FR3096892A1

FR3096892A1 - Composition anti-inflammatoire comprenant des constituants d’origine végétale

Info

Publication number: FR3096892A1
Application number: FR1905922A
Authority: FR
Inventors: Elsa Renzacci-Simongiovanni; Richard Coll
Original assignee: Laboratoires Arkopharma SA
Current assignee: Laboratoires Arkopharma SA
Priority date: 2019-06-04
Filing date: 2019-06-04
Publication date: 2020-12-11
Anticipated expiration: 2039-06-04
Also published as: FR3096892B1

Abstract

Composition anti-inflammatoire comprenant les constituants d’origine végétale suivants, en quantités efficaces : au moins un inhibiteur de LTA4h, de PGE synthase et/ou de cytokine(s) pro-inflammatoire(s), etau moins un inhibiteur de MMP3.

Description

Composition anti-inflammatoire comprenant des constituants d’origine végétale

L’invention concerne le domaine des compositions anti-inflammatoires comprenant des constituants d’origine végétale.

Etat de la technique

Compte tenu de leurs propriétés anti-inflammatoires et antalgiques induites par l’inhibition de la cyclo-oxygénase (COX), les anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) font partie des médicaments les plus largement prescrits. Ils représentent l’une des classes de médicament les plus utilisées dans le monde [Hermans, 2017][1]. Les AINS sont définis comme regroupant l’ensemble des médicaments symptomatiques inhibiteurs de la synthèse des prostaglandines. Ce mécanisme d’action commun confère aux AINS leurs propriétés et leurs effets secondaires. La diminution de la synthèse des prostaglandines par les AINS est consécutive à l’inhibition plus ou moins sélective des isoenzymes de la COX [UMVF, 2016] http://umvf.cerimes.fr/media/ressRhumatologie/2016-abrege/2016-Chapitre30.pdf

La publication [Domiati, 2019][2]résume bien l’histoire et les principaux mécanismes d’action connus à date des AINS, en précisant ce qui suit :

« L'époque des anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) remonte au XVIIIe siècle, avec l'avènement de l'acide acétylsalicylique. Depuis 3500 ans, les AINS constituent la pierre angulaire du traitement de l'inflammation et de la douleur associées à diverses maladies, notamment la polyarthrite rhumatoïde, l'arthrose et d'autres. Le mécanisme d'action principal des AINS a été décrit pour la première fois en 1971 par Vane et Pipe[3-6]. Ils ont démontré que les AINS inhibent la biosynthèse des prostaglandines en empêchant le substrat acide de se lier au site actif de l'enzyme COX. On a par la suite découvert que l’enzyme COX existait dans plusieurs isoformes ; le plus célèbre d'entre eux est la COX-1, caractérisée en 1976, suivie de l'isoenzyme de la COX-2, découverte par la suite en 1991. On a découvert que la COX-1 joue un rôle dans de nombreuses fonctions physiologiques, notamment le maintien d'une fonction rénale normale, la protection de la muqueuse du tube digestif et la synthèse de thromboxane A2 pro-agrégatif dans les plaquettes. D'autre part, on pense que la COX-2 joue un rôle dans la médiation de la douleur, de l'inflammation et de la fièvre. De plus, on sait que les AINS réduisent la production de radicaux superoxydes, induisent l'apoptose, inhibent l'expression des molécules d'adhésion, réduisent l'oxyde nitrique synthase, diminuent les cytokines pro-inflammatoires (par exemple, TNF-α, interleukine-1), modifient l'activité des lymphocytes, altèrent les fonctions de la membrane cellulaire et stabilisent les enzymes lysosomales[7-10]. En fait, les AINS augmentent l'IL-10, la cytokine anti-inflammatoire, alors qu'ils diminuent ou n'ont aucun effet sur l'IL-1, la cytokine pro-inflammatoire. Par ailleurs, les AINS augmentent la production de TNFα tout en diminuant la PGE2[11]. Grâce à la connaissance croissante du mécanisme d'action des AINS, plusieurs agents ont été récemment synthétisés afin de réduire leurs effets secondaires. »

Comme cela est bien connu dans l’art antérieur, une des voies principales du mécanisme inflammatoire est la voie de l’acide arachidonique (AA). Les prostaglandines (éicosanoïdes exerçant une action purement locale mais ayant une distribution quasi-ubiquitaire leur permettant d’intervenir dans de nombreux processus physiologiques et pathologiques) sont synthétisées à partir de l’acide arachidonique (lui-même issu des phospholipides membranaires) grâce à la cyclo-oxygénase (COX), dont il existe deux isoenzymes :

• COX-1 (cyclo-oxygénase 1), catalysant la formation de prostaglandines impliquées dans la cytoprotection de la muqueuse gastrique et la préservation de la fonction rénale, ainsi que la production de thromboxane A2 (TXA2, prostaglandine vasoconstrictrice et pro-agrégante) par les plaquettes ; et

• COX-2 (cyclo-oxygénase 2), qui est essentiellement une isoenzyme inductible, conduisant à la libération de prostaglandines ayant un rôle pathologique (fièvre, douleur, inflammation, prolifération cellulaire), mais aussi un rôle bénéfique dans divers processus (cicatrisation, fonction rénale, ovulation, etc.) et gouvernant la synthèse de prostacycline (PGI2), prostaglandine vasodilatatrice et antiagrégante, par les cellules endothéliales. Dans un souci de clarté, la voie de l’acide arachidonique (également dénommée « cascade l’acide arachidonique » est schématisée en figure 1.

Tel qu’indiqué sur le site internet http://umvf.cerimes.fr/media/ressRhumatologie/2016-abrege/2016-Chapitre30.pdf, « [o]n peut classer les AINS selon leur famille chimique (tableau 30.4), leur demi-vie (tableau 30.5) ou selon leur spécificité anti-COX. Sur ce dernier critère, on distingue quatre catégories d’AINS :

• les anti-COX-1 préférentiels : représentés par l’aspirine à faible dose (300 mg par jour ou moins), employée comme antiagrégant à visée antithrombotique, mais aussi l’indométacine et le piroxicam ;

• les anti-COX-2 préférentiels : nimésulide (Nexen®), méloxicam (Mobic®) ;

• les anti-COX-2 sélectifs (dénommés communément « «Coxibs ») : célécoxib (Celebrex®), parécoxib (Dynastat®), étoricoxib (Arcoxia®), qui se démarquent des précédents par leur moindre risque ulcérogène et l’absence d’effet antiagrégant plaquettaire ;

• les AINS classiques, qui tous inhibent COX-2 et plus ou moins COX-1 aux doses thérapeutiques. »

Toutefois, et alors que l’emploi des AINS se banalise, les effets secondaires qu’ils entraînent représentent un réel enjeu de santé publique puisqu’il est estimé que 100 000 hospitalisations et 16 000 décès leurs sont associés chaque année aux USA [Hermans, 2017][1].

Ces dernières années, et en vue de limiter les effets secondaires bien connus (en particulier toxicité gastrique et effet anti-thrombotique) associés à l’inhibition de la cyclo-oxygénase 1 (COX-1), les efforts se sont concentrés sur le développement d'inhibiteurs sélectifs de la cyclo-oxygénase 2 (COX-2) offrant un meilleur profil de tolérance digestive que les AINS non sélectifs, en préservant la cyclo-oxygénase 1 (COX-1) [Brazier, 2012][12]. En effet, les AINS sélectifs de la COX-2 ont joui, fut un temps, d’une équivalence antalgique et anti-inflammatoire par rapport aux AINS conventionnels associés à une réduction significative de l’incidence des complications digestives [Brazier, 2012][12]. Cependant, aujourd’hui, les inhibiteurs sélectifs de COX-2 restants sur le marché (« coxibs », tels que celecoxib, étoricoxib et parecoxib) font l’objet d’une augmentation d’accidents cardiovasculaires [Hermans, 2017[1]; Burnier, 2005[13]; Ritter, 2009][14]. Les conséquences multi-viscérales importantes et les effets cutanés graves liés à la prise de ces inhibiteurs de COX-2 ont eu raison de l'enthousiasme initial suscité par cette nouvelle classe de médicaments anti-inflammatoires. Ces effets secondaires sont d’ailleurs listés dans les différents résumés des caractéristiques des médicaments concernés (RCP). A titre illustratif, il est possible de citer le RCP (2016) du Celebrex (source : http://agence-prd.ansm.sante.fr/php/ecodex/rcp/R0278307.htm), lequel dispose :

Affections vasculaires : très fréquentes>1/10 : hypertension (dont une aggravation de l’hypertension)

Dans ce contexte, il est également possible de citer les effets secondaires importants listés au sein du Résumé des Caractéristiques du Produit (RCP) de l’Etoricoxib Zydus (etoricoxib), disponible sur le site Internet suivant : (source : http://base-donnees-publique.medicaments.gouv.fr/affichageDoc.php?specid=62496336&typedoc=R) [ANSM 2016].

D’autres reports d’effets secondaires importants associés à l’utilisation de coxibs sont également accessibles sur les liens suivants :

http://www.doctissimo.fr/html/dossiers/rhumatismes/sa_3537_anti_inflammatoires.htm,
https://ansm.sante.fr/S-informer/Communiques-Communiques-Points-presse/VIOXX-R-rofecoxib-et-CELEBREX-R-celecoxib-et-risque-d-evenements-cardiovasculaires [ANSM, 2001], cette liste n’étant bien évidemment nullement exhaustive.

En outre, il doit être également fait état du « Rappel sur la sécurité d’emploi des coxibs (inhibiteurs sélectifs de la cyclo-oxygénase 2) » de l’ANSM (en date de juillet 2013 ; source : https://ansm.sante.fr/var/ansm_site/storage/original/application/7e0c0c79c628f673282dc3a76af0da8a.pdf). Ce rappel stipule notamment :

« Tous les AINS, y compris l'aspirine, ont un mode d'action commun : l'inhibition de la COX. Les deux isoformes de la COX permettent schématiquement la synthèse de prostaglandines aux propriétés différentes :

- la COX-1 permet de synthétiser préférentiellement les prostaglandines participant à la protection de la muqueuse gastro-duodénale et à l'agrégation plaquettaire (effet pro-agrégant) ;

- la COX-2 permet de synthétiser préférentiellement les prostaglandines impliquées dans la réaction inflammatoire et dans l’agrégation plaquettaire (effet anti-agrégant) ;

- la COX-1 et la COX-2 sont aussi responsables de la synthèse de prostaglandines qui contribuent à la régulation de l’hémodynamique intrarénale, dans le but de maintenir la perfusion glomérulaire.

Les AINS conventionnels (également dénommés « AINS classiques ») bloquent à la fois la COX-1 et la COX-2, ce qui expliquerait leurs effets indésirables digestifs par inhibition de la production de prostaglandines "cytoprotectrices". La sélectivité des coxibs pour la COX-2 devrait théoriquement réduire ce risque. Mais il faut rappeler que cette sélectivité est une notion relative :in vitro, elle dépend de la nature de la molécule et de la dose, alors qu’en clinique, s’y ajoutent d’autres paramètres tels que les caractéristiques pharmacocinétiques et la susceptibilité individuelle du patient. »

Toujours en ce qui concerne les effets secondaires attribuables aux AINS conventionnels, il convient de mettre en exergue les résultats d’une récente enquête de pharmacovigilance, confiée en juin 2018 aux centres régionaux de pharmacovigilance de Tours et Marseille par l’Agence nationale de sécurité du médicament et des produits de santé (ANSM)[19]. Aux termes de ces résultats, il apparaît que :

« Sur l’ensemble des cas rapportés depuis l’année 2000, 337 cas de complications infectieuses avec l’ibuprofène et 49 cas avec le kétoprofène ont été retenus après avoir pris en compte uniquement les cas les plus graves chez des enfants ou des adultes (souvent jeunes) sans facteur de risque ni comorbidité. Il s’agit d’infections sévères de la peau et des tissus mous (dermohypodermites, fasciites nécrosantes,…), de sepsis, d’infections pleuro-pulmonaires (pneumonies compliquées d’abcès, de pleurésie), d’infections neurologiques (empyèmes, abcès cérébraux,…) ou ORL compliquées (cellulites, médiastinites,...), à l’origine d’hospitalisations, de séquelles voire de décès ».

Malgré ces effets secondaires sévères et fréquents, notamment chez les patients atteints de maladies cardiovasculaires ou polymédicamentés, les prescriptions d’AINS restent une tendance forte, comme en témoigne la publication intitulée « Despite guidelines and a trend toward decreased prescribing, the use of potentially harmful NSAIDs continued in CVD patients. The MHRA directives potentially might have affected patients without CVD who may have inappropriately restricted their use of COX-2.” [Chen, 2018][15].

Le développement d’anti-inflammatoires ayant des effets secondaires modérés et moins fréquents, à plus ou moins long terme, reste donc un enjeu majeur de santé publique, étant donné la prévalence des maladies chroniques, qui sont actuellement la toute première cause de mortalité mondiale et qui nécessitent une prise en charge thérapeutique, laquelle favorise la prise concomitante de traitements anti-inflammatoires à plus ou moins long terme (https://www.who.int/topics/chronic_diseases/fr/ [OMS, 2019])[16]. Cet enjeu majeur a conduit l’industrie pharmaceutique à développer de nouvelles approches thérapeutiques pour remédier aux effets secondaires des AINS actuellement sur le marché, à savoir : association de molécules, traitement concomitant avec protecteur digestif, nanoparticules d’anti-inflammatoires, voie d’administration alternative à la voie orale, optimisation des propriétés pharmacocinétiques des AINS [Angi, 2019][17], etc. Toutefois, ces approches alternatives créent - de manière artificielle - de nouvelles contraintes technologiques, logistiques et/ou pécuniaires dont l’homme du métier souhaiterait naturellement s’affranchir.

Des approches que l’on peut qualifier de « plus naturelles » ont également été envisagées. De telles approches sont possibles notamment eu égard au fait que certains produits naturels à base de plantes sont connus pour soulager l’inflammation ; l’exemple le plus connu étant sans conteste l’extrait d’écorce de saule blanc (genreSalix) dont le principe actif, dénommé salicine (glycoside de l’alcool salicylique), a été identifié au XIXème siècle par BUCHNER et LEROUX. La dose recommandée pour l’usage médical bien établi du saule, par exemple, est de 393 à 1572 mg d’un extrait de ratio plante/extrait équivalent à 8-14:1, soit une dose journalière en équivalent plante de plus de 3 g à plus de 22 g [European Union herbal monograph on Salix, various species includingS. purpureaL.,S. daphnoidesVill.,S. fragilisL., cortex, EMA/HMPC/80630/2016][18]. De telles doses d’extrait ont notamment pour effet d’augmenter le prix du produit final de manière significative et risquent doncin finede nuire à l’observance du traitement/de la cure. Il convient donc, dans la mesure du possible, de s’affranchir de l’utilisation d’extrait de saule (genre Salix, et en particulier d’un extrait de son écorce) au sein de produits naturels à base de plantes.

Tout comme la salicine, d’autres actifs végétaux connus pour leurs propriétés anti-inflammatoires (comme, par exemple, les curcumines du curcuma) sont utilisés à des doses journalières importantes, le cas échéant en association avec d’autres actifs végétaux (parmi lesquels figure fréquemment la salicine). Ainsi, il est possible de citer le produit Inflakin^®dont la composition pour une dose journalière (3 comprimés/jour) est présentée dans le [Table 1] infra :

Extrait de curcuma titré à 95% de curcumines	868 mg
curcumines	825 mg
Extrait de grande camomille	637,5 mg
Extrait d’harpagophytum titré à 2,7% d’harpogosides	600 mg
harpogosides	16,2 mg
Extrait de saule blanc titré à 30% de salicine	360 mg
salicine	108 mg
Extrait d’ananas titré à 250GDU/g de bromélaïne	150 mg
bromélaïne	37,5 GDU ("Gelatin Digesting Units”, en langue anglaise)
Extrait de gingembre titré à 2% de gingérol	142,5 mg
gingérol	2,85 mg
Extrait de poivre titré à 95% de pipérine	78,9 6mg
pipérine	75 mg

Il est également possible de mentionner le produit Nutralgic^®dont la composition pour une dose journalière (3 comprimés/jour) est présentée dans le [Table 2] infra :

Extrait sec de rhizomes de Curcuma (Curcuma longa) titré à 95% de curcuminoïdes	798,3 mg
Extrait sec de racines d’Harpagophytum (Harpagophytum procubens) titré à 3% d’iridoïdes	600 mg
Extrait sec de parties aériennes de grande Camomille (Tanacetum parthenium) titré à 0,2% de Parthénolides	600 mg
Extrait sec d’écorce de Saule blanc (Salix alba) titré à 25% de salicine	300 mg
Extrait sec de gomme résine de Boswellia (Boswellia serrata) titré à 65% d’acide boswellique	255 mg
Extrait sec de rhizomes de Gingembre (Zingiber officinale) titré à 5% de gingerols	150 mg
Extrait sec de fruits de Poivrier noir (Piper nigrum) titré à 95% de pipérine	78.75 mg

Outre la présence de salicine - dont il convient, dans la mesure du possible, de s’affranchir - les produits présentés au sein des [Table 1] et [Table 2] supra présentent des doses journalières importantes de curcumines, à savoir environ 825 mg/jour concernant le produit Inflakin^®et environ 750 mg/jour eu égard au produit Nutralgic^®. A de telles doses journalières, il est légitime de craindre l’apparition d’effets secondaires liés à l’inhibition des COX. En outre, l’administration de ces produits en trois prises journalières représente un frein à la bonne observance du traitement/de la cure par le patient/sujet. Les doses journalières importantes en curcumines des produits Inflakin^®et Nutralgic^®susvisés peuvent s’expliquer par l’approche communément admise dans le domaine des anti-inflammatoires « naturels » consistant à utiliser une dose importante d’un ingrédient actif naturel ubiquitaire destiné à agir sur l’ensemble des voies de l’inflammation.

