CN100444860C - 一种复方中药提取物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种复方中药提取物组合物及其制备方法，该组合物含组合单元A和组合单元B，是从川芎、红花、桃仁、赤芍、枳壳、柴胡药材中提取分离获取，经喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥法获得各组合单元浸膏粉，并进行组合构成中药提取物组合物，其中含组合物单元A 1～5g、组合物单元B 1.5～5g，组合物中有效组分含量为芍药苷类化合物15%～40%，黄酮类化合物15%～40%。该组合物能显著降低高脂血症大鼠总胆固醇以及低密度脂蛋白胆固醇含量，可用于制备防治血脂胆固醇过高及心脑血管疾病的药物。制剂剂型为口服液、颗粒剂、片剂、胶囊等口服制剂。与传统复方相比，具有组方明确，工艺稳定，疗效显著等优点。

Description

一种复方中药提取物组合物及其制备方法

所属技术领域

本发明涉及一种中药组合物及其制备方法，特别是一种有效组分明确、具有调血脂作用的复方中药提取物组合物及其制备方法。

背景技术

心脑血管疾病是当前死亡率最高的疾病，严重威胁人类健康，脂质代谢紊乱是导致心脑血管疾病的重要因素。目前，常用的他汀类降血脂药物长期应用具有较大毒副作用，甚至产生严重不良反应。因此，从天然药物，特别是传统中医方剂中开发降血脂的有效药物是降血脂药物开发的热点。现有中药制剂大多是在古方或验方的基础上制成的复方中药制剂，存在药效物质不明确、难以进行质量控制等缺陷。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有调血脂作用的复方中药提取物组合物及其制备方法，组成该组合物的组合单元A和组合单元B是从川芎、红花、桃仁、赤芍、枳壳、柴胡药材中提取分离获取，组合物处方中，含组合单元A1～5g，组合单元B1.5～5g。

本发明提供的制备方法通过以下几步实现：

(1)溶剂提取法获取复方中药提取物；

(2)柱层析法分离获取组合单元，并进行组合构成中药提取物组合物。

溶剂提取法是取全方药材，以水或10％～80％乙醇溶液为溶剂，单独或混合提取。采用的提取方法有煎煮、加热回流、超声等，提取液常压或减压浓缩。

柱层析分离获取各组合单元是采用大孔树脂、聚酰胺等柱层析方法，分离获取各组合单元，采用喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥法获得各组合单元浸膏粉。

制备方法主要有：(1)取全方药材饮片，加水煎煮，提取液浓缩，浓缩液上大孔树脂柱，分别以水及10％～80％乙醇梯度洗脱。收集30％以下浓度乙醇洗脱液，减压回收溶剂，喷雾或真空干燥成浸膏粉，得组合单元A；收集40％～60％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，喷雾或真空干燥成浸膏粉，得组合单元B；(2)取全方药材饮片，加60％乙醇回流提取，提取液减压浓缩除去乙醇，加适量水后，上大孔树脂柱，分别以水及10％～80％乙醇梯度洗脱。收集30％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，喷雾或真空干燥成浸膏粉，得组合单元A；收集70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，喷雾或真空干燥成浸膏粉，得组合单元B；(3)取方中赤芍药材饮片，加70％乙醇回流提取。提取液减压浓缩除去乙醇，加适量水后，上大孔树脂柱分别以水、20％乙醇、40％乙醇洗脱，收集40％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，喷雾或真空干燥成浸膏粉，得组合单元A；全方其它药材饮片，加60％乙醇回流提取。提取液减压浓缩除去乙醇，加适量水后，上大孔树脂柱，分别以水、30％乙醇、70％乙醇洗脱。收集70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，喷雾或真空干燥成浸膏粉，得组合单元B。

组合物中的组合单元A和组合单元B主要含有芍药苷类化合物和黄酮类化合物，有效组分主要有芍药苷、羟基芍药苷、芍药内酯苷、新橙皮苷、橙皮苷、柚皮苷、阿魏酸、苦杏仁苷等。组合物中芍药苷类化合物含量为15％～40％，黄酮类化合物含量为15％～40％。

本发明提供的复方中药提取物组合物具有降血脂作用，可在制备防治高脂血症及心脑血管疾病药物中应用。制备的药物制剂形式为口服制剂，包括口服液、颗粒剂、片剂、胶囊剂等。

本发明主要特点是：本组合物源于川芎、桃仁、赤芍、红花、枳壳、柴胡组成的中药方剂，通过现代分离技术获取有效组分并组成组合单元，由组合单元组成复方组合物，该组合物保留且突出了原方调血脂主效应，药效物质明确，组合物药效优于原方及各组合单元，体现了配伍增效作用。

