CN108752416A - 氨基酸多肽的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种氨基酸多肽的制备方法，制备过程包括：称量50‑70g树脂投入到多肽固相合成管中，加入70‑90毫升的DMF溶胀半小时以上，抽掉DMF，用脱保护液进行Fmoc去保护反应，10min于摇床，抽掉去保护液，用DMF、DCM洗涤3次，从反应器中取5～10mg树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测并记录颜色，准备投料，进入氨基酸缩合反应，分别按照SEQ.1‑SEQ.N肽的氨基酸序列顺序取氨基酸：HBTU＝1:1，用反应液溶解，投入到反应器中，搅拌反应3‑5小时后，从反应器中取少量树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测，抽掉反应器中的液体，用DMF、DCM各洗涤2次，得到第一个氨基酸缩合后的肽树脂。

Description

氨基酸多肽的制备方法
技术领域
本发明涉氨基酸多肽的制备方法，属于化学合成领域。
技术背景
多肽是α－氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽，同理类推还有三肽、四肽、五肽等。通常由三个或三个以上氨基酸分子脱水缩合而成的化合物都可以成为叫多肽。
一般肽中含有的氨基酸的数目为二到九,根据肽中氨基酸的数量的不同,肽有多种不同的称呼：由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽，同理类推还有三肽、四肽、五肽等,一直到九肽。通常由10～100氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫多肽，它们的分子量低于10,000Da(Dalton，道尔顿)，能透过半透膜，不被三氯乙酸及硫酸铵所沉淀。也有文献把由2～10个氨基酸组成的肽称为寡肽(小分子肽)；10～50个氨基酸组成的肽称为多肽；由50个以上的氨基酸组成的肽就称为蛋白质,换言之,蛋白质有时也被称为多肽。多肽也简称为肽，是20世纪被发现的。
发明内容
本发明涉及氨基酸多肽的制备方法，制备过程包括：称量50-70g树脂投入到多肽固相合成管中，加入70-90毫升的DMF溶胀半小时以上，抽掉DMF，用脱保护液进行Fmoc去保护反应，10min于摇床，抽掉去保护液，用DMF、DCM洗涤3次，从反应器中取5～10mg树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测并记录颜色，准备投料，进入氨基酸缩合反应，分别按照SEQ.1-SEQ.N肽的氨基酸序列顺序取氨基酸：HBTU＝1:1，用反应液溶解，投入到反应器中，搅拌反应3-5小时后，从反应器中取少量树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测，抽掉反应器中的液体，用DMF、DCM各洗涤2次，得到第一个氨基酸缩合后的肽树脂，对所得肽树脂重复进行以上“Fmoc去保护——氨基酸缩合”反应步骤，至最后一个氨基酸反应完毕，得到序列号为SEQ ID NO.1–N+1的肽，反应完毕后，DMF、DCM各洗涤树脂2-3次，甲醇洗两次，继续抽干15-20min，反应器中取出合成完的肽树脂，在室温下于裂解液中裂解两小时，将树脂过滤后，于旋蒸仪蒸干，用无水乙醚(冰浴)洗3次。
本发明的有益效果是：制备工艺简易环保，成本低，适用范围广。
具体实施方式
以下结合具体的实施例对本发明中的原理和特征进行描述，所举实例只是为了对本发明进一步的解释说明，并非用来限定本发明的范围。
实施例1
称量50g树脂投入到多肽固相合成管中，加入70毫升的DMF溶胀半小时以上，抽掉DMF，用脱保护液进行Fmoc去保护反应，10min于摇床，抽掉去保护液，用DMF、DCM洗涤3次，从反应器中取5mg树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测并记录颜色，准备投料，进入氨基酸缩合反应，分别按照SEQ.1-SEQ.N肽的氨基酸序列顺序取氨基酸：HBTU＝1:1，用反应液溶解，投入到反应器中，搅拌反应3小时后，从反应器中取少量树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测，抽掉反应器中的液体，用DMF、DCM各洗涤2次，得到第一个氨基酸缩合后的肽树脂，对所得肽树脂重复进行以上“Fmoc去保护——氨基酸缩合”反应步骤，至最后一个氨基酸反应完毕，得到序列号为SEQ ID NO.1–N+1的肽，反应完毕后，DMF、DCM各洗涤树脂2次，甲醇洗两次，继续抽干15min，反应器中取出合成完的肽树脂，在室温下于裂解液中裂解两小时，将树脂过滤后，于旋蒸仪蒸干，用无水乙醚(冰浴)洗3次。
实施例2
称量70g树脂投入到多肽固相合成管中，加入90毫升的DMF溶胀半小时以上，抽掉DMF，用脱保护液进行Fmoc去保护反应，10min于摇床，抽掉去保护液，用DMF、DCM洗涤3次，从反应器中取10mg树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测并记录颜色，准备投料，进入氨基酸缩合反应，分别按照SEQ.1-SEQ.N肽的氨基酸序列顺序取氨基酸：HBTU＝1:1，用反应液溶解，投入到反应器中，搅拌反应5小时后，从反应器中取少量树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测，抽掉反应器中的液体，用DMF、DCM各洗涤2次，得到第一个氨基酸缩合后的肽树脂，对所得肽树脂重复进行以上“Fmoc去保护——氨基酸缩合”反应步骤，至最后一个氨基酸反应完毕，得到序列号为SEQ ID NO.1–N+1的肽，反应完毕后，DMF、DCM各洗涤树脂3次，甲醇洗两次，继续抽干20min，反应器中取出合成完的肽树脂，在室温下于裂解液中裂解两小时，将树脂过滤后，于旋蒸仪蒸干，用无水乙醚(冰浴)洗3次。
实施例3
称量60g树脂投入到多肽固相合成管中，加入80毫升的DMF溶胀半小时以上，抽掉DMF，用脱保护液进行Fmoc去保护反应，10min于摇床，抽掉去保护液，用DMF、DCM洗涤3次，从反应器中取8mg树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测并记录颜色，准备投料，进入氨基酸缩合反应，分别按照SEQ.1-SEQ.N肽的氨基酸序列顺序取氨基酸：HBTU＝1:1，用反应液溶解，投入到反应器中，搅拌反应4小时后，从反应器中取少量树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测，抽掉反应器中的液体，用DMF、DCM各洗涤2次，得到第一个氨基酸缩合后的肽树脂，对所得肽树脂重复进行以上“Fmoc去保护——氨基酸缩合”反应步骤，至最后一个氨基酸反应完毕，得到序列号为SEQ ID NO.1–N+1的肽，反应完毕后，DMF、DCM各洗涤树脂3次，甲醇洗两次，继续抽干20min，反应器中取出合成完的肽树脂，在室温下于裂解液中裂解两小时，将树脂过滤后，于旋蒸仪蒸干，用无水乙醚(冰浴)洗3次。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不是用于限制本发明范围，凡是在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均已该包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.氨基酸多肽的制备方法，其特征在于，制备过程包括：称量50-70g树脂投入到多肽固相合成管中，加入70-90毫升的DMF溶胀半小时以上，抽掉DMF，用脱保护液进行Fmoc去保护反应，10min于摇床，抽掉去保护液，用DMF、DCM洗涤3次，从反应器中取5～10mg树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测并记录颜色，准备投料，进入氨基酸缩合反应，分别按照SEQ.1-SEQ.N肽的氨基酸序列顺序取氨基酸：HBTU＝1:1，用反应液溶解，投入到反应器中，搅拌反应3-5小时后，从反应器中取少量树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测，抽掉反应器中的液体，用DMF、DCM各洗涤2次，得到第一个氨基酸缩合后的肽树脂，对所得肽树脂重复进行Fmoc去保护——氨基酸缩合反应步骤，至最后一个氨基酸反应完毕，得到序列号为SEQ ID NO.1–N+1的肽，反应完毕后，DMF、DCM各洗涤树脂2-3次，甲醇洗两次，继续抽干15-20min，反应器中取出合成完的肽树脂，在室温下于裂解液中裂解两小时，将树脂过滤后，于旋蒸仪蒸干，用无水乙醚冰浴洗3次。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，反应时间为3-5小时。
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