CN112585153B - 一种化合物或其盐及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

一种化合物或其盐作为连接链，可将该化合物或其盐加载在固相树脂上，进行多肽药物的固相合成，能提高多肽药物的合成收率。

Description

一种化合物或其盐及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种化合物或其盐及其制备方法与应用。
背景技术
这里的陈述仅是提供与本发明相关的背景信息，并不必然构成现有技术。
发明人知晓多肽药物有着重要的价值，例如醋酸亮丙瑞林、阿拉瑞林、利拉鲁肽、PMX-53(PMX-53的结构见EP1017713或J.Med.Chem.1999，42，1965-1974；Low-Molecular-Weight Peptidic and Cyclic Antagonists of the Receptor for the ComplementFactor C5a中的记载)等有着重要的药学用途，但合成多肽药物并不容易。发明人知晓多肽合成一般有固相合成法，液相合成法，固液结合合成方法等，一般固相合成法为主流方法，但涉及到一些修饰的时候，固相合成法很难独立完成，即使能完成，收率不是太高，例如在合成醋酸亮丙瑞林时，CN101195653B公开的总收率为16.5％，纯度为98％，其粗品纯度没有提及。高效液相色谱法分离和纯化促黄体素释放激素的研究(陈小芬)中公开的粗品纯度为53％，纯化后纯度85％，纯化收率76％，纯化后纯度低，总收率无法计算。CN1015997325B中公开的纯化收率为71％，纯度大于98.5％，粗品纯度及收率没有提及，总收率无法计算。CN102464702B中公开的粗品收率15％～25％，纯化收率95％，总收率在14％～24％，纯度99.5％。
发明内容
一方面，本发明涉及如下式(1)的化合物或其盐：
式(1)中R1为氢或氨基保护基；
R2选自烷基、氨基，所述的烷基、氨基任选进一步被0至3个选自烷基、苯基、羧基、烷氧羰基、氨基甲酰基的取代基所取代；
作为选择当R2为烷基时，其碳链上可含双键和/或三键；
作为选择R2可以其相连的N原子作为氨基形成氨基酸或带有保护基的氨基酸或它们形成的肽链；
R3为H或含有能与固相树脂反应的活性基团(反应位点)的取代基；
X1、X2各自独立地为O或S；
R4为H或烷基。
另一方面，本发明涉及加载有上述式(1)所示化合物或其盐的树脂。
再一方面，本发明涉及上述式(1)所述的化合物或其盐或加载有上述式(1)所示化合物或其盐的树脂的应用。
具体实施方式
为更详细的了解本发明，本发明进行如下详述，但这并不构成对本发明的任何限制。
一方面，本发明涉及如下式(1)的化合物或其盐：
式(1)中R1为氢或氨基保护基；在一些实施方式中，所述氨基保护基包括Fmoc、Boc、Alloc、Dde、ivDde、Trt、Mtt或Mmt。
R2选自烷基、氨基，所述的烷基、氨基任选进一步被0至3个选自烷基、苯基、羧基、烷氧羰基、氨基甲酰基的取代基所取代；优选地，所述烷基为C1～10烷基，例如C1～6烷基、C1～4烷基、正丁基、异丁基、仲丁基、丙基、乙基、甲基等。
作为选择当R2为烷基时，其碳链上可含双键和/或三键；
作为选择R2可以其相连的N原子作为氨基形成氨基酸或带有保护基的氨基酸或它们形成的肽链(亦即以式(1)中与R2相连的N为N端，R2与其形成带保护基或不带保护基的氨基酸，或带保护基或不带保护基的肽链，例如2肽，3肽等)；在一些实施方式中，所述氨基酸或带有保护基的氨基酸为α-氨基酸或带有保护基的α-氨基酸。
在一些实施方式中，R2为CH3(CH2)n-，CH2＝CH-(CH2)p-，Ph-(CH2)r-，NH2-C(＝O)-NH-，C1～6烷基-NH-，/>其中的P为氨基或羟基保护基，多个P可相同或不相同(例如/>为为/>为为/>为/>)；其中，n、p、q、r分别为0～10的整数，(CH2)n、(CH2)p、(CH2)q或(CH2)r中任意一个或多个CH2可被取代，例如被一个或多个烷基取代，该烷基例如为C1～3烷基，例如甲基、乙基等。
在一些实施方式中，R2为甲基、乙基、丙基、正丁基、叔丁基、仲丁基、
在一些实施方式中，R2为乙基、
R3为H或含有能与固相树脂反应的活性基团(反应位点)的取代基；优选地，该取代基为含有羧基、羟基和/或NH2等的取代基。
在一些实施方式中，R3为H或-(CH2)mCOOH，m为选择1～10的整数，(CH2)m中任意一个或多个CH2可被取代，例如被一个或多个烷基取代，该烷基例如为C1～3烷基，例如甲基、乙基等。
在一些实施方式中，R3与X1共同构成-OH、-O(CH2)mCOOH、-SH或-O(CH2)mCOOH。
X1或X2分别为O或S；
在一些实施方式中，X1、X2均为O。
R4为H或烷基，优选地，该烷基为C1～6烷基，例如C1～4烷基、甲基、乙基、正丙基、异丙基等。
本发明的如上化合物可至少按如下路线制备：
上述路线中，Y为离去基团，其余取代基的定义可按如上方式选择，在此不进行赘述。
上述路线中，步骤(a)为亲核取代反应；步骤(b)为还原氨化反应；步骤(c)为氨基保护反应。这些反应的具体条件可按本领域常规技术进行。
上述路线的每步中，如果遇见对反应条件敏感的基团，可先进行保护，随后进行脱保护。
本发明的如上化合物可通过R3加载在固相树脂上，起到类似于多肽固相合成中连接臂的作用，在脱除保护基后式(1)的NH上(框选如下)发上多肽偶联反应，最后通过裂解成多肽碳端为-CONHR2的多肽链(如果R2或偶联形成的肽链中含有保护基可进行脱除后形成目标肽链，肽链的其余部分也可与R2发生环化反应形成环肽等)。
采用本发明式(1)所示的化合物加载在固相树脂上进行多肽合成可简化碳端修饰多肽的合成，扩大固相环化的范围，改变固相树脂的用途，如可以用AM/MBHA或其同等功能的树脂合成碳端是羧基(R2脱除保护后成为羧基)的多肽。并且在树脂改性后，对于多肽合成过程中氨基酸的偶联难易程度有明显的改观(例如在利拉鲁肽的合成中)，能够获得比原来更好的粗品纯度和收率(例如在亮丙瑞林和阿拉瑞林的合成中)。
因此，本发明提供如上所述的化合物(1)加载在固相树脂上通过反应制备碳端含-CONHR2多肽的应用。在一些实施方式中，式(1)具有如下结构：
式(I)～式(XII)中，R1～R4，X1，X2，n，p，q，r，s，t的定义如上所述；
R5选自-CH2COOH、-CH2CH2COOH、-(CH2)4NH2、/>-CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2CONH2、-CH2CH2CONH2、-CH2SH、H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、-(CH2)2SCH3、/>当R5中存在羧基、羟基、-NH2、-NH-、巯基、胍基时，其可被保护基保护，该保护基例如选自Boc、Trt、/>羧基保护基例如为：t-Bu(叔丁基)、All(烯丙基)等；羟基保护基例如为：t-Bu、TMS(三甲基硅基)等；氨基保护基例如为：Fmoc(9-芴甲氧羰基)、Boc(叔丁氧羰基)、Alloc(叔丁氧羰基)、Dde(1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代环己亚基)乙基)等；巯基保护基例如为：Trt(三苯甲基)，Acm(乙酰氨甲基)等。
R6为羧基保护基；在一些实施例中，R6为C1～6烷基，苄基，Boc等。
R7为C1～6烷基。
在一些实施方式中，式(1)具有如下结构：
在一些实施方式中，式(X)具有如下结构：
式(X-1)中R1为H或氨基保护基团；
m为1～10的整数，(CH2)m中任意一个或多个CH2可被取代，例如被一个或多个烷基取代，该烷基例如为C1～3烷基，例如甲基、乙基等。在一些实施方式中，m为2～6的整数，例如2、3、4、5或6。
本发明上述式(X-1)的化合物能加载在固相树脂上，利用该加载上述式(X-1)的固相树脂合成多肽，其能改观氨基酸的偶联的难易程度，获得好的粗品纯度和收率(例如在亮丙瑞林和阿拉瑞林的合成中)。在至少一些实施方式中，式(X-1)的化合物能加载在AM固相树脂或MBHA固相树脂上合成亮丙瑞林多肽，获得好的粗品纯度和收率。
在一些实施方式中，式(X-1)中的氨基保护基团的例子包括但不限于Fmoc、Boc、Alloc、Dde、ivDde、Trt、Mtt或Mmt。即式(X-1)所示的化合物包括但不限于如上的式(xi)～式(xx)。
在至少一个实施方式中，式(X-1)中的氨基保护基团是Fmoc或Boc，即式(X-1)为式(xii)或式(xiii)。由此而获得的有益效果是采用这两个保护基在进行保护反应的过程中选用的原料价格便宜，可商购获得，且反应条件简单，后处理容易。对于Fmoc，其脱除保护基的反应方便，条件温和。
一方面，本发明式(X-1)所示的化合物可按如下合成路线之一制备获得：
合成路线一：
上述合成路线一中，Y为亲核取代离去基团；M为氢或羧基保护基，m的定义如上所述，优选m为2或3；R1为H或氨基保护基，所述氨基保护基例如为Fmoc、Boc、Alloc、Dde、ivDde、Trt、Mtt或Mmt等。
在一些实施方式中，Y为卤素原子或磺酸酯。在一些实施方式中，卤素原子为氯、溴或碘。在一些实施方式中，磺酸酯为甲磺酸酯、乙磺酸酯、苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯。
在一些实施方式中，M为甲基、乙基、叔丁基或苄基。
在一些实施方式中，上述合成路线一中步骤(a)是在碱性条件下进行。
在一些实施方式中，上述合成路线一中步骤(b)是与乙胺或其盐发生还原胺化反应。在一些实施方式中，采用硼氢化钠、氰基硼氢化钠、醋酸硼氢化钠、H2/钯碳、H2/氢氧化钯使步骤(b)发生还原胺化反应。
在一些实施方式中，上述合成路线一中步骤(c)是水解反应。
在一些实施方式中，当R1为氨基保护基时，还进行步骤(d)，采用R1基团保护氨基。本发明采用R1基团保护氨基可采用常规的技术手段，在一些实施方式中，当R1为Fmoc时，采用Fmoc-Osu或Fmoc-Cl在碱性环境下使Fmoc取代氮原子上的氢，以获得式(A-2)所示的化合物。
