CN115181712B - 约氏乳杆菌ljm20及其菌剂和应用 - Google Patents
约氏乳杆菌ljm20及其菌剂和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115181712B CN115181712B CN202211113207.0A CN202211113207A CN115181712B CN 115181712 B CN115181712 B CN 115181712B CN 202211113207 A CN202211113207 A CN 202211113207A CN 115181712 B CN115181712 B CN 115181712B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lactobacillus johnsonii
- ljm20
- group
- mice
- sperm
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 241001468157 Lactobacillus johnsonii Species 0.000 title claims abstract description 52
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 title claims description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 21
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 claims description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- 230000013011 mating Effects 0.000 claims description 9
- 230000019100 sperm motility Effects 0.000 claims description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 230000002381 testicular Effects 0.000 claims description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 claims 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 12
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 abstract description 12
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 abstract description 9
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 abstract description 8
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 abstract description 7
- 230000035558 fertility Effects 0.000 abstract description 5
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 abstract description 5
- YJPIGAIKUZMOQA-UHFFFAOYSA-N Melatonin Natural products COC1=CC=C2N(C(C)=O)C=C(CCN)C2=C1 YJPIGAIKUZMOQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 abstract description 3
- DRLFMBDRBRZALE-UHFFFAOYSA-N melatonin Chemical compound COC1=CC=C2NC=C(CCNC(C)=O)C2=C1 DRLFMBDRBRZALE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 229960003987 melatonin Drugs 0.000 abstract description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000021595 spermatogenesis Effects 0.000 abstract description 2
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 abstract description 2
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 abstract description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 42
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 229960002092 busulfan Drugs 0.000 description 19
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 11
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 11
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 8
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 7
- 208000031320 Teratogenesis Diseases 0.000 description 7
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 6
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010043275 Teratogenicity Diseases 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 231100000211 teratogenicity Toxicity 0.000 description 3
- 208000007466 Male Infertility Diseases 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 2
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 210000003736 gastrointestinal content Anatomy 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 1
- 206010021929 Infertility male Diseases 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010050208 Teratospermia Diseases 0.000 description 1
- 208000002312 Teratozoospermia Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 206010003883 azoospermia Diseases 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000007413 intestinal health Effects 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 210000004995 male reproductive system Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 208000008634 oligospermia Diseases 0.000 description 1
- 230000036616 oligospermia Effects 0.000 description 1
- 231100000528 oligospermia Toxicity 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/10—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for ruminants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/30—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for swines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Mycology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Birds (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Physiology (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及微生物领域,具体涉及约氏乳杆菌LJM20及其菌剂和应用。本发明的约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)M20能改善动物机体代谢,增加有益的代谢产物,从而增加睾丸有益代谢产物如褪黑素、有益于精子发生的不饱和脂肪酸,从而提高雄性动物的精子质量和繁殖力;能在动物体内定植,并对人工胆盐、人工胃酸、人工肠液耐受能力强。
Description
技术领域
本发明涉及微生物领域,具体涉及约氏乳杆菌LJM20及其菌剂和应用。
背景技术
目前,雄性动物的雄性不孕不育率大幅度提高,主要是因为雄性生殖系统更容易受环境因素的影响。然而现在还没有良好的方法改善精液品质从而治疗雄性不孕不育。近年来研究发现肠道菌群与人及其他动物的健康息息相关,然而肠道菌群与雄性生殖轴的关系还没有确认,虽然已经有研究发现肠道菌群混合物可以改变雄性动物的精液品质,有益的肠道有益菌群可以改善动物的精液品质,但是还没有报道具体是哪种有益菌可以起到改善动物精液品质,提高雄性动物繁殖力,也没有任何文献公开哪种具体的肠道菌可以提高雄性繁殖力。
发明内容
本发明的目的是提供一种约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20。
本发明的另一目的是提供包含上述约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20的菌剂。
本发明的另一目的是提供上述约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20的应用。
本发明的约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20,该菌株于2022年 7月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编100101),分类命名为约氏乳杆菌Lactobacillus johnsonii,保藏编号为CGMCC No.25326。
本发明提供含有约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20的菌剂,所述菌剂可以是液体菌剂或固体菌剂,采用常规技术手段、加入微生物制剂领域允许的辅料制备得到。
本发明提供了约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20用于制备以下用途的制剂的用途,
(1)改善肠道健康;
(2)改善血液及睾丸代谢组;
(3)增加雄性动物精子浓度;
(4)增加雄性动物精子活力;
(5)提高雄性动物交配成功率及交配的雌性动物怀孕率;和/或
(6)提高雄性动物交配的雌性动物产活仔数。
本发明的约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20能改善动物机体代谢,增加有益的代谢产物,从而增加睾丸有益代谢产物如褪黑素、有益于精子发生的不饱和脂肪酸,从而提高雄性动物的精子质量和繁殖力;而且能在动物体内定植,并对人工胆盐、人工胃酸、人工肠液耐受能力强。
附图说明
图1为本发明的约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20的生长曲线(MRS培养基);
图2显示本发明实施例2中试验小鼠在试验周期35天体重变化情况;
图3显示本发明实施例2中试验小鼠的精子浓度;
图4显示本发明实施例2中试验小鼠的精子活力;
