CN114836358B - 罗伊氏乳杆菌sxdt-32及其应用 - Google Patents
罗伊氏乳杆菌sxdt-32及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114836358B CN114836358B CN202210741105.7A CN202210741105A CN114836358B CN 114836358 B CN114836358 B CN 114836358B CN 202210741105 A CN202210741105 A CN 202210741105A CN 114836358 B CN114836358 B CN 114836358B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lactobacillus reuteri
- sxdt
- animal
- strain
- reuteri
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 title claims abstract description 78
- 229940001882 lactobacillus reuteri Drugs 0.000 title claims abstract description 76
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 21
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 13
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 claims abstract description 7
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims abstract description 5
- 230000008951 colonic inflammation Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 10
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 4
- 235000019730 animal feed additive Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 claims 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 claims 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 abstract description 10
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 10
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 abstract description 7
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 abstract description 6
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 5
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 abstract description 4
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 abstract description 4
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 abstract description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 abstract description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract 1
- 229920003045 dextran sodium sulfate Polymers 0.000 description 26
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 14
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 9
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 6
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 5
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 5
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 4
- 230000007413 intestinal health Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 3
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000008944 intestinal immunity Effects 0.000 description 3
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 3
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 3
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M malachite green Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229940107698 malachite green Drugs 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 241000910112 Ataliothrips reuteri Species 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 230000002180 anti-stress Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 238000010227 cup method (microbiological evaluation) Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013585 weight reducing agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/12—Antidiarrhoeals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/173—Reuteri
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Physiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及益生菌领域,具体涉及罗伊氏乳杆菌SXDT‑32及其应用。其保藏编号为CGMCC No. 24727。该菌株对大肠杆菌、沙门氏菌具有很好的抑制作用;能在动物体内定植,并对人工胆盐、人工胃酸、人工肠液耐受能力强;可以牢固的黏附定植于动物肠道中,抑制病原微生物在肠道中生长,提高动物肠道免疫力,缓解动物结肠炎症,降低动物腹泻和死亡率,改善动物肠道健康,此外,还可提高动物生长性能。
Description
技术领域
本发明涉及益生菌领域,具体涉及罗伊氏乳杆菌SXDT-32及其应用。
背景技术
早期断奶引起的应激主要表现为仔猪腹泻,从而导致仔猪生长性能降低,死亡率提高。虽然抗生素在过去的几十年里显著提高了腹泻的治疗效果,但常导致耐药菌株的产生、传播以及食品中的抗生素残留已经成为一个严重的问题。因此,许多国家正在逐步禁止在动物生产中使用抗生素。然而,禁抗导致了仔猪腹泻发生率和死亡率陡然增加。因此,迫切需要开发针对腹泻的绿色安全、高效无毒的治疗方法。
目前,对于益生菌的研究已然成为了热点。已发现益生菌能在肠道健康和疾病治疗方面表现出巨大的潜力。是一种潜在的抗生素替代品。
发明内容
本发明的目的是提供一种罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32。
本发明的再一目的是提供上述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32的应用。
本发明的再一目的是提供一种生物菌剂。
本发明的再一目的是提供一种饲料添加剂。
本发明的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32,其保藏编号为CGMCCNo. 24727。
本发明提供了含有罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32的菌剂。所述菌剂可以是液体菌剂或固体菌剂,可采用常规技术手段、加入微生物制剂领域允许的辅料制备得到。
本发明提供了罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32用于制备以下制剂的应用:
抑制病原微生物;
促进动物生长的制剂
治疗结肠炎症的制剂;
降低腹泻率的制剂;或
提高肠道免疫力的制剂。
优选地,所述病原微生物为细菌。更优选为革兰氏阴性菌。
作为本发明的一种实施方式,所述病原微生物为大肠杆菌或沙门氏菌。
根据本发明的动物饲料添加剂,其含有上述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32。
以上所述的动物饲料添加剂或动物饲料含有罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32的发酵菌体。
本发明提供含有罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri) SXDT-32的菌剂。
本发明所述的菌剂可以是液体菌剂或固体菌剂,可采用常规技术手段、加入微生物制剂领域允许的辅料制备得到。
本发明通过实验证明,罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri) SXDT-32对大肠杆菌、沙门氏菌具有很好的抑制作用;能在动物体内定植,并对人工胆盐、人工胃酸、人工肠液耐受能力强;可以促进动物生长,改善结肠炎症,降低腹泻率,提高肠道免疫力,改善肠道健康。
本发明的有益效果在于:本发明通过在马身猪粪便中分离获得一株罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri) SXDT-32,该菌株对大肠杆菌、沙门氏菌具有很好的抑制作用;能在动物体内定植,并对人工胆盐、人工胃酸、人工肠液耐受能力强;以葡聚糖硫酸钠(DSS)建立小鼠结肠炎症损伤模型,发现该菌株能够缓解并治疗小鼠结肠炎症,缓解因DSS引起的小鼠体重降低和结肠长度缩短;在对7-30日龄的仔猪饲养试验中也显示出,罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri) SXDT-32能显著降低仔猪腹泻率,并能提高仔猪21日龄和30日龄重。罗伊氏乳杆菌可以牢固的黏附定植于动物肠道中,抑制病原微生物在肠道中生长,提高动物肠道免疫力,缓解动物结肠炎症,降低动物腹泻和死亡率,改善动物肠道健康,此外,还可提高动物生长性能。
附图说明
图1为本发明实施例2中罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32的生长曲线;
图2为本发明实施例2中罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32 的孔雀石绿染色后油镜镜检图;
图3为本发明实施例2中罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32的菌落形态图;
图4为本发明实施例3中小鼠试验方案实施图;
图5为本发明实施例3中试验小鼠整个试验期体重变化图;
图6显示本发明实施例3中试验小鼠在试验开始后第7天时体重变化情况;
