CN101366856B - 一种治疗鱼鳞病的中药组合物的检测方法 - Google Patents
一种治疗鱼鳞病的中药组合物的检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种治疗鱼鳞病的中药组合物的检测方法，属于中药制剂中成份含量测定和鉴别方法。其所述药物是由白鲜皮、威灵仙、生地黄、苍术、防风、蝉蜕、红花、火麻仁、桂枝、当归、川芎、甘草、苦参、麻黄、地肤子十五味药组成，特征在于用高效液相色谱法测定所述药物的一种或几种成分的含量；用薄层色谱法鉴别其中的一种或几种成分。本发明弥补了现有技术的不足，提高了本发明药物的质量控制标准，且方法简便，结果准确，重现性好。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，尤其是指中药制剂中成份含量测定和鉴别方法。
背景技术
鱼鳞病(ichthyosis)是一组遗传性皮肤病，主要表现为肌肤甲错，从细磷屑至鳄鱼皮样改变不等，这种病目前在国内外尚无较好的治疗方法。西医主要根据鱼鳞病的不同临床类型采取相应的治疗措施，治疗目的是缓解症状，增加角质层含水量和促进正常角化。用于全身治疗的药物主要为维生素A及13-顺维甲酸等；局部治疗常用0.1％维甲酸霜、10％尿素软膏或尿素霜等药物，但疗效均不能令人满意。中医称鱼鳞病为“蛇皮病”“鱼鳞风”等，认为系先天不足、后天失养、血虚风燥、营卫失和等所致，治疗以养血润燥、活血和营为主，常内服、外用结合治疗，多用汤剂和酊剂，服用不方便，并且疗效不确切。
在公开号为CN1762452A的中国专利申请文件中公开了一种治疗鱼鳞病的药物及其制备方法，该药物由中药材白鲜皮、威灵仙、生地黄、苍术、防风、蝉蜕、红花、火麻仁、桂枝、当归、川芎、甘草、苦参、麻黄、地肤子十五味药组成。该专利没有公开其质量控制方法，本发明是在该发明药物制剂的基础上，提供了上述发明药物的质量控制方法，通过此方法可以控制该发明药物及含相同组分药物的质量。
发明内容
本发明提供一种治疗鱼鳞病的中药组合物的检测方法，其所述药物是由白鲜皮、威灵仙、生地黄、苍术、防风、蝉蜕、红花、火麻仁、桂枝、当归、川芎、甘草、苦参、麻黄、地肤子十五味药组成，特征在于用高效液相色谱法测定所述药物的一种或几种成分的含量；用薄层色谱法鉴别其中的一种或几种成分；
含量测定：
a)用高效液相色谱法测定该中药组合物中苦参的含量，操作步骤如下：
色谱条件：以氨基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为60-90∶20-5∶20-5的乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液为流动相，检测波长为220nm，理论板数按苦参碱峰计算应不低于4000；
对照品溶液的制备：精密称取苦参碱对照品适量，加体积比为60-90∶40-10的乙腈-无水乙醇溶解，制成每1ml含50μg苦参碱的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品粉末0.5-1.5g，精密称定，加浓氨试液1-2ml，精密加入三氯甲烷20-30ml密塞，称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取滤液10ml，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇使溶解，并转移至5ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含苦参以苦参碱计，不得少于0.8mg；
b)用高效液相色谱法测定该中药组合物中当归和川芎的含量，操作步骤如下：
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为20-40:80-60的甲醇-0.1％磷酸溶液为流动相，检测波长为320nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品粉末1-3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15-25ml，密塞，称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每1g含当归、川芎以阿魏酸计，不得少于30μg。
鉴别方法：
其中对甘草的鉴别是采用甘草次酸对照品作为阳性对照
和对苦参的鉴别是采用槐定碱对照品作为阳性对照；
和对麻黄的鉴别是采用盐酸麻黄碱对照品作为阳性对照；
和对川芎的鉴别是采用川芎对照药材作为阳性对照；
a)用薄层色谱法鉴别其中的甘草成分：
取本品4-10g，研细，加乙醇40ml与盐酸2ml，置水浴上加热回流20-50分钟，放冷，滤过，取滤液浓缩至约10ml，加水10ml，搅匀，转移到分液漏斗中，用沸程为60～90℃的石油醚提取两次，每 次20ml，合并石油醚提取液置水浴上蒸干，残渣加无水乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液5-10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10：20：7：0.5的60～90℃石油醚-苯-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
b)用薄层色谱法鉴别其中的苦参成分：
取本品4-10g，研细，加三氯甲烷25ml与浓氨试液1ml，超声处理15-30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取槐定碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4-8μl分别点于同一硅胶G薄层版上，以体积比为5：0.6：0.3的三氯甲烷-甲醇-浓氨试液10℃以下放置后的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
c)用薄层色谱法鉴别其中的麻黄成分：
取本品4-8g，研细，置50ml锥形瓶中，加浓氨试液1ml、乙醚30ml，密塞，放置两个小时，时时振摇，滤过，加酸性乙醇(取乙醇20ml，加盐酸1ml，混匀)1ml，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4-8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40：7：1的三氯甲烷-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
d)用薄层色谱法鉴别其中的川芎成分：
取本品2-5g，研细，加1％碳酸氢钠溶液50ml，超声处理10-20分钟，离心，取上清液用稀盐酸调节pH值至2～3，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4：1：0.1的苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
药品应具有安全性、有效性、稳定性及可控性，完善的质量控制标准能够保证药品质量的可靠性和均一性。在公开号为CN1762452A的中国专利申请文件中公开的药物对鱼鳞病的治疗效果已经得到临床的验证，但是否能够保证该发明药物的质量以及药物中有效成分的含量，是决定该发明药物疗效的基础。
在国家卫生部颁发的药品标准中，与该发明含相同药味组方的质量控制方法中，除有一项显微鉴别及两个薄层鉴别项外，没有其它含量测定方法，难以很好地从多方面控制该发明药物的质量。本发明内容弥补 了现有技术的不足，提高了该发明药物的质量控制标准，具体内容如下：①增加组方中麻黄的薄层色谱定性鉴别方法，并经方法学试验确认方法专属、可行、阴性无干扰；②增加组方中川芎的薄层色谱定性鉴别方法，并经方法学试验确认方法专属、可行、阴性无干扰；③增加组方中苦参的定量测别方法，苦参碱是苦参中的一种生物碱成分，也是苦参的主要活性成分之一，本发明利用高效液相色谱法测定该药物中苦参碱的含量，结果准确，重现性好，具有专属性；④增加当归、川芎两味药材的定量测定方法，阿魏酸在当归中含量丰富，是当归的主要活性成分，同时也是川芎的主要功效成分之一，本发明利用高效液相色谱法测定该药物中当归和川芎的共有成分阿魏酸的总含量，方法简便，结果准确，重现性好。
具体实施方式
对于本领域技术人员而言，根据本发明所公开的技术内容，本领域技术人员将很清楚本发明的其它实施方案，本发明实施例仅作为示例。在不违反本发明主旨及范围的情况下，可对本发明进行各种改变和改进，但只要使用本发明所述的质量控制方法，均在本发明保护范围之内。
实施例1
处方：苦参44g，甘草44g，地黄88g，防风44g，苍术66g，威灵仙66g，地肤子66g，火麻仁44g，麻黄44g，红花44g，白鲜皮66g，蝉蜕44g，当归66g，川芎44g，桂枝44g。
制法：以上十五味，取桂枝、当归、川芎全量及白鲜皮半量、共粉成细粉；除红花外，余之半量的白鲜皮及地黄等十一味，加水煎煮2 次，第二次煎煮时下红花，每次3小时，合并煎液过滤，滤液浓缩成相对密度为1.00～1.30的清膏、检测温度为50～80℃；将上述细粉与清膏混合均匀，干燥后粉碎成细粉即得待检药物。
鉴别和含量测定方法如下：
鉴别方法包括下列步骤：
(1)甘草的鉴别：取本品4g，研细，加乙醇40ml与盐酸2ml，置水浴上加热回流20分钟，放冷，滤过，取滤液浓缩至约10ml，加水10ml，搅匀，转移到分液漏斗中，用石油醚(60～90℃)提取两次，每次20ml，合并石油醚提取液置水浴上蒸干，残渣加无水乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10：20：7：0.5的石油醚(60～90℃)-苯-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)苦参的鉴别：取本品4g，研细，加三氯甲烷25ml与浓氨试液1ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取槐定碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各8μl分别点于同一硅胶G薄层版上，以体积比为5：0.6：0.3的三氯甲烷-甲醇-浓氨试液10 ℃以下放置后的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)麻黄的鉴别：取本品4g，研细，置50ml锥形瓶中，加浓氨试液1ml、乙醚30ml，密塞，放置两个小时，时时振摇，滤过，加酸性乙醇(取乙醇20ml，加盐酸1ml，混匀)1ml，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40：7：1的三氯甲烷-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)川芎的鉴别：取本品2g，研细，加1％碳酸氢钠溶液50ml，超声处理20分钟，离心，取上清液用稀盐酸调节pH值至2～3，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4：1：0.1的苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
含量测定方法包括下列步骤：
(1)苦参的含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验：以氨基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为60:20:20的乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液为流动相，检测波长为220nm。理论板数按苦参碱峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备：精密称取苦参碱对照品适量，加体积比为60:40的乙腈-无水乙醇溶解，制成每1ml含50μg苦参碱的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末0.5g，精密称定，加浓氨试液1ml，精密加入三氯甲烷20ml密塞，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取滤液10ml，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇使溶解，并转移至5ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含苦参以苦参碱(C15H24N2O)计为1.0mg。
(2)当归、川芎的含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为20:80的甲醇-0.1％磷酸溶液为流动相，检测波长为320nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000。
对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15ml，密塞，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含当归、川芎以阿魏酸(C10H10O4)计，为45μg。
实施例2取实施例1中的药物组合物
鉴别方法包括下列步骤：
(1)甘草的鉴别：取本品6g，研细，加乙醇40ml与盐酸2ml，置水浴上加热回流40分钟，放冷，滤过，取滤液浓缩至10ml，加水10ml，搅匀，转移到分液漏斗中，用石油醚(60～90℃)提取两次，每次20ml，合并石油醚提取液置水浴上蒸干，残渣加无水乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液8ul，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10：20：7：0.5的石油醚(60～90℃)-苯-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)苦参的鉴别：取本品6g，研细，加三氯甲烷25ml与浓氨试液1ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取槐定碱对照品，加乙醇制成每1ml含 0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各8μl分别点于同一硅胶G薄层版上，以体积比为5：0.6：0.3的三氯甲烷-甲醇-浓氨试液10℃以下放置后的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)麻黄的鉴别：取本品6g，研细，置50ml锥形瓶中，加浓氨试液1ml、乙醚30ml，密塞，放置两个小时，时时振摇，滤过，加酸性乙醇(取乙醇20ml，加盐酸1ml，混匀)1ml，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40：7：1的三氯甲烷-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)川芎的鉴别：取本品3g，研细，加1％碳酸氢钠溶液50ml，超声处理10分钟，离心，取上清液用稀盐酸调节pH值至2~3，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4：1： 0.1的苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
含量测定方法包括下列步骤：
(1)苦参的含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验：以氨基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为80:10:10的乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液为流动相，检测波长为220nm。理论板数按苦参碱峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备：精密称取苦参碱对照品适量，加体积比为80:20的乙腈-无水乙醇溶解，制成每1ml含50μg苦参碱的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末1.0g，精密称定，加浓氨试液1.5ml，精密加入三氯甲烷25ml密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取滤液10ml，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇使溶解，并转移至5ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含苦参以苦参碱(C15H24N2O)计为0.9mg。
(2)当归、川芎的含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以体积比为30:70的甲醇-0.1％磷酸溶液为流动相，检测波长为320nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000。
对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含当归、川芎以阿魏酸(C10H10O4)计为43μg。
实施例3取实施例1中的药物组合物
鉴别方法包括下列步骤：
(1)甘草的鉴别：取本品10g，研细，加乙醇40ml与盐酸2ml，置水浴上加热回流50分钟，放冷，滤过，取滤液浓缩至10ml，加水10ml，搅匀，转移到分液漏斗中，用石油醚(60～90℃)提取两次，每次20ml，合并石油醚提取液置水浴上蒸干，残渣加无水乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液5ul，对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10：20：7：0.5的石油醚(60～90℃)-苯-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)苦参的鉴别：取本品10g，研细，加三氯甲烷25ml与浓氨试液1ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取槐定碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4μl分别点于同一硅胶G薄层版上，以体积比为5：0.6：0.3的三氯甲烷-甲醇-浓氨试液10℃以下放置后的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)麻黄的鉴别：取本品8g，研细，置50ml锥形瓶中，加浓氨试液1ml、乙醚30ml，密塞，放置两个小时，时时振摇，滤过，加酸性乙醇(取乙醇20ml，加盐酸lml，混匀)1ml，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40：7：1的三氯甲烷-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)川芎的鉴别：取本品5g，研细，加1％碳酸氢钠溶液50ml，超声处理20分钟，离心，取上清液用稀盐酸调节pH值至2～3，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使 溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4：1：0.1的苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
含量测定方法包括下列步骤：
