CN105169234A - 一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，属于中药质量检测技术领域。中药制剂由下述重量配比的药材按中药制剂方法经浸泡、提取、滤过、浓缩、干燥、粉碎制成的中药片剂：姜黄20～30份，墨旱莲15～25份，女贞子15～25份，枸杞子3～15份，丹参10～20份，黄芪20～40份，葛根10～25份，为片剂；质量检测方法：分别以姜黄素、葛根素、黄芪甲苷为对照品，采用薄层色谱法鉴别中药制剂中是否含有姜黄、葛根、黄芪成分；以丹参酮IIA为对照品，采用薄层色谱法；以丹酚酸B为对照品，采用高效液相色谱法联合鉴别中药制剂中是否含有丹参成分。本发明质量检测方法检测准确、快速、可靠、方便。

Description

一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法

技术领域

本发明属于中药质量检测技术领域，具体涉及一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法。

背景技术

治疗糖尿病视网膜病变的中药糖综清眩片，具有养阴清热、补益肝肾、健脾的功效，其中姜黄为君药，主养阴清热、活血祛瘀。墨旱莲、女贞子、枸杞子为臣药，凉血止血、补益肝肾。丹参、黄芪益气活血、健脾固表为佐药。葛根解热生津、除烦止渴、生举阳气，质轻，升发诸药上行为使药。诸药共用可达养阴清热、补益肝肾兼以健脾之功效。为促进中药制剂现代化，中药制剂的质量研究内容是非常有必要的，对关键性指标进行分析检测，使中药复方制剂达到安全、有效、质量可控。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，检测准确、快速、可靠、方便和能够对中药制剂质量进行科学、可行、有效、可靠的控制，使该中药制剂达到稳定、可控、高效及安全。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂由下述重量配比的药材按中药制剂方法经浸泡、提取、滤过、浓缩、干燥、粉碎制成的中药片剂：姜黄20～30份，墨旱莲15～25份，女贞子15～25份，枸杞子3～15份，丹参10～20份，黄芪20～40份，葛根10～25份；

质量检测方法包括以下步骤：

以姜黄素为对照品，采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂中是否含有姜黄成分；

以葛根素为对照品，采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂中是否含有葛根成分；

以丹参酮IIA为对照品，采用薄层色谱法；以丹酚酸B为对照品，采用高效液相色谱法联合鉴别所述中药制剂中是否含有丹参成分；

以黄芪甲苷为对照品，采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂中是否含有黄芪成分。

进一步地，质量检测方法还包括以下步骤：

以姜黄素为对照品，采用超高效液相色谱法测定所述中药制剂中姜黄成分的含量；

以葛根素为对照品，采用超高效液相色谱法测定所述中药制剂中葛根成分的含量。

优选的，以姜黄素为对照品，采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂中是否含有姜黄成分，包括以下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药制剂适量，研细，取1～4g，置索氏提取器中，加50～100mL沸程60～90℃石油醚提取0.5～2小时，取出，固体晾干后，加水30～50mL，超声处理20～40分钟，过滤，滤渣连同滤纸，加无水乙醇30～50mL，振摇，超声处理20～40分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2～4mL使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：取姜黄素对照品，加无水乙醇制成每1mL含0.2～1mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照所述中药制剂配比称取除姜黄以外的其他药材，按中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

吸取上述三种溶液各2～5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比80:18:2的三氯甲烷-乙醇-冰乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，置日光和紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有姜黄成分。

优选的，以葛根素为对照品，采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂中是否含有葛根成分，包括以下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药制剂适量，研细，取1～3g，置索氏提取器中，加50～100mL沸程60～90℃石油醚提取0.5～2小时，取出，固体晾干后，加体积分数30%乙醇30～50mL，超声处理20～40分钟，过滤，滤液用水饱和的正丁醇萃取2～4次，每次10～20mL，合并正丁醇萃取液，蒸干，残渣加甲醇0.3～1mL使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取葛根素对照品，加甲醇制成每1mL含0.5～2mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照所述中药制剂配比称取除葛根以外的其他药材，按中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

吸取上述三溶液各4～8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比20:6:1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有葛根成分。

