CN110317257A - 一种辛卡利特的固液相合成法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种辛卡利特固液相结合的合成方法，主要解决现有技术存在的原料昂贵以及后处理繁琐的技术问题。技术方案为：一种辛卡利特的固液相合成法，包括以下步骤：（1）液相法合成Fmoc‑Asp‑Phe‑CONH2二肽片段；（2）将二肽片段装载到二氯三苯基氯树脂上，得到Fmoc‑Asp（β‑2Cl‑Trt Cl树脂）‑Phe‑NH2；（3）固相合成法依次连接余下保护氨基酸，得到辛卡利特树脂肽，Asp‑Tyr(SO3H)‑Met‑Gly‑Trp‑Met‑Asp（β‑2Cl‑Trt Cl树脂）‑Phe‑CONH2；（4）切割得到辛卡利特粗品，Asp‑Tyr(SO3H)‑Met‑Gly‑Trp‑Met‑Asp‑Phe‑CONH2；粗品再经高效液相色谱分离纯化、冻干精制得到辛卡利特。
Description
技术领域
本发明涉及多肽化合物合成技术领域，尤其涉及一种辛卡利特的固液相合成法。
背景技术
胆囊收缩素（CCK）是一种具有多种分子形式且具有双重分布的脑肠肽，由33 个氨基酸组成，具有激素和神经递质的作用。辛卡利特（sincalide）为一八肽分子，是胆囊收缩素的一个片段，具有胆囊收缩素的全部生物活性，是一种人工合成的胆囊素八肽(Octapeptide)，主要用于促胆囊收缩，胆囊诊断试剂，临床用于治疗慢性胰腺炎，发现胰分泌功能明显改善，症状明显减轻。CAS 号为：25126-32-3，分子式为C49H62N10O16S3，分子量1143.27。
目前，辛卡利特的制备方法主要有酶法和化学法两种。其中，酶法合成由于涉及酶制剂种类比较多、酶制剂价格昂贵，且中间产物分离困难、制备周期长，目前已不再使用酶法制备辛卡利特。化学合成是目前常用的辛卡利特制备方法。CN201410105423.X公开了一种制备辛卡利特的方法，该方法中选择了氨基树脂，在低温条件下用三氟乙酸裂解多肽树脂，虽然能减少磺酰基脱落，但是不能完全避免，而且会导致多肽裂解不完全，降低粗品收率；CN200810043920.6公开了一种制备辛卡利特的方法，该方法选择用氨水裂解多肽树脂，其中氨水有毒，对眼、鼻、皮肤有刺激性和腐蚀性，不利于后期产业化，而且选用的Fmoc-Asp(odmab)-OH这一原料价格昂贵，增加了生产成本，没有显著的经济效益。CN201810365226.X公开了一种制备辛卡利特的方法，该方法也是选取了两肽片段树脂作为起始树脂，但是Asp1选择了Fmoc-Asp （Ome）-OH保护策略，在裂解后还需要水解去除Ome。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高收率、低成本、反应条件温和、环境污染小、有利于实现产业化的辛卡利特的合成方法，主要解决现有技术存在的原料昂贵以及后处理繁琐的技术问题。
本发明的技术方案为：一种辛卡利特的固液相合成法，包括以下步骤：
（1）液相法合成Fmoc-Asp-Phe-CONH2二肽片段；
（2）将二肽片段装载到二氯三苯基氯树脂上，得到Fmoc-Asp（β-2Cl-Trt Cl 树脂）-Phe-NH2；
（3）固相合成法依次连接余下保护氨基酸，得到辛卡利特树脂肽，
Asp-Tyr(SO3H)-Met-Gly-Trp-Met-Asp（β-2Cl-Trt Cl树脂）-Phe-CONH2；
（4）切割得到辛卡利特粗品，Asp-Tyr(SO3H)-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-CONH2；粗品再经高效液相色谱分离纯化、冻干精制得到辛卡利特。
具体步骤如下：
（1）Fmoc-Asp（Otbu）-Osu，NH2-Phe-CONH2溶于四氢呋喃中，加入DIEA，搅拌反应2小时，旋蒸除去四氢呋喃，加入体积比95%TFA溶液搅拌反应1-2小时，去除叔丁基，再加乙醚结晶得到Fmoc-Asp- Phe-CONH2二肽片段；
（2）将二氯三苯基氯树脂置于圆底烧瓶中，加入Fmoc-Asp-Phe-CONH2二肽片段，加入二氯甲烷，DIEA，搅拌反应2小时，再加入甲醇震荡反应30分钟，过滤除去滤液；用二氯甲烷洗涤树脂三次，干燥，得到Fmoc-Asp（β-2Cl-Trt Cl 树脂）-Phe-CONH2；
（3）将Fmoc-Asp（β-2Cl-Trt Cl 树脂）-Phe-CONH2置于多肽反应器中，加入脱保护试剂，氮气搅拌反应30分钟，抽干，再用DMF洗涤5次，加入相应的保护氨基酸，HBTU/NMM为缩合剂，DMF做溶剂，反应30-60分钟，茚三酮检测反应终点，反应结束后抽真空排干反应液，用DMF洗涤3次，再加入脱保护试剂，依次循环，直至连完最后一个天冬氨酸，脱保护，得到辛卡利特树脂肽；
脱保护试剂为体积比20%哌啶/DMF溶液，反应中所提到保护氨基酸依次是Fmoc-Met-OH，Fmoc-Trp-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Met-OH，Fmoc-Tyr(SO3h)-OH，Fmoc-Asp(Ofm)-OH；
（4）将辛卡利特树脂肽置于圆底烧瓶中，加入裂解试剂，常温条件下反应1小时，抽滤滤去树脂颗粒，收集滤液，减压浓缩旋去溶剂，得到辛卡利特中间体；再经高效液相色谱分离纯化、冻干后得到辛卡利特精品。
裂解试剂的配比为醋酸：三氟乙酸/二氯甲烷=2/98（V/V）；
本发明中一些常用缩写具有以下含义：
HBTU：O-苯并三唑-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟磷酸盐；
NMM：N-甲基吗啉；
Fmoc：芴甲氧羰基；
Trp：色氨酸；
Gly：甘氨酸；
Asp：天冬氨酸；
Phe：苯丙氨酸；
Met：蛋氨酸；
Tyr：酪氨酸；
HSO3：磺酰基；
Ofm：芴甲氧基；
DIEA：N,N-二异丙基乙胺；
DMF：N,N-二甲基甲酰胺；
2Cl-Trt Cl Resin：二氯三苯基氯树脂。
本发明的有益效果是：本发明中策略性的选择了一个二肽片段中的Asp侧链羧基装载到二氯树脂上，在弱酸条件下就能将多肽从树脂上切割下来，避免了强酸条件下磺酸基掉落的副反应，同时Asp1选择Fmoc-Asp（ofm）-OH保护，去Fmoc过程中一并脱除ofm保护基；省去了一个反应步骤，提高了粗品纯度，通过一步切割就得到辛卡利特粗品，该方法操作简单，反应条件温和，无毒害，收率高，并解决了水解过程中产生的废水问题，利于后期工业化放大，具有极大的应用价值。
附图说明
图1为本发明产物色谱图。
图2为本发明产物质谱图。
具体实施方式
以下将参照实例对本发明做进一步的详细描述，但本发明不限于这具体实例。
实施例
（1）制备Fmoc-Asp-Phe-CONH2
称取Fmoc-Asp （Otbu）-OSU 10.2g（MW:508.5，20mmol），NH2-Phe-CONH2 3.61g（MW:164.2，22mmol）加入200ml四氢呋喃，10mlDIEA，搅拌反应2小时，再经萃取，洗涤，旋蒸除去溶剂，得到油状物12.1g，再加入100ml 配比为95%TFA/5%H2O(V/V)去保护基，搅拌反应1-2小时，加乙醚结晶，抽滤除去滤液，得到白色固体滤饼即为二肽片段Fmoc-Asp-Phe-CONH2 ,干燥后得到二肽片段10.5g。
（2）制备Fmoc-Asp（β-2Cl-Trt Cl 树脂）-Phe-CONH2
称取二氯三苯基氯树脂20g，加入Fmoc-Asp-Phe-CONH2 10.5g（MW:501.5，20mmol），加入300ml二氯甲烷，30mlDIEA，搅拌反应2小时，加入200ml甲醇，震荡反应30分钟，过滤除去滤液，树脂用二氯甲烷洗涤3次，得到Fmoc-Asp（β-2Cl-Trt Cl 树脂）-Phe-CONH2；
（3）制备辛卡利特树脂肽
将Fmoc-Asp（β-2Cl-Trt Cl 树脂）-Phe-CONH2置于多肽反应器中，加入300ml脱保护试剂，氮气搅拌反应30分钟，抽干，DMF洗涤5次，称取保护氨基酸，缩合剂，加入到反应器中，再加入200mlDMF，氮气搅拌反应30-60分钟，茚三酮检测反应终点，反应结束后排干反应液，DMF洗涤3次，反复循环，直至连完最后一个氨基酸，脱保护，得到辛卡利特树脂肽；
每一步缩合反应所加入的氨基酸的量分别为：
Fmoc-Met-OH （7.42g），
Fmoc-Trp-OH （8.52g），
Fmoc-Gly-OH（5.95g），
Fmoc-Met-OH（7.43g），
Fmoc-Tyr(SO3H)-OH（9.66g），
Fmoc-Asp(Ofm)-OH（10.67g）；
每一步缩合反应所采用的缩合剂的量为：HBTU(3.6g)，NMM(2.27ml)
脱帽试剂为体积比20%的哌啶/DMF混合溶液；
（4）制备辛卡利特
取步骤（3）中的辛卡利特树脂肽共32g置于500ml圆底烧瓶中，加入320ml裂解液，配比为三氟乙酸/二氯甲烷=2/98（V/V），置于摇床中常温震荡反应1小时，抽滤滤掉树脂颗粒，收集滤液，减压浓缩旋去溶剂，得到辛卡利特粗品共11.5g；再经高效液相色谱分离纯化、冻干后得到纯度99%的辛卡利特精品7.6g，收率达到66%。见图1、2。
Claims (7)
1.一种辛卡利特的固液相合成法，其特征在于：包括以下步骤
（1）液相法合成Fmoc-Asp-Phe-CONH2二肽片段；
（2）将二肽片段装载到二氯三苯基氯树脂上，得到Fmoc-Asp（β-2Cl-Trt Cl 树脂）-Phe-NH2；
（3）固相合成法依次连接余下保护氨基酸，得到辛卡利特树脂肽，
Asp-Tyr(SO3H)-Met-Gly-Trp-Met-Asp（β-2Cl-Trt Cl树脂）-Phe-CONH2；
（4）切割得到辛卡利特粗品，Asp-Tyr(SO3H)-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-CONH2；粗品再经高效液相色谱分离纯化、冻干精制得到辛卡利特。
2.根据权利要求1所述的一种辛卡利特的固液相合成法，其特征在于：步骤（1）具体内容为：Fmoc-Asp（Otbu）-Osu，NH2-Phe-CONH2溶于四氢呋喃中，加入DIEA，搅拌反应2小时，旋蒸除去四氢呋喃，加入体积比95%TFA溶液搅拌反应1-2小时，去除叔丁基，再加乙醚结晶得到Fmoc-Asp- Phe-CONH2二肽片段。
3.根据权利要求1所述的一种辛卡利特的固液相合成法，其特征在于：步骤（2）具体内容为：将二氯三苯基氯树脂置于圆底烧瓶中，加入Fmoc-Asp-Phe-CONH2二肽片段，加入二氯甲烷，DIEA，搅拌反应2小时，再加入甲醇震荡反应30分钟，过滤除去滤液；用二氯甲烷洗涤树脂三次，干燥，得到Fmoc-Asp（β-2Cl-Trt Cl 树脂）-Phe-CONH2。
4.根据权利要求1所述的一种辛卡利特的固液相合成法，其特征在于：步骤（3）具体内容为：将Fmoc-Asp（β-2Cl-Trt Cl 树脂）-Phe-CONH2置于多肽反应器中，加入脱保护试剂，氮气搅拌反应30分钟，抽干，再用DMF洗涤5次，加入相应的保护氨基酸，HBTU/NMM为缩合剂，DMF做溶剂，反应30-60分钟，茚三酮检测反应终点，反应结束后抽真空排干反应液，用DMF洗涤3次，再加入脱保护试剂，依次循环，直至连完最后一个天冬氨酸，脱保护，得到辛卡利特树脂肽。
5.根据权利要求4所述的一种辛卡利特的固液相合成法，其特征在于：脱保护试剂为体积比20%哌啶/DMF溶液，反应中所提到保护氨基酸依次是Fmoc-Met-OH，Fmoc-Trp-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Met-OH，Fmoc-Tyr(SO3h)-OH，Fmoc-Asp(ofm)-OH。
6.根据权利要求1所述的一种辛卡利特的固相合成法，其特征在于：步骤（4）具体内容为：将辛卡利特树脂肽置于圆底烧瓶中，加入裂解试剂，常温条件下反应1小时，抽滤滤去树脂颗粒，收集滤液，减压浓缩旋去溶剂，得到辛卡利特中间体；再经高效液相色谱分离纯化、冻干后得到辛卡利特精品。
7.根据权利要求6所述的一种辛卡利特的固液相合成法，其特征在于：所述裂解试剂为下述体积比的混合物：三氟乙酸:二氯甲烷=2:98。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111233714A (zh) * | 2020-03-18 | 2020-06-05 | 滨海吉尔多肽有限公司 | 一种maps多肽的制备方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1210543A (zh) * | 1996-02-09 | 1999-03-10 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 血管活性肠肽类似物的合成 |
| CN101463072A (zh) * | 2008-11-11 | 2009-06-24 | 吉尔生化（上海）有限公司 | 一种八肽胆囊收缩素的制备方法 |
| CN102775471A (zh) * | 2012-08-03 | 2012-11-14 | 吉尔生化（上海）有限公司 | 固相法和液相法结合合成八肽胆囊收缩素的方法 |
| CN103833842A (zh) * | 2014-03-20 | 2014-06-04 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种辛卡利特的制备方法 |
| CN104987362A (zh) * | 2015-07-20 | 2015-10-21 | 合肥国肽生物科技有限公司 | 一种固相合成制备醋酸辛卡利特的方法 |
| CN106397572A (zh) * | 2016-10-24 | 2017-02-15 | 合肥国肽生物科技有限公司 | 一种辛卡利特的纯化方法 |
| CN108239148A (zh) * | 2018-04-23 | 2018-07-03 | 滨海吉尔多肽有限公司 | 一种辛卡利特的固相合成法 |
-
2019
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Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1210543A (zh) * | 1996-02-09 | 1999-03-10 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 血管活性肠肽类似物的合成 |
| CN101463072A (zh) * | 2008-11-11 | 2009-06-24 | 吉尔生化（上海）有限公司 | 一种八肽胆囊收缩素的制备方法 |
| CN102775471A (zh) * | 2012-08-03 | 2012-11-14 | 吉尔生化（上海）有限公司 | 固相法和液相法结合合成八肽胆囊收缩素的方法 |
| CN103833842A (zh) * | 2014-03-20 | 2014-06-04 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种辛卡利特的制备方法 |
| CN104987362A (zh) * | 2015-07-20 | 2015-10-21 | 合肥国肽生物科技有限公司 | 一种固相合成制备醋酸辛卡利特的方法 |
| CN106397572A (zh) * | 2016-10-24 | 2017-02-15 | 合肥国肽生物科技有限公司 | 一种辛卡利特的纯化方法 |
| CN108239148A (zh) * | 2018-04-23 | 2018-07-03 | 滨海吉尔多肽有限公司 | 一种辛卡利特的固相合成法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 凌云等: "八肽胆囊收缩素(CCK-8)的合成及其药理评价", 《中国药物化学杂志》 * |
| 武振羽等: "环肽合成进展", 《化学进展》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111233714A (zh) * | 2020-03-18 | 2020-06-05 | 滨海吉尔多肽有限公司 | 一种maps多肽的制备方法 |
| CN111233714B (zh) * | 2020-03-18 | 2022-04-08 | 滨海吉尔多肽有限公司 | 一种maps多肽的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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