具体实施例

实施例1复方中药提取物组合物制备方法1

将川芎、桃仁、赤芍、红花、枳壳、柴胡六种药材按3∶3∶3∶2∶2∶1比例混合，分别加7倍、6倍、5倍量水煎煮2.0h、1.5h、1.0h。过滤，合并滤液，70℃减压浓缩至1g药材/ml的浓度，浓缩液过滤。以滤液∶树脂量(ml∶g)为1∶3的比例将滤液上于D-101型大孔树脂柱中，分别以水、10％乙醇、20％乙醇、30％乙醇、40％乙醇、50％乙醇、60％乙醇、70％乙醇洗脱，收集各洗脱液。取30％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥成浸膏粉，得组合单元A；合并40％乙醇、50％乙醇、60％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥成浸膏粉，得组合单元B。

实施例2复方中药提取物组合物制备方法2

将川芎、桃仁、赤芍、红花、枳壳、柴胡六种药材按3∶3∶3∶2∶2∶1比例混合，加10倍量60％乙醇煎煮3次，每次1.5h。过滤，合并滤液，减压回收乙醇，加水适量稀释至1.5g药材/ml的浓度，过滤。以滤液∶树脂量(ml∶g)为1∶4.5的比例将滤液上于D-101型大孔树脂柱中，分别以4倍树脂床体积水、5倍树脂床体积10％乙醇、3倍树脂床体积30％乙醇、3倍树脂床体积70％乙醇洗脱。收集30％乙醇洗脱液减压回收溶剂，真空干燥成浸膏粉，得组合单元A；收集70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥成浸膏粉，得组合单元B。

实施例3复方中药提取物组合物制备方法3

取方中赤芍药材饮片，加8倍量70％乙醇回流提取3次，每次1.0。提取液减压浓缩除去乙醇，加适量水后，上大孔树脂柱。分别以5倍树脂床体积20％乙醇、4倍树脂床体积40％乙醇洗脱。收集40％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，喷雾干燥成浸膏粉，得组合单元A。将川芎、桃仁、红花、枳壳、柴胡五种药材按3∶3∶2∶2∶1比例混合，加10倍量60％乙醇，回流提取3次，每次1.5h。过滤，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩液加适量水稀释至1g药材/ml的浓度，过滤。以滤液∶树脂量(ml∶g)为1∶4.5的比例将滤液上于D-101型大孔树脂柱中，分别以4倍树脂床体积的30％乙醇、3倍树脂床体积70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱物，回收乙醇，回收液加适量水稀释，过滤，滤液喷雾干燥得组合单元B。喷雾干燥条件：液体比重：1.08，进口温度160℃，出口温度70℃。

实施例4复方中药提取物各组合单元组合方式

组合方式1：A∶B为5∶2得组合物1

组合方式2：A∶B为4∶5得组合物2

组合方式3：A∶B为3.8∶5得组合物3

组合方式4：A∶B为2∶3得组合物4

组合方式5：A∶B为2∶5得组合物5

实施例5复方中药提取物组合物总黄酮含量测定

1仪器和试药722型分光光度计，柚皮甙对照品：Sigma试剂。其余试剂均为分析纯。

2对照品溶液和供试品溶液制备精密称取柚皮甙对照品适量，加50％甲醇溶解并定容，制成浓度为0.5mg/ml的溶液，作为对照品溶液。另取约0.5g供试品，精密称定，热水溶解，定容于100ml量瓶中。精密吸取此溶液10ml，过聚酰胺柱，先用20.0ml水洗，弃去水洗液，再用95％乙醇洗脱于100ml量瓶中并定容，作为供试品溶液。

1.3含量测定：精密吸取一定量对照品溶液与供试品溶液于50ml量瓶中，精密加入5％NaNO₂1.0ml，放置6min，再加入10％Al(NO₃)₃1.0ml，放置6min，加4％NaOH10.0ml，用95％乙醇定容，放置60min，以空白试剂为空白，在420nm波长处测定吸光度，外标法计算含量。

组合物1含黄酮类化合物11％

组合物2含黄酮类化合物18％

组合物3含黄酮类化合物24％

组合物4含黄酮类化合物19％

组合物5含黄酮类化合物22％

实施例6复方中药提取物组合物芍药苷含量测定

1仪器和药品日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，CLSS-VP色谱处理系统，SPD-M10A二极管阵列检测器(DAD)，SIL-10AD自动进样器。芍药苷对照品：由中国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2芍药苷对照品溶液和供试品溶液的制备精密称取干燥至恒重的芍药苷对照品适量，加50％甲醇溶解并定容，制成浓度为0.25mg/ml的溶液，取样品约0.1g，精密称定，用50％甲醇溶解，定容于100ml量瓶中，作为供试品溶液。临用前用0.45μm微孔滤膜过滤。

3色谱条件色谱柱Shim-pack C₁₈(150mm×4.6mm，5μm)；流动相甲醇-0.5％醋酸水30∶70；流速1.0ml/min；柱温30℃；DAD检测器，检测波长230nm；进样量：20μl；CLASS-VP色谱工作站。

4样品测定精密吸取20μl对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算样品中芍药苷含量。

组合物1含芍药苷类37％

组合物2含芍药苷类26％

组合物3含芍药苷类22％

组合物4含芍药苷类24％

组合物5含芍药苷类19％

实施例7复方中药提取物组合物组分分析

采用LC/MS、LC/MS/MS联用技术，确定组合物中主要含有下列成分：芍药苷、羟基芍药苷、芍药内酯苷、新橙皮苷、橙皮苷、柚皮苷、阿魏酸、苦杏仁苷等。

实施例8复方中药提取物及组合物降脂药效实验1

1实验材料：

1.1动物：雄性Wistar大鼠，6～8周，体重：160-190g。

1.2药物：全方提取物：采用上述提取方法获取的总提取物；组合单元A、组合单元B、提取物组合物：A∶B为3∶2。阳性对照药：心血康。

1.3高脂饲料：4％胆固醇、10％猪油、0.2％甲基硫氧嘧啶、0.5％胆盐、85％普通饲料。

2实验方法：

2.1实验分组：所用动物分为空白组、模型组、对照组、样品组。

2.2检测指标：总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇。

3统计方法：所有数据用均数±标准差(X±S)表示，统计用F检验。

4实验结果；实验结果如表1所示，结果表明，组合得到的提取物组合物能够显著降低大鼠血液中总胆固醇、甘油三酯以及低密度脂蛋白胆固醇含量，其降血脂效果优于各组合单元，存在配伍增效作用。

表1降脂药效实验结果

注：*与模型组相比具有显著差异(P＜0.05)，**与模型组相比，具有非常显著差异(P＜0.01)

实施例9复方中药提取物及组合物降脂药效实验2

1实验材料：

1.1动物：雄性Wistar大鼠，6～8周，体重：160-190g。

1.2药物：中药提取物各组合物。阳性对照药：血脂康。

1.3高脂饲料：4％胆固醇、10％猪油、0.2％甲基硫氧嘧啶、0.5％胆盐、85％普通饲料。

2.实验方法：

2.1实验分组：所用动物分为空白组、模型组、对照组、样品组。

2.2检测指标：总胆固醇，低密度脂蛋白胆固醇。

3.统计方法：所有数据用均数±标准差(X±S)表示，统计用F检验。

4.实验结果：实验结果如表2所示，该提取物组合物能够显著降低大鼠血液中总胆固醇以及低密度脂蛋白胆固醇含量，且其降血脂效果优于阳性药。

表2药效实验结果

注：*与模型组相比具有显著差异(P＜0.05)，**与模型组相比，具有非常显著差异(P＜0.01)

无需进一步详细阐述，相信采用前面所公开的内容，本领域技术人员可最大限度地应用本发明。因此，前面的具体实施例应理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。

Claims (4)

1.一种具有防治高脂血症及心脑血管疾病功效的复方中药提取物组合物，其特征是：组成该组合物的组合单元A和组合单元B是从川芎、红花、桃仁、赤芍、枳壳、柴胡药材中提取，通过以下方法获得：将川芎、桃仁、赤芍、红花、枳壳、柴胡六种药材按3∶3∶3∶2∶2∶1比例混合，分别加7倍、6倍、5倍量水煎煮2.0小时、1.5小时、1.0小时，过滤，合并滤液，70℃减压浓缩至1g药材/ml的浓度，浓缩液过滤，以滤液∶树脂量ml∶g为1∶3的比例将滤液上于D-101型大孔树脂柱中，分别以水、10％乙醇、20％乙醇、30％乙醇、40％乙醇、50％乙醇、60％乙醇、70％乙醇洗脱，收集各洗脱液，取30％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥成浸膏粉，得组合单元A，合并40％乙醇、50％乙醇、60％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥成浸膏粉，得组合单元B；组合物中含组合单元A 1～5g，组合单元B 1.5～5g。

2.一种具有防治高脂血症及心脑血管疾病功效的复方中药提取物组合物，其特征是：组成该组合物的组合单元A和组合单元B是从川芎、红花、桃仁、赤芍、枳壳、柴胡药材中提取，通过以下方法获得：将川芎、桃仁、赤芍、红花、枳壳、柴胡六种药材按3∶3∶3∶2∶2∶1比例混合，加10倍量60％乙醇煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，加水适量稀释至1.5g药材/ml的浓度，过滤，以滤液∶树脂量ml∶g为1∶4.5的比例将滤液上于D-101型大孔树脂柱中，分别以4倍树脂床体积水、5倍树脂床体积10％乙醇、3倍树脂床体积30％乙醇、3倍树脂床体积70％乙醇洗脱，收集30％乙醇洗脱液减压回收溶剂，真空干燥成浸膏粉，得组合单元A，收集70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥成浸膏粉，得组合单元B；组合物中含组合单元A 1～5g，组合单元B 1.5～5g。

3.根据权利要求1或2所述的复方中药提取物组合物，其特征是：组合单元A和B含有芍药苷类化合物和黄酮类化合物，组合物中含有15％～40％芍药苷类化合物和15％～40％黄酮类化合物。

4.根据权利要求1或2所述的复方中药提取物组合物在制备防治高脂血症及心脑血管疾病药物中的应用。