优选的，以丹参酮IIA为对照品，采用薄层色谱法；以丹酚酸B为对照品，采用高效液相色谱法联合鉴别所述中药制剂中是否含有丹参成分，包括以下步骤：

薄层色谱法：

供试品溶液的制备：取所述中药制剂适量，研细，取8～10g，加水30～60mL超声处理20～40分钟，过滤，滤渣加乙醚30～50mL超声处理20～40分钟，过滤，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1～2mL使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取丹参酮IIA对照品，加乙酸乙酯制成每1mL含1～3mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照所述中药制剂配比称取除丹参以外的其他药材，按中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

吸取上述三种溶液各2～8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比4:1的沸程60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有丹参成分；

高效液相色谱法：

供试品溶液的制备：取所述中药制剂适量，研细，取0.1～0.3g，加体积分数75%的甲醇30～50mL，超声处理20～40分钟，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取丹酚酸B对照品，加体积分数75%甲醇制成每1mL含30～40μg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照所述中药制剂配比称取除丹参以外的其他药材，按中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比24:8:1:67的甲醇-乙腈-甲酸-水为流动相，检测波长286nm，柱温35℃；分别吸取上述三种溶液各10～20μL，注入液相色谱仪，测定；供试品色谱中，呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰；阴性样品无干扰，表明供试品中含有丹参成分。

优选的，以黄芪甲苷为对照品，采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂中是否含有黄芪成分，包括以下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药制剂适量，研细，取5～10g，加水50～100ml，振摇，超声0.5～2小时，离心，取上清液加乙醚萃取2～4次，每次20～40ml；挥尽水层中乙醚，加水饱和的正丁醇萃取3～5次，每次20ml，合并正丁醇萃取液，用正丁醇饱和的质量分数1%NaOH水溶液洗涤2～4次，每次30～40ml，合并正丁醇提取液，蒸干正丁醇，残渣加甲醇0.5～1ml使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含1～2mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照所述中药制剂配比称取除黄芪以外的其他药材，按中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

吸取上述三种溶液各4～10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量分数10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有黄芪成分。

优选的，以姜黄素为对照品，采用超高效液相色谱法测定所述中药制剂中姜黄成分的含量，包括以下步骤：

色谱条件与系统适用性试验：采用ACQUITYUPLCBEH2.1×100mm,1.8μm色谱柱；以体积比40～50:60～50的乙腈-2%冰乙酸水溶液为流动相；二极管阵列检测器；流量为0.4mL/min；检测波长430nm；柱温30℃；

对照品溶液的制备：取姜黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含2～10μg的溶液；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的所述中药制剂，研细，取0.1～0.5g，精密称定，精密加入甲醇30～60mL，密塞，称定重量，超声处理20～40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液5mL，置25mL容量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；

合格标准：所述中药制剂每片含姜黄以姜黄素计，不得少于0.43mg。

优选的，以葛根素为对照品，采用超高效液相色谱法测定所述中药制剂中葛根成分的含量，包括以下步骤：

色谱条件与系统适用性试验：采用ACQUITYUPLCBEH2.1×100mm,1.8μm色谱柱；以体积比20～30:80～70的甲醇-水为流动相；二极管阵列检测器；流量为0.3mL/min；检测波长250nm；柱温30℃；

对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，加体积分数30%乙醇制成每1ml含5～15μg的溶液；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，研细，取0.2～0.5g，精密称定，精密加入30%乙醇30～50mL，密塞，称定重量，超声处理20～40分钟，放冷，再称定重量，用体积分数30%乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液5mL，置25mL容量瓶中，加体积分数25%甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；

合格标准：所述中药制剂每片含葛根以葛根素计，不得少于3.77mg。

采用上述技术方案所产生的有益效果在于：

治疗糖尿病视网膜病变的中药糖综清眩片对于糖尿病性视网膜病变具有很好的预防和治疗效果，总有效率89.7%，为糖尿病患者带来福音，具有广阔的社会、经济、医疗前景。糖综清眩片成品质量的好坏直接关系到其疗效，对患者至关重要，因此本发明对糖综清眩片成品的质量检测方法进行了大量的研究工作，通过大量的实验研究在该品种的质量标准中制定了多味药材的鉴别项目,采用薄层色谱法结合高效液相色谱法鉴别丹参成分，采用超高效液相色谱法测定产品中的姜黄素、葛根素的含量，检测准确、快速、可靠、方便。通过建立明确专属性强的鉴别及有效成分的含量测定，能够对其成品质量进行科学、可行、有效、可靠的控制，使该制剂达到稳定、可控、高效及安全，是对产品投料要求及质量的严格控制，是保证产品疗效，更好地满足患者需要的有效方法。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明；

