CN110240580A - 一种利用低共熔溶剂制备丹参提取物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种利用低共熔溶剂制备丹参提取物的方法，将丹参粉末加入低共熔溶剂水溶液中，于25‑75℃、50‑200W下超声提取15‑60min，离心，取上清液，即为丹参提取物；所述低共熔溶剂水溶液中低共熔溶剂由氢键供体与氢键受体和/或去离子水混合而成。本发明提供一种高效、绿色的利用低共熔溶剂制备丹参提取物的方法，该方法可同时提取丹酚酸B、丹参酮IIA及隐丹参酮三种化合物，其中对丹酚酸B的提取率较水提物高46.0％，而水提物中检测不到丹参酮IIA与隐丹参酮。本方法具有所需时间短，能耗低，绿色环保的特点。本发明通过引入天然低共熔溶剂制备中药提取物，为中药活性成分提取、中药炮制提供的新的研发思路。

Description

一种利用低共熔溶剂制备丹参提取物的方法
(一)技术领域
本发明涉及一种丹参提取物的制备方法。
(二)背景技术
丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根茎，是一种历史悠久的临床常用活血化瘀类中药，也是现代医学研究中最受关注的中药之一。2015年版《中国药典》(一部)中收载的含丹参的成方制剂就达146种，常见中成药如丹红注射液、复方丹参滴丸等均以丹参为主要药味。
丹参的主要化学成分包括水溶性酚酸类、丹参酮类，以及其他含量较低的成分如萜类、生物碱类等。其中丹酚酸B和丹参酮IIA含量较高，在《中国药典》(2015版)、《欧洲药典》(EP8.0)、《美国药典》(USP40)中均为质量标志物。其中《中国药典》(2015版)规定丹酚酸B的含量≥3.0％(干燥品)，丹参酮类(丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮I)含量≥0.25％(干燥品)。而《欧洲药典》(EP8.0)和《美国药典》(USP40)则进一步规定了丹参酮IIA的含量≥0.12％和0.1％(干燥品)。
提取制备是中药生产过程的关键环节之一，提取溶剂的选取则对该环节的效果起到决定性作用。提取溶剂不仅有关活性成分的提取效率，还对中药质量、安全起着不可忽视的作用。目前在中药生产、研究中，常用的提取溶剂是水和醇类溶剂(不同比例的乙醇)。这两类溶剂有着原料易得、毒副作用小等优点，但也存在着极性区间较窄、对某些类别的活性成分提取能力弱等问题亟待解决。
具体于丹参提取制备而言，则表现为两类质量标志物丹酚酸B、丹参酮IIA无法同时提取，提取物制备时间长等。
(三)发明内容
本发明目的是提供一种高效、绿色的利用低共熔溶剂制备丹参提取物的方法，该方法可同时提取两种药典质量标志物丹酚酸B和丹参酮IIA，且对丹酚酸B的提取效率较水提高46.0％。本方法通过引入天然低共熔溶剂(NADES)制备中药提取物，具有所需时间短，能耗低，绿色环保的特点，为中药活性成分提取、中药炮制提供的新的研发思路。
本发明采用的技术方案是：
本发明提供一种利用低共熔溶剂制备丹参提取物的方法，所述方法为：将丹参粉末加入低共熔溶剂水溶液中，于25-75℃、50-200W下超声提取15-60min，离心(优选16200×g下10min)，取上清液，即为丹参提取物；所述低共熔溶剂由氢键供体(HBD)与氢键受体(HBA)和/或去离子水混合而成(即低共熔溶剂由氢键供体与氢键受体混合加热制备而成，或者低共熔溶剂由氢键供体与氢键受体和去离子水混合加热制备而成)，所述氢键供体包括：乳酸(Lac)、甘油(Gly)、葡萄糖(Glu)、尿素(Ur)、柠檬酸(Ca)、苹果酸(Maa)、丙二酸(Mal)，所述氢键受体包括：L-脯氨酸(L-Pro)、D-脯氨酸(D-Pro)、氯化胆碱(ChCl)、甜菜碱(Bet)。
进一步，低共熔溶剂由氢键供体与氢键受体以物质的量之比1:1-2.5混合加热制备而成。
进一步，低共熔溶剂由氢键供体与氢键受体和去离子水以物质的量之比1:1:1-5混合加热制备而成。
进一步，优选低共熔溶剂按如下方法制备：将氢键供体与氢键受体和/或去离子水混合后，在80-100℃加热搅拌0.5-2小时(优选80℃，1h)，形成澄清均一的低共熔溶剂。
进一步，所述低共熔溶剂水溶液中低共熔溶剂体积浓度为25-100％(优选75％)，所述丹参粉末重量以低共熔溶剂水溶液体积用量计为25-200mg/mL(优选100mg/mL)。
进一步，提取条件优选为：在50℃、200W下超声提取30分钟。
进一步，所述低共熔溶剂优选为：L-脯氨酸与乳酸以摩尔比1:1混合后在80℃加热1h制得。
与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：本发明提供一种高效、绿色的利用低共熔溶剂制备丹参提取物的方法，该方法可同时提取丹酚酸B(药典质量标志物)、丹参酮IIA(欧洲药典、美国药典质量标志物)及隐丹参酮三种化合物，其中对丹酚酸B的提取率较水提物高46.0％，而水提物中检测不到丹参酮IIA与隐丹参酮。本方法具有所需时间短，能耗低，绿色环保的特点。本发明通过引入天然低共熔溶剂(NADES)制备中药提取物，为中药活性成分提取、中药炮制提供的新的研发思路。
(四)附图说明
图1.实施例1的高效液相色谱图。
图2.实施例2的高效液相色谱图。
图3.对比例1的高效液相色谱图。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
以下结合实施例对本发明所述的丹参有效成分丹酚酸B的提取方法进一步的阐释，以帮助本领域的技术人员对本发明的发明构思、技术方案有更完整、准确和深入的理解。
本发明实施例所用丹参均按照《中国药典》2015版采集制备。
实施例1.DES-1为溶剂(1mL)
将L-脯氨酸(1.15g)与乳酸(0.90g)以摩尔比1:1的比例混合，于80℃加热搅拌1小时，形成澄清均一的低共熔溶剂，记为DES-1。将750μL的DES-1与250μL水混合均匀，获得1mlDES-1水溶液，加入1.5mL离心管中，再准确称取100.0mg丹参(产地山东)粉末加入其中，于50℃下超声提取30min，超声功率为200W。超声提取后，于16200×g下离心10min，取上清液，即为丹参提取物。上清液用体积浓度50％甲醇水溶液稀释10倍后进行高效液相色谱(HPLC)检测，根据化合物(丹酚酸B、丹参酮IIA和隐丹参酮)的标准曲线，获得丹参提取物中所含化合物种类及含量，提取率＝化合物含量/丹参原料重量(mg/g)；测得丹参提取物中丹酚酸B提取率42.04mg/g；丹参酮IIA提取率1.48mg/g；隐丹参酮提取率0.84mg/g。
可见，采用低共熔溶剂提取的丹参提取物中：丹酚酸B提取率较对比例1水提物高46.0％；丹参酮IIA提取率1.48mg/g(对比例1水提物中未检出)；隐丹参酮提取率0.84mg/g(对比例1水提物中未检出)。
HPLC检测条件如下：
Agilent Hypersil ODS-C18(4.0×250mm，5μm)；流动相为0.1％甲酸水(A)-乙腈(B)，梯度洗脱：0-12min，10％-22％B，12-38min，22％-30％B，38-50min，30％-45％B，50-55min，45％-90％B，55-65min，90％B；检测波长280nm/254nm；柱温25℃；流速0.8mL/min。
实施例2DES-2为溶剂(1mL)
将实施例1中DES-1改为L-脯氨酸(1.15g)与甘油(2.30g)以摩尔比2:5的比例混合，于80℃加热搅拌1小时，形成澄清均一的低共熔溶剂，记为DES-2。其他操作同实施例1，测得丹参提取物中：丹酚酸B提取率34.78mg/g(较对比例1水提物高20.8％)；丹参酮IIA提取率1.05mg/g(对比例1水提物中未检出)；隐丹参酮提取率0.51mg/g(对比例1水提物中未检出)。
实施例3.DES-1为溶剂(10g丹参，100mL水溶液)
将L-脯氨酸(115g)与乳酸(90g)以摩尔比1:1的比例混合，于80℃加热搅拌1小时，形成澄清均一的低共熔溶剂，记为DES-1。将25mL低共熔溶剂DES-1与75mL水混合，获得100ml DES-1水溶液，并加入1000mL锥形瓶中，再准确称取10.00g丹参(产地山东)粉末加入其中，于50℃下超声提取1h，超声功率为200W。超声提取后，于16200×g下离心20min，取上清液，即为丹参提取物。采用实施例1方法测得提取物中：丹酚酸B提取率37.62mg/g；丹参酮IIA提取率1.36mg/g；隐丹参酮提取率0.75mg/g。
实施例4低共熔溶剂种类对提取效果的影响
将实施例1中低共熔溶剂改为表1所述，组成为氢键受体、氢键供体和/或去离子水，丹参粉末加入量以低共熔溶剂水溶液总体积计均为0.1g/mL，其他操作同实施例1，所制得丹参提取物中丹酚酸B、丹参酮IIA及隐丹参酮的含量见表1，结果显示，DES-1综合提取性能最佳，其次是DES-2及DES-17。
表1.步骤1中低共熔溶剂种类与提取结果关系考察(提取条件同实施例1)
实施例5低共熔溶剂水溶液中低共熔溶剂体积浓度对提取效果的影响
将实施例1中DES-1体积浓度改成表2所示，其他操作同实施例1，所制得丹参提取物中丹酚酸B、丹参酮IIA及隐丹参酮的含量见表2，结果显示，75％DES-1提取效果最佳。
表2.低共熔溶剂浓度对丹参提取效果的影响
实施例6提取固液比对提取效果的影响
将实施例1中丹参用量(mg)以DES-1与水总体积(ml)计改为表3所示，其他操作同实施例1，所制得丹参提取物中丹酚酸B、丹参酮IIA及隐丹参酮的含量见表3，结果显示，100mg/mL为最佳提取固液比。
表3.提取固液比对提取效果的影响
实施例7提取温度对提取效果的影响
将实施例1中温度改成表4所示，其他操作同实施例1，所制得丹参提取物中丹酚酸B、丹参酮IIA及隐丹参酮的含量见表4，结果显示，50℃为最佳提取温度。
表4.提取温度对提取效果的影响
实施例8提取功率对提取效果的影响
将实施例1中功率改成表5所示，其他操作同实施例1，所制得丹参提取物中丹酚酸B、丹参酮IIA及隐丹参酮的含量见表5，结果显示，200W为最佳提取功率。
表5.功率对提取效果的影响
实施例9提取时间对提取效果的影响
将实施例1中提取时间改成表6所示，其他操作同实施例1，所制得丹参提取物中丹酚酸B、丹参酮IIA及隐丹参酮的含量见表6，结果说明30min为最佳提取时间。
表6.提取时间对提取效果的影响
对比例1水为溶剂(1mL)
准确称取100.0mg丹参(产地山东)粉末加入1.5mL离心管中，再于其中加入1.0mL去离子水。于50℃下超声提取30min，超声功率为200W。超声提取后，于16200×g下离心10min，取上清液即为制得的丹参水提取物。以实施例1中所述的方法检测，测得主要化合物提取效果如下：丹酚酸B，28.78mg/g；丹参酮IIA及隐丹参酮未检出(含量<0.0125mg/g)。

Claims (7)

1.一种利用低共熔溶剂制备丹参提取物的方法，其特征在于所述方法为：将丹参粉末加入低共熔溶剂水溶液中，于25-75℃、50-200W下超声提取15-60min，离心，取上清液，即为丹参提取物；所述低共熔溶剂水溶液中低共熔溶剂由氢键供体与氢键受体和/或去离子水混合而成，所述氢键供体包括：乳酸、甘油、葡萄糖、尿素、柠檬酸、苹果酸、丙二酸，所述氢键受体包括：L-脯氨酸、D-脯氨酸、氯化胆碱、甜菜碱。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述低共熔溶剂由氢键供体与氢键受体以物质的量之比1:1-2.5混合加热制备而成。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述低共熔溶剂由氢键供体与氢键受体和去离子水以物质的量之比1:1:1-5混合加热制备而成。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述低共熔溶剂按如下方法制备：将氢键供体与氢键受体和/或去离子水混合后，在80-100℃加热搅拌0.5-2小时，形成澄清均一的低共熔溶剂。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述低共熔溶剂水溶液中低共熔溶剂体积浓度为25-100％，所述丹参粉末重量以低共熔溶剂水溶液体积用量计为25-200mg/mL。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述提取条件为：在50℃、200W下超声提取30分钟。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述低共熔溶剂为：L-脯氨酸与乳酸以物质的量之比1:1混合后在80℃加热1h制得。
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