图5显示本发明实施例2中试验小鼠的精子顶体完整性;
图6显示本发明实施例2中试验小鼠的精子的畸形率;
图7显示本发明实施例2中试验小鼠的怀孕率;
图8显示本发明实施例2中试验小鼠的产活仔数;
图9显示本发明实施例3中试验公猪的采精量;
图10显示本发明实施例3中试验公猪精子的浓度;
图11显示本发明实施例3中试验公猪精子的活力;
图12显示本发明实施例3中试验公猪精子的顶体完整性;
图13显示本发明实施例3中试验公猪精子的畸形率;
图14显示本发明实施例4中试验公山羊精子的浓度;
图15显示本发明实施例4中试验公山羊精子的活力;
图16显示本发明实施例4中试验公山羊精子的顶体完整性;
图17显示本发明实施例4中试验公山羊精子的畸形率。
本发明的约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20,该菌株分类命名为约氏乳杆菌Lactobacillus johnsonii,于2022年 7月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编100101),保藏编号为CGMCC No.25326。
具体实施方式
本发明提供了约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20,缩写为LJM20,进一步验证了约氏乳杆菌(Lactobacillus Johnsonii) M20对雄性动物繁殖力的有益作用,以白消安(Busulfan)建立小鼠弱精、少精症模型,发现该菌株能够提高精子浓度、活力、顶体完整性,降低精子畸形率,提高雄鼠与正常雌鼠交配的成功率,交配后母鼠的怀孕率、产活仔数。夏季高温高湿会导致公猪、公羊精液品质下降,从而导致母猪、母羊怀孕率和产活仔数减少,LJM20可以提高夏季高温高湿状态下公猪和公羊的精子浓度和活力、顶体完整性,降低精子畸形率。
实施例1约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20的分离
1、菌株分离:约氏乳杆菌Lactobacillus johnsonii分离自肠道内容物。取肠道内容物,用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释,吸取合适稀释度的稀释液0.1mL在MRS琼脂上均匀涂布,37°C培养48h后, 将生长出的菌落通过平板划线接种到新的MRS固体培养基进行纯化培养48h。
2、菌株富集:将纯化培养后的菌株,在无菌操作台上用接种环逐一接种到无菌MRS肉汤培养基中,置于摇床中,37°C培养48h后进行16S rRNA鉴定,并将剩余部分与含有25%甘油的生理盐水混合,保存至-80°C冰箱。
3、16S rRNA鉴定:将富集后的菌液,使用细菌通用引物进行菌落PCR扩增后, 送至生工生物工程(上海)股份有限公司进行16S rDNA测序鉴定,在NCBI上将各个菌株的16SrDNA序列与数据库中所有已测定细菌的16S rDNA序列进行比对,其中发现有5株与约氏乳杆菌属的Lactobacillus johnsonii strain1000的16S rDNA 序列的同源相似性最高,确定这5株菌种类别为约氏乳杆菌 (Lactobacillus johnsonii)。
实施例2约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20的特性检测
1、约氏乳杆菌LJM20的微生物学特性如下:
(1)菌落形态:圆形单菌落,直径大约1~2mm,乳白色,不透明,菌落表面光滑有微微的凸起,边缘是规则的。
(2)染色后细菌形态呈现短杆状,无鞭毛,不能运动。
(3)生长特性:在MRS液体培养基中,置于37°C摇床培养,5小时后开始进入对数生长期,14h进入平台期,最大活菌数为3.0×108CFU/mL。
2、耐胆盐检测
将已活化并且菌液浓度在1×108CFU/mL的菌液,分别取1ml接种到9ml含猪胆盐浓度为0.3g/100mL的无菌生理盐水中,1h后采用平板涂布法测定活菌数。
结果显示(表1),在0.3g/100mL的胆盐浓度下,与其它4株约氏乳杆菌比较, LJM20具有最好的耐胆盐能力,存活率在21.21%左右。
表1约氏乳杆菌在强胆盐0.3%浓度下的存活率%
3、耐人工胃液检测
将已活化并且菌液浓度在1×108CFU/mL的菌液,分别取1ml接种到9ml pH=1.5的人工胃液中,1h后采用平板涂布法测定活菌数。
结果显示(表2),在pH=1.5的人工胃液1h后,与其它4株约氏乳杆菌比较, LJM20具有最好的耐人工胃液能力,存活率在 22.33%左右。
表2约氏乳杆菌在pH=1.5的人工胃液中的存活率%
4、耐人工肠液检测
将已活化并且菌液浓度在1×108CFU/mL的菌液,分别取1ml接种到9ml pH=6.8的人工胃液中,4h后采用平板涂布法测定活菌数。
结果显示(表3),在人工肠液4h后,与其它4株约氏乳杆菌比较,LJM20具有最好的耐人工肠液能力,存活率在20.43%左右。
表3约氏乳杆菌在人工肠液的存活率%
实施例3约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20对白消安模型雄性小鼠繁殖力的影响
一、实验方法
1、选取100只21日龄的ICR雄性小鼠,饲养于中国农业科学院动物科学研究所动物中心。试验过程中,将鼠房的温度控制在22±2℃,光照/黑暗时间为12小时,并自由取食和饮水。
2、将所有小鼠随机分为5组(每组20只小鼠):对照组(Con组),白消安组(B组),B+LJM20(10^6)组,B+LJM20(10^8)组,B+LJM20(10^10)组。Con组:在试验过程中,每天灌胃一次0.1ml的生理盐水,为期14天;B组:在试验过程中,每天灌胃一次0.1ml的生理盐水,为期14天;B+LJM20(10^6)组:在试验过程中,每天灌胃一次0.1ml浓度为1×106CFU/mL的菌液,为期14天;B+LJM20(10^8)组:在试验过程中,每天灌胃一次0.1ml浓度为1×108CFU/mL的菌液,为期14天;B+LJM20(10^10)组:在试验过程中,每天灌胃一次0.1ml浓度为1×1010CFU/mL的菌液,为期14天。然后所有小鼠正常饲养21天(3周),不做任何处理,试验过程中,每天测量小鼠体重,观察并记录小鼠的状态,存活情况,有无临床异常症状等。总计35天后(14天+21天),第36天,每组随机选取10只小鼠,收集样品进行分析。每组剩余的10只小鼠与正常母鼠交配,每只公鼠与2只母鼠交配,交配4天。交配4天后母鼠单笼饲养,公鼠收样检测分析。交配21天后统计母鼠怀孕率,产活仔数。
二、检测指标
1、试验期间,每2天统计小鼠体重一次。
2、测量公鼠精子浓度、活力、顶体完整性、畸形率。
3、交配21天后统计母鼠的怀孕率、产活仔数。
4、并检测公鼠的血液指标和睾丸代谢物。
三、实验结果
1、生长情况:整个试验中小鼠生长变化情况如图2所示,白消安导致小鼠体重增长变慢,从处理的第5天白消安组(B)的体重要低于对照组,而且一直到实验结束,白消安组体重显着低于对照组,而白消安处理后饲喂LJM20的3个组的体重要高于白消安组。
2、精子浓度:如图3所示,白消安模型组小鼠的精子浓度远远低于对照组,白消安处理后饲喂LJM20的3个组的精子浓度远远高于白消安组,几乎达到对照组的水平。
3、精子活力:如图4所示,白消安模型组小鼠的精子活力远远低于对照组,白消安处理后饲喂LJM20的3个组的精子活力远远高于白消安组,几乎达到对照组的水平。
4、精子顶体完整性:如图5所示,白消安模型组小鼠的精子顶体完整性变差,远远低于对照组,白消安处理后饲喂LJM20的3个组的精子顶体完整性远远高于白消安组,几乎达到对照组的水平。
5、精子畸形率:如图6所示,白消安模型组小鼠的精子畸形率远远高于对照组,白消安处理后饲喂LJM20的3个组的精子畸形率远远低于白消安组,与对照组的水平相当。
6、怀孕率:如图7所示,白消安模型组小鼠与正常母鼠交配后的怀孕率远远低于对照组,白消安处理后饲喂LJM20的3个组的小鼠与正常母鼠交配后的怀孕率远远高于白消安组,几乎达到对照组的水平。
7、产活仔数:如图8所示,白消安模型组小鼠与正常母鼠交配后,母鼠产活仔数远远少于对照组,白消安处理后饲喂LJM20的3个组的小鼠与正常母鼠交配后,母鼠产活仔数远远多于白消安组,几乎达到对照组的水平。
8、另外,对处理后的公鼠的血液和睾丸代谢物分析发现,白消安增加了血液及睾丸中有害代谢物,减少有益代谢物。而白消安处理后饲喂LJM20增加血液及睾丸有益代谢物如褪黑素、多不饱和脂肪酸等。
实施例4约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20对公猪精液品质的影响
一、实验方法
选用公猪站里健康公猪40头(2 ~ 3岁),体重大约300公斤(kg)。所有公猪分别被圈养在封闭的猪舍内,并提供商品饲料和自由饮水。猪圈环境保持清洁、通风,并定期消毒。实验在夏季的7,8月份。
所有公猪被随机分为4个组:对照组(Con);LJM20(10^9)组;LJM20(10^12)组;LJM20(10^15)组;每组10头公猪。Con组:饲喂商用饲料;LJM20(10^9)组:饲喂商用饲料+109CFU/头/天LJM20;LJM20(10^12)组:饲喂商用饲料+1012CFU/头/天LJM20;LJM20(10^15)组:饲喂商用饲料+1015CFU/头/天LJM20;LJM20饲喂两周(14天),然后所有组饲喂商用饲料56天(总实验周期70天),每天饲喂2次,定量饲喂。试验过程中,观察并记录公猪的状态。70天后收取公猪精液,并测试分析。
二、检测指标
1、试验期间,每天统计公猪的体征。
2、第71天开始检测公猪的精液品质。
三、实验结果
1、采精量:如图9所示,饲喂LJM20的3个组的采精量多于对照组。
2、精子浓度:如图10所示,饲喂LJM20的3个组的精子浓度高于对照组。
3、精子活力:如图11所示,饲喂LJM20的3个组的精子活力高于对照组。
4、精子顶体完整性:如图12所示,饲喂LJM20的3个组的精子顶体完整性高于对照组。
5、精子畸形率:如图13所示,饲喂LJM20的3个组的精子畸形率低于对照组。
实施例5约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20对公山羊精液品质的影响
选用健康公山羊40只(2 ~ 3岁),体重大约100公斤(kg)。所有山羊分别被圈养在封闭的羊舍内,并提供商品饲料(精料和草料)和自由饮水。羊圈环境保持清洁、通风,并定期消毒。实验在夏季的7,8月份。
所有公山羊被随机分为4个组:对照组(Con);LJM20(3×10^8)组;LJM20(3×10^11)组;LJM20(3×10^14)组;每组10只公山羊。Con组:饲喂商品饲料;LJM20(3×10^8)组:饲喂商用饲料+3×108CFU/头/天 LJM20;LJM20(3×10^11)组:饲喂商用饲料+3×1011CFU/头/天LJM20;LJM20(3×10^14)组:饲喂商用饲料+3×1014CFU/头/天LJM20;LJM20饲喂两周(14天),然后所有组饲喂商用饲料56天(总实验周期70天),定量饲喂。试验过程中,观察并记录公山羊的状态。70天后收取公羊精液,并测试分析。
与同属种的约氏乳杆菌相比, LJM20最大的优势是具有提高动物繁殖性能的特性。而且在人工胆盐、人工胃酸、人工肠液耐受能力强。
以上实施例仅用于解释本申请的技术方案,不限定本申请的保护范围。
Claims (4)
1. 约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20,其特征在于,所述约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20的保藏编号为CGMCC No.25326。
2.包含权利要求1所述的约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20的菌剂。
3.根据权利要求2所述的菌剂,其特征在于,所述菌剂为液体菌剂或固体菌剂。
4.权利要求1所述的约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii) M20用于制备以下用途的制剂的应用,
(1)改善血液及睾丸代谢组的制剂;
(2)增加雄性动物精子浓度的制剂;
(3)增加雄性动物精子活力的制剂;
(4)提高雄性动物交配成功率及交配的雌性动物怀孕率的制剂;和/或
(5)提高雄性动物交配的雌性动物产活仔数的制剂。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211113207.0A CN115181712B (zh) | 2022-09-14 | 2022-09-14 | 约氏乳杆菌ljm20及其菌剂和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211113207.0A CN115181712B (zh) | 2022-09-14 | 2022-09-14 | 约氏乳杆菌ljm20及其菌剂和应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115181712A CN115181712A (zh) | 2022-10-14 |
CN115181712B true CN115181712B (zh) | 2022-12-13 |
Family
ID=83524478
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202211113207.0A Expired - Fee Related CN115181712B (zh) | 2022-09-14 | 2022-09-14 | 约氏乳杆菌ljm20及其菌剂和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115181712B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2024178170A1 (en) * | 2023-02-23 | 2024-08-29 | Can Technologies, Inc. | Lactobacillus johnsonii compositions and methods to support chicken performance |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106974941A (zh) * | 2017-03-09 | 2017-07-25 | 南昌大学 | 一种用于不孕症治疗的微生态制剂制备方法 |
CN107438438A (zh) * | 2014-12-31 | 2017-12-05 | 莱昂大学 | 益生菌在提高雄性生育力中的用途 |
WO2018146332A1 (de) * | 2017-02-13 | 2018-08-16 | Freie Universität Berlin | Verwendung von lactobacillus buchneri zur erhöhung der fertilität eines weiblichen säugetiers |
CN111849799A (zh) * | 2019-04-26 | 2020-10-30 | 大江生医股份有限公司 | 益生菌株、其组合物及其用于制备泌尿生殖道保健组合物的用途 |
CN112592871A (zh) * | 2021-01-20 | 2021-04-02 | 山东中科嘉亿生物工程有限公司 | 一种干酪乳杆菌jylc-374及其在改善男性前列腺产品中的应用 |
-
2022
- 2022-09-14 CN CN202211113207.0A patent/CN115181712B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107438438A (zh) * | 2014-12-31 | 2017-12-05 | 莱昂大学 | 益生菌在提高雄性生育力中的用途 |
WO2018146332A1 (de) * | 2017-02-13 | 2018-08-16 | Freie Universität Berlin | Verwendung von lactobacillus buchneri zur erhöhung der fertilität eines weiblichen säugetiers |
CN106974941A (zh) * | 2017-03-09 | 2017-07-25 | 南昌大学 | 一种用于不孕症治疗的微生态制剂制备方法 |
CN111849799A (zh) * | 2019-04-26 | 2020-10-30 | 大江生医股份有限公司 | 益生菌株、其组合物及其用于制备泌尿生殖道保健组合物的用途 |
CN112592871A (zh) * | 2021-01-20 | 2021-04-02 | 山东中科嘉亿生物工程有限公司 | 一种干酪乳杆菌jylc-374及其在改善男性前列腺产品中的应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115181712A (zh) | 2022-10-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102373172B (zh) | 一株屎肠球菌及其应用 | |
CN110982760B (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治猪腹泻中的应用 | |
CN112011481B (zh) | 一株防治畜禽细菌性腹泻的罗伊氏乳杆菌及其应用 | |
CN112574924B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌菌株及其微生态制剂和应用 | |
CN114085789B (zh) | 戊糖片球菌ma.wtpqj01及其应用 | |
CN114908013B (zh) | 一株产ddp-iv抑制剂的厦门希瓦氏菌及其应用 | |
CN114836358B (zh) | 罗伊氏乳杆菌sxdt-32及其应用 | |
CN102391962A (zh) | 一种屎肠球菌制剂及其生产工艺 | |
CN113717881A (zh) | 一种凝结芽孢杆菌bc66及其应用 | |
CN115181712B (zh) | 约氏乳杆菌ljm20及其菌剂和应用 | |
CN111304119A (zh) | 一种降解伏马毒素的饲用枯草芽孢杆菌及其应用 | |
CN106906166A (zh) | 一种猪源唾液乳杆菌活菌制剂及应用 | |
CN117904007B (zh) | 枯草芽孢杆菌菌株sklan202311d及其应用 | |
CN115181711B (zh) | 人乳杆菌lhm11及菌剂和应用 | |
CN115197885B (zh) | 格氏乳球菌lgm15及菌剂和应用 | |
CN113862196B (zh) | 一株枯草芽孢杆菌sd-kc-001及其应用 | |
CN110028560B (zh) | 一种凝结芽孢杆菌产的细菌素及其应用 | |
CN111803529A (zh) | 一种预防犊牛腹泻的复合微生态制剂 | |
CN115478029B (zh) | 罗伊氏乳杆菌lrb5及菌剂和应用 | |
CN116064324B (zh) | 一株鼠李糖乳杆菌及其培养方法和在防治腹泻和肠炎方面的应用 | |
CN115873081A (zh) | 一种乳酸菌素及其在防控宠物细菌感染的应用 | |
CN111548965B (zh) | 一株驴源短小芽孢杆菌及其在制备治疗驴驹腹泻的药物上的应用 | |
CN112410252B (zh) | 一株小菜蛾麦芽芳香卡诺杆菌PxCG2菌株及其应用 | |
CN114657093A (zh) | 一株鸽源卷曲乳杆菌bl4014及其应用 | |
CN110257299B (zh) | 一种阴沟肠杆菌在促进反刍动物生长的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20221213 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |