CN110237066B - 3-甲氧基黄酮及其衍生物在制备治疗或预防肾病的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物化学领域，具体涉及3‑甲氧基黄酮及其衍生物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防肾病，例如，慢性肾功能衰竭疾病，的药物中的应用。本发明研究结果显示3‑甲氧基黄酮对肾病尤其是慢性肾功能衰竭疾病的症状能够具有明显改善作用。

Description

3-甲氧基黄酮及其衍生物在制备治疗或预防肾病的药物中的 应用

技术领域

本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，具体涉及3-甲氧基黄酮及其衍生物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防肾病，例如，慢性肾功能衰竭疾病的药物中的应用。

背景技术

黄酮类化合物是自然界中分布最广的一类多酚类物质，有着广泛且重要的药理活性，比如抗氧化、抗癌、抗过敏、抗菌、抗炎活性以及抗心血管疾病和镇痛作用。3-甲氧基黄酮(3-methoxyflavone，CAS：7245-02-5)具有特定的抗病毒活性和抗肿瘤活性。

现有的相关专利中，仅查询到《一种3－甲氧基黄酮类化合物,其制备方法和应用》(申请号：CN200710040286.6)与此专利较为相关，申请的内容是化合物的制备以及抗肿瘤(乳腺癌、肺癌、前列腺癌等)药理学研究内容。

慢性肾功能衰竭是由各种病因所致的慢性肾病发展至晚期而出现的一组临床症状组成的综合症。根据肾功能损害的程度将慢性肾功能衰竭分为4期：肾贮备功能下降,患者无症状；肾功能不全代偿期；肾功能失代偿期(氮质血症期)，患者有乏力，食欲不振和贫血；尿毒症阶段，有尿毒症症状。

慢性肾功能衰竭主要治疗方式包括保守治疗和肾脏替代治疗。

替代疗法是临床治疗慢性肾功能衰竭的主要方法，当前由于技术的进步，移植以及透析治疗越来越多地应用于慢性肾功能衰竭患者中，疗效也有所提高。但是这类方法一般更适用于晚期慢性肾功能衰竭的患者，对于早期以及中期慢性肾功能衰竭患者并不完全适用，而且这类方法花费较高，大部分患者无法接受。

守治疗包括饮食治疗和对慢性肾功能衰竭原发病的治疗。药物治疗方面，目前临床主要采用中医药治疗方法，但是由于部分药方及方法是医生自己的经验，无法保证能够全面推广；西药方面，用于阳性对照的化合物地塞米松虽然能够缓解慢性肾功能衰竭的症状，但是副作用较大，不适合长期使用。

3-甲氧基黄酮已有报道具有抗肿瘤(乳腺癌、肺癌、前列腺癌等)的作用。但是，现有技术没有公开和启示过3-甲氧基黄酮及其衍生物具有治疗或预防慢性肾病，尤其是慢性肾功能衰竭，的用途。

发明内容

本发明目的是提供3-甲氧基黄酮及其衍生物或其药学上可接受的盐在制药应用领域中的新用途，即3-甲氧基黄酮及其衍生物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防肾病，例如，慢性肾功能衰竭疾病，的药物中的应用。

本发明提供了3-甲氧基黄酮及其衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防肾病，例如，慢性肾功能衰竭疾病，的药物中的应用。

本发明提供了一种治疗或预防肾病，例如，慢性肾功能衰竭的药物组合物，其包含治疗有效量的3-甲氧基黄酮及其衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成分。所述药物组合物还可以包含有药学上可接受的载体。

发明所述的3-甲氧基黄酮及其衍生物或其药学上可接受的盐可以单独给药，或者与其他药学上可接受的治疗剂联合给药。所述的治疗剂包括但不限于：血管紧张素IIAT₁受体拮抗剂，例如，坎得沙坦西来替酯(坎得沙坦cilexitil)、依普罗沙坦、伊贝沙坦、氯沙坦钾、替米沙坦；转化酶抑制剂，例如，阿拉普利、苯那普利、卡托普利、西拉普利、依那普利、依那普利拉；利尿剂，例如，氢氯噻嗪、苄氟噻嗪、氯噻酮。

“肾病”是指包括糖尿病肾脏病、慢性肾功能衰竭、慢性肾炎、晚期肾病、肾肥大、肾增生、肾小球硬化或肾小球肾炎。

“药学上可接受的盐”是指与磷酸、硫酸、盐酸等无机酸，或醋酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸等有机酸，或天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸形成的盐，或与上述酸成酯或酰胺后再与无机碱形成的盐，如钠、钾、钙、铝盐和铵盐。

“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如

)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

本发明所述的用于治疗或预防肾病，例如，慢性肾功能衰竭疾病，的药物组合物可以制成药剂学上任何一种剂型。例如，可以是口服形式或者注射形式的，如胶囊剂、片剂、分散片、输液剂、注射剂、冻干剂、口服剂、混悬剂、丸剂、乳剂、冲剂或凝胶剂。可采用本技术领域常用的技术将所述的用于治疗或预防肾病，例如，慢性肾炎或慢性肾功能衰竭，的药物组合物制成任何一种所需要的剂型。

此专利申请的内容是3-甲氧基黄酮及其衍生物或其药学上可接受的盐对肾病，例如，慢性肾功能衰竭疾病，的药效学研究，试验结果显示其能够有效的改善慢性肾功能衰竭疾病的症状。

有益效果

1、3-甲氧基黄酮及其衍生物或其药学上可接受的盐对肾病尤其是慢性肾功能衰竭疾病的症状能够具有明显改善作用；

2、3-甲氧基黄酮及其衍生物或其药学上可接受的盐的原料药及其不同种类的剂型均对肾病尤其是慢性肾功能衰竭有效。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐述本发明，但这些实施例仅用于说明本发明，而不用于限制本发明的范围。

实施例1

1)材料：

动物：远交系SD大鼠30只，雄性，300g±20g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，合格证号：SCXK(沪)2003-0003，选用市售固体饲料喂养7天适应环境。

2)药物：

地塞米松磷酸钠注射液，上海通用药业股份有限公司生产,含量：5mg/mL，批号：060608；

3-甲氧基黄酮购自江苏江山制药有限公司公司，批号为：061010。用溶媒0.5wt.％DMSO配成所需不同浓度的药液。

3)方法：将SD大鼠按照体重随机分为五组，分别为假手术组、模型组、阳性药物组(地塞米松)以及3-甲氧基黄酮的低剂量组和3-甲氧基黄酮的高剂量组，每组6只。采用大鼠5/6肾切除的慢性肾功能衰竭(CRF)模型，SD大鼠用2wt.％戊巴比妥(30mg/kg wt.)腹腔注射麻醉，局部剪毛，皮肤消毒，背左侧或腹部切口充分暴露左侧肾脏，剥离肾包膜，迅速切除上、下极各约1/3，以明胶海绵压迫止血，并滴加数滴凝血酶溶液加快凝血速度，待没有活动性出血后分层缝合。

术后7天后进行第2次手术造模，右侧背部切开暴露右肾，结扎肾蒂，摘除右肾，并称量切除右肾组织的重量。

第二次手术造模2天后，阳性药物组肌注给予地塞米松(0.1mg/kgwt.)；3-甲氧基黄酮的低剂量组和3-甲氧基黄酮的高剂量组分别灌胃给予3-甲氧基黄酮4μM/kg wt.和16μM/kg wt.，灌胃体积为0.1mL/kg wt.；同时设置假手术组，6只大鼠，假手术组除保留肾脏外，其它手术过程同样执行，并且假手术组和模型组灌胃给予等体积的含0.1wt.％DMSO和5wt.％葡萄糖注射液的溶液(简称DMSO:糖水)。按表1所示方法给予各组SD大鼠不同的处置方法给药34天，全部动物均自由摄取饲料和饮水。

在第二次手术造模后第2天，所有大鼠都按25mg/kg wt.四环素(为荧光染料)接受肌注。第30天肌注15mg/kg wt.钙黄绿素(calcein)。

表1各组动物处置方法

4)每天对受试动物进行常规观察，每周收集24h尿液进行尿蛋白检测；给药结束后，测试骨密度；腹主动脉取血，分离血清，检测血象、生化指标；解剖动物，取肾脏，称取重量，切开和计算脏器系数，然后固定于10％福尔马林溶液中，常规包埋、切片、染色，进行病理学检查。

具体的检测指标和方法为：

(1)一般观察：每天；

(2)体重，每周1次，并计算存活率；

(3)生化检查：用瑞士生产的TOCHE COBAS MIRA全自动生化分析仪检测血肌酐、血清总蛋白和白蛋白，血清尿素氮，K⁺、Na⁺、Ga²⁺、P、Mg²⁺和b-ALP，用奥地利生产的Zenyth200st酶标仪和大鼠甲状旁腺激素酶联免疫分析(PTH)ELISA试剂盒(产品编号：E0465r)检测血清PTH(甲状旁腺素)含量，停药后检查；

(4)24h尿量及尿液成分分析：用日本生产的AUTION JET尿十项分析仪检测尿蛋白含量，每周一次；

(5)血液学检查：用法国生产的AB&VETABC(169)血球计数仪检测红细胞计数、血红蛋白和红细胞比积，停药后检查；

(6)骨密度检查：停药后检查，骨生长率观察，两側胫、腓骨去软组织后，胫骨保留于70％酒精，冷藏两天，然后转移到70％酒精，冷藏，用德国Stratec公司生产的外周骨定量计算机断层扫描仪(pQCT，peripheral Quantitative Computed Tomography，XCTReasearch SA)检测总骨密度、小梁骨密度和皮质骨密度。腓骨立即用干冰或液氮冷冻，然后用生理盐水浸泡过的纱布包好，密封保存在-70度以下的冰箱，为将来冷冻切片，酶分析用；

(7)肾脏大体组织学观察、镜下病理组织学检查。

①肾脏病理形态学观察:肉眼及组织学观察，计算肾系数、PAS特殊染色后用上海申藤信息技术有限公司开发的IMS细胞图像分析系统和医学图像分析软件计算用系膜/肾小球面积比；

②用武汉博士德生物工程有限公司提供的PCNA免疫组化染色试剂盒(产品编号：SA2024)对石蜡切片进行Proliferation cell nuclear antigen(PCNA)免疫染色，以计算肾小球内阳性细胞核的比例。

5)数据处理：

结果以

表示，显著性检验用方差分析。

6)结果

表2、各受试物对大鼠体重的影响(

g)

注：与假手术组相比^#p<0.05，^##p<0.01；与模型组相比*p<0.05，**p<0.01。

从表2结果可以看出，与模型组相比，3-甲氧基黄酮的高剂量组和低剂量组动物平均体重有显著性差异(P<0.05)。

表3、各受试物对大鼠生存率的影响(％)

假手术组动物表现机警，反应快，皮毛致密，整齐而有光泽，饮食正常，无动物死亡。其他组动物精神萎靡，活动迟缓，皮毛蓬松，枯槁无光泽，食欲不振，其中模型组最为明显。每周均有模型动物死亡，死亡情况见表3。

表4、各受试物对大鼠尿蛋白的影响(

mg)

注：与假手术组相比^#p<0.05，^##p<0.01；与模型组相比*p<0.05，**p<0.01。

从表4结果可以看出，与模型组相比，3-甲氧基黄酮的高剂量组和低剂量组的动物尿蛋白含量有显著性差异(P<0.05)。

表5、各受试物对大鼠血液和生化指标的影响

注：与假手术组相比^#p<0.05，^##p<0.01；与模型组相比*p<0.05，**p<0.01。

表6、各受试物对大鼠血液和生化指标的影响

注：与假手术组相比^#p<0.05，^##p<0.01；与模型组相比*p<0.05，**p<0.01。

从表5、6的结果可以看出，与模型组相比，各组别动物血液和生化指标无显著性差异(P>0.05)。

表7、各受试物对大鼠骨密度的影响(

mg/cm³)

注：与假手术组相比^#p<0.05，^##p<0.01；与模型组相比*p<0.05，**p<0.01。

与模型组相比，3-甲氧基黄酮的高剂量组和低剂量组动物骨小梁密度有显著性差异(P<0.05)。

表8、各受试物对大鼠肾脏病理相关指标的影响

注：与假手术组相比^#p<0.05，^##p<0.01；与模型组相比*p<0.05，**p<0.01。

与模型组相比，3-甲氧基黄酮的低剂量组动物肾系数有显著性差异(P<0.05)；与模型组相比，3-甲氧基黄酮的高剂量组和低剂量组肾脏增殖细胞核比例有显著性差异(P<0.05)。

与模型组相比，3-甲氧基黄酮的高剂量组和低剂量组动物系膜肾小球面积比有显著性差异(P<0.05)。

以模型组作为对照，肾脏损伤程度，3-甲氧基黄酮的高剂量组和低剂量组肾脏损伤较小，详见表8。

模型组造模成功，阳性药物地塞米松对慢性肾功能衰竭症状有一定的缓解作用，4μM/Kg和16μM/Kg的3-甲氧基黄酮对慢性肾功能衰竭症状有一定的改善作用。

Claims (3)

1.一种药物组合物在制备用于治疗或预防慢性肾功能衰竭的药物中的应用，所述药物组合物含有治疗有效量的3-甲氧基黄酮或其药学上可接受的盐为作为活性成分，以及药学上可接受的载体，其中所述3-甲氧基黄酮的结构如下：

2.一种药物组合物在制备用于治疗或预防慢性肾功能衰竭的药物中的应用，所述药物组合物包含治疗有效量的3-甲氧基黄酮或其药学上可接受的盐作为活性成分以及其他药学上可接受的治疗剂，以及药学上可接受的载体，其中所述3-甲氧基黄酮的结构如下：

3.3-甲氧基黄酮或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防慢性肾功能衰竭的药物中的应用，其中所述3-甲氧基黄酮的结构如下：