CN105056190A - 一种促进骨折愈合的中药组合物及有效成分检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药组合物，目的在于针对现有技术不足，着眼于中药组合物中含有的各种苯并酸类化合物及其衍生物在促进骨折愈合、提高愈后骨骼强度方面的显著作用。苯并酸类化合物及其衍生物，如绿原酸等，从通常特性上来讲，苯并酸类物质已经被发现具备杀菌消炎、病毒的一定抗性、促进体液组织液分泌等药理作用，也可抑制TNF-B等因子生长活动，可以干预性地抑制炎症反应，为骨折患处迅速生长保驾护航。中药组合物主要参考了苯并酸类化合物有效成分的量来选择，则进一步给出一种前述促进骨折愈合的中药组合物的苯并酸类有效成分检测方法。

Description

一种促进骨折愈合的中药组合物及有效成分检测方法

技术领域

本发明涉及中药组合物有效成分的检测方法，具体涉及一种促进骨折愈合中药组合物、及其制备方法，和其中含有的苯并酸类有效成分的检测方法。

背景技术

骨折后的利用中药组合物促进恢复，一直是我国中医界的专有技术，但是现有技术中的促进骨折愈合的中药组合物，所用药材五花八门，各种药材用法、疗效的说法层出不穷，很难有客观的判断标准，某中药组合物有没有效果，往往通过几例或是一些临床例子来说明，说服力不足，某一味或者多味中药材在某中药组合物中到底发挥不发挥作用，发挥多大的作用，很难评估，而现有的中药组合物检测方法，往往仅仅检测单一药材的标准、是否合格，有效成分是否足够等情况，对中药组合物的效用如何，没有一些有理有据的方法进行检测。

发明内容

本发明的中药组合物，其目的在于针对现有技术的不足，着眼于中药组合物中含有的各种苯并酸类化合物及其衍生物在促进骨折愈合、提高愈后骨骼强度方面的显著作用。在现有技术中，通过细致分析，已经发现促进骨折愈合的中药材中含有多种苯并酸类化合物及其衍生物，如绿原酸及其衍生物绿原酸甲酯等、阿魏酸、咖啡酸、没食子酸、茴香酸等等。从通常特性上来讲，苯并酸类物质已经被发现具备杀菌消炎、病毒的一定抗性、促进体液组织液分泌等药理作用，也可抑制TNF-B、TNF-alpha、COX-2等因子生长活动，可以干预性地抑制炎症反应，抑制各种炎症和坏死因子的表达，为骨折患处迅速生长，消除炎症等不良影响而保驾护航。

本发明结合骨折愈合相关的中药材的特性，以中药组方惯例规则为基础，从是否含有苯并酸类化合物以及多少出发，参考性地给出了一种促进骨折愈合的中药组合物：

一种促进骨折愈合的中药组合物，其所含有的中药组方为，何首乌、淫羊藿、熟地黄、龟甲、巴戟天、杜仲、续断、骨碎补、当归、山药、三七、白芷、自然铜、血竭、五爪金龙、大通草、紫木通、仙人掌、生姜、甜瓜籽、生菜籽、黄瓜籽、土鳖虫、补骨脂，大黄，乳香，马钱子粉，冰片，甜瓜子。

前述的一种促进骨折愈合的中药组合物，其特征在于，其重量份配比为：

何首乌1-3份、淫羊藿2-7份、熟地黄2-4份、龟甲1-2份、巴戟天1-3份、杜仲2-3份、续断2-5份、骨碎补2-7份、当归1-6份、山药1-3份、三七1-3份、白芷1-4份、自然铜1-3份、血竭1-4份、五爪金龙1-3份、大通草1-3份、紫木通1-3份、仙人掌2-4份、生姜1-3份、甜瓜籽1-3份、生菜籽1-3份、黄瓜籽1-3份、土鳖虫1-3份、补骨脂1-10份，大黄1-10份，乳香1-10份，马钱子粉1-10份，冰片1-10份，甜瓜子1-10份。

前述的一种促进骨折愈合的中药组合物，其特征在于，其重量份配比进一步可以为：

何首乌1份、淫羊藿3份、熟地黄3份、龟甲2份、巴戟天2份、杜仲3份、续断4份、骨碎补5份、当归2份、山药3份、三七3份、白芷3份、自然铜2份、血竭2份、五爪金龙2份、大通草2份、紫木通2份、仙人掌3份、生姜3份、甜瓜籽3份、生菜籽3份、黄瓜籽3份、土鳖虫3份、补骨脂10份、大黄5份，乳香5份，马钱子粉5份，冰片5份，甜瓜子5份。

前述的一种促进骨折愈合的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物为口服药物制剂，剂型为选自丸剂、散剂、颗粒剂、片剂、锭剂、煎膏剂、胶剂、糖浆剂、滴丸剂、胶囊剂、酒剂、浸膏剂的其中一种。

前述的一种促进骨折愈合的中药组合物的中药组合物制备方法，其特征在于：

1)将当归、三七、自然铜、血竭、续断五种药材混合粉碎成均一的药物粉末A，备用，将骨碎补、补骨脂、土鳖虫三种药材单独混合以备煎煮；

2)将何首乌、淫羊藿、熟地黄、龟甲、巴戟天、杜仲、山药、白芷、五爪金龙、大通草、紫木通、仙人掌、生姜、甜瓜籽、生菜籽、黄瓜籽、大黄，乳香，马钱子粉，冰片，甜瓜子加水煎煮2次，每次0.5-1.5小时，将骨碎补、补骨脂、土鳖虫三种药材加水煎煮3次，每次0.5-1小时；

3)将步骤2)中的两种煎煮后的药液加热浓缩至体积减小一半后，静置至常温，加入药物粉末A，再搅拌混合均匀，浓缩至稠膏状；

4)将步骤3)的稠膏加入药学上可以接受的辅料，混合，按需求制成制剂。

介于前述促进骨折愈合的中药组合物主要参考了苯并酸类化合物有效成分的量来选择，则进一步给出一种前述促进骨折愈合的中药组合物的苯并酸类有效成分的检测方法，其特征在于：

所述苯并酸类有效成分的检测方法是利用配置有低压汞灯的宽波长范围的高效液相色谱法检测中药组合物中的苯并酸类的有效成分，具体的步骤是：

A)溶剂提取：取该稠膏状的中药组合物，或者是经稠膏状转制的中药组合物，加入溶剂，配制成药物含量约为15mg/ml-30mg/ml的待检样品溶液；

B)配制苯并酸类标准样品对照溶液：取绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、绿原酸甲酯、没食子酸、茴香酸，按照等物质的量混合后，用溶剂配制成各成分浓度均为15ug/ml-90ug/ml的对照溶液，此处使用的溶剂与步骤A保持一致；

C)高效液相色谱检测：将待测样品溶液和对照溶液分别按照以下方法进行高效液相色谱检测：

以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，按进样量为5ul-20ul进样，柱温为10℃-25℃，用由用由F相、G相和H相组成的流动相以1ml/min-5ml/min的流速进行梯度洗脱，同时采用检测波长为210-330nm的低压汞灯提供的宽波长范围的紫外光波长检测，获得待检样品溶液和对照溶液的高效液相色谱图；

D)将待检样品溶液的高效液相色谱图与对照溶液的高效液相色谱图比较，与对照溶液的高效液相色谱图中相应成分的保留时间相同的峰即是与该成分相同物质的特征峰，并根据峰面积按外标法计算含量；

其中，所述梯度洗脱步骤为：0分钟，流动相中F相的体积百分比为15％～30％，流动相中G相的体积百分比为70％～40％，流动相中H相的体积百分比为15％～30％；2分钟～5分钟，F相为20％～30％，G相为75％～45％，H相为15％～25％；5分钟～10分钟，F相为17％～33％，G相为68％～34％，H相为17％～33％；10分钟～20分钟，F相为16％～32％，G相为64％～36％，H相为16％～32％；20分钟～30分钟，F相为18％～34％，G相为64％～32％，H相为18％～34％；30分钟～40分钟，F相为20％～40％，G相为60％～20％，H相为20％～40％；其中，以上百分比均为体积百分比；

其中，所述对照溶液的高效液相色谱图中各峰依次为绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、绿原酸甲酯、没食子酸、茴香酸的特征峰；

所述流动相的F相是甲醇；所述流动相的G相是0.8％～3％的三乙胺；所述流动相的H相是乙腈。H相也可以是四氢呋喃。

前述的苯并酸类有效成分的检测方法，其特征在于：所述步骤A和B使用的溶剂可以是与水互溶的质量百分比浓度为20％～75％的乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯与水的混合溶剂。

前述的苯并酸类有效成分的检测方法，其特征在于：所述梯度洗脱步骤为：0分钟，流动相中F相的体积百分比为17％，流动相中G相的体积百分比为66％，流动相中H相的体积百分比为17％；3分钟，F相为18％，G相为64％，H相为18％；5分钟，F相为19％，G相为62％，H相为19％；10分钟，F相为20％，G相为60％，H相为20％；15分钟，F相为22％，G相为56％，H相为22％；20分钟，F相为24％，G相为52％，H相为24％；其中，以上百分比均为体积百分比。

前述的苯并酸类有效成分的检测方法，其特征在于：所述紫外光多波长检测的检测波长为251nm、260nm、273nm、315nm、325nm，所述流动相的流速为2ml/min，所述色谱柱柱温为20℃。

本发明所述混合对照品溶液的高效液相色谱图中的各峰的归属是通过以下方法确定的：分别配制绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、没食子酸、茴香酸的标准品溶液，然后在前述的同一色谱条件下分别制备各单独标准品溶液和所述对照溶液的高效液相色谱图，根据各单独标准品溶液色谱图中相应成分的峰的保留时间确定对照溶液色谱图中各峰的归属。经过多次重复试验，发现所述流动相中混合对照品溶液中有五种苯丙酸类有效成分有固定的出峰，这五种成分为绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、没食子酸、茴香酸，因此，可确定对照溶液高效液相色谱图中五个位置峰的归属。

与现有技术相比，本发明的有益效果有：

通过前期数据分析，确定了对照溶液高效液相色谱图中有五个峰的归属分别为绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、没食子酸、茴香酸，因此，在检测组合物的有效成分时，不需要再分别制备以上五种成分的各标准品的高效液相色谱图，从而节省了时间和试剂。

此外，本发明的检测方法通过充分设计，按事先安排的程序连续改变流动相中各相之间的比例进行梯度洗脱，做到了分离组合物多种成分细致而准确的目的，也对进一步检测波长提高精度成为可能。

采用本发明的检测方法，可以同时对组合物的有效成分中的绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、没食子酸、茴香酸这五种成分做到半定量的检测。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1。

1)仪器与试剂。

设备与试剂：海能LC7000高效液相色谱仪(一体式防尘PDA光路，高效的色谱工作站具有较强处理数据能力，实时错误自动报警，可编程式控制色谱柱情况，四元低压泵，超宽范围的温度控制的柱温箱)；常用可适应该仪器的色谱柱；高精度电子天平；超声波清洗器；超纯水。对照品：绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、没食子酸、茴香酸。

待检样品：促进骨折愈合的中药组合物。

其他试剂：四氢呋喃(色谱纯)、甲醇、三乙胺(分析纯)的水溶液(色谱运行温度调整至18℃以下以保证三乙胺与水混溶的效果)。

2)检测方法。

a、对照溶液的制备：准确量取绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、绿原酸甲酯、没食子酸、茴香酸适量，用100％的甲醇溶解，定容，摇匀，滤膜过滤，制得绿原酸含量为30μg/ml、阿魏酸含量为30μg/ml、咖啡酸含量为30μg/ml、没食子酸含量为30μg/ml、茴香酸含量为30μg/ml的混合对照品溶液。

b、待检样品溶液的制备：取中药组合物0.1g进行精密称定后，置于100ml的容量瓶中，精密加入90％甲醇至刻度线；常温下进行超声1小时，使其完全溶解，制得浓度为2mg/ml的样品溶液，摇匀，微孔滤膜过滤。

c、色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，取混合对照样品溶液10μL进样，柱温为15℃，流速1.5ml/min，按下述程序安排进行梯度洗脱：

0分钟，流动相中F相的体积百分比为17％，流动相中G相的体积百分比为66％，流动相中H相的体积百分比为17％；3分钟，F相为18％，G相为64％，H相为18％；5分钟，F相为19％，G相为62％，H相为19％；10分钟，F相为20％，G相为60％，H相为20％；15分钟，F相为22％，G相为56％，H相为22％；20分钟，F相为24％，G相为52％，H相为24％；其中，以上百分比均为体积百分比；

检测波长为210-330nm的低压汞灯提供的宽波长范围的紫外光波长检测，获得待检样品溶液和对照溶液的高效液相色谱图；

其中，流动相的G相是0.8％的三乙胺，其制备方法是：将分析纯的三乙胺加水配制成0.8％的三乙胺溶液(柱温设置在15℃，以保证绝对混溶)；流动相的F相是甲醇，流动相的H相是乙腈。

按照上述方法得到待检样品溶液的高效液相色谱图，其中，待检样品溶液的进样量为10μL，流速0.8ml/min。

3)结果比较。

混合对照品溶液的高效液相色谱图中，比较待检样品溶液的高效液相色谱图与对照溶液的高效液相色谱图各峰的保留时间和峰面积，根据绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、没食子酸、茴香酸的紫外特征峰数据以及实际检测结果，可以确定，上述五种物质在无冲突的情况下，对应的低压汞灯检出波长分别为波长为251nm、260nm、273nm、315nm、325nm。进一步可以确认这些物质的存在，以及大致含量的计算。

实施例2。

1)仪器与试剂。

设备与试剂：海能LC7000高效液相色谱仪(一体式防尘PDA光路，高效的色谱工作站具有较强处理数据能力，实时错误自动报警，可编程式控制色谱柱情况，四元低压泵，超宽范围的温度控制的柱温箱)；常用可适应该仪器的色谱柱；高精度电子天平；超声波清洗器；超纯水。对照品：绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、没食子酸、茴香酸。

待检样品：促进骨折愈合的中药组合物。

其他试剂：四氢呋喃(色谱纯)、甲醇、三乙胺(分析纯)的水溶液(色谱运行温度调整至18℃以下以保证三乙胺与水混溶的效果)。

2)检测方法。

a、对照溶液的制备：准确量取绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、绿原酸甲酯、没食子酸、茴香酸适量，用100％的甲醇溶解，定容，摇匀，滤膜过滤，制得绿原酸含量为50μg/ml、阿魏酸含量为50μg/ml、咖啡酸含量为50μg/ml、没食子酸含量为50μg/ml、茴香酸含量为50μg/ml的混合对照品溶液。

b、待检样品溶液的制备：取中药组合物0.2g进行精密称定后，置于100ml的容量瓶中，精密加入95％甲醇至刻度线；常温下进行超声1.5小时，使其完全溶解，制得浓度为4mg/ml的样品溶液，摇匀，微孔滤膜过滤。

c、色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，取混合对照样品溶液20μL进样，柱温为16℃，流速2ml/min，按下述程序安排进行梯度洗脱：

0分钟，流动相中F相的体积百分比为18％，流动相中G相的体积百分比为64％，流动相中H相的体积百分比为18％；3分钟，F相为19％，G相为62％，H相为19％；5分钟，F相为20％，G相为60％，H相为20％；10分钟，F相为20％，G相为60％，H相为20％；15分钟，F相为22％，G相为56％，H相为22％；20分钟，F相为24％，G相为52％，H相为24％；其中，以上百分比均为体积百分比；

检测波长为210-330nm的低压汞灯提供的宽波长范围的紫外光波长检测，获得待检样品溶液和对照溶液的高效液相色谱图；

其中，流动相的G相是1.2％的三乙胺，其制备方法是：将分析纯的三乙胺加水配制成1.2％的三乙胺溶液(柱温设置在16℃，以保证绝对混溶)；流动相的F相是甲醇，流动相的H相是四氢呋喃。

按照上述方法得到待检样品溶液的高效液相色谱图，其中，待检样品溶液的进样量为20μL，流速2ml/min。

3)结果比较。

混合对照品溶液的高效液相色谱图中，比较待检样品溶液的高效液相色谱图与对照溶液的高效液相色谱图各峰的保留时间和峰面积，根据绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、没食子酸、茴香酸的紫外特征峰数据以及实际检测结果，可以确定，上述五种物质在无冲突的情况下，对应的低压汞灯检出波长分别为波长为251nm、260nm、273nm、315nm、325nm。进一步可以确认这些物质的存在，以及大致含量的计算。

实施例3。

1)仪器与试剂。

设备与试剂：海能LC7000高效液相色谱仪(一体式防尘PDA光路，高效的色谱工作站具有较强处理数据能力，实时错误自动报警，可编程式控制色谱柱情况，四元低压泵，超宽范围的温度控制的柱温箱)；常用可适应该仪器的色谱柱；高精度电子天平；超声波清洗器；超纯水。对照品：绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、没食子酸、茴香酸。

待检样品：促进骨折愈合的中药组合物。

其他试剂：四氢呋喃(色谱纯)、95％甲醇、三乙胺(分析纯)的水溶液(色谱运行温度调整至18℃以下以保证三乙胺与水混溶的效果)。

2)检测方法。

a、对照溶液的制备：准确量取绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、绿原酸甲酯、没食子酸、茴香酸适量，用95％的甲醇溶解，定容，摇匀，滤膜过滤，制得绿原酸含量为60μg/ml、阿魏酸含量为60μg/ml、咖啡酸含量为60μg/ml、没食子酸含量为60μg/ml、茴香酸含量为60μg/ml的分别配成五种独立的对照溶液。

b、待检样品溶液的制备：取中药组合物0.15g进行精密称定后，置于100ml的容量瓶中，精密加入90％甲醇至刻度线；常温下进行超声2小时，使其完全溶解，制得浓度为3mg/ml的样品溶液，摇匀，微孔滤膜过滤。

c、色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，取混合对照样品溶液18μL进样，柱温为17℃，流速3ml/min，按下述程序安排进行梯度洗脱：

0分钟，流动相中F相的体积百分比为19％，流动相中G相的体积百分比为62％，流动相中H相的体积百分比为19％；3分钟，F相为20％，G相为60％，H相为20％；5分钟，F相为21％，G相为58％，H相为21％；10分钟，F相为22％，G相为56％，H相为22％；15分钟，F相为23％，G相为54％，H相为23％；20分钟，F相为24％，G相为52％，H相为24％；其中，以上百分比均为体积百分比；

检测波长为210-330nm的低压汞灯提供的宽波长范围的紫外光波长检测，获得待检样品溶液和对照溶液的高效液相色谱图；

其中，流动相的G相是1.5％的三乙胺，其制备方法是：将分析纯的三乙胺加水配制成1.5％的三乙胺溶液(柱温设置在17℃，以保证绝对混溶)；流动相的F相是95％甲醇，流动相的H相是四氢呋喃。

按照上述方法得到待检样品溶液的高效液相色谱图，其中，待检样品溶液的进样量为18μL，流速3ml/min。

3)结果比较。

混合对照品溶液的高效液相色谱图中，比较待检样品溶液的高效液相色谱图分别与五种物质的分别形成的五种独立的对照溶液的高效液相色谱图各峰的保留时间和峰面积，根据绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、没食子酸、茴香酸的紫外特征峰数据以及实际检测结果，可以确定，上述五种物质在无冲突的情况下，对应的低压汞灯检出波长分别为波长为251nm、260nm、273nm、315nm、325nm。进一步可以确认这些物质的存在，以及大致含量的计算。

上述具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，尤其是一些具体范围、数值的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (9)

1.一种促进骨折愈合的中药组合物，其所含有的中药组方为，何首乌、淫羊藿、熟地黄、龟甲、巴戟天、杜仲、续断、骨碎补、当归、山药、三七、白芷、自然铜、血竭、五爪金龙、大通草、紫木通、仙人掌、生姜、甜瓜籽、生菜籽、黄瓜籽、土鳖虫、补骨脂，大黄，乳香，马钱子粉，冰片，甜瓜子。

2.如权利要求1所述的一种促进骨折愈合的中药组合物，其特征在于，其重量份配比为：

何首乌1-3份、淫羊藿2-7份、熟地黄2-4份、龟甲1-2份、巴戟天1-3份、杜仲2-3份、续断2-5份、骨碎补2-7份、当归1-6份、山药1-3份、三七1-3份、白芷1-4份、自然铜1-3份、血竭1-4份、五爪金龙1-3份、大通草1-3份、紫木通1-3份、仙人掌2-4份、生姜1-3份、甜瓜籽1-3份、生菜籽1-3份、黄瓜籽1-3份、土鳖虫1-3份、补骨脂1-10份，大黄1-10份，乳香1-10份，马钱子粉1-10份，冰片1-10份，甜瓜子1-10份。

3.如权利要求2所述的一种促进骨折愈合的中药组合物，其特征在于，其重量份配比为：

何首乌1份、淫羊藿3份、熟地黄3份、龟甲2份、巴戟天2份、杜仲3份、续断4份、骨碎补5份、当归2份、山药3份、三七3份、白芷3份、自然铜2份、血竭2份、五爪金龙2份、大通草2份、紫木通2份、仙人掌3份、生姜3份、甜瓜籽3份、生菜籽3份、黄瓜籽3份、土鳖虫3份、补骨脂10份、大黄5份，乳香5份，马钱子粉5份，冰片5份，甜瓜子5份。

4.如权利要求2或3所述的一种促进骨折愈合的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物为口服药物制剂，剂型为选自丸剂、散剂、颗粒剂、片剂、锭剂、煎膏剂、胶剂、糖浆剂、滴丸剂、胶囊剂、酒剂、浸膏剂的其中一种。

5.一种制备如权利要求2或3所述的一种促进骨折愈合的中药组合物的中药组合物制备方法，其特征在于：

1)将当归、三七、自然铜、血竭、续断五种药材混合粉碎成均一的药物粉末A，备用，将骨碎补、补骨脂、土鳖虫三种药材单独混合以备煎煮；

2)将何首乌、淫羊藿、熟地黄、龟甲、巴戟天、杜仲、山药、白芷、五爪金龙、大通草、紫木通、仙人掌、生姜、甜瓜籽、生菜籽、黄瓜籽、大黄，乳香，马钱子粉，冰片，甜瓜子加水煎煮2次，每次0.5-1.5小时，将骨碎补、补骨脂、土鳖虫三种药材加水煎煮3次，每次0.5-1小时；

3)将步骤2)中的两种煎煮后的药液加热浓缩至体积减小一半后，静置至常温，加入药物粉末A，再搅拌混合均匀，浓缩至稠膏状；

4)将步骤3)的稠膏加入药学上可以接受的辅料，混合，按需求制成制剂。

6.一种针对权利要求2或3所述促进骨折愈合的中药组合物的苯并酸类有效成分的检测方法，其特征在于：所述苯并酸类有效成分的检测方法是利用配置有低压汞灯的宽波长范围的高效液相色谱法检测中药组合物中的苯并酸类的有效成分，具体的步骤是：

A)溶剂提取：取该稠膏状的中药组合物，或者是经稠膏状转制的中药组合物，加入溶剂，配制成药物含量约为15mg/ml-30mg/ml的待检样品溶液；

B)配制苯并酸类标准样品对照溶液：取绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、绿原酸甲酯、没食子酸、茴香酸，按照等物质的量混合后，用溶剂配制成各成分浓度均为15ug/ml-90ug/ml的对照溶液，此处使用的溶剂与步骤A保持一致；

C)高效液相色谱检测：将待测样品溶液和对照溶液分别按照以下方法进行高效液相色谱检测：

以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，按进样量为5ul-20ul进样，柱温为10℃-25℃，用由用由F相、G相和H相组成的流动相以1ml/min-5ml/min的流速进行梯度洗脱，同时采用检测波长为210-330nm的低压汞灯提供的宽波长范围的紫外光波长检测，获得待检样品溶液和对照溶液的高效液相色谱图；

D)将待检样品溶液的高效液相色谱图与对照溶液的高效液相色谱图比较，与对照溶液的高效液相色谱图中相应成分的保留时间相同的峰即是与该成分相同物质的特征峰，并根据峰面积按外标法计算含量；

其中，所述梯度洗脱步骤为：0分钟，流动相中F相的体积百分比为15％～30％，流动相中G相的体积百分比为70％～40％，流动相中H相的体积百分比为15％～30％；2分钟～5分钟，F相为20％～30％，G相为75％～45％，H相为15％～25％；5分钟～10分钟，F相为17％～33％，G相为68％～34％，H相为17％～33％；10分钟～20分钟，F相为16％～32％，G相为64％～36％，H相为16％～32％；20分钟～30分钟，F相为18％～34％，G相为64％～32％，H相为18％～34％；30分钟～40分钟，F相为20％～40％，G相为60％～20％，H相为20％～40％；其中，以上百分比均为体积百分比；

其中，所述对照溶液的高效液相色谱图中各峰依次为绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、绿原酸甲酯、没食子酸、茴香酸的特征峰；

所述流动相的F相是甲醇；所述流动相的G相是0.8％～3％的三乙胺；所述流动相的H相是乙腈。

7.根据权利要求6所述的苯并酸类有效成分的检测方法，其特征在于：所述步骤A和B使用的溶剂可以是与水互溶的质量百分比浓度为20％～75％的乙醇、丙酮、距丁醇、乙酸乙酯与水的混合溶剂。

8.根据权利要求7所述的苯并酸类有效成分的检测方法，其特征在于：所述梯度沈脱步骤为：0分钟，流动相中F相的体积百分比为17％，流动相中G相的体积百分比为66％，流动相中H相的体积百分比为17％；3分钟，F相为22％，G相为56％，H相为22％；5分钟，F相为19％，G相为62％，H相为19％；10分钟，F相为20％，G相为60％，H相为20％；15分钟，F相为22％，G相为56％，H相为22％；20分钟，F相为24％，G相为52％，H相为24％；其中，以上百分比均为体积百分比。

9.根据权利要求6-8任意一项所述的苯并酸类有效成分的检测方法，其特征在于：所述紫外光多波长检测的检测波长为251nm、260nm、273nm、315nm、325nm，所述流动相的流速为2ml/min，所述色谱柱柱温为20℃。