CN101129457A

CN101129457A - 一种分步获得总丹参酮和总酚酸的制备方法

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Publication number: CN101129457A
Application number: CNA2007100707313A
Authority: CN
Inventors: 贺庆; 水文波; 程翼宇; 葛志伟; 窦静
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2007-08-08
Filing date: 2007-08-08
Publication date: 2008-02-27
Anticipated expiration: 2027-08-08
Also published as: CN100560090C

Abstract

本发明提供一种分步获得总丹参酮和总酚酸的制备方法，通过用乙酸乙脂提取总丹参酮，药渣加醇水提取，提取液用大孔吸附树脂柱分离获得。用本发明方法获得的总丹参酮和总酚酸，与药剂学允许的赋形剂制备成药物制剂，也可与其他药物或组分一起制成药物制剂。所制备的药物制剂为固体制剂、液体制剂、缓释制剂或控释制剂。本发明方法从丹参药材中分步得到总丹参酮和总酚酸这两类丹参中主要活性成分，并使用同一分析方法测定其中丹参酮IIA和丹酚酸B的含量。本发明方法设计合理，生产低成本、易操作、稳定性好、适于产业化生产。

Description

一种分步获得总丹参酮和总酚酸的制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，具体而言是涉及从中药丹参中经过提取、精制，分步获得总丹参酮和总酚酸，以及对其中代表性成分进行含量测定。

背景技术

目前，在全球范围内，中草药都有一定的市场，随着人们对健康要求认识水平的增高以及人口的老龄化，亚健康状态化，人们更加渴望回归自然，利用纯天然程度高的药物治疗、预防一些化学合成药物所不能解决得问题，因此天然植物药的应用超出它原来民族传统文化的背景。从天然药物中寻求副作用小、且物美价廉的药物成为世界各国医药企业所追逐的目标。欧共体对草药进行了统一立法，加拿大和澳大利亚等国草药地位已经合法化，美国政府也已起草了植物药管理办法，开始接受天然药物的复方混合制剂作为治疗药，这些为中药作为治疗药进入国际医药市场提供了良好的国际环境。另一方面，随着全球经济一体化进程的加快，特别是我国正式加入WTO，中国医药市场融入国际医药大市场的广度和深度将进一步加剧。面临强大跨国医药集团的激烈竞争以及日本、韩国、印度、泰国等亚洲国家传统医药产品和德国、法国等欧洲国家植物药的巨大冲击，我国传统中药产生的众多产品由于尚不能符合国际医药市场的标准和要求而被拒之门外。

丹参，别名血生根、赤根、血参、红根。丹参来自植物Salvia miltiorrhiza的根茎。丹参入药始载于汉代的《神农本草经》。中医认为，其味苦性微寒，具有活血通经、祛淤止痛、清心除烦、凉血消痈之功效，适用于治疗月经不调，冠心病，动脉硬化症，高血脂，心绞痛，痛经，经闭，崩漏，带下，跌打瘀血，失眠，乙肝，神经衰弱，血吸虫病肝脾肿大，骨节疼痛等疾病，尤为妇科、内科及外伤科证属血淤兼热者所常用。现代研究表明，丹参中主要含丹参酮类化合物及丹酚酸类化合物等。

目前，丹参中丹参酮类及丹酚酸类化合物的制备方法有所报道，但多为制备某类或某种成分，且往往缺乏有效的质量评价方法对制备产物的质量进行评价。本发明不但能从丹参药材中获取丹参酮类和丹酚酸类成分，而且用统一的高效液相色谱法对这两类成分中的代表化合物进行定量。此外，现有报道获取丹酚酸方法多较为复杂，不利于工业化生产需求，且常常使用水提后过柱的方法，在产业化的时候需要大量浓缩水，极为不便。步骤繁多，操作繁琐，限制了它们在工业上的应用。而本方法采用三道简单步骤，不但得到了两类有效成分，而且对其进行了高效液相色谱-蒸发光散射检测器联用(HPLC-ELSD)分析和代表性有效成分定量，为丹参酮、丹酚酸的获取与质量控制提供了良好的借鉴。

发明内容

本发明的目的是提供一种分步获得总丹参酮和总酚酸的制备方法，包括用乙酸乙脂提取总丹参酮，药渣加醇水提取，提取液用大孔吸附树脂柱分离这几个步骤。具体通过以下述技术方案实现：

(1)丹参药材去除杂质，烘干，用乙酸乙脂提取，提取液减压浓缩，干燥，即得总丹参酮；

(2)药渣加醇水提取，提取液减压浓缩富集；

(3)浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用水冲洗，弃去，再用含水乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压浓缩至无醇，冷冻干燥，即得丹参总酚酸。

其中：步骤(1)中，用乙酸乙脂8-15倍量，加热提取1-3次，每次0.5-2小时，最佳为12倍溶剂量提取1次，1小时。步骤(2)中，乙醇浓度为0-80％，溶剂用量为6-15倍量，加热提取1-3次，每次0.5-2小时，最佳为乙醇浓度50％，溶剂用量8倍量，提取2次，每次2小时。步骤(3)中，乙醇浓度为20-100％，最佳为40％。

用本发明方法所制备的总丹参酮和总酚酸，可制成任何一种药剂学上所说的药物剂型，这些药物剂型可以是，片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、缓释制剂、控释制剂、凝胶剂、软膏剂、油膏剂、霜剂、栓剂、注射剂、粉针剂、贴剂、滴丸、混悬剂等。也可配合其他药物或组分一起制成制剂使用。

本发明所述方法与其他方法相比的优势在于：

(1)通过本发明所述方法能从丹参药材中分步得到总丹参酮和总酚酸这两类丹参中主要活性成分，并使用同一分析方法测定其中丹参酮IIA和丹酚酸B的含量。

(2)总酚酸的提取采用醇水混合溶液，能有效降低浓缩时的温度，加快浓缩速度。

(3)本发明所述方法以有效成分得率和含量为指标进行综合评价，避免了一味追求有效成分含量高，而造成浸膏得率很低，难以满足工业化生产的要求。

(4)本发明设计合理，生产低成本、易操作、稳定性好、易于产业化生产总丹参酮和总酚酸，并对其中代表性成分进行含量测定。

附图说明

图1为丹参酮HPLC-ELSD图。

图2为丹酚酸HPLC-ELSD图。

具体实施方式

本发明结合附图和实施例作进一步的说明。应该说明以下述各实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。

实施例一HPLC-ELSD分析及含量测定

(1)丹酚酸B和丹参酮IIA的HPLC-ELSD联用分析及含量测定

色谱条件色谱柱Agilent Zorbax SB-C₁₈柱(4.6mm×150mm，5μm)；采用梯度洗脱，流动相A相为0.5％冰醋酸水溶液，流动相B相为含0.5％冰醋酸的乙腈溶液；0min，5％B，5min，10％B，15min，20％B，25min，35％B，35min，75％B，45min，95％B，55min，95％B；流速0.5mL·min^-1；检测波长：0-30min，288nm，30-55min，270nm；柱温30℃；进样量5L。丹酚酸B出峰时间为29.9min，丹参酮IIA出峰时间为50.4min。

供试品溶液的制备精密称取丹参酮成分和丹酚酸成分适量，用甲醇溶液分别溶解在容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。

测定方法精密吸取供试品溶液及对照品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。

(2)总酚酸的含量测定

总酚酸的含量测定按专利申请文献(中国专利，申请号01142288.2)所述方法进行测定：HPLC法在288nm测定丹酚酸B的含量，丹参总酚酸含量＝F(A-B)+B，其中A为分光光度法测定以丹酚酸B为对照计算的总酚酸含量，B为高效液相色谱法测定的丹酚酸B含量，F为校正因子0.626。结果参见图1和图2，图1中：A为ELSD；B为HPLC(254nm)；1为丹参酮IIA。图2中：A为ELSD图；B为HPLC(254nm)；1为丹酚酸B。

实施例二

取丹参1kg，50℃干燥6小时，加12倍量乙酸乙脂微沸状态加热回流提取1小时，提取液过滤后减压浓缩至近干后，真空干燥至干，得总丹参酮。药渣加8倍量50％乙醇水溶液微沸状态加热回流提取2次，每次2小时，提取液过滤，合并，减压浓缩至1g/mL(生药量)，上D₁₀₁大孔树脂(0.52g生药材/g湿树脂)。用4倍量柱体积去离子水冲洗，弃去，继续用4倍量40％乙醇水溶液洗脱。收集洗脱液，减压浓缩至无醇，冷冻干燥，即得丹参总酚酸。按实施例一方法测定，总丹参酮中丹参酮IIA含量为35.5％，总丹酚酸浸膏中总丹酚酸含量为88.7％，其中丹酚酸B含量为65.5％。

实施例三

取丹参1kg，50℃干燥6小时，加10倍量乙酸乙脂微沸状态加热回流提取2小时，提取液过滤后减压浓缩至近干后，真空干燥至干，得总丹参酮。药渣加10倍量50％乙醇水溶液微沸状态加热回流提取2次，每次2小时，提取液过滤，合并，减压浓缩至1g/mL(生药量)，上D₁₀₁大孔树脂(0.52g生药材/g湿树脂)。用5倍量柱体积去离子水冲洗，弃去，继续用5倍量30％乙醇水溶液洗脱。收集洗脱液，减压浓缩至无醇，冷冻干燥，即得丹参总酚酸。按实施例一方法测定，总丹参酮中丹参酮IIA含量为33.1％，总丹酚酸浸膏中总丹酚酸含量为86.5％，其中丹酚酸B含量为60.2％。

实施例四

取丹参1kg，50℃干燥6小时，加8倍量乙酸乙脂微沸状态加热回流提取1小时，提取液过滤后减压浓缩至近干后，真空干燥至干，得总丹参酮。药渣加8倍量70％乙醇水溶液微沸状态加热回流提取2次，每次1小时，提取液过滤，合并，减压浓缩至0.5g/mL(生药量)，上D₁₀₁大孔树脂(0.52g生药材/g湿树脂)。用4倍量柱体积去离子水冲洗，弃去，继续用4倍量50％乙醇水溶液洗脱。收集洗脱液，减压浓缩至无醇，冷冻干燥，即得丹参总酚酸。按实施例一方法测定，总丹参酮中丹参酮IIA含量为30.6％，总丹酚酸浸膏中总丹酚酸含量为88.5％，其中丹酚酸B含量为61.2％。

实施例五

取丹参1kg，50℃干燥6小时，加12倍量乙酸乙脂微沸状态加热回流提取1.5小时，提取液过滤后减压浓缩至近干后，真空干燥至干，得总丹参酮。药渣加12倍量50％乙醇水溶液微沸状态加热回流提取1次，每次2小时，提取液过滤，合并，减压浓缩至1g/mL(生药量)，上D₁₀₁大孔树脂(0.52g生药材/g湿树脂)。用4倍量柱体积去离子水冲洗，弃去，继续用4倍量40％乙醇水溶液洗脱。收集洗脱液，减压浓缩至无醇，冷冻干燥，即得丹参总酚酸。按实施例一方法测定，总丹参酮中丹参酮II A含量为33.3％，总丹酚酸浸膏中总丹酚酸含量为85.7％，其中丹酚酸B含量为58.6％。

实施例六滴丸的制备

取实施例二的总丹参酮0.5g与10.5g聚乙二醇-6000混合均匀，加热熔融，化料后移至滴丸滴灌中，药液滴至6～8℃液体石蜡中，除油，制得滴丸300粒。

实施例七冻干粉针剂的制备

取降香油1.5g，加入到13ml饱和的羟丙基β-环糊精中，搅拌溶解，滤过，滤液低温干燥得降香油和羟丙基β-环糊精的包合物粉末。除上述降香油合羟丙基β-环糊精的包合物粉末外，再取实施例二的总酚酸0.5g、甘露醇5.5g、依地酸钙钠0.9g和蒸馏水2ml，上述组分混匀后，冷冻干燥，分装350支，即得。

实施例八片剂的制备

取实施例二中丹参总酚酸适量与微晶纤维素混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，60℃干燥1小时，整粒，加入滑石粉适量，混匀，压片，即得。

实施例九胶囊的制备

取实施例二中总丹参酮与花生油按2∶18的比例水溶式不锈钢搅拌灌中，同时加入适量明胶和甘油混合，放出再用胶体磨磨浆，磨出的混合液搅拌，制成药液；将甘油与蒸馏水在40-50℃温度下搅拌混溶，再将甘油液温至80-90℃，取明胶加入其中混合搅拌，直至全部溶化成胶液，然后在60℃温度下使胶液静置4小时，用制板机制成胶板供制丸工序使用；将上述制成的药液和胶板送入压丸机制丸，然后在22-25℃温度下吹风4小时作滚筒定型，又在25-30℃温度下吹风干燥16-20小时，检选合格胶丸，用95％乙醇清洗，在25-30℃下吹风干燥4小时，即得。

实施例十注射液的制备

取实施例二中丹参总酚酸适量用40℃注射用水溶解，加入适量药用载体等渗剂，调节溶液的pH值为7.0-8.0，加注射用水至全量，用超滤器超滤除热源，测定pH值后，用膜过滤，分装后，高压灭菌，检验、包装，即得。

Claims

1.一种分步提取总丹参酮和总酚酸的制备方法，其特征是通过以下步骤实现：

(2)药渣加醇水提取，提取液减压浓缩富集；

2.根据权利要求1所述的一种分步提取总丹参酮和总酚酸的制备方法，其特征是：步骤(1)中用乙酸乙脂8-15倍量，加热提取1-3次，每次0.5-2小时。

3.根据权利要求1所述的一种分步提取总丹参酮和总酚酸的制备方法，其特征是：步骤(1)中，步骤(1)中用乙酸乙脂10-12倍量，加热提取1-2次，每次0.5-1小时。

4.根据权利要求1所述的一种分步提取总丹参酮和总酚酸的制备方法，其特征是：步骤(2)中，乙醇浓度为0-80％，溶剂用量为6-15倍量，加热提取1-3次，每次0.5-2小时。

5.根据权利要求1所述的一种分步提取总丹参酮和总酚酸的制备方法，其特征是：步骤(2)中，乙醇浓度为30-70％，溶剂用量为6-10倍量，加热提取1-2次，每次1-2小时。

6.根据权利要求1所述的一种分步提取总丹参酮和总酚酸的制备方法，其特征是：步骤(3)中，乙醇浓度为20-100％。

7.根据权利要求1所述的一种分步提取总丹参酮和总酚酸的制备方法，其特征是：步骤(3)中，乙醇浓度为30-60％。

8.根据权利要求1所述的一种分步提取总丹参酮和总酚酸的制备方法，其特征是：制备所得的总丹参酮和总酚酸，与药剂学允许的赋形剂制备成药物制剂。

9.根据权利要求1所述的一种分步提取总丹参酮和总酚酸的制备方法，其特征是：制备所得的总丹参酮和总酚酸，与其他药物或组分一起制成药物制剂。

10.根据权利要求8或9所述的一种分步提取总丹参酮和总酚酸的制备方法，其特征是：所制备的药物制剂为固体制剂、液体制剂、缓释制剂或控释制剂。