CN109852656A - 一种燕窝多肽粉及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及燕窝加工领域，具体涉及一种燕窝多肽粉及其制备方法，该燕窝多肽粉的制备方法包括对燕窝进行粉碎和细胞破碎的预处理，对燕窝匀浆进行二次酶解以及用反渗透膜和膜过滤设备对酶解上清液进行分离纯化；从而提高燕窝多肽的得率和纯度，并充分利用燕窝原料，节约成本。

Description

一种燕窝多肽粉及其制备方法

技术领域

本发明涉及燕窝加工技术领域，具体涉及一种燕窝多肽粉及其制备方法。

背景技术

燕窝又称燕菜、燕根、燕蔬菜，是指雨燕科的部分雨燕和金丝燕属的几种金丝燕分泌 出来的唾液，再混合其他物质所筑成的巢穴。燕窝是中国自明代以来开始被食用的传统名 贵食品之一。《本经逢原》谓：“燕窝，甘平无毒，能金水相生，肾气上滋于肺，而胃气亦 得而安，今人以之调补虚劳，咳吐红痰”。研究证明，燕窝中的主要成分有水溶性蛋白质、 碳水化合物、微量元素：钙、磷、铁、钠、钾及对促进人体活力起重要作用的氨基酸(赖 氨酸、胱氨酸和精氨酸)。因此，随着人民生活水平的提高，越来越多的消费者选择燕窝作 为高级滋补品，用于滋阴润肺、护肤养颜、提高免疫力等保健调养。

目前燕窝的加工方式主要是以蒸煮的粗加工方式，这种方式得到的燕窝产品中基本保 持原有大分子蛋白质结构，由于蛋白质分子量太大，无法被人体完全吸收，使得燕窝的吸 收效率较低，因此一些研究者进一步探究了燕窝深加工的方式，通过提取出燕窝中的营养 成分，用以制备天然产物，或是以此为基础开发饮料。研究表明，燕窝中含有丰富的燕窝 多肽，具有较好的生物活性，并且可以充分发挥燕窝的功效性。为此，提取制备燕窝多肽也成为了热点。

在现有技术中，通常采用水提法和酶解法来制备燕窝多肽，但所制得的燕窝多肽产率 低，纯度低，含有较多的杂质。

发明内容

本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：

现有技术中，用酶解法来制备燕窝多肽，其蛋白质的酶解时间在5小时以上，降解后 的沉淀物会被直接丢弃，并且没有对所得到的燕窝酶解液进行纯化，无法保证燕窝小分子 多肽产品的纯度。进一步地，发明人发现，燕窝在没有经过粉碎和超声破碎处理的条件下， 燕窝的降解率和水解度都偏低，对沉淀物进行分析，发现还有大量未被蛋白酶降解的燕窝 底物。接着，发明人通过增长酶解时间和增加蛋白酶量，但是最终沉淀物仍存在大量未被 降解的燕窝底物，也就是说，在一次蛋白酶解过程中，不管是增加蛋白酶量，还是延长酶 解时间，对于燕窝的降解率和水解度，上升的幅度都不大，因此酶解沉淀物被大量丢弃。

有鉴于此，在本发明的第一方面，本发明提出了一种燕窝多肽粉的制备方法，其包括 以下步骤：

(1)将燕窝粉碎成燕窝粉末，燕窝粉末按照1:15的料液比加水浸泡，再用细胞破碎仪 进行破碎处理，以便得到燕窝匀浆；

(2)向所述燕窝匀浆中加入3％的所述燕窝粉末重量的蛋白酶，酶解3h，沸水浴中灭 活酶，离心处理，以便得到酶解上清液Y1和沉淀物Y2；

(3)取所述沉淀物Y2与水按照1:20的料液比重悬成燕窝重悬液，再向燕窝重悬液加 入1％的所述燕窝粉末重量的蛋白酶，酶解2h，沸水浴中灭活酶，离心处理，以便得到酶解 上清液Y3和沉淀物Y4；

(4)合并所述酶解上清液Y1和酶解上清液Y3，以便得到酶解上清液Y5；

(5)将所述酶解上清液Y5用反渗透膜进行脱盐处理，再用膜过滤设备进行过滤处理， 以便得到燕窝多肽纯化液；

(6)将所述燕窝多肽纯化液冷冻干燥，以便得到燕窝多肽粉。

本发明采用粉碎和细胞破碎，酶解工艺和膜过滤技术，将燕窝烘干后进行粉碎、超声 波破碎，使得燕窝细胞充分破碎，有利于内容物充分释放出来，利用分步二次酶解，进一步将离心后的燕窝沉淀物中残留的蛋白质转化成多肽，提高了多肽的提取率，通过膜过滤设备脱去溶液中的无机盐和分离出小分子的燕窝多肽，提高了燕窝粉的纯度，同时避免无机盐对产品口感和风味的影响，充分利用燕窝原料，节约了成本，且操作简单。

另外，根据本发明上述实施例提出的燕窝多肽粉的制备方法，还可以具有如下附加的 技术特征：

作为优选，在步骤(2)中，调节所述燕窝匀浆的pH至2～9后，再酶解处理。

作为优选，在步骤(3)中，调节所述燕窝重悬液的pH至2～9后，再酶解处理。

作为优选，在步骤(1)中，所述细胞破碎仪采用超声细胞破碎仪，所述超声细胞破碎 仪的超声频率为40KHz，超声功率为200w，超声破碎20min。

作为优选，在步骤(2)和步骤(3)中，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶，菠萝蛋白酶，胰 蛋白酶，胃蛋白酶，中性蛋白酶，碱性蛋白酶、风味蛋白酶中的一种或几种。

作为优选，在步骤(5)中，所述膜过滤设备的膜通量为3KDa。

作为优选，在步骤(2)中，离心处理是在8000r/min条件下离心15min。

作为优选，在步骤(3)中，离心处理是在8000r/min条件下离心15min。

在本发明的第二方面，本发明提出了一种利用上述燕窝多肽粉的制备方法制备的燕窝 多肽粉。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的技术方案。应理解，本发明提到的一个或多个 方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间 还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明 的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非 为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在 无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。

为了更好的理解上述技术方案，下面将更详细地描述本发明的示例性实施例。虽然显 示了本发明的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐 述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将 本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。

本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。

本发明工艺流程：

燕窝→烘干→高速粉碎→加水浸泡→超声破碎→第一次酶解→第二次酶解→分离纯化 →冷冻干燥，即可。

各成分的检测方法如下：

燕窝多肽的提取率：采用甲醛滴定法测定酶解液中的水解度，水解度越高说明多肽含 量的提取率越高。

甲醛滴定法：

在小烧杯中量取蛋白酶解液5.0mL并加入60mL蒸馏水混合均匀，采用0.2mol/L标准NaOH溶液调节酶解稀释液至pH 8.2，再加入pH 8.2的甲醛溶液20mL，最后用0.1mol/L 标准NaOH溶液滴定，记录pH滴至9.2时所消耗的标准NaOH溶液的体积。

计算公式：

式中：

ΔV：滴定样品与滴定蛋白原液所消耗的标准NaOH溶液体积之差；

C：NaOH标准溶液浓度(mol/L)；

W：原料克数(g)；

V_tot：酶解液的总体积(mL)；

V：滴定取用的酶解液体积(mL)；

n_o：水解前每克蛋白游离的氨基毫摩尔数(mmol/g)；

n：水解后每克蛋白游离的氨基毫摩尔数(mmol/g)；

h_tot：原料蛋白质中所含肽键总数(mmol/g)；

Pro％：样品的蛋白质含量；

110：氨基酸平均分子量。

燕窝粉的降解率：

燕窝粉的降解率计算公式如下：

唾液酸含量的测定：

通过GB 3.636-2014中华人民共和国国家标准燕窝及其制品中唾液酸的测定液相色谱 法测定燕窝原液中的唾液酸含量，以评估唾液酸的含量。

燕窝多肽的纯度：

燕窝多肽的纯度计算公式如下

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1燕窝多肽粉的制备

预处理：

称取1kg燕窝在50℃下烘2h，得干燕窝，干燕窝放入高速粉碎机中粉碎成燕窝粉末， 然后按照料液比1:15将燕窝粉末加入水中浸泡，再用超声波细胞破碎仪进行破碎处理，其 中，设定超声频率为40KHz，超声功率为200w，超声破碎20min，以便得到燕窝匀浆。

分步二次酶解：

称取64g的燕窝匀浆(内含4g干燕窝粉和60g水，即1:15)，加入120mg胰蛋白酶， 混合均匀，用1mol/L和0.1mol/L的碳酸钠溶液调节燕窝匀浆的pH至8，在37℃下酶解3h， 得到酶解液A；接着，将酶解液A置于沸水浴中灭活10min，将酶灭活，在8000r/min条件 下离心处理15min，以便得到酶解上清液Y1和沉淀物Y2。

将所述沉淀物Y2加入40g的水中使之重悬，形成燕窝重悬液，在燕窝重悬液中加入40mg碱性蛋白酶(该碱性蛋白酶由地衣芽孢杆菌常规发酵而得)，混合均匀，用1mol/L和0.1mol/L的碳酸钠溶液调节燕窝匀浆的pH至8，在50℃下酶解2h，得到酶解液B；接着， 将酶解液B置于沸水浴中灭活10min，将酶灭活，在8000r/min条件下离心处理15min，以 便得到酶解上清液Y3和沉淀物Y4；弃去所述沉淀物Y4，合并所述酶解上清液Y1和酶解 上清液Y3，以便得到酶解上清液Y5。

分离纯化：

将所述酶解上清液Y5用反渗透膜进行脱盐处理，再用膜通量为3KDa的膜过滤设备进 行过滤处理，以便得到燕窝多肽纯化液。

冷冻干燥：

将所述燕窝多肽纯化液进行冷冻干燥，以便得到燕窝多肽粉。

检测结果

唾液酸含量为：10.1％；燕窝粉的降解率为82％；燕窝多肽的提取率为78％；燕窝多肽 的纯度为：92％。燕窝多肽粉的水溶性良好，风味有燕窝的蛋白香味，无苦涩味。

实施例2燕窝多肽粉的制备

预处理：

称取1kg燕窝在50℃下烘2h，得干燕窝，干燕窝放入高速粉碎机中粉碎成燕窝粉末， 然后按照料液比1:15将燕窝粉末加入水中浸泡，再用超声波细胞破碎仪进行破碎处理，其 中，设定超声频率为40KHz，超声功率为200w，超声破碎20min，以便得到燕窝匀浆。

分步二次酶解：

称取64g的燕窝匀浆(内含4g干燕窝粉和60g水，即1:15)，加入120mg胰蛋白酶， 混合均匀，用1mol/L和0.1mol/L的碳酸钠溶液调节燕窝匀浆的pH至6，在37℃下酶解3h， 得到酶解液A；接着，将酶解液A置于沸水浴中灭活10min，将酶灭活，在8000r/min条件 下离心处理15min，以便得到酶解上清液Y1和沉淀物Y2。

将所述沉淀物Y2加入40g的水中使之重悬，形成燕窝重悬液，在燕窝重悬液中加入40mg碱性蛋白酶(该碱性蛋白酶由地衣芽孢杆菌常规发酵而得)，混合均匀，用1mol/L和0.1mol/L的碳酸钠溶液调节燕窝匀浆的pH至6，在50℃下酶解2h，得到酶解液B；接着， 将酶解液B置于沸水浴中灭活10min，将酶灭活，在8000r/min条件下离心处理15min，以 便得到酶解上清液Y3和沉淀物Y4；弃去所述沉淀物Y4，合并所述酶解上清液Y1和酶解 上清液Y3，以便得到酶解上清液Y5。

分离纯化：

将所述酶解上清液Y5用反渗透膜进行脱盐处理，再用膜通量为3KDa的膜过滤设备进 行过滤处理，以便得到燕窝多肽纯化液。

冷冻干燥：

将所述燕窝多肽纯化液进行冷冻干燥，以便得到燕窝多肽粉。

检测结果

唾液酸含量为：10.3％；燕窝多肽的纯度为：90％；燕窝粉的降解率为80％；燕窝多肽的提取率为75％。燕窝多肽粉的水溶性良好，风味有燕窝的蛋白香味，无苦涩味。

实施例3燕窝多肽粉的制备

预处理：

称取1kg燕窝在50℃下烘2h，得干燕窝，干燕窝放入高速粉碎机中粉碎成燕窝粉末， 然后按照料液比1:15将燕窝粉末加入水中浸泡，再用超声波细胞破碎仪进行破碎处理，其 中，设定超声频率为40KHz，超声功率为200w，超声破碎20min，以便得到燕窝匀浆。

酶解：

称取64g的燕窝匀浆(内含4g干燕窝粉和60g水，即1:15)，加入120mg胰蛋白酶和40mg的碱性蛋白酶(该碱性蛋白酶由地衣芽孢杆菌常规发酵而得)，混合均匀，用1mol/L 和0.1mol/L的碳酸钠溶液调节燕窝匀浆的pH至8，在37℃下酶解5h，得到酶解液；接着， 将酶解液置于沸水浴中灭活10min，将酶灭活，在8000r/min条件下离心处理15min，以便 得到酶解上清液和沉淀物。

分离纯化：

将所述酶解上清液用反渗透膜进行脱盐处理，再用膜通量为3KDa的膜过滤设备进行过 滤处理，以便得到燕窝多肽纯化液。

冷冻干燥：

将所述燕窝多肽纯化液进行冷冻干燥，以便得到燕窝多肽粉。

检测结果

唾液酸含量为：7.1％；燕窝粉的降解率为65％；燕窝多肽的提取率为60％；燕窝多肽 的纯度为：86％。

实施例4燕窝多肽粉的制备

预处理：

称取1kg燕窝在50℃下烘2h，得干燕窝，干燕窝放入高速粉碎机中粉碎成燕窝粉末， 然后按照料液比1:15将燕窝粉末加入水中浸泡，以便得到燕窝溶液。

分步二次酶解：

称取64g的燕窝溶液(内含4g干燕窝粉和60g水，即1:15)，加入120mg胰蛋白酶， 混合均匀，用1mol/L和0.1mol/L的碳酸钠溶液调节燕窝匀浆的pH至8，在37℃下酶解3h， 得到酶解液A；接着，将酶解液A置于沸水浴中灭活10min，将酶灭活，在8000r/min条件 下离心处理15min，以便得到酶解上清液Y1和沉淀物Y2。

将所述沉淀物Y2加入40g的水中使之重悬，形成燕窝重悬液，在燕窝重悬液中加入40mg碱性蛋白酶(该碱性蛋白酶由地衣芽孢杆菌常规发酵而得)，混合均匀，用1mol/L和0.1mol/L的碳酸钠溶液调节燕窝匀浆的pH至8，在50℃下酶解2h，得到酶解液B；接着， 将酶解液B置于沸水浴中灭活10min，将酶灭活，在8000r/min条件下离心处理15min，以 便得到酶解上清液Y3和沉淀物Y4；弃去所述沉淀物Y4，合并所述酶解上清液Y1和酶解 上清液Y3，以便得到酶解上清液Y5。

分离纯化：

将所述酶解上清液Y5用反渗透膜进行脱盐处理，再用膜通量为3KDa的膜过滤设备进 行过滤处理，以便得到燕窝多肽纯化液。

冷冻干燥：

将所述燕窝多肽纯化液进行冷冻干燥，以便得到燕窝多肽粉。

检测结果

唾液酸含量为：2.3％；燕窝粉的降解率为25％；燕窝多肽的提取率为13％；燕窝多肽的纯度为：78％。

实施例5燕窝多肽粉的制备

预处理：

称取1kg燕窝在50℃下烘2h，得干燕窝，干燕窝放入高速粉碎机中粉碎成燕窝粉末， 然后按照料液比1:15将燕窝粉末加入水中浸泡，以便得到燕窝溶液。

分步二次酶解：

称取64g的燕窝溶液(内含4g干燕窝粉和60g水，即1:15)，加入120mg胰蛋白酶， 混合均匀，用1mol/L和0.1mol/L的碳酸钠溶液调节燕窝匀浆的pH至8，在37℃下酶解3h， 得到酶解液A；接着，将酶解液A置于沸水浴中灭活10min，将酶灭活，在8000r/min条件 下离心处理15min，以便得到酶解上清液Y1和沉淀物Y2。

将所述沉淀物Y2加入40g的水中使之重悬，形成燕窝重悬液，在燕窝重悬液中加入40mg碱性蛋白酶(该碱性蛋白酶由地衣芽孢杆菌常规发酵而得)，混合均匀，用1mol/L和0.1mol/L的碳酸钠溶液调节燕窝匀浆的pH至8，在50℃下酶解2h，得到酶解液B；接着， 将酶解液B置于沸水浴中灭活10min，将酶灭活，在8000r/min条件下离心处理15min，以 便得到酶解上清液Y3和沉淀物Y4；弃去所述沉淀物Y4，合并所述酶解上清液Y1和酶解 上清液Y3，以便得到酶解上清液Y5。

冷冻干燥：

将所述酶解上清液Y5进行冷冻干燥，以便得到燕窝多肽粉。

检测结果

唾液酸含量为：2.8％；燕窝粉的降解率为28％；燕窝多肽的提取率为18％；燕窝多肽 的纯度为76％。

综上，本发明通过采用高速破碎和超声破碎进行预处理，提高了燕窝的降解率和水解 度，多肽含量有了明显的提高，第一次酶解时间为3小时，第二次酶解时间为2小时，第一次酶解3小时后，本发明人发现生成的燕窝多肽会抑制蛋白酶的水解，即燕窝多肽的产量达到了平稳期，即使再延长酶解时间，燕窝多肽的量也不会再增加，因此，本发明人 对第一次酶解的沉淀物进行了第二次酶解，由于该沉淀物基本不含燕窝多肽，因而在第二 次酶解中，解除了产物抑制的作用，使得沉淀物中含有的燕窝底物被进一步得以分解利用。采用二次酶解法，克服产物抑制效应，在相对现有技术缩短反应时间的同时，大大提高了燕窝多肽的提取率。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、 或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包 含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不应理 解为必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可 以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，本领域的技术人员可以 将本说明书中描述的不同实施例或示例进行接合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的， 不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例 进行变化、修改、替换和变型。

Claims (9)

1.一种燕窝多肽粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将燕窝粉碎成燕窝粉末，燕窝粉末按照1:15的料液比加水浸泡，再用细胞破碎仪进行破碎处理，以便得到燕窝匀浆；

（2）向所述燕窝匀浆中加入3%的所述燕窝粉末重量的蛋白酶，酶解3h，沸水浴中灭活酶，离心处理，以便得到酶解上清液Y1和沉淀物Y2；

（3）取所述沉淀物Y2与水按照1:20的料液比重悬成燕窝重悬液，再向燕窝重悬液加入1%的所述燕窝粉末重量的蛋白酶，酶解2h，沸水浴中灭活酶，离心处理，以便得到酶解上清液Y3和沉淀物Y4；

（4）合并所述酶解上清液Y1和酶解上清液Y3，以便得到酶解上清液Y5；

（5）将所述酶解上清液Y5用反渗透膜进行脱盐处理，再用膜过滤设备进行过滤处理，以便得到燕窝多肽纯化液；

（6）将所述燕窝多肽纯化液冷冻干燥，以便得到燕窝多肽粉。

2.如权利要求1所述的燕窝多肽粉的制备方法，其特征在于：在步骤（2）中，调节所述燕窝匀浆的pH至2~9后，再酶解处理。

3.如权利要求1所述的燕窝多肽粉的制备方法，其特征在于：在步骤（3）中，调节所述燕窝重悬液的pH至2~9后，再酶解处理。

4.如权利要求1所述的燕窝多肽粉的制备方法，其特征在于：在步骤（1）中，所述细胞破碎仪采用超声细胞破碎仪，所述超声细胞破碎仪的超声频率为40KHz，超声功率为200w，超声破碎20min。

5.如权利要求1所述的燕窝多肽粉的制备方法，其特征在于：在步骤（2）和步骤（3）中，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶，菠萝蛋白酶，胰蛋白酶，胃蛋白酶，中性蛋白酶，碱性蛋白酶、风味蛋白酶中的一种或几种。

6.如权利要求1所述的燕窝多肽粉的制备方法，其特征在于：在步骤（5）中，所述膜过滤设备的膜通量为3KDa。

7.如权利要求1所述的燕窝多肽粉的制备方法，其特征在于：在步骤（2）中，离心处理是在8000 r/min条件下离心15min。

8.如权利要求1所述的燕窝多肽粉的制备方法，其特征在于：在步骤（3）中，离心处理是在8000 r/min条件下离心15min。

9.一种利用权利要求1~8中任一项所述的燕窝多肽粉的制备方法制备的燕窝多肽粉。