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Met
                245                 250                 255Met Ile Thr Arg His Glu Gly Ser Thr Arg Phe Phe Asn Phe Ser Thr
        260                 265                 270Ser Ala Glu Lys Ser Ser Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn
    275                 280                 285Asn Leu Ser Leu Arg Asp Val Ala Val Ser Val Asp Phe Trp Ala Pro
290                 295                 300Val Gln Leu Asn Gly Ala Ala Val Trp Asp Val Ala Val Glu Ala Pro305                 310                 315                 320Ala Gln Ser Leu Pro Cys Ala Arg Glu Arg Glu Pro Pro Arg Thr Ser
            325                 330                 335Asp Leu Ser Arg Val Pro Gly Ser Pro Val Leu Asp Cys Ser Val Ala
        340                 345                 350His Cys Leu Arg Phe Arg Cys His Ile Pro Ser Phe Ser Ala Lys Glu
    355                 360                 365Glu Leu His Phe Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Ala Trp Val Ser
370                 375                 380Gln Met Leu Gln Lys Lys Val Ser Val Val Ser Val Ala Glu Ile Thr385                 390                 395                 400Phe Asn Arg Ala Val Tyr Ser Gln Val Pro Gly Glu Glu Pro Phe Met
            405                 410                 415Arg Ala Gln Val Glu Thr Val Leu Glu Glu Tyr Glu Glu His Asp Pro
        420                 425                 430Val Pro Leu Val Val Gly Ser Cys Val Gly Gly Leu Leu Leu Leu Ala
    435                 440                 445Leu Ile Ser Ala Thr Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg Arg Tyr
450                 455                 460Lys Glu Met Leu Gly Glu Lys Pro Gly Asp Ala Ala Thr Phe Pro Gly465                 470                 475                 480Glu Asp Ala Ser Cys Gly Ala Ser Asp Leu Pro Leu Ser Gln
            485                 490

Claims (2)

1.命名为199M，保藏号为ATCC HB 12058的杂交瘤。
2.由权利要求1的杂交瘤分泌的单克隆抗体。
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