Par ailleurs, si les COX - et la 5-LOX - sont impliquées dans la production de médiateurs lipidiques dits «pro-inflammatoires » (tels que PGE2 pour les COX et LTB4 pour la 5-LOX ; cf. figure 1), les données de la littérature indiquent qu’elles sont également responsables, dans le cadre de la voie de l’acide arachidonique (cf. figure 1), de la production de médiateurs lipidiques dits « pro-résolutifs de l’inflammation » (tels que PGD2 pour les COX et la lipoxine pour la 5-LOX), à savoir impliqués dans la résolution de l’inflammation. Par conséquent, et outre les effets secondaires discutés supra liés à l’inhibition des COX, les inventeurs ont gardé à l’esprit le fait que cette inhibition des COX (et de 5-LOX) était également susceptible d’inhiber la production des susdits médiateurs lipidiques « pro-résolutifs de l’inflammation », ce qui irait, à tout le moins, à l’encontre du but recherché (traitement de l’inflammation). Dans le cadre de leurs recherches, les inventeurs ont donc délibérément privilégié des stratégies thérapeutiques qui :

contrôlent non seulement l’inhibition de médiateurs pro-inflammatoires (comme, par exemple, LTB4 et PGE2 ; cf. figure 1), mais
induisent/favorisent la production de médiateurs pro-résolutifs de l’inflammation par les voies anti-inflammatoires endogènes (comme, par exemple, la lipoxine et PGD2 ; cf. figure 1).

Dans ce contexte, en allant à contre-courant de l’approche communément admise dans le domaine des anti-inflammatoires d’origine naturelle (et plus particulièrement des anti-inflammatoires d’origine végétale), consistant traditionnellement à envisager l’utilisation d’une quantité importante d’un ingrédient actif naturel ubiquitaire destiné à agir sur l’ensemble des voies de l’inflammation (par exemple le curcuma, comme cela s’avère être le cas concernant les produits Inflakin^®et Nutralgic^®susvisé), les inventeurs sont parvenus, de manière tout à fait surprenante, à mettre au point une composition anti-inflammatoire comprenant une pluralité d’ingrédients actifs d’origine végétale (à savoir au moins deux, de préférence trois, préférablement quatre et avantageusement cinq) agissant sélectivement - et de manière synergique - sur les principales voies de l’inflammation. Cette approche, tout à fait novatrice, permet notamment :

d’utiliser des doses (en particulier des doses journalières) en ingrédients actifs végétaux anti-inflammatoires significativement inférieures aux doses traditionnellement employées, tout en préservant l’efficacité en termes d’effet anti-inflammatoire,
de limiter/d’éviter l’inhibition des COX invivoet les effets négatifs associés à une telle inhibition, en particulier en inhibant spécifiquement l’enzyme PGE synthase (et, de préférence, également la LTA4h), entraînant de ce fait une inhibition spécifique de la synthèse des médiateurs pro-inflammatoires » (tels que PGE2 pour les COX et LTB4 pour la LTA4h),
d’induire/favoriser la production de médiateurs pro-résolutifs de l’inflammation (PGD2 via la PGD synthase et, de préférence, également la lipoxine via la 12/15-LOX)
d’administrer la dose journalière requise afin d’obtenir l’effet anti-inflammatoire escompté en une ou deux prise(s) (maximum), favorisant ainsi l’observance du traitement/de la cure.

L’invention a pour objet une composition anti-inflammatoire, à usage humain ou animal (de préférence à usage humain), de préférence administrable par voie orale, ladite composition comprenant (consistant essentiellement en ou consistant en) les constituants d’origine végétale suivants, en quantités efficaces :

a) au moins un inhibiteur de LTA4h, de PGE synthase et/ou de cytokine(s) pro-inflammatoire(s), préférablement des trois, de préférence ledit au moins un inhibiteur étant compris dans une préparation à base de plante(s) telle qu’un extrait (de préférence sec) à base de plante(s), et

b) au moins un inhibiteur de MMP3, en quantité efficace, de préférence ledit au moins un inhibiteur étant compris dans une préparation à base de plante(s) telle qu’un extrait (de préférence sec) à base de plante(s) ou un concentré à base de plante(s), préférablement ledit au moins un inhibiteur de MMP3 étant également au moins un réducteur de stress oxydatif, avantageusement au moins un inhibiteur de production d’espèces réactives de l’oxygène ;

lesdits constituants a) et b) étant différents, et

de préférence ladite composition étant dépourvue de salicine.

Selon un mode de réalisation préféré, cette composition anti-inflammatoire est d’origine naturelle et, de préférence, d’origine végétale.

Si la composition selon l’invention est de préférence administrable par voie orale, ladite composition peut être administrée via d’autres voies (topique, systémique etc.).

Avantageusement, la composition selon l’invention comprend au moins un excipient et/ou un additif acceptable du point de vue alimentaire et/ou pharmaceutique, ajouté(s) en vue d'obtenir la forme galénique désirée, de préférence administrable par voie orale. Ledit au moins un excipient et/ou additif est/sont, par exemple, sélectionné(s) parmi des liants, des lubrifiants, des édulcorants, des diluants, des agents d'enrobage, des arômes (naturels ou synthétiques).

Selon un mode de réalisation préféré, l’on utilise au moins un inhibiteur de LTA4h, de PGE synthase et de cytokine(s) pro-inflammatoire(s) en combinaison avec au moins un inhibiteur de MMP3, ce dernier étant également au moins un réducteur de stress oxydatif (et avantageusement au moins un inhibiteur d’espèces réactives de l’oxygène). Cela permet d’obtenir un effet anti-inflammatoire (et en particulier un effet antalgique, notamment à moyen et long terme) en agissant sélectivement - et de manière synergique - sur les principales voies de l’inflammation, et ce à faible dose.

Selon un mode de réalisation, le susdit constituant a) comprend (consiste essentiellement en ou consiste en) au moins un premier inhibiteur de LTA4h, de PGE synthase et/ou de cytokine(s) pro-inflammatoire(s) d’origine végétale (avantageusement des trois) et au moins un deuxième inhibiteur de LTA4h, de PGE synthase et/ou de cytokine(s) pro-inflammatoire(s) d’origine végétale (par exemple un inhibiteur de LTA4h et d’au moins une cytokine pro-inflammatoire telle que IL-1b), différent du premier.

De préférence, le constituant a) est sélectionné parmi : harpagoside, acides boswelliques, gingérols, shogaols, insaponifiables de soja, resvératrol et leurs mélanges, préférablement parmi : harpagoside, acides boswelliques, gingérols, shogaols et leurs mélanges, avantageusement parmi : acides boswelliques, gingérols et leurs mélanges ; de manière préférée ledit constituant a) consistant en un mélange acides boswelliques/gingérols (préférablement dans un rapport en masse compris entre environ 5/1 et environ 1/2, avantageusement entre environ 4/1 et environ 1/1, de manière préférée entre environ 3,5/1 et environ 2/1).

Le mode de réalisation dans lequel le susdit constituant a) consiste en un mélange acides boswelliques/gingérols (de préférence dans les proportions indiquées supra) est particulièrement préféré au sens de la présente invention, dans la mesure où les inventeurs ont pu mettre en évidence le fait que l’utilisation de ce mélange acides boswelliques/gingérols permettait, en association avec le susdit constituant b), d’obtenir une action anti-inflammatoire (même en utilisant de faibles doses d’acides boswelliques/gingérols) efficace (notamment une action antalgique, de préférence à moyen ou à long terme) en raison d’une action sur trois des quatre principales voies de l’inflammation que sont la voie de l’acide arachidonique, la voie des cytokines et la voie du stress oxydatif.

Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, le constituant b) est sélectionné parmi : superoxyde dismutase, insaponifiables de soja, acide chicorique et leurs mélanges, préférablement parmi : superoxyde dismutase, acide chicorique et leurs mélanges, de manière préférée le constituant b) étant la SOD.

Les inventeurs ont découvert que l’utilisation de la SOD en tant que constituant b) s’avérait particulièrement avantageuse en ce que la SOD permet non seulement d’agir sur la voie du stress oxydatif (ce qui est connu dans l’état de la technique) mais également d’agir en synergie sur la voie des enzymes (en inhibant notamment la MMP3), ce qui a été découvert, de manière surprenante, par les inventeurs. Il en résulte que la combinaison entre un mélange acides boswelliques/gingérols et de la SOD, au sein de la composition selon l’invention, est un mode de réalisation préféré.

De préférence, lorsque le constituant b) est la SOD), la composition selon l’invention comprend, pour une dose journalière, entre 1 et 140 UI (unités enzymatiques), de préférence entre 10 et 70 UI, et de manière préférée entre 30 et 40 UI de SOD.

Selon un mode de réalisation préféré, la composition selon l’invention comprend, pour une dose journalière, entre 1 et 70 mg, de préférence entre 5 et 60 mg, avantageusement entre 7 et 50 mg, préférablement entre 10 et 40 mg, et de manière préférée entre 20 et 30 mg du susdit constituant a).

Bien qu’étant inférieures aux doses journalières en acides boswelliques et/ou gingérols traditionnellement utilisées lors d’essais cliniques, les inventeurs ont découvert que, dans le cadre de la synergie d’action intervenant entre la pluralité d’ingrédients actifs d’origine végétale utilisés dans la composition selon l’invention, ces doses plus faibles en constituant a) (par exemple en acides boswelliques et/ou gingérols) permettaient d’obtenir l’effet anti-inflammatoire (et en particulier l’effet antalgique) escompté, tout en limitant/évitant l’inhibition des COX (et de la 5-LOX)in vivoet les effets négatifs associés à une telle inhibition ; effets négatifs largement discutés supra.

Selon un mode de réalisation préféré, la composition selon l’invention comprend en outre au moins un, et avantageusement deux, des constituants d’origine végétale suivants, en quantité(s) efficace(s) :

c) au moins un activateur de 12/15-LOX, de préférence compris dans une préparation à base de plante(s) telle qu’un extrait à base de plante(s), préférablement ledit au moins un activateur de 12/15-LOX étant également au moins un réducteur de stress oxydatif, avantageusement au moins un activateur de SOD, et

d) au moins un réducteur de stress oxydatif, préférablement au moins un activateur de SOD, de préférence compris dans une préparation à base de plante(s) ;

dans laquelle :

- lorsque le constituant d) est présent, celui-ci est différent du constituant b), et

- lorsque les constituants c) et d) sont présents, le constituant d) est différent du constituant c).

En d’autres termes, selon un mode de réalisation, la composition selon l’invention comprend, consiste essentiellement en, ou consiste en, les constituants a), b) et c), en quantités efficaces.

Selon un autre mode de réalisation, particulièrement préféré, la composition selon l’invention comprend, consiste essentiellement en, ou consiste en, les constituants a), b), c) et d), en quantités efficaces.

De manière particulièrement préférée, le constituant c) est la baïcaline, et/ou le constituant d) est sélectionné parmi : acide chicorique,resvératrol, verbascoside, baïcaline, gingérols, mangostines, SOD et leurs mélanges, de préférence parmi : baïcaline, gingérols, mangostines, SOD et leurs mélanges, avantageusement parmi : gingérols, mangostines, SOD et leurs mélanges ; de manière particulièrement préférée ledit constituant d) étant les mangostines.

Avantageusement, le constituant c) est la baïcaline et le constituant d) est sélectionné parmi : acide chicorique,resvératrol, verbascoside, gingérols, mangostines, SOD et leurs mélanges, de préférence parmi : gingérols, mangostines, SOD et leurs mélanges, de manière particulièrement préférée ledit constituant d) étant les mangostines. Les inventeurs ont découvert que les mangostines permettaient d’améliorer l’effet anti-inflammatoire de la composition selon l’invention en luttant contre le stress oxydatif (« réducteur de stress oxydatif ») via l’induction de la production de SOD endogène (« activateur de SOD »).

De préférence, la composition selon l’invention comprend, pour une dose journalière :

y) entre 1 et 400 mg, de préférence entre 12 et 300 mg, préférablement entre 35 et 240 mg, avantageusement entre 40 et 180 mg, et de manière préférée entre 60 et 120 mg du constituant c), et/ou

z) entre 1 et 60 mg, avantageusement entre 2 et 40 mg, et de manière préférée entre 10 et 20 mg du constituant d),

de préférence ladite composition comprenant y) et z).

Tel qu’expliqué précédemment en lien avec la dose journalière préférée du constituant a), et sans être lié par la théorie, le fait d’utiliser une pluralité d’ingrédients actifs d’origine végétale agissant sélectivement - et de manière synergique - sur les principales voies de l’inflammation permet d’utiliser des doses journalières en constituants c) et d) inférieures aux doses traditionnellement employées, tout en préservant l’efficacité en termes d’effet inflammatoire (en particulier en termes d’effet antalgique).

Selon un mode de réalisation préféré, la composition selon l’invention comprend les constituants a), c) et d) susvisés (ainsi que, de préférence, le constituant b) susvisé), lesdits constituants a), b) et d) étant présents dans les pourcentages en masse suivants, par rapport à la masse totale desdits constituants a), c) et d) :

- entre 10 et 50%, de préférence entre 12 et 35 %, avantageusement entre 15 et 25%, du constituant a),

- entre 20 et 80%, de préférence entre 40 et 75 %, avantageusement entre 60 et 70%, du constituant c), et

- entre 1 et 50%, de préférence entre 5 et 35 %, préférablement entre 10 et 20%, et avantageusement entre 11 et 15%, du constituant d).

Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, la composition selon l’invention comprend, consiste essentiellement en, ou consiste en, les constituants a) - d). De préférence :

- ledit constituant a) consiste en un mélange acides boswelliques/gingérols, préférablement dans un rapport en masse compris entre environ 5/1 et environ 1/2, avantageusement entre environ 4/1 et environ 1/1, de manière préférée entre environ 3,5/1 et environ 2/1 (tel qu’indiqué précédemment),

- ledit constituant b) consiste en la SOD,

- ledit constituant c) consiste en la baïcaline, et

- ledit constituant d) consiste en les mangostines.

L’invention a également pour objet une composition comprenant :

- une première préparation à base deBoswellia, préférablement deBoswellia serrataet/ou deBoswellia sacra,avantageusement deBoswellia serrata, telle qu’un extrait, de préférence sec, ladite première préparation comprenant les acides boswelliques dudit constituant a),

- un deuxième préparation à base deZingiber officinale,telle qu’un extrait, de préférence sec, ladite deuxième préparation comprenant les gingérols dudit constituant a),

- une troisième préparation à base deCucumis melo, telle qu’un extrait ou un concentré, deCucumis melo, avantageusement un concentré deCucumis melo, ladite troisième préparation comprenant ledit constituant b),

- une quatrième préparation à base deScutellaria baicalensis, telle qu’un extrait, de préférence sec, ladite quatrième préparation comprenant ledit constituant c), et

- une cinquième préparation à base deGarcinia mangostana,telle qu’un extrait, de préférence sec, ladite cinquième préparation comprenant ledit constituant d).

Cette composition comprenant les cinq préparations à base de plante susvisées est particulièrement avantageuse, comme en témoignent les résultats expérimentaux obtenus à partir d’une composition de cette nature ; résultats discutés au sein de l’exemple 2 infra.

Sans être lié par la théorie, et même si la combinaison des différents constituants d’origine végétale susvisés permet d’obtenir de très bons résultats, il est possible de formuler l’hypothèse selon laquelle l’ensemble des constituants de chacune des cinq préparations à base de plante susvisées permet d’obtenir, via un phénomène de synergie (caractérisé par une action plus importante de l’ensemble des constituants par rapport à un constituant pris isolément), un meilleur effet anti-inflammatoire (et en particulier antalgique) par rapport à chacun des constituants a) - d) pris isolément. Ce mode d’action spécifique, qui fait intervenir plusieurs constituants de la plante simultanément, est appelé synergie d’action, du grec « synergos », « œuvrer ensemble ». « Le tout est plus grand que la somme des parties » est le principe fondamental énoncé par Ibn Sïna, médecin philosophe, plus connu sous le nom d’Avicenne (980-1037). Il est donc possible de penser légitimement que l’association des différents ingrédients actifs d’origine végétale présents dans chacune des cinq préparations à base de plante susvisées permet d’obtenir une activité anti-inflammatoire (et en particulier antalgique) optimale grâce au phénomène de synergie.

Selon un mode de réalisation préféré, les susdites cinq préparations à base de plante sont présentes au sein de la composition selon l’invention dans les pourcentages en masse suivants, par rapport à la masse totale des cinq préparations à base de plante :

- entre 1 et 10%, de préférence entre 2 et 8%, avantageusement entre 4 et 7% de ladite première préparation,

- entre 10 et 50%, de préférence entre 20 et 40%, avantageusement entre 25 et 35%, de ladite deuxième préparation,

- entre 0,1 et 5%, de préférence entre 0,1 et 2%, préférablement entre 0,2 et 1% et avantageusement entre 0,4 et 0,8% de ladite troisième préparation,

- entre 10 et 40%, de préférence entre 15 et 35%, avantageusement entre 20 et 30%, de ladite quatrième préparation, et

- entre 15 et 55%, de préférence entre 25 et 45%, avantageusement entre 30 et 40%, de ladite cinquième préparation.

L’invention concerne également un médicament, un complément alimentaire, un aliment diététique destiné à des fins médicales spéciales ou un dispositif médical comprenant, consistant essentiellement en ou consistant en la composition selon l’invention.

L’invention a également pour objet la composition selon l’invention pour son utilisation en tant que médicament.

Un autre objet de l’invention concerne la composition selon l’invention pour son utilisation dans la prévention, la régulation et/ou le traitement de l’inflammation, de préférence dans la régulation et/ou le traitement de l’inflammation, avantageusement dans le traitement de l’inflammation.

De préférence, ladite composition est administrée au patient/sujet en une ou deux prise(s) journalière(s) durant un laps de temps donné (par exemple durant au moins un mois, préférablement durant au moins deux mois, avantageusement durant au moins trois mois).

Tel qu’indiqué au fil de la présente demande de brevet, la composition selon l’invention permet avantageusement d’obtenir un effet antalgique, de préférence à moyen ou long terme.

Tel qu’indiqué précédemment, la composition selon l’invention présente notamment les avantages suivants :

absence de modification de l’activité enzymatique des COXin vivo(et en particulier absence d’inhibition des COXin vivo) et, par conséquent, absence des effets secondaires inhérents à une telle modification (et en particulier à une telle inhibition)
efficacité « anti-inflammatoire » à faible dose, entraînant une diminution de la consommation d’AINS.

Par conséquent, en raison d’une efficacité « anti-inflammatoire » (et en particulier antalgique) à tout le moins similaire à celle des compositions de l’art antérieur et d’une meilleure sécurité d’usage (diminution des effets secondaires liés à l’inhibition des COX, tel qu’expliqué précédemment), la composition selon l’invention présente un meilleur rapport bénéfice/risque que celui des compositions de l’art antérieur.

Par ailleurs, et tel qu’indiqué précédemment, la composition selon l’invention est adaptée pour être administrée à un individu humain ou animal (de préférence humain) en une ou deux prise(s) journalière(s) (notamment afin de favoriser l’observance du traitement/de la cure).

Définitions

Composition anti-inflammatoire. Composition permettant,in vivo, de prévenir, réguler et/ou traiter l’inflammation/les mécanismes inflammatoires. La composition anti-inflammatoire selon l’invention est de préférence d’origine naturelle et avantageusement d’origine végétale.

Inflammation . La réaction inflammatoire, ou inflammation, se met en place dès lors que l’organisme subit un traumatisme, une agression ou une infection. L’organisme réagit en laissant migrer vers le site concerné, les cellules impliquées dans le déclenchement et la résolution de l’inflammation, notamment les monocytes et macrophages, qui ont une position centrale. La réaction inflammatoire dépasse parfois ses objectifs, et peut être responsable d’effets délétères. La composition selon l’invention est particulièrement adaptée pour prévenir, réguler et/ou traiter les symptômes inflammatoires (à savoir inflammation(s) et/ou douleur(s)) liés à tout type de pathologies/désordres inflammatoires, parmi lesquels il est notamment possible de citer :

a) les inflammations musculaires,

b) les affections rhumatismales inflammatoires aigues ou chroniques telles que :

- les rhumatismes abarticulaires tels que tendinites, bursites, périarthrites scapulo-humérales, lombalgies, radiculalgies ;

- l’arthrose, et en particulier certaines arthroses douloureuses et invalidantes (symptômes de poussées aigues d'arthroses) ;

- la polyarthrite rhumatoïde, spondylarthrite ankylosante ou syndromes apparentés, tels que syndrome de Fiessinger-Leroy-Reiter et rhumatisme psoriasique,

c) les manifestations inflammatoires dans les domaines ORL et/ou stomatologique,

d) les affections douloureuses d'intensité légère à modérée, telles que les états de dysménorrhée après recherche étiologique, et/ou les états fébriles, et

e) les inflammations digestives et intestinales.

La composition selon l’invention est également adaptée pour une utilisation dans la prise en charge des phénomènes inflammatoires de bas grade, impliqués dans la genèse de pathologies telles que la maladie d’Alzheimer et les maladies neurodégénératives, les maladies cardio-vasculaires, l’hypertension, l’insulino-résistance, ou encore le cancer.

Selon un mode de réalisation, la composition selon l’invention est adaptée et destinée à la prévention, à la régulation et/ou au traitement des :

a) inflammations musculaires, et

La composition selon l’invention permet un traitement symptomatique au long cours ou un traitement symptomatique de courte durée. A titre de traitement symptomatique au long cours, il est possible de citer le traitement :

- des rhumatismes inflammatoires chroniques, notamment polyarthrite rhumatoïde,

- de certaines arthroses douloureuses et invalidantes,

- des manifestations inflammatoires dans les domaines ORL et/ou stomatologique,

- des rhumatismes inflammatoires chroniques, notamment polyarthrite rhumatoïde, spondylarthrite ankylosante ou syndromes apparentés, tels que syndrome de Fiessinger-Leroy-Reiter et rhumatisme psoriasique,

- de certaines arthroses douloureuses et invalidantes.

Selon un mode de réalisation, la composition selon l’invention permet d’améliorer le confort articulaire et/ou de prévenir/anticiper la dégradation dudit confort articulaire.

A titre de traitement symptomatique de courte durée, mention peut être faite des traitements suivants :

- traitement des rhumatismes abarticulaires tels que tendinites, bursites, périarthrites scapulo-humérales, lombalgies, radiculalgies ;

- traitement des poussées aigües d’arthrose.

Selon un mode de réalisation préféré, la composition selon l’invention est à visée antalgique, avantageusement à moyen ou long terme, à savoir, par exemple, pour une période de traitement ou de cure d'une durée d’au moins un mois, préférablement d’au moins trois mois, et typiquement comprise entre trois et six mois.

Les causes de l’inflammation sont nombreuses et variées : agent infectieux, substance étrangère inerte, agent physique, lésion cyto-tissulaire post-traumatique… L’inflammation commence par une réaction de « reconnaissance » faisant intervenir certaines cellules de l’organisme (monocytes, macrophages, lymphocytes) ou des protéines circulantes (anticorps, protéines du complément, facteur de Hageman…). A la phase de reconnaissance fait suite la mise en jeu séquentielle de tout un ensemble de cellules et de médiateurs dont l’ordre d’intervention est complexe et variable.

La réaction inflammatoire est un processus dynamique qui se déroule généralement en quatre phases successives [Galanaud, 2001[20],Bougault, 2019[21],Soualeh, 2017[22] ;Millet, 2014[23]] :

(i) Une phase d’initiation qui fait suite à un signal de danger d'origine exogène ou endogène.

(ii) Une phase de recrutement qui met en jeu la mobilisation des éléments de défenses de l’organisme, des cellules immunocompétentes (effecteurs primaires) telles que monocytes et macrophages (cellules « au cœur de l’inflammation »). La réponse inflammatoire, qui constitue l’élément essentiel de la dynamique de l’immunité innée, est complémentaire de la réponse immunitaire, base de l’immunité acquise.

(iii) Une phase d’amplification et de propagation de la réaction inflammatoire qui met en jeu les effecteurs secondaires y compris les médiateurs cytokiniques (tels que les interleukines ; voie des cytokines, schématisée en figure 2), lipidiques (voie de l’acide arachidonique, schématisée en figure 1) et les enzymes de dégradations, métalloprotéases (MMP) (voie des enzymes, schématisée en figure 3), incluant les collagénases (MMP 1, 8, 13, 18), les gélatinases (MMP 2, 9), les stromélysine (MMP3, 10, 11), cathepsines et les sérines protéases afin d’éliminer l’agent initiateur. Une production en excès de radicaux libres d’oxygène, dénommée « stress oxydatif », a également lieu (voie du stress oxydatif, schématisée en figure 4).

(iv) une phase de résolution qui tend vers un retour à l’homéostasie tissulaire ou à restaurer l’intégrité du tissu agressé. Parmi les anti-inflammatoires physiologiques on retrouve les cytokines anti-inflammatoires, les inhibiteurs de protéase (TIMP pour « tissue inhibitors of matrix metalloproteinases), les enzymes antioxydante (glutathion, peroxydase, SOD, catalase), lipoxines, etc. Cependant, en cas d’échec de la résolution, le processus inflammatoire évolue vers une chronicité qui pourrait être pathologique.

A la lumière de ce qui précède, et même si les mécanismes de la réaction inflammatoire s’avèrent variés et complexes, les principales voies de l’inflammation peuvent donc être résumées comme suit : la voie de l’acide arachidonique (cf. figure 1), la voie des cytokines (cf. figure 2), la voie des enzymes (cf. figure 3) et la voie du stress oxydatif (cf. figure 4).

Antalgique. Qui prévient ou diminue la sensation de douleur.

Voie de l’acide arachidonique (schématisée en figure 1). Les cellules en phase inflammatoire vont libérer de l’acide arachidonique (abrégé en « AA » ; C20:4 n-6 ; n° CAS : 506-32-1). Il s’agit d’un acide gras présent dans les phospholipides constituant les membranes cellulaires de l’organisme. Cet acide arachidonique va être métabolisé principalement par les cyclo-oxygénases (COX) et les lipoxygénases (LOX) produisant les médiateurs de l’inflammation : prostaglandines et leucotriènes (voir figure 1 ; cf. également Millet, 2014[23]).

Voie des cytokines/cytokines (schématisée en figure 2). Tel que mentionné précédemment, la voie des cytokines (cf. figure 2) représente l’une des principales voies de l’inflammation et plus précisément une phase d’amplification et de propagation de la réaction inflammatoire qui met en jeu les effecteurs secondaires, à savoir les cytokines. En particulier, le déclenchement et la régulation des phénomènes inflammatoires reposent largement sur ces cytokines. Les cytokines sont des glycoprotéines intervenant dans les communications à courte distance entre les cellules de l’organisme. Lorsqu’un monocyte (forme circulante du macrophage) ou un macrophage récemment arrivé dans un tissu, est activé, il produit une première vague de cytokines pro-inflammatoires. Celles-ci vont déclencher en cascades les phénomènes inflammatoires locaux (activation d’enzymes, libération de médiateurs, décrits plus-bas) mais également généraux.

Les principales cytokines pro-inflammatoires sont les interleukines-1 (IL-1) alpha et beta, le Tumor Necrosis factor alpha (TNF-alpha), IL-6, etc.

Cette production est constamment associée à la libération, par le monocyte/macrophage lui-même, de substances à effet anti-inflammatoire. L’effet inflammatoire net dépend de l’équilibre entre système pro- et anti-inflammatoires. Cela permet un contrôle multiparamétrique, plus fin, de l’intensité de la réaction. Assurer par l’intermédiaire de médiateurs antiinflammatoires produits dans une deuxième vague, la terminaison de la réponse. Les principaux anti-inflammatoires cytokiniques étant : IL-4, IL-10, etc. [Galanaud, 2001[20]; Bougault, 2019][21].

Inhibiteur de cytokine(s) pro-inflammatoire(s). Par « inhibiteur de cytokine(s) pro-inflammatoire(s) », l’on entend une substance, un composé, une composition ou un constituant capable de diminuer ou de supprimer l’activité enzymatique d’au moins une cytokine pro-inflammatoire, de préférence sélectionnée dans le groupe constitué par IL-1b (IL-1β), IL-12 et IL-6. Selon la présente invention, afin de déterminer si un constituant particulier (en particulier le constituant a)) est un inhibiteur ou non de cytokine(s) pro-inflammatoire(s), l’on met en œuvre le protocole de testin vitroprésenté dans l’exemple 2, au point 2.3, à savoir l’on évalue par RT-qPCR l’expression des gènes codants pour les cytokines IL-1β (« IL-1b », cf. figure 11), IL-12 (cf. figure 12) et IL-6 (cf. figure 13). Par exemple, si l’on se réfère à la figure 11, il apparaît que, outre la composition de l’exemple 1, l’extrait de gingembre est un inhibiteur de IL-1β et, par conséquent, doit être considéré, au sens de la présente invention, comme un Inhibiteur de cytokine(s) pro-inflammatoire(s). De même, si l’on se réfère à la figure 12, il apparaît que, outre la composition de l’exemple 1, l’extrait deBoswellia serrataest un inhibiteur d’IL-12 et, par conséquent, doit être considéré, au sens de la présente invention, comme un Inhibiteur de cytokine(s) pro-inflammatoire(s).

Voie des enzymes (schématisée en figure 3). Les cellules immunitaires jouant un rôle clef dans le mécanisme inflammatoire, à savoir les monocytes et macrophages, contiennent des enzymes de dégradation (contribuant à remodeler la matrice extracellulaire), qui, suite à l’inflammation, vont se déverser dans le milieu extérieur. Ces enzymes sont les métalloprotéases (MMP), incluant les collagénases (MMP 1, 8, 13, 18), les gélatinases (MMP 2, 9), les stromélysine (MMP3, 10, 11), cathepsines et les sérines protéases. Le rôle d’un anti-inflammatoire sera de limiter les effets pro-inflammatoires de ces enzymes quand elles sont déversées dans le milieu extracellulaire et donc limiter les lésions tissulaires qui en sont directement issues [Millet, 2014][23].

Voie du stress oxydatif (ou « stress oxydant ») (schématisée en figure 4). Une production en excès d’espèces réactives de l’oxygène (ROS pour « Reactive Oxygen Species ») (cf. définition infra) a lieu lors de l’inflammation, favorisant la destruction d’éventuels microorganismes, mais risquant d’entrainer un effet cytotoxique par une altération des protéines et des acides gras membranaires entrainant un dommage tissulaire. Formés en trop grande quantités, ces DRO deviennent pathologiques. Ils peuvent notamment activer l’expression de gènes codant pour les cytokines pro-inflammatoires = boucle inflammatoire [Bougault, 2019[21]]. Cette voie dite « voie du stress oxydatif » est considérée comme faisant partie du mécanisme inflammatoire (cf. figure 4).

Réducteur de stress oxydatif. Par « réducteur de stress oxydatif, » l’on entend une substance, un composé, une composition ou un constituant capable de réduire le stress oxydatif. A titre de réducteur de stress oxydatif, l’on peut notamment citer les« inhibiteur[s] de production d’espèces réactives de l’oxygène »(cf. définition infra), les « activateur[s] de SOD »(cf. définition infra) ou encore les hème-oxygénases, et en particulier la hème-oxygénase-1 (HEMEox ; cf. définition infra).

Espèces réactives de l’oxygène (ou dérivés réactifs de l’oxygène (DRO)) . Les espèces réactives de l’oxygène (ou « radicaux libres de l’oxygène », dénommées « Reactive oxygen species » (ROS), en langue anglaise) sont des dérivés chimiques oxygénés tels que des radicaux libres, des ions oxygénés et des peroxydes, rendus chimiquement très réactifs par la présence d'électrons de valence non appariés. Il peut s’agir par exemple de l’anion superoxyde O2^-, de l’oxygène singulet O2^•, du peroxyde d'hydrogène H2O2, ou encore de l'ozone O3. Lorsque la concentration de ces DRO croît, cela est susceptible d’endommager des structures cellulaires, ce qu’on appelle le « stress oxydatif » (ou stress oxydant ; cf. définition supra).

Inhibiteur de production d’espèces réactives de l’oxygène (ROS). Par « inhibiteur de production d’espèces réactives de l’oxygène», l’on entend une substance, un composé, une composition ou un constituant capable de diminuer ou de supprimer la production de ROS. Selon la présente invention, afin de déterminer si un constituant particulier est un inhibiteur ou non de production de ROS, l’on met en œuvre le protocole de testin vitroprésenté dans l’exemple 2, au point 2.3, à savoir l’on traite des macrophages dérivés des monocytes humains (h-MDMs) avec les différentes préparations à base de plante(s), prises isolément ou en combinaison pendant 24h. La production de ROS est mesurée par chimioluminescence en présence de 5-amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione (Luminol, Sigma) en utilisant un luminomètre (ENVison, Perkin Elmer) paramétré pour maintenir les cellules à 37°C. La production de chimioluminescence est enregistrée pendant 1h30 après avoir stimulé ou non les cellules avec 100μM de 12-O-tetradecanoylphorbol- 13-acetate (TPA) ou 100μM de zymosan. L'analyse statistique est réalisée en utilisant l'aire sous la courbe. Si l’on se réfère aux figures 17 et 18, outre la composition de l’exemple 1, l’extrait de gingembre et le concentré de jus de melon (SOD B EXTRAMEL^®) sont des inhibiteurs de production d’espèces réactives de l’oxygène.

Activateur de SOD . Par « activateur de SOD », l’on entend une substance, un composé, une composition ou un constituant induisant ou augmentant l’activité enzymatique de la superoxyde dismutase (SOD). Contrairement à ce qui était connu dans l’état de la technique, les inventeurs ont mis en évidence le fait que la baïcaline (ainsi qu’un extrait - de préférence sec - de scutellaire comprenant ladite baïcaline, tel que celui utilisé au sein de la composition de l’exemple 1) et les mangostines (ainsi qu’un extrait - de préférence sec - de mangoustan comprenant lesdites mangostines, tel que celui utilisé au sein de la composition de l’exemple 1) étaient des activateurs de SOD (et présentaient par conséquent des effets positifs sur la voie du stress oxydatif).

Selon la présente invention, afin de déterminer si un constituant particulier (avantageusement le constituant c) et/ou le constituant d)) est un activateur ou non de SOD, il est possible de mettre en œuvre, par analogie, le protocole de testin vitroprésenté dans l’exemple 2, au point 2.3 (impliquant l’évaluation par RT-qPCR de l’expression de la SOD).

Hemoxygénase-1 (ou « « hème-oxygénase-1 » ; HEMEox). Parmi les systèmes antioxydants endogènes, l'hème oxygénase, qui dégrade l'hème en bilirubine (un antioxydant), fer et monoxyde de carbone (qui possède un effet antiinflammatoire), représente un système efficace de protection en limitant les lésions de stress oxydant. L’hème-oxygénase-1 est une enzyme inductible et ubiquiste.

Composition administrable par voie orale. Composition qui se trouve sous une forme galénique adaptée à une administration par voie orale. Il peut s’agir d’une forme galénique solide ou d’une forme galénique liquide. A titre de forme galénique solide, peuvent être envisagées les formes galéniques solides suivantes :

un comprimé, tel qu’un comprimé à avaler, à croquer, effervescent, orodispersible,
une forme galénique sublinguale,
une pastille,
une poudre, telle qu’une poudre en sachet, en stick, vrac ou adaptée à un conditionnement en gélule ;

ladite forme galénique solide étant préférablement sélectionnée parmi un comprimé ou une gélule ; de manière particulièrement préférée ladite forme galénique solide étant une gélule.

Concernant les formes galéniques liquides envisageables, au sens de la présente invention, il est possible de citer notamment les sirops, les suspensions buvables, les formes visqueuses (par exemple les formes semi-liquides ou pâteuses). Ces formes galéniques liquides peuvent notamment se présenter sous forme d’ampoules de liquide, de flacons munis d’un compte-gouttes.

Selon un mode de réalisation préféré, ladite composition anti-inflammatoire se présente sous une forme galénique solide, avantageusement sous forme pulvérulente.

Inhibiteur . Un inhibiteur s’entend d’une substance, d’un composé, d’une composition ou d’un constituant diminuant ou supprimant la production d’un ou plusieurs autre(s) composé(s), en particulier en diminuant ou supprimant une ou plusieurs activité(s) enzymatique(s).

Activateur . A l’inverse d’un inhibiteur, un activateur s’entend d’une substance, d’un composé, d’une composition ou d’un constituant induisant ou augmentant la production d’un ou plusieurs autre(s) composé(s), notamment en induisant ou en augmentant une ou plusieurs activité(s) enzymatique(s).

LTA4h . L’acronyme « LTA4h » (ou « LTA4H ») désigne l’enzyme leucotriène A4 hydrolase, laquelle est une enzyme ubiquitaire dont le rôle consiste à convertir le leucotriène A4 (LTA4) en leucotriène B4 (LTB4), médiateur pro-inflammatoire de la voie de l’acide arachidonique (cf. figure 1).

Inhibiteur de LTA4h. Par « inhibiteur de LTA4h », l’on entend une substance, un composé, une composition ou un constituant capable de diminuer ou de supprimer l’activité enzymatique de la LTA4h. Selon la présente invention, afin de déterminer si un constituant particulier (en particulier le constituant a)) est un inhibiteur ou non de LTA4h, l’on met en œuvre le protocole de testin vitroprésenté dans l’exemple 2, au point 2.3, à savoir l’on évalue par RT-qPCR l’expression des gènes codants pour la LTA4H (cf. figure 5). Si l’on se réfère à la figure 5, il apparaît que, outre la composition de l’exemple 1, les extraits de gingembre et deBoswellia serratasont des inhibiteurs de LTA4h.

PGE synthase . L’acronyme « PGE synthase » désigne la prostaglandine-E synthase, qui est une enzyme de type isomérase, laquelle intervient dans la voie de l’acide arachidonique (cf. figure 1) afin d’assurer la conversion de la prostaglandine H2 (PGH2) en prostaglandine E2 (PGE2). Tel qu’indiqué précédemment et tout comme le LTB4, le PGE2 est également un médiateur pro-inflammatoire.

Inhibiteur de PGE synthase. Par « inhibiteur de PGE synthase », l’on entend une substance, un composé, une composition ou un constituant capable de diminuer ou de supprimer l’activité enzymatique de la PGE synthase. Selon la présente invention, afin de déterminer si un constituant particulier (en particulier le constituant a)) est un inhibiteur ou non de PGE synthase, l’on met en œuvre le protocole de testin vitroprésenté dans l’exemple 2, au point 2.3, à savoir l’on évalue par RT-qPCR l’expression des gènes codants pour la PGE synthase (cf. figure 6). Si l’on se réfère à la figure 6, il apparaît que, outre la composition de l’exemple 1, l’extrait deBoswellia serrataest un inhibiteur de PGE synthase.

Substances actives d’origine végétale .Les substances actives d’origine végétale sont essentiellement :

- des plantes, parties de plantes, fruits, algues, champignons, lichens ; entiers, fragmentés ou brisés, utilisés en l’état, soit le plus souvent sous forme desséchée, soit à l’état frais ; et/ou

- des préparations à base de plante(s), algues, champignons, lichens, par exemple, des extraits, des huiles essentielles, des jus d’expression, des exsudats ayant subi un traitement, ou des substances végétales ayant subi une opération de réduction de taille pour des applications spécifiques (par exemple, divisées pour des tisanes ou pulvérisées pour mise en forme gélule).

Selon un mode de réalisation préféré de la présente invention, tout ou partie des substances actives d’origine végétale contenues dans la composition anti-inflammatoire d’origine végétale selon l’invention se trouvent sous forme d’extrait à base de plante(s), de préférence d’extrait sec.

Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, au sein de la composition anti-inflammatoire selon l’invention :

- le susdit constituant a) comprend (consiste essentiellement en ou consiste en) au moins un premier inhibiteur de LTA4h, de PGE synthase et/ou de cytokine(s) pro-inflammatoire(s) d’origine végétale (avantageusement des trois) et au moins un deuxième inhibiteur de LTA4h, de PGE synthase et/ou de cytokine(s) pro-inflammatoire(s) d’origine végétale (par exemple un inhibiteur de LTA4h et d’au moins une cytokine pro-inflammatoire telle que IL-1b) , différent du premier, ledit premier inhibiteur étant contenu dans une première substance active d’origine végétale - en l’espèce une préparation à base de plante(s) - consistant en un extrait (de préférence sec) deBoswellia (de préférence de Boswellia serrataet/ou deBoswellia sacra, avantageusement deBoswellia serrata) et ledit deuxième inhibiteur étant contenu dans une deuxième substance active d’origine végétale - en l’espèce une préparation à base de plante(s) - consistant en un extrait (de préférence sec) deZingiber officinale;

- le susdit constituant b) est contenu dans substance active d’origine végétale - en l’espèce une préparation à base de plante(s) - consistant en une préparation (telle qu’un extrait ou un concentré, avantageusement un concentré) comprenant de la superoxyde dismutase (SOD) d’origine végétale (avantageusement d’origine fruitière) et, de manière préférée, issue d’au moins unCucurbitaceaetel que leCucumis melo(de préférence ladite préparation un du concentré de jus de pulpe de melon, préférablement cantaloup, avantageusement débarrassé des graines et de la peau, par exemple disponible dans le commerce sous la dénomination « SOD B Extramel^®») ;

- le susdit constituant c) est contenu dans substance active d’origine végétale - en l’espèce une préparation à base de plante(s) - consistant en un extrait (de préférence sec) deScutellaria baicalensiset/ou

- le susdit constituant d) est contenu dans substance active d’origine végétale - en l’espèce une préparation à base de plante(s) - consistant en un extrait (de préférence sec) deZingiber officinale, deScutellaria baicalensis,deGarcinia mangostanaet/ou une préparation comprenant de la SOD (cf. supra).

Boswellia. Le genre Boswellia regroupe plus de 30 espèces et de nombreuses sous-espèces d'arbres ou d'arbustes de la famille des Burséracées originaires d'Afrique ou d'Asie, produisant une résine aromatique. La résine de plusieurs espèces est exploitée sous le nom d'encens ou oliban (Olibanumen latin), notamment à partir des espèces suivantes :Boswellia carteriiBirdw.,B. frereanaBirdw.,B. sacraFlueck.,B. serrataRoxb.,B. bhau-dajianaBirdw.,B. papyrifera(Delile ex. Caill.) Hochst. Les principales espèces du genre Boswellia sont les suivantes [Aksamija, 2012][24]:

Boswellia B. serrata(syn. thurifera) Roxb. ex. Colebr. Inde

B. ovalifoliolataBal.& Henry Inde

B. papyrifera(Delile ex. Caill.) Hochst. Niger, République Centrafricaine, Cameroun, Ethiopie, Soudan, Ouganda

B. socotranaBalf.f Socotra (Yémen)

B. carteriBirdw. Somalie du Nord, Ethiopie, Soudan, Erythrée

B. bhau-dajianaBirdw. Somalie

B. microphylliaChiovenda Somalie

B. multifoliataSomalie B. rivae Engler Somalie

B. sacra(syn. Carteri selon certains auteurs) Flueck. Yemen du Sud, Oman

B. frereanaBirdw. Nord de la Somalie

B. odorataNigeria, Niger, Cameroun

B. popovianaHepper Socotra (Yémen)

B. nanaHepper Socotra (Yémen)

B. pirottaeChiov. Ethiopie

B. ogadensisVollesen Ethiopie

B. neglectaS. Moore Ethiopie, Kenya, Tanzanie, Ouganda

B. elongataBalf.f Socotra (Yémen)

B. dioscoridesThul. & Gifri Socotra (Yémen)

B. dalzieliiHutch. Afrique de l’Ouest

B. bullataThul. & Gifri Socotra (Yémen)

B. ameeroBalf.f Socotra (Yémen)

Les principales sources bibliographiques concernant les Boswellia spp. et leur(s) pays d’origine sont les suivantes :

Ouedraogo et al, 2006; Germplasm,Resources Information Network – GRIN ;
United States Department of Agriculture; 2006, IUCN Red List of Threatened Species;
Hassan et al, 2009;
Yibekal Abebe Tessema, 2012; et
National Center for Biotechnology Information – NCBI.

Au sens de la présente invention sont préférées les espècesBoswellia sacraetBoswellia serrata, cette dernière étant particulièrement préférée.

Boswellia serrata. Boswellia serrataRoxb. ex. Colebr. est un arbre qui pousse dans les zones arides et les forêts sèches de l’Inde, aussi en Afrique du Nord et au Moyen-Orient. Arbre de taille moyenne, ses feuilles sont caduques, opposées et sessiles, obtuses, à bords dentelés, ses fleurs sont en grappe avec des pétales allongés de couleur crème. La résine de boswellie fait partie de la pharmacopée officielle de l'Inde et de la Chine. La médecine traditionnelle ayurvédique (Inde) lui attribue des propriétés anti-inflammatoires utiles pour le traitement des douleurs rhumatismales, de l'inflammation du tube digestif et des voies respiratoires ainsi que de diverses affections cutanées. En médecine traditionnelle chinoise, on l'emploie pour traiter les douleurs rhumatismales et menstruelles ainsi que les ecchymoses et autres blessures cutanées. La boswellie consiste en l’exsudat de gomme-résine séchée à l’air, spontané ou obtenu par incision de la tige ou des branches deBoswellia serrataRoxb. ex Colebr. Les principaux constituants caractéristiques sont des acides triterpéniques pentacycliques, dont les composants majeurs sont l’acide acétyl-béta-boswellique, l’acide acétyl-11-céto-béta-boswellique (AKBA), l’acide béta-boswellique, l’acide alpha-boswellique, l’acide 11-céto-béta-boswellique (KBA) [monographie Escop, 2009]. Selon la Pharmacopée européenne (01/2013:2310), la matière végétale ne doit pas contenir moins de 1,0% d'acide 11-céto-β-boswellique (C₃₀H₄₆O₄; Mr 470,7) et moins de 1,0% d'acide acétyl-11-céto-β-boswellique (C₃₂H₄₈O₅; Mr 512,7), calculés par rapport à la drogue desséchée.

Boswellia sacra .Boswellia sacraFlueck. est une espèce originaire de l’Arabie (notamment du Sud Yémen, d’Oman). Il existe une confusion entreB. sacra(Arabie) etB. carteri(oucarterii, Somalie). La différence botanique des deux plantes résiderait dans le port : type buisson chezB. sacra(ramification débutant dès le niveau du sol ou un peu au-dessus), type arbre avec un tronc véritable chezB. carteri. D’après certains auteurs, il n’existe probablement qu’une seule espèce,Boswellia sacra(syn.carteri) que l’on trouve à la fois en Arabie et en Afrique. Les adaptations aux environnements extrêmes devraient être responsables des

différences observées par les botanistes entre ces espèces. L’appellationBoswellia sacra

sera employée pour désigner l’espèce sud-arabique, tandis que pour l’espèce africaine, on

parlera deB. carteri. (pour les dénominations botaniques voir sur Tela botanica)

Acides boswelliques . Les acides boswelliques sont des composés acides triterpéniques pentacylcliques ; les molécules agencées en 5 cycles à 6 carbones font partie des familles des ursanes ou des oléananes, qui diffèrent par la position d’un méthyle (C29) sur le cycle E [https://dumas.ccsd.cnrs.fr/dumas-01614373/document, p64-66].

Notamment présents dans la gomme-résine de boswellie, ce sont principalement l’acide acétyl-béta-boswellique (C₃₂H₅₀O₄, CAS RN 5968-70-7), l’acide acétyl-11-céto-béta-boswellique (AKBA, C₃₂H₄₈O₅, CAS RN 67416-61-9), l’acide béta-boswellique (C₃₀H₄₈O₃, CAS RN 631-69-6), l’acide alpha-boswellique (C₃₀H₄₈O₃, CAS RN 471-66-9), l’acide 11-céto-béta-boswellique (KBA, C₃₀H₄₆O₄, CAS RN 17019-92-0).

Acide acétyl-11-céto-béta- boswellique (« AKBA ») . L'acide acétyl-11-céto-béta boswellique ou AKBA (en anglais acetyl-11-keto-beta-boswellic acid) (C₃₂H₄₈O₅, CAS RN 67416-61-9) est, selon la dénomination IUPAC, l’acide (3R,4R,4aR,6aR,6bS,8aR,11R,12S,12aR,14aR,14bS)-3-acétyloxy-4,6a,6b,8a,11,12,14b-heptaméthyl-14-oxo-1,2,3,4a,5,6,7,8,9,10,11,12,12a,14a-tétradécahydropicène-4-carboxylique, synonyme acide 3-O-acétyl-11-céto-β-boswellique.

Gingembre (Zingiber officinale). Zingiber officinaleRoscoe, herbe vivace par un rhizome sympodial, est peut-être originaire de Chine ou d’Inde, et de nombreux cultivars sont produits en inde, Malaisie, Chine, Sierra Leone, Nigéria, Australie, notamment. L’usage du gingembre est extrêmement populaire - pour la cuisine comme épice et pour traiter de nombreux maux, notamment dans toute l'Asie, en particulier en Inde et en Chine, depuis plus de 5000 ans [EMA/HMPC/577856/2010, 2012][28]. Le rhizome brut est séché à l’air, coupé ou entier, il a une odeur aromatique caractéristique et un goût épicé et brûlant. Il doit contenir, selon la monographie de la Pharmacopée européenne (01/2011:1522), au moins 15 ml/kg d’huile essentielle (calculé en drogue anhydre), et pas moins de 0.8% de gingérols et gingerdiones et, selon la Pharmacopée des Etats Unis d’Amérique (USP), pas plus de 0,18% de shogaols. Les principaux constituants du rhizome, piquants, sont les gingérols, dont le principal est le -6-gingérol, aussi le 8- et le 10-gingérol, accompagnés de leurs précurseurs biogénétiques les déhydrogingerdiones et les gingerdiones, de gingerdiols et leurs esters, des diarylheptenones (i.e. gingerenones A, B and C, et isogingerenone B), notamment. Les shogaols, produits de déshydratation (delta-4,5) sont absents du rhizome frais [Rombi, 2015][25].

Gingérols et leurs dérivés . Les gingérols sont des phénols de de structure générale 1-(4’-hydroxy-3’-méthoxyphényl)-5-hydroxyalcan-3-ones. Le 6-gingérol (C₁₇H₂₆O_4,CAS RN 23513-14-6) est aussi appelé selon la dénomination IUPAC, (5S)-5-hydroxy-1-(4-hydroxy-3-méthoxyphényl)décan-3-one. Le 8-gingérol (C₁₉H₃₀O₄, CAS RN 23513-08-8) est le (5S)-5-hydroxy-1-(4-hydroxy-3-méthoxyphényl)dodécan-3-one. Le 10-gingérol (C₂₁H₃₄O₄, CAS RN 23513-15-7) est le (5S)-5-hydroxy-1-(4-hydroxy-3-méthoxyphényl)tétradécan-3-one.Les shogaols sont les produits de déshydratation (delta-4,5) des gingérols. Par exemple, le 6-shogaol (C₁₇H₂₄O_3,CAS RN 555-66-8) est aussi dénommé selon l’IUPAC, (E)-1-(4-hydroxy-3-méthoxyphényl)dec-4-èn-3-one. L'administration intrapéritonéale de 6-gingérol (25-50 mg/kg) à des souris a provoqué une inhibition de la réponse de convulsion induite par l'acide acétique et du temps de léchage induit par le formol au cours de la phase de latence. Le 6-gingérol (50-100 mg / kg) a également inhibé l'œdème de la patte induit par le carraghénane. Les résultats suggèrent que le 6-gingérol possède des activités analgésiques et anti-inflammatoires [monographie ESCOP, 2008]. De nombreuses étudesin vitroet expérimentales sur des animaux, démontrent que les extraits de racine de gingembre ont des effets anti-inflammatoires.

Shogaols . Les shogaols sont les produits de déshydratation (delta-4,5) des gingérols. Par exemple, le 6-shogaol (C₁₇H₂₄O_3,CAS RN 555-66-8) est aussi dénommé selon l’IUPAC, (E)-1-(4-hydroxy-3-méthoxyphényl)dec-4-èn-3-one.

Scutellaire (Scutellaria baicalensis). Scutellaria baicalensisGeorgi est une herbe pérenne native de l’Est de l’Asie, on la trouve en Chine, au Japon, en Corée, en Mongolie et en Russie. En médecine traditionnelle chinoise, c’est une des 50 plantes fondamentales, les racines sont principalement employées pour traiter les états « chauds et humides », les maladies inflammatoires, les allergies, stimuler les fonctions hépatiques. La racine pivotante, grande et allongée, est généralement récoltée au printemps ou en automne, quand la plante a plusieurs années. La racine et le rhizome sont riches en flavonoïdes (flavones et leurs dérivésO- etC-glycolsylés, flavanones, chalcones) : la baïcaléine (ou 5,6,7-trihydroxyflavone) qui est la génine de la baicaline (O-7-glucuronylée), le wogonoside, la wogonine, la scutellaréine, notamment [Rombi, 2015][25]. Ces composés ont des propriétés antioxydantes, anti-inflammatoires, antiseptiques antiallergiques, cardioprotectrices et hépatoprotectrices, sont notamment décrites dans la littérature scientifique. Selon la pharmacopée européenne (04/2011:2438), la racine ne doit pas contenir moins de 9,0 % de baïcaline (C₂₁H₁₈O₁₁; Mr 446,4) calculée en drogue desséchée.

Baïcaline et ses dérivés . La baïcaline (C₂₁H₁₈O₁₁, CAS RN 21967-41-9) est dénommée selon l’IUPAC l’acide (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(5,6-dihydroxy-4-oxo-2-phénylchromèn-7-yle)oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylique. La baïcaléine (ou 5,6,7-trihydroxyflavone, C₁₅H₁₀O₅, CAS RN 491-67-8) est la génine de la baïcaline (O-7-glucuronylée) est selon l’IUPAC la 5,6,7-trihydroxy-2-phénylchromèn-4-one. La baïcaline a des actions anti-inflammatoires, analgésiques, antipyrétiques. [Dong, 2015[30]; Jin, 2019][29].

Melon ( Cucumis melo ). Cucumis meloL., le melon, est une plante herbacée annuelle à longues tiges sympodiales, probablement originaire d'Afrique intertropicale, largement cultivée comme plante potagère pour son faux-fruit comestible, et dont il existe de nombreuses variétés et cultivars. Le jus de la pulpe du melon, notamment le jus de pulpe de melon cantaloup (préalablement débarrassé des graines et de la peau), est riche en vitamine C, vitamine A, acide folique (ou vitamine B9), béta-carotène, fibres, potassium, cuivre, notamment. L’extrait retenu est titré et riche en Superoxyde Dismutase (SOD), une enzyme qui protège les plantes du stress oxydatif, enzyme aussi présente chez les animaux dans les mitochondries et le cytoplasme. Selon l’invention, l’on utilise, de préférence, un concentré du jus de melon (de préférence du jus de pulpe de melon et avantageusement du jus de pulpe de melon cantaloup, préalablement débarrassé des graines et de la peau). Ce concentré est titré et riche en superoxyde dismutase (SOD), une enzyme qui protège les plantes du stress oxydatif, enzyme également présente chez les animaux, au sein des mitochondries et du cytoplasme. A titre d’exemple, il est possible d’utiliser le produit disponible dans le commerce sous la dénomination « SOD B Extramel^®».

Superoxyde dismutase (SOD) . La Superoxyde Dismutase (SOD, CAS RN 9054-89-1) est une enzyme anti-oxydante, métalloprotéine qui se présente chez les plantes notamment sous la forme de dimère zinc-cuivre Zn-Cu-SOD ou manganèse Mn-SOD ou encore fer Fe-SOD.

La libération excessive d'anions superoxydes contribue aux dommages tissulaires observés après la reperfusion dans plusieurs organes ischémiques, notamment les reins, l'estomac, les intestins et le cœur. La surexpression de la superoxyde dismutase humaine cuivre-zinc (CuZn-SOD) a un effet protecteur contre l'ischémie du myocarde et les lésions de reperfusion chez la souris. De plus, des études précliniques ont montré que les enzymes SOD ont un effet protecteur chez les modèles animaux de diverses maladies pulmonaires et d'arthrite expérimentale.

Mangoustan (Garcinia mangostana). Garcinia mangostanaL., qui fournit le mangoustan, est un arbre grand, avec des feuilles persistantes oblongues ou oblongues-lancéolées. Il est cultivé dans la forêt tropicale humide de certains pays d'Asie du Sud-Est tels que l'Indonésie, la Malaisie, le Sri Lanka, les Philippines et la Thaïlande. Le fruit est violet foncé ou rougeâtre, à chair blanche, molle et juteuse, à la saveur légèrement acide et douce et à l'arôme agréable ; il est couronné par le stigmate sessile à 4 parties. Il y a de 6 à 8 graines et la pulpe est juteuse, blanche et délicieuse en goût et en odeur, d’une taille avoisinant celle d’une orange. Le fruit est d’usage traditionnel en Asie et en Inde, et actuellement utilisé pour le traitement des douleurs abdominales, de la diarrhée, de la fièvre, des infections urinaires, des maladies inflammatoires et immunologiques. Les principaux constituants du fruit sont des xanthones prénylées ou oxygénées, dérivées de la dibenzo-gamma-pyrone, ce sont les alpha-, béta- et gamma-mangostines, la gartanine E, la 8-désoxygartanine, et les garcinones C et D, composants les plus étudiés parmi 68 xanthones isolées à ce jour [Ovalle-Magallanes, 2017[26]; Pedraza-Chaverri, 2008[27]].

Mangostines . Les mangostines sont des xanthones prénylées, dérivées de la dibenzo-gamma-pyrone, ce sont principalement les alpha-, béta- et gamma-mangostines et les 1- et 3-isomangostines et leur forme hydrate. L’alpha-mangostine (C₂₄H₂₆O_6,CAS RN 6147-11-1) est dénommée selon l’IUPAC 1,3,6-trihydroxy-7-méthoxy-2,8-bis(3-méthylbut-2-ényl)xanthèn-9-one. La béta- mangostine (C₂₅H₂₈O_6,CAS RN 20931-37-7) est dénommée selon l’IUPAC 1,6-dihydroxy-3,7-diméthoxy-2,8-bis(3-méthylbut-2-ényl)xanthèn-9-one. La gamma-mangostine (C₂₃H₂₄O_6,CAS RN 31271-07-5) est dénommée selon l’IUPAC 1,3,6,7-tétrahydroxy-2,8-bis(3-méthylbut-2-ényl)xanthèn-9-one. Elles possèdent de multiples activitésin vitro, telles que antioxydant, antibactérien, cytotoxique et anti-prolifératif [Ovalle-Magallanes, 2017[26]; Pedraza-Chaverri, 2008[27]].

Harpagophytum. HarpagophytumHarpagophytum procumbensDC. et/ou Harpagophytum zeyheri Decne, l’harpagophyton est une plante herbacée pérenne originaire du Sud du continent africain, notamment présente dans le désert du Kalahari et la région des steppes namibiennes en Afrique du Sud-Ouest. Ses racines tubérisées secondaires, communément appelées « griffe du diable » en raison de leur forme, ont été largement utilisées en médecine traditionnelle pour diverses indications comme les troubles digestifs, la constipation, les maladies du sang, ainsi que comme fébrifuge, pour soulager les douleurs. En Europe, il est utilisé pour traiter l'arthrite douloureuse, la tendinite, la perte d'appétit et les troubles dyspeptiques. Il doit contenir, selon la monographie de la Pharmacopée européenne (01/2011:1095), au moins 1,2% d’harpagoside (C₂₄H₃₀O₁₁; Mr 494,5) calculée en drogue desséchée. Les principaux constituants de la griffe du diable sont des iridoïdes : harpagoside, harpagide, 8-(4-coumaroyl)-harpagides, 6-(4-coumaroyl) harpagides, procumbide et ses esters procumboside.

Harpagoside. L’harpagoside et ses dérivés, notamment présents dans les racines tubérisées secondaires de l’harpagophyton, font partie de la famille phytochimique des iridoïdes. L’harpagoside (C₂₄H₃₀O₁₁, CAS RN 19210-12-9) est dénommé selon l’IUPAC [(1S,4aS,5R,7S,7aS)-4a,5-dihydroxy-7-méthyl-1-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxyméthyl)oxan-2-yl]oxy-1,5,6,7a-tétrahydrocyclopenta[c]pyran-7-yl] (E)-3-phénylprop-2-ènoate.

Insaponifiables de soja. L'insaponifiable est la fraction résiduelle qui est insoluble dans l'eau (mais soluble dans les solvants organiques) après saponification. L’insaponifiable de soja est obtenu à partir de graines deGlycine soja, partie qui n'a pas été transformée en savon au cours du processus de saponification.

Resvératrol. Le resvératrol ou 3,4',5-trihydroxystilbène (C₁₄H₁₂O₃, CAS RN 501-36-0) est un polyphénol de la classe des stilbènes présent dans certains fruits comme les raisins, la rhubarbe (Rheum tataricum), la mûre (Morus spp.), la grenade (Punica granatum). Il s’agit d’une phytoalexine, substance de défense produite en réponse à un stress environnemental ou à l’attaque d’un pathogène. Il est dénommé selon l’IUPAC 5-[(E)-2-(4-hydroxyphényl)éthenyl]benzène-1,3-diol.

Chicorée. La chicorée sauvage (Cichorium intybusL.) est une plante herbacée à racine pivotante originaire d'Europe, d'Afrique du Nord et d'Asie. Les fleurs ligulées de la chicorée sont héliotropes, elles passent du bleu au bleu pâle et au rose en fonction des heures de la journée. La feuille de chicorée contient notamment de l’acide chicorique.

Acide chicorique. L’acide chicorique est un acide phénolique, dérivé de l'acide hydroxycinnamique (C₂₂H₁₈O₁₂, CAS RN 6537-80-0). Il est dénommé selon l’IUPAC acide (2R,3R)-2,3-bis[[(E)-3-(3,4-dihydroxyphényl)prop-2-ènoyl]oxy]butanedioïque.

Verveine odorante (extrait aqueux de feuille de verveine odorante PLX®). La verveine odorante, aussi appelée verveine citronnelle (lemon verbena en anglais, Aloysia citriodora Palau ou Aloysia triphylla, syn. Lippia citriodora Humb., Bompl. et Kunth), est un arbuste originaire d'Amérique du Sud. Elle est notamment cultivée en Afrique du Nord, en Europe méridionale et en Iran. Il s'agit d'une plante aromatique utilisée dans le monde entier à des fins médicinales et comme additif alimentaire et boisson. Les principaux constituants de la feuille sont des polyphénols de type glycosides de phénylpropanoïdes comme le verbascoside et l’isoverbascoside, des flavonoïdes tels que la lutéoline-7-diglucuronide, aux propriétés antioxydantes.

Verbascoside . Le verbascoside (C29H36O15, CAS RN 61276-17-3) est un ester hétérosidique phénylpropanoïque. Il est dénommé selon l’IUPAC [6-[2-(3,4-dihydroxyphényl)ethoxy]-5-hydroxy-2-(hydroxyméthyl)-4-(3,4,5-trihydroxy-6-méthyloxan-2-yl)oxyoxan-3-yl](E)-3-(3,4-dihydroxyphényl)prop-2-ènoate.

Ingrédient actif d’origine végétale . Au sens de la présente invention, un ingrédient actif d’origine végétale s’entend d’un composé phytochimique compris dans une substance active d’origine végétale (cf. définition supra) ou dans une préparation à base de plante(s) (cf. définition infra) et responsable d’un effet pharmacologique/biologique ou nutritionnel, en l’espèce dans le cadre de la prévention, de la régulation et/ou du traitement de l’inflammation/des mécanismes inflammatoires. A titre illustratif, et si l’on considère le mode de réalisation particulièrement préféré mentionné infra, sous l’intitulé « Préparation à base de plante(s) » , il convient de noter que :

- les ingrédients actifs d’origine végétale de la préparation à base de plante(s) « extrait deBoswellia » (de préférence de Boswellia serrataet/ousacra, avantageusement deBoswellia serrata)» sont les acides boswelliques (et en particulier l’acide acétyl-béta-boswellique (C₃₂H₅₀O₄, CAS RN 5968-70-7), l’acide acétyl-11-céto-béta-boswellique (AKBA, C₃₂H₄₈O₅, CAS RN 67416-61-9), l’acide béta-boswellique (C₃₀H₄₈O₃, CAS RN 631-69-6), l’acide alpha-boswellique (C₃₀H₄₈O₃, CAS RN 471-66-9), l’acide 11-céto-béta-boswellique (KBA, C₃₀H₄₆O₄, CAS RN 17019-92-0)) ;

- les ingrédients actifs d’origine végétale de la préparation à base de plante(s) « extrait deZingiber officinale» sont les gingérols (et en particulier le 6-gingérol, le 8-gingérol et le 10-gingérol) et/ou les shogaols (et en particulier le 6-shogaol), avantageusement les gingérols ;

- l’ingrédient actif d’origine végétale de la préparation à base de plante(s) « extrait deScutellaria baicalensis» est la baïcaline ;

- les ingrédients actifs d’origine végétale de la préparation à base de plante(s) « extrait deGarcinia mangostana» sont les mangostines (et en particulier les alpha-, béta- et gamma-mangostines et les 1- et 3-isomangostines et leur forme hydrate) ; et

- l’ingrédient actif d’origine végétale de la préparation à base de plante(s) « concentré deCucumis melo» (de préférence concentré du jus de pulpe de melon, préférablement cantaloup, avantageusement débarrassé des graines et de la peau) est la SOD.

Préparation à base de plante(s) . Une préparation à base de plante(s) est une préparation appropriée obtenue à partir d’une substance active d’origine végétale (cf. définition supra) par un traitement comme l’extraction, la distillation, l’expression, le fractionnement, la purification, la concentration ou la fermentation [Ph. Eur., 07/20210:1434]. Les procédés de traitement sont par exemple mécanique (pressage, filtration, évaporation…), physico-chimique (extraction par solvant, entraînement à la vapeur, ou distillation) et/ou biochimique, permettant d’extraire certains constituants phytochimiques d’intérêt. Les préparations à base de plante(s) incluent, par exemple, les extraits, les huiles essentielles, les jus pressés, les exsudats traités, les plantes coupées ou pulvérisées [Ph. Eur., 07/20210:1434]. Dans le cas des fruits, il peut s’agir de concentrés, tel que des concentrés de jus, d’infusions concentrées ou d’alcoolats. Ces concentrés sont obtenus à partir d’une substance active d’origine végétale (fruit) par un procédé d’extraction mécanique d’évaporation d’eau.

Extrait à base de plante(s). Les extraits à base de plante(s) sont des préparations liquides, semi-solides ou solides, obtenues à partir des substances d’origine végétale, en utilisant un solvant approprié [Ph. Eur ., 07/2015:0765].

MMP1. L’acronyme « MMP1 » désigne l’enzyme pro-inflammatoire « Matrix metalloproteinase-1 », en langue anglaise (métalloprotéase matricielle 1, en langue française). La famille des MMP est composée de plus de 20 endopeptidases, dénommées soit par un nom descriptif soit par un numéro. Cette enzyme pro-inflammatoire entraine la dégradation de la matrice extracellulaire.

MMP3 . L’acronyme « MMP3 » désigne l’enzyme « Matrix metalloproteinase-3 », en langue anglaise (métalloprotéase matricielle 3, en langue française). Tel qu’indiqué précédemment, cette enzyme MMP3 est une enzyme pro-inflammatoire jouant un rôle dans les mécanismes inflammatoires, et plus particulièrement, dans le cadre de la voie inflammatoire dite « voie enzymatique », laquelle est schématisée en figure 3, à des fins de clarté.

Inhibiteur de MMP3. Par « inhibiteur de MMP3 », l’on entend une substance, un composé, une composition ou un constituant capable de diminuer ou de supprimer l’activité enzymatique de la MMP3. Selon la présente invention, afin de déterminer si un constituant particulier (en particulier le constituant b)) est un inhibiteur ou non de MMP3, l’on met en œuvre le protocole de testin vitroprésenté dans l’exemple 2, au point 2.3, à savoir l’on évalue par RT-qPCR l’expression de la MMP3 (cf. figure 14). Si l’on se réfère à la figure 14, il apparaît que, outre la composition de l’exemple 1, le concentré de jus de pulpe de melon (SOD B EXTRAMEL^®) est un inhibiteur de MMP3.

Salicine (ou salicyline ; N° CAS : 138-52-3) . La salicine (ou salicyline) est un anti-inflammatoire non sélectif (ayant une affinité environ 100 fois supérieure pour COX-1 que pour COX-2) produit dans l’écorce de saule blanc (genreSalix). Plus précisément, il s’agit d’un hétéroside naturel du D-glucose ayant une structure chimique très proche de l'aspirine et possédant les mêmes effets sur l'organisme. Une fois consommé, il forme un métabolite : l'acide salicylique.

Dose journalière . Quantité de composition administrée par tranche de 24 heures, à un individu humain ou animal, afin d’obtenir l’effet inflammatoire escompté. La composition selon l’invention permet avantageusement l’administration de la dose journalière en une ou deux prise(s) (maximum).

Lipoxygénase (LOX). La lipoxygénase est un type de protéine enzymatique qui catalyse l'oxydation des acides gras ou autres alcènes. Il en existe différentes sortes. La famille des lipoxygénases comporte principalement trois enzymes péroxydantes lipidiques que l’on retrouve dans le tissu humain, incluant les 5-LOX, 12-LOX et 12/15-LOX. Leurs noms correspondent à la position du carbone de l’acide arachidonique (AA) qui subit l’oxygénation.

5-lipoxygénase (5-LOX) . La 5-lipoxygénase (5-LOX) est une lipoxygénase impliquée dans la régulation de l’inflammation qui intervient dans la biosynthèse des leucotriènes LTA4 (cf. figure 1), LTB4 (cf. figure 1), LTC4, LTD4 et LTE4, médiateurs pro-inflammatoires.

Modulateur d’activité enzymatique de COX-1, COX-2 et/ou 5-LOX . Par « modulateur d’activité enzymatique de COX-1, COX-2 et/ou 5-LOX», l’on entend une substance, un composé, une composition ou un constituant induisant ou augmentant ou, à l’inverse, diminuant ou supprimant, l’activité enzymatique de de COX-1, COX-2 et/ou 5-LOX. Selon la présente invention, afin de déterminer si une composition ou un constituant est un « modulateur d’activité enzymatique de COX-1, COX-2 et/ou 5-LOX », l’on met en œuvre le protocole de testin vitroprésenté dans l’exemple 2, au point 2.3, à savoir évaluation par RT-qPCR de l’expression de la COX-1 (cf. figure 8), de la COX-2 (cf. figure 9) et/ou de la 5-LOX (cf. figure 10).

12/15-lipoxygénase (12/15-LOX) . La 12/15-lipoxygénase (12/15-LOX) diffère de la 5-LOX et de la 12-LOX par la spécificité de la position de l’oxygénation sur l’AA, par ses propriétés enzymatiques et par les tissus dans lesquels elle est exprimée. Tel qu’indiqué précédemment, cette 12/15-LOX joue un rôle clé, dans la mesure où elle induit la production de lipoxine, un médiateur anti-inflammatoire (cf. figure 1).

Activateur de 12/15-LOX . Par « activateur 12/15-LOX », l’on entend une substance, un composé, une composition ou un constituant induisant ou augmentant l’activité enzymatique de la 12/15-LOX. Selon la présente invention, afin de déterminer si un constituant particulier (en particulier le constituant c)) est un activateur ou non de 12/15-LOX, l’on met en œuvre le protocole de testin vitroprésenté dans l’exemple 2, au point 2.3, à savoir évaluation par RT-qPCR de l’expression de la 12/15-LOX (cf. figure 7). Si l’on se réfère à la figure 7, il apparaît que, outre la composition de l’exemple 1, l’extrait de scutellaire est un activateur de 12/15-LOX.

Dispositif(s) médical(aux) : Tout instrument, appareil, équipement, matière ou autre article, utilisé seul ou en association, y compris le logiciel nécessaire pour le bon fonctionnement de celui-ci, destiné par le fabricant à être utilisé chez l’homme à des fins :

- de diagnostic, de prévention, de contrôle, de traitement ou d’atténuation d’une maladie,

- de diagnostic, de contrôle, de traitement, d’atténuation ou de composition d’une blessure ou d’un handicap,

- d’étude ou de remplacement ou modification de l’anatomie ou d’un processus physiologique,

- de maîtrise de la conception,

et dont l’action principale voulue dans ou sur le corps humain n’est pas obtenue par des moyens pharmacologiques ou immunologiques ni par métabolisme, mais dont la fonction peut être assistée par de tels moyens.

Complément alimentaire. Composition à usage humain ou animal (de préférence à usage humain) dont le but est de compléter le régime normal et qui constitue une source concentrée de nutriments ou d'autres substances ayant un effet nutritionnel ou physiologique, seuls ou combinés, commercialisés sous forme de doses, à savoir les formes de présentation telles que les gélules, les pastilles, les comprimés, les pilules et autres formes similaires, ainsi que les sachets de poudre, les ampoules de liquide, les flacons munis d'un compte-gouttes et les autres formes analogues de préparations liquides ou en poudre destinées à être prises en unités mesurées de faible quantité. La composition d’un « complément alimentaire » selon l’invention est à visée nutritionnelle.

Aliments diététiques destinés à des fins médicales spéciales (ADDFMS). Conformément à la législation française, et plus particulièrement à l’Article L5137-1 du Code de la santé publique,« On entend par aliments diététiques destinés à des fins médicales spéciales les aliments destinés à une alimentation particulière qui sont spécialement traités ou formulés pour répondre aux besoins nutritionnels des patients. Ils sont destinés à constituer l'alimentation exclusive ou partielle des patients dont les capacités d'absorption, de digestion, d'assimilation, de métabolisation ou d'excrétion des aliments ordinaires ou de certains de leurs ingrédients ou métabolites sont diminuées, limitées ou perturbées, ou dont l'état de santé appelle d'autres besoins nutritionnels particuliers qui ne peuvent être satisfaits par une modification du régime alimentaire normal ou par un régime constitué d'aliments destinés à une alimentation particulière ou par une combinaison des deux ».

Certains aspects de l’invention seront mieux appréhendés à la lecture de la description détaillée présentée ci-après, faite en référence aux figures 1 à 18, dans lesquelles :

[Fig. 1-4] sont des schémas représentant les principales voies de l’inflammation connues dans l’état de la technique, à savoir la voie de l’acide arachidonique (figure 1), la voie des cytokines (figure 2), la voie des enzymes (figure 3) et la voie du stress oxydatif (figure 4),

[Fig. 5-10] sont des diagrammes en bâtons présentant les résultats expérimentaux discutés au point 2.4.2 de l’exemple 2, concernant l’expression d’enzymes impliquées dans la synthèse de médiateurs lipidiques pro- et anti-inflammatoires sous l’effet de de la composition de l’exemple 1 ou de chacun de ses constituants pris isolément et à dose équivalente,

[Fig. 11-13] sont également des diagrammes en bâtons présentant les résultats expérimentaux discutés au point 2.4.3 de l’exemple 2, concernant l’expression des cytokines pro-inflammatoires IL-1 beta, IL-12 et IL-6 sous l’effet de de la composition de l’exemple 1 ou de chacun de ses constituants pris isolément et à dose équivalente,

[Fig. 14-15] sont également des diagrammes en bâtons présentant les résultats expérimentaux discutés au point 2.4.4 de l’exemple 2, concernant l’expression des métalloprotéases pro-inflammatoires (MMP3 et MMP1) sous l’effet de de la composition de l’exemple 1 ou de chacun de ses constituants pris isolément et à dose équivalente,

est également un diagramme en bâtons présentant les résultats expérimentaux discutés au point 2.4.5.1 de l’exemple 2, concernant l’expression de l’enzyme anti-oxydante hemoxygénase-1 (HEMEox) sous l’effet de de la composition de l’exemple 1 ou de chacun de ses constituants pris isolément et à dose équivalente, et

[Fig. 17-18] sont également des diagrammes en bâtons présentant les résultats expérimentaux discutés au point 2.4.5.2 de l’exemple 2, concernant la production d’espèces réactives de l’oxygène (ROS) sous l’effet de de la composition de l’exemple 1 ou de chacun de ses constituants pris isolément et à dose équivalente et en réponse à des agents activateurs, à savoir le 12-O-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate (PTA ; cf. figure 17) ou encore le Zymosan (ZNO ; cf. figure 18).

Description détaillée

Exemples

Exemple 1 : Composition selon l’invention et son procédé de préparation

L’on prépare une composition selon un mode de réalisation particulièrement préféré de l’invention, sous forme de comprimé pelliculé, dont la formule est présentée dans le [Table 3] infra. Les quantités des différentes préparations à base de plante sont indiquées pour une dose journalière.

Préparation à base de plante	Information(s) concernant l’obtention de la préparation à base de plante	Quantité (dose journalière)	Proportions dans le mélange	Ingrédient(s) actif(s) (eu égard aux effets anti-inflammatoires escomptés)	Titre en ingrédient(s) actif(s)
EXTRAIT DE BOSWELLIA SERRATA ( *Boswellia serrata,* gomme-résine)	Extrait sec de gomme résine de Boswellia serrata,solvants d’extraction : éthanol, éthyle acétate.Ratio plante/extrait environ 25 :1	25 mg	6,1 %	Acides boswelliques dont AKBA (acide acétyl-11-kétocéto-béta- boswellique)	80% en acides boswelliques (dont 30% en AKBA)
EXTRAIT DE GINGEMBRE ( *Zingiber officinale,* rhizome)	Extrait sec hydro-alcoolique de rhizome de gingembre. Ratio plante/extrait environ 5-7 :1, 97,9% d’extrait sur support maltodextrine (maïs) 2% –acacia gomme 0,1%	125 mg	30,6%	Gingérols	5% en gingérols
EXTRAIT DE SCUTELLAIRE ( *Scutellaria baicalensis,* racine)	Extrait sec hydro-alcoolique de racine de scutellaire. Ratio plante/extrait environ 50:1, support jusqu’à 10% de maltodextrine	106 mg	26%	Baïcaline	80% en baïcaline,
EXTRAIT DE MANGOUSTAN ( *Garcinia mangostana* , fruit)	Extrait sec hydro-alcoolique de fruit de mangoustan. Ratio plante/extrait environ 12:1	150 mg	36,7%	Mangostines	11% en mangostines
CONCENTRE DE JUS DE MELON SECHE NATURELLEMENT RICHE EN SOD ( *Cucumis melo* , fruit) (SOD B EXTRAMEL^®)	Concentré de jus de melon, 15 à 25% d’extrait sur 75-85% huile végétale hydrogénée	2,5 mg	0,6%	SOD	14 000 UI/g de concentré

Le procédé de préparation de la susdite composition est le suivant :

- dans un mélangeur de type industriel, incorporer l’ensemble des matières premières en prenant soin de les tamiser au préalable sur une grille de dimension appropriée,

- mélanger à une vitesse et selon une durée adaptée afin de garantir l’homogénéité du mélange selon un procédé de compression directe,

- comprimer le mélange homogène sur une presse de type industrielle munie de poinçons, par exemple de poinçons oblongs 15 x 9,5 mm, permettant d’obtenir des comprimés nus possédant une friabilité inférieure à 1% et dont l’aspect ne présente pas de défauts (par exemple un défaut de collage, clivage, grippage, ...), et dont la qualité est satisfaisante pour que les comprimés nus puissent être pelliculés, et afin d’obtenir une masse ciblée, par exemple 820 mg,

- pelliculer les comprimés nus dans une turbine de pelliculage industrielle, par exemple à 5% de dépôt sec,

- conditionner les comprimés par exemple sous blisters, puis dans le conditionnement secondaire adapté.

Exemple 2 : Tests in vitro - Mise en évidence d’une synergie d’action en matière d’effets anti-inflammatoires de la composition de l’exemple 1

2.1 Introduction

Dans un souci de neutralité et d’objectivité, les testsin vitroont été effectués par un laboratoire tiers, spécialisé dans l’inflammation.

2.2 But de l’étude

L’objectif est de comparer le potentiel anti-inflammatoire de la composition de l’exemple 1 (combinant les cinq préparations à base de plante susvisées ; mode de réalisation particulièrement préféré de l’invention) sur les principales voies de l’inflammation, avec le potentiel anti-inflammatoire de chacune de ces cinq préparations à base de plante, prise isolément et à dose équivalente.

2.3. Protocole expérimental

2.3.1 Introduction

Le potentiel anti-inflammatoire des cinq préparations à base de plante (composition de l’exemple 1), prises seules ou en combinaison a été évalué sur des macrophages humains activés par l'lFN-γ et le LPS. Ce protocole expérimental est d’autant plus pertinent que, comme cela est connu dans l’état de la technique, les macrophages jouent un rôle crucial dans la réponse inflammatoire.

Plus précisément, l’activité anti-inflammatoire de ces cinq préparations à base de plante, prises isolément ou en combinaison, a été évaluée en déterminant l'expression de marqueurs spécifiques/représentatifs de l'inflammation et de sa résolution, et ce pour chacune des voies principales de l’inflammation. Eu égard notamment au caractère représentatif des marqueurs testés, les résultats de cette étudein vitrosont extrapolablesin vivo.

L’équilibre redox a également été étudié.

Afin de mettre en exergue de potentiels effets synergiques, les effets anti-inflammatoires des préparations à base de plante seules ont été comparés aux effets anti-inflammatoires induits par la combinaison des cinq préparations à base de plante de l’exemple 1.

Les cinq préparations à base de plante ont été testées dans les mêmes proportions (doses) que celles définies dans le [Table 3] supra, seules ou en combinaison (composition de l’exemple 1). La composition de l’exemple 1 a été testée à deux doses différentes, à savoir 15 µg et 30 µg.

Les testsin vitrosont des outils performants pour réaliser des criblages d’activité de diverses substances. Le terme «in vitro »est utilisé pour caractériser toute mesure, exploration ou étude biologique effectuée dans un milieu "artificiel" (milieu de culture, éprouvette, ...) en dehors de l'organisme.

2.3.2 Etape 1 : Choix du type cellulaire pour le test et préparation des cellules

Parmi les cellules impliquées dans une réaction inflammatoire, les monocytes circulants et les macrophages tissulaires ont une position centrale. Ces cellules immunitaires innées interviennent en première ligne au cours de la défense de l'hôte et contribuent, dans une première phase, à déclencher l'inflammation, et dans une deuxième phase, à la résoudre.

Ces cellules mononuclées du sang périphérique ont été obtenues à partir de donneurs de sang sain.

2.3.3 Etape 2 : Evaluation de la cytotoxicité (ou viabilité cellulaire) des préparations à base de plante à tester

La mesure et le contrôle de la viabilité cellulaire est une technique essentielle dans tout laboratoire axé sur la recherche cellulaire. Cette compétence permet l'optimisation des conditions de culture cellulaire. A l’issue de l’essai de cytotoxicité, une dose maximale non toxique (ou concentration maximale non toxique) pourra être déterminée. C’est-à-dire une dose à laquelle les différentes préparations à tester pourront être utilisés sans crainte d’induire une lyse cellulaire et donc des résultats faussés avec des faux-positifs ou faux-négatifs. Il s’agit ici de l’étape préliminaire à tout test cellulaire, afin d'optimiser les conditions de culture cellulaire.

Les préparations à base de plante à tester (il s’agit en l’occurrence ici d’extraits, d’un concentré et de leur mélange) sont mises en culture avec les cellules cibles (en l’occurrence ici avec des macrophages issus de monocytes humains) à différentes concentrations (gamme de concentrations définie au préalable en fonction des données de la bibliographe sur les différentes préparations à tester).

La cytotoxicité des préparations est évaluée. Il existe de nombreuses méthodes pour mesurer la cytotoxicité comme le dosage du relargage par les cellules de la Lactate DésHydrogénase (LDH), marqueur majeur de lyse cellulaire ; la technique MTT (sel de tétrazolium), méthode rapide de numération des cellules vivantes ; etc [Riss et al. 2004[31]; Riss et al. 2016[32]].

La viabilité cellulaire, notamment des macrophages provenant de monocytes humains mis en présence des préparations à tester, permet de déterminer la dose maximale non toxique de chaque préparation afin d’optimiser les conditions de culture cellulaire nécessaires à la réalisation du testin vitrod’évaluation des potentiels effets anti-inflammatoires et/ou antioxydants des substances à tester.

2.3.4 Etape 3 : Evaluer les potentiels effets anti-inflammatoires et/ou antioxydants des préparations à base de plantes testées

Le potentiel antioxydant et anti-inflammatoire des préparations testées a été évalué sur des macrophages humains mis dans un état d’activation présentant un profil pro-inflammatoire et pro-oxydant.

L’activation classique des macrophages est déclenchée par des cytokines de type 1 (Th1), en particulier l’interféron -gamma (IFN-gamma). Elle est associée à la production de molécules effectrices (espèces réactives de l’oxygène et de l’azote) et de cytokines pro-inflammatoires (IL-12, IL-1β, TNFα, IL-6). L’ensemble de ces médiateurs pro-inflammatoires sont impliqués dans l'inflammation, la destruction de la matrice extracellulaire, la cytotoxicité, l'élimination microbienne, la régulation de la prolifération cellulaire et l'apoptose.

L’activation peut également être réalisée par stimulation par des cytokines de type 2 (Th2), en particulier LipoPolySaccharides (LPS).

Les macrophages dérivés des monocytes humains (h-MDMs) sont traités avec l’IFN-gamma (10 UI/mL) et le LPS (100 ng/mL) pendant 24h.

Après incubation, les h-MDMs doivent être traités, notamment pendant 6h, avec les différentes préparations à tester.

Les ARNm totaux ont été extraits avec le kit EZ-10 (BioBasic®) et la synthèse des ADNc a été faite en utilisant le kit Verso cDNA kit (Thermo Scientific), en respectant les protocoles des kits. La PCR semi-quantitative en temps réel a été réalisée sur le système LightCycler 480 (Roche Diagnostics). En utilisant le kit LightCycler 480 Green Master I (Roche Diagnostics) 10μL de la solution de réaction sont incubés : 8μL de mix (contenant les amorces sens et anti-sens et le LightCycler 480 SYBR Green I Master) et 2μL d’ADNc/échantillons dilué au 10ème. L’amplification a été réalisée pendant 60 cycles (1s à 95°C, 5s à 60°C et 20s à 72°C). Les amorces sont utilisées à une concentration finale de 10mM. Le gène de la GAPDH est utilisé comme gène de référence afin de déterminer l’expression relative de chaque gène des échantillons. Une courbe standard a été réalisée par dilutions successives du pool de tous les échantillons d’ADNc (1/5, 1/10 ; 1/20 et 1/50) et a été utilisée dans chaque expérience pour chacun des gènes.

Pour valider avec certitude l’activité anti-inflammatoire et/ou antioxydante des préparations testées, l’expression de marqueurs d’intérêts impliqués dans l’inflammation et sa résolution, ainsi que dans l’équilibre redox doit être étudiée (notamment les marqueurs spécifiques des différentes voies de l’inflammation, cf. infra). Les marqueurs spécifiques étudiés aux fins de la présente étude sont listés ci-après, pour chacune des voies principales de l’inflammation :

- concernant la voie de l’acide arachidonique : évaluation par RT-qPCR de l’expression des gènes codants pour les enzymes suivantes : LTA4H (cf. figure 5), PGE synthase (cf. figure 6), 12/15-LOX (cf. figure 7), COX-1(cf. figure 8), COX-2 (cf. figure 9) et 5-LOX (cf. figure 10) ;

- concernant la voie des cytokines : évaluation par RT-qPCR des cytokines IL-1β (« IL-1b », cf. figure 11), IL-12 (cf. figure 12) et IL-6 (cf. figure 13) ;

- concernant la voie des enzymes : évaluation par RT-qPCR de l’expression des métalloprotéinases MMP-3 et MMP-1 (cf. respectivement figures 14 et 15) ;

- concernant la voie du stress oxydatif :

a) évaluation par RT-qPCR de l’expression de l’hemoxygénase-1 (HEMEox), et

b) traitement des macrophages dérivés des monocytes humains (h-MDMs) avec les différentes préparations à base de plante, prise isolément ou en combinaison pendant 24h. La production de ROS a été mesuré par chimioluminescence en présence de 5-amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione (Luminol, Sigma) en utilisant un luminomètre (ENVison, Perkin Elmer) paramétré pour maintenir les cellules à 37°C. La production de chimioluminescence a été enregistrée pendant 1h30 après avoir stimulé ou non les cellules avec 100μM de 12-O-tetradecanoylphorbol- 13-acetate (TPA) ou 100μM de zymosan. L'analyse statistique a été réalisée en utilisant l'aire sous la courbe.

2.3.5 Analyses statistiques

Les résultats présentés sont exprimés par la moyenne d’au moins 3 données ± SEM. Pour chaque expérience, les données ont été soumises à une analyse « one-way » ANOVA suivie de la méthode de comparaison multiple des moyennes de Dunnett. P <0,05 est considéré comme le niveau de significativité statistique.

2.4 Résultats

2.4.1 Cytotoxicité et doses choisies

Le test réalisé a permis de montrer que le seuil de cytotoxicité du mélange était atteint pour une concentration de 31.25 µg/ml. Pour les extraits pris indépendamment les concentrations seuils de cytotoxicité se sont révélées supérieures. Ainsi, la concentration maximale de 30 µg/ml pour le mélange a été choisie pour réaliser le test (les concentrations de chaque extrait ont été calculées à partir de cette concentration maximale de 30 µg/ml ramenée à leur proportion dans le mélange afin de pouvoir évaluer l’effet synergique).

Une demie-dose, i.e. 15 µg, a également été testée afin d’expérimenter un potentiel effet dose-dépendant du mélange.

Les résultats obtenus sur les différentes voies métaboliques - et discutés ci-après - ne montrent pas, dans l’ensemble, de différence significative entre le mélange à 30 µg/ml et le mélange à 15 µg/ml.

2.4.2 Concernant les marqueurs représentatifs de la voie de l’acide arachidonique

Les enzymes impliquées dans la synthèse des médiateurs lipidiques pro-inflammatoires, telles que la LTA4hydrolase et la PGE synthase ont été analysées (cf. respectivement figures 5 et 6). Comme montré sur les diagrammes objet des figures 5 et 6, la composition de l’exemple 1 (à 30 μg et 15 μg) diminue l’expression de la LTA4hydrolase et de la PGE synthase, alors que la majorité des préparations à base de plante, prises isolément et à doses équivalentes, ne modifient pas, voire induisent, l’expression de ces enzymes. Ainsi, les extraits de scutellaire et de mangoustan, ainsi que le concentré de jus de melon, induisent l’expression de la LTA4h et la PGE synthase. Les extraits de gingembre et de boswellia apparaissent, quant à eux, diminuer l’expression de la LTA4h, dans une moindre mesure que la diminution observée avec la composition de l’exemple 1. L’extrait de boswellia apparaît en outre diminuer l’expression de la PGE synthase, là encore dans une moindre mesure que la diminution observée avec la composition de l’exemple 1. Outre l’effet synergique ainsi caractérisé concernant la diminution de l’expression de la LTA4hydrolase et de la PGE synthase lors de la mise en œuvre de la composition de l’exemple 1, les résultats présentés en figures 5 et 6 tendent à indiquer que :

les extraits de gingembre et de boswellia sont les préparations à base de plante les plus efficaces en matière d’inhibition de l’enzyme LTA4hydrolase, et
l’extrait de boswellia est la préparation à base de plante la plus efficace en matière d’inhibition de l’enzyme PGE synthase.

La 12/15-Lipoxygénase (12/15-LOX), enzyme permettant la synthèse de médiateurs anti-inflammatoires, voit son expression augmentée avec la composition de l’exemple 1 (cf. figure 7). A l’inverse des autres préparations à base de plante qui diminuent l’expression de la 12/15-LOX, l’extrait scutellaire augmente significativement son expression (cf. également figure 7). Ceci tend à indiquer que l’extrait de scutellaire est la préparation à base de plante la plus efficace afin de permettre la synthèse de médiateurs anti-inflammatoires via la 12/15-LOX.

Concernant l’expression génique des enzymes pro- et anti-inflammatoires, telles que les cyclo-oxygénases-1 et -2 (COX-1, COX-2) et la 5-Lipoxygénase (5-LOX), la composition de l’exemple 1 ne modifie pas leur expression, comme montré en figures 8, 9 et 10, alors que certains de ses constituants, pris isolément et à doses équivalentes, modifient l’expression de ces enzymes. En effet :

l’extrait de scutellaire augmente l’expression de COX-1, COX-2 et 5-LOX (cf. figures 8, 9 et 10),
l’extrait de mangoustan induit l’expression de COX-2 et 5-LOX (cf. figures 9 et 10), et
l’extrait de boswellia augmente l’expression de COX-2 (cf. figure 9).

Ces résultats permettent de mettre en évidence le fait que la composition de l’exemple 1 diminue l’expression des enzymes pro-inflammatoires, telles que la LTA4h et la PGE synthase, et, à l’inverse, augmente l’expression de la 12/15-LOX anti-inflammatoire. Ainsi la composition de l’exemple 1 réoriente le profil lipidique des macrophages inflammatoires vers la synthèse de médiateurs anti-inflammatoires. Aucune des préparations à base de plante de la composition de l’exemple 1, prises isolément et à doses équivalentes, ne permet d’obtenir le même profil. La synergie d’action en matière d’effets anti-inflammatoires entre les différents constituants de la composition de l’exemple 1 est donc démontrée en ce qui concerne la voie de l’acide arachidonique.

Ces résultats sont d’autant plus intéressants que, comme représenté sur les figures 8, 9 et 10, l’expression des COX et de la 5-LOX n’a pas été modifiée (et donc pas inhibée) par la composition de l’exemple 1. En particulier, ceci laisse présager,in vivo, l’absence d’effets secondaires liés à l’inhibition des COX et l’absence d’impact négatif sur la production, par la 12/15-LOX, du médiateur pro-résolutif de l’inflammation que constitue la lipoxine.

2.4.3 Concernant les marqueurs représentatifs de la voie des cytokines

Comme montré sur les figures 11-13, l’analyse des cytokines pro-inflammatoires (IL-1beta, IL-12 et IL-6) révèle une diminution significative de l’expression de l’ensemble de ces cytokines uniquement lorsque les macrophages sont mis en culture avec la composition de l’exemple 1. L’extrait de boswellia diminue significativement l’expression de la cytokine pro-inflammatoire IL-12, alors que l’extrait de gingembre diminue l’expression de l’IL-1beta.

L’analyse de l’expression des cytokines permet de mettre en exergue le fait que la composition de l’exemple 1 permet une inhibition significativement plus importante de la production de chacune des cytokines pro-inflammatoires testées (IL-1b, IL-12 et IL-6) par rapport aux cinq préparations à base de plante de la composition de l’exemple 1, prises isolément et à doses équivalentes. Par conséquent, une synergie d’action en matière d’effets anti-inflammatoires entre les différents constituants de la composition de l’exemple 1 est donc également démontrée en ce qui concerne la voie des cytokines.

2.4.4 Concernant les marqueurs représentatifs de la voie des enzymes

Comme montré sur les diagrammes objet des figures 14 et 15, la composition de l’exemple 1 permet d’obtenir une forte diminution de l’expression des MMP3 et MMP1 pro-inflammatoires.

A l’exception du concentré de jus de melon, aucune des préparations à base de plante de la composition de l’exemple 1, prises isolément et à dose équivalente, ne permet de diminuer aussi efficacement l’expression de la MMP3 (cf. figure 14). La forte diminution de l’expression de la MMP3 mise en évidence par les inventeurs à partir du susdit concentré de jus de melon suggère que, contrairement à ce qui était admis dans l’art antérieur (attribuant l’inhibition enzymatique des métalloprotéases, dans le cadre de la voie des enzymes, à des préparations à base de Boswellia), le susdit concentré de jus de melon est un inhibiteur de l’expression de la MMP3 (en sus de son efficacité dans la voie du stress oxydatif).

Par ailleurs, et même si le susdit concentré de jus de melon apparaît également diminuer l’expression de la MMP1 (cf. figure 15), cette inhibition est plus importante pour ce qui concerne la composition de l’exemple 1 (cf. également figure 15).

La composition de l’exemple 1 a un profil global d’inhibition des MMP1 et MMP3 supérieur au profil obtenu à partir de chacun des cinq constituants de ladite composition, pris isolément et à doses équivalentes. Par conséquent, une synergie d’action en matière d’effets anti-inflammatoires entre les différents constituants de la composition de l’exemple 1 est donc également démontrée en ce qui concerne la voie des enzymes.

2.4.5 Concernant les marqueurs représentatifs de la voie du stress oxydatif

2.4.5.1 Effets observés sur l’expression génique des enzymes antioxydantes

La composition de l’exemple 1 augmente fortement l’expression de l’enzyme anti-oxydante hemoxygénase-1 (HEMEox), alors que ses cinq constituants, pris isolément et à doses équivalentes, n’ont pas d’effets (cf. figure 16). Ceci permet de mettre en évidence une synergie d’action entre les constituants de la susdite composition en matière d’expression de l’enzyme anti-oxydante susvisée.

2.4.5.2 Effets observés sur la production des espèces réactives de l’oxygène (ROS pour « reactive oxygen species)

Une diminution importante de la production de ROS est observée lorsque les cellules (macrophages) sont traitées par la composition de l’exemple 1 (cf. figures 17 et 18). L’extrait de gingembre et le concentré de melon - pris isolément et à doses équivalentes - diminuent significativement la production de ROS (cf. figures 17 et 18). A l’inverse, les extraits de boswellia et de scutellaire augmentent significativement la production de ROS (cf. figures 17 et 18).

2.4.5.3 Conclusion concernant la voie du stress oxydatif

Comme montré sur les diagrammes présentés en figures 16-18, la composition de l’exemple 1 présente un profil antioxydant global unique et supérieur à celui de chacun des constituants de ladite composition pris séparément ; profil antioxydant global caractérisé par une diminution importante de la production de ROS et une forte augmentation de l’expression de l’enzyme anti-oxydante l’hemoxygénase-1 (HEMEox).

Par conséquent, une synergie d’action en matière d’effets anti-inflammatoires entre les différents constituants de la composition de l’exemple 1 est donc également démontrée en ce qui concerne la voie du stress oxydatif.

2.4.6 Conclusion

Une synergie d’action entre les différents constituants de la composition selon l’invention (composition de l’exemple 1) a donc été démontrée sur les principales voies de l’inflammation.

Bibliographie

[1]HERMANS C. « Bénéfices, risques et indication des anti-inflammatoires COX-2 sélectifs revisités : focus sur le Célécoxib ».Louvain Med, (2017). 136(5) :302-309.

[2]DOMIATI S., MEHANNA M., RAGAB H. et al. «Elucidation of the molecular mechanism underlying the anti-inflammatory activity of an effective and safe bipyrazole-based compound».Inflamm. Res. (2019). p 1–8.

[3]BRUNE K, HINZ B. «The discovery and development of anti-inflammatory

drugs».Arthritis Rheum, (2004). 50:2391–9. (cité au sein de [Domiati, 2019] en tant que référence 1)

[4]JONES R. «Nonsteroidal anti-inflammatory drug prescribing: past,

present, and future ».Am J Med, (2001).110:4S–7S. (cité au sein de [Domiati, 2019] en tant que référence 2)

[5]VANE JR, BOTTING RM. «Mechanism of action of nonsteroidal antiinflammatory

drugs».Am J Med., (1998). 104(Suppl 3A):2S–8S. (cité au sein de [Domiati, 2019] en tant que référence 3)

[6]AMBRANSON SB, WEISSMANN G. «The mechanisms of action of nonsteroidal

anti-inflammatory drugs».Arthritis Rheum., (1989). 32(1):1–9. (cité au sein de [Domiati, 2019] en tant que référence 4)

[7]PRAVEEN Rao PN, KNAUS EE. «Evolution of nonsteroidal anti-inflammatory

drugs (NSAIDs): cyclooxygenase (COX) inhibition and beyond».J Pharm Pharm Sci, (2008). 11(2):81s–110s. (cité au sein de [Domiati, 2019] en tant que référence 5)

[8]DAVIES NM, GOOD RL, ROUPE KA, YANEZ JA. «Cyclooxygenase-3:

axiom, dogma, anomaly, enigma or splice error? Not as easy as 1, 2, 3».J Pharm Pharm Sci., (2004). 7:217–26. (cité au sein de [Domiati, 2019] en tant que référence 6)

[9]MIZUSHIMA T. «Molecular mechanism for various pharmacological activities of NSAIDs. Pharmaceuticals», (2010). 3:1614–36. (cité au sein de [Domiati, 2019] en tant que référence 7)

[10]HILARIO M., TERRERI MT, L. CA. «Nonsteroidal anti-inflammatory drugs: cyclooxygenase 2 inhibitors».J Pediatr, (2006) 82(5):s206-212. (cité au sein de [Domiati, 2019] en tant que référence 8)

[11]LAVIGNE P, SHI Q, JOLICCOEUR FC, PELLETIER JP, MARTEL-PELLETIER

J, FERNANDES JC. «Modulation of IL-1 beta, IL-6, TNF-alpha and PGE(2) by pharmacological agents in explants of membranes from failed total hip replacement».Osteoarthr Cartil., (2002). 10(11):898–904. (cité au sein de [Domiati, 2019] en tant que référence 9)

[12]BRAZIER M, FARDELLONE P. Chapitre 17 - Traitement de la polyarthrite évolutive. In: CALOP J, LIMAT S, FERNANDEZ C, AULAGNER G. Pharmacie Clinique et Thérapeutique. Elsevier Masson, Paris, 2012;281-301.

[13]BURNIER M. «The safety of rofecoxib».Expert Opin Drug Saf., (2005). 4(3):491-9.

[14]RITTER JM, HARDING I, WARREN JB. «Precaution, cyclooxygenase inhibition, and cardiovascular risk».Trends Pharmacol Sci., (2009). 30(10):503-8.

[15]CHEN, Y., BEDSON, J., HAYWARD, R. A., & JORDAN, K. P. «Trends in prescribing of non-steroidal anti-inflammatory drugs in patients with cardiovascular disease: influence of national guidelines in UK primary care».Family Practice, (2018). 35(4), 426–432.

[16] [OMS, 2019]

(https://www.who.int/topics/chronic_diseases/fr/)

[17]Angi, R., Solymosi, T., Erdősi, N., Jordán, T., Kárpáti, B., Basa-Dénes, O., … Glavinas, H. (2019). Preparation, Pre-clinical and Clinical Evaluation of a Novel Rapidly Absorbed Celecoxib Formulation. AAPS PharmSciTech, 20(2).

[18][European Union herbal monograph on Salix, various species includingS. purpureaL.,S. daphnoidesVill.,S. fragilisL., cortex, EMA/HMPC/80630/2016]

[19]Enquête de pharmacovigilance, confiée en juin 2018 aux centres régionaux de pharmacovigilance de Tours et Marseille par l’Agence nationale de sécurité du médicament et des produits de santé (ANSM) : https://ansm.sante.fr/S-informer/Points-d-information-Points-d-information/Anti-inflammatoires-non-steroidiens-AINS-et-complications-infectieuses-graves-Point-d-Information

[20]Galanaud, P, Emilie D. Physiologie et physiopathologie de l’inflammation. J Gynecol Obstet Biol Reprod, 2001 ;30 (Suppl 1) : 8-11

[21]Bougault V. Les bases de l’inflammation. Université de Lille 2. Consulté le 6 mai 2019. Disponible : http://moodle.univ-lille2.fr/mod/resource/view.php?id=49472

[22]Soualeh N. Thèse de doctorat sur l’Evaluation des effets neuro-inflammatoires de l’exposition périnatale aux anguilles (Anguilla anguilla L.) contaminées naturellement aux polluants organiques persistants sur le comportement et les fonctions cognitives dans un modèle murin. Soutenue publiquement le 14/12/2017. Université de Lorraine. Disponible : http://docnum.univ-lorraine.fr/public/DDOC_T_2017_0288_SOUALEH.pdf

[23]Millet A. Rôle pro-inflammatoire et immunomodulateur de la proteinase 3 membranaire exprimée au cours de l’apoptose : implications dans la granulomatose avec polyangéite. Médecine humaine et pathologie. Université René Descartes - Paris V, 2014. Français. ffNNT : 2014PA05S001ff.fftel-00940917f. Disponible : https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00940917/document

[24]Aksamija A. Etude chimique des matériaux résineux : oliban, dammar et mastic : application à des prélèvements artistiques et archéologiques. Thèse. Université d’Avignon, 2012. Français. NNT : 2012AVIG0245

https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00872166/document

[25]Rombi M, Robert D. Le dictionnaire des plantes médicinale. 130 plantes médicinales, monographies, composition, mode d’action. Editions Alpen, 2015, p 328-335.

[26]Ovalle-Magallanes, B., Eugenio-Pérez, D., & Pedraza-Chaverri, J. (2017). Medicinal properties of mangosteen (Garcinia mangostana L.): A comprehensive update. Food and Chemical Toxicology, 109, 102–122.

[27]Pedraza-Chaverri, J., Cárdenas-Rodríguez, N., Orozco-Ibarra, M., & Pérez-Rojas, J. M. (2008). Medicinal properties of mangosteen (Garcinia mangostana). Food and Chemical Toxicology, 46(10), 3227–3239.

[28]EMA/HMPC/577856/2010. Assessment report on Zingiber officinale Roscoe, rhizoma, 2012. https://www.ema.europa.eu/en/documents/herbal-report/final-assessment-report-zingiber-officinale-roscoe-rhizoma_en.pdf

[29]Jin, B.-R., Chung, K.-S., Kim, H.-J., & An, H.-J. (2019). Chinese Skullcap (Scutellaria baicalensis Georgi) inhibits inflammation and proliferation on benign prostatic hyperplasia in rats. Journal of Ethnopharmacology.

[30]Dong, S., Zhong, Y., Lu, W., Li, G., Jiang, H., & Mao, B. (2015). Baicalin Inhibits Lipopolysaccharide-Induced Inflammation Through Signaling NF-κB Pathway in HBE16 Airway Epithelial Cells. Inflammation, 38(4), 1493–1501.

[31]Riss TL, Moravec RA. Use of multiple assay endpoints to investigate the effects of incubation time, dose of toxin, and plating density in cell-based cytotoxicity assays. Assay Drug Dev Technol. 2004 Feb;2(1):51-62.

[32]Riss TL, Moravec RA Niles AL, Duellman S, Benink HA, Worzella TJ, Minor L. Cell Viability Assays. In : Assay Guidance Manual 2004-2013 May 1 [updated 2016 Jul 1]. Available : https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK144065/pdf/Bookshelf_NBK144065.pdf

Claims

Composition anti-inflammatoire, à usage humain ou animal, de préférence administrable par voie orale, ladite composition comprenant les constituants d’origine végétale suivants, en quantités efficaces :
a) au moins un inhibiteur de LTA4h, de PGE synthase et/ou de cytokine(s) pro-inflammatoire(s), préférablement des trois, de préférence ledit au moins un inhibiteur étant compris dans une préparation à base de plante(s) telle qu’un extrait à base de plante(s), et
b) au moins un inhibiteur de MMP3, en quantité efficace, de préférence ledit au moins un inhibiteur étant compris dans une préparation à base de plante(s) telle qu’un extrait à base de plante(s) ou un concentré à base de plante(s), préférablement ledit au moins un inhibiteur de MMP3 étant également au moins un réducteur de stress oxydatif, avantageusement au moins un inhibiteur de production d’espèces réactives de l’oxygène ;
lesdits constituants a) et b) étant différents, et
de préférence ladite composition étant dépourvue de salicine.
Composition selon la revendication 1, dans laquelle le constituant a) est sélectionné parmi : harpagoside, acides boswelliques, gingérols, shogaols, insaponifiables de soja, resvératrol et leurs mélanges, préférablement parmi : harpagoside, acides boswelliques, gingérols, shogaols et leurs mélanges, avantageusement parmi : acides boswelliques, gingérols et leurs mélanges; de manière préférée ledit constituant a) consistant en un mélange acides boswelliques/gingérols.
Composition selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle le constituant b) est sélectionné parmi : superoxyde dismutase, insaponifiables de soja, acide chicorique et leurs mélanges, préférablement parmi : superoxyde dismutase, acide chicorique et leurs mélanges, de manière préférée le constituant b) étant la SOD.
Composition selon l’une des revendications précédentes, ladite composition comprenant, pour une dose journalière :
i) entre 1 et 70 mg, de préférence entre 5 et 60 mg, avantageusement entre 7 et 50 mg, préférablement entre 10 et 40 mg, et de manière préférée entre 20 et 30 mg du constituant a), et/ou
ii) entre 1 et 140 UI, de préférence entre 10 et 70 UI, et de manière préférée entre 30 et 40 UI du constituant b) lorsque le constituant b) est la SOD,
de préférence ladite composition comprenant i) et ii).
Composition selon l’une des revendications précédentes, ladite composition comprenant en outre au moins un, et avantageusement deux, des constituants d’origine végétale suivants, en quantité(s) efficace(s) :
c) au moins un activateur de 12/15-LOX, de préférence compris dans une préparation à base de plante(s) telle qu’un extrait à base de plante(s), préférablement ledit au moins un activateur de 12/15-LOX étant également au moins un réducteur de stress oxydatif, avantageusement au moins un activateur de SOD, et
d) au moins un réducteur de stress oxydatif, préférablement au moins un activateur de SOD, de préférence compris dans une préparation à base de plante(s) ;
dans laquelle :
- lorsque le constituant d) est présent, celui-ci est différent du constituant b), et
- lorsque les constituants c) et d) sont présents, le constituant d) est différent du constituant c).
Composition selon la revendication précédente, dans laquelle :
- le constituant c) est la baïcaline, et/ou
- le constituant d) est sélectionné parmi : acide chicorique,resvératrol, verbascoside, baïcaline, gingérols, mangostines, SOD et leurs mélanges, de préférence parmi : baïcaline, gingérols, mangostines, SOD et leurs mélanges, avantageusement parmi : gingérols, mangostines, SOD et leurs mélanges ; de manière particulièrement préférée ledit constituant d) étant les mangostines.
Composition selon la revendication précédente, ladite composition comprenant, pour une dose journalière :
y) entre 1 et 400 mg, de préférence entre 12 et 300 mg, préférablement entre 35 et 240 mg, avantageusement entre 40 et 180 mg, et de manière préférée entre 60 et 120 mg du constituant c), et/ou
z) entre 1 et 60 mg, avantageusement entre 2 et 40 mg, et de manière préférée entre 10 et 20 mg du constituant d),
de préférence ladite composition comprenant y) et z).
Composition selon l’une des revendications 5 à 7, ladite composition comprenant, consistant essentiellement en, ou consistant en, les constituants a) - d).
Composition selon la revendication 8, dans laquelle les constituants a), c) et d) sont présents dans les pourcentages en masse suivants, par rapport à la masse totale desdits constituants a), c) et d) :
- entre 10 et 50%, de préférence entre 12 et 35 %, avantageusement entre 15 et 25%, du constituant a),
- entre 20 et 80%, de préférence entre 40 et 75 %, avantageusement entre 60 et 70%, du constituant c), et
- entre 1 et 50%, de préférence entre 5 et 35 %, préférablement entre 10 et 20%, et avantageusement entre 11 et 15%, du constituant d).
Composition selon la revendication 8 ou 9, dans laquelle :
- ledit constituant a) consiste en un mélange acides boswelliques/gingérols, préférablement dans un rapport en masse compris entre environ 5/1 et environ 1/2, avantageusement entre environ 4/1 et environ 1/1, de manière préférée entre environ 3,5/1 et environ 2/1,
- ledit constituant b) consiste en la SOD,
- ledit constituant c) consiste en la baïcaline, et
- ledit constituant d) consiste en les mangostines.
Composition selon la revendication précédente, dans laquelle ladite composition comprend :
- une première préparation à base deBoswellia, préférablement deBoswellia serrataet/ou deBoswellia sacra,avantageusement deBoswellia serrata, telle qu’un extrait, de préférence sec, ladite première préparation comprenant les acides boswelliques dudit constituant a),
- un deuxième préparation à base deZingiber officinale,telle qu’un extrait, de préférence sec, ladite deuxième préparation comprenant les gingérols dudit constituant a),
- une troisième préparation à base deCucumis melo, telle qu’un extrait ou un concentré, deCucumis melo, avantageusement un concentré deCucumis melo, ladite troisième préparation comprenant ledit constituant b),
- une quatrième préparation à base deScutellaria baicalensis, telle qu’un extrait, de préférence sec, ladite quatrième préparation comprenant ledit constituant c), et
- une cinquième préparation à base deGarcinia mangostana,telle qu’un extrait, de préférence sec, ladite cinquième préparation comprenant ledit constituant d).
Médicament, complément alimentaire, aliment diététique destiné à des fins médicales spéciales ou dispositif médical comprenant la composition selon l’une des revendications 1 à 11.
Composition selon l’une des revendications 1 à 11 pour son utilisation en tant que médicament.
Composition selon l’une des revendications 1 à 11 pour son utilisation dans la prévention, la régulation et/ou le traitement de l’inflammation, de préférence dans la régulation et/ou le traitement de l’inflammation, avantageusement dans le traitement de l’inflammation.