(1)苦参的含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验：以氨基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为90:5:5的乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液为流动相，检测波长为220nm。理论板数按苦参碱峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备：精密称取苦参碱对照品适量，加体积比为90:10的乙腈-无水乙醇溶解，制成每1ml含50μg苦参碱的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末1.5g，精密称定，加浓氨试液2ml，精密加入三氯甲烷30ml密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取滤液10ml，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇使溶解，并转移至5ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含苦参以苦参碱(C15H24N2O)计为1.1mg。
(2)当归、川芎的含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为40:60的甲醇-0.1％磷酸溶液为流动相，检测波长为320nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000。
对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含当归、川芎以阿魏酸(C10H10O4)计，为42μg。
Claims (1)
1.一种治疗鱼鳞病的中药组合物的检测方法，其所述药物是由白鲜皮、威灵仙、生地黄、苍术、防风、蝉蜕、红花、火麻仁、桂枝、当归、川芎、甘草、苦参、麻黄、地肤子十五味药组成，特征在于用高效液相色谱法测定所述药物的一种或几种成分的含量；用薄层色谱法鉴别其中的一种或几种成分；
含量测定：
a)用高效液相色谱法测定该中药组合物中苦参的含量，操作步骤如下：
色谱条件：以氨基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为60-90∶20-5∶20-5的乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液为流动相，检测波长为220nm，理论板数按苦参碱峰计算应不低于4000；
对照品溶液的制备：精密称取苦参碱对照品适量，加体积比为60-90∶40-10的乙腈-无水乙醇溶解，制成每1ml含50μg苦参碱的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取该中药组合物粉末0.5-1.5g，精密称定，加浓氨试液1-2ml，精密加入三氯甲烷20-30ml密塞，称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取滤液10ml，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇使溶解，并转移至5ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该中药组合物每1g含苦参以苦参碱计，不得少于0.8mg；
b)用高效液相色谱法测定该中药组合物中当归和川芎的含量，操作步骤如下：
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为20-40∶80-60的甲醇-0.1％磷酸溶液为流动相，检测波长为320nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取药物粉末1-3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15-25ml，密塞，称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
该中药组合物每1g含当归、川芎以阿魏酸计，不得少于30μg；
鉴别方法：
其中对甘草的鉴别是采用甘草次酸对照品作为阳性对照
和对苦参的鉴别是采用槐定碱对照品作为阳性对照；
和对麻黄的鉴别是采用盐酸麻黄碱对照品作为阳性对照；
和对川芎的鉴别是采用川芎对照药材作为阳性对照；
a)用薄层色谱法鉴别其中的甘草成分：
取该中药组合物4-10g，研细，加乙醇40ml与盐酸2ml，置水浴上加热回流20-50分钟，放冷，滤过，取滤液浓缩至10ml，加 水10ml，搅匀，转移到分液漏斗中，用沸程为60～90℃的石油醚提取两次，每次20ml，合并石油醚提取液置水浴上蒸干，残渣加无水乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液5-10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10∶20∶7∶0.5的60～90℃石油醚-苯-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
b)用薄层色谱法鉴别其中的苦参成分：
取该中药组合物4-10g，研细，加三氯甲烷25ml与浓氨试液1ml，超声处理15-30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取槐定碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4-8μl分别点于同一硅胶G薄层版上，以体积比为5∶0.6∶0.3的三氯甲烷-甲醇-浓氨试液10℃以下放置后的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
c)用薄层色谱法鉴别其中的麻黄成分：
取该中药组合物4-8g，研细，置50ml锥形瓶中，加浓氨试液1ml、乙醚30ml，密塞，放置两个小时，时时振摇，滤过，加酸性乙醇1ml，该酸性乙醇制法是：取乙醇20ml，加盐酸1ml，混匀，蒸干， 残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4-8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40∶7∶1的三氯甲烷-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
d)用薄层色谱法鉴别其中的川芎成分：
取该中药组合物2-5g，研细，加1％碳酸氢钠溶液50ml，超声处理10-20分钟，离心，取上清液用稀盐酸调节pH值至2～3，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4∶1∶0.1的苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
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