CN105368746A - 嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法 - Google Patents

嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105368746A
CN105368746A CN201510867449.2A CN201510867449A CN105368746A CN 105368746 A CN105368746 A CN 105368746A CN 201510867449 A CN201510867449 A CN 201510867449A CN 105368746 A CN105368746 A CN 105368746A
Authority
CN
China
Prior art keywords
gemma
bacstearothermophilus
preparation
culture
bacterial classification
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201510867449.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105368746B (zh
Inventor
赵健存
韩宝福
屈道银
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shinva Medical Instrument Co Ltd
Original Assignee
Shinva Medical Instrument Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shinva Medical Instrument Co Ltd filed Critical Shinva Medical Instrument Co Ltd
Priority to CN201510867449.2A priority Critical patent/CN105368746B/zh
Publication of CN105368746A publication Critical patent/CN105368746A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105368746B publication Critical patent/CN105368746B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明属于微生物芽孢发酵技术领域，具体涉及一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法。制备方法是菌种热激，菌种活化，菌种冷刺激，一级培养，二级培养，即得。本发明根据嗜热脂肪芽孢杆菌的特点，采用热激、活化、冷刺激和逐级培养的手段，使该芽孢杆菌能够在发酵的过程中快速形成芽孢，缩短发酵时间，降低生产成本，提高使用效果；而且工艺简单、成本低廉，具有可操作性强的优点。

Description

嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法
技术领域
本发明属于微生物芽孢发酵技术领域，具体涉及一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法。
背景技术
嗜热脂肪芽孢杆菌为需氧或者兼性厌氧菌，为革兰氏阳性菌，利用葡萄糖生长产酸不产气。最适生长繁殖温度为55-60℃，最高生长温度为65-75℃，属于嗜热菌。中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)收藏编号为：10267，即ATCC：7953。
嗜热脂肪芽孢杆菌所产芽孢无毒，无致病性，对热、放射线和化学物质有很强的抵抗力，尤其对压力蒸汽和过氧化氢的抗力强于大多数微生物，因此在我国、欧洲、美国等地作为热力灭菌和过氧化氢低温等离子灭菌的标准菌株，另外该菌还经常用来检测抗生素的残留等。鉴于嗜热脂肪芽孢杆菌所产芽孢的特性，在消毒灭菌监测领域得到广泛的应用。
在加工生产中嗜热脂肪芽孢杆菌快速大量的形成稳定芽孢状态关系到整个生产及其后其保存使用的效果，其中如何提高嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢生成率显得尤为重要，所以确定一种快速有效的促进嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢形成的方法是十分必要的。
发明内容
本发明的目的是提供一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法，操作简便、缩短了发酵时间、降低了生产成本、提高了使用效果。
本发明所述的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法，步骤如下：
(1)菌种热激：菌种在水浴中加热；
(2)菌种活化：在菌种活化培养基上进行菌种培养；
(3)菌种冷刺激：将活化好的菌种在-10－-20℃放置1-2h；
(4)一级培养：在芽孢生长培养基上倒置培养；
(5)二级培养：在芽孢生长培养基上倒置培养，得到嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢。
步骤(1)中所述的水浴温度为50-60℃。
步骤(1)中所述的加热时间为4-6h。
步骤(1)中所述的菌种用无菌水稀释到浓度为1×106-3×106cfu/ml。
步骤(2)中所述的菌种培养温度为56-60℃，菌种培养时间为12-16h。
步骤(2)中所述的菌种活化培养基按照质量百分比计组成为蛋白胨1％、牛肉浸出粉0.3％、氯化钠0.5％、蒸馏水余量，pH7.2±0.2，其灭菌条件为121℃灭菌20-30min。
步骤(4)中所述的倒置培养温度为30-38℃，倒置培养时间为20-25h。
步骤(4)中所述的芽孢生长培养基按照质量百分比计组成为牛肉浸出粉0.2％、蛋白胨0.4％、葡萄糖0.1％、磷酸氢二钾0.2％、氯化锰0.2％、琼脂2％、蒸馏水余量，pH7.2±0.2，其灭菌条件为115℃灭菌30min。
步骤(5)中所述的倒置培养温度为56-60℃，倒置培养时间为20-25h。
步骤(5)中所述的芽孢生长培养基按照质量百分比计组成为牛肉浸出粉0.2％、蛋白胨0.4％、葡萄糖0.1％、磷酸氢二钾0.2％、氯化锰0.2％、琼脂2％、蒸馏水余量，pH7.2±0.2，其灭菌条件为115℃灭菌30min。
活化后的菌种经过-10－-20℃的冷刺激后再接种到芽胞生长培养基上会提高芽胞生成的速率和比率。
本发明所述的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法，具体步骤如下：
(1)将嗜热脂肪芽孢杆菌菌株溶解到去离子水中，制作成菌悬液，调节菌悬液菌种的浓度为1×106-3×106cfu/ml。将溶解好的菌悬液置于50-60℃的水浴中，加热4-6h。
(2)将经过热激的菌种接种到菌种活化培养基中，56-60℃静止培养12-16h。
(3)将活化好的菌种放置到-10－-20℃条件下放置1-2h，然后放置到室温。
(4)一级培养：将处理好的菌液接种到芽孢生长培养基中，30-38℃条件下静止正置1h，然后静止倒置培养24h。
(5)二级培养：将一级培养后的芽孢生长培养基，56-60℃静止培养20-25h，得到嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢。
嗜热脂肪芽孢杆菌菌株优选中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)ATCC：7953。
芽孢的转化率可通过对得到的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢用芽孢染色法染色获得，芽胞呈绿色，没有形成芽孢的菌体呈红色。
本发明中所用的芽孢染色法为：用接种环取菌样涂布于玻片上，待自然干燥。而后通过火焰加热将菌固定于玻片上；将涂片放入平皿内，片上放两层滤纸，滴加足量的质量浓度5.0％孔雀绿水溶液；将平皿盖好，放54-56℃条件下，加热30min。取出，去滤纸，用自来水冲洗残留孔雀绿溶液；加质量浓度0.5％沙黄水溶液，染1min。水洗，待干后镜检。
本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：
本发明根据嗜热脂肪芽孢杆菌的特点，采用热激、活化、冷刺激和逐级培养的手段，使该芽孢杆菌能够在发酵的过程中快速形成芽孢，缩短发酵时间，降低生产成本，提高使用效果；而且工艺简单、成本低廉，具有可操作性强的优点。
本发明通过改进培养基的配方以及培养的工艺，可有效地提高芽孢的生成率，得到大批量的芽孢。而且培养基的原料价格低廉，工艺流程相对简单，生产周期短，整个培养工艺一批次耗时大约72h，本发明提供了一种可以使芽孢的生产工业化发酵的路线，芽孢的转化率大于等于98％，可一次获得含量≥1×109cfu/ml的芽孢。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步描述。
实施例1
(1)将嗜热脂肪芽孢杆菌菌株溶解到去离子水中，制作成菌悬液，调节菌悬液菌种的浓度为1×106cfu/ml。将溶解好的菌悬液置于50℃的水浴中，加热4h。
(2)将经过热激的菌种接种到菌种活化培养基中，56℃静止培养12h。
(3)将活化好的菌种放置到-20℃条件下放置1h，然后放置到室温。
(4)一级培养：将处理好的菌液接种到芽孢生长培养基中，35℃条件下静止正置1h，然后静止倒置培养24h。
(5)二级培养：将一级培养后的芽孢生长培养基，56℃静止培养20h，得到嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢。
对上述得到的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢用芽孢染色法染色，芽胞的形成率为98％。
实施例2
(1)将嗜热脂肪芽孢杆菌菌株溶解到去离子水中，制作成菌悬液，调节菌悬液菌种的浓度为1×106cfu/ml。将溶解好的菌悬液置于55℃的水浴中，加热5h。
(2)将经过热激的菌种接种到菌种活化培养基中，58℃静止培养14h。
(3)将活化好的菌种放置到-15℃条件下放置1.5h，然后放置到室温。
(4)一级培养：将处理好的菌液接种到芽孢生长培养基中，30℃条件下静止正置1h，然后静止倒置培养24h。
(5)二级培养：将一级培养后的芽孢生长培养基，56℃静止培养23h，得到嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢。
对上述得到的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢用芽孢染色法染色，芽胞的形成率为99％。
实施例3
(1)将嗜热脂肪芽孢杆菌菌株溶解到去离子水中，制作成菌悬液，调节菌悬液菌种的浓度为3×106cfu/ml。将溶解好的菌悬液置于60℃的水浴中，加热6h。
(2)将经过热激的菌种接种到菌种活化培养基中，60℃静止培养16h。
(3)将活化好的菌种放置到-10℃条件下放置2h，然后放置到室温。
(4)一级培养：将处理好的菌液接种到芽孢生长培养基中，38℃条件下静止正置1h，然后静止倒置培养24h。
(5)二级培养：将一级培养后的芽孢生长培养基，60℃静止培养25h，得到嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢。
对上述得到的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢用芽孢染色法染色，芽胞的形成率为98％。

Claims (10)

1.一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法，其特征在于步骤如下：
(1)菌种热激：菌种在水浴中加热；
(2)菌种活化：在菌种活化培养基上进行菌种培养；
(3)菌种冷刺激：将活化好的菌种在-10－-20℃放置1-2h；
(4)一级培养：在芽孢生长培养基上倒置培养；
(5)二级培养：在芽孢生长培养基上倒置培养，得到嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢。
2.根据权利要求1所述的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法，其特征在于步骤(1)中所述的水浴温度为50-60℃。
3.根据权利要求1所述的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法，其特征在于步骤(1)中所述的加热时间为4-6h。
4.根据权利要求1所述的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法，其特征在于步骤(1)中所述的菌种用无菌水稀释到浓度为1×106-3×106cfu/ml。
5.根据权利要求1所述的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述的菌种培养温度为56-60℃，菌种培养时间为12-16h。
6.根据权利要求1所述的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述的菌种活化培养基按照质量百分比计组成为蛋白胨1％、牛肉浸出粉0.3％、氯化钠0.5％、蒸馏水余量，pH7.2±0.2。
7.根据权利要求1所述的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法，其特征在于步骤(4)中所述的倒置培养温度为30-38℃，倒置培养时间为20-25h。
8.根据权利要求1所述的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法，其特征在于步骤(4)中所述的芽孢生长培养基按照质量百分比计组成为牛肉浸出粉0.2％、蛋白胨0.4％、葡萄糖0.1％、磷酸氢二钾0.2％、氯化锰0.2％、琼脂2％、蒸馏水余量，pH7.2±0.2。
9.根据权利要求1所述的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法，其特征在于步骤(5)中所述的倒置培养温度为56-60℃，倒置培养时间为20-25h。
10.根据权利要求1所述的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法，其特征在于步骤(5)中所述的芽孢生长培养基按照质量百分比计组成为牛肉浸出粉0.2％、蛋白胨0.4％、葡萄糖0.1％、磷酸氢二钾0.2％、氯化锰0.2％、琼脂2％、蒸馏水余量，pH7.2±0.2。
CN201510867449.2A 2015-12-01 2015-12-01 嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法 Active CN105368746B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510867449.2A CN105368746B (zh) 2015-12-01 2015-12-01 嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510867449.2A CN105368746B (zh) 2015-12-01 2015-12-01 嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105368746A true CN105368746A (zh) 2016-03-02
CN105368746B CN105368746B (zh) 2019-04-12

Family

ID=55371382

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510867449.2A Active CN105368746B (zh) 2015-12-01 2015-12-01 嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105368746B (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106282068A (zh) * 2016-09-28 2017-01-04 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 抵抗力可控型芽孢杆菌芽孢的制备方法
CN106434520A (zh) * 2016-09-28 2017-02-22 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 芽孢杆菌芽孢的制备方法
CN106867940A (zh) * 2017-03-16 2017-06-20 青岛农业大学 一种促进嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生长萌发的方法
CN108865938A (zh) * 2018-07-11 2018-11-23 青岛高迈生物科技有限公司 一种高产芽孢的嗜热脂肪芽孢杆菌
CN110205274A (zh) * 2019-06-12 2019-09-06 南京巨鲨显示科技有限公司 一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基
CN114410540A (zh) * 2022-02-07 2022-04-29 山东新华医疗器械股份有限公司 一种提高芽孢率的嗜热脂肪芽孢杆菌培养液及培养方法
CN115804403A (zh) * 2022-12-15 2023-03-17 西北农林科技大学 一种高压微射流均质协同射频处理的嗜热菌菌液杀菌方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102181389A (zh) * 2011-03-18 2011-09-14 大连民族学院 一种选育高产芽孢率芽孢杆菌的方法
CN104342385A (zh) * 2014-08-29 2015-02-11 湖北省生物农药工程研究中心 一种嗜热脂肪芽孢杆菌活菌制剂的制备工艺
CN104593315A (zh) * 2015-01-06 2015-05-06 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 一种制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102181389A (zh) * 2011-03-18 2011-09-14 大连民族学院 一种选育高产芽孢率芽孢杆菌的方法
CN104342385A (zh) * 2014-08-29 2015-02-11 湖北省生物农药工程研究中心 一种嗜热脂肪芽孢杆菌活菌制剂的制备工艺
CN104593315A (zh) * 2015-01-06 2015-05-06 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 一种制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JUHEE KIM AND H. BROOKS NAYLOR: "Spore Production by Bacillus stearothermophilus", 《APPLIED MICROBIOLOGY》 *
N. FINLEY AND M. L. FIELDS: "Heat Activation and Heat-induced Dormancy of Bacillus stearothermophilus Spores", 《APLLIED MICROBIOLOGY》 *

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106282068A (zh) * 2016-09-28 2017-01-04 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 抵抗力可控型芽孢杆菌芽孢的制备方法
CN106434520A (zh) * 2016-09-28 2017-02-22 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 芽孢杆菌芽孢的制备方法
CN106434520B (zh) * 2016-09-28 2019-11-12 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 芽孢杆菌芽孢的制备方法
CN106867940A (zh) * 2017-03-16 2017-06-20 青岛农业大学 一种促进嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生长萌发的方法
CN106867940B (zh) * 2017-03-16 2020-07-07 青岛农业大学 一种促进嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生长萌发的方法
CN108865938A (zh) * 2018-07-11 2018-11-23 青岛高迈生物科技有限公司 一种高产芽孢的嗜热脂肪芽孢杆菌
CN108865938B (zh) * 2018-07-11 2021-05-28 青岛创通生物科技有限公司 一种高产芽孢的嗜热脂肪芽孢杆菌
CN110205274A (zh) * 2019-06-12 2019-09-06 南京巨鲨显示科技有限公司 一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生成培养基
CN114410540A (zh) * 2022-02-07 2022-04-29 山东新华医疗器械股份有限公司 一种提高芽孢率的嗜热脂肪芽孢杆菌培养液及培养方法
CN114410540B (zh) * 2022-02-07 2024-01-19 山东新华医疗器械股份有限公司 一种提高芽孢率的嗜热脂肪芽孢杆菌培养液及培养方法
CN115804403A (zh) * 2022-12-15 2023-03-17 西北农林科技大学 一种高压微射流均质协同射频处理的嗜热菌菌液杀菌方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN105368746B (zh) 2019-04-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105368746A (zh) 嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备方法
CN105779297B (zh) 一株产高活性多酚氧化酶的酵母菌及其在普洱茶生产中的应用
CN104911120A (zh) 一种枯草芽孢杆菌的发酵生产工艺
CN106867940B (zh) 一种促进嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生长萌发的方法
CN102260638B (zh) 窖泥功能菌及其制备方法
CN104593315A (zh) 一种制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法
CN103013861B (zh) 枯草芽孢杆菌hjda32菌株及其所产细菌素的制备方法
CN104928202A (zh) 一种芽孢杆菌的发酵培养方法
CN104403953B (zh) 一种饲料用酿酒酵母菌高密度发酵培养基配方及其应用
CN105746756A (zh) 人工发酵茶叶生产茯茶的方法及菌株
CN108441436A (zh) 一种副干酪乳杆菌及其应用
CN106434520B (zh) 芽孢杆菌芽孢的制备方法
CN104630166A (zh) 微生物发酵生产低温葡萄糖氧化酶的方法
CN105062947A (zh) 一种高芽孢率地衣芽孢杆菌的生产方法
CN110184227B (zh) 一株耐酸乳杆菌及其应用
CN103849581B (zh) 一种花椒内生短杆菌及其筛选纯化方法和用途
CN106520575B (zh) 一株高产过氧化氢酶的黑曲霉菌株及其应用
CN102093992B (zh) 微生物发酵生产低温蛋白酶的方法
CN108865938A (zh) 一种高产芽孢的嗜热脂肪芽孢杆菌
Nout et al. Effect of environmental conditions during soya-bean fermentation on the growth of Staphylococcus aureus and production and thermal stability of enterotoxins A and B
CN102093990A (zh) 微生物发酵生产低温淀粉酶的方法
CN110438060A (zh) 一种嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢的制备、富集方法
CN104531580B (zh) 一种高性能文莱胶菌株及其应用
CN103789210A (zh) 一种产孢真菌菌种长期保藏的方法
CN103289912A (zh) 一种凝结芽孢杆菌的固体发酵方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant