CN109917036B

CN109917036B - 庆大霉素普鲁卡因维b12胶囊中庆大霉素c组分含量的hplc-elsd检测方法

Info

Publication number: CN109917036B
Application number: CN201910230015.XA
Authority: CN
Inventors: 卢日刚; 朱健萍; 朱荣; 赵庄; 黄丽丽; 陈瀚; 谭菊英; 邓鸣
Original assignee: Guangxi Institute For Food And Drug Control
Current assignee: Guangxi Institute For Food And Drug Control
Priority date: 2019-03-26
Filing date: 2019-03-26
Publication date: 2022-04-01
Anticipated expiration: 2039-03-26
Also published as: CN109917036A

Abstract

本发明属于化学检测领域，具体涉及一种庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分含量的HPLC‑ELSD检测方法，包括（1）色谱条件与系统适用性试验（2）溶液制备（3）测定等步骤。该方法操作简单，检测效率高，误差小，检验方法较稳定，该方法的准确度、精密度、专属性、检测限、耐用性等均符合方法学验证要求，具有很强的实用性，能快速的检测出庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分的含量，从而有效的控制庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊的质量。

Description

庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分含量的HPLC- ELSD检测方法

技术领域

本发明属于化学检测领域，具体涉及一种庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分含量的HPLC-ELSD检测方法。

背景技术

庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊（曾用名胃炎胶囊，又名庆大霉素普鲁卡因胶囊，以下简称为“胶囊”））是由硫酸庆大霉素、盐酸普鲁卡因、维生素B12及适量辅料组成的复方口服制剂。其中，硫酸庆大霉素为氨基糖苷类抗生素，对各种革兰阴性细菌、革兰阳性细菌及幽门螺旋杆菌均有抗菌作用，可抑制幽门螺旋杆菌，在胃中发挥局部杀菌作用；盐酸普鲁卡为局麻药，可对损伤黏膜表面的神经末梢起封闭作用，阻断病灶对中枢神经系统的刺激，从而迅速缓解疼痛；维生素B12是形成消化道正常上皮细胞必需的物质。三者配合可起到抗菌、止痛和促进胃粘膜修复的作用，在临床上用于缓解急、慢性胃炎症状及消炎、止痛、促进胃黏膜修复。

庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊现行标准为《国家药品标准》化学药品地方标准上升国家标准（第六册）WS-10001-（HD-0524）-2002、国家食品药品监督管理局标准YBH15222004和国家食品药品监督管理局标准YBH20972006，三份标准中针对硫酸庆大霉素的检测项有硫酸盐的鉴别反应（WS-10001-（HD-0524）-2002）、薄层鉴别（YBH15222004、YBH20972006）和含量测定，无其组分的控制指标。硫酸庆大霉素为氨基糖苷类抗生素，是以庆大霉素C₁、C_1a、C₂、C_2a等组分为主的混合物，无紫外吸收。硫酸庆大霉素作为本品的主要药效成分之一，标准中缺少相应的检查项目，对于产品质量的控制来说是无疑是一个重大隐患。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术存在的不足而提供的一种庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分含量的HPLC-ELSD检测方法，采用该方法对庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分的含量进行测定，操作简单，检测效率高，误差小，能快速的检测出庆大霉素C组分的含量，从而有效的控制庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊的质量。

为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：

一种庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分含量的HPLC-ELSD检测方法，包括以下步骤：

（1）色谱条件与系统适用性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Shiseido ACR C18 4.6×250mm 5μm色谱柱，以甲醇为流动相A ，0.02mol/L三氟乙酸为流动相B，按表1进行梯度洗脱，流速1ml/min，柱温30℃，雾化温度为70℃，气流速度为1.6SLM，庆大霉素标准品溶液色谱图应与标准图谱一致；

（2）溶液制备：

硫酸庆大霉素标准品溶液的制备

取硫酸庆大霉素标准品100mg，精密称定，置于10mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取1、3、5mL，用水稀释至10mL，摇匀，制成浓度分别约为1mg/mL、3mg/mL、5mg/mL的标准品溶液①、②、③；

供试品溶液的制备：

取本品内容物混匀，称取适量，相当于平均装量，精密称定，精密加水5mL，振摇使硫酸庆大霉素溶解，过滤，取续滤液作为供试品溶液；

（3）测定:

精密量取标准品溶液①、②、③各20μL，照上述的色谱条件，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，计算标准品溶液各组分浓度对数值与相应峰面积对数值的线性回归方程，相关系数（r）不小于0.99；取供试品溶液同法测定，用庆大霉素各组分的线性回归方程分别计算供试品中对应组分的量（C_tcx），并按下面公式计算出各组分的含量（%，u/u）；

式中，Cx为庆大霉素各组分的含量％，u/u；C_tcx为由回归方程计算出的各组分的含量mg/ml；

为供试品平均装量g；W为供试品取样量mg；V为供试品稀释倍数；标示量以g计。

C₁应为标示量的15.3%～28.0%、，C_1a应为标示量的19.6%～48.0%，C_2a+C₂应为标示量的28.5%～63.8%，四个组分总含量不低于标示量85%。

本发明的有益效果为：

本发明提供的一种庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分含量的HPLC-ELSD检测方法，该方法操作简单，检测效率高，误差小，检验方法较稳定，本发明方法的准确度、精密度、专属性、检测限、耐用性等均符合方法学验证要求，具有很强的实用性，能快速的检测出庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分的含量，从而有效的控制庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊的质量。

附图说明

图1为采用本发明检测方法对47批次庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊样品进行测定得出的硫酸庆大霉素四组分总含量分布图；

图2为采用本发明检测方法对47批次庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊样品进行测定得出的硫酸庆大霉素C₁组分含量分布图；

图3为采用本发明检测方法对47批次庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊样品进行测定得出的硫酸庆大霉素C_1a组分含量分布图；

图4为采用本发明检测方法对47批次庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊样品进行测定得出的硫酸庆大霉素C₂+C_2a含量分布图；

图5为采用本发明检测方法对4家企业生产的庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊样品进行测定得出的4家企业样品硫酸庆大霉素总含量平均值对比图；

图6为采用本发明检测方法对4家企业生产的庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊样品进行测定得出的4家企业样品硫酸庆大霉素C_1a组分含量平均值对比图；

图7为采用本发明检测方法对4家企业生产的庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊样品进行测定得出的4家企业样品硫酸庆大霉素C₁组分含量平均值对比图；

图8为采用本发明检测方法对4家企业生产的庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊样品进行测定得出的4家企业样品硫酸庆大霉素C₂+C_2a组分含量平均值对比图；

图9为庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊剂中硫酸庆大霉素组分测定典型图谱。

具体实施方式

实施例1

一、一种庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分含量的HPLC-ELSD检测方法，包括以下步骤：

（1）色谱条件与系统适用性试验：

（2）溶液制备：

硫酸庆大霉素标准品溶液的制备

供试品溶液的制备：

（3）测定:

二、本发明庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分含量的HPLC-ELSD检测方法的方法学验证情况如下：

1、线性关系考察

取硫酸庆大霉素标准品（批号130326-201716，C1含量15.9%，C1a含量15.2%，C2含量16.9%，C2a含量10.3%；由中国食品药品检定研究院提供）200mg，精密称定，置于20mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取0.5、1、2.5、5、10mL，用水稀释至10mL，摇匀，制成浓度分别约为0.5μg/mL、1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL的线性工作溶液（1）、（2）、（3）、（4）、（5）。精密量取线性工作溶液（1）、（2）、（3）、（4）、（5）各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以各组分浓度对数值对相应峰面积对数值进行线性回归，结果见表2。结果表明庆大霉素各组分在相应浓度范围内线性关系良好。

2、仪器进样精密度考察

取上述线性工作溶液（3），连续进样5针， 4个组分的RSD分别为2.4%、3.4%、0.6%、2.4%，结果见表3。

3、溶液稳定性考察

取（海口奇力制药股份有限公司生产，批号171101）按本发明方法中供试品溶液的制备方法进行制备供试品溶液，在本发明方法中限定的色谱条件下检测，结果显示溶液中各组分在12小时内稳定性良好，C1a、C2、C2a、C1四个组分的RSD分别为2.0%、4.7%、6.2%、3.5%，结果见表4。

4、回收率考察

取硫酸庆大霉素（华北制药集团华栾有限公司生产，批号Q160604）适量，精密称定，分别加水溶解并制成浓度约为0.5mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL的标准品溶液L、M、H；

回收率考察溶液L：取庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊（海口奇力制药股份有限公司生产，批号171101）内容物混匀，称取适量（约相当于硫酸庆大霉素5mg），精密称定，精密加入10mL标准品溶液L，振摇使硫酸庆大霉素溶解，滤过，取续滤液。

回收率考察溶液M：称取内容物适量（约相当于硫酸庆大霉素10mg），精密称定，精密加入10mL标准品溶液M，振摇使硫酸庆大霉素溶解，滤过，取续滤液。

回收率考察溶液H：称取内容物适量（约相当于硫酸庆大霉素15mg），精密称定，精密加入10mL标准品溶液H，振摇使硫酸庆大霉素溶解，滤过，取续滤液。

每个浓度的回收率考察溶液平行制备3份，在本发明方法中限定的色谱条件下检测，结果见表5。结果表明回收率良好，方法可行。

5、重复性考察

取庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊（海口奇力制药股份有限公司生产，批号171101）内容物，按本发明方法中供试品溶液的制备方法制成重复性考察溶液6份，在本发明方法中限定的色谱条件下检测，结果见表6。结果显示重复性良好。

6、方法检出限和定量限考察

三、应用效果

1、采用本发明庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分含量的HPLC-ELSD检测方法对不同企业生产的47批次庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊样品进行检测，测定庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分含量的情况，

仪器与试药：Aglient 1260- ELSD 380高效液相色谱仪；电子天平METTLERXS205DU；硫酸庆大霉素标准品（批号130326-201716，C1含量15.9%，C1a含量15.2%，C2含量16.9%，C2a含量10.3%；由中国食品药品检定研究院提供）。

目前国内所有现行有效的硫酸庆大霉素制剂相关标准中只有中国药典收载的硫酸庆大霉素注射液收录有硫酸庆大霉素组分检查项，并规定：C₁应为标示量的15.3%～28.0%、，C_1a应为标示量的19.6%～48.0%，C_2a+C₂应为标示量的28.5%～63.8%，四个组分总含量不低于标示量85%，故以此作为参考对本次结果进行评价。测定结果见表7。

2、样品测定结果分析

总体分布情况： 47批次样品总含量平均值103.3%，含量范围111.5%～93.9%；C1a含量平均值33.2%，含量范围25.6%～39.6%；C1含量平均值22.2%，含量范围19.9%～27.0%；C2+C2a含量平均值47.9%，含量范围42.7%～54.5%，结果均符合规定，合格率为100%。47批次样品总含量和各组分含量分布图见图1～图4。

企业间数据比较：硫酸庆大霉素4个组分总含量海南天煌最大为108.5%，浙江天瑞最小为97.1%；C₁含量最大的是齐齐制药26.6%，最小海口奇力21.8%；C_1a含量最大的是齐齐制药36.6%，最小浙江天瑞29.0%； C₂+C_2a含量最大海南天煌51.0%，最小齐齐制药43.1%；4家企业样品硫酸庆大霉素4个组分总含量均大于85%，各组分含量均符合规定。4家企业样品总含量平均值与各组分含量平均值对比见表8和图5～图8。

3、硫酸庆大霉素原料组分测定结果与分析

2015年版中国药典硫酸庆大霉素庆大霉素C组分项规定：C₁应为14%～22%，C_1a应为10%～23%，C₂+C_2a应为17%～36%，四个组分总含量不得低于50.0%。对7家企业提供的7个批次硫酸庆大霉素原料进行测定，结果显示除浙江瑞新提供的由华北制药集团华栾有限公司生产的硫酸庆大霉素原料C1含量和总含量均低于规定限度外，其他API测定结果均符合规定，考虑到此次抽检未抽到浙江瑞新生产的样品，且提供的原料批号较早，不排除企业长期未生产对剩余原料保存不当导致含量测定不合格的情况。测定结果见表9。

上述可见，采用本发明庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分含量的HPLC-ELSD检测方法，操作简单，检测效率高，误差小，适用性广；采用该方法对各个企业生产的庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊进行检测，能够快速准确的检测出庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分的含量，从而有利于对各个企业生产的庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊样品的质量进行判定。

Claims

1.一种庆大霉素普鲁卡因维B12胶囊中庆大霉素C组分含量的HPLC-ELSD检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）色谱条件与系统适用性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Shiseido ACR C18 4.6×250mm 5μm色谱柱，以甲醇为流动相A ，0.02mol/L三氟乙酸为流动相B，按表1进行梯度洗脱，流速1ml/min，柱温30℃；

（2）溶液制备：

硫酸庆大霉素标准品溶液的制备

供试品溶液的制备：

（3）测定:

精密量取标准品溶液①、②、③各20μL，照上述的色谱条件，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，计算标准品溶液各组分浓度对数值与相应峰面积对数值的线性回归方程，相关系数r不小于0.99；取供试品溶液同法测定，用庆大霉素各组分的线性回归方程分别计算供试品中对应组分的量C_tcx，并按下面公式计算出各组分的含量Cx；

为供试品平均装量g；W为供试品取样量mg；V为供试品稀释倍数；标示量以g计；

步骤（1）色谱条件与系统适用性试验中，雾化温度为70℃，气流速度为1.6SLM。