合成路线二：
Y、M、R1、m的定义如合成路线一，在此不进行赘述。
在一些实施方式中，上述合成路线二中的步骤(a)的反应条件与上述合成路线一中步骤(a)相同。
在一些实施方式中，上述合成路线二中的步骤(b)的反应条件与上述合成路线一中步骤(c)相同。
合成路线三：
R1、M、m的定义如合成路线一，在此不进行赘述。
在一些实施方式中，上述合成路线三中的步骤(a)的反应条件与上述合成路线一中步骤(b)相同。
在一些实施方式中，上述合成路线三中的步骤(b)的反应条件与上述合成路线一中步骤(c)相同。
在一些实施方式中，上述合成路线三中的步骤(c)的反应条件与上述合成路线一中步骤(d)相同。
合成路线四：
Y、M、R1、m的定义同合成路线一。
在一些实施方式中，在上述合成路线四中，步骤(a)发生的是采用的亲核取代反应，或/>的还原氨化反应。在一些实施方式中，/>为卤代乙烷。该发生亲核取代反应的条件与合成路线一中的步骤(a)相同。该还原氨化反应条件与合成路线一中的步骤(b)相同。
在一些实施方式中，上述合成路线四中的步骤(b)的反应条件与上述合成路线一中步骤(c)相同。
在一些实施方式中，上述合成路线四中的步骤(c)的反应条件与上述合成路线一中步骤(d)相同。
另一方面，本发明还提供一种上述式(1)所示的化合物加载的固相树脂，所述固相树脂具有如下结构：
其中，式(1)-树脂中表示固相树脂的本体，式(1)-树脂中的G为上述式(1)中R3中含有的基团与固相树脂侧链上的基团反应形成的连接结构，R’3为R3反应后剩余结构，Z为固相树脂侧链反应后剩余结构，其余取代基的定义同式(1)；优选地，R’3-G-Z为R’3-CONH-Z、R’3-COO-Z(即固相树脂上的活性功能基团为氨基或羟基)；作为选择，R’3-G可以没有，Z直接与X1相连(即固相树脂上的活性功能基团为活性卤，如活性氯)。
在一些实施方式中，式(1)-树脂中的树脂包括AM树脂、MBHA树脂、Sieber树脂、Rink树脂、CTC树脂等。这些树脂都可商购获得。
AM树脂具有如下结构：
其中的NH2通常作为与式(1)中R3的连接基团。R3中通常可带有-COOH等以与其连接。
MBHA树脂具有结构：
其中的NH2通常作为与式(1)中R3的连接基团。R3中通常可带有-COOH等以与其连接。
Sieber树脂具有结构：
其中的NH2通常作为与式(1)中R3的连接基团。R3中通常可带有-COOH等以与其连接。
Rink树脂具有结构：
其中的NH2通常作为与式(1)中R3的连接基团。R3中通常可带有-COOH等以与其连接。
CTC树脂具有结构：
其中的与氯相连的季碳通常作为与式(1)中R3的连接基团，R3中通常可带有-OH、-NH2等以与其连接，或当R3为氢时，该季碳直接与X1相连。
在一些实施方式中，式(1)-树脂具有如下结构：
在一些实施方式中，式(1)-树脂具有如下结构：
在一些实施方式中，在式(i)-树脂～式(vii)-树脂及式(x)～式(xx)-树脂中的树脂选自AM树脂、MBHA树脂、Sieber树脂或Rink树脂，优选为AM树脂、MBHA树脂。
在一些实施方式中，式(viii)-树脂～式(ix)-树脂中的树脂为CTC树脂。
在一些实施方式中，式(X)-树脂具有如下结构：
式(X-1)-树脂中表示固相树脂的本体，Z、R1、m的定义如上所述，在此，不对其进行赘述。
在一些实施方式中，式(X-1)-树脂中的树脂为AM树脂或MBHA树脂。
当为AM固相树脂时，式(X-1)-树脂可具体为：
当为MBHA固相树脂时，式(X-1)-树脂可具体为：
另一方面，本发明提供如上式(1)所示的化合物或其盐，或所述的式(1)-树脂在制备碳端含式(1)中-NR2的目标多肽或其盐中的应用，作为选择该-NR2中的可转化成目的结构或与多肽链的其余部分环合。
在一些实施方式中，所述应用包括如下步骤：
将式(1)所示的化合物加载在起始固相树脂上得到式(1)-树脂或直接提供式(1)-树脂；
式(1)-树脂中各基团的定义如上所述，在此不进行赘述；
当R1为氨基保护基团时，脱除该氨基保护基团暴露NH基团，当R1为氢时，无需脱除；
在暴露的NH基团上采用固相逐步偶联的方法制备全保护肽链的肽树脂；
将全保护肽链从肽树脂上切割下来直接得到目标多肽或其盐或脱除保护基后得到目标多肽或其盐；作为选择，在将全保护肽链从肽树脂切割下来之前可以将该全保护肽链为起始肽进行环合反应以形成环肽；优选地，该全保护肽链中发生环合的反应位点在R2中。
在一些实施方式中，所述目标多肽为亮丙瑞林或其盐，其碳端为-CONHCH2CH3，式(1)-树脂中NR2即为NCH2CH3。
在一些实施方式中，当所述目标多肽为亮丙瑞林或其盐，所述式(1)-树脂为所述式(X-1)-树脂或式(IX)-树脂。在一些实施方式中，所述(X-1)-树脂为式(xi)-树脂至式(xx)-树脂中的任一种。在一些实施方式中，所述式(IX)-树脂为所述式(viii)-树脂，该式(viii)-树脂中的树脂为CTC树脂。在一些实施方式中，式(xi)-树脂至式(xx)-树脂中所述树脂为AM树脂、MBHA树脂、Sieber树脂或Rink树脂等，优选前两种树脂。式(X-1)-树脂的结构例如如下所示，其中R1为氨基保护基：
在至少一些实施方式中，当目标多肽为亮丙瑞林或其盐时，以如下被偶联的氨基酸为反应试剂采用固相逐步偶联的方法在暴露的NH2上依次偶联制备亮丙瑞林的全保护肽的肽树脂：Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-DLeu-OH、Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH、Fmoc-Ser(t-Bu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、H-Glp-OH，得到如下的亮丙瑞林的全保护肽的肽树脂：
Glp-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-DLeu-Leu-Arg(pbf)-Pro-式(1)-树脂；优选为Glp-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-DLeu-Leu-Arg(pbf)-Pro-式(X-1)-树脂；更优选为Glp-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-DLeu-Leu-Arg(pbf)-Pro-式(X-1)-AM树脂、Glp-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-DLeu-Leu-Arg(pbf)-Pro-式(X-1)-MBHA树脂、Glp-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-DLeu-Leu-Arg(pbf)-Pro-式(X-1)-Sieber树脂或Glp-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-DLeu-Leu-Arg(pbf)-Pro-式(X-1)-Rink树脂；
在每步偶联之前脱除连接在树脂上的肽上的Fmoc保护基。
在一些实施方式中，所述目标多肽为阿拉瑞林或其盐，其碳端为-CONHCH2CH3，式(1)-树脂中NHR2即为NHCH2CH3。
在一些实施方式中，当所述目标多肽为阿拉瑞林或其盐，所述式(1)-树脂为所述式(X-1)-树脂或式(IX)-树脂。在一些实施方式中，所述(X-1)-树脂为式(xi)-树脂至式(xx)-树脂中的任一种。在一些实施方式中，所述式(IX)-树脂为式(viii)-树脂，该式(viii)-树脂中的树脂为CTC树脂。在一些实施方式中，式(xi)-树脂至式(xx)-树脂中所述树脂为AM树脂、MBHA树脂、Sieber树脂或Rink树脂等，优选前两种树脂。式(X-1)-树脂的结构如上所述。所述式(IX)-树脂例如如下所示：
/>
式(IX)-CTC树脂中R1为氨基保护基。
在至少一些实施方式中，当目标多肽为阿拉瑞林或其盐时，以如下被偶联的氨基酸为反应试剂采用固相逐步偶联的方法在暴露的NH2上依次偶联制备阿拉瑞林的全保护肽的肽树脂：Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-DAla-OH，Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH，Fmoc-Ser(t-Bu)-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，H-Glp-OH，得到如下的阿拉瑞林的全保护肽的肽树脂：
Glp-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-DAla-Leu-Arg(pbf)-Pro-式(1)-树脂；优选为Glp-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-DAla-Leu-Arg(pbf)-Pro-式(IX)-树脂；更优选为Glp-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-DAla-Leu-Arg(pbf)-Pro-式(IX)-CTC树脂；
在每步偶联之前脱除连接在树脂上的肽上的Fmoc保护基。
在一些实施方式中，所述目标多肽为PMX-53或其盐，其为环肽，所述式(1)-树脂中NR2为其中P1，P2为保护基，优选地，所述NR2为/>
在一些实施方式中，当所述目标多肽为PMX-53或其盐，所述式(1)-树脂为所述式(VI)-树脂。在一些实施方式中，所述式(VI)-树脂为式(ix)-树脂。优选地，该式(ix)-树脂中的树脂为CTC树脂。
在至少一些实施方式中，当目标多肽为PMX-53或其盐时，以如下被偶联的氨基酸为反应试剂采用固相逐步偶联的方法在暴露的NH2上依次偶联，并乙酰化最后被偶联氨基酸上的氨基，以制备PMX-53未环化前的全保护的肽树脂：Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-D-Cha-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Orn(Dde)-OH，Fmoc-Phe-OH，得到如下的PMX-53未环化前的全保护肽的肽树脂：
Ac-Phe-Orn(Dde)-Pro-D-Cha-Trp(Boc)-式(1)-树脂；优选为Ac-Phe-Orn(Dde)-Pro-D-Cha-Trp(Boc)-式(VI)-树脂；更优选为Ac-Phe-Orn(Dde)-Pro-D-Cha-Trp(Boc)-式(ix)-树脂；进一步优选为Ac-Phe-Orn(Dde)-Pro-D-Cha-Trp(Boc)-式(ix)-CTC树脂；
在每步偶联之前脱除连接在树脂上的肽上的Fmoc保护基；
随后脱除All保护基及Dde保护基，再进行环化反应得到PMX-53的全保护肽的肽树脂：
Ac-Phe-c(Orn-Pro-D-Cha-Trp(Boc)-Arg(pbf))-树脂；优选地，该树脂为CTC树脂；
最后裂解脱除保护基得所述PMX-53或其盐。
在一些实施方式中，所述目标多肽为利拉鲁肽或其盐，其碳端为-CONHCH2COOH，所述式(1)-树脂中NR2为NCH2COOP3，所述P3为保护基，优选为叔丁基。
在一些实施方式中，当所述目标多肽为利拉鲁肽或其盐，所述式(1)-树脂为所述式(VI)-树脂。在一些实施方式中，所述式(VI)-树脂为式(x)-树脂。优选地，该式(x)-树脂中的树脂为AM树脂、MBHA树脂、Sieber树脂或Rink树脂等，优选前两种树脂。所述式(VI)-树脂例如如下所示：
在至少一些实施方式中，当目标多肽为利拉鲁肽或其盐时，以如下被偶联的氨基酸为反应试剂采用固相逐步偶联的方法在暴露的NH2上依次偶联制备利拉鲁肽的全保护的肽树脂：moc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Glu(Ot-Bu)-OH，Fmoc-Lys(N-ε-(Palm-Glu-Ot-Bu)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Glu(Ot-Bu)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH，Fmoc-Ser(t-Bu)-OH，Fmoc-Ser(t-Bu)-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Asp(Ot-Bu)-OH，Fmoc-Ser(t-Bu)-OH，Fmoc-Thr(t-Bu)-OH，Fmoc-Thr(t-Bu)-OH，Fmoc-HmbGly-OH，Fmoc-Glu(Ot-Bu)-OH，Fmoc-Ala-OH，Boc-His(Trt)-OH；得到如下的利拉鲁肽的全保护肽的肽树脂：
H-His(Trt)-Ala-Glu(Ot-Bu)-HmbGly-Thr(t-Bu)-Phe-Thr(t-Bu)-Ser(t-Bu)-Asp(Ot-Bu)-Val-Ser(t-Bu)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-Leu-Glu(Ot-Bu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-(Palm-Glu-Ot-Bu))-Glu(Ot-Bu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(pbf)-Gly-Arg(pbf)-式(1)-树脂；优选为H-His(Trt)-Ala-Glu(Ot-Bu)-HmbGly-Thr(t-Bu)-Phe-Thr(t-Bu)-Ser(t-Bu)-Asp(Ot-Bu)-Val-Ser(t-Bu)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-Leu-Glu(Ot-Bu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-(Palm-Glu-Ot-Bu))-Glu(Ot-Bu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(pbf)-Gly-Arg(pbf)-式(VI)-树脂；更优选为H-His(Trt)-Ala-Glu(Ot-Bu)-HmbGly-Thr(t-Bu)-Phe-Thr(t-Bu)-Ser(t-Bu)-Asp(Ot-Bu)-Val-Ser(t-Bu)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-Leu-Glu(Ot-Bu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-(Palm-Glu-Ot-Bu))-Glu(Ot-Bu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(pbf)-Gly-Arg(pbf)-式(x)-树脂；进一步优选为H-His(Trt)-Ala-Glu(Ot-Bu)-HmbGly-Thr(t-Bu)-Phe-Thr(t-Bu)-Ser(t-Bu)-Asp(Ot-Bu)-Val-Ser(t-Bu)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-Leu-Glu(Ot-Bu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-(Palm-Glu-Ot-Bu))-Glu(Ot-Bu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(pbf)-Gly-Arg(pbf)-式(x)-AM树脂；
在每步偶联之前脱除连接在树脂上的肽上的Fmoc保护基。
在一些实施方式中，上述合成各种多肽的反应中的起始固相树脂包括但不限于AM树脂、MBHA树脂、Sieber树脂、Rink树脂、CTC树脂或与其具同等功能的树脂。由此而得的式(1)-树脂例如为式(1)-AM树脂、式(1)-MBHA树脂、式(1)-Sieber树脂、式(1)-Rink树脂或式(1)-CTC树脂。在一些实施方式中，这些树脂的取代度为0.3～2.0mmol/g。
在一些实施方式中，上述合成各种多肽的反应中的采用偶联试剂将式(1)所示的化合物或其盐加载到所述起始固相树脂上。在一些实施方式中，该偶联试剂包括但不限于DIC/HoBt、DIC/Cl-HoBt、DIC/HooBt或DIC/HoAt组合中的一种或多种。在一些实施方式中，这些偶联试剂与所述起始固相树脂中有效反应位点及式(A)化合物的摩尔比为1∶0.5～3.0∶0.5～3.0。这种方式适用于式(1)所示的化合物与树脂之间以酰胺基的方式连接。这些树脂例如可为AM树脂、MBHA树脂、Sieber树脂、Rink树脂等。对于类似于CTC树脂，式(1)所示的化合物通常与其是以直接的-O-键相连，此时，通过亲核取代反应可使式(1)所示的化合物与CTC树脂相连。
在一些实施方式中，上述合成各种多肽的反应在每次偶联氨基酸时，树脂上有效反应位点：被偶联的氨基酸∶偶联试剂的摩尔比例为1.0∶1.5～6.0∶1.5～6.0。
本发明树脂上的有效反应位点的摩尔数可根据常规技术确定，例如根据紫外法测定即可。
在至少一些实施方式中，上述合成各种多肽的反应在每次偶联之前将被偶联的氨基酸反应液在2～8℃下预活化5～15min，反应时间在30min～150min。本发明预活化可将被偶联氨基酸和HoBt、Cl-HoBt、HooBt、HoAt等溶解后，在低温下加入缩合试剂DIC等，进行预活化。采用该方法能获得的有益效果是低温预活化利于抑制氨基酸的消旋；此外，由于原位法生成活性酯需要时间，预活化可以节约反应时间。
本发明在每次氨基酸偶联反应及脱保护基反应中，可采用常规的技术手段监测。在一些实施方式中，氨基酸偶联反应终点及脱保护反应终点采用茚三酮检测/四氯苯醌监测判定。
在一些实施方式中，采用裂解液(所述裂解液一般是指将肽链从树脂上释放的试剂，其可同时或不同时脱除肽链的保护基，当无法脱除肽链上的保护基时，可采用本发明常规的方法脱除这些保护基)将全保护肽从肽树脂上切割释放并同时或不同时脱除保护基得到所述目标多肽或其盐。在至少一个实施方式中，所述裂解液为TFA∶EDT∶H2O＝90～95∶2.5～5∶2.5～5(体积比)。在一些实施方式中，所述裂解液与所述全保护肽的肽树脂比例为6～15ml该裂解液：1g该肽树脂。
在需要脱除保护基时，本发明中的保护基可采用本领域常规的技术手段脱除，在一些实施方式中，Fmoc保护基使用体积分数为20％哌啶/DMF溶液(如每100ml中含有约20ml哌啶及约80ml DMF溶液)或2％哌啶/2％DBU/DMF溶液(如每100ml溶液中含约2ml哌啶，约2ml DBU及约96ml DMF溶液)脱除，例如脱保护5～30min。在一些实施方式中，Trt保护基使用体积分数为80％醋酸/四氢呋喃溶液(如每100ml中含有约80ml醋酸及约20ml四氢呋喃)脱除。在一些实施方式中，ivDde保护基使用体积分数为2.5％水合肼/DMF溶液(如每100ml中含有约2.5ml水合肼及约97.5ml DMF)脱除。在一些实施方式中，Alloc保护基使用四(三苯基膦)钯/DCM溶液脱除。在一些实施方式中，Mtt或Mmt保护基使用2％TFA/DCM溶液(如每100ml中含有约2ml TFA及约98ml DCM)脱除。在一些实施方式中，Boc保护基使用2，6-二甲基吡啶/DCM和TBSOTf/DCM的混合溶液脱除。
在一些实施方式中，将全保护肽从肽树脂上释放并同时脱除保护基直接得到所述目标多肽或其盐之后，还对其进行纯化。纯化可采用本领域常规的技术手段，在一些实施方式中，采用反向制备液相纯化得到目标多肽或其盐的纯品。在一些实施方式中，反向制备液相中的流动相为0.1％TFA/水溶液及0.1％TFA/乙腈溶液，纯化得到的为目标多肽的三氟醋酸盐，为得到目标多肽的醋酸盐，在换盐步骤中反向制备色谱缓冲体系可为0.1～1.0％醋酸/水溶液-乙腈；最后经冻干后得到目标多肽醋酸盐。
本发明偶联试剂表示能引起氨基酸羧基和氨基缩合形成酰胺键的试剂。
本发明裂解液表示多肽合成完成后，将肽链从树脂上释放的试剂，其可同时或不同时脱除肽链的保护基。
本发明部分英文缩写具有如下中文名称，未列的英文缩写遵循固相合成技术领域的解释。
本发明中，利拉鲁肽检测方法：
色谱柱：十八烷基键合硅胶；流动相A：13.6g磷酸二氢钾溶液(pH＝3.5)；流动相B：乙腈∶水＝1∶1；
检测波长：215纳米。
本发明中，阿拉瑞林检测方法：
色谱柱：十八烷基键合硅胶；流动相：0.1mmol/L磷酸溶液(用三乙胺调节pH值至3.0)-乙腈(80∶20)；
运行时间：90分钟；检测波长：220纳米。
本发明中，PMX-53检测方法：
色谱柱：十八烷基键合硅胶；流动相A：0.1％三氟醋酸/水溶液；流动相B：0.1％三氟醋酸/乙腈∶水＝80∶20；
梯度洗脱：49～59％B 20分钟；检测波长：220纳米。
实施例1式(xii)所示化合物的制备
本实施例按如下路线制备式(xii)所示化合物：
(1)化合物xii-1的制备
称取4-甲氧基水杨醛(100g，657mmol，1.0eq)，K2CO3(181g，1314mmol，2.0eq)于1L反应容器中，加入THF(3.0eq，300ml)和4-溴丁酸乙酯(192g(141ml)，985.5mmol，1.5eq)，搅拌并开始加热至反应完全。经后处理及MTBE重结晶，再干燥后得到化合物A-2-1，共155g(收率88.7％，纯度98.67％)。
(2)化合物xii-2的制备
将155g化合物xii-1转移至2L反应瓶中，再加入EtNH2.HCl(59.69g，732mmol，1.5eq)，NaBH3CN(92.0g，1464mmol，3eq)的MeOH溶液，室温搅拌24h，再加入NaOH(48.8g，1220mmol，2.5eq)后搅拌12h。残留物用MTBE萃取一次，除杂质后直接用于下一步。
(3)化合物(xii)的制备
在上述全部步骤(2)所得溶液中加入Na2CO3(52g，488mmol，1.0eq)的四氢呋喃水溶液，最后加入Fmoc-Osu(247g，732mmol，1.5eq)，室温下搅拌至反应完成。经过后处理MTBE重结晶再干燥后得到化合物(xii)，共144g(总收率：44.8％，按起始原料4-甲氧基水杨醛计算，纯度97.84％)。
MW＝489.56ESI，Neg：[2M-2H]-＝977.4。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6，ppm)δ：12.10(brs，1H)，7.87(m，2H)，7.64(d，J＝6.4Hz，1H)，7.51(d，J＝6.5Hz，1H)，7.40(d，J＝6.9Hz，1H)，7.34(d，J＝6.9Hz，1H)，7.26(d，J＝6.85Hz，2H)，6.31-7.50(m，3H)，4.44(dd，J1＝22.45Hz，J2＝4.6Hz，2H)，4.15～4.25(m，，3H)，3.96(d，J＝5.05Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.16(d，J＝5.95Hz，1H)，2.93(d，J＝5.95Hz，1H)，2.93(m，2H)，1.90(s，2H)，0.95(s，1.5H)，0.72(s，1.5H)。
实施例2式(xii)所示的化合物的制备
(1)化合物xii-1的制备
称取4-甲氧基水杨醛(100g，657mmol，1.0eq)，K2CO3(181g，1314mmol，2.0eq)于1L反应容器中，加入THF(3.0eq，300ml)和4-溴丁酸乙酯(192g(141ml)，985.5mmol，1.5eq)，搅拌并开始加热至反应完全。经后处理及MTBE重结晶，再干燥后得到化合物xii-1，共159.3g(收率89.8％，纯度98.80％)。
(2)化合物xii-2的制备
将NaOH(59.8g，1495mmol，2.5eq)的甲醇水溶液加入到含159.3g化合物A-2-1的上述反应瓶中，最后加入EtNH2·HCl(73.14g，897mmol，1.5eq)和Pd/C(22.2g)，H2加压至0.2～20bar，室温25℃搅拌至反应完全，过滤，除去Pd/C，旋干甲醇后残留物用MTBE萃取一次，除杂质后直接用于下一步。
(3)化合物xii的制备
在全部上述步骤(2)所得溶液中加入Na2CO3(63.4g，598mmol，1.0eq)的四氢呋喃水溶液，然后加入Fmoc-Osu(302.3g，897mmol，1.5eq)，室温下搅拌至反应完成。经过后处理MTBE重结晶再干燥后得到化合物xii，共195.2g(总收率：60.7％，以起始原料4-甲氧基水杨醛计算，纯度96.64％)。
MW＝489.56ESI，Neg：[2M-2H]-＝977.3。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6，ppm)δ：12.12(brs，1H)，7.84(m，2H)，7.63(d，J＝6.4Hz，1H)，7.50(d，J＝6.5Hz，1H)，7.41(d，J＝6.9Hz，1H)，7.33(d，J＝6.9Hz，1H)，7.26(d，J＝6.85Hz，2H)，6.31-7.51(m，3H)，4.42(dd，J1＝22.45Hz，J2＝4.6Hz，2H)，4.14～4.25(m，，3H)，3.96(d，J＝5.05Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.16(d，J＝5.95Hz，1H)，2.92(d，J＝5.95Hz，1H)，2.92(m，2H)，1.90(s，2H)，0.95(s，1.5H)，0.72(s，1.5H)。
实施例3式xiii所示化合物的制备
(1)称取4-甲氧基水杨醛(100g，657mmol，1.0eq)，K2CO3(181g，1314mmol，2.0eq)于1L反应容器中，加入THF(3.0eq，300ml)和4-溴丁酸乙酯(192g(141ml)，985.5mmol，1.5eq)，搅拌并开始加热至反应完全。经后处理及MTBE重结晶，再干燥后得到化合物xii-1，共154.6g(收率87.0％，纯度98.47％)。
(2)将NaOH(58.1g，1451.5mmol，2.5eq)的甲醇水溶液加入到含154.6g化合物xii-1的上述反应瓶中，再加入EtNH2·HCl(71.0g，870.9mmol，1.5eq)和Pd/C(22.5g)，H2加压至0.2～20bar，室温25℃搅拌至反应完全，过滤，除去Pd/C，旋干甲醇后残留物用MTBE萃取一次，除杂质后直接用于下一步。
(3)在上步反应所得溶液加入Na2CO3(61.5g，580.6mmol，1.0eq)，于2L反应容器中，加入H2O和THF，最后加入(Boc)2O(139.2g，638.7mmol，1.1eq)，室温下搅拌至反应完成，经过后处理和正向硅胶柱纯化后得到式xiii所示的化合物，共107.3g，(总收率：44.4％，按起始原料4-甲氧基水杨醛计算，纯度98.72％。
MW＝367.44，ESI，Neg：[2M-2H]-＝732.7。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6，ppm)δ：12.15(brs，1H)，6.31～7.50(m，3H)，4.44(dd，J1＝22.45Hz，J2＝4.6Hz，2H)，3.96(d，J＝5.05Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.16(d，J＝5.95Hz，1H)，2.93(d，J＝5.95Hz，1H)，2.93(m，2H)，1.91(s，2H)，0.90-0.95(m，12H)。
按实施例3的操作步骤，分别用Trt-Cl、Mtt-Cl、Mmt-Cl或Alloc-Cl代替(Boc)2O在碱性条件下反应分别得到式(xvii)、式(xviii)、式(xix)、式(xiv)所示的化合物。
按实施例3的操作步骤，用2-乙酰基-5，5-二甲基-1，3-环己二酮(2-acetyldimedone)或DMAB-OH代替在(Boc)2O酸性条件下加热回流得到式(xv)、式(xvi)所示的化合物。
实施例4如下式(xx)所示的化合物的制备
(1)称取4-甲氧基水杨醛(100g，657mmol，1.0eq)，K2CO3(181g，1314mmol，2.0eq)于1L反应容器中，加入THF(3.0eq，300ml)和3-溴丙酸乙酯178g(126ml)，985.5mmol，1.5eq)，搅拌并开始加热。搅拌并开始加热至反应完全。经后处理及MTBE重结晶，再干燥后得到如下中间体142.4g(收率65.5％，纯度98.67％)。
(2)将NaOH(56.4g，1411mmol，2.5eq)的甲醇水溶液加入到含142.4g步骤(1)所得化合物的上述反应瓶中，再加入EtNH2·HCl(69.0g，846.8mmol，1.5eq)和Pd/C(21.4g)，H2加压至0.2～20bar，室温25℃搅拌至反应完全，过滤，除去Pd/C，旋干甲醇后残留物用MTBE萃取一次，除杂质后直接用于下一步。
(3)上述全部溶液中加入Na2CO3(45.6g，564.4mmol，1.0eq)，于2L反应容器中，加入H2O和THF，最后加入Fmoc-Osu(285.3g，846.6mmol，1.5eq)，室温25℃下搅拌至反应完成。经过后处理MTBE重结晶再干燥后得到如下标题化合物xx，共158.35g(总收率：50.1％，按4-甲氧基水杨醛计算，纯度98.74％)。
MW＝475.53ESI，Neg：[2M-2H]-＝949.2。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6，ppm)δ：12.11(brs，1H)，7.88(m，2H)，7.65(d，J＝6.3Hz，1H)，7.52(d，J＝6.3Hz，1H)，7.39(d，J＝6.8Hz，1H)，7.33(d，J＝6.8Hz，1H)，7.27(d，J＝6.9Hz，2H)，6.30～7.50(m，3H)，4.45(dd，J1＝21.45Hz，J2＝4.5Hz，2H)，4.10～4.30(m，3H)，3.99(d，J＝5.15Hz，2H)，3.75(s，3H)，3.18(d，J＝6.05Hz，1H)，2.93(d，J＝6.05Hz，1H)，2.94(m，2H)，0.94(s，1.5H)，0.75(s，1.5H)。
实施例5如下式(viii)所示的化合物的制备
称取4-甲氧基水杨醛(100g，657mmol，1.0eq)，EtNH2·HCl(80g，981mmol，1.5eq)，溶液于800mL水中，溶液浑浊。再加入NaOH(39.36g，981mmol，1.5eq)后，溶液澄清，继续搅拌1h。冰浴条件下加入NaBH3CN(33g，525mmo，0.8eq)反应3h，将反应液倒入乙酸乙酯中，搅拌分液，水相用乙酸乙酯萃取2次后，合并有机相。有机相用饱和食盐水洗涤1次，用无水硫酸钠干燥后粗品126.28g备用。
上述126.28g粗品溶于H2O和THF溶液，加入Na2CO3(73.77g，696mmol，1.0eq)，于反应容器中，加入H2O和THF，最后加入Fmoc-Osu(235g，696mmol，1.0eq)，室温下搅拌至反应完成。经乙酸乙酯重结晶后得到标题式(viii)所示的化合物，共218g(总收率：81.1％，纯度98.64％)。
MW＝403.47ESI，Neg：[2M-2H]-＝804.8。
1H-NMR(500MHz，DMSO，ppm)，δ：9.32(brs，0.7H)，7.89(m，2H)，7.65(d，J＝6.3Hz，1H)，7.52(d，J＝6.3Hz，1H)，7.38(d，J＝6.8Hz，1H)，7.32(d，J＝6.8Hz，1H)，7.27(d，J＝6.9Hz，2H)，6.31～7.49(m，3H)，4.45(dd，J1＝21.45Hz，J2＝4.5Hz，2H)，4.10～4.30(m，，3H)，3.99(d，J＝5.15Hz，2H)，3.75(s，3H)，0.94(s，1.5H)，0.75(s，1.5H)。
实施例6如下式(ix)所示的化合物的制备
本实施例按如下路线合成该化合物：
称取4-甲氧基水杨醛(100g，657mmol，1.0eq)，H-Arg(pbf)-OAll.HCl(493g，981mmol，1.5eq)，溶液于400mL甲醇中，溶液浑浊。再加入三乙胺(66.4g，657mmol，1.0eq)后，溶液澄清，继续搅拌1h。冰浴条件下加入NaBH3CN(33g，525mmo，0.8eq)反应3h，用水稀释后将反应液倒入乙酸乙酯中，搅拌分液，水相用乙酸乙酯萃取2次后，合并有机相。有机相用饱和食盐水洗涤1次，用无水硫酸钠干燥后粗品126.28g备用。
上述126.28g粗品溶于H2O和THF溶液，加入Na2CO3(73.77g，696mmol，1.0eq)，于反应容器中，加入H2O和THF，最后加入Fmoc-Osu(235g，696mmol，1.0eq)，室温25℃下搅拌至反应完成。
经过检测，反应完成后，将溶液倒入柠檬酸水溶液中，用分液漏斗分液。水相用乙酸乙酯萃取一次，合并有机相，直接真空浓缩。再用正向硅胶柱纯化后得到标题化合物ix，共391.4g(总收率：64.5％，纯度98.64％)。
MW＝911.07ESI，Neg：[2M-2H]-＝1820.1。
实施例7式(x)所示的化合物的制备
本实施例按如下路线制备式(x)化合物：
称取4-甲氧基水杨醛(10g，65.7mmol，1.0eq)，K2CO3(18.1g，131.4mmol，2.0eq)于1L反应容器中，加入THF(3.0eq，35ml)和4-溴丁酸乙酯(19.2g，98.6mmol，1.5eq)，搅拌并开始加热至反应完全。经后处理及MTBE重结晶，再干燥后得到化合物xii-1，共15.1g(收率86.3％，纯度98.74％)。
将NaOH(6.0g，150mmol，2.5eq)的甲醇水溶液加入到上述反应瓶中，最后加入H-Gly-OBu-t·HCl(15.1g，90mmol，1.5eq)和Pd/C(3.2g)，H2加压，室温搅拌至反应完全，过滤，除去Pd/C，旋干甲醇后残留物用MTBE萃取一次，除杂质后直接用于下一步。
上述溶液加入Na2CO3(6.0g，56.7mmol，1.0eq)的四氢呋喃水溶液，然后加入Fmoc-Osu(28.73g，85.1mmol，1.5eq)，室温下搅拌至反应完成。经过后处理MTBE重结晶再干燥后得到式x所示的化合物，共22.7g(总收率：58.6％，纯度97.55％)。
MW＝575.65ESI，Neg：[2M-2H]-＝1149.3
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6，ppm)δ：12.12(brs，1H)，7.84(m，2H)，7.63(d，J＝6.4Hz，1H)，7.50(d，J＝6.5Hz，1H)，7.41(d，J＝6.9Hz，1H)，7.33(d，J＝6.9Hz，1H)，7.26(d，J＝6.85Hz，2H)，6.31-7.51(m，3H)，4.55(s，2H)，4.42(dd，J1＝22.45Hz，J2＝4.6Hz，2H)，4.14-4.25(m，3H)，3.73(s，3H)，3.16(d，J＝5.95Hz，1H)，2.92(d，J＝5.95Hz，1H)，2.92(m，2H)，1.90(s，2H)，1.25(s，9H)。
实施例8醋酸亮丙瑞林的制备
本实施例以式(A-2)所示的化合物按如下路线制备亮丙瑞林：
亮丙瑞林全保护肽树脂的制备：
称取AM树脂(9.41g，含5mmol的有效反应位点-NH2，取代度为0.53mmol/g)加入到带夹套的玻璃反应器中，加入100ml DCM溶胀2小时，再抽滤，并用体积分数为5％DIEA/DCM溶液洗涤2次，DMF洗涤两次，加入实施例2中的式(A-2)所示的化合物(4.90g，10mmol)，HoBt(1.35g，10mmol)，再用适量DMF溶解后，加入DIC(1.58ml，10mmol)，在循环水温30℃的夹套反应器中反应2.5小时，反应终点用茚三酮检测液和四氯苯醌检测液分别进行检测，两种检测液检测均呈阴性，说明反应完全。完全反应后，脱除Fmoc保护基，Fmoc基团脱除用体积分数为20％哌啶/DMF溶液脱保护30min。脱除Fmoc后，采用SPPS法依次偶联被保护基保护的氨基酸，依次偶联的氨基酸为：Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-DLeu-OH，Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH，Fmoc-Ser(t-Bu)-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，H-Glp-OH。
在每步偶联之前脱除连接在树脂上的肽上的Fmoc保护基，Fmoc基团脱除用体积分数为20％哌啶/DMF溶液脱保护30min。
每步氨基酸的偶联使用HoBt+DIC作为偶联试剂，多肽树脂上的有效反应位点与待偶联的氨基酸以及偶联试剂的摩尔投料比为1∶3∶3，每次待偶联氨基酸需要在冰水浴中预活化15min左右，即在待偶联氨基酸加入偶联试剂反应，再进行连接。
制得亮丙瑞林的全保护肽树脂如下：
经干燥后得到亮丙瑞林全保护肽树脂21.81g。
亮丙瑞林三氟醋酸盐粗肽的制备：
裂解液的配制：配置裂解液150ml，该裂解液中含三氟乙酸135ml，EDT(1，2-乙二硫醇)7.5ml，纯水7.5ml，摇匀后-20℃冷却30min备用。
将上述制备得到的全保护亮丙瑞林肽树脂21.81g(-20℃预冷30min)，加入到130ml带有磁子的圆底烧瓶中，已预冷的裂解液取出摇匀，加入到烧瓶中，裂解温度在30min上升到30℃，并维持30±2℃搅拌2.5小时，用砂芯漏斗过滤并用少量切割液洗涤树脂。将合并的滤液缓慢导入冷甲基叔丁基醚(-20℃预冷2小时)900ml，倒入过程要保持甲基叔丁基匀速搅拌，出现白色沉淀，用布氏漏斗过滤，并用冷甲基叔丁基醚洗涤滤饼3次，真空抽干得到亮丙瑞林三氟醋酸盐粗肽5.87g(粗肽收率：92.6％，按相对于起始树脂中含5mmol的有效反应位点-NH2计算，粗肽收率是按起始的摩尔数计算理论得到的目标产物的重量，再用实际最终所得重量乘以粗品纯度，再比上理论重量即得粗肽收率，以下收率按相同方法计算)，粗品纯度95.44％。
亮丙瑞林三氟醋酸盐粗肽的纯化：
将上述制备得到的亮丙瑞林三氟醋酸盐粗肽用5％的的乙腈水溶液溶解，溶液用0.45μm的微孔过滤膜过滤，待用。
经反向制备色谱纯化，纯化的条件如下：色谱柱以粒径为10μm，孔径为的C18键合硅胶为固定相。流动相：0.1％TFA/水溶液(流动相A)及0.1％TFA/乙腈溶液(流动相B)。
样品溶液(％) 流动相A(％) 流动相B(％) 时间(min) 流速(ml/min)
100 0 0 / 60
0 71 29 5 60
0 51 49 60 60
0 0 100 5 60
将纯度＞97％的样品收集上样，用0.5％醋酸/水溶液(流动相C)及0.5％醋酸/乙腈溶液(流动相D)进行纯化，运行梯度如下：
样品溶液(％) 流动相C(％) 流动相D(％) 时间(min) 流速(ml/min)
100 0 0 / 60
0 83 17 5 60
0 53 47 60 60
0 0 100 5 60
按照本方案，得到醋酸亮丙瑞林乙腈/水溶液，经旋蒸冻干后得到醋酸亮丙瑞林的成品2.46g(总收率为40.6％，按相对于起始树脂中含5mmol的有效反应位点-NH2计算，采用EP8.0(欧洲药典8.0)检测方法检测，纯度为99.81％，单杂均小于0.15％)，MW：1209.4，ESI-MS，Pos[M+H]+＝1210.5。
如上所述，针对醋酸亮本瑞林的合成方法，CN101195653B公开的总收率为16.5％，纯度为98％，粗品纯度没有提及。高效液相色谱法分离和纯化促黄体素释放激素的研究(陈小芬)公开的粗品纯度为53％，纯化后纯度为85％，纯化收率76％，纯化后纯度低，总收率无法计算。CN1015997325B公开的纯化收率为71％，纯度大于98.5％，粗品纯度及收率没有提及，总收率无法计算。CN102464702B公开的粗品收率15％～25％，纯化收率95％，总收率在14％～24％，纯度99.5％。本发明醋酸亮丙瑞林采用TFA体系(流动相：A：0.1％TFA/H2O；B：0.1％TFA/乙腈；梯度为在20min内由25％A+75％B过渡到35％A+65％B；流速：1mL/min)检测，纯化收率为65％，粗品纯度99.3％，最大单杂0.27％。
实施例9醋酸亮丙瑞林的制备
亮丙瑞林全保护肽树脂的制备：
称取AM树脂(9.41g，含5mmol的有效反应位点-NH2，取代度为0.53mmol/g)加入到带夹套的玻璃反应器中，加入100ml DCM溶胀2小时，再抽滤，并用体积分数为5％DIEA/DCM溶液洗涤2次，DMF洗涤两次。加入实施例3中的化合物A-3(3.67g，10mmol)，HoBt(1.35g，10mmol)，再用适量DMF溶解后，加入DIC(1.58ml，10mmol)，在循环水温30℃的夹套反应器中反应2.5小时，反应终点用茚三酮检测液和四氯苯醌检测液分别进行检测，两种检测液检测均呈阴性，说明反应完全。当反应完全后，脱除Boc保护基，Boc脱保护先加入脱保护液B约40mL，再加入脱保护液A约40mL，脱保护30min，其中脱保护液A：10molar ％2，6-二甲基吡啶/DCM(2.5％2，6-二甲基吡啶/DCM(v/v))；脱保护液B：10molar％TBSOTf/DCM(5％TBSOTf/DCM(v/v))。脱除Boc后，采用SPPS法依次偶联被保护基保护的氨基酸，依次偶联的氨基酸为：Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-DLeu-OH，Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH，Fmoc-Ser(t-Bu)-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，H-Glp-OH。
每步氨基酸的偶联使用HoBt+DIC作为偶联试剂，多肽树脂上的有效反应位点与待偶联的氨基酸以及偶联试剂的摩尔投料比＝1∶3∶3，每次待偶联氨基酸需要在冰水浴中预活化15min左右，即在待偶联氨基酸加入偶联试剂反应，再进行连接。
Fmoc基团脱除用体积分数为20％哌啶/DMF溶液脱保护30min。
制得亮丙瑞林的全保护肽树脂如下：
经干燥后得到亮丙瑞林全保护肽树脂19.26g。亮丙瑞林三氟醋酸盐粗肽的制备：
配置裂解液150ml，该裂解液中含三氟乙酸135ml，EDT(1，2-乙二硫醇)7.5ml，纯水7.5ml，摇匀后-20℃冷却30min备用。
将上述制备得到的全保护亮丙瑞林肽树脂19.26g(-20℃预冷30min)，加入到带有磁子的圆底烧瓶中，预冷好的裂解液取出摇匀，量取135ml加入到烧瓶中，裂解温度在30min上升到30℃，并维持30±2℃搅拌2.5小时，用砂芯漏斗过滤并用少量切割液洗涤树脂。将合并的滤液缓慢导入冷甲基叔丁基醚(-20℃预冷2小时)810ml，倒入过程要保持甲基叔丁基匀速搅拌，出现白色沉淀，用布氏漏斗过滤，并用冷甲基叔丁基醚洗涤滤饼3次，真空抽干得到亮丙瑞林三氟醋酸盐粗肽5.46g(粗肽收率：85.6％，按相对于起始树脂中含5mmol的有效反应位点-NH2计算)，粗肽纯度94.84％。
亮丙瑞林三氟醋酸盐粗肽的纯化：
将上述制备得到的亮丙瑞林三氟醋酸盐粗肽用5％的乙腈水溶液溶解，溶液用0.45μm的微孔过滤膜过滤，待用。
粗品经反向制备色谱纯化，纯化的条件如下：色谱柱以粒径为10μm，孔径为的C18键合硅胶为固定相。流动相：0.1％TFA/水溶液(流动相A)及0.1％TFA/乙腈溶液(流动相B)。
样品溶液(％) 流动相A(％) 流动相B(％) 时间(min) 流速(ml/min)
100 0 0 / 60
0 71 29 5 60
0 51 49 60 60
0 0 100 5 60
将纯度＞97％的样品收集上样，用0.5％醋酸/水溶液(流动相C)及0.5％醋酸/乙腈溶液(流动相D)进行纯化，运行梯度如下：
样品溶液(％) 流动相C(％) 流动相D(％) 时间(min) 流速(ml/min)
100 0 0 / 60
0 83 17 5 60
0 53 47 60 60
0 0 100 5 60
按照本方案，得到醋酸亮丙瑞林乙腈/水溶液，经旋蒸冻干后得到醋酸亮丙瑞林的成品2.02g(总收率为33.4％，按相对于起始树脂中含5mmol的有效反应位点-NH2计算，采用EP8.0(欧洲药典8.0)检测方法检测，纯度为99.67％，单杂均小于0.15％).MW：1209.41，ESI-MS，Pos[M+H]+＝1210.5。
实施例10醋酸亮丙瑞林的制备
亮丙瑞林全保护肽树脂的制备：
称取AM树脂(9.41g，含5mmol的有效反应位点-NH2，取代度为0.53mmol/g)加入到带夹套的玻璃反应器中，加入100ml DCM溶胀2小时，再抽滤，并用体积分数为5％DIEA/DCM溶液洗涤2次，DMF洗涤两次。加入4.76g(10mmol)实施例4中的制备得到的如下化合物：
HoBt(1.35g，10mmol)，再用适量DMF溶解后，加入DIC(1.58ml，10mmol)，在循环水温30℃的夹套反应器中反应2.5小时，反应终点用茚三酮检测液和四氯苯醌检测液分别进行检测，两种检测液检测均呈阴性，说明反应完全。完全反应后，脱除Fmoc保护基，Fmoc基团脱除用体积分数为20％哌啶/DMF溶液脱保护30min。脱除Fmoc后，采用SPPS法依次偶联被保护基保护的氨基酸，依次偶联的氨基酸为：Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-DLeu-OH，Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH，Fmoc-Ser(t-Bu)-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，H-Glp-OH。
每步氨基酸的偶联使用HoBt+DIC作为偶联试剂，多肽树脂上的有效反应位点与待偶联的氨基酸以及偶联试剂的摩尔投料比＝1∶3∶3，每次待偶联氨基酸需要在冰水浴中预活化15min左右，即在待偶联氨基酸加入偶联试剂反应，再进行连接。
偶联过程中，Fmoc基团脱除用体积分数为20％哌啶/DMF溶液脱保护30mins。
制得亮丙瑞林的全保护肽树脂如下：
经干燥后得到亮丙瑞林全保护肽树脂20.95g。
亮丙瑞林三氟醋酸盐粗肽的制备：
配置裂解液150ml，该裂解液中含三氟乙酸135ml，EDT(1，2-乙二硫醇)7.5ml，纯水7.5ml，摇匀后-20℃冷却30min备用。
上述制备得到的全保护亮丙瑞林肽树脂20.95g(-20℃预冷30min)，加入到带有磁子的圆底烧瓶中，将预冷好的的裂解液取出摇匀，加入到烧瓶中，裂解温度在30min上升到30℃，并维持30±2℃搅拌2.5小时，用砂芯漏斗过滤并用少量切割液洗涤树脂。将合并的滤液缓慢导入冷甲基叔丁基醚(-20℃预冷2小时)900ml，倒入过程要保持甲基叔丁基匀速搅拌，出现白色沉淀，用布氏漏斗过滤，并用冷甲基叔丁基醚洗涤滤饼3次，真空抽干得到亮丙瑞林三氟醋酸盐粗肽5.71g(粗肽收率：90.5％，按相对于起始树脂中含5mmol的有效反应位点-NH2计算)，粗肽纯度95.79％。
亮丙瑞林三氟醋酸盐粗肽的纯化：将上述制备得到的亮丙瑞林三氟醋酸盐粗肽用5％的乙腈水溶液溶解，溶液用0.45μm的微孔过滤膜过滤，待用。经反向制备色谱纯化，纯化的条件如下：色谱柱以粒径为10μm，孔径为的C18键合硅胶为固定相。流动相：0.1％TFA/水溶液(流动相A)及0.1％TFA/乙腈溶液(流动相B)。
样品溶液(％) 流动相A(％) 流动相B(％) 时间(min) 流速(ml/min)
100 0 0 / 60
0 71 29 5 60
0 51 49 60 60
0 0 100 5 60
将纯度＞97％的样品收集上样，用0.5％醋酸/水溶液(流动相C)及0.5％醋酸/乙腈溶液(流动相D)进行纯化，运行梯度如下：
样品溶液(％) 流动相C(％) 流动相D(％) 时间(min) 流速(ml/min)
100 0 0 / 60
0 83 17 5 60
0 53 47 60 60
0 0 100 5 60
按照本方案，得到醋酸亮丙瑞林乙腈/水溶液，经旋蒸冻干后得到醋酸亮丙瑞林的成品2.35g(总收率为38.8％，按相对于起始树脂中含5mmol的有效反应位点-NH2计算，采用EP8.0(欧洲药典8.0)检测方法检测，纯度为99.79％，单杂均小于0.15％)，MW：1209.41，ESI-MS，Pos[M+H]+＝1210.4。
实施例11醋酸阿拉瑞林的制备
本实施例按如下路线合成阿拉瑞林：
阿拉瑞林全保护肽树脂的制备：
称取CTC树脂(30g，含36mmol的有效反应位点叔碳Cl，取代度为1.2mmol/g)和式(viii)所示的化合物(14.5g，36mmol，1eq)加入到带夹套的玻璃反应器中，加入300mlDCM，氮气鼓荡，加入DIEA(25ml，144mmol，4eq)。在循环水温30℃的夹套反应器中反应2.5小时，用甲醇封端30min后，DMF×3，MeOH×3洗涤三次，真空抽干得到树脂。测定取代度为0.35mmol/g。
取上述所得连接有式(viii)所示的化合物的树脂(14.28g，含5mmol有效反应位点N-Fmoc，取代度为0.35mmol/g)加入到带夹套的玻璃反应器中，加入150ml DMF溶胀120min，采用20％哌啶溶液脱保护30min，脱除Fmoc基团。脱除Fmoc后，采用SPPS法依次偶联被保护基保护的氨基酸，依次偶联的氨基酸为：Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-DAla-OH，Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH，Fmoc-Ser(t-Bu)-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，H-Glp-OH。
每步氨基酸的偶联用HoBt+DIC作为偶联试剂，多肽树脂的有效反应位点与被偶联的氨基酸以及偶联试剂的摩尔投料比＝1∶3∶3每次偶联的反应液需要在冰水浴中预活化15min左右，再进行连接。偶联过程中，Fmoc基团脱除用体积分数为20％哌啶溶液脱保护30min。
制得阿拉瑞林的全保护肽树脂如下：
经干燥后得到阿拉瑞林全保护肽树脂90.3g。
阿拉瑞林三氟醋酸盐粗肽的制备：
配置裂解液200ml，该裂解液中含三氟乙酸180ml，EDT(1，2-乙二硫醇)10ml，纯水10ml，摇匀后-20℃冷却30min备用。
称取上述制备的全保护阿拉瑞林肽树脂30.1g(-20℃预冷30min)，加入到带有磁子的圆底烧瓶中，将预冷的裂解液取出摇匀，量取180ml加入到烧瓶中，裂解温度在30min上升到30℃，并维持30±2℃搅拌2.5小时，用砂芯漏斗过滤并用少量切割液洗涤树脂。将合并的滤液缓慢倒入冷甲基叔丁基醚(-20℃预冷2hrs)1000ml，倒入过程要保持甲基叔丁基匀速搅拌，出现白色沉淀，用布氏漏斗过滤，并用冷甲基叔丁基醚洗涤滤饼3次，真空抽干得到阿拉瑞林三氟醋酸盐粗肽10.78g(粗品收率：88.84％，以相对于连接有式(viii)所示的化合物的树脂中含5mmol的有效反应位点N-Fmoc计算，按照如上EP(8.0)检测方法，粗品纯度96.14％)。
阿拉瑞林三氟醋酸盐粗肽的纯化：
将上述制备得到的阿拉瑞林三氟醋酸盐粗肽用5％的乙腈水溶液溶解，溶液用0.45μm的微孔过滤膜过滤，待用。
经反向制备色谱纯化，纯化的条件如下：色谱柱以粒径为10μm，孔径为的C18键合硅胶为固定相。流动相：0.1％TFA/水溶液(流动相A)及0.1％TFA/乙腈溶液(流动相B)。
将纯度＞97％的样品收集上样，用0.5％醋酸/水溶液(流动相C)及0.5％醋酸/乙腈溶液(流动相D)进行纯化，运行梯度如下：
按照本方案，得到醋酸阿拉瑞林乙腈/水溶液，经旋蒸冻干后得到醋酸阿拉瑞林的成品4.16g。(总收率为35.5％，按相对于连接有式(viii)所示的化合物的树脂中含5mmol的有效反应位点N-Fmoc计算；采用EP8.0(欧洲药典8.0)检测方法检测，纯度为99.76％，单杂均小于0.15％)。MW：1167.34，ESI-MS，Pos[M+H]+＝1168.4。
实施例12 PMX-53的制备
本实施例按如下路线合成PMX-53：
式(ix)-CTC树脂的制备：
称取CTC树脂10g(含10mmol的有效反应位点叔碳Cl，取代度为1.0mmol/g，1eq)到干燥的250mL烧瓶中，加入式(ix)所示的化合物(12.36g，15mmol，1.5eq)，无水DCM 100mL，在摇床上震荡10min，缓慢加入DIEA(7mL，40mmol，4eq)，边加边震荡。待DIEA加完后，摇床上室温反应12.5小时。再加入MeOH 10mL，摇床上反应30min，将混合液转移至砂芯反应器中，用DMF和MeOH分别洗涤3次，真空抽干30min，再转移至干燥箱中30℃真空干燥16h，得到式(ix)-CTC树脂13.2g，紫外分光光度计测定取代度0.36mmol/g。
PMX-53线性全保护肽树脂的制备：
取式(ix)-CTC树脂(2.78g，含有1mmol有效反应位点N-Fmoc，取代度为0.36mmol/g)加入到带夹套的玻璃反应器中，加入30mL DMF溶胀60min，采用体积分数为20％哌啶溶液脱Fmoc保护30min。脱除Fmoc后，采用SPPS法依次偶联被保护基保护的氨基酸，依次偶联的氨基酸为：Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-D-Cha-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Orn(Dde)-OH，Fmoc-Phe-OH。然后采用乙酸酐乙酰化。
偶联过程中，Fmoc基团的脱除用体积分数为20％哌啶DMF溶液脱保护30min。
每步氨基酸的偶联用HoBt+DIC作为偶联试剂，多肽树脂的有效反应位点与被偶联的氨基酸以及偶联试剂的摩尔投料比＝1∶3∶3，每次偶联反应液需要在冰水浴中预活化15min左右，再进行连接。制得PMX-53的全保护线性肽树脂如下：
经干燥后得到阿拉瑞林全保护肽树脂3.70g。
PMX-53环化肽树脂的制备：
脱除All保护基：将全部上述线性肽肽树脂转移至砂芯反应器中，加入DMF 40ml溶胀30min，再用DCM洗涤两次。然后用30ml DCM做溶剂，加入四(三苯基膦)钯0.12g(0.1mmol，0.1eq)，苯基硅烷1.2ml(10mmol，10eq)反应15min。重复该反应3次后，用0.5％DIEA/DMF和0.5％二乙基二硫代氨基甲酸钠/DMF洗涤5次后，用DMF洗涤3次。
脱除Dde保护基：将2.5％水合肼/DMF溶液30ml，加入到上述反应器中，反应1h后用DMF洗涤5次。
PMX-53环化全保护肽肽树脂的制备：
将DMF 25ml加入到上述反应器中，加入PyBop 1.56g(3mmol，3eq)，DIEA 1.05ml(6mmol，6eq)，室温下反应60min后，取少量树脂洗涤后进行茚三酮检测呈阴性。用DMF，MeOH分别洗涤3次后，真空抽干，得到环化全保护肽的肽树脂3.34g。
PMX-53三氟醋酸盐粗肽的制备：
配置裂解液30ml，该裂解液中含三氟乙酸27ml，EDT(1，2-乙二硫醇)1.5ml，纯水1.5ml，摇匀后-20℃冷却30min备用。
将制备得到的环化全保护肽肽树脂3.34g(-20℃预冷30min)，加入到50ml离心管中，将预冷的裂解液取出摇匀，量取24ml加入到离心管中，室温下摇床震荡3小时，用砂芯漏斗过滤并用少量切割液洗涤树脂。将合并的滤液缓慢倒入冷甲基叔丁基醚(-20℃预冷2小时)180ml，倒入过程要保持甲基叔丁基匀速搅拌，出现白色沉淀，用离心机离心分离上清液，并用冷甲基叔丁基醚洗涤沉淀3次，真空抽干得到PMX-53三氟醋酸盐粗肽0.78g(粗品收率：87.3％，以相对于连接有式(ix)所示的化合物的树脂中含lmmol的有效反应位点N-Fmoc计算，粗品纯度85.24％)。
PMX-53三氟醋酸盐粗肽的纯化：
将制备得到的PMX-53三氟醋酸盐粗肽用5％的乙腈水溶液溶解，溶液用0.45μm的微孔过滤膜过滤，待用。
经反向制备色谱纯化，纯化条件如下：色谱柱以粒径为10μm，孔径为的C18键合硅胶为固定相。流动相：0.1％TFA/水溶液(流动相A)及0.1％TFA/乙腈溶液(流动相B)。
按照本方案，得到PMX-53的三氟醋酸盐乙腈/水溶液，冻干后得到PXM-53的成品0.42g。(总收率为46.4％，以相对于连接有式(ix)所示的化合物的树脂中含1mmol的有效反应位点N-Fmoc计算；采用EP8.0(欧洲药典8.0)检测方法检测，纯度为99.12％，单杂均小于0.2％)。MW＝896.09 ESI，Neg：[M+H]+＝897.2。
实施例13醋酸利拉鲁肽的制备
利拉鲁肽全保护肽树脂的制备：
称取AM树脂(1.69g，含1mmol的有效反应位点-NH2，取代度为0.59mmol/g)加入到带夹套的玻璃反应器中，加入20ml DCM溶胀2小时，再抽滤，并用5％DIEA/DCM溶液洗涤2次，DMF洗涤两次。加入式(x)所示的化合物(1.15g，2mmol)，HoBt(0.27g，2mmol)，再用适量DMF溶解后，加入DIC(0.315ml，10mmol)。在循环水温30℃的夹套反应器中反应2.5小时，反应终点用茚三酮检测液和四氯苯醌检测液分别进行检测，两种检测液检测均呈阴性，说明反应完全。反应完全后，采用20％哌啶DMF溶液脱Fmoc保护30min。脱除Fmoc后，采用SPPS法依次偶联被保护基保护的氨基酸，依次偶联的氨基酸为：
moc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Glu(Ot-Bu)-OH，Fmoc-Lys(N-ε-(Palm-Glu-Ot-Bu)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Glu(Ot-Bu)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH，Fmoc-Ser(t-Bu)-OH，Fmoc-Ser(t-Bu)-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Asp(Ot-Bu)-OH，Fmoc-Ser(t-Bu)-OH，Fmoc-Thr(t-Bu)-OH，Fmoc-Thr(t-Bu)-OH，Fmoc-HmbGly-OH，Fmoc-Glu(Ot-Bu)-OH，Fmoc-Ala-OH，Boc-His(Trt)-OH。
每步氨基酸的偶联使用HoBt+DIC作为偶联试剂，多肽树脂的有效反应位点与被偶联的氨基酸以及偶联试剂的摩尔投料比＝1∶3∶3，每次偶联反应液需要在冰水浴中预活化15min左右，再进行连接。
偶联过程中，Fmoc基团脱除用20％哌啶DMF溶液脱保护30min。
经上述反应，得到利拉鲁肽的全保护肽肽树脂：
经干燥后得到利拉鲁肽全保护肽树脂9.12g。
利拉鲁肽三氟醋酸盐粗肽的制备：
裂解液的配制：配置裂解液100ml，该裂解液中含三氟乙酸90ml，EDT(1，2-乙二硫醇)5ml，纯水5ml，摇匀后-20℃冷却30min备用。
将上述制备得到的全保护利拉鲁肽肽树脂9.12g(-20℃预冷30min)，加入到250ml带有磁子的圆底烧瓶中，已预冷的裂解液取出摇匀，加入到烧瓶中，裂解温度在30min上升到30℃，并维持30±2℃搅拌2.5小时，用砂芯漏斗过滤并用少量三氟乙酸洗涤树脂。将合并的滤液缓慢倒入冷甲基叔丁基醚(-20℃预冷2小时)600ml，倒入过程要保持甲基叔丁基匀速搅拌，出现白色沉淀，用布氏漏斗过滤，并用冷甲基叔丁基醚洗涤滤饼3次，真空抽干得到利拉鲁肽三氟醋酸盐粗肽3.72g(粗肽收率：66.9％，以起始AM树脂中含的1mmol有效反应位点-NH2计算)，粗品纯度67.45％。
利拉鲁肽三氟醋酸盐粗肽的纯化：
将上述制备得到的利拉鲁肽三氟醋酸盐粗肽用5％的乙腈水溶液溶解，溶液用0.45μm的微孔过滤膜过滤，待用。
经反向制备色谱纯化，纯化的条件如下：色谱柱以粒径为7μm，孔径为的C8键合硅胶为固定相。流动相：0.1％TFA/水溶液(流动相A)及0.1％TFA/乙腈溶液(流动相B)。
样品溶液(％) 流动相A(％) 流动相B(％) 时间(min) 流速(ml/min)
100 0 0 / 60
0 46 54 5 60
0 26 74 60 60
0 0 100 5 60
将纯度＞97％的样品收集上样，用0.5％醋酸/水溶液(流动相C)及0.5％醋酸/乙腈溶液(流动相D)进行纯化，运行梯度如下：
样品溶液(％) 流动相C％) 流动相D(％) 时间(min) 流速(ml/min)
100 0 0 / 60
0 55 45 5 60
0 5 95 60 60
0 0 100 5 60
按照本方案，得到醋酸利拉鲁肽乙腈/水溶液，经旋蒸冻干后得到利拉鲁肽醋酸盐的成品0.68g(总收率为18.1％，以起始AM树脂中含的1mmol有效反应位点-NH2计算；采用EP8.0(欧洲药典8.0)检测方法检测，纯度为99.21％，单杂均小于0.15％)，MW：3751.20，MODI-TOF，[M+H]+＝3752.4。
最后说明的是：以上实施例仅用于说明本发明的实施过程和特点，而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，均应涵盖在本发明的保护范围当中。

Claims (17)

1.如下式(1)的化合物或其盐：
式(1)中R1为氨基保护基；
R2和R3选自以下组合之一：
i)R2为R3为H；
ii)R2为R3为-(CH2)3COOH；
X1、X2各自独立地为O；
R4为甲基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中，所述化合物选自以下化合物：
3.权利要求1或2所述的化合物或其盐的合成方法，其中，所述化合物按如下合成路线制备：
其中，Y为离去基团，其余取代基的定义如权利要求1所述；
步骤(a)为亲核取代反应；步骤(b)为还原氨化反应；步骤(c)为氨基保护反应。
4.一种权利要求1或2所述的式(1)所示的化合物或其盐加载的固相树脂，所述固相树脂具有如下结构：
其中，式(1)-树脂中表示固相树脂的本体，式(1)-树脂中的G为权利要求1或2所述的式(1)中R3含有的基团与固相树脂侧链上的基团反应形成的连接结构，R’3为R3反应后剩余结构，Z为固相树脂侧链反应后剩余结构，其余取代基的定义同式(1)。
5.根据权利要求4所述的固相树脂，其中，R’3-G-Z为R’3-CONH-Z或R’3-COO-Z。
6.根据权利要求4所述的固相树脂，其中，R’3-G不存在，Z直接与X1相连。
7.根据权利要求4所述的固相树脂，其中，式(1)-树脂具有如下结构：
8.根据权利要求7所述的固相树脂，其中，在式(x)-树脂中的树脂选自AM树脂、MBHA树脂、Sieber树脂或Rink树脂。
9.根据权利要求8所述的固相树脂，其中，所述树脂为AM树脂或MBHA树脂。
10.根据权利要求7所述的固相树脂，其中，式(viii)-树脂或式(ix)-树脂中的树脂为CTC树脂。
11.权利要求1或2所述的式(1)所示的化合物或其盐，或权利要求5-10中任一项所述的式(1)-树脂在制备碳端含式(1)中-NHR2的目标多肽或其盐中的应用。
12.根据权利要求11所述的应用，其包括如下步骤：
将式(1)所示的化合物加载在起始固相树脂上得到式(1)-树脂或直接提供式(1)-树脂；
式(1)-树脂中各基团的定义同权利要求5至10中任一项所述；
当R1为氨基保护基团时，脱除该氨基保护基团暴露NH基团；当R1为氢时，无需脱除；
在暴露的NH基团上采用固相逐步偶联的方法制备全保护肽链的肽树脂；
将全保护肽链从肽树脂上切割下来直接得到目标多肽或其盐或脱除保护基后得到目标多肽或其盐；
当所述目标多肽为亮丙瑞林或其盐，其碳端为-NHCH2CH3，式(1)-树脂中NHR2即为NHCH2CH3；
当所述目标多肽为阿拉瑞林或其盐，其碳端为-NCH2CH3，式(1)-树脂中NR2即为NCH2CH3；
当所述目标多肽为PMX-53或其盐，其为环肽，所述式(1)-树脂中NR2为
当所述目标多肽为利拉鲁肽或其盐时，其碳端为-NCH2COOH，所述式(1)-树脂中NR2为NCH2COOP，所述P为叔丁基。
13.根据权利要求12所述的应用，其中，在将全保护肽链从肽树脂切割下来之前将该全保护肽链为起始肽进行环合反应以形成环肽。
14.根据权利要求12所述的应用，其中，当目标多肽为亮丙瑞林或其盐时，以如下被偶联的氨基酸为反应试剂采用固相逐步偶联的方法在暴露的NH上依次偶联制备亮丙瑞林的全保护肽的肽树脂：Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-DLeu-OH、Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH、Fmoc-Ser(t-Bu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、H-Glp-OH，得到如下的亮丙瑞林的全保护九肽的肽树脂：
Glp-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-DLeu-Leu-Arg(pbf)-Pro-式(1)-树脂，
在每步偶联之前脱除连接在树脂上的肽上的Fmoc保护基。
15.根据权利要求12所述的应用，其中，当目标多肽为阿拉瑞林或其盐时，以如下被偶联的氨基酸为反应试剂采用固相逐步偶联的方法在暴露的NH2上依次偶联制备阿拉瑞林的全保护肽的肽树脂：Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-DAla-OH，Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH，Fmoc-Ser(t-Bu)-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，H-Glp-OH，得到如下的阿拉瑞林的全保护肽的肽树脂：
Glp-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-DAla-Leu-Arg(pbf)-Pro-式(1)-树脂；
在每步偶联之前脱除连接在树脂上的肽上的Fmoc保护基。
16.根据权利要求12所述的应用，其中，当目标多肽为PMX-53或其盐时，以如下被偶联的氨基酸为反应试剂采用固相逐步偶联的方法在暴露的NH2上依次偶联，并乙酰化最后被偶联氨基酸上的氨基，以制备PMX-53未环化前的全保护的肽树脂：Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-D-Cha-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Orn(Dde)-OH，Fmoc-Phe-OH，得到如下的PMX-53未环化前的全保护肽的肽树脂：
Ac-Phe-Orn(Dde)-Pro-D-Cha-Trp(Boc)-式(1)-树脂；
在每步偶联之前脱除连接在树脂上的肽上的Fmoc保护基；
随后脱除All保护基及Dde保护基，再进行环化反应得到PMX-53的全保护肽的肽树脂：
Ac-Phe-c(Orn-Pro-D-Cha-Trp(Boc)-Arg(pbf))-树脂；
最后裂解脱除保护基得所述PMX-53或其盐。
17.根据权利要求12所述的应用，其中，当目标多肽为利拉鲁肽或其盐时，以如下被偶联的氨基酸为反应试剂采用固相逐步偶联的方法在暴露的NH上依次偶联制备利拉鲁肽的全保护的肽树脂：Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Glu(Ot-Bu)-OH，Fmoc-Lys(N-ε-(Palm-Glu-Ot-Bu)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Glu(Ot-Bu)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH，Fmoc-Ser(t-Bu)-OH，Fmoc-Ser(t-Bu)-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Asp(Ot-Bu)-OH，Fmoc-Ser(t-Bu)-OH，Fmoc-Thr(t-Bu)-OH，Fmoc-Thr(t-Bu)-OH，Fmoc-HmbGly-OH，Fmoc-Glu(Ot-Bu)-OH，Fmoc-Ala-OH，Boc-His(Trt)-OH；得到如下的利拉鲁肽的全保护肽的肽树脂：
H-His(Trt)-Ala-Glu(Ot-Bu)-HmbGly-Thr(t-Bu)-Phe-Thr(t-Bu)-Ser(t-Bu)-Asp(Ot-Bu)-Val-Ser(t-Bu)-Ser(t-Bu)-Tyr(t-Bu)-Leu-Glu(Ot-Bu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-(Palm-Glu-Ot-Bu))-Glu(Ot-Bu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(pbf)-Gly-Arg(pbf)-式(1)-树脂；
在每步偶联之前脱除连接在树脂上的肽上的Fmoc保护基。
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