图7显示本发明实施例3中试验小鼠在试验开始后第13天时体重变化情况;
图8显示本发明实施例3中试验小鼠在试验开始后第18天时体重变化情况;
图9显示本发明实施例3中试验小鼠的结肠长度;
图10显示本发明实施例3中试验小鼠结肠HE染色以及根据结肠HE染色进行的病理评分;
图11显示本发明实施例4中仔猪在第21日龄和30日龄时的体重变化情况;
图12显示本发明实施例4中仔猪在整个试验期内的腹泻率统计结果。
罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri) SXDT-32,该菌株于2022年 4月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编100101),分类命名为罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteri,保藏编号为CGMCC No. 24727。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。
实施例1 罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)的分离与16S rRNA鉴定
罗伊氏乳杆菌的分离与鉴定:罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)分离自山西省大同市阳高县古城镇北方四季牧场的马身猪粪便中。
1、粪便收集:采集20头育肥马身猪粪便各1g,加入20ml含有20%甘油的无菌生理盐水进行旋涡混匀,并分装到无菌冻存管中,每管1ml。处理完成后置于干冰中,带回实验室保存于-80°C冰箱,直到使用。
2、菌株分离:取马身猪粪样1ml,用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释,吸取合适稀释度的稀释液0.1mL在MRS琼脂上均匀涂布,37°C培养48h后,将生长出的菌落通过平板划线接种到新的MRS固体培养基进行纯化培养48h。
3、菌株富集:将纯化培养后的菌株,在无菌操作台上用接种环逐一接种到无菌MRS肉汤培养基中,置于摇床中,37°C培养48h后进行16S rRNA鉴定,并将剩余部分与含有50%甘油的生理盐水混合,保存至-80°C冰箱。
4、16S rRNA鉴定:将富集后的菌液,使用细菌通用引物27F:AGAGTTTGATCCTGGCTCAG;1492R:GGTTACCTTGTTACGACTT,进行菌落PCR扩增后,进行16S rDNA测序鉴定,将各个菌株的16S rDNA序列与数据库中所有已测定细菌的16S rDNA序列进行比对,其中发现有6株与乳杆菌属的Lactobacillus reuteri DSM20016的16S rDNA 序列的同源相似性最高,确定这6株菌种类别为罗伊氏乳杆菌 (Lactobacillus reuteri)。
实施例2 罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)的特性检测
1、抑菌能力检测
病原指示菌选用2种常见致病菌:大肠杆菌(Escherichia coli)BW25113和鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonella typhimurium)ATCC14028。
采用牛津杯法测定菌株的抑菌活性。将大肠杆菌(Escherichia coli)BW25113和鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonella typhimurium)ATCC14028分别接种在LB肉汤培养基中,放置37°C培养箱中培养12-18h。将大肠杆菌(Escherichia coli)BW25113和鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)ATCC14028菌株浓度分别用无菌生理盐水调整至1×108CFU/mL,各取200μl, 均匀涂布在LB琼脂培养基,将灭菌后的牛津杯均匀轻放在LB培养基上,在牛津杯中分别加入200μL已活化并且菌液浓度在1×108CFU/mL的带有MRS肉汤的菌液。放置37°C培养箱中培养12h。用游标卡尺测量抑菌圈大小并评价抑菌效果。结果显示(表1),相比于其它5株罗伊氏乳杆菌,罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32对大肠杆菌(Escherichia coli)BW25113和鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonella typhimurium)ATCC14028均有较强抑制效果,取得了最大的抑菌圈直径,并且显著高于SXDT-1菌株(p<0.05)。
表1 罗伊氏乳酸菌对病原菌的抑制能力
注:以上数值为抑菌圈直径,单位mm。
2、耐胆盐检测
将已活化并且菌液浓度在1×108CFU/mL的菌液,分别取1ml接种到9ml含猪胆盐浓度为0.3g/100mL的无菌生理盐水中,1h后采用平板涂布法测定活菌数。
结果显示(表2),在0.3g/100mL的胆盐浓度下,相比较其它5株罗伊氏乳杆菌,罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32的存活率显著高于其它菌株(p<0.05),存活率达到18.44%左右。
表2罗伊氏乳杆菌在强胆盐0.3%浓度下的存活率%
3、耐人工胃液检测
将已活化并且菌液浓度在1×108CFU/mL的菌液,分别取1ml接种到9ml PH=1.5的人工胃液中,1h后采用平板涂布法测定活菌数。结果显示(表3),在pH=1.5的人工胃液1h后,相比较其它5株罗伊氏乳杆菌,其中罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32的存活率显著高于其它菌株(p<0.05),存活率达到19.60%左右。
表3罗伊氏乳杆菌在PH=1.5的人工胃液中的存活率%
4、耐人工肠液检测
将已活化并且菌液浓度在1×108CFU/mL的菌液,分别取1ml接种到9ml pH=6.8的人工胃液中,4h后采用平板涂布法测定活菌数。结果显示(表4),在人工肠液4h后,相比较其它5株罗伊氏乳杆菌,罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32存活率取得最大值,达到18.96%左右,并且显著高于SXDT-1、SXDT-21、SXDT-31菌株(p<0.05)。
