CN110169491A - 一种高蛋白酶的微生物饲料及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物饲料制备技术领域,具体是公开了一种高蛋白酶的微生物饲料,包括菌种原料和固体培养基,所述菌种原料由产蛋白酶枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌组成,所述菌种原料内各菌种占菌种原料的重量百分数为产蛋白酶枯草芽孢杆菌25%‑46%、乳酸菌30%‑55%、酵母菌20%‑35%,所述产蛋白酶枯草芽孢杆菌为经过低能离子修饰后筛选出的具有较高蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌;所述固体培养基由豆粕、大蒜秸秆、银杏叶渣、玉米粉、硫酸镁和麸皮组成。本发明克服了现有技术的不足,大大提高了微生物饲料内蛋白酶的活性,提高养殖动物的抵抗力和免疫力,减少疾病损失和环境污染,降低了生产成本,提高养殖的效率。
Description
技术领域
本发明涉及微生物饲料制备技术领域,具体属于一种高蛋白酶的微生物饲料及其制备方法。
背景技术
由于养殖业过度追求高密度、高产量,势必造成养殖污染物增加与积累,导致养殖环境的逐步恶化,主要体现为:水质污染;空气污染;病原微生物大量滋生传播疾病;药物残留;微量元素过度排放对环境的污染等,直接造成养殖失败和威胁产品质量安全。根据当前国家有关食品安全、环境保护等相关政策的出台,研发生产绿色、高效、健康、无抗的微生物饲料、饲料添加剂、微生物添加剂、酶制剂成为摆在当前养殖各行业面前的一个重大课题。
将蛋白酶添加在养殖饲料中,能够提高养殖动物的抵抗力和免疫力,但是目前常用的饲料制酶剂的价格过高,如何提高微生物饲料中蛋白酶的活性,同时降低制作成本,成为业内亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的是提供了一种高蛋白酶的微生物饲料,克服了现有技术的不足,大大提高了微生物饲料内蛋白酶的活性,提高养殖动物的抵抗力和免疫力,减少疾病损失和环境污染,降低了生产成本,提高养殖的效率。
为解决上述问题,本发明所采取的技术方案如下:
一种高蛋白酶的微生物饲料,包括菌种原料和固体培养基,所述菌种原料由产蛋白酶枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌组成,所述菌种原料内各菌种占菌种原料的重量百分数为产蛋白酶枯草芽孢杆菌25%-46%、乳酸菌30%-55%、酵母菌20%-35%,所述产蛋白酶枯草芽孢杆菌为经过低能离子修饰后筛选出的具有较高蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌;所述固体培养基由豆粕、大蒜秸秆、银杏叶渣、玉米粉、硫酸镁和麸皮组成,所述固体培养基中各组分占固体培养基的重量百分数为豆粕20%-42%、大蒜秸秆12%-28%、银杏叶渣20%-36%、玉米粉5%-12%、硫酸镁0.2%-2%、麸皮15%-32%。
进一步,包括菌种原料和固体培养基,所述菌种原料由产蛋白酶枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌组成,所述菌种原料内各菌种占菌种原料的重量百分数为产蛋白酶枯草芽孢杆菌35.5%、乳酸菌42.5%、酵母菌22%,所述产蛋白酶枯草芽孢杆菌为经过低能离子修饰后筛选出的具有较高蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌;所述固体培养基由豆粕、大蒜秸秆、银杏叶渣、玉米粉、硫酸镁和麸皮组成,所述固体培养基中各组分占固体培养基的重量百分数为豆粕31%、大蒜秸秆20%、银杏叶渣28%、玉米粉8.5%、硫酸镁1.1%、麸皮11.4%。
进一步,所述产蛋白酶枯草芽孢杆菌低能离子修饰的步骤为:取枯草芽孢杆菌用生理盐水稀释至一定倍数,制成浓度为10×108cfu/ml的菌悬液;在多功能离子注入机内,取0.1ml的菌悬液均匀涂布在无菌平板上,无菌风干后用10Kev的氮离子进行不同剂量的离子注入;离子注入后进行培养、筛选,得到具有较高蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌。
一种高蛋白酶的微生物饲料的制备方法,其特征在于:包括如下步骤,
(1)培养基制备:按照配方中豆粕、大蒜秸秆、银杏叶渣、玉米粉和麸皮的重量百分含量称取原料,将上述原料分别投入粉碎装置中进行粉碎,过40目筛后混合均匀,在混合过程中加入硫酸镁,调节PH为7.0-7.2,灭菌,制成固体培养基;
(2)菌种活化:将经过低能离子修饰的产蛋白酶枯草芽孢杆菌接种到LB培养基进行活化,将乳酸菌接种到MRS培养基进行活化;
(3)菌种接种:将步骤2中活化的菌种原料按照接种量为8%-10%接种到步骤1中制备的固体培养基上;
(4)固态发酵:将接种好的固体培养基放置到发酵设备中,在30-35℃温度条件下,持续发酵24-38小时;
(5)包装:将步骤4中发酵好的产品进行干燥、粉碎、检测后进行包装。
进一步,所述步骤1中所述培养基的原料采用高温蒸汽进行灭菌。
进一步,所述步骤2中菌种原料的活化均采用斜面培养的方式。
进一步,所述步骤4中固态发酵的的条件为:罐压004-0.05MPa、搅拌转速100-150rpm和通气量1-2vols/vol/min。
本发明与现有技术相比较,本发明的实施效果如下:
1、本发明使用低能离子修饰的产蛋白酶枯草芽孢杆菌作为主要菌剂,提高微生物饲料中的蛋白酶活性,提高养殖动物的抵抗力和免疫力,减少疾病损失和环境污染。
2、本发明使用豆粕、大蒜秸秆、银杏叶渣、玉米粉和麸皮这些农产品作为培养基的原料,取代了价格高昂的化学药剂,极大的降低了成本。
3、本发明进一步优化了发酵过程,在固体培养基中添加了硫酸镁,进一步的提高了产蛋白酶枯草芽孢杆菌分泌的蛋白酶的活性,
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述,但本发明不仅限于这些实例,在为脱离本发明宗旨的前提下,所为任何改进均落在本发明的保护范围之内。
实施例1
一种高蛋白酶的微生物饲料,包括菌种原料和固体培养基,菌种原料由产蛋白酶枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌组成,菌种原料内各菌种占菌种原料的重量百分数为产蛋白酶枯草芽孢杆菌27%、乳酸菌42%、酵母菌31%,产蛋白酶枯草芽孢杆菌为经过低能离子修饰后筛选出的具有较高蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌;固体培养基由豆粕、大蒜秸秆、银杏叶渣、玉米粉、硫酸镁和麸皮组成,固体培养基中各组分占固体培养基的重量百分数为豆粕35%、大蒜秸秆12%、银杏叶渣24%、玉米粉6%、硫酸镁0.3%、麸皮22.7%。
产蛋白酶枯草芽孢杆菌低能离子修饰的步骤为:取枯草芽孢杆菌用生理盐水稀释至一定倍数,制成浓度为10×108cfu/ml的菌悬液;在多功能离子注入机内,取0.1ml的菌悬液均匀涂布在无菌平板上,无菌风干后用10Kev的氮离子进行不同剂量的离子注入;离子注入后进行培养、筛选,得到具有较高蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌。
一种高蛋白酶的微生物饲料的制备方法,包括如下步骤,
(1)培养基制备:按照配方中豆粕、大蒜秸秆、银杏叶渣、玉米粉和麸皮的重量百分含量称取原料,将上述原料分别投入粉碎装置中进行粉碎,过40目筛后混合均匀,在混合过程中加入硫酸镁,调节PH为7.0-7.2,灭菌,制成固体培养基;
(2)菌种活化:将经过低能离子修饰的产蛋白酶枯草芽孢杆菌接种到LB培养基进行活化,将乳酸菌接种到MRS培养基进行活化;
(3)菌种接种:将步骤2中活化的菌种原料按照接种量为8%-10%接种到步骤1中制备的固体培养基上;
(4)固态发酵:将接种好的固体培养基放置到发酵设备中,在30-35℃温度条件下,持续发酵24-38小时;
(5)包装:将步骤4中发酵好的产品进行干燥、粉碎、检测后进行包装。
步骤1中培养基的原料采用高温蒸汽进行灭菌;步骤2中菌种原料的活化均采用斜面培养的方式;步骤4中固态发酵的的条件为:罐压004-0.05MPa、搅拌转速100-150rpm和通气量1-2vols/vol/min。
本实施例中经过发酵后的产蛋白酶枯草芽孢杆菌分泌的蛋白酶酶活达到3029.4U/mL。
实施例2
一种高蛋白酶的微生物饲料,包括菌种原料和固体培养基,菌种原料由产蛋白酶枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌组成,菌种原料内各菌种占菌种原料的重量百分数为产蛋白酶枯草芽孢杆菌36%、乳酸菌32%、酵母菌32%,产蛋白酶枯草芽孢杆菌为经过低能离子修饰后筛选出的具有较高蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌;固体培养基由豆粕、大蒜秸秆、银杏叶渣、玉米粉、硫酸镁和麸皮组成,固体培养基中各组分占固体培养基的重量百分数为豆粕31%、大蒜秸秆21%、银杏叶渣26%、玉米粉6%、硫酸镁0.3%、麸皮22.7%。
产蛋白酶枯草芽孢杆菌低能离子修饰的步骤为:取枯草芽孢杆菌用生理盐水稀释至一定倍数,制成浓度为10×108cfu/ml的菌悬液;在多功能离子注入机内,取0.1ml的菌悬液均匀涂布在无菌平板上,无菌风干后用10Kev的氮离子进行不同剂量的离子注入;离子注入后进行培养、筛选,得到具有较高蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌。
制备方法与步骤均与实施例1相同。
本实施例中经过发酵后的产蛋白酶枯草芽孢杆菌分泌的蛋白酶酶活达到3014.6U/mL。
实施例3
一种高蛋白酶的微生物饲料,包括菌种原料和固体培养基,菌种原料由产蛋白酶枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌组成,菌种原料内各菌种占菌种原料的重量百分数为产蛋白酶枯草芽孢杆菌45%、乳酸菌30%、酵母菌25%,产蛋白酶枯草芽孢杆菌为经过低能离子修饰后筛选出的具有较高蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌;固体培养基由豆粕、大蒜秸秆、银杏叶渣、玉米粉、硫酸镁和麸皮组成,固体培养基中各组分占固体培养基的重量百分数为豆粕27%、大蒜秸秆26%、银杏叶渣33%、玉米粉5%、硫酸镁0.6%、麸皮8.4%。
产蛋白酶枯草芽孢杆菌低能离子修饰的步骤为:取枯草芽孢杆菌用生理盐水稀释至一定倍数,制成浓度为10×108cfu/ml的菌悬液;在多功能离子注入机内,取0.1ml的菌悬液均匀涂布在无菌平板上,无菌风干后用10Kev的氮离子进行不同剂量的离子注入;离子注入后进行培养、筛选,得到具有较高蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌。
制备方法与步骤均与实施例1相同。
本实施例中经过发酵后的产蛋白酶枯草芽孢杆菌分泌的蛋白酶酶活达到3126.3U/mL。
实施例4
与实施例3对比,采用未经低温修饰的产蛋白酶枯草芽孢杆菌作为菌种原料,在固体培养基中不添加硫酸镁,其他成分与制备方法均与实施例3相同。
本实施例中经过发酵后的产蛋白酶枯草芽孢杆菌分泌的蛋白酶酶活达到3126.3U/mL。
实施例5
小鸡喂养试验:
临床实验选用个体重量相等、无病害、同年龄段的小鸡(刚孵化的小鸡),将小鸡分为5组,即为数量相同的A、B、C、D、E组,饲养环境完全相同,每组50只,A组饲喂市场所购买的饲料;B、C、D、E组对应饲喂本发明实施例1、实施例2、实施例3和实施例4的微生物饲料;每次投放饲料量等同,饲养三个月。表2是实验结束时的结果。
本发明对于养殖动物具有很大的经济效益,能对于提高养殖动物的抵抗力和免疫力,对肠胃细菌造成的疾病具有良好的防治作用
以上内容仅仅是对本发明构思所作的举例和说明,所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代,只要不偏离发明的构思或者超越本权利要求书所定义的范围,均应属于本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种高蛋白酶的微生物饲料,其特征在于:包括菌种原料和固体培养基,所述菌种原料由产蛋白酶枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌组成,所述菌种原料内各菌种占菌种原料的重量百分数为产蛋白酶枯草芽孢杆菌25%-46%、乳酸菌30%-55%、酵母菌20%-35%,所述产蛋白酶枯草芽孢杆菌为经过低能离子修饰后筛选出的具有较高蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌;所述固体培养基由豆粕、大蒜秸秆、银杏叶渣、玉米粉、硫酸镁和麸皮组成,所述固体培养基中各组分占固体培养基的重量百分数为豆粕20%-42%、大蒜秸秆12%-28%、银杏叶渣20%-36%、玉米粉5%-12%、硫酸镁0.2%-2%、麸皮15%-32%。
2.根据权利要求1所述的一种高蛋白酶的微生物饲料,其特征在于:包括菌种原料和固体培养基,所述菌种原料由产蛋白酶枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌组成,所述菌种原料内各菌种占菌种原料的重量百分数为产蛋白酶枯草芽孢杆菌35.5%、乳酸菌42.5%、酵母菌22%,所述产蛋白酶枯草芽孢杆菌为经过低能离子修饰后筛选出的具有较高蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌;所述固体培养基由豆粕、大蒜秸秆、银杏叶渣、玉米粉、硫酸镁和麸皮组成,所述固体培养基中各组分占固体培养基的重量百分数为豆粕31%、大蒜秸秆20%、银杏叶渣28%、玉米粉8.5%、硫酸镁1.1%、麸皮11.4%。
3.根据权利要求1所述的一种高蛋白酶的微生物饲料,其特征在于:所述产蛋白酶枯草芽孢杆菌低能离子修饰的步骤为:取枯草芽孢杆菌用生理盐水稀释至一定倍数,制成浓度为10×108cfu/ml的菌悬液;在多功能离子注入机内,取0.1ml的菌悬液均匀涂布在无菌平板上,无菌风干后用10Kev的氮离子进行不同剂量的离子注入;离子注入后进行培养、筛选,得到具有较高蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌。
4.一种高蛋白酶的微生物饲料的制备方法,其特征在于:包括如下步骤,
(1)培养基制备:按照配方中豆粕、大蒜秸秆、银杏叶渣、玉米粉和麸皮的重量百分含量称取原料,将上述原料分别投入粉碎装置中进行粉碎,过40目筛后混合均匀,在混合过程中加入硫酸镁,调节PH为7.0-7.2,灭菌,制成固体培养基;
(2)菌种活化:将经过低能离子修饰的产蛋白酶枯草芽孢杆菌接种到LB培养基进行活化,将乳酸菌接种到MRS培养基进行活化;
(3)菌种接种:将步骤2中活化的菌种原料按照接种量为8%-10%接种到步骤1中制备的固体培养基上;
(4)固态发酵:将接种好的固体培养基放置到发酵设备中,在30-35℃温度条件下,持续发酵24-38小时;
(5)包装:将步骤4中发酵好的产品进行干燥、粉碎、检测后进行包装。
5.根据权利要求4所述的一种高蛋白酶的微生物饲料的制备方法,其特征在于:所述步骤1中所述培养基的原料采用高温蒸汽进行灭菌。
6.根据权利要求4所述的一种高蛋白酶的微生物饲料的制备方法,其特征在于:所述步骤2中菌种原料的活化均采用斜面培养的方式。
7.根据权利要求4所述的一种高蛋白酶的微生物饲料的制备方法,其特征在于:所述步骤4中固态发酵的的条件为:罐压004-0.05MPa、搅拌转速100-150rpm和通气量1-2vols/vol/min。
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赵丛等: "N~+离子注入诱变选育中性蛋白酶高产菌株及发酵条件的研究 ", 《工业微生物》 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN115553380A (zh) * | 2022-10-13 | 2023-01-03 | 徐州工程学院 | 一种发酵饲料及其发酵工艺 |
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