CN110025010A - 一种丁香提取物和丁香提取物脂质体及制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食品领域，具体公开了一种丁香提取物和丁香提取物脂质体及制备方法和应用。本发明通过制备丁香提取物新型脂质体，替代传统香辛料粉末在食品烹饪中的使用，提高了丁香的利用率，同时有效控制烹饪过程中杂环胺类物质的生成，解决了肉制品煎制过程中杂环胺类物质含量较高的问题，可操作性强。
Description
技术领域
本发明属于食品领域，更具体地，涉及一种丁香提取物和丁香提取物脂质体及制备方法和应用。
背景技术
丁香为桃金娘科植物丁香(Eugenia caryophylla Thunb.)的干燥花蕾，是药食两用植物，也是我国传统的香辛调味料。丁香中主要含有机酸类、苷类和挥发油类等有效成分，文献报道丁香精油具有很强的抗氧化活性，其水提取液、醇提取液及挥发油对多种细菌、真菌具有抑制和杀灭作用。
肉制品是人们日常生活中的主要营养来源之一，烘烤、煎炸、微波等加工方式赋予肉类食品独特的风味，深受消费者青睐。然而，肉制品在经过高温加工后会产生多种杂环胺，长期大量摄入会对人体健康造成危害。
杂环胺是蛋白质在热加工过程中生成的，由碳、氮、氢原子组成具有多环芳香族结构的一类致癌、致突变化合物。长期食用含杂环胺的熟肉制品有产生消化道癌症的可能。影响杂环胺形成的因素有多种，例如加工温度、加工时间、原料中是否含有糖类、肌酸和游离氨基酸等前体物。
为了抑制肉制品中杂环胺的生成，国内外均作了大量研究，目前抑制方式主要通过在原料肉中添加蔬果、茶和香辛料等抗氧化剂的提取物等，然后再辅助以控制加工温度和时间来抑制杂环胺的生成。其中，传统卤制及烤制过程中都会添加香辛料和调味料，可在一定程度上抑制烹饪过程中杂环胺类物质的生成但效果不佳。因此研究新的丁香提取物进一步抑制杂环胺的生成对提高烤制猪肉的安全性具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是通过制备一种新型的丁香提取物新型脂质体，替代传统香辛料粉末在食品烹饪中的使用，从而达到精确控制香辛料的用量，解决猪肉煎制过程中杂环胺类物质含量较高的问题。
为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种丁香提取物的制备方法，该制备方法包括：
将干制丁香粉与乙醇溶液混合均匀，再依次进行超声处理、闪式提取以及过滤，然后浓缩至完全去除乙醇溶液后进行冷冻干燥，制得丁香提取物。
根据本发明，优选地，所述乙醇溶液的浓度为0～70vol％；所述丁香粉与乙醇溶液的质量比为1：8～12；所述超声处理的温度为50～70℃，时间为10～15min；所述闪式提取的时间为5～15min；所述冷冻干燥的温度为-20℃至-10℃，时间为24～72h。
本发明第二方面提供利用上述制备方法制备的丁香提取物。
本发明第三方面提供一种丁香提取物脂质体的制备方法，所述制备方法包括：
(1)将上述丁香提取物制成浓度为0.1～0.3wt％的丁香提取物乙醇溶液；
(2)将大豆卵凝脂、胆固醇和乙醇充分混合后，再与PBS缓冲液以及步骤(1)中的丁香提取物乙醇溶液混合均匀，制得第一混合物；
(3)将第一混合物进行超声处理，直到形成O/W型乳剂，制得第二混合物；
(4)将第二混合物旋蒸挥除有机溶剂直到形成均匀的脂质膜，制得第三混合物；
(5)将第三混合物与磷酸盐缓冲液混合均匀，然后依次进行超声处理以及高速剪切，最后进行冷冻干燥，制得丁香提取物脂质体。
根据本发明，优选地，步骤(1)中所述丁香提取物乙醇溶液中乙醇溶液的浓度为0～70wt％。
根据本发明，优选地，步骤(2)中所述胆固醇与大豆卵凝脂的质量比为1：2.5～3.5；PBS缓冲液的浓度为0.08～0.12mol/L，pH值为6.5～7.2；以第一混合物总质量为基准，乙醇的含量为25～40wt％，PBS缓冲液的含量为50～70wt％，丁香提取物乙醇溶液的含量为5～10wt％。
根据本发明，优选地，步骤(3)中所述超声处理的温度为40～50℃。
根据本发明，优选地，步步骤(4)所述旋蒸的温度为35～45℃，一般地，旋蒸在旋转蒸发仪的水浴条件下进行，主要是为了挥除有机溶剂。
本发明中步骤(5)中需先将第三混合物与磷酸盐缓冲液混合均匀，制得乳状混悬液后再进行超声处理，其中，优选地，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.08～0.12mol/L，pH值为6.5～7.2，磷酸盐缓冲液与第三混合物的质量比为1：3～5；所述超声处理的温度为40～50℃，时间为5～15min；所述高速剪切的时间为20～40s；所述冷冻干燥的温度为-20℃至-10℃，时间为24～72h。
本发明第四方面提供一种利用上述制备方法制备的丁香提取物脂质体。
本发明第五方面提供一种丁香提取物脂质体在食品领域的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
(1)本发明采用酒精为溶剂溶解丁香粉，然后在超声处理后进行闪氏提取、冷冻干燥获得丁香提取物，提取效率高，使丁香中的有效成分得到了最大程度的有效保存。
(2)本发明采用逆向蒸发法制得了一种新型的丁香提取物脂质体产品，该丁香提取物脂质体的包封率可达35～45％，脂质体制备较成功。
(3)本发明通过制备丁香提取物新型脂质体，替代传统香辛料粉末在食品烹饪中的使用，提高了丁香的利用率，同时有效控制烹饪过程中杂环胺类物质的生成，解决了肉制品煎制过程中杂环胺类物质含量较高的问题，可操作性强。
本发明的其它特征和优点将在随后具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
通过结合附图对本发明示例性实施方式进行更详细的描述，本发明的上述以及其它目的、特征和优势将变得更加明显，其中，在本发明示例性实施方式中，相同的参考标号通常代表相同部件。
图1示出了本发明实施例1中的丁香提取物脂质体对杂环胺含量的影响。
附图标记说明：
1、MeIQx；2、4,8-DiMeIQx；3、harman；4、Norharman；5、PhIP；6、杂环胺含量ng/g。
具体实施方式
下面将更详细地描述本发明的优选实施方式。虽然以下描述了本发明的优选实施方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施方式所限制。
实施例
丁香提取物的制备：
将干制丁香粉与浓度为0～70vol％的乙醇溶液按照质量比1:10混合均匀，再在50～70℃的条件下进行10～15min的超声处理，然后闪式提取5～15min，过滤、浓缩至完全去除乙醇溶液后在-20℃至-10℃下冷冻干燥24～72h，制得丁香提取物。
丁香提取物脂质体的制备：
(1)将上述制得的丁香提取物制成浓度为0.1～0.3wt％的丁香提取物乙醇溶液，其中，乙醇溶液的浓度为0～70wt％。
(2)将大豆卵凝脂、胆固醇和乙醇充分混合后，再与PBS缓冲液以及步骤(1)中的丁香提取物乙醇溶液混合均匀，制得第一混合物；
其中，所述胆固醇与大豆卵凝脂的质量比为1：2.5～3.5；PBS缓冲液的浓度为0.08～0.12mol/L，pH值为6.8～7.2；以第一混合物总质量为基准，乙醇的含量为25～40wt％，PBS缓冲液的含量为50～70wt％，丁香提取物乙醇溶液的含量为5～10wt％。
(3)将第一混合物在40～50℃温度下进行超声处理，直到形成O/W型乳剂，制得第二混合物。
(4)旋转蒸发仪40℃水浴条件下将第二混合物旋蒸挥除有机溶剂直到形成均匀的脂质膜，制得第三混合物。
(5)将第三混合物与磷酸盐缓冲液混合均匀，然后依次进行超声处理以及高速剪切，最后进行冷冻干燥，制得丁香提取物脂质体，
其中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.08～0.12mol/L，pH值为6.5～7.2，磷酸盐缓冲液与第三混合物的质量比为1：3～5；所述超声处理的温度为40～50℃，时间为5～15min；所述高速剪切的时间为20～40s；所述冷冻干燥的温度为-10～-20℃，时间为24～72h。
测试例
取6份制得的丁香提取物脂质体样品进行包封率测定，包封率测定方法如下：
(1)取1mL丁香提取物脂质体样品，以4500r/min的速度离心处理30min，然后取上层清液与乙醇定容混合至10mL，对上述混合液进行全波长扫描，可知280nm时吸光度最高，测定280nm处吸光值Cf；
(2)取1mL丁香提取物脂质体样品，与乙醇定容混合至10mL，对上述样品进行全波长扫描，可知280nm时吸光度最高，测定280nm处吸光值Ct。
按照下列式1计算包封率EN：
EN＝(1-(Cf/Ct))×100％ 式1
| 名称 | 包封率％ |
| 样品1 | 35.1 |
| 样品2 | 37.5 |
| 样品3 | 43.7 |
| 样品4 | 39.8 |
| 样品5 | 38.6 |
| 样品6 | 45.2 |
由此可知，本发明制得的丁香提取物脂质体的包封率均在35～45％之间，具有较好的包封率。
丁香提取物脂质体对杂环胺含量的影响
将分别混有0.05wt％、0.10wt％、0.15wt％、0.20wt％、0.25wt％、0.30wt％丁香提取物脂质体的猪肉样品在220℃下煎制4min，然后分别称取4g煎制后的猪肉样品与0.1mol/L、16mL HCl以及0.1mol/L、16mL甲醇均质混合，在室温下超声提取30min后以10000r/min的速度离心处理10min，再使用固相萃取柱纯化，最后采用液相色谱法检测各煎制猪肉样品中杂环胺的含量，检测结果如图1所示。
由图1可知，丁香水提物脂质体对杂环胺harman、Norharman、PhIP生成具有明显的抑制效果，含0.30wt％丁香提取物脂质体的猪肉样品中，丁香提取物脂质体对PhIP生成抑制率为88.7％，对Norharman生成抑制率为56.4％，对harman生成抑制率为48.46％。含0.25wt％丁香提取物脂质体的猪肉样品中，丁香提取物脂质体对4，8-DiMeIQx生成抑制率为36.34％。由此可知本发明的丁香水提物脂质体能降低杂环胺含量，有效地解决了肉制品煎制过程中杂环胺类物质含量较高的问题。
以上已经描述了本发明的各实施例，上述说明是示例性的，并非穷尽性的，并且也不限于所披露的各实施例。在不偏离所说明的各实施例的范围和精神的情况下，对于本技术领域的普通技术人员来说许多修改和变更都是显而易见的。
Claims (10)
1.一种丁香提取物的制备方法，其特征在于，该制备方法包括：
将干制丁香粉与乙醇溶液混合均匀，再依次进行超声处理、闪式提取以及过滤，然后浓缩至完全去除乙醇溶液后进行冷冻干燥，制得丁香提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述乙醇溶液的浓度为0～70vol％；所述丁香粉与乙醇溶液的质量比为1：8～12；所述超声处理的温度为50～70℃，时间为10～15min；所述闪式提取的时间为5～15min；所述冷冻干燥的温度为-20℃至-10℃，时间为24～72h。
3.一种利用权利要求1或2所述的制备方法制备的丁香提取物。
4.一种丁香提取物脂质体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
(1)将权利要求3所述的丁香提取物制成浓度为0.1～0.3wt％的丁香提取物乙醇溶液；
(2)将大豆卵凝脂、胆固醇和乙醇充分混合后，再与PBS缓冲液以及步骤(1)中的丁香提取物乙醇溶液混合均匀，制得第一混合物；
(3)将第一混合物进行超声处理，直到形成O/W型乳剂，制得第二混合物；
(4)将第二混合物旋蒸挥除有机溶剂直到形成均匀的脂质膜，制得第三混合物；
(5)将第三混合物与磷酸盐缓冲液混合均匀，然后依次进行超声处理以及高速剪切，最后进行冷冻干燥，制得丁香提取物脂质体。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其中，步骤(1)中所述丁香提取物乙醇溶液中乙醇溶液的浓度为0～70wt％。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其中，步骤(2)中所述胆固醇与大豆卵凝脂的质量比为1：2.5～3.5；PBS缓冲液的浓度为0.08～0.12mol/L，pH值为6.5～7.2；以第一混合物总质量为基准，乙醇的含量为25～40wt％，PBS缓冲液的含量为50～70wt％，丁香提取物乙醇溶液的含量为5～10wt％。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其中，步骤(3)中所述超声处理的温度为40～50℃，步骤(4)所述旋蒸的温度为35～45℃。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其中，步骤(5)中所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.08～0.12mol/L，pH值为6.5～7.2，磷酸盐缓冲液与第三混合物的质量比为1：3～5；所述超声处理的温度为40～50℃，时间为5～15min；所述高速剪切的时间为20～40s；所述冷冻干燥的温度为-20℃至-10℃，时间为24～72h。
9.一种利用权利要求4-8中任意一项所述的制备方法制备的丁香提取物脂质体。
10.权利要求9所述的丁香提取物脂质体在食品领域的应用。
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2019
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