表4罗伊氏乳杆菌在人工肠液的存活率%
5、生长曲线测定
按1%接种量从浓度为1×108CFU/mL的罗伊氏乳杆菌SXDT-32菌液中吸取定量的菌液接种到MRS肉汤培养基中,放入37°C的摇床中。每隔1h使用酶标仪测定发酵液在OD600的值。结果显示(图1),罗伊氏乳杆菌SXDT-32菌株在4h后即可进入对数生长期,14h进入平台期,最大活菌数达到2.7×108CFU/mL。
6、形态及菌落观察
将菌体涂抹在载玻片并对其烘干,用含有1%的孔雀石绿染色3分钟,染色完成后用去离子水缓慢冲洗,洗掉多余的染色液,烘干玻片后置于显微镜下油镜观察并拍照,结果显示于(图2)。用接种环蘸取一环菌液在MRS琼脂培养基进行划线,37°C培养48h后对其菌落形态进行观察,结果显示于(图3)。
罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri) SXDT-32的微生物学特性如下:
(1)菌落形态:单菌落圆形,直径约1~2mm,呈现乳白色,不透明,菌落表面光滑微凸,边缘规则。
(2)染色后细菌形态呈现短杆状,无鞭毛,不运动。
(3)生长特性:在MRS液体培养基中,置于37°C摇床培养,4小时后开始进入对数生长期,14h进入平台期,最大活菌数为2.7×108CFU/mL。
实施例3 罗伊氏乳杆菌SXDT-32对DSS造模小鼠肠道健康的影响
通过以上实验,确定罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32菌株具有最好的抗逆益生特性,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No. 24727。因此保留罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32菌株用于后去实验。
一、实验方法
1、选取36只20日龄的ICR雄性小鼠,饲养于中国农业科学院动物科学研究所动物中心。试验过程中,将鼠房的温度控制在21±2℃,光照/黑暗时间为12小时,并自由取食和饮水。
2、以葡聚糖硫酸钠(DSS)建立小鼠结肠炎症损伤模型,将所有小鼠随机分为三组:Con组,DSS组,L.r+DSS组。Con组:在试验过程中,每天灌胃一次0.1ml的生理盐水,为期18天;DSS组:在试验过程中,每天灌胃一次0.1ml的生理盐水(NS),为期18天,在试验的第8-13天,给小鼠饮用含有3%DSS的自来水6天;L.r+DSS组:在试验过程中,每天灌胃一次0.1ml浓度为1×108CFU/mL的菌液,为期18天,在试验的第8-13天,给小鼠饮用含有3%DSS的自来水6天。具体试验方案见图4。试验过程中,每天测量小鼠体重,观察并记录小鼠的状态,存活情况,有无临床异常症状等。试验结束后测量结肠长度并采集小鼠结肠组织样本,将样本保存在4%的甲醛溶液中,用于HE染色,观察小鼠结肠形态,并对其进行病理评分。
二、实验结果
1、生长情况:整个试验中小鼠生长变化情况如图5所示,第7天各组间的小鼠体重没有明显差异(图6);第13天时,Con组小鼠体重显著高于DSS组和L.r+DSS组的小鼠体重,虽L.r+DSS组与DSS组的小鼠体重无显著差异,但是从数值上来看,L.r+DSS组的小鼠体重高于DSS组(图7);第18天时,L.r+DSS组小鼠体重与Con组无显著差异,且显著高于DSS组(图8)。
2、结肠长度:如图9所示,虽然Con组小鼠结肠长度与L.r+DSS组存在显著差异,但L.r+DSS组的小鼠结肠长度显著高于DSS组。
3、结肠形态及病理评分:如图10所示,DSS组小鼠结肠肠道出现严重的炎症细胞浸润,出现严重的炎症情况,L.r+DSS组小鼠肠道局部出现了炎症情况;病理评分显示,DSS组分值显著高于L.r+DSS组。这些结果预示着罗伊氏乳杆菌SXDT-32菌株可以很好的缓解和治疗小鼠结肠炎症,促进肠道健康。
实施例4罗伊氏乳杆菌SXDT-32对仔猪肠道健康的影响
一、实验方法
选用河北唐山某养殖场产的健康母猪40头(3 ~ 4岁,5 ~ 6胎)及其临产仔猪。在断奶前,所有育有哺乳仔猪的母猪分别被圈养在封闭的产房内,并提供商品饲料和自由饮水。猪圈环境保持清洁、通风,并定期消毒。
所有母猪被随机分为对照组(Con)和菌液饲喂组(L.r)。每组20头母猪,每窝选取14头仔猪。两组仔猪初始体重相近(初始BW =1.73±0.03 kg),并在21日龄开始断奶。Con组:从仔猪7日龄开始,对仔猪饲喂商用教槽料,使其自由采食,直至30日龄结束试验;L.r组:从仔猪7日龄开始,对仔猪饲喂额外含有5×1010CFU/kg罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32的同品牌商用教槽料,使其自由采食,直至30日龄结束试验。试验过程中,第21、30天测量仔猪体重,观察并记录仔猪的状态,统计仔猪腹泻率等。
二、实验结果
1、仔猪体重情况:如图11所示,L.r组仔猪在21日龄时的体重显著高于Con组;L.r组仔猪在30日龄时的体重也显著高于Con组。
2、腹泻率:如图12所示,L.r组仔猪的腹泻率显著低于Con组。
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (5)
1.罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri) SXDT-32,其特征在于,所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri) SXDT-32的保藏编号为CGMCC No. 24727。
2.包含权利要求1所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri) SXDT-32的微生物菌剂。
3.根据权利要求2所述的菌剂,其特征在于,所述菌剂是液体菌剂或固体菌剂。
4.权利要求1所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri) SXDT-32的用于制备以下制剂的应用:
抑制病原微生物的制剂,所述病原微生物为大肠杆菌或沙门氏菌;
促进动物体重的制剂;
治疗结肠炎症的制剂;或
降低腹泻率的制剂。
5.一种动物饲料添加剂,其特征在于,含有包含权利要求1所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri) SXDT-32,或者由所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)SXDT-32发酵制备而得。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210741105.7A CN114836358B (zh) | 2022-06-28 | 2022-06-28 | 罗伊氏乳杆菌sxdt-32及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210741105.7A CN114836358B (zh) | 2022-06-28 | 2022-06-28 | 罗伊氏乳杆菌sxdt-32及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114836358A CN114836358A (zh) | 2022-08-02 |
CN114836358B true CN114836358B (zh) | 2023-02-24 |
Family
ID=82575102
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210741105.7A Active CN114836358B (zh) | 2022-06-28 | 2022-06-28 | 罗伊氏乳杆菌sxdt-32及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114836358B (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115478029B (zh) * | 2022-09-22 | 2023-09-29 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 罗伊氏乳杆菌lrb5及菌剂和应用 |
CN116004446B (zh) * | 2022-11-30 | 2024-01-26 | 天津小薇生物科技有限公司 | 一种提高免疫力的罗伊式乳杆菌ll029及其应用 |
Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005060708A2 (en) * | 2003-12-19 | 2005-07-07 | The Iams Company | Canine probiotic lactobacilli |
WO2016120405A1 (en) * | 2015-01-30 | 2016-08-04 | Technische Universität München | Composition for use in preventing and/or treating diarrhea in animals |
CN107047933A (zh) * | 2016-08-30 | 2017-08-18 | 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一种固态罗伊氏乳杆菌微生态制剂的制备方法和应用 |
KR101851297B1 (ko) * | 2017-02-13 | 2018-04-23 | 강원대학교 산학협력단 | 신규한 락토바실러스 루테리 균주 및 그 항균 용도 |
CN108004179A (zh) * | 2017-12-29 | 2018-05-08 | 龙大食品集团有限公司 | 一株具益生特性且拮抗产肠毒性大肠杆菌的罗伊氏乳杆菌及应用 |
CN110540950A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-12-06 | 南京农业大学 | 一株罗伊氏乳杆菌22及其应用 |
CN110734879A (zh) * | 2019-11-13 | 2020-01-31 | 东北农业大学 | 罗伊氏乳杆菌lr-co21及其应用 |
CN111534446A (zh) * | 2019-12-11 | 2020-08-14 | 中国农业科学院特产研究所 | 罗伊氏乳杆菌及其应用 |
CN112358999A (zh) * | 2020-11-26 | 2021-02-12 | 中国农业大学 | 一种罗伊氏乳杆菌及其应用 |
WO2021146582A1 (en) * | 2020-01-17 | 2021-07-22 | AgBiome, Inc. | Compositions and methods for controlling undesirable microbes and improving animal health |
-
2022
- 2022-06-28 CN CN202210741105.7A patent/CN114836358B/zh active Active
Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005060708A2 (en) * | 2003-12-19 | 2005-07-07 | The Iams Company | Canine probiotic lactobacilli |
WO2016120405A1 (en) * | 2015-01-30 | 2016-08-04 | Technische Universität München | Composition for use in preventing and/or treating diarrhea in animals |
CN107047933A (zh) * | 2016-08-30 | 2017-08-18 | 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一种固态罗伊氏乳杆菌微生态制剂的制备方法和应用 |
KR101851297B1 (ko) * | 2017-02-13 | 2018-04-23 | 강원대학교 산학협력단 | 신규한 락토바실러스 루테리 균주 및 그 항균 용도 |
CN108004179A (zh) * | 2017-12-29 | 2018-05-08 | 龙大食品集团有限公司 | 一株具益生特性且拮抗产肠毒性大肠杆菌的罗伊氏乳杆菌及应用 |
CN110540950A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-12-06 | 南京农业大学 | 一株罗伊氏乳杆菌22及其应用 |
CN110734879A (zh) * | 2019-11-13 | 2020-01-31 | 东北农业大学 | 罗伊氏乳杆菌lr-co21及其应用 |
CN111534446A (zh) * | 2019-12-11 | 2020-08-14 | 中国农业科学院特产研究所 | 罗伊氏乳杆菌及其应用 |
WO2021146582A1 (en) * | 2020-01-17 | 2021-07-22 | AgBiome, Inc. | Compositions and methods for controlling undesirable microbes and improving animal health |
CN112358999A (zh) * | 2020-11-26 | 2021-02-12 | 中国农业大学 | 一种罗伊氏乳杆菌及其应用 |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
Effects of feeding fermented wheat with Lactobacillus reuteri on gut morphology, intestinal fermentation, nutrient digestibility, and growth performance in weaned pigs;M. H. A. Le, S. Galle 等;《Journal of Animal Science》;20161101;第94卷(第11期);参见全文 * |
Isolation and characterization of potential probiotic lactobacilli from pig feces;Ji Hyun Yun 等;《Journal of Basic Microbiology》;20090409;第49卷(第2期);参见全文 * |
Study and use of the probiotic Lactobacillus reuteri in pigs: a review;Chengli Hou 等;《Journal of Animal Science and Biotechnology》;20150409;第6卷(第1期);参见全文 * |
一株蓝狐源罗伊氏乳杆菌的分离鉴定及初步应用;蔡熙姮;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》;20210115(第2021/01期);参见全文 * |
东北粘豆包中一株罗伊氏乳杆菌的分离、鉴定与益生性质研究;孙大庆等;《黑龙江八一农垦大学学报》;20151031(第05期);参见全文 * |
猪源益生乳杆菌的分离、鉴定和筛选及ERIC-PCR分型研究;林朝洪;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》;20080415(第2008/04期);参见全文 * |
猪源益生菌筛选及其益生作用机理的研究;徐雅芫;《中国博士学位论文全文数据库 基础科学辑》;20200515(第2020/05期);参见第5页第8段、第25页第3段、第31页第4段、第60页第2段、第64页第3段、表2.2-2.5、图5.1 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN114836358A (zh) | 2022-08-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106282072B (zh) | 一种复合乳酸菌微生态制剂及其制备方法与应用 | |
CN114836358B (zh) | 罗伊氏乳杆菌sxdt-32及其应用 | |
CN114806978B (zh) | 约氏乳杆菌sxdt-23及其应用 | |
JPH09506625A (ja) | サルモネラの調節用の共生体 | |
CN111534447B (zh) | 约氏乳杆菌及其应用 | |
CN110577912B (zh) | 一种格氏乳杆菌及其在制备发酵乳中的应用 | |
CN108048352B (zh) | 一种产抑菌物质的屎肠球菌xc2及其筛选方法与应用 | |
CN114085789B (zh) | 戊糖片球菌ma.wtpqj01及其应用 | |
CN117904007B (zh) | 枯草芽孢杆菌菌株sklan202311d及其应用 | |
JP2010161944A (ja) | 新型カゼイ菌の亜種(sg96)及びこれを含有する菌抑制組成物及びその用途 | |
CN116590172A (zh) | 乳酸片球菌glp06及其应用和产品 | |
CN110028560B (zh) | 一种凝结芽孢杆菌产的细菌素及其应用 | |
CN109486732B (zh) | 一种长双歧杆菌及其应用 | |
CN117143767B (zh) | 可调节肠道菌群的母乳源发酵粘液乳杆菌msjk0025及其应用 | |
US11160839B2 (en) | Pediococcus pentosaceus CCFM1012 and application thereof to preparation of Campylobacter jejuni infection antagonism medicine | |
CN117327626A (zh) | 一种植物乳杆菌ts1及其培养方法与应用 | |
CN115181711B (zh) | 人乳杆菌lhm11及菌剂和应用 | |
CN115197885B (zh) | 格氏乳球菌lgm15及菌剂和应用 | |
CN114891705B (zh) | 一种产酸的民猪源罗伊氏乳杆菌及其培养方法与应用 | |
CN113717887B (zh) | 一种鹅源植物乳杆菌及其应用 | |
CN116286514A (zh) | 多功能菌剂及其所含的罗伊氏乳杆菌及其应用 | |
CN116083272A (zh) | 一种丁酸梭菌及其生物饲料添加剂的应用 | |
CN115651860A (zh) | 凝结芽孢杆菌bc-hyc株及其应用 | |
CN115181712B (zh) | 约氏乳杆菌ljm20及其菌剂和应用 | |
CN117904006A (zh) | 粪肠球菌菌株sklan202311l及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |