CN101347507A - 治疗伤科疾病的药物组合物及其制备方法、应用、药物制剂和质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种新的治疗伤科疾病的药物组合物、该药物组合物的制备方法、应用、含有所述药物组合物的药物制剂及其质量控制方法。本发明所提供的药物组合物具有止痛迅速而持久、消肿明显而快捷、促进骨痂生长、加速骨折愈合的功能；且具有比现有技术药物组合物更好的疗效和更高的安全性。
Description
技术领域
本发明涉及一种主治伤科疾病的药物组合物，并涉及该药物组合物的制备方法、应用、含有所述药物组合物的药物制剂及其质量控制方法。
背景技术
伤科疾病是一种影响工作和身体健康的常见病、多发病。随着社会交通、运输及建筑业的发展，骨伤疾病的发生也日趋增多。俗话说“伤筋动骨，一百零五”。就说明了筋骨损伤后，需要经过较长的时间才能恢复。目前西医治疗骨折，复位固定后主要靠的是时间；而我国的传统中医学通过千百年来的历代医家的不断实践和总结，在伤科学方面已积累了丰富的经验，形成了比较完整的理论体系，已有大量的临床资料证明，通过药物的内服外敷，可获得消肿止痛，缩短骨折愈合时间的功效。目前市场上治疗跌打损伤的中成药也不少，如三七伤药片、跌打丸等，但上述中成药的组方及侧重面不同，对骨折不同阶段的疗效差别也很大。
在公开号为CN1709463A的专利中公开了一种治疗伤科疾病的药物，其原料包括三七、炙海星、红花、炙鸡骨、土鳖虫、煅自然铜、炙乳香、炙没药、马钱子粉、朱砂、甜瓜子、冰片等十二味药，该发明采用现代仿生学原理、结合传统中医学理论，将具有极强再生能力的天然海洋药物海星和素有“以形补形”著称的鸡骨配以传统伤科要药，经科学加工而成为一种新型的治疗伤科疾病药物，其适用面广，疗效快捷而且稳定。经多家医疗机构3000多病例临床观察表明，使用该发明药物治疗新旧骨折和软骨组织扭挫伤等伤科疾病均取得令人满意的疗效。并且在大量的临床验证中尚未发现该产品有毒副作用。
CN1709463A公开的发明组方中的朱砂为矿物类药物，约占该发明优选处方总量的3.6％。朱砂主含硫化汞(HgS)，作为传统清心镇惊安神之要药，中医临床广为应用。近年来，随着分析技术与仪器精密度的不断进步，人们对含有有毒药材(如朱砂、雄黄等)的中成药的研究不断深入，并对其进行再评价。目前社会上对于含有重金属和矿物质的中药存在着认识上的争议，如有报道认为，朱砂为汞剂，可致慢性中毒，久服易造成机体蓄积。但是也有研究发现对一些含朱砂的中成药制剂在进行动物实验时，动物粪便中检测到的总汞，折合成硫化汞后，占给药量的98.5％，而在动物的胃肠道组织中则未检测到汞，说明硫化汞在胃肠道内未发生吸附，基本上全部被排出体外，因此认为朱砂中的主要成分硫化汞(《中国药典》规定朱砂中硫化汞不得少于96％)实际上是不被机体所吸收的无效、无毒成分，而其中具有毒性和生物活性的成分-可溶于酸的汞-只占非常小的比例。此外，也有人认为硫化汞不应该是无效、无毒成分，而是有效、有毒成分的前体药物。鉴于朱砂药理、毒理方面还存在着诸多争议，很多专家建议在临床应用时务必慎重，能不用则不用，或用替代品，非用不可时应严格掌握法度。
公开号为CN1951428A的中国专利申请公开了一种同类的用于治疗伤科疾病的药物，该药物去除了朱砂，并认为朱砂在原方中属佐药，少用或不用，不会严重影响君臣药的疗效；同时，使用朱砂所带来的危害可能要远远大于使用它所产生的疗效。
本发明人认为，朱砂在该类治疗伤科疾病的药物中并不是无关紧要、可有可无的。《素问·至真要大论》就有“君一臣二，制之小也；君一臣三佐五，制之中也；君一臣三佐九，制之大也”的配伍理论。可见，方剂组方中的佐药并不是可任意去留的。对于一首配伍严谨、效用明显的方剂特别是成方制剂来讲，佐药的选用是关键之一。假如君臣药选择得体，而佐药使用不当或忽略了佐药的使用，临床疗效恐难周全。从CN1709463A公开的发明的方解中可知，组方中的朱砂是起佐药作用的，主要是借助它的良好的重镇安神作用协助君药治疗伤科疾病中的次要症状，即对患者因伤痛而产生的焦躁不安、失眠多梦的症状起到一定的治疗作用，可以通过促进睡眠减轻患者的痛苦，有助于骨伤的愈合。并且该组合物中朱砂用量占有一定的比例，故不应该用简单地忽略不计这种轻率的方法来改变原组方的严谨性。事实上，根据专利文献CN1951428A的记载，去除朱砂后的药物组合物的疗效也有一定程度的减弱。
因而在本领域需要一种新的治疗伤科疾病的中药组合物，其不但保留了现有药物组方的严谨性与功能，具有明确的、符合中药理论的配方，还具有更高的用药安全性以及更好的疗效。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种新的治疗伤科疾病的药物组合物；
本发明的目的之二是提供该药物组合物的制备方法；
本发明的目的之三是提供该药物组合物在制备药物制剂中的应用；
本发明的目的之四是提供该药物的质量控制方法。
基于公开号为CN1709463A的发明专利，为了在保持原组方的严谨性与功能的条件下，进一步保证该种药物的用药安全性，本发明人对该方中所含朱砂的代用品进行了深入研究，创造性地用珍珠替代了朱砂；并通过实验证明，本发明药物不但具有符合中药理论的配方，还具有更好的疗效和更高的用药安全性。
本发明提供的治疗伤科疾病的药物组合物，由包括下列重量份的药材制成：
三七 26-60份 海星 13-30份 红花 4-9份
鸡骨 13-30份 土鳖虫 13-30份 自然铜 6-15份
乳香 1-3份 没药 1-3份 马钱子粉 6-15份
珍珠 3-7.5份 甜瓜子 1-3份 冰片 0.5-1.5份。
根据本发明药物组合物的一个优选方案，所述药材的用量为：
三七 32-48份 海星 16-24份 红花 4.8-7.2份
鸡骨 16-24份 土鳖虫 16-24份 自然铜 8-12份
乳香 1.6-2.4份 没药 1.6-2.4份 马钱子粉 8-12份
珍珠 4-6份 甜瓜子 1.6-2.4份 冰片 0.8-1.2份。
根据本发明药物组合物的另一优选方案，所述药材的用量为：
三七 40份 海星 20份 红花 6份
鸡骨 20份 土鳖虫 20份 自然铜 10份
乳香 2份 没药 2份 马钱子粉 10份
珍珠 5份 甜瓜子 2份 冰片 1份。
其中三七、海星为君药。三七为五加科植物三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.chen)的干燥根及根茎，甘、微苦、温，功擅散瘀和血，瘀散则血自归经，血和则肿消痛止，还具有止血不留瘀的特长。海星为海盘车科动物罗氏海盘(Asterias rollestoni bell)、陶氏太阳海星(SolasterDawsoni Verrill)、海燕(Asterinia Pectinifera(Müller et Troschel))、轮海星(Crossaster papposus(Linne))或砂海星(Luidia quinariavon Martems)的干燥全体，味咸平，具有奇迹般的再生能力。人们曾推测，海星可能含有某种促进创伤修复再补的物质，后来通过实验证明：海星的棘皮中含有丰富的蛋白质、钙质、牛磺酸及10种必需微量元素(其中锌的含量较高)及维生素B1、B2等多种维生素，其棘皮中的蛋白质经盐酸水解后测定出现了19种氨基酸，其中8种氨基酸为人体必需氨基酸，另有两种为半必需氨基酸。这些成分都有利于骨折和损伤的愈合。
