CN117783334A - 德拉沙星葡甲胺起始物料中杂质的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种德拉沙星葡甲胺起始物料中杂质的检测方法，包括供试品溶液的配制、对照品溶液的配制和测定三个步骤。本发明的检测方法能够准确检测出起始物料3‑羟基氮杂环丁烷盐酸盐(式II)中杂质(式III)，且方法学验证结果显示本发明方法专属性、定量限与检测限、线性、进样精密度、溶液稳定性、中间精密度、准确度及耐用性均良好。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及德拉沙星葡甲胺合成过程中起始物料3-羟基氮杂环丁烷盐酸盐中杂质的检测方法。
背景技术
德拉沙星(Delafloxacin)是一种新型喹诺酮类抗生素，用于治疗急性细菌性皮肤和皮肤结构感染(ABSSSI)以及社区获得性细菌性肺炎(CABP)；其葡甲胺盐的化学结构如式I所示：
德拉沙星最早由Wakunaga制药开发，2006年，Rib-X(即现在的Melinta)获得该药的全球独家授权，并于2017年6月19日获美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市，商品名为目前，该药在国内尚未批准上市。
3-羟基氮杂环丁烷盐酸盐(式II)是合成德拉沙星葡甲胺的一种起始物料，在合成反应中，起始物料的杂质不可避免地会带入到德拉沙星葡甲胺产物中。因而，对于德拉沙星葡甲胺起始物料的检测或质量控制，对于制备德拉沙星葡甲胺、提高德拉沙星葡甲胺质量稳定性具有重要意义。
式III化合物为3-羟基氮杂环丁烷盐酸盐制备过程中的工艺杂质，式III化合物在紫外光区无特征紫外吸收，因此，为了准确测定该杂质含量，亟需提供一种新的检测方法。
发明内容
本发明的目的是为了解决以上现有技术的不足而提供一种德拉沙星葡甲胺起始物料3-羟基氮杂环丁烷盐酸盐中杂质(式III)的检测方法。
本发明的技术方案为：
德拉沙星葡甲胺起始物料中杂质的检测方法，先将杂质进行衍生化反应得到衍生化合物，再采用高效液相色谱进行检测，所述检测方法采用C18色谱柱，以流动相A和流动相B作为洗脱液进行梯度洗脱，所述流动相A为磷酸溶液，优选为0.05％～0.2％的磷酸溶液，更优选为0.09％～0.11％的磷酸溶液，最优选为0.1％的磷酸溶液，所述流动相B为乙腈；所述梯度洗脱条件包括：
其中，85≤a1≤95，45≤a2≤55，80≤a3≤95；25≤t1≤35，5≤t2≤15，0.1≤t3≤1，5≤t4≤15；
所述德拉沙星葡甲胺起始物料为：
所述杂质为：
所述杂质衍生化合物为：
优选地，所述C18色谱柱为Inertsil ODS-SP色谱柱，所述色谱柱的规格为内径4.6mm，长度150mm，填料粒径5μm。
进一步地，在本发明的某些实施例中，所述C18色谱柱还可以是Agilent Extend-C18色谱柱，所述色谱柱的规格为内径4.6mm，长度150mm，填料粒径5μm。
优选地，在本发明所述德拉沙星葡甲胺起始物料中杂质的检测方法中，还具有如下任选的色谱条件：
色谱柱温度为15～40℃，优选为20～30℃，和/或
流动相流速为0.7～1.3ml/min，优选为0.9～1.1ml/min，和/或
检测器采用紫外检测器，检测波长为225～235nm，优选为228～232nm。
在本发明的一个具体实施方案中，所述色谱柱温度为25℃；流动相流速为1.0ml/min；检测波长为230nm。
在本发明的一个具体实施方案中，a1＝90，a2＝50，a3＝90；t1＝30，t2＝10，0.1≤t3≤1，8≤t4≤12。
在本发明的一个具体实施方案中，a1＝90，a2＝50，a3＝90；t1＝30，t2＝10，t3＝1，t4＝9。
在本发明的一个具体实施方案中，所述杂质(式III)与对甲基苯磺酰氯反应得到所述杂质衍生化合物(式IV)。
在本发明的一个具体实施方案中，所述德拉沙星葡甲胺起始物料(式II)经N,N-二甲基乙酰胺溶解后，加入三乙胺乙腈溶液、对甲基苯磺酰氯溶液，室温下反应，将所述杂质(式III)与对甲基苯磺酰氯反应得到所述杂质衍生化合物(式IV)。
本领域技术人员应知晓的是，除上述紫外检测器外，本发明的分析方法还可以灵活选用常用的其他类型高效液相色谱检测器，如荧光检测器、电化学检测器、示差检测器、蒸发光散射检测器、电导检测器、质谱检测器、电雾式检测器等。
具体地，本发明提供的德拉沙星葡甲胺起始物料中杂质的检测方法，包括供试品溶液的配制、对照品溶液的配制和测定三个步骤。
所述供试品溶液的配制包括：取德拉沙星葡甲胺起始物料10mg，置容器中，量入N,N-二甲基乙酰胺1ml，溶解，再分别加入三乙胺乙腈溶液和对甲基苯磺酰氯溶液，摇匀，于室温下反应，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，作为供试品溶液。
所述对照品溶液的配制包括：取杂质对照品适量，加N,N-二甲基乙酰胺溶解并稀释制成每1ml中含杂质30μg的溶液，作为对照品母液。量取对照品母液1ml，置容器中，再分别加入三乙胺乙腈溶液和对甲基苯磺酰氯溶液，摇匀，于室温条件下反应，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液。
所述测定步骤包括：量取供试品溶液与对照品溶液分别注入色谱仪，记录色谱图，按外标法计算各杂质检出量。
优选地，上述供试品溶液和对照品溶液配制过程中三乙胺乙腈溶液为3％三乙胺乙腈溶液，溶液配制方法为：取三乙胺3ml，置100ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀；所述三乙胺乙腈溶液的体积为1.75ml～2.2ml，更优选为2ml。
优选地，上述供试品溶液和对照品溶液配制过程中对甲基苯磺酰氯溶液配制方法为：取对甲基苯磺酰氯适量，加丙酮1ml溶解；所述对甲基苯磺酰氯的质量为415mg～500mg，更优选为450mg。
优选地，上述供试品溶液和对照品溶液配制过程中反应时间分别为40～60min，优选为50min。
本发明中，“室温”指15-25℃。
有益效果：
本发明提供的德拉沙星葡甲胺起始物料中杂质的检测方法，能够准确检测出起始物料3-羟基氮杂环丁烷盐酸盐(式II)中杂质(式III)，杂质及主峰理论板数均能满足药典要求，而且方法学验证结果显示本发明方法专属性、定量限与检测限、线性、进样精密度、溶液稳定性、中间精密度、准确度及耐用性均良好，为控制德拉沙星葡甲胺原料药及其制剂的质量提供了有效准确的检测方法。
附图说明
图1为实施例2中杂质(式III化合物)检查专属性试验结果；
图2为实施例2中杂质(式III化合物)检查线性回归曲线；
图3为实施例2中杂质(式III化合物)检查耐用性试验图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
仪器及试剂与试药信息：
1.仪器
2.试剂与试药
实施例1分析方法优化
本实施例对参与反应的对甲苯磺酰氯(PTSC)、三乙胺用量和反应时间进行了优化考察。
1、仪器及色谱条件
仪器：Ultimate3000高效液相色谱仪
色谱柱：Inertsil ODS-SP(4.6×150mm，5μm)
流动相A：0.1％磷酸
流动相B：乙腈
检测波长：230nm
流速：1.0ml/min
柱温：25℃
进样盘温度：10℃
进样量：10μl
洗脱梯度：
2、实验步骤及结果
溶液配制：
三乙胺乙腈溶液：取三乙胺3ml，置100ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀；
对照品贮备液：称取式III化合物对照品约3.5mg，精密称定，置10ml量瓶，加3％三乙胺乙腈溶液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；
对照品母液：精密量取对照品贮备液1ml，置10ml量瓶，加3％三乙胺乙腈溶液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品母液。
(1)三乙胺用量考察
取式II化合物(批号：PB00224-01-507-200801)约10mg，置10ml离心管中，量入N,N-二甲基乙酰胺1ml，超声溶解，平行配制三份，分别加入对照品贮备液各1ml，再分别加入3％三乙胺乙腈溶液0.75ml、1.0ml和1.2ml，摇匀，加入对甲苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约270mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液1～3。精密量取供试品溶液，注入色谱仪，记录色谱图。如下表1所示。
表1三乙胺用量考察
| 三乙胺用量(ml) | 衍生化合物峰面积 |
| 0.0525 | 3.507 |
| 0.060 | 3.595 |
| 0.066 | 3.068 |
结果表明，三乙胺用量在0.0525ml～0.066ml，衍生化反应后衍生物(式IV)的峰面积未有明显变化。
(2)对甲苯磺酰氯(PTSC)用量考察
取式II化合物(批号：PB00224-01-507-200801)约10mg，置10ml离心管中，量入N,N-二甲基乙酰胺1ml，超声溶解，平行配制三份，分别加入对照品贮备液和3％三乙胺乙腈溶液各1ml，摇匀，再各加入不同用量的对甲苯磺酰氯溶液(对甲苯磺酰氯的称样量见表2所示，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液4～7。精密量取供试品溶液，注入色谱仪，记录色谱图。结果见表2所示。
表2对甲苯磺酰氯用量考察
结果表明，对甲苯磺酰氯用量在415mg～500mg，衍生化反应后衍生物(式IV)的峰面积未有明显变化。
(3)反应时间考察
取式II化合物(批号：PB00224-01-507-200801)约10mg，置10ml离心管中，量入N,N-二甲基乙酰胺1ml，超声溶解，平行配制两份，分别加入对照品母液和3％三乙胺乙腈溶液各1ml，摇匀，再加入对甲苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，分别于25℃条件下反应40min和60min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液8～9。精密量取供试品溶液，注入色谱仪，记录色谱图。结果见表3所示。
表3衍生化反应时间考察
| 时间(min) | 衍生化合物峰面积 |
| 40 | 0.439 |
| 60 | 0.392 |
结果表明，衍生化反应时间在40min～60min，衍生化反应后衍生物(式IV)的峰面积未有明显变化。
通过上述对甲苯磺酰氯(PTSC)、三乙胺用量，反应时间进行了优化考察，我们选择对甲苯磺酰氯(PTSC)最适合用量为450mg，三乙胺的最适合用量为0.060ml，于25℃条件下反应时间为50min。
实施例2方法学验证
在实施例1所得优选条件的基础上进行方法学验证。
仪器及色谱条件
仪器：Ultimate3000高效液相色谱仪
色谱柱：Inertsil ODS-SP(4.6×150mm，5μm)
流动相A：0.1％磷酸
流动相B：乙腈
检测波长：230nm
流速：1.0ml/min
柱温：25℃
进样盘温度：10℃
进样量：10μl
洗脱梯度：
(1)专属性
三乙胺乙腈溶液：取三乙胺3ml，置100ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀。
称取式III化合物对照品约2mg，精密称定，置10ml量瓶，加N,N-二甲基乙酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密量取对照品贮备液3ml，置20ml量瓶，加N,N-二甲基乙酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品母液。
称取对甲苯磺酰氯约450mg，置10ml离心管中，加入丙酮1ml溶解，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和N,N-二甲基乙酰胺1ml，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为空白溶液。
精密量取对照品贮备液1ml，置10ml离心管中，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲基苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液1。
精密量取对照品母液1ml，置10ml离心管中，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲基苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液2。
取式II化合物(批号：PB00224-01-507-200801)约10mg，置10ml离心管中，量入N,N-二甲基乙酰胺1ml，超声溶解，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲基苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
精密量取空白溶液、对照品溶液和供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表4和图1。
表4式III化合物检查专属性试验结果
结果表明，溶剂和供试品溶液均不干扰衍生物的出峰。衍生物在228.79nm有较大吸收，本方法选择230nm作为最佳波长。
(2)检测限与定量限
取专属性项下的对照品溶液2适量，加乙腈稀释制成适宜浓度的溶液，将信噪比约为10:1时作为定量限，信噪比约为3:1时作为检测限。取定量限浓度溶液，连续进样6次，考察进样精密度，结果见表5。
表5式III化合物检查检测限与定量限测定结果
结果表明，本方法定量限进样精密度较好。
(3)线性与范围
取专属性项下的对照品贮备液各适量，分别用N,N-二甲基乙酰胺稀释成每1ml中含式III化合物约20μg和60μg的溶液，作为对照品母液1和对照品母液2。
精密量取1ml对照品母液1，置10ml离心管中，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，平行配制三份，分别转移至200ml量瓶、100ml量瓶和50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为线性溶液1～3。
精密量取1ml对照品母液2，置10ml离心管中，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，平行配制两份，分别转移至100ml量瓶和50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为线性溶液4～5。
精密量取各对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度C(μg/ml)为横坐标(x)，峰面积A为纵坐标(y)，进行线性回归。结果见表6和图2。
表6式III化合物检查线性关系考察结果
结果表明，式III化合物在0.05％～0.6％范围内线性关系良好。
(4)进样精密度
取“线性与范围”项下线性溶液4，连续进样6次，考察峰面积的RSD。结果见表7。
表7式III化合物检查进样精密度试验结果
结果表明，本方法进样精密度良好。
(5)溶液稳定性
取专属性项下的对照品贮备液各适量，用N,N-二甲基乙酰胺稀释成每1ml中含式III化合物约30μg的溶液，作为对照品母液。精密量取对照品母液1ml，置10ml离心管中，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲基苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
取式II化合物(批号：PB00224-01-507-200801)约10mg，置10ml离心管中，量入N,N-二甲基乙酰胺1ml，超声溶解，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲基苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照品溶液和供试品溶液均于10℃放置，分别于0，4，8，12，16，24，28和41小时取样测定，考察溶液稳定性，结果见表8。
表8式III化合物检查溶液稳定性试验结果
结果表明，对照品溶液与供试品溶液在10℃条件下放置41小时，溶液稳定性良好。
(6)重复性
称取对甲苯磺酰氯约450mg，至10ml离心管中，加入丙酮1ml溶解，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和N,N-二甲基乙酰胺1ml，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为空白溶液。
取式II化合物(批号：PB00224-01-507-200801)约10mg，精密称定，置10ml离心管中，量入N,N-二甲基乙酰胺1ml，超声溶解，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲基苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，平行配制6份。
称取式III化合物对照品约6mg，精密称定，置20ml量瓶，加N,N-二甲基乙酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密量取对照品贮备液2ml，置20ml量瓶，加N,N-二甲基乙酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品母液。精密量取对照品母液1ml，置至10ml离心管中，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲基苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
取空白溶液、供试品溶液与对照品溶液分别进样测定，按外标法以峰面积计算，结果见表9。
表9式III化合物检查重复性试验结果
结果表明，本法的重复性较好。
(7)中间精密度
为验证本法的中间精密度，由不同人，使用不同仪器，在不同日期重新进行一组重复性试验，按外标法计算12份供试品溶液中式III化合物的含量，并计算RSD，结果见表10。
表10式III化合物检查中间精密度试验结果
结果表明，本法中间精密度良好。
(8)准确度
对照品母液1：精密量取重复性项下的对照品贮备液2ml，置20ml量瓶，加N,N-二甲基乙酰胺稀释至刻度，摇匀；
对照品母液2：精密量取4ml对照品母液1，置20ml量瓶，加N,N-二甲基乙酰胺稀释至刻度，摇匀；
对照品母液3：精密量取重复性项下的对照品贮备液4ml，置20ml量瓶，加N,N-二甲基乙酰胺稀释至刻度，摇匀；
取式II化合物(批号：PB00224-01-507-200801)约10mg，精密称定，置10ml离心管中，精密量入1ml对照品母液2，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲基苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，平行配制3份，分别作为供试品溶液1～3。
取式II化合物(批号：PB00224-01-507-200801)约10mg，精密称定，置10ml离心管中，精密量入1ml对照品母液1，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲基苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，平行配制3份，分别作为供试品溶液4～6。
取式II化合物(批号：PB00224-01-507-200801)约10mg，精密称定，置10ml离心管中，精密量入1ml对照品母液3，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲基苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，平行配制3份，分别作为供试品溶液7～9。
取供试品溶液与对照品溶液分别进样测定，按外标法以峰面积计算，结果见表11。
表11式III化合物检查准确度试验结果
结果表明，本法的准确度较好。
(9)耐用性
取式II化合物(批号：PB00224-01-507-200801)约10mg，精密称定，置10ml离心管中，量入N,N-二甲基乙酰胺1ml，超声溶解，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲基苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
取重复性项下的对照品母液1ml，置10ml离心管中，量入N,N-二甲基乙酰胺1ml，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲基苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
考察柱温、流速、磷酸浓度、色谱柱发生微小变化时，对供试品中式III化合物测定的影响，以考察本品色谱条件的耐用性。耐用性条件设计见表12，结果见表13。
表12式III化合物检查耐用性试验考察因素
表13式III化合物检查耐用性试验结果
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注：*理论塔板数-为每个条件下对照品溶液1-1色谱图中主峰的理论塔板数
结果表明，柱温、流速、磷酸浓度、色谱柱等发生微小变化对本品的含量测定无明显影响。
综上，经过专属性、定量限与检测限、线性、进样精密度、溶液稳定性、中间精密度、准确度及耐用性等方法学研究，表明本法可行，适用于起始物料(式II)中杂质式III化合物的检查。
实施例3样品检验
1、仪器及色谱条件
仪器：Ultimate3000高效液相色谱仪
色谱柱：Inertsil ODS-SP(4.6×150mm，5μm)
流动相A：0.1％磷酸
流动相B：乙腈
检测波长：230nm
流速：1.0ml/min
柱温：25℃
进样盘温度：10℃
进样量：10μl
洗脱梯度：
2、实验步骤及结果
取式II化合物约10mg，精密称定，置10ml离心管中，量入N,N-二甲基乙酰胺1ml，超声溶解，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲基苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
取式III化合物对照品适量，精密称定，加N,N-二甲基乙酰胺溶解并稀释制成每1ml中含式III化合物约30μg的溶液，作为对照品母液。精密量取对照品母液1ml，置10ml离心管中，再分别加入三乙胺乙腈溶液2ml和对甲基苯磺酰氯溶液(取对甲苯磺酰氯约450mg，加丙酮1ml溶解)，使用涡旋仪摇匀约30s，于25℃条件下反应50min，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，在拟定的式III化合物检查色谱条件下进样测定，记录色谱图，按外标法计算各杂质检出量。结果见表14。
表14式III化合物检查结果
| 杂质名称 | PB00224-01-507-200801 | PB00224-01-21007 |
| 式III化合物 | 0.071％ | 0.11％ |
由多批次样检结果可得，式III化合物的检出量为0.071％～0.11％。
Claims (10)
1.德拉沙星葡甲胺起始物料中杂质的检测方法，其特征在于，先将杂质进行衍生化反应得到衍生化合物，再采用高效液相色谱进行检测；所述检测方法采用C18色谱柱，以流动相A和流动相B作为洗脱液进行梯度洗脱；所述流动相A为磷酸溶液，优选为0.05％～0.2％的磷酸溶液，更优选为0.09％～0.11％的磷酸溶液，最优选为0.1％的磷酸溶液；所述流动相B为乙腈；所述梯度洗脱条件包括：
其中，85≤a1≤95，45≤a2≤55，80≤a3≤95；25≤t1≤35，5≤t2≤15，0.1≤t3≤1，5≤t4≤15；
所述德拉沙星葡甲胺起始物料为：
所述杂质为：
所述杂质衍生化合物为：
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述C18色谱柱为InertsilODS-SP色谱柱，所述色谱柱的规格为内径4.6mm，长度150mm，填料粒径5μm。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述C18色谱柱为Agilent Extend-C18色谱柱，所述色谱柱的规格为内径4.6mm，长度150mm，填料粒径5μm。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还具有如下任选的色谱条件：
色谱柱温度为15～40℃，优选为20～30℃，和/或
流动相流速为0.7～1.3ml/min，优选为0.9～1.1ml/min，和/或
检测器采用紫外检测器，检测波长为225～235nm，优选为228～232nm。
5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱温度为25℃；流动相流速为1.0ml/min；检测波长为230nm。
6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，a1＝90，a2＝50，a3＝90；t1＝30，t2＝10，0.1≤t3≤1，8≤t4≤12。
7.如权利要求1中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述杂质(式III)与对甲基苯磺酰氯反应得到所述杂质衍生化合物(式IV)。
8.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述德拉沙星葡甲胺起始物料(式II)经N,N-二甲基乙酰胺溶解后，加入三乙胺乙腈溶液、对甲基苯磺酰氯溶液，室温下反应，将所述杂质(式III)与对甲基苯磺酰氯反应得到所述杂质衍生化合物(式IV)。
9.如权利要求1-8中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括供试品溶液的配制、对照品溶液的配制和测定三个步骤：
所述供试品溶液的配制包括：取德拉沙星葡甲胺起始物料10mg，置容器中，量入N,N-二甲基乙酰胺1ml，溶解，再分别加入三乙胺乙腈溶液和对甲基苯磺酰氯溶液，摇匀，于室温下反应，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，作为供试品溶液；
所述对照品溶液的配制包括：取杂质对照品适量，加N,N-二甲基乙酰胺溶解并稀释制成每1ml中含杂质30μg的溶液，作为对照品母液；量取对照品母液1ml，置容器中，再分别加入三乙胺乙腈溶液和对甲基苯磺酰氯溶液，摇匀，于室温条件下反应，转移至50ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液；
所述测定步骤包括：量取供试品溶液与对照品溶液分别注入色谱仪，记录色谱图，按外标法计算各杂质检出量。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，
供试品溶液和对照品溶液配制过程中所述三乙胺乙腈溶液为3％三乙胺乙腈溶液；所述三乙胺乙腈溶液的体积为1.75ml～2.2ml，优选为2ml；
供试品溶液和对照品溶液配制过程中所述对甲基苯磺酰氯溶液配制方法为：取对甲基苯磺酰氯适量，加丙酮1ml溶解；所述对甲基苯磺酰氯的质量为415mg～500mg，优选为450mg；
供试品溶液和对照品溶液配制过程中反应时间分别为40～60min，优选为50min。
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