图1为本发明实施例1（3）b.中丹参阴性样品HPLC色谱图；

图2为本发明实施例1（3）b.中丹酚酸B对照品HPLC色谱图；

图3为本发明实施例1（3）b.中供试品1丹酚酸BHPLC色谱图；

图4为本发明实施例1（3）b.中供试品2丹酚酸BHPLC色谱图；

图5为本发明实施例1（3）b.中供试品3丹酚酸BHPLC色谱图；

图6为实施例2（1）中姜黄阴性样品UPLC色谱图；

图7为实施例2（1）中姜黄素对照品UPLC色谱图；

图8为实施例2（1）中供试品中姜黄素UPLC色谱图；

图9为实施例2（2）中葛根阴性样品UPLC色谱图；

图10为实施例2（2）中葛根素对照品UPLC色谱图；

图11为实施例2（2）中供试品中葛根素UPLC色谱图。

具体实施方式

实施例1

一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂由下述重量配比的药材组成：姜黄25份，墨旱莲20份，女贞子20份，枸杞子5份，丹参15份，黄芪30份，葛根15份。

治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂为片剂；制备方法：

姜黄粉碎成粗粉，丹参、葛根切片，墨旱莲切段，与女贞子，加入体积分数70%乙醇，重量是姜黄、丹参、葛根、墨旱莲和女贞子总重量的10倍，浸泡1小时，回流提取2小时，过滤，药渣中加入体积分数70%乙醇，重量是姜黄、丹参、葛根、墨旱莲和女贞子总重量的8倍，回流提取2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩回收乙醇，并浓缩药液至相对密度在45～50℃为1.10～1.25的清膏，在50～70℃下真空干燥；粉碎，得醇提浸膏粉。

黄芪切片，与枸杞子加水，水的重量是黄芪和枸杞子总重量的10倍，浸泡1小时，回流提取3小时，过滤；药渣中加水，水的重量是黄芪和枸杞子总重量的10倍，回流提取3小时，过滤；药渣中再加水，水的重量是黄芪和枸杞子总重量的10倍，回流提取3小时，过滤，合并滤液，在60～80℃减压浓缩，浓缩成相对密度在50～60℃为1.20～1.30的清膏后置于50～80℃真空干燥箱干燥，粉碎，得水提浸膏粉。

将醇提浸膏和水提浸膏干粉，添加适宜的辅料，混合，干法制粒，将干颗粒加入1%硬脂酸镁，混合均匀，压片，包衣，制成治疗糖尿病视网膜病变的口服片剂。每片重0.6克，醇提浸膏粉和水提浸膏粉共占片剂总重量的76.3%。

上述治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂质量检测方法-薄层鉴别方法包括以下步骤：

（1）姜黄的鉴别：

供试品溶液的制备：取上述中药制剂适量，研细，取2g，置索氏提取器中，加100mL沸程为60～90℃石油醚，提取1小时，取出，固体晾干后，置锥形瓶中，加水30mL，超声处理30分钟，过滤，滤渣连同滤纸置锥形瓶中，加无水乙醇50mL，振摇，超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：取姜黄素对照品，加无水乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照所述中药制剂配比称取除姜黄以外的其他药材，按上述中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

照薄层色谱法2010版《中国药典》一部附录ⅥB试验，吸取上述三种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙醇-冰乙酸，体积比80:18:2为展开剂，展开，取出，晾干，置日光和365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有姜黄成分。

（2）葛根的鉴别：

供试品溶液的制备：取上述中药制剂适量，研细，取2g，置索氏提取器中，加100mL沸程为60～90℃石油醚，提取1小时，取出，固体晾干后，置锥形瓶中，加体积分数30%乙醇50mL，超声处理30分钟，过滤，滤液用水饱和的正丁醇萃取3次，每次20mL，合并正丁醇萃取液，蒸干，残渣加甲醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取葛根素对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照所述中药制剂配比称取除葛根以外的其他药材，按上述中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

照薄层色谱法2010版《中国药典》一部附录ⅥB试验，吸取上述三溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水，体积比20:6:1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有葛根成分。

（3）丹参的鉴别

a.丹参酮IIA

供试品溶液的制备：取上述中药制剂适量，研细，取8g，加水50mL超声处理30分钟，过滤，滤渣加乙醚40mL超声处理30分钟，过滤，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取丹参酮IIA对照品，加乙酸乙酯制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照上述中药制剂配比称取除丹参以外的其他药材，按上述中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

照薄层色谱法2010版《中国药典》一部附录ⅥB试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为60～90℃石油醚-乙酸乙酯，体积比4:1为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有丹参成分；

b.丹酚酸B

供试品溶液的制备：取上述中药制剂适量，研细，取0.2g，置锥形瓶中，加体积分数75%的甲醇50mL，超声处理30分钟，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取丹酚酸B对照品，加体积分数75%甲醇制成每1mL含35μg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照上述中药制剂配比称取除丹参以外的其他药材，按上述中药制剂方法制成中药片剂，按照上述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

照高效液相色谱法2010版《中国药典》一部附录ⅥD试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-甲酸-水，体积比24:8:1:67为流动相，检测波长286nm，柱温35℃；分别吸取上述三种溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定；供试品色谱中，呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰；阴性样品无干扰，表明供试品中含有丹参成分。结果如图1-5所示。

（4）黄芪的鉴别

供试品溶液的制备：取上述中药制剂适量，研细，取5g，加水50ml，振摇，超声1小时，离心，取上清液加乙醚萃取3次，每次20ml；挥尽水层中乙醚，加水饱和的正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇萃取液，用正丁醇饱和的质量分数1%NaOH水溶液洗涤3次，每次30ml，合并正丁醇提取液，正丁醇提取液置水浴上，蒸干正丁醇，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照上述中药制剂配比称取除黄芪以外的其他药材，按上述中药制剂方法制成中药片剂，按照上述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

照薄层色谱法2010版《中国药典》一部附录ⅥB试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水，体积比13:7:2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量分数10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有黄芪成分。

实施例2

一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法-有效成分含量测定

治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的重量配比及制备方法同实施例1。

（1）检测姜黄成分

色谱条件与系统适用性试验：采用ACQUITYUPLCBEH2.1×100mm,1.8μm色谱柱；以乙腈-2%冰乙酸水溶液，体积比48:52为流动相；二极管阵列检测器；流量为0.4mL/min；检测波长430nm；柱温30℃；

对照品溶液的制备：取姜黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含4μg的溶液；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的所述中药制剂，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液5mL，置25mL容量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；

合格标准：所述中药制剂每片含姜黄以姜黄素计，不得少于0.43mg。

试验结果如表1、图6-8所示。

表1姜黄素含量测定结果

（2）检测葛根成分

色谱条件与系统适用性试验：采用ACQUITYUPLCBEH2.1×100mm,1.8μm色谱柱；以甲醇-水，体积比23:77为流动相；二极管阵列检测器；流量为0.3mL/min；检测波长250nm；柱温30℃；

对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，加体积分数30%乙醇制成每1ml含10μg的溶液；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50mL，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用体积分数30%乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液5mL，置25mL容量瓶中，加体积分数25%甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；

合格标准：所述中药制剂每片含葛根以葛根素计，不得少于3.77mg。

试验结果如表2、图9～11所示。

表2葛根素含量测定结果

实施例3

一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂由下述重量配比的药材组成：姜黄30份，墨旱莲25份，女贞子25份，枸杞子15份，丹参20份，黄芪40份，葛根25份。

治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂为片剂；

制备方法：

姜黄粉碎成粗粉，丹参、葛根切片，墨旱莲切段，与女贞子，加入体积分数70%乙醇，浸泡，回流提取1～3次，过滤，合并滤液，减压浓缩回收乙醇，并浓缩药液至相对密度在45～50℃时为1.10～1.25的清膏，在50～70℃下真空干燥；粉碎，得醇提浸膏粉；每次加入体积分数70%乙醇的重量是姜黄、丹参、葛根、墨旱莲和女贞子总重量的8～10倍；浸泡时间1小时，每次回流提取时间1～3小时；

黄芪切片，与枸杞子加水，浸泡，回流提取1～4次，过滤，合并滤液，在60～80℃减压浓缩，浓缩成相对密度在50～60℃时为1.20～1.30的清膏，在50～80℃下真空干燥；粉碎，得水提浸膏粉；每次加入水的重量是黄芪和枸杞子总重量的6～10倍；浸泡时间1小时，每次回流提取时间2～4小时；

将醇提浸膏和水提浸膏干粉，添加适宜的辅料，混合，干法制粒，将干颗粒加入1%硬脂酸镁，混合均匀，压片，包衣，制成治疗糖尿病视网膜病变的口服片剂。

上述治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂质量检测方法-薄层鉴别方法包括以下步骤：

（1）姜黄的鉴别：

供试品溶液的制备：取上述中药制剂适量，研细，取4g，置索氏提取器中，加50mL沸程为60～90℃石油醚，提取2小时，取出，固体晾干后，置锥形瓶中，加水50mL，超声处理40分钟，过滤，滤渣连同滤纸置锥形瓶中，加无水乙醇30mL，振摇，超声处理20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：取姜黄素对照品，加无水乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照所述中药制剂配比称取除姜黄以外的其他药材，按上述中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

照薄层色谱法2010版《中国药典》一部附录ⅥB试验，吸取上述三种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙醇-冰乙酸，体积比80:18:2为展开剂，展开，取出，晾干，置日光和365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有姜黄成分。

（2）葛根的鉴别：

供试品溶液的制备：取上述中药制剂适量，研细，取3g，置索氏提取器中，加50mL沸程为60～90℃石油醚提取2小时，取出，固体晾干后，置锥形瓶中，加体积分数30%乙醇50mL，超声处理40分钟，过滤，滤液用水饱和的正丁醇萃取4次，每次10mL，合并正丁醇萃取液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取葛根素对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照所述中药制剂配比称取除葛根以外的其他药材，按上述中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

照薄层色谱法2010版《中国药典》一部附录ⅥB试验，吸取上述三溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水，体积比20:6:1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有葛根成分。

（3）丹参的鉴别

a.丹参酮IIA

供试品溶液的制备：取上述中药制剂适量，研细，取10g，加水30mL超声处理40分钟，过滤，滤渣加乙醚30mL超声处理20分钟，过滤，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取丹参酮IIA对照品，加乙酸乙酯制成每1mL含3mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照上述中药制剂配比称取除丹参以外的其他药材，按上述中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

照薄层色谱法2010版《中国药典》一部附录ⅥB试验，吸取上述三种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为60～90℃石油醚-乙酸乙酯，体积比4:1为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有丹参成分；

b.丹酚酸B

供试品溶液的制备：取上述中药制剂适量，研细，取0.1g，置锥形瓶中，加体积分数75%的甲醇30mL，超声处理40分钟，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取丹酚酸B对照品，加体积分数75%甲醇制成每1mL含40μg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照上述中药制剂配比称取除丹参以外的其他药材，按上述中药制剂方法制成中药片剂，按照上述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

照高效液相色谱法2010版《中国药典》一部附录ⅥD试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-甲酸-水，体积比24:8:1:67为流动相，检测波长286nm，柱温35℃；分别吸取上述三种溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定；供试品色谱中，呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰；阴性样品无干扰，表明供试品中含有丹参成分。

（4）黄芪的鉴别

供试品溶液的制备：取上述中药制剂适量，研细，取10g，加水100ml，振摇，超声2小时，离心，取上清液加乙醚萃取4次，每次40ml；挥尽水层中乙醚，加水饱和的正丁醇萃取5次，每次20ml，合并正丁醇萃取液，用正丁醇饱和的质量分数1%NaOH水溶液洗涤2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，正丁醇提取液置水浴上，蒸干正丁醇，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照上述中药制剂配比称取除黄芪以外的其他药材，按上述中药制剂方法制成中药片剂，按照上述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

照薄层色谱法2010版《中国药典》一部附录ⅥB试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水，体积比13:7:2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量分数10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有黄芪成分。

实施例4

一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法-有效成分含量测定

治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的重量配比及制备方法同实施例3。

（1）检测姜黄成分

色谱条件与系统适用性试验：采用ACQUITYUPLCBEH2.1×100mm,1.8μm色谱柱；以乙腈-2%冰乙酸水溶液，体积比40:60为流动相；二极管阵列检测器；流量为0.4mL/min；检测波长430nm；柱温30℃；

对照品溶液的制备：取姜黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的所述中药制剂，研细，取0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇30mL，密塞，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液5mL，置25mL容量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；

合格标准：所述中药制剂每片含姜黄以姜黄素计，不得少于0.43mg。

（2）检测葛根成分

色谱条件与系统适用性试验：采用ACQUITYUPLCBEH2.1×100mm,1.8μm色谱柱；以甲醇-水，体积比30:70为流动相；二极管阵列检测器；流量为0.3mL/min；检测波长250nm；柱温30℃；

对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，加体积分数30%乙醇制成每1ml含15μg的溶液；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇30mL，密塞，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用体积分数30%乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液5mL，置25mL容量瓶中，加体积分数25%甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；

合格标准：所述中药制剂每片含葛根以葛根素计，不得少于3.77mg。

治疗糖尿病视网膜病变的中药糖综清眩片对于糖尿病性视网膜病变具有很好的预防和治疗效果，总有效率89.7%，为糖尿病患者带来福音，具有广阔的社会、经济、医疗前景。糖综清眩片成品质量的好坏直接关系到其疗效，对患者至关重要，因此本发明对糖综清眩片成品的质量检测方法进行了大量的研究工作，通过大量的实验研究在该品种的质量标准中制定了多味药材的鉴别项目,采用薄层色谱法结合高效液相色谱法鉴别丹参成分，采用超高效液相色谱法测定产品中的姜黄素、葛根素的含量，检测准确、快速、可靠、方便。通过建立明确专属性强的鉴别及有效成分的含量测定，能够对其成品质量进行科学、可行、有效、可靠的控制，使该制剂达到稳定、可控、高效及安全，是对产品投料要求及质量的严格控制，是保证产品疗效，更好地满足患者需要的有效方法。

Claims (8)

1.一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，其特征在于：所述治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂由下述重量配比的药材按中药制剂方法经浸泡、提取、滤过、浓缩、干燥、粉碎制成的中药片剂：姜黄20～30份，墨旱莲15～25份，女贞子15～25份，枸杞子3～15份，丹参10～20份，黄芪20～40份，葛根10～25份；

所述质量检测方法包括以下步骤：

以姜黄素为对照品，采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂中是否含有姜黄成分；

以葛根素为对照品，采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂中是否含有葛根成分；

以丹参酮IIA为对照品，采用薄层色谱法；以丹酚酸B为对照品，采用高效液相色谱法联合鉴别所述中药制剂中是否含有丹参成分；

以黄芪甲苷为对照品，采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂中是否含有黄芪成分。

2.根据权利要求１所述的一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，其特征在于，所述质量检测方法还包括以下步骤：

以姜黄素为对照品，采用超高效液相色谱法测定所述中药制剂中姜黄成分的含量；

以葛根素为对照品，采用超高效液相色谱法测定所述中药制剂中葛根成分的含量。

3.根据权利要求１所述的一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，其特征在于，所述以姜黄素为对照品，采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂中是否含有姜黄成分，包括以下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药制剂适量，研细，取1～4g，置索氏提取器中，加50～100mL沸程60～90℃石油醚提取0.5～2小时，取出，固体晾干后，加水30～50mL，超声处理20～40分钟，过滤，滤渣连同滤纸，加无水乙醇30～50mL，振摇，超声处理20～40分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2～4mL使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：取姜黄素对照品，加无水乙醇制成每1mL含0.2～1mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照所述中药制剂配比称取除姜黄以外的其他药材，按中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

吸取上述三种溶液各2～5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比80:18:2的三氯甲烷-乙醇-冰乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，置日光和紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有姜黄成分。

4.根据权利要求１所述的一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，其特征在于，所述以葛根素为对照品，采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂中是否含有葛根成分，包括以下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药制剂适量，研细，取1～3g，置索氏提取器中，加50～100mL沸程60～90℃石油醚提取0.5～2小时，取出，固体晾干后，加体积分数30%乙醇30～50mL，超声处理20～40分钟，过滤，滤液用水饱和的正丁醇萃取2～4次，每次10～20mL，合并正丁醇萃取液，蒸干，残渣加甲醇0.3～1mL使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取葛根素对照品，加甲醇制成每1mL含0.5～2mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照所述中药制剂配比称取除葛根以外的其他药材，按中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

吸取上述三溶液各4～8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比20:6:1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有葛根成分。

5.根据权利要求１所述的一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，其特征在于，所述以丹参酮IIA为对照品，采用薄层色谱法；以丹酚酸B为对照品，采用高效液相色谱法联合鉴别所述中药制剂中是否含有丹参成分，包括以下步骤：

薄层色谱法：

供试品溶液的制备：取所述中药制剂适量，研细，取8～10g，加水30～60mL超声处理20～40分钟，过滤，滤渣加乙醚30～50mL超声处理20～40分钟，过滤，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1～2mL使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取丹参酮IIA对照品，加乙酸乙酯制成每1mL含1～3mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照所述中药制剂配比称取除丹参以外的其他药材，按中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

吸取上述三种溶液各2～8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比4:1的沸程60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有丹参成分；

高效液相色谱法：

供试品溶液的制备：取所述中药制剂适量，研细，取0.1～0.3g，加体积分数75%的甲醇30～50mL，超声处理20～40分钟，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取丹酚酸B对照品，加体积分数75%甲醇制成每1mL含30～40μg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照所述中药制剂配比称取除丹参以外的其他药材，按中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比24:8:1:67的甲醇-乙腈-甲酸-水为流动相，检测波长286nm，柱温35℃；分别吸取上述三种溶液各10～20μL，注入液相色谱仪，测定；供试品色谱中，呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰；阴性样品无干扰，表明供试品中含有丹参成分。

6.根据权利要求１所述的一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，其特征在于，所述以黄芪甲苷为对照品，采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂中是否含有黄芪成分，包括以下步骤：

供试品溶液的制备：取所述中药制剂适量，研细，取5～10g，加水50～100ml，振摇，超声0.5～2小时，离心，取上清液加乙醚萃取2～4次，每次20～40ml；挥尽水层中乙醚，加水饱和的正丁醇萃取3～5次，每次20ml，合并正丁醇萃取液，用正丁醇饱和的质量分数1%NaOH水溶液洗涤2～4次，每次30～40ml，合并正丁醇提取液，蒸干正丁醇，残渣加甲醇0.5～1ml使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含1～2mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性样品溶液的制备：按照所述中药制剂配比称取除黄芪以外的其他药材，按中药制剂方法制成中药片剂，按照所述供试品溶液的制备方法制备成阴性供试品溶液；

吸取上述三种溶液各4～10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量分数10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性样品无干扰，表明供试品中含有黄芪成分。

7.根据权利要求2所述的一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，其特征在于，所述以姜黄素为对照品，采用超高效液相色谱法测定所述中药制剂中姜黄成分的含量，包括以下步骤：

色谱条件与系统适用性试验：采用ACQUITYUPLCBEH2.1×100mm,1.8μm色谱柱；以体积比40～50:60～50的乙腈-2%冰乙酸水溶液为流动相；二极管阵列检测器；流量为0.4mL/min；检测波长430nm；柱温30℃；

对照品溶液的制备：取姜黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含2～10μg的溶液；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的所述中药制剂，研细，取0.1～0.5g，精密称定，精密加入甲醇30～60mL，密塞，称定重量，超声处理20～40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液5mL，置25mL容量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；

合格标准：所述中药制剂每片含姜黄以姜黄素计，不得少于0.43mg。

8.根据权利要求2所述的一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法，其特征在于，所述以葛根素为对照品，采用超高效液相色谱法测定所述中药制剂中葛根成分的含量，包括以下步骤：

色谱条件与系统适用性试验：采用ACQUITYUPLCBEH2.1×100mm,1.8μm色谱柱；以体积比20～30:80～70的甲醇-水为流动相；二极管阵列检测器；流量为0.3mL/min；检测波长250nm；柱温30℃；

对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，加体积分数30%乙醇制成每1ml含5～15μg的溶液；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，研细，取0.2～0.5g，精密称定，精密加入30%乙醇30～50mL，密塞，称定重量，超声处理20～40分钟，放冷，再称定重量，用体积分数30%乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液5mL，置25mL容量瓶中，加体积分数25%甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；

合格标准：所述中药制剂每片含葛根以葛根素计，不得少于3.77mg。