CN110205274A - 一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，组分包括基质和芽孢生成因子；芽孢生成因子，包括：葡萄糖、K2HPO4，KH2PO4，MnCl2中的一种或几种；基质，包括：营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆肉汤培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基、磷酸盐缓冲液、PBS、生理盐水中的一种或几种。通过在液体或固体基质中，添加特定的嗜热脂肪芽胞杆菌芽胞生成因子，诱导芽胞生成，液体或固体基质为芽胞提供营养物质或生长环境，芽胞生成后即可在后续实验中对其收集备用；可在48h内批量制备嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢，有效提高芽孢生成率，满足工业化制备生物指示剂所需的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的数量。
Description
技术领域
本发明涉及一种培养基，具体涉及一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，属于微生物培养基技术领域。
背景技术
在生存条件恶劣下，如营养物质不充分、代谢废物累积等，产芽胞菌种生长停滞，产生芽胞。芽胞是营养细胞的休眠体，在较长时间内保持休眠状态，能抵抗多种外界压力，如高温、高压、高寒、营养缺乏等。在合适条件下，通常是在营养物质的激活下，同芽胞营养性发芽受体结合，引发细胞内级联信号转导，诱导芽胞发芽并恢复营养菌体生长。
芽胞发芽是微生物芽胞在暴露于能支持微生物生长的条件之后发生的一系列不可逆、复杂的生化事件，使芽胞进入营养菌体繁殖阶段。芽胞的高度抗逆性提高了细菌的存活，也可利用其高度的抗性进行灭菌监测。
生物指示剂是灭菌监测的金标准，通过标准化的菌株及符合要求的抗力来对特定灭菌过程进行监测。生物指示剂中所用菌株比器械或敷料上真实的微生物负荷的抗力更大；因此，通过生物指示剂可对灭菌过程进行检测，保证灭菌有效性。
压力蒸汽灭菌生物指示剂中通用的菌种为嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢。嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢是对湿热压力蒸汽灭菌抗力最强的芽孢。因此，制备生物指示剂需要嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢作为染菌菌种。而在工业化生产中，嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成率低，制备周期长，难以满足生物指示剂制备所需芽孢数量。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种有效提高芽孢生成率的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，组分包括基质和芽孢生成因子；
所述芽孢生成因子，包括：葡萄糖、K2HPO4，KH2PO4，MnCl2中的一种或几种；
所述基质，包括：营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆肉汤培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基、磷酸盐缓冲液、PBS、生理盐水中的一种或几种。
上述芽孢生成因子的质量浓度为0.01-2%。
上述营养肉汤培养基，包括以下组分：蛋白胨5-20g/L，牛肉粉1-10g/L，氯化钠3-10g/L；pH为6.5-7.8。
进一步的，上述营养肉汤培养基，包括以下组分：蛋白胨7-10g/L，牛肉粉3-7g/L，氯化钠4-6g/L；pH为7.0-7.5。
上述营养琼脂培养基，包括以下组分：蛋白胨5-20g/L，牛肉粉1-10g/L，氯化钠3-10g/L，琼脂10-30g/L；pH为6.5-7.8。
进一步的，上述营养琼脂培养基，包括以下组分：蛋白胨7-10g/L，牛肉粉3-7g/L，氯化钠4-6g/L，琼脂15-25g/L；pH为7.0-7.5。
上述胰蛋白胨大豆肉汤培养基，包括以下组分：胰蛋白胨10-30g/L，大豆蛋白胨1-8g/L，葡萄糖1-5g/L，磷酸氢二钾1-5g/L，氯化钠3-10g/L；pH为6.5-7.8。
进一步的，上述胰蛋白胨大豆肉汤培养基，包括以下组分：胰蛋白胨15-20g/L，大豆蛋白胨1.5-5g/L，葡萄糖1.5-4g/L，磷酸氢二钾1.5-4g/L，氯化钠3.5-7g/L；pH为7.0-7.5。
上述胰蛋白胨大豆琼脂培养基，包括以下组分：胰蛋白胨10-30g/L，大豆蛋白胨1-8g/L，葡萄糖1-5g/L，磷酸氢二钾1-5g/L，氯化钠3-10g/L，琼脂15-25g/L ；pH为6.5-7.8。
进一步的，上述胰蛋白胨大豆琼脂培养基，包括以下组分：胰蛋白胨15-20g/L，大豆蛋白胨1.5-5g/L，葡萄糖1.5-4g/L，磷酸氢二钾1.5-4g/L，氯化钠3.5-7g/L，琼脂15-25g/L ；pH7.0-7.5。
本发明的有益之处在于：
本发明的一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，为针对嗜热脂肪芽胞杆菌芽胞，提供的一种芽胞生成培养基配方；通过在液体或固体基质中，添加特定的嗜热脂肪芽胞杆菌芽胞生成因子，诱导芽胞生成，液体或固体基质为芽胞提供营养物质或生长环境，芽胞生成后即可在后续实验中对其收集备用；本发明的芽孢生成培养基，可在48h内批量制备出嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢，有效提高芽孢生成率，满足工业化制备生物指示剂所需的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的数量，具有很强的实用性和广泛的适用性。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。
一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，组分包括基质和芽孢生成因子；
芽孢生成因子的浓度为0.01-2%，包括：葡萄糖、K2HPO4，KH2PO4，MnCl2中的一种或几种；
基质包括：营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆肉汤培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基、磷酸盐缓冲液、PBS、生理盐水中的一种或几种。
营养肉汤培养基的pH为6.5-7.8，由蛋白胨5-20g/L，牛肉粉1-10g/L，氯化钠3-10g/L组成。
营养琼脂培养基的pH为6.5-7.8，由蛋白胨5-20g/L，牛肉粉1-10g/L，氯化钠3-10g/L，琼脂10-30g/L组成。
胰蛋白胨大豆肉汤培养基的pH为6.5-7.8，由胰蛋白胨10-30g/L，大豆蛋白胨1-8g/L，葡萄糖1-5g/L，磷酸氢二钾1-5g/L，氯化钠3-10g/L组成。
胰蛋白胨大豆琼脂培养基的pH为6.5-7.8，由胰蛋白胨10-30g/L，大豆蛋白胨1-8g/L，葡萄糖1-5g/L，磷酸氢二钾1-5g/L，氯化钠3-10g/L，琼脂15-25g/L 组成。
实施例1：
一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，由以下质量组分的原料组成：蛋白胨5g/L，牛肉粉3g/L，NaCl 3g/L，K2HPO4 0.02g/L。
实施例2：
一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，由以下质量组分的原料组成：胰蛋白胨15g/L，大豆蛋白胨5g/L，葡萄糖4g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，氯化钠3.5g/L；pH为7.0-7.5。
实施例3：
一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，由以下质量组分的原料组成：胰蛋白胨15g/L，大豆蛋白胨1.5g/L，葡萄糖1.5g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，氯化钠3.5g/L，氯化锰 0.5g/L，琼脂15g/L；pH为7.0-7.5。
芽孢制备：
将实施例3制备的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，于121℃下灭菌30min后，备用于芽孢制备；
取上述培养基，接种嗜热脂肪芽孢杆菌营养菌体，于56℃摇床培养24h后，1000rmp离心10min，分离菌体；重悬3次后，100℃下灭菌，制得嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，其特征在于，组分包括基质和芽孢生成因子；
所述芽孢生成因子，包括：葡萄糖、K2HPO4，KH2PO4，MnCl2中的一种或几种；
所述基质，包括：营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆肉汤培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基、磷酸盐缓冲液、PBS、生理盐水中的一种或几种。
2.根据权利要求1所述的一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，其特征在于，所述芽孢生成因子的质量浓度为0.01-2%。
3.根据权利要求1所述的一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，其特征在于，所述营养肉汤培养基，包括以下组分：蛋白胨5-20g/L，牛肉粉1-10g/L，氯化钠3-10g/L；pH为6.5-7.8。
4.根据权利要求3所述的一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，其特征在于，所述营养肉汤培养基，包括以下组分：蛋白胨7-10g/L，牛肉粉3-7g/L，氯化钠4-6g/L；pH为7.0-7.5。
5.根据权利要求1所述的一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，其特征在于，所述营养琼脂培养基，包括以下组分：蛋白胨5-20g/L，牛肉粉1-10g/L，氯化钠3-10g/L，琼脂10-30g/L；pH为6.5-7.8。
6.根据权利要求5所述的一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，其特征在于，所述营养琼脂培养基，包括以下组分：蛋白胨7-10g/L，牛肉粉3-7g/L，氯化钠4-6g/L，琼脂15-25g/L；pH为7.0-7.5。
7.根据权利要求1所述的一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，其特征在于，所述胰蛋白胨大豆肉汤培养基，包括以下组分：胰蛋白胨10-30g/L，大豆蛋白胨1-8g/L，葡萄糖1-5g/L，磷酸氢二钾1-5g/L，氯化钠3-10g/L；pH为6.5-7.8。
8.根据权利要求7所述的一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，其特征在于，所述胰蛋白胨大豆肉汤培养基，包括以下组分：胰蛋白胨15-20g/L，大豆蛋白胨1.5-5g/L，葡萄糖1.5-4g/L，磷酸氢二钾1.5-4g/L，氯化钠3.5-7g/L；pH为7.0-7.5。
9.根据权利要求1所述的一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，其特征在于，所述胰蛋白胨大豆琼脂培养基，包括以下组分：胰蛋白胨10-30g/L，大豆蛋白胨1-8g/L，葡萄糖1-5g/L，磷酸氢二钾1-5g/L，氯化钠3-10g/L，琼脂15-25g/L ；pH为6.5-7.8。
10.根据权利要求9所述的一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基，其特征在于，所述胰蛋白胨大豆琼脂培养基，包括以下组分：胰蛋白胨15-20g/L，大豆蛋白胨1.5-5g/L，葡萄糖1.5-4g/L，磷酸氢二钾1.5-4g/L，氯化钠3.5-7g/L，琼脂15-25g/L ；pH7.0-7.5。
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