CN109749975B

CN109749975B - 一株沼泽红假单胞菌hew-gj106及其应用

Info

Publication number: CN109749975B
Application number: CN201910221032.7A
Authority: CN
Inventors: 李雪平; 李成; 印遇龙
Original assignee: Beijing Heswof Biotechnology Co ltd
Current assignee: Beijing Heswof Biotechnology Co ltd
Priority date: 2019-03-22
Filing date: 2019-03-22
Publication date: 2020-11-10
Anticipated expiration: 2039-03-22
Also published as: CN109749975A

Abstract

本发明提供了一株新分离的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)HEW‑GJ106，该菌具有显著的益生性，能显著抑制大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙门氏菌(Salmonella sp.)、嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila))等病原菌的生长繁殖，具有良好的抑菌性。

Description

一株沼泽红假单胞菌HEW-GJ106及其应用

技术领域

本发明涉及光合细菌，特别涉及一株沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106及其应用。

背景技术

饲料中添加抗生素能够抵抗疾病，促进动物的生长，加快集约化畜牧业的发展。但是随着人们对绿色、安全和环保理念的不断加强和对健康程度的不断重视，抗生素添加剂在给人们带来巨大经济利益的同时其负面效应也逐渐凸显，最典型的特征就是抗生素引起的耐药性、内源性感染、二重感染以及药物残留，这些对养殖业、饲料工业和动物带来严重威胁，进而通过食物链危及人类健康。因此，限制乃至禁止饲料行业和养殖业使用抗生素的呼声越来越高，研究和开发新的抗生素替代品刻不容缓。

近年来，益生菌因其安全、无毒、无残留、不诱发耐药性且对动物生长具有显著作用而被作为抗生素替代品的首要选择。乳酸杆菌是益生菌中的主要菌种，它是动物消化道栖生微生物，在防治胃肠道感染、调节免疫功能和调节肠道的微生物菌群中具有较好作用，是一种很有前途的益生菌生产菌种。

目前，光合细菌类产品的开发利用已成为我国饲料行业发展的一个新趋势，但也存在一些需要解决的问题。沼泽红假单胞菌是一种广泛存在于自然界中的光合细菌，不仅能够净化水质，还含有丰富的营养，可以作为水产动物的饵料添加剂，同事能够提高水产动物的生长性能、提高动物免疫力等，引起国内外学者的关注，但沼泽红假单胞菌一般生长周期长，7天以上，且在培养过程中容易老化，需要经常更新菌种，另外，发酵培养基的配方比较复杂，需要碳源、氮源、磷源、维生素、微量元素等营养成分，实际配置过程繁琐，难以有效的推广应用，满足不了养殖业生产上的需求。现有的很多沼泽红假单胞菌对养殖池塘的有机物的将借力不强，会导致其使用量加倍，增加养殖成本，制约沼泽红假单胞菌的生产。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的提供一株繁殖速度快、既能提高动物生产性能又能改善水质的益生性更强的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)HEW-GJ106，以克服现有沼泽红假单胞菌的缺陷。

为了实现本发明的目的，本发明提供的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106是从河北某水产养殖场的养殖水底泥中分离的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)HEW-GJ106。

本发明提供的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)HEW-GJ106，已于2018年12月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)，保藏编号为CGMCCNO.17021，分类命名为沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。

本发明还提供了上述沼泽红假单胞菌HEW-GJ106的培养方法，包括以下步骤：

1)将-20℃冷冻保存的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106解冻后，在无菌条件下于光合细菌培养基上划线，20-40℃，光照强度为1500-5000LX，培养3-6d(优选为30℃，光照强度为3500LX，培养4d)，获得沼泽红假单胞菌HEW-GJ106单菌落，挑取单菌落于种子培养基中，20-40℃，光照强度为1500-5000LX，培养3-6d(优选为30℃，光照强度为3500LX，培养4d)，获得沼泽红假单胞菌HEW-GJ106种子液，活性达到4.2×10⁸-1.0×10¹⁰CFU/mL；

2)取步骤1)得到的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106种子液接种于二级发酵培养基，进行二级发酵培养；

3)将步骤2)得到的二级发酵培养液接种于三级发酵培养基，进行三级发酵培养，得HEW-GJ106菌株发酵液。

进一步地，其中所述光合细菌培养基按重量百分比计由下述组分组成：碳酸氢钠0.1-2％；七水硫酸镁0.01-0.1％；硫酸铵0.04-1％；磷酸氢二钾0.01-0.2％；氯化钠0.01-0.3％；乙酸钠0.05-2％；酵母粉0.05-1％；琼脂0.8-2％；余量为水，pH6.0-8.0。优选为：碳酸氢钠0.5％；七水硫酸镁0.05％；硫酸铵0.1％；磷酸氢二钾0.05％；氯化钠0.02％；乙酸钠0.5％；酵母粉0.15％；琼脂1.5％；余量为水，pH7.0±0.2。

进一步地，其中所述种子培养基按重量百分比计由下述组分组成：胰蛋白胨0.05-1.0％；酵母提取物0.05-1.0％；乙酸钠0.05-1.0％；丙酸钠0.1-1.0％；七水硫酸镁0.01-0.5％；无水氯化钙0.01-0.1％；氯化铵0.02-0.2％；磷酸氢二钾0.05-0.5％；氯化镁0.01-0.2％；碳酸氢钠0.1-1.0％；氯化钠0.05-0.5％；余量为水，pH7.0±0.2；优选为：胰蛋白胨0.5％；酵母提取物0.15％；乙酸钠0.6％；丙酸钠0.4％；七水硫酸镁0.03％；无水氯化钙0.04％；氯化铵0.06％；磷酸氢二钾0.05％；氯化镁0.03％；碳酸氢钠0.5％；氯化钠0.08％；余量为水，pH7.0±0.2。

进一步地，其中所述二级和三级发酵培养基按重量百分比计均由下述组分组成：蛋白胨0.02-1.0％；酵母膏0.02-1.0％；乙酸钠0.02-1.0％；硫酸铵0.01-0.5％；氯化钙0.01-0.1％；磷酸氢二钾0.01-0.2％；氯化镁0.01-01％；氯化铵0.01-0.2％；余量为水，pH7.0±0.2；优选为：蛋白胨0.2％；酵母膏0.2％；乙酸钠0.8％；硫酸铵0.05％；氯化钙0.02％；磷酸氢二钾0.06％；氯化镁0.06％；氯化铵0.04％；余量为水；pH7.0±0.2。

进一步地，其中所述二级发酵和三级发酵的条件均为：发酵温度25-37℃，装液量40-80％，pH值5.5-8.5，光照强度1500-5000LX，发酵时间72-120h；优选为：发酵温度为30℃，装液量75％，pH值7.2，光照强度4000LX，发酵时间90h。

本发明提供的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)HEW-GJ106具有以下微生物学特征：沼泽红假单胞菌HEW-GJ106是革兰氏阴性菌，在光合细菌培养基上生长迅速，30℃光照培养4d形成的菌落较小，呈红色、圆形、边缘整齐且表面光滑、湿润、直径0.1mm-1.0mm，菌落形态如图1，显微镜下菌体呈杆状，稍有弯曲，厌氧或微氧环境下生长良好，经革兰氏染色后菌株形态如图2；沼泽红假单胞菌HEW-GJ106的生长温度：4℃-45℃；最适pH值为4-10；光照强度：1000-5000LX。沼泽红假单胞菌HEW-GJ106的最适生长温度：25℃-35℃；最适pH值为5.5-8.5；最适光照强度：2500-4000LX。本发明沼泽红假单胞菌HEW-GJ106具有显著的益生性，可有效抑制大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙门氏菌(Salmonella sp.)嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)的生长繁殖，可有效维持动物肠道菌群平衡，改善肠道性能，提高动物生产性能。本发明沼泽红假单胞菌HEW-GJ106的抑菌性的检验方法如下：

在无菌操作台上，将浓度为10⁹CFU/mL的病原菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、嗜水气单胞菌)的菌悬液10mL与90mLNA固体培养基(冷却至45℃且灭菌后)混匀，制备成厚度4mm左右的病原菌NA平板，将灭菌的牛津杯放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，待10分钟后，分别向各小管中滴加200μL的本发明制备的发酵液，勿使其外溢，30℃光照培养72-96h，然后测量抑菌圈直径。每个实验三个重复，取平均值。

其中，所述病原菌NA平板是将121℃高温灭菌后的NA培养基与上述的病原菌菌悬液按照体积比9:1混匀后，倒入灭菌后的平板，冷却后形成表面光滑的4mm厚的病原菌NA平板。所述NA固体培养基的配方按重量百分比计的组成为：蛋白胨1％；牛肉膏0.3％；琼脂2％；NaCl 0.5％；余量为水，pH 7.2±0.2。

另外，本发明进一步提供了上述沼泽红假单胞菌HEW-GJ106在畜禽养殖中的应用。

另外，本发明还提供了含有上述沼泽红假单胞菌HEW-GJ106的饲料。

本发明具有以下有益效果：

1.本发明的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106生长条件容易实现(生长温度：4℃-45℃；最适pH值为4-10；光照强度：1000-5000LX。沼泽红假单胞菌HEW-GJ106最适生长温度：25℃-35℃；最适pH值为5.5-8.5；最适光照强度：2500-4000LX)；发酵力强、生长旺盛；经发酵工艺改进和培养基优化，30℃发酵96h，发酵液活菌数可达到6.4×10⁹CFU/mL，更加适合饲料工业和畜禽养殖业发展的迫切需要，为今后应用过程中降低生产成本、提高经济效益奠定了坚实的菌种基础。

2.本发明的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106具有显著的益生性，能显著抑制大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙门氏菌(Salmonellasp.)、嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila))等病原菌的生长繁殖，具有良好的抑菌性。

3.本发明的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106具有优良的微生物学特性、显著的益生性及抗逆性和超强的发酵性能，不但可以提高动物的饲料利用效率，节约成本，而且大大改善了动物体内消化道内环境的稳态，促进营养的吸收利用，促进动物生长，显著提高了动物的生产性能、免疫性能和繁殖性能，降低了生产成本，提高了经济效益。在其用量较少，例如在饲料中仅为10⁶CFU/g时即可发挥显著作用。

附图说明

图1是本发明的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106在平板上的菌落形态图；

图2是本发明的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106经革兰氏染色显微镜下的菌株形态图；

图3是本发明的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106系统发育树图；

图4是本发明的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对肉鸡肠道微生物菌群的影响图；

图5是本发明的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对每头母猪日产奶量的影响图。

具体实施方式

下面结合实施例解释本发明，实施案例仅用于说明本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。

本发明中涉及到的百分号“％”，若未特别说明，是指质量百分比；但溶液的百分比，除另有规定外，是指100mL溶液中含有溶质的克数。以下各材料或试剂，若非特别说明，均为市售。

实施例1沼泽红假单胞菌HEW-GJ106的分离筛选、鉴定及保藏

1、沼泽红假单胞菌的分离纯化：

在无菌条件下从河北某水产养殖场采集养殖水底泥1g，置于盛有4.5mL灭菌的0.85wt％生理盐水的离心管中，200r/min震荡30min震荡混匀，于光合细菌培养基平板上进行划线，然后在上面再倒一层光合细菌培养基，待冷却至室温后采用厌氧培养法(5％CO₂(v/v))，将涂好的平板于30℃光照(光照强度3500LX)培养96h后，用接种环挑取棕红色菌落在光合细菌培养基平板上进行划线分离纯化，培养后挑取分离效果较好的菌落(生长旺盛的单菌落)，用接种环转接于光合细菌斜面培养基上作纯培养，重复传代纯培养3次，而后置于4℃冰箱保存备用。

2、菌株显微形态的观察

将步骤1保存的斜面菌种，经2-3次活化，取干净的载玻片，滴一滴无菌水于载玻片上，然后挑取1-2接种环的上述活化菌种，涂匀，干燥后固定。革兰氏染色：先用1mL草酸铵结晶紫染液染色1-2min，用水冲洗，接着滴加1mL卢氏碘液覆盖1-2min，用水冲洗，然后滴加95％(v/v)乙醇至乙醇液不再呈现紫色时停止约30s，最后用1mL番红染液复染2-3min，水洗。镜检选取革兰氏染色为阴性的杆状菌株作为备用。

草酸铵结晶紫染液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95％(v/v)乙醇中)20mL与1％草酸铵水溶液80mL混匀，静置24h后过滤即可。

卢卡氏碘液：碘0.33g，碘化钾0.66g，蒸馏水100mL。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至100mL即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为黄色即不能使用。

番红染液：番红O(safranine，又称沙黄O)2.5g，95％(v/v)乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可

3、抑菌性沼泽红假单胞菌的筛选：

取浓度为10⁹CFU/mL的致病菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、嗜水气单胞菌)的菌悬液50mL与等体积冷却至45℃的NA固体培养基(灭菌后)混匀，制备成4mm左右的病原菌NA平板，每个病原菌NA平板在无菌条件下用无菌镊子夹取灭菌牛津杯放在平皿上，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，待10分钟后，然后分别吸取200μL步骤1疑似沼泽红假单胞菌菌株的发酵液于牛津杯中，光合细菌培养基作为对照，于30℃下恒温光照培养72-96h。每个菌株发酵液至少做3个重复，用游标卡尺测其抑菌圈直径的大小，取平均值，选择抑菌性最好的菌株，命名为HEW-GJ106，重复传代纯培养3次，而后置于4℃冰箱保存备用，进行下一步的研究。

其中，所述病原菌NA平板是将121℃高温灭菌后的NA培养基与病原菌菌悬液混匀后，倒入灭菌后的平板，冷却后形成表面光滑的4mm厚的病原菌NA平板。所述NA固体培养基的配方按重量百分比计为：蛋白胨1％；牛肉膏0.3％；琼脂2％；NaCl 0.5％；余量为水，pH7.2±0.2。

4、菌株属的鉴定

对HEW-GJ106菌株进行生理生化鉴定，接触酶试验、明胶液化试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、淀粉水解试验、硫化氢试验及柠檬酸试验均为阳性，V-P试验和甲基红试验为阴性，可利用甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、蔗糖、葡萄糖、硫代硫酸钠、丙三醇等，结果与《常见细菌系统鉴定手册》对照。鉴定结果显示HEW-GJ106菌株为沼泽红假单胞菌，其部分生理生化特性如表1所示。

表1沼泽红假单胞菌HEW-GJ106的部分生理生化特性

鉴定项目	HEW-GJ106	鉴定项目	HEW-GJ106
				革兰氏染色	-	硝酸盐还原试验	+
接触酶	+	硫化氢试验	+
				明胶液化	+	吲哚实验	+
淀粉水解试验	+	山梨糖	-
				脲酶试验	+	鼠李糖	-
柠檬酸盐	+	棉籽糖	-
				V-P	-	木糖	-
甲基红试验	-	甘露醇	-
				乳糖盐	+	甲酸盐	+
麦芽糖	-	硫代硫酸钠	+
				蔗糖	+	乙酸盐	+
阿拉伯糖	-	葡萄糖	+
				棉籽糖	-	丙三醇	+
山梨醇	-	蜜二糖	-
				>7％NaCl生长	-	松三糖	-
4-7％NaCl生长	+	丙酸盐	+

注：“+”表示反应阳性；“-”表示反应阴性。

6、16S rDNA测序测定

采用CTAB法提取HEW-GJ106菌株基因组DNA。利用引物F和R对HEW-GJ106菌株的16SrDNA基因片段进行PCR扩增，PCR扩增体系(25μL)包括引物F和R各1.0μL，Taq DNA聚合酶1.5U，10×Taq buffer2.5μL，Mg²⁺(25mmoL/L)1.5μL，菌株基因组DNA50ng。反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性40s，53℃退火1min，72℃延伸1min30s，共30个循环，72℃温浴10min。反应结束后取3μL PCR产物在1wt％琼脂糖凝胶上进行电泳检测。所得PCR产物回收纯化，送生物工程(上海)有限公司进行DNA序列的测定。将所测得的序列与GenBank中的16SrDNA序列进行BLAST分析比对，可以看出菌株HEW-GJ106与沼泽红假单胞菌的同源性达到99.97％。系统发育进化树如图3所示，菌株HEW-GJ106与沼泽红假单胞菌聚于同一支。通过菌株HEW-GJ106的形态特征、生理生化特征、16S rDNA特征，确定菌株HEW-GJ106为沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)。

上述菌株HEW-GJ106的16S rDNA序列如SEQ ID NO:1所示。

7.菌株保藏

上述经分离、纯化、筛选得到的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)HEW-GJ106已于2018年12月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)，保藏编号为CGMCC NO.17021，分类命名为沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)。

实施例2沼泽红假单胞菌HEW-GJ106发酵液的制备

将-20℃冷冻保存的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106解冻后，在无菌条件下在光合细菌培养基上划线，30℃，光照强度为3500LX，培养4d，获得沼泽红假单胞菌HEW-GJ106单菌落，挑取单菌落于种子培养基中，30℃，光照强度为3500LX，培养4d，获得沼泽红假单胞菌HEW-GJ106种子液，活性达到10⁹CFU/mL。

所述光合细菌培养基按重量百分比计由下述组分组成：碳酸氢钠0.5％；七水硫酸镁0.05％；硫酸铵0.1％；磷酸氢二钾0.05％；氯化钠0.02％；乙酸钠0.5％；酵母粉0.15％；琼脂1.5％；余量为水，pH7.0±0.2。

所述种子培养基按重量百分比计由下述组分组成：胰蛋白胨0.5％；酵母提取物0.15％；乙酸钠0.6％；丙酸钠0.4％；七水硫酸镁0.03％；无水氯化钙0.04％；氯化铵0.06％；磷酸氢二钾0.05％；氯化镁0.03％；碳酸氢钠0.5％；氯化钠0.08％；余量为水，pH7.0±0.2。

取沼泽红假单胞菌HEW-GJ106种子液接种于50L光合细菌发酵罐中(37.5L发酵培养基)，进行二级发酵培养。

所述发酵培养基按重量百分比计由下述组分组成：蛋白胨0.2％；酵母膏0.2％；乙酸钠0.8％；硫酸铵0.05％；氯化钙0.02％；磷酸氢二钾0.06％；氯化镁0.06％；氯化铵0.04％；余量为水，pH7.0±0.2。

所述50L发酵罐的发酵条件为：发酵温度为30℃，装液量75％，pH值7.2，光照强度4000LX，发酵时间90h。

将二级发酵培养液接种于500L光合细菌发酵罐中，进行三级发酵。

500L发酵罐培养基、发酵条件与50L发酵罐相同。

发酵结束后，检测发酵液活菌数为3.6×10¹⁰CFU/mL，发酵液于4℃保存在冰箱内备用。

实施例3沼泽红假单胞菌HEW-GJ106益生性验证

在无菌操作台上，将浓度为10⁹CFU/mLd的病原菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、嗜水气单胞菌)的菌悬液50mL与等体积冷却至45℃的NA培养基(灭菌后)混匀，制备成4mm左右的病原菌NA平板，将灭菌的牛津杯放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，待10分钟后，分别向各小管中滴加200μL保存好的实施例2制备的发酵液，勿使其外溢，30℃培养72-96h，然后测量抑菌圈直径。每个实验三个重复，取平均值，结果如表2。

其中，所述病原菌NA平板是将121℃高温灭菌后的NA培养基与病原菌菌悬液混匀后，倒入灭菌后的平板，冷却后形成表面光滑的4mm厚的病原菌NA平板。所述NA培养基的配方按重量百分比计由下述组分组成：蛋白胨1％；牛肉膏0.3％；NaCl 0.5；余量为水，pH 7.2±0.2。

表2 沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对病原菌的抑菌效果

病原菌	抑菌直径(mm)
		大肠杆菌Escherichia coli	21.6
金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus	20.5
		沙门氏菌Salmonella sp.	18.2
嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)	16.4

实施例4肉鸡的生长性能、屠宰性能、免疫性能及粪便菌群试验

将实施例2制备的发酵液经高速离心机8000r/min离心40min得菌泥，与稳定化保护剂按照质量比为1.42:2于搅拌罐中混合，启动搅拌器，30r/min，25min，均匀混合后得菌湿粉，然后将菌湿粉进行-38℃预冷冻，再进行-62℃冷冻干燥得沼泽红假单胞菌菌粉，活性为2.0×10¹⁰CFU/g。选用1日龄的罗斯308肉鸡4000羽，体重45±2g左右，随机分为2个组，每组4个重复，每个重复500羽，对照组饲喂基础日粮，处理组在基础日粮的基础上添加2×10⁶CFU/g沼泽红假单胞菌制剂。试验组和对照组饲料配方和饲喂量一样，试验鸡自由采食和饮水，饲养管理和免疫程序参照肉鸡饲养管理手册，试验期为42天。

由表3可知，沼泽红假单胞菌HEW-GJ106可显著提高了肉鸡的生产性能，试验组增重、平均日增重、出栏率显著高于对照组(P<0.05)，料肉比和死淘率显著低于对照组(P<0.05)。在肉鸡基础日粮中添加沼泽红假单胞菌制剂，可提高肉鸡增重195.63g(P<0.05)，料肉比降低0.12(P<0.05)，死淘率降低73.26％(P<0.05)，出栏率提高了9.68％(P<0.05)。

表3 沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对肉鸡生长性能的影响

项目	对照组	试验组
			初重/g	46.14±0.85	45.81±0.96
末重/g	2538.42±15.82<sup>a</sup>	2734.05±18.26<sup>b</sup>
			平均日采食量g/d	113.93±3.65<sup>a</sup>	115.42±4.32<sup>a</sup>
平均日增重g/d	59.34±1.24<sup>a</sup>	64.01±1.68<sup>b</sup>
			料肉比	1.92±0.12<sup>a</sup>	1.80±0.06<sup>b</sup>
死淘率/％	7.63±0.22<sup>a</sup>	2.04±0.06<sup>b</sup>
			出栏率/％	89.24±1.65<sup>a</sup>	97.88±1.02<sup>b</sup>

注：同行数据肩标不同字母表示差异显著(P<0.05)，肩标相同字母或无肩标表示差异不显著(P>0.05)。

分别于试验的第21天和第42天，每重复随机选取5只鸡空腹称重、屠宰、解剖，采集脾脏、左侧胸腺、法氏囊，并剔除脂肪组织，然后迅速称其鲜重。免疫器官指数计算公式如下：

由表4可知：在肉鸡21日龄和42日龄，试验组组脾脏指数、法氏囊指数、胸腺指数均显著高于对照组(P<0.05)，表明沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对肉鸡免疫器官的发育有促进作用。

表4沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对肉鸡免疫器官指数的影响

试验结束后从各组选取体重接近平均值的5只鸡进行屠宰试验。鸡称重采血后，放血致死，测定指标包括：屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率和腿肌率。如表5所示，试验组肉鸡各项屠宰指标均高于对照组，活重、胴体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重、腿肌重、屠宰率、半净膛率、全净膛率均显著高于对照组(P<0.05)，分别比对照组显著提高了5.06％、4.6％、8.45％、4.29％、9.58％、8.95％、2.69％、5.55％、4.12％(P<0.05)。胸肌率和腿肌率分别比对照组提高了10.18％、5.08％。

表5沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对肉鸡屠宰性能的影响

项目	对照组	试验组
			活重/g	2452.36±45.38<sup>a</sup>	2576.45±47.16<sup>b</sup>
胴体重/g	2254.19±22.96<sup>a</sup>	2357.87±23.54<sup>b</sup>
			半净膛重/g	2025.13±15.22<sup>a</sup>	2196.35±16.46<sup>b</sup>
全净膛重/g	1783.25±11.26<sup>a</sup>	1859.84±13.28<sup>b</sup>
			胸肌重/g	345.06±8.27<sup>a</sup>	378.12±9.82<sup>b</sup>
腿肌重/g	289.42±6.26<sup>a</sup>	315.33±7.44<sup>b</sup>
			屠宰率/％	89.47±1.25<sup>a</sup>	91.88±1.12<sup>b</sup>
半净膛率/％	82.39±1.07<sup>a</sup>	86.96±0.91<sup>b</sup>
			全净膛率/％	69.98±1.24<sup>a</sup>	72.86±1.08<sup>b</sup>
胸肌率/％	19.45±0.94<sup>a</sup>	21.43±1.06<sup>a</sup>
			腿肌率/％	16.35±1.05<sup>a</sup>	17.18±0.89<sup>a</sup>

屠宰后45-60min内用Delta-320酸度计肌肉测定，专用电极直接插入肉中测定胸肌肉的pH值。取胸肌样品，用CR-400色度仪测定肉色亮度和肉色红度。取屠宰24h胸肌肉样，称重后(W1)，将肉样置于上下各垫20层滤纸中，加压35kg，持续10min，撤去压力后称肉样重(W2)，计算其失水率。

取滴水损失测定后的肉样置于食品袋内后，连同食品袋一起置80℃左右水浴锅中至肉内中心温度达75℃并保持10min，用取样器取样，再用剪刀修成2.5cm长，直径为1.0cm的圆柱，置于C-LM3型嫩度计上进行剪切，记录最大剪切力，每个肉样剪切3次，取平均值。

由表6可知，在肉鸡饲料中添加沼泽红假单胞菌制剂，与对照组相比，试验组肉色优于对照组，试验组组胸肌a*值提高28.57％(P<0.05)，胸肌b*值提高18.30％(P<0.05)，pH值提高1.24％，试验组较对照组失水率降低11.81％(P<0.05)，剪切力降低20.58％(P<0.05)。

表6沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对肉鸡肉质品质的影响

项目	对照组	试验组
			红度a*	1.75±0.24<sup>a</sup>	2.25±0.18<sup>b</sup>
黄度b*	3.06±0.15<sup>a</sup>	3.62±0.21<sup>b</sup>
			亮度l*	58.22±2.67	58.18±2.48
pH值	5.65±0.06<sup>a</sup>	5.72±0.03<sup>a</sup>
			失水率(％)	20.58±1.28<sup>a</sup>	18.15±1.14<sup>b</sup>
剪切力(N/cm)	1.41±0.16<sup>a</sup>	1.12±0.11<sup>b</sup>

试验结束后，每重复随机选取5只鸡称重，翅下静脉采血，3000r/rain，离心15min，取上清液分装，-20℃保存备用。血清溶菌酶和血清总蛋白含量按照试剂盒(南京建成生物工程研究所)方法测定。沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对肉鸡血清免疫指标的影响见表7，可知：基础日粮中添加沼泽红假单胞菌制剂可显著提高42日龄肉鸡的血清溶菌酶含量和血清总蛋白含量，分别比对照组提高了55.83％、13.79％。

表7沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对肉鸡血清免疫指标的影响

组别	对照组	试验组组
			血清溶菌酶含量/(ug·L<sup>-1</sup>)	41.12±3.64<sup>a</sup>	64.08±3.45<sup>b</sup>
血清总蛋白/(g·L<sup>-1</sup>)	57.86±3.78<sup>a</sup>	65.84±2.66<sup>b</sup>

试验结束后，每个重复随机选取5只体重适中的健康鸡进行屠宰，分别取出回肠和盲肠，并对肠道两端进行结扎。用酒精棉球消毒各结扎口后，放入已灭菌塑料袋中，采用平板菌落计数法进行细菌计数，测定肠道内容物中大肠杆菌及乳酸菌的数量，以每克肠道内容物中细菌个数的对数lg(CFU/g)表示。沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对肉鸡肠道菌群的影响如图4所示，可知：基础日粮中添加沼泽红假单胞菌制剂提高了回肠、盲肠中乳酸菌的含量，降低了回肠、盲肠中大肠杆菌的含量。

实施例5蛋鸡后期的生产性能试验

将4000只520日龄的淘汰鸡(海兰褐蛋鸡)随机分成2组，每组5个重复，每个重复400只，以基础日粮组为对照组，试验组添加2×10⁶CFU/g沼泽红假单胞菌制剂(同实施例4)，共2个处理组。采用3层阶梯式笼养，专人饲养，自由采食、饮水，自然通风，每天光照17h，日喂2次。饲养管理和免疫程序参照蛋鸡饲养管理手册。每日记录各组的产蛋数、蛋重、耗料量见表8。试验期9周。

如表8所示，在蛋鸡饲料中添加沼泽红假单胞菌制剂能够显著提高蛋鸡520日龄-550日龄产蛋率13.16％(P<0.05)，增加蛋重7.41％(P<0.05)，降低蛋鸡料蛋比0.36(P<0.05)；试验组显著提高蛋鸡551-583日龄产蛋率15.27％(P<0.05)，增加蛋重8.00％(P<0.05)，降低蛋鸡料蛋比0.36(P<0.05)。

表8沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对蛋鸡生产性能的影响

注：同行数据肩标不同字母表示差异显著(P<0.05)，肩标相同字母或无肩标表示差异不显著(P>0.05)

试验期，从对照组和试验组随机抽取50只蛋，利用蛋品质测定仪测试抽取蛋样的蛋品质，在蛋鸡基础日粮中添加沼泽红假单胞菌制剂可以提高蛋壳厚度，显著提高蛋的光泽度、哈氏单位和蛋黄颜色(P<0.05)，分别提高3.74％、3.67％、3.68％；显著降低脏蛋率、沙壳蛋率、脏蛋率和鸡蛋破损率(P<0.05)，分别比对照组降低80％、69.05％、81.13％(见表9)。

表9沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对鸡蛋品质的影响

表9的结果显示，沼泽红假单胞菌HEW-GJ106可显著提高蛋鸡后期的生产性能和鸡蛋品质，有效替代抗生素添加剂，适合大规模推广使用。

实施例6哺乳母猪的生长性能试验

选取体况基本一致，第2胎次和预产期相近的健康PIC母猪40头，随机分为2组，每组10个重复，每个重复2头猪。试验从母猪妊娠90天至仔猪25日龄断奶时结束。对照组饲喂基础日粮，试验组在基础日粮基础上添加2×10⁶CFU/g沼泽红假单胞菌制剂(同实施例4)母猪于预产期前7d转入分娩舍，均饲养于同一分娩舍。分娩舍为高床、漏缝式地板，圈舍通风良好，舍内保持清洁干燥，温度保持在16～24℃，仔猪采用保温箱保暖。分娩当天(记为试验第0天)不喂料，分娩后按试验分组给相应的试验料。分娩后前3d均采用限制饲养，第1天饲喂2.0kg/d，第2、3天每日增加0.5kg，第4天开始自由采食，日喂3次，自由饮水，仔猪10日龄开始补料，其他饲养管理和免疫程序均按规模化猪场标准统一进行。断奶后母猪转入配种舍，以同一操作熟练的技术员观察母猪的发情情况，确定母猪发情是以人工观察和公猪试情相结合的方式进行。每天观察2次(09:00和17:00)，记录母猪断奶后至再发情的间隔天数。

在分娩后第1天和第14天每组随机抽取10头母猪分别从前、中、后3个部位的乳头采集乳样，每头猪采集30mL左右。第14天采样前在母猪耳缘静脉注射10IU催产素，注射后立即用手挤的方法收集乳样。采用红外线乳成分分析仪测定乳脂、乳蛋白、乳糖、总固形物的含量。由表10可见，在母猪日粮中添加沼泽红假单胞菌制剂，与对照组相比，试验组分别显著提高母猪哺乳第1天、第14天乳蛋白含量16.7％、24.94％(P<0.05)；分别显著提高母猪乳哺乳第1天、第14天乳脂率23.37％、18.99％(P<0.05)；显著提高母猪哺乳第1天乳糖含量12.56％(P<0.05)，提高母猪哺乳第14天乳糖含量3.62％；显著提高母猪哺乳第1天、第14天乳中总固形物含量10.75％、15.52％(P<0.05)。

表10沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对哺乳母猪乳常规成分的影响(％)

注：同行数据肩标不同字母表示差异显著(P＜0.05)，肩标相同字母或无肩标表示差异不显著(P>0.05)

记录母猪每天的投料量、剩余料量及产奶量，计算试验全期(母猪妊娠90天至仔猪25日龄断奶)母猪的平均日采食量。分娩后立即称量仔猪初生个体重，计算初生头均重。试验结束称量每窝仔猪个体重，记录每窝仔猪数，计算头均重，并计算仔猪平均日增重。由图5可知，在母猪基础日粮中添加沼泽红假单胞菌制剂，可显著提高母猪的日产奶量，试验组比对照组提高了19.19％(P<0.05)。沼泽红假单胞菌可提高母猪的泌乳性能。由表11可知，在母猪日粮中添加沼泽红假单胞菌制剂，试验组可显著提高仔猪初生重、仔猪断奶均重、仔猪日增重(P<0.05)，分别提高了11.81％、12.17％、12.25％；显著降低仔猪腹泻率、死淘率(P<0.05)，分别为61.00％、63.01％；试验组提高母猪采食量7.58％，母猪发情间隔降低18.75％，母猪失重显著降低17.66％(P<0.05)，妊娠母猪和哺乳母猪便秘率分别显著降低78.65％、66.92％(P<0.05)。

表11沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对母猪及其仔猪生产性能的影响

测定指标	对照组	试验组
			出生窝仔数(头)	11.24±1.05<sup>a</sup>	11.45±1.13<sup>a</sup>
断奶活仔数(头)	10.06±0.94<sup>a</sup>	10.97±0.72<sup>a</sup>
			仔猪初生均重(kg/头)	1.27±0.09<sup>a</sup>	1.42±0.05<sup>b</sup>
仔猪断奶均重(kg/头)	6.74±0.18<sup>a</sup>	7.56±0.24<sup>b</sup>
			仔猪日增重(g/天)	218.8±12.34<sup>a</sup>	245.6±15.56<sup>b</sup>
仔猪腹泻率(％)	8.59±0.26<sup>b</sup>	3.35±0.31<sup>a</sup>
			仔猪死淘率(％)	5.84±0.22<sup>b</sup>	2.16±0.18<sup>a</sup>
母猪采食量(kg/头·天)	4.22±0.18	4.54±0.15
			发情间隔(天)	7.68±0.88	6.24±0.72
哺乳失重(kg)	21.18±1.64<sup>b</sup>	17.44±1.28<sup>a</sup>
			妊娠母猪便秘率(％)	21.64±1.25<sup>b</sup>	4.62±1.06<sup>a</sup>
哺乳母猪便秘率(％)	34.58±2.38<sup>b</sup>	11.44±2.06<sup>a</sup>

注：同行数据肩标不同字母表示差异显著(P＜0.05)，肩标相同字母或无肩标表示差异不显著(P＞0.05)

本试验结果显示沼泽红假单胞菌HEW-GJ106可显著提高母猪和仔猪的生产性能和抗病了，能有效替代抗生素添加剂，适合大规模推广使用。

实施例7鲤鱼的生产性能及水质净化试验

试验在河北某鲤鱼养殖场，择6个大小且水质相近的池塘，每个池塘鲤鱼投放1500尾/亩，同时搭配放养白鲢120尾/亩、花鲢50尾/亩，标记为1、2、3、4、5、6号池，1-3号池为对照组，4-6号池为微生态组。对照组饲喂基础日粮(见表12)，试验组在基础日粮中添加2×10⁶CFU/g沼泽红假单胞菌制剂。从试验开始每天定时、定点投喂饵料。每天喂4次(8:00、11:00、14:00、17:00)，投喂量为体重的2％～3％，水温为21-28℃，水体pH值为7.5左右。预饲期10d，试验期60d。分别于试验的开始、结束后，进行打样称重。计算增重率、饵料系数。每一周检测1次水质，氨氮、亚硝酸盐、pH值、溶解氧采用便携式水质分析仪测定。

表12基础日粮组成及营养水平

由表13可见，试验组比对照组增重提高19.81％，差异显著(P<0.05)，饵料系数降低0.39，差异显著(P<0.05)。沼泽红假单胞菌制剂能够调节鱼类肠道健康，提高饲料消化率。

表13沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对鲤鱼生长性能的影响

项目	对照组	试验组
			初重/g	55.24±0.36<sup>a</sup>	55.68±0.25<sup>a</sup>
末重/g	142.78±1.84<sup>a</sup>	160.56±1.72<sup>b</sup>
			增重	87.54±1.48<sup>a</sup>	104.88±1.47<sup>b</sup>
饵料系数	1.31±0.06<sup>b</sup>	0.92±0.02<sup>a</sup>
			成活率	90％	100％

取鱼的前、中、后肠内容物各1g，分别于9mL灭菌的0.85wt％生理盐水中支撑悬液，然后取1mL悬液于9mL灭菌的0.85wt％生理盐水中进行逐级稀释后检测大肠杆菌和乳酸菌数，结果如表14所示，饲料中添加沼泽红假单胞菌制剂显著提高鲤鱼鱼肠道内乳酸杆菌菌群数(P<0.05)，显著降低鲤鱼鱼肠道大肠杆菌菌群数(P<0.05)。

表14沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对鱼肠道乳酸菌和大肠杆菌的影响lg(cfu/g)

项目	对照组	试验组
			乳酸菌	5.72±0.14<sup>a</sup>	7.25.±0.26<sup>b</sup>
大肠杆菌	7.38±0.18<sup>b</sup>	5.88±0.15<sup>a</sup>

由表15可知，随着沼泽红假单胞菌制剂的添加，水体中氨氮、亚硝酸盐的含量逐渐降低，水体中溶氧逐渐升高。试验第4周，试验组氨氮、亚硝酸盐含量较对照组分别降低33.08％、47.06％，差异显著(P<0.05)，水体中溶氧量提高6.44％，差异显著(P<0.05)。试验第6周，试验组氨氮、亚硝酸盐含量较对照组分别降低38.52％、53.3％，差异显著(P<0.05)，水体中溶氧量提高9.76％，差异显著(P<0.05)。试验第8周，试验组氨氮、亚硝酸盐含量较对照组分别降低54.69％、66.15％，差异显著(P<0.05)，水体中溶氧量提高13.61％，差异显著(P<0.05)。结果表明沼泽红假单胞菌制剂提高了饲料中氮和磷的利用率，同时随粪便排泄到水中的，沼泽红假单胞菌制剂能够继续分解水体中的残饵、粪便等，净化了水质，降低了水体中有毒有害物质的含量。

表15沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对鱼塘水质的影响

注：同列数据肩标不同字母表示差异显著(P＜0.05)，肩标相同字母或无肩标表示差异不显著(P＞0.05)

实施例8净化虾塘水质的试验

设计对照组和试验组，试验组用实施例4中的沼泽红假单胞菌制剂对养殖鱼虾池塘使用，使用前将其稀释十倍后溶解于水中，进行全池喷洒，且每月使用一次，对照组为空白对照，不使用沼泽红假单胞菌制剂，一周后取虾塘的水样，检测溶氧、氨氮、亚硝酸盐、硫化氢、COD含量、pH值、大肠杆菌数等。结果如表16所示，试验组氨氮、亚硝酸盐、硫化氢均未检出，COD含量、pH及大肠杆菌数均低于对照组(P<0.05)，溶氧高于对照组，提高了2.63倍。表明沼泽红假单胞菌能够降解水体中有机物如饵料、浮游生物残体、排泄物、有机碎屑等，避免有机废物在池中的积累，还可减少池塘中的有机耗氧，间接增加水体溶氧，从而能够保证有机物的氧化、氨化、硝化、反硝化的正常循环，从而保持良好的水质。

表16沼泽红假单胞菌HEW-GJ106对鱼塘水质的影响

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 北京好实沃生物技术有限公司

<120> 一株沼泽红假单胞菌HEW-GJ106及其应用

<130> 190047-I-CP-NZJ

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1484

<212> DNA

<213> 沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)

<400> 1

agagtttgat cctggctcag agcgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgaac 60

gggcgtagca atacgtcagt ggcagacggg tgagtaacgc gtgggaacgt accttttggt 120

tcggaacaac acagggaaac ttgtgctaat accggataag cccttacggg gaaagattta 180

tcgccgaaag atcggcccgc gtctgattag ctagttggtg aggtaatggc tcaccaaggc 240

gacgatcagt agctggtctg agaggatgat cagccacatt gggactgaga cacggcccaa 300

actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tggacaatgg gggaaaccct gatccagcca 360

tgccgcgtga gtgatgaagg ccctagggtt gtaaagctct tttgtgcggg aagataatga 420

cggtaccgca agaataagcc ccggctaact tcgtgccagc agccgcggta atacgaaggg 480

ggctagcgtt gctcggaatc actgggcgta aagggtgcgt aggcgggttt ctaagtcaga 540

ggtgaaagcc tggagctcaa ctccagaact gcctttgata ctggaagtct tgagtatggc 600

agaggtgagt ggaactgcga gtgtagaggt gaaattcgta gatattcgca agaacaccag 660

tggcgaaggc ggctcactgg gccattactg acgctgaggc acgaaagcgt ggggagcaaa 720

caggattaga taccctggta gtccacgccg taaacgatga atgccagccg ttagtgggtt 780

tactcactag tggcgcagct aacgctttaa gcattccgcc tggggagtac ggtcgcaaga 840

ttaaaactca aaggaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg 900

acgcaacgcg cagaacctta ccagcccttg acatgtccag gaccggtcgc agagacgcga 960

ccttctcttc ggagcctgga gcacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc gtgtcgtgag 1020

atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccccgtcct tagttgctac catttagttg 1080

agcactctaa ggagactgcc ggtgataagc cgcgaggaag gtggggatga cgtcaagtcc 1140

tcatggccct tacgggctgg gctacacacg tgctacaatg gcggtgacaa tgggaagcta 1200

aggggcgacc cttcgcaaat ctcaaaaagc cgtctcagtt cggattgggc tctgcaactc 1260

gagcccatga agttggaatc gctagtaatc gtggatcagc atgccacggt gaatacgttc 1320

ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc atgggagttg gctttacctg aagacggtgc 1380

gctaaccagc aatgggggca gccggccacg gtagggtcag cgactggggt gaagtcgtaa 1440

caaggtagcc gtaggggaac ctgcggctgg atcacctcct ttct 1484

Claims

1.一株沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)HEW-GJ106，已于2018年12月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.17021；所述沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)HEW-GJ106是从河北某水产养殖场的养殖水底泥中分离，其生长温度为25℃-35℃；最适pH值为5.5-8.5；光照强度为2500-4000LX。

2.权利要求1所述的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将-20℃冷冻保存的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106解冻后，在无菌条件下于光合细菌培养基上划线，20-40℃，光照强度为1500-5000LX，培养3-6d，获得沼泽红假单胞菌HEW-GJ106单菌落，挑取单菌落于种子培养基中，20-40℃，光照强度为1500-5000LX，培养3-6d，获得沼泽红假单胞菌HEW-GJ106种子液，活性达到4.2×10⁸-1.0×10¹⁰CFU/mL；

2）取步骤1）得到的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106种子液接种于二级发酵培养基，进行二级发酵培养；

3）将步骤2）得到的二级发酵培养液接种于三级发酵培养基，进行三级发酵培养，得HEW-GJ106菌株发酵液。

3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述光合细菌培养基按重量百分比计由下述组分组成：碳酸氢钠0.1-2%；七水硫酸镁0.01-0.1%；硫酸铵0.04-1%；磷酸氢二钾0.01-0.2%；氯化钠0.01-0.3%；乙酸钠0.05-2%；酵母粉0.05-1%，琼脂0.8-2%；余量为水，pH6.0-8.0。

4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，所述种子培养基按重量百分比计由下述组分组成：胰蛋白胨0.05-1.0%；酵母提取物0.05-1.0%；乙酸钠0.05-1.0%；丙酸钠0.1-1.0%；七水硫酸镁0.01-0.5%；无水氯化钙0.01-0.1%；氯化铵0.02-0.2%；磷酸氢二钾0.05-0.5%；氯化镁0.01-0.2%；碳酸氢钠0.1-1.0%；氯化钠0.05-0.5%；余量为水，pH7.0±0.2。

5.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，所述二级发酵培养基按重量百分比计由下述组分组成：蛋白胨0.02-1.0%；酵母膏0.02-1.0%；乙酸钠0.02-1.0%；硫酸铵0.01-0.5%；氯化钙0.01-0.1%；磷酸氢二钾0.01-0.2%；氯化镁0.01-01%；氯化铵0.01-0.2%；余量为水，pH7.0±0.2。

6.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，所述三级发酵培养基按重量百分比计由下述组分组成：蛋白胨0.02-1.0%；酵母膏0.02-1.0%；乙酸钠0.02-1.0%；硫酸铵0.01-0.5%；氯化钙0.01-0.1%；磷酸氢二钾0.01-0.2%；氯化镁0.01-01%；氯化铵0.01-0.2%；余量为水，pH7.0±0.2。

7.根据权利要求5或6所述的培养方法，其特征在于，所述二级发酵和三级发酵的条件均为：发酵温度25-37℃，装液量40-80%，pH 值5.5-8.5，光照强度1500-5000LX，发酵时间72-120h。

8.根据权利要求1所述的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106在用于制备畜禽饲料中的应用。

9.含有权利要求1所述的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106的动物饲料。