红花、鸡骨、土鳖虫、自然铜为臣药。红花为菊科植物红花(Carthamustinctorius L)的干燥花，味辛、温，主入心、肝二经血分，即可活血通经，又可消肿止痛。鸡骨雉科动物家鸡(Gallus gallus domesticus Brisson)的骨骼，亦含丰富的胶原蛋白和钙质可“以形补形”。土鳖虫为鳖蠊科昆虫地鳖(Eupolyphaga sinensis Walker)或冀地鳖(Stelephaga plancyi(Boleny))的雌虫干燥体，味成寒，因其成寒滋阴柔肝，益肾强骨，兼有活血祛瘀，通经止痛，消肿疗伤之能，故具续筋接骨的功效，诚如《本草经疏》曰：“庶虫，治跌打损伤，续筋骨有奇效”。自然铜，为硫化物类矿物黄铁矿族黄铁矿，主要含二硫化铁(FeS2)，味辛、平，归肝经，可散瘀止痛，长于接筋续骨。上述四味药合用，可助君药活血散瘀，消肿止痛，加强其续筋接骨之功效。
乳香、没药、马钱子粉、珍珠、甜瓜子、冰片为佐药。乳香为橄榄科乳香树属植物卡氏乳香树(Boswellia carterii Birdw.)、鲍达乳香树(Boswellia bhaw-dajiana Birdw)或野乳香树(B.neglecta M.Moore)的树干皮部伤口处渗出的树脂，味苦辛，性温。没药为橄榄科植物没药树(Commiphora myrrha Engl.)或爱伦堡没药树(Balsamodendronehrenbergianum Berg.)的胶树脂，其味苦、辛、性平，此二者功效相近，均能活血止痛，消肿生肌，而乳香善于活血伸筋，没药却长于破血散瘀；马钱子粉为马钱科植物马钱(Strychnos nux-vomica L)的干燥成熟种子的炮制加工品，味苦，温，可通络止痛，散结消肿，《衷中参西录》云：“开通经络，透达关节之力，远胜于它药”。珍珠为珍珠贝科动物马氏珍珠贝(Pteria martensii(Dunker))、蚌科动物三角帆蚌(Hyriopsis cumingii(Lea))或褶纹冠蚌(Cristaria plicata(Leach))等双壳类动物受刺激形成的珍珠。味甘、成，寒，可安神定惊，解毒生肌。甜瓜子，葫芦科植物甜瓜(Cucumismelo L.)的干燥种子，可散结消瘀，清肺润肠，和中止渴。冰片为人工合成龙脑(C10H18O)(Borneolum Syntheticum)，味辛、苦，微寒，能清热止痛生肌，更有利于骨伤的恢复。
优选地，所述海星为炙海星，所述鸡骨为炙鸡骨，所述乳香为炙乳香，所述没药为炙没药，所述自然铜为煅自然铜。
优选地，上述药材的炮制依据为：《中国药典》2005年版一部各药材项下炮制规定及参照辽宁省中药炮制规范(1986年版)炮制规定。
炙乳香：取净乳香，照醋炙法(2005年版《中国药典》一部附录IID)炒至表面光亮。
炙没药：取净没药，照醋炙法(2005年版《中国药典》一部附录IID)炒至表面光亮。
马钱子粉：取净马钱子，照烫法(2005年版《中国药典》一部附录II D)用砂烫至鼓起并显棕褐色或深棕色，得制马钱子；取制马钱子，粉碎成细粉，照2005年版《中国药典》一部马钱子的[含量测定]项下的方法测定士的宁含量后，加适量淀粉，使含量符合规定，混匀，即得。
煅自然铜：取净自然铜，照煅法(2005年版《中国药典》一部附录II D)煅至暗红，淬至表面呈黑褐色，光泽消失并酥松。每100公斤自然铜，用醋30公斤。
炙鸡骨：取净鸡骨头，参照辽宁省中药炮制规范(1986年版)，除净残肉，用水洗净，放沸水中煮沸，干燥。
炙海星：取净海星，参照辽宁省中药炮制规范(1986年版)，以流通蒸气蒸两小时后，60℃以上干燥即得。
珍珠：取净珍珠，参照辽宁省中药炮制规范(1986年版)，捣碎成粗末，再磨成极细粉或用水飞法磨成极细粉。
本发明提供一种制备本发明药物组合物的方法，包括如下步骤：
(1)称取所述重量配比的药材备用；
(2)将除冰片和珍珠外的药材粉碎，过100-250目筛；
(3)将珍珠水飞或粉碎成极细粉，兑入过筛后的上述药材粉末中，混合均匀，最后加入研细的冰片粉末，充分混合均匀，即制得本发明的药物组合物。
本发明提供另一种制备所述药物组合物的方法，包括如下步骤：
(1)称取所述重量配比的药材备用；
(2)将除红花、珍珠和冰片外的药材粉碎，过100-250目筛；
(3)将红花加6-10倍水煎煮两次，每次1-2小时，合并煎液，过滤，将滤液浓缩至在40-85℃测量时相对密度为1.05-1.35的清膏；
(4)将上述清膏及步骤(2)所制得的药粉混合，干燥成细粉；
(5)将珍珠水飞或粉碎成极细粉，兑入步骤(4)所制得的细粉中，混合均匀，最后加入研细的冰片粉末，充分混合均匀，即制得本发明的药物组合物。
本发明还提供了上述药物组合物或根据上述方法制得的药物组合物在制备治疗伤科疾病的药物组合物中的应用。
本发明还提供了一种药物制剂，其包括由上述药物组合物或根据上述方法制得的药物组合物与药学上可接受的常规辅料。本发明提供的药物制剂涉及不同的剂型，其包含本发明药物组合物以及不同剂型所需的各种常规辅料，如崩解剂、润滑剂、粘合剂等，以常规的中药制剂方法制备成片剂、胶囊剂和丸剂等。
根据本发明的一个优选实施方案，每单位制剂含相当于0.28g药物组合物。
本发明的药物制剂和药物组合物具有止痛迅速而持久、消肿明显而快捷、促进骨痂生长、加速骨折愈合的功能，主要用于治疗伤科疾病。另外，本发明的药物制剂和药物组合物在治疗类风湿性关节炎、髌骨软骨软化症、腰间盘突出症、骨质疏松及儿童及成人股骨头坏死方面也有较好的疗效。
本发明还提供了本发明的药物质量控制方法，其中包括：定性鉴别和含量测定两种类型。
本发明的药物质量控制方法适用于本发明十二味药组成的药物组合物，也适用于含有各种制剂辅料的药物制剂。该药物质量控制方法可包括下述定性鉴别方法中的任意一种或任意几种的组合、下述含量测定方法中的任意一种或任意几种的组合、以及任意定性鉴别方法和任意含量测定方法的任意组合。
在所述药物质量控制方法中，所述“药物”是指本发明药物组合物或相当量的经过预处理的药物制剂。所述预处理是指如为包衣片，则去除包衣、研细；如为胶囊剂，则为取其内容物；如为包衣丸剂，则为去除包衣，研细。
本发明所用对照品及对照药材均为中国药品生物制品检定所提供(符合现行药品法定标准规定)。
定性鉴别：
定性鉴别包括以下项目的一种或任意数种的组合：
(1)取本发明药物粉末，置显微镜下观察：花粉粒类圆形或椭圆形，直径43-66μm，外壁有齿状突起，具3个萌发孔；树脂道碎片含棕黄色分泌物；体壁碎片棕色或棕红色，有圆形毛窝，直径8-24μm，有的具长短不一的刚毛；不规则碎块，多呈无色或浅粉色、浅黄绿色，有光泽，可见细密波状纹理；非腺毛单细胞，多碎断，壁极厚，木化，基部膨大似石细胞；不规则形碎块，无色，有光泽，完整者表面有圆形窝孔，多数碎块边缘呈半圆环状，有突起；
或者，取本发明药物粉末，置显微镜下观察：树脂道碎片含棕黄色分泌物；体壁碎片棕色或棕红色，有圆形毛窝，直径8-24μm，有的具长短不一的刚毛；不规则碎块，多呈无色或浅粉色、浅黄绿色，有光泽，可见细密波状纹理；非腺毛单细胞，多碎断，壁极厚，木化，基部膨大似石细胞；不规则形碎块，无色，有光泽，完整者表面有圆形窝孔，多数碎块边缘呈半圆环状，有突起；
(2)取本发明药物粉末1.5-3g，加入甲醇10ml，超声处理10-30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取三七对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4-8μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为5∶3∶1∶1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，在95-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)取本发明药物粉末3-5g，加80％丙酮溶液10ml，密塞，超声处理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以体积比为7∶2∶3∶0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)取本发明药物粉末3-5g，加体积比为10∶1的三氯甲烷-乙醇混合液12-18ml与浓氨试液1-2ml，密塞，超声处理10-30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取士的宁和马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取供试品溶液4-15μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为4∶5∶0.6∶0.4的甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)取本发明药物粉末2-4g，加三氯甲烷15ml，振摇，浸渍2-4小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加三氯甲烷制成每1ml约含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的苯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在95-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
或者，取本发明药物粉末2-4g，加三氯甲烷15ml，振摇，超声处理15-30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加无水乙醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2-10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为17∶3的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在95-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(6)取本发明药物粉末1.5-3g和海星对照药材粉末0.2-1g，分别加入6ml热水，盖上保鲜膜，100℃煮20-40分钟，冷却后4000rpm离心20分钟，取上清液各5-15μl，照中国药典2005版三部附录IVC进行电泳法试验，按下述电泳条件进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳，即得；供试品与对照药材在相应的位置上显相同的蛋白条带；其中所述的电泳条件：分离胶：12.5％；浓缩胶：5％；恒电流：30mA；电压：200V；电泳时间：2-3小时；用考马斯亮蓝R250染色4小时，摇床脱色；
所述超声处理在160W、50kHz下进行，所述药物是上述药物组合物，或根据上述方法制得的药物组合物，或相当量的经过预处理的上述药物制剂。
含量测定：
包括以下项目的一种或任意数种的组合：
(1)马钱子中士的宁的含量测定
色谱条件及系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为21∶79的乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液为流动相，该流动相用10％磷酸调节pH值为2.8，检测波长为260nm；理论板数按士的宁峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：精密称取士的宁对照品10mg，置25ml量瓶中，加三氯甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含士的宁16μg的溶液；
供试品溶液的制备：取本发明药物粉末0.5-1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氢氧化钠试液3ml，混匀，放置30分钟，精密加三氯甲烷20ml，密塞，称定重量，置水浴中回流提取2小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷提取液，用铺有少量硫酸钠的滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本发明药物每单位制剂含马钱子粉以士的宁(C21H22N2O2)计，在0.10-0.20mg之间(上述单位制剂是指含相当于0.28g药物组合物的成品制剂)；
(2)冰片的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：聚乙二醇(PEG)-20M毛细管柱，柱长30m，内径0.32mm，膜厚度0.5μm，柱温140℃；理论板数按龙脑峰计算应不低于8000；
校正因子测定：取水杨酸甲酯适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作为内标溶液；另取冰片对照品10-20mg，精密称定，置50ml量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取0.5μl，注入气相色谱仪，测定，计算校正因子；
测定法：取本发明药物粉末0.5-1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液5-15ml，混匀，密塞，称定重量，超声处理15-25分钟，放至室温，再称定重量，用内标溶液补足减失的重量，摇匀，离心20分钟，吸取上清液0.5μl注入气相色谱仪，测定，以龙脑、异龙脑峰面积之和计算，即得；
本品每单位制剂含冰片(C10H18O)应不少于0.60mg(上述单位制剂是指含相当于0.28g药物组合物的成品制剂)；
(3)三七的含量测定
色谱条件及系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；用蒸发光散射检测器检测；理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于8000；
| 时间(分钟) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0-20 | 20→40 | 60→80 |
| 20-25 | 40 | 60 |
对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、三七皂苷R1对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg1 0.3-0.5mg、人参皂苷Rb1 0.3-0.5mg、三七皂苷R1 0.08-0.12mg的混合溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取本发明药物0.5-1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10-30ml，密塞，称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本发明药物每单位制剂含三七以人参皂苷Rg1(C42H72O14)、人参皂苷Rb1(C54H92O23)、三七皂苷R1(C47H80O18)的总量计，应不少于2.8mg(上述单位制剂是指含相当于0.28g药物组合物的成品制剂)；
所述药物是上述药物组合物，或根据所述方法制得的药物组合物，或相当量的经过预处理的上述的药物制剂。
根据本发明的一个实施方案，药物质量控制方法至少包括三七的含量测定。
药品应具有安全性、有效性、稳定性及可控性。完善的质量控制标准能够保证药品质量的可靠性和均一性。鉴于中药组合物成分的复杂性和成分之间的相互干扰。每一个中药组合物的质量控制方法都是针对其本身制定的而不可能是通用型的。在已公开的文献中尚无公开针对本发明药物的质量控制方法，因而制定出科学合理质量控制方法对本发明药物的有效性、安全性及质量的可控性、均一性和稳定性至关重要。
本发明的质量控制方法是从本发明药物的各个层面都尽可能制定出具有可操作性的检测方法。在含量测定项中，针对君药之一的三七制定了含量测定方法，对本发明药物的有效性起到了一定的作用；对所含有毒药材马钱子制定了含量限度检测方法，对本发明药物的安全性起到了重要的作用；对本发明药物的主要易挥发性成分冰片制定了含量控制范围，对本发明制剂过程中工艺质量控制的稳定性起到了一定的监测作用。在定性鉴别中分别制定了药材红花、马钱子和冰片的薄层色谱定性鉴别方法及药材海星的凝胶电泳定性鉴别方法。在与相关的现有技术相比，本发明更能较全面的控制本发明药物的质量，弥补了现有技术的不足。例如：在公开号为CN1951428A的专利申请中的质量控制方法中就未制订出君药三七及易挥发成分冰片的含量测定方法及药材红花、马钱子和冰片的薄层色谱定性鉴别方法及药材海星的凝胶电泳定性鉴别方法，因而难以更科学合理地控制所发明药物的质量进而保证其有效性和稳定性。更确切地说本发明质量控制的范围更大，控制指标多，方法可靠，易于操作，灵敏度、精密度及重现性好，体现在产品质量效果上表现为各种成分的检出稳定可靠，可有效地防止造假行为的发生，更好地保证疗效及用药安全。
本发明药物用珍珠替代了现有技术CN1709463A中的朱砂，从而与CN1709463A相比，避免了朱砂的潜在毒性，增加了药物的安全性。与现有技术CN1951428A相比，本发明药物的中药配方更加科学和严谨，取得了更好的疗效。
因而，本发明的药物具有明确的、符合中药理论的配方和制备方法，有充足的动物实验及数据证明，该药物具有止痛迅速而持久、消肿明显而快捷、促进骨痂生长、加速骨折愈合的功效；且与现有技术药物相比，具有更好的疗效和/或用药安全性。这样，本发明药物既符合现代人们对药品的要求，又将有利于提高国内外消费者对该中药的认可度。另外，对于本领域技术人员而言，在阅读本说明书之后，本发明其余的优点和特征也是显而易见的。
具体实施方式
应该理解，本领域技术人员基于此处公开的内容，可以对本发明进行各种不偏离本发明精神和范围内的各种修改和改进。例如，本领域技术人员可以理解，在本发明的药物的质量控制方法中，对于所给出的某些具体数值进行适当的修改也有可能实现质量控制的目的。它们应当都落在本申请的权利要求定义的专利保护范围内。此外，应当理解，此处提供的实施例仅用于说明本发明的目的，而不应解释为对本发明的限制。
下面通过具体实施例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些实施例包括本发明药物的药效学试验和毒理学试验。
药效学试验：
本发明的药物具有止痛迅速而持久、消肿明显而快捷、促进骨痂生长、加速骨折愈合的功能，发明人通过药效学试验对本发明药物与对比文献方A(处方为三七、炙海星、红花、炙鸡骨、土鳖虫、煅自然铜、炙乳香、炙没药、马钱子粉、朱砂、甜瓜子、冰片，见专利公开号为CN1709463A的中国专利文献)及对比文献方B(处方中去除了朱砂，见公开号为CN1951428A的中国专利文献)进行对比研究，以说明其有益效果。
实验动物：日本大耳白兔，体重2.0-3.0kg，雌雄不限；昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄各半。
实验药品：对比文献方A(依据专利文献CN1709463A的优选方案的药物)；对比文献方B(按照专利文献CN1951428A的专利申请中实施例5所述处方制得的药物作为对照)；本发明药物(按照实施例1所述处方制得)。上述药物实验时用蒸馏水配至所需浓度。
统计结果均经“t”检验，结果以X±SD表示。如采用其它检验方法，另加注明。
一、本品对大耳兔骨折组织学及骨动力学的影响
取32只日本大耳兔，无菌条件下全麻，造成右侧桡骨中段3mm缺损的横行骨折，术毕缝合伤口，不用纱布覆盖及包扎固定，造模后动物按体重随机分为4组：模型对照组，对比文献方A组(120mg/kg)，对比文献方B组(120mg/kg)，本品(120mg/kg)。术后第二天开始灌服给药，连续给药35天，每天一次。分别于给药后第21天和33天各肌注四环素50mg/kg做双标记(黄应堂，“医学科学实验模型及评价方法”甘肃文化出版社，1998年)，末次给药后2小时处死动物，于肘腕部切段取样，弃除全部软组织，将桡骨组织纵性劈开，一分为二，一半制备骨磨片，供骨动力学观察；一半在10％中性福尔马林液中固定，常规脱钙，石蜡包埋，切片，苏木素伊红(HE)染色，供光学显微镜观察。
上述实验观察结果如下：
1.四环素双标记的骨动力学观察
实验于给药后第21天及处死前48小时各肌注四环素50mg/kg一次，处死后取桡骨磨片，将制备好的骨磨片置于奥林巴斯(Olympus)B II-2型荧光显微镜下观察，镜下分别测量三个部位取平均值。结果模型对照组的双标记线成单线，线条较细且模糊；对比文献方A、对比文献方B和本品组的双标记线有单线也有双线，双线条较平滑、清晰。
表1.对兔骨折处骨折性骨架之骨小梁
四环素双标记荧光线间距的影响(μm)
| 组别 | 动物数 | 剂量 | 荧光线 | 双线间距或单线宽度 |
| (只) | (mg/kg) | |||
| 模型对照组 | 8 | --- | 单线，模糊 | 10.7±1.7 |
| 对比文献方A | 8 | 120 | 单线或双线 | 14.2±2.4** |
| 对比文献方B | 8 | 120 | 单线或双线 | 13.5±2.3* |
| 本品 | 8 | 120 | 单线或双线 | 15.7±1.6***# |
与模型对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001
与对比文献组比较#P＜0.05
2.光镜观察
将HE染色切片，用真彩色图像分析仪进行骨形态剂量学研究，包括骨折线处软骨组织面积(×40)、骨外膜下软骨组织面积(×40)及骨折线原骨皮质所在处骨性骨痂的面积(×100，测三个视野，取均值)，结果见表2。
表2对大耳白兔桡骨骨形态计量分析
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 骨折线处软骨组织(μm2) | 骨外膜下软骨组织(μm2) | 骨小梁占视域面积(μm2) |
| 模型对照组 | --- | 209855.0±48672.3 | 272208.1±42972.5 | 79515.4±12389.3 |
| 对比文献方A | 120 | 24932.6±5646.6*** | 54920.1±12152.9*** | 99583.1±20652.1* |
| 对比文献方B | 120 | 25807.6±9021.2*** | 54557.6±6708.5* ** | 97987.4±12498.1* |
| 本品 | 120 | 22252.8±6569.3*** | 44752.8±8364.5* **# | 111127.8±11802.6***# |
与模型对照组比较*P＜0.05 ***P＜0.001
与对比文献方B比较#P＜0.05
二、本品对小鼠角叉菜胶性足肿胀的影响
取40只小鼠，雌雄各半，按体重随机分为4组，按表3所示剂量每天灌胃给药一次，对照组灌服等量蒸馏水，连续给药7天，于末次给药后30分钟，在小鼠左后中掌腱膜下注射1％角叉菜胶0.03ml，于致炎后6小时剪下小鼠双侧后足，称重，以其重量差值表示小鼠足肿胀程度。结果如表3所示，对比文献方A和本品对角叉菜胶引起的小鼠足肿胀具有明显的抑制作用，对比文献方B作用稍弱。
表3对小鼠角叉菜胶性足肿胀的影响
| 组别 | 动物数(只) | 剂量(mg/kg) | 足肿胀程度(mg) |
| 模型对照组 | 10 | --- | 36.0±3.2 |
| 对比文献方A | 10 | 160 | 31.9±2.3** |
| 对比文献方B | 10 | 160 | 33.8±2.5 |
| 本品 | 10 | 160 | 31.9±2.6** |
与模型对照组比较**P＜0.01
三、本品对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
取40只小鼠，雌雄各半，按体重随机分为4组，按表4所示剂量每天灌胃给药一次，对照组灌服等量蒸馏水，连续给药7天，于末次给药后30分钟，将0.05ml二甲苯均匀滴于小鼠左耳内外侧，右耳为正常对照，2小时后，将小鼠处死，沿耳廓基线剪下双耳，用直径9mm的打孔器分别在相同部位的左右耳上打下耳片，称重，以左右两耳片重量差值作为肿胀度。结果如表4所示，对比文献方A、对比文献方B和本品对二甲苯所致耳廓肿胀均具有显着抑制作用，抑制率分别是26.5％、13.8％、28.6％，本品作用明显强于对比文献方B。
表4.对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
| 组别 | 动物数(只) | 剂量(mg/kg) | 足肿胀程度(mg) | 抑制率(％) |
| 模型对照组 | 10 | --- | 18.9±3.1 | --- |
| 对比文献方A | 10 | 160 | 13.9±2.6*** | 26.5 |
| 对比文献方B | 10 | 160 | 16.3±2.3* | 13.8 |
| 本品 | 10 | 160 | 13.5±2.3***# | 28.6 |
与模型对照组比较*P＜0.05 ***P＜0.001
与对比文献方B比较#P＜0.05
四、本品对小鼠自主活动的影响
取40只小鼠，雌雄各半，按体重随机分为4组，按表5所示剂量每天灌胃给药一次，对照组灌服等量蒸馏水，连续给药7天，于末次给药后30分钟，将小鼠放入自主活动记数仪中，适应2分钟后，记录5分钟内活动次数。结果表明：本品可明显减少小鼠的自主活动。
表5.对小鼠自主活动的影响
| 组别 | 动物数(只) | 剂量(mg/kg) | 活动次数 |
| 模型对照组 | 10 | --- | 235±53 |
| 对比文献方A | 10 | 350 | 188±36**# |
| 对比文献方B | 10 | 350 | 222±67 |
| 本品 | 10 | 350 | 166±34**# |
与模型对照组比较**P＜0.01
与对比文献方B比较#P＜0.05
五、本品对水合氯醛引起小鼠睡眠时间的影响
取40只小鼠，雌雄各半，按体重随机分为4组，按表6所示剂量每天灌胃给药一次，对照组灌服等量蒸馏水，连续给药7天，于末次给药30分钟后按0.4g/kg腹腔注射水合氯醛，记录翻正反射开始消失至恢复的时间。结果表明：本品和对比文献方A均能明显延长给水合氯醛小鼠的睡眠时间；对比文献方B对给水合氯醛小鼠睡眠时间未见有明显影响。
表6对水合氯醛引起小鼠睡眠时间的影响
| 组别 | 动物数(只) | 剂量(mg/kg) | 睡眠时间(分钟) |
| 模型对照组 | 10 | --- | 91±11 |
| 对比文献方A | 10 | 350 | 108±11** |
| 对比文献方B | 10 | 350 | 88±11 |
| 本品 | 10 | 350 | 102±8*# |
与模型对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01
与对比文献方B比较#P＜0.05
毒理学试验：
一、急性毒性试验
取昆明种小鼠70只，体重18-22g，雌雄各半。随机分为7组，灌胃给药(本发明药物)一次，连续观察7天，按改良寇氏法求出本品的半数致死量(LD50)为4.1073±0.3811g/kg。死亡小鼠尸检后未发现肉眼可见变化。
二、长期毒性试验
取SD大鼠80只，体重80-100g，雌雄各半。随机分为4组。用药组分别按700、200和70mg/kg(分别为人临床用量的10、2.9和1倍，即LD50的1/6、1/20和1/59)每天灌胃给药一次，对照组按同法灌服与高剂量组药量体积相同的蒸馏水，连续给药90天(为临床人用药一个疗程的3倍)。结果表明：在上述给药剂量和给药时间下，本发明药物对大鼠体重、外观行为、尿便、血象和病理组织学检查均无明显毒性反应。恢复期后上述指标检查也未发现延迟性毒性。
结论：
通过对实验性桡骨骨折的日本大耳白兔组织形态学观察，我们发现，本发明药物同对比文献方A和对比文献方B相比，其促进软骨钙化、骨痂生长等药效作用不但没有减弱，而且其作用后四环素双标记线同对比文献方B比较显著加宽，骨小梁数量显著增加，可能是因为所替换组分珍珠中含有大量易于吸收的生物活性钙，可以补充钙质，促进骨的合成。
通过对小鼠角叉菜胶性足肿胀的影响及对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响等抗炎作用观察，证明本发明药物的抗炎作用与对比文献A相比没有明显变化，而明显强于对比文献方B，说明珍珠在该组方中起一定程度的抗炎作用。
通过对小鼠自主活动的影响及对水合氯醛引起小鼠睡眠时间的影响等镇静作用观察，发现本发明药物可明显减少小鼠的自主活动次数，延长给水合氯醛小鼠的睡眠时间，作用明显强于对比文献方B，说明去朱砂后该组方药物镇静安神作用减弱，而用珍珠替换朱砂后的本发明药物与对比文献方A相比，镇静作用没有明显改变。
以下通过实施例进一步阐述本发明药物的制备方法。本实施例中所用辅料购自营口奥达制药有限公司。
实施例1：本发明药物片剂的制备
①称取下述重量配比的药材：三七40g、炙海星20g、红花6g、炙鸡骨20g、土鳖虫20g、煅自然铜10g、炙乳香2g、炙没药2g、马钱子粉10g、珍珠5g、甜瓜子2g、冰片1g；
②将除珍珠和冰片外的药材粉碎，过120目筛；
③将珍珠水飞成极细粉，兑入过筛后的上述药粉中混合均匀，加适量糖浆，制粒、干燥、整粒；
④将冰片研细后兑入整粒后的药物中，混合均匀；
⑤向步骤④制得的药物中加入适量硬脂酸镁，压成素片，共制成500片，包薄膜衣，即得。
实施例2：本发明药物胶囊剂的制备
①称取下述重量配比的药材：三七40g、炙海星20g、红花6g、炙鸡骨20g、土鳖虫20g、煅自然铜10g、炙乳香2g、炙没药2g、马钱子粉10g、珍珠5g、甜瓜子2g、冰片1g；
②将除珍珠和冰片外的药材粉碎，过120目筛；
③将珍珠制成珍珠极细粉，兑入过筛后的上述药粉中混合均匀；
④将冰片研细后兑入步骤③制得的药粉中，混合均匀；
⑤向上述步骤④制得的药粉装入硬胶囊中，共制成500粒，即得。
实施例3：本发明药物胶囊剂的制备
①称取下述重量配比的药材：三七50g、炙海星15g、红花4g、炙鸡骨25g、土鳖虫25g、煅自然铜7g、炙乳香1.5g、炙没药2.5g、马钱子粉13g、珍珠4g、甜瓜子2.5g、冰片1.2g；
②将除珍珠和冰片外的药材粉碎，过180目筛；
③将珍珠制成珍珠极细粉，兑入过筛后的上述药粉中混合均匀，制粒、干燥、整粒；
④将冰片研细后兑入步骤③制得的药物中，混合均匀；
⑤将制得的药物颗粒装入硬胶囊中，共制成540粒，即得。
实施例4：本发明药物丸剂的制备
①称取下述重量配比的药材：三七40g、炙海星20g、红花6g、炙鸡骨20g、土鳖虫20g、煅自然铜10g、炙乳香2g、炙没药2g、马钱子粉10g、珍珠5g、甜瓜子2g、冰片1g；
②将除红花、珍珠和冰片外的药材粉碎，过140目筛；
③将红花加8倍的水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，过滤，将滤液减压浓缩至在80℃测量时相对密度为1.15的清膏；
④将上述清膏及步骤②所制得的药粉混合均匀，干燥成细粉；
⑤将珍珠制成珍珠极细粉，将冰片研细，都兑入步骤④所制得的细粉中，混合均匀；
⑥将所制得的药粉加适量可压性淀粉，制成丸剂，即得。
实施例5：本发明药物丸剂的制备
①称取下述重量配比的药材：三七30g、炙海星25g、红花8g、炙鸡骨17g、土鳖虫17g、煅自然铜12g、炙乳香1.5g、炙没药1.5g、马钱子粉8g、珍珠3g、甜瓜子1.5g、冰片0.8g；
②将除红花、珍珠和冰片外的药材粉碎，过160目筛；
③将红花加10倍的水煎煮两次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，过滤，将滤液减压浓缩至在60℃测量时相对密度为1.25的清膏；
④将上述清膏及步骤②所制得的药粉混合均匀，干燥成细粉；
⑤将珍珠制成珍珠极细粉，将冰片研细，兑入步骤④所制得的细粉中，混合均匀；
⑥将所制得的药粉加适量可压性淀粉，制成丸剂450粒，即得。
实施例6：上述实施例1的片剂的质量控制方法：
定性鉴别：
1.取本品3片，除去薄膜衣，研细，取适量，置显微镜下观察：花粉粒类圆形或椭圆形，直径43-66μm，外壁有齿状突起，具3个萌发孔。树脂道碎片含棕黄色分泌物。体壁碎片棕色或棕红色，有圆形毛窝，直径8-24μm，有的具长短不一的刚毛。不规则碎块，多呈无色或浅粉色、浅黄绿色，有光泽，可见细密波状纹理。非腺毛单细胞，多碎断，壁极厚，木化，基部膨大似石细胞。不规则形碎块，无色，有光泽，完整者表面有圆形窝孔，多数碎块边缘呈半圆环状，有突起。
2.取本品5片，除去薄膜衣，研细，加入甲醇10ml，超声处理20分钟(160W、50kHz)，滤过，滤液作为供试品溶液。另取三七对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.取本品10片，除去薄膜衣，研细，加80％丙酮溶液10ml，密塞，超声处理15分钟(160W、50kHz)，滤过，滤液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇(7∶2∶3∶0.4)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.取本品10片，除去薄膜衣，研细，加三氯甲烷-乙醇(10∶1)混合液15ml与浓氨试液1.5ml，密塞，超声处理15分钟(160W、50kHz)，滤过，滤液作为供试品溶液。另取士的宁和马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液(4∶5∶0.6∶0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
5.取本品10片，除去薄膜衣，研细，加三氯甲烷15ml，振摇，浸渍2小时，滤过，滤液作为供试品溶液。另取冰片对照品，加三氯甲烷制成每1ml约含2mg的溶液，作为对照品溶液。照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-丙酮(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
或者，取本品10片，除去薄膜衣，研细，加三氯甲烷15ml，振摇，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加无水乙醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以17∶3的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点
6.取本品10片，除去薄膜衣，研细，称取2.0g，另称取海星对照药材0.5g，分别加入6ml热水，盖上保鲜膜，100℃煮30分钟，冷却后4000rpm离心20分钟，取上清液各10μl，照电泳法(中国药典2005版三部，附录IVC)试验，按下述电泳条件进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳，即得。供试品与对照药材在相应的位置上显相同的蛋白条带。其中所述的电泳条件：分离胶：12.5％；浓缩胶：5％；恒电流：30mA；电压：200V；电泳时间：2小时；用考马斯亮蓝R250染色4小时，摇床脱色。
含量测定：
1.马钱子中士的宁的含量测定
色谱条件及系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液(用10％磷酸调节pH值2.8)(21∶79)为流动相，检测波长为260nm。理论板数按士的宁峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备：精密称取士的宁对照品10mg，置25ml量瓶中，加三氯甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含士的宁16μg)。
供试品溶液的制备：取本品20片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氢氧化钠试液3ml，混匀，放置30分钟，精密加三氯甲烷20ml，密塞，称定重量，置水浴中回流提取2小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷提取液，用铺有少量硫酸钠的滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每片含马钱子粉以士的宁(C21H22N202)计，为0.16mg。
2.冰片的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：聚乙二醇(PEG)-20M毛细管柱(柱长30m，内径0.32mm，膜厚度0.5μm)，柱温140℃。理论板数按龙脑峰计算应不低于8000。
校正因子测定：取水杨酸甲酯适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作为内标溶液。另取冰片对照品15mg，精密称定，置50ml量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取0.5μl，注入气相色谱仪，测定，计算校正因子。
测定法：取本品20片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，混匀，密塞，称定重量，超声处理20分钟，放至室温，再称定重量，用内标溶液补足减失的重量，摇匀，离心20分钟，吸取上清液0.5μl注入气相色谱仪，测定，以龙脑、异龙脑峰面积之和计算，即得。
本品每片含冰片(C10H18O)为0.87mg。
3.三七的含量测定
色谱条件及系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；蒸发光散射检测器；理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于8000。
| 时间(分钟) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0-20 | 20→40 | 60→80 |
| 20-25 | 40 | 60 |
对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、三七皂苷R1对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg1 0.4mg、人参皂苷Rb1 0.4mg、三七皂苷R1 0.1mg的混合溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取本品20片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每片含三七以人参皂苷Rg1(C42H72O14)、人参皂苷Rb1(C54H92O23)、三七皂苷R1(C47H80O18)的总量计，为3.8mg。
Claims (10)
1.一种治疗伤科疾病的药物组合物，其特征在于，它由下列重量份的药材制成：
三七 26-60份 海星 13-30份 红花 4-9份
鸡骨 13-30份 土鳖虫 13-30份 自然铜 6-15份
乳香 1-3份 没药 1-3份 马钱子粉 6-15份
珍珠 3-7.5份 甜瓜子 1-3份 冰片 0.5-1.5份。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药材的用量为：
三七 32-48份 海星 16-24份 红花 4.8-7.2份
鸡骨 16-24份 土鳖虫 16-24份 自然铜 8-12份
乳香 1.6-2.4份 没药 1.6-2.4份 马钱子粉 8-12份
珍珠 4-6份 甜瓜子 1.6-2.4份 冰片 0.8-1.2份。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述药材的用量为：
三七 40份 海星 20份 红花 6份
鸡骨 20份 土鳖虫 20份 自然铜 10份
乳香 2份 没药 2份 马钱子粉 10份
珍珠 5份 甜瓜子 2份 冰片 1份，
所述海星为炙海星，所述鸡骨为炙鸡骨，所述乳香为炙乳香，所述没药为炙没药，所述自然铜为煅自然铜。
4.一种制备权利要求1-3之一所述药物组合物的方法，包括如下步骤：
(1)称取所述重量配比的药材备用；
(2)将除冰片和珍珠外的药材粉碎，过100-250筛；
(3)将珍珠水飞或粉碎成极细粉，兑入过筛后的上述药材粉末中，混合均匀，最后加入研细的冰片粉末，充分混合均匀，即制得本发明的药物。
5.一种制备权利要求1-3之一所述药物组合物的方法，包括如下步骤：
(1)称取所述重量配比的药材备用；
(2)将除红花、珍珠和冰片外的药材粉碎，过100-250目筛；
(3)将红花加6-10倍水煎煮两次，每次1-2小时，合并煎液，过滤，将滤液浓缩至在40-85℃测量时相对密度为1.05-1.35的清膏；
(4)将上述清膏及步骤(2)所制得的药粉混合，干燥成细粉；
(5)将珍珠水飞或粉碎成极细粉，兑入步骤(4)所制得的细粉中，混合均匀，最后加入研细的冰片粉末，充分混合均匀，即制得本发明的药物。
6.根据权利要求1或2或3所述的药物组合物或根据权利要求4或5所述方法制得的药物组合物在制备治疗伤科疾病的药物制剂中的应用。
7.一种药物制剂，由权利要求1或2或3的药物组合物或根据权利要求4或5所述方法制得的药物组合物及药学上可接受的辅料组成。
8.一种药物质量控制方法，包括以下项目(1)-(6)的一种或任意数种的组合：
(1)取本发明药物粉末，置显微镜下观察：花粉粒类圆形或椭圆形，直径43-66μm，外壁有齿状突起，具3个萌发孔；树脂道碎片含棕黄色分泌物；体壁碎片棕色或棕红色，有圆形毛窝，直径8-24μm，有的具长短不一的刚毛；不规则碎块，多呈无色或浅粉色、浅黄绿色，有光泽，可见细密波状纹理；非腺毛单细胞，多碎断，壁极厚，木化，基部膨大似石细胞；不规则形碎块，无色，有光泽，完整者表面有圆形窝孔，多数碎块边缘呈半圆环状，有突起；
或者，取本发明药物粉末，置显微镜下观察：树脂道碎片含棕黄色分泌物；体壁碎片棕色或棕红色，有圆形毛窝，直径8-24μm，有的具长短不一的刚毛；不规则碎块，多呈无色或浅粉色、浅黄绿色，有光泽，可见细密波状纹理；非腺毛单细胞，多碎断，壁极厚，木化，基部膨大似石细胞；不规则形碎块，无色，有光泽，完整者表面有圆形窝孔，多数碎块边缘呈半圆环状，有突起；
(2)取本发明药物粉末1.5-3g，加入甲醇10ml，超声处理10-30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取三七对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4-8μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为5∶3∶1∶1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，在95-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)取本发明药物粉末3-5g，加80％丙酮溶液10ml，密塞，超声处理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以体积比为7∶2∶3∶0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)取本发明药物粉末3-5g，加体积比为10∶1的三氯甲烷-乙醇混合液12-18ml与浓氨试液1-2ml，密塞，超声处理10-30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取士的宁和马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取供试品溶液4-15μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为4∶5∶0.6∶0.4的甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)取本发明药物粉末2-4g，加三氯甲烷15ml，振摇，浸渍2-4小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加三氯甲烷制成每1ml约含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的苯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在95-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
或者，取本发明药物粉末2-4g，加三氯甲烷15ml，振摇，超声处理15-30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加无水乙醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005版一部附录VI B中薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2-10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为17∶3的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在95-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(6)取本发明药物粉末1.5-3g和海星对照药材粉末0.2-1g，分别加入6ml热水，盖上保鲜膜，100℃煮20-40分钟，冷却后4000rpm离心20分钟，取上清液各5-15μl，照中国药典2005版三部附录IV C进行电泳法试验，按下述电泳条件进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳，即得；供试品与对照药材在相应的位置上显相同的蛋白条带；其中所述的电泳条件：分离胶：12.5％；浓缩胶：5％；恒电流：30mA；电压：200V；电泳时间：2-3小时；用考马斯亮蓝R250染色4小时，摇床脱色；
所述超声处理在160W、50kHz下进行，所述药物是权利要求1或2或3的药物组合物，或根据权利要求4或5所述方法制得的药物组合物，或相当量的经过预处理的根据权利要求7所述的药物制剂。
9.一种药物质量控制方法，包括以下项目(1)-(3)的一种或任意数种的组合：
(1)马钱子中士的宁的含量测定
色谱条件及系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为21∶79的乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液为流动相，该流动相用10％磷酸调节pH值为2.8，检测波长为260nm；理论板数按士的宁峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：精密称取士的宁对照品10mg，置25ml量瓶中，加三氯甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含士的宁16μg的溶液；
供试品溶液的制备：取本发明药物粉末0.5-1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氢氧化钠试液3ml，混匀，放置30分钟，精密加三氯甲烷20ml，密塞，称定重量，置水浴中回流提取2小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷提取液，用铺有少量硫酸钠的滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本发明药物每单位制剂含马钱子粉以士的宁计，在0.10-0.20mg之间；
(2)冰片的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：聚乙二醇-20M毛细管柱，柱长30m，内径0.32mm，膜厚度0.5μm，柱温140℃；理论板数按龙脑峰计算应不低于8000；
校正因子测定：取水杨酸甲酯适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作为内标溶液；另取冰片对照品10-20mg，精密称定，置50ml量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取0.5μl，注入气相色谱仪，测定，计算校正因子；
测定法：取本发明药物粉末0.5-1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液5-15ml，混匀，密塞，称定重量，超声处理15-25分钟，放至室温，再称定重量，用内标溶液补足减失的重量，摇匀，离心20分钟，吸取上清液0.5μl注入气相色谱仪，测定，以龙脑、异龙脑峰面积之和计算，即得；
本品每单位制剂含冰片应不少于0.60mg；
(3)三七的含量测定
色谱条件及系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；用蒸发光散射检测器检测；理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、三七皂苷R1对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.3-0.5mg、人参皂苷Rb10.3-0.5mg、三七皂苷R10.08-0.12mg的混合溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取本发明药物0.5-1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10-30ml，密塞，称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本发明药物每单位制剂含三七以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总量计，应不少于2.8mg；
上述单位制剂是指含相当于0.28g药物组合物的成品制剂；所述药物是权利要求1或2或3的药物组合物，或根据权利要求4或5所述方法制得的药物组合物，或相当量的经过预处理的根据权利要求7所述的药物制剂。
10.一种药物质量控制方法，包括权利要求8所述药物质量控制方法中任一项或多项和权利要求9所述药物质量控制方法中任一项或